CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo pueden clasificarse según diferentes criterios, pero los más importantes son aquellos que se basan en: a) Su consistencia b) Su utilización c) Su composición d) Su origen

a) SEGÚN SU ESTADO FÍSICO (CONSISTENCIA):
1) Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración. 2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un agente gelificante. Los más utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una proteína animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y además su uso está muy limitado porque su punto de fusión es bajo (licúa a temperatura ambiente) razón por la que no puede utilizarse para cultivos a 37ºC, que es la tempera óptima de crecimiento para muchos microorganismos. Agar-agar: Es un polímero de azúcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molécula insoluble enagua pero soluble en agua caliente; una solución al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39ºC y no se funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y solidifica una vez fundido alrededor de los 45ºC. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgánicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un microorganismo. Aunqu e el agar es una mezcla de polisacáridos, Araki, en 1937, los dividió en dos grupos: - agarosa, con poco sulfato, libre de ácido pirúvico, y - agaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporción de agarosa a agaropectina en el agar varía según el alga de origen. El agar puede utilizarse para diferentes fines, aunque los más importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar bacteriológico, agares purificados y agarosa, utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que se produce, se utiliza en trabajo microbiológico, por lo que es importante la ausencia de metales tóxicos.

3) Medios semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias

SEGÚN SU UTILIZACIÓN.
1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de b acterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio más conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar común, que resulta de la adición de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc. 2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc ) El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate). 3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias. 4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibidores podrían considerarse como una variante más restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adición de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo de una población determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos. 5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies. La adición de un azúcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los gérmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. También lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemólisis), el SS (que es doblemente diferencial), etc. 6) Medios de identificación: Son los destinados a comprobar alguna cualidad específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de

8) Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa que. cualquier medio al que se le haya añadido un elemento diferencial de un microorganismo. b) mediante liofilización de una suspensión bacteriana. y más raramente de vegetales. El caldo-infusión cerebro-corazón (BHI). donde la reproductibilidad no podrá ser exacta. los medios de cultivo pueden ser clasificados en: 1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados. Se emplean en la obtención de vacunas. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas: a) haciendo pases periódicos de placa a placa. En la práctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los más empleados. resultando un medio de composición perfectamente definida. y los más empleados se preparan a partir de tejidos animales. Son ejemplos típicos de este grupo los medios de Stuart -Amies. con lo cual se consigue simultáneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de identificación. ATENDIENDO A SU COMPOSICIÓN. 9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clínicas que no pueden sembrarse inmediatamente.los microorganismos. utilizados para identificar los gérmenes urinarios más importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilización de sustratos cromogénicos específicos. el medio de Simmons y en general. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el Laboratorio de Microbiología. Son ejemplos de esto últimos los medios CPS ID3 o Uriline ID (Biomerieux). en la investigación y en la industria. Su utilización debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior del medio (generalmente en un tubo). es un ejemplo típico de estos medios. y por consiguiente no es rigurosamente constante. 7) Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un microorganismo ya aislado. El agar Kligler.1%. etc. Según las sustancias que entren a formar parte en su composición. por diversas razones nos interese mantener. Su composición no es exactamente definida. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales. 2) Medios sintéticos: Son aquellos que contienen en su composición exclusivamente sustancias químicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas. . son medios utilizados en identificación. Cary-Blair. Actualmente están apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios específicos de identificació n para ciertos microorganismos. y c) congelando las cepas en leche descremada estéril al 0. Los medios más adecuados para la multiplicación suelen ser líquidos. el sustrato específico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado.

extracto de tejidos. y aunque no vamos a enumerarlos todos. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. ß ó gamma). Se utiliza para el crecimiento de estreptococos.3) Medios semisintéticos: El gran número de factores de crecimiento exigidos para ciertos gérmenes hace que la fabricación de un medio sintético para estos gérmenes sea imposible o demasiado cara. aparte de los virus.). haciéndolo exclusivamente en células vivas con unas características determinadas. las Chlamydias. DESCRIPCIÓN Y UTILIZACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO MEDIOS DE CULTIVO COMUNES . La adición de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que están en el interior de los hematíes. Para la preparación del agar sangre se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sódico o un preparado enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. como por ejemplo extracto de levadura. c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factore s de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo. Son los más corrientemente utilizados. pero sí puede añadir factores inhibidores del crecimiento . En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgánico complejo (extracto de levadura. Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de gérmenes que no presentan exigencias particulares. etc. Según su origen: a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de o rigen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce exactamente. Rickettsias. etc.Ciertos gérmenes no crecen en ningún medio por muy enriquecido que esté éste. sí son los más conocidos en un laboratorio de Microbiología. b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cualitativa y cuantitativamente. No es diferencial. Ejemplos de este tipo son. Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza además para la investigación de los diversos tipos de hemólisis ( .

Las colonias lactosa negativas serán incoloras. (Cistina Lactosa Electrólito Deficiente) está recomendado para el recuento e identificación presuntiva de los microorganismos de las vías urinarias.S. Agar S. pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies (caballo. Agar C. Un ejemplo clásico es el Thayer-Martin. conejo. Es un medio inhibidor de los gérmenes Gram positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para enterobacterias por su contenido en sales biliares.L. Por adición de uno o varios antibióticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos. Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que se destruyan las sustancias inhibidoras. etc. aunque la interpretación sea diferente al anterior medio por la incorporación de otro indicador: el azul de bromo timol. Isovitalex. denominadas de forma diferente según las casas comerciales (Polivitex. apareciendo del mismo color que el medio subyacente (naranja). . que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. Por esta razón el agar chocolate contiene hemoglobina. pero en él pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. que son termolábiles. Su bajo contenido en electrolitos evita la invasión de los cultivos po r Proteus. En su composición lleva un azúcar (lactosa) y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferen cial. La sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al 5%.E.) contienen más de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. humana).: El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales. Estas mezclas. : El medio C. El medio contiene sales biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y gérmenes Gram positivos. blanco o azulado.La presencia de lactosa en su composición le confiere el carácter de medio diferencial.L.D. Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el aislamiento e identificación de enterobacterias. Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base. utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocola te enriquecido al cual se ha añadido una mezcla de tres antibióticos específicos que impedirán el crecimiento del resto de la flora acompañante. El agar chocolate puede convertirse quizás en uno de los medios más enriquecidos si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre.D. Los gérmenes que fermenten la lactosa producen una acidificación del medio que hacen aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes. pues facilitan las reacciones hemolíticas o contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados gérmenes. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos y meningococos) y Haemophilus.bacteriano presentes en el suero. Las colonias lactosa positivas aparecerán de color amarillo y las lactosa negativas lo harán con un color verdoso.E.

Este medio es capaz de detectar los gérmenes formadores de SH2. Así. La inhibición tiene lugar. igual que el de Shigella. mirabilisy E. con la simple visualización d el cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos. Neisseria o Estreptococos. Por esta razón debe utilizarse siempre junto con otro medio menos inhibidor como el Hektoen. pero no es diferencial. Hay que señalar que el vibrión colérico crece bien en este medio. : Medio cromogénico desarrollado por Biomerieux.Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan nunca la lactosa por lo que este medio es excelente para descartar todas las colonias que no cumplan este requisito. coli y en menor medida sobre Proteus y Citrobacter. nos muestra los gérmenes que son capaces de producir ácido sulfhídrico. sobre E. P. El agar SS es un medio muy inhibidor que a veces impide incluso el crecimiento de ciertas especies de Salmonella y sobre todo de Shigella. anaerobiosy .La presencia de lactosa y rojo de metilo nos permiten diferenciar las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las que no lo hacen (incoloras). sacarosa y salicilina) permiten ampliar el poder diferencial de este medio. una colonia incolora y con un punto negro central es sospechosa de Salmonella. igual que el SS. Es un medio muy enriquecido. Islam o New GBS: Medios utilizados para detección de Estreptococos agalactiae. y será exclusivamente a estas colonias a quienes se hagan las pruebas bioquímicas confirmatorias de esta especie. faecalis. C. como Brucella. El agar SS es doblemente diferencial. porque además de indicarnos el comportamiento de los gérmenes con relación a la lactosa. azulo marrón). Permite el cultivo de aerobios. p. Las cualidades del agar Hektoen se deben a su riqueza en peptonas y azúcares. Otros microorganismos diferentes requieren los sistemas de identificación habituales (API. que neutralizan el efecto inhibidor de las sales biliares respecto a ciertos gérmenes de cultivo delicado (Shigella en particular). ID3.S. Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la realización de los antibiogramas o pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos. ej) Granada. La identificación solo requiere la adición de un reactivo para confirmar o descartar la especie sospechada. mediante la utilización de un sustrato cromogénico específico de este microorganismo. obteniéndose colonias más numerosas y voluminosas que en los medios selectivos usuales. A él nos referiremos más ampliamente en el capítulo correspondiente Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de gérmenes exigentes. que permite la identificación de E. que se mani fiesta como un precipitado de color negro en el centro de la colonia. Caldo tioglicolato con resazurina: Es un medio recomendado para controles de esterilidad. El crecimiento de Salmonella es excelente. La presencia de tres azúcares (lactosa. Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias.P. Agar Hektoen: Es un medio más diferencial y menos selectivo que el agar SS. coli. esencialmente.

Agar King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas. . Su elevado contenido en cloruro sódico permite la inhibición de la mayoría de los otros gérmenes. Agar Cetrimida. al aumentar. Tiene un bajo potencial redox que. Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el cultivo de anaerobios. Aunque de él hablaremos con más detenimiento en el capítulo de pruebas de identificación bacteriana. coli. investigar la formación de gas y comprobar si el microorganismo puede producir sulfato ferroso a partir del tiosulfato sódico. Caldo selenito-F: Se utiliza exclusivamente para enriquecimiento de Salmonellas. podemos ir adelantando que se trata de un medio diferencial que permite conocer el comportamiento del microorganismo ante dos azúcares (glucosa y lactosa). pues impide el crecimiento de Gram positivos y diferencia muy bien a E. inhibiendo Gram positivos y la mayoría de enterobacterias. El segundo pone además de manifiesto la pigmentación fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV. se manifiesta por un color rosa del medio. Es un medio diferencial e inhibidor a la vez. Agar Levine ó EMB (Eosina azul de metileno): Se utiliza para aislamiento de enterobacterias. ya que estegérmen crece bien en medios salados y fermenta el manitol (colonias amarillas). Agar Kligler : Medio específico para pruebas de identificación de enterobacterias.microaerófilos. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio en diferencial: así se puede identificar presuntivamente el Staphylococcus aureus. a la vez que los diferencia del resto. Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sucrosa (DCLS): Similar al agar SS. Medio de Loeffler: Es un medio específico para el cultivo de Corynebacterium difteriae. Agar Gardnerella: Agar con sangre humana más una mezcla de antibióticos que permiten la observación de colonias betahemolíticas características de Gardnerella vaginalis Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de Campylobacter intestinales creciendo a 42º C en microaerofilia. cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo metálico característico. Agar Chapman: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos. Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa positivos.

El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes. a 35-37 ºC durante 24 horas. Contiene verde malaquita para inhibir parcialmente el crecimiento de otras bacterias.2 15.0 Agar pH final: 7. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos. La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano. Fundamento Por las características de sus componentes es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona 5. El huevo se utiliza como sustancia de enriquecimiento. Incubación En aerobiosis.0 Extracto de carne 3. Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2 minutos hasta su disolución. según el uso a que se destine. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos.0 Instrucciones Suspender 31 g de polvo por litro de agua destilada.Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract) : Se utiliza para el aislamiento de bacterias del género Legionella Löwenstein-Jensen: Este medio se utiliza para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis.0 Cloruro de sodio 8. mirabilis ATCC 43071 Crecimiento Bueno-excelente . aguas y otros materiales de importancia sanitaria. Siembra En superficie o por la técnica de pour plate. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. Nutritivo Agar Medio de cultivo utilizado para propósitos generales. para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. Resultados a-Agar nutritivo: Microorganismos P.3 ± 0.

pyogenes ATCC 19615 S. aeruginosa ATCC 27853 Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente B-Agar nutritivo suplementado con 5% de sangre de carnero: Microorganismos S. Medio preparado: a 2-8 ºC. aureus ATCC 25923 B. Si bien el aislamiento es un paso crucial en este camino.  Adquirir práctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir de sus componentes individuales. cultivar e identificar a la misma. A menudo nuestro interés es caracterizar una especie bacteriana.E. pneumoniae ATCC 6305 S. coli ATCC 25922 S. cereus ATCC 10876 E. . Presentación x 100g :Código: B02-122-05 x 500g :Código: B02-122-06 6 x 50 ml: B04-122-84 MEDIOS DE CULTIVO Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos. faecalis ATCC 29212 P. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. para lo cual debemos estar preparados para aislar.  Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación del medio de cultivo en la práctica microbiológica. pneumoniae ATCC 49619 Crecimiento Abundante Abundante Abundante Hemólisis Beta Alfa Alfa Características del medio Medio preparado: ámbar claro a medio ligeramente opalescente. comenzaremos examinando los medios de cultivo. ya que en estos últimos se basan muchos de los principios del aislamiento. OBJETIVOS:  Conocer la clasificación de los medios de cultivo. razón por la cual es difícil aislarlas.

Las características de los microorganismos a tener en cuenta al momento de preparar un medio de cultivo adecuado para su desarrollo en el laboratorio son: Tipo trófico: se refiere a los requerimientos de carbono y energía. es cualquier medio que proporcione sustancias nutritivas que permitan el desarrollo y reproducción de microorganismos. quimiotrofos (litotrofos u organotrofos) y fototrofos. heterótrofos. Tipo respiratorio: aerobios. no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos.2. la variedad de medios de cultivo también lo es. La diversidad metabólica de los microorganismos es enorme. Es decir. anaerobios. anaerobios facultativos y microaerófilos. Agar nutritivo Temperatura óptima de crecimiento: según el rango de temperatura al cual el Microorganismo presenta su mayor crecimiento. según los cuales se los clasifica en autótrofos. Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan. por ello.6 y 7. El conocimiento de las necesidades nutritivas y físicas de los microorganismos es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado. mesófilos y Termófilos. Reconocer la necesidad de evitar la contaminación tanto de los medios de cultivo como de los demás elementos utilizados en el laboratorio de microbiología. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN SU ORIGEN Los medios de cultivos pueden clasificarse en: . Rango de pH: en general el rango óptimo de pH para la mayoría de las bacterias oscila entre 6. INTRODUCCIÓN: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes. se los clasifica en psicrófilos. factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos.

o por el agregado de inhibidores.a Medios enriquecidos o mejorados: se obtienen a partir de un medio común. Selectivos II. huevos. por ejemplo. cuya concentración no se conoce con exactitud y que proveen todos los nutrientes necesarios. agua. yema de huevo etc. albúmina. Se citan como ejemplos el agar sangre y el agar chocolate.Naturales: Son aquellos que existen como tales en la naturaleza. Medios especiales: se los clasifica según su finalidad.a. papa. Se utilizan para el cultivo de microorganismos exigentes en cuanto a sus requerimientos nutricionales. Medios comunes: Permiten el desarrollo de una gran variedad de microorganismos. Especiales II. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS ARTIFICIALES COMPLEJOS SEGÚN SU FINALIDAD I. Tales como sangre. II. suero. A los medios artificiales a su vez se los puede dividir en sintéticos y complejos. Comunes Medios Artificiales Complejos II. Enriquecidos II. como por ejemplo el caldo nutritivo. leche. puede ser una simple solución de sales con una fuente de carbono o puede contener muchos compuestos orgánicos. Un medio no sintético o complejo e s aquel del que se desconoce su composición química exacta. etc. Para esto últ imo se busca establecer condiciones desfavorables de pH.c. Diferenciales I. Un medio del cual se conoce exactamente su composición química se denomina sintético o químicamente definido. como el Caldo carne y agar carne. II. sangre. en una flora mixta. permitan el desarrollo de determinadas especies y al mismo tiempo inhiban la proliferación de la flora acompañante. con el agregado de elementos nutritivos elegidos según las necesidades. animales o microbianos. . Artificiales: Están compuestos de substancias que son manipuladas por el hombre en el laboratorio.b Medios selectivos: Estos medios han sido modificados de alguna manera para que. nutrientes y de temperatura. tierra.b. II. se trata básicamente de extractos de tejidos vegetales.

Estos medio selectivo.El agar Saburaud es un ejemplo de medio selectivo.6 favorece el desarrollo de hongos al mismo tiempo frena el d esarrollo de la mayoría de las bacterias. sobre la base de la diferencia de color de sus respectivas colonias. II. Sin embargo en agar con azul de metileno las colonias de E. por ejemplo un indicador. hasta un número suficiente tal que sea posible su aislamiento en medios selectivos apropiados. II. algún elemento presente en él permite diferenciarlos. el alcohol fenil etílico y la azida de sodio. Un ejemplo de este t ipo es el agar con eosina azul de metileno que diferencia Escherichia coli de Enterobacter aerogenes. . aerogenes son rosadas con un centro azul y rara vez presentan brillo.2 Medios selectivos para aislamiento: son medios selectivos sólidos.b. coli son oscuras y con brillo metálico. verde brillante).1 Medios selectivos para enriquecimiento: Son m edios en los que los microorganismos crecen en libre competencia. en cambio las colonias de E. Estas diferencias se basan en alguna propiedad bioquímica que unos poseen y otros no. CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN BUEN MEDIO DE CULTIVO Como ya se ha señalado. viéndose favorecidos aquellos para los cuales las condiciones de desarrollo son las más apropiadas. por el agregado de agentes que inhiben el crecimiento.b. Aunque dos o más tipos de microorganismos pueden crecer en este medio.diferenciales resultan muy útiles para el aislamiento de un microorganismo separándolo de la flora acompañante. los antibióticos. no llegándose a inhibir totalmente el crecimiento del resto de microorganismos. Se ponen en evidencia las colonias de los microorganismos que se desea aislar y a su vez se diferencian de aquellas que pudieran haber desarrollado provenientes de la flora acompañante. forman colonias de color blanco grisáceo. En su mayor parte los medios diferenciales son asimismo selectivos. se utilizan para sembrar directamente con la muestra incógnita o a partir del medio selectivo para enriquecimiento. Ejemplos de sustancias inhibidoras son algunos colorantes (cristal violeta. II. en el que el pH de 5. Se logra así la multiplicación de los microorganismos que se desea identificar. Cuando se cultivan ambas especies sobre agar nutritivo. la provisión de elementos nutritivos en concentración adecuada.c Medios diferenciales: permiten el desarrollo de muchas de las especies que coexisten en una mezcla que se desea aislar.

por lo que tiene la ventaja de ser sólido a la temperatura de incubación. El componente dominante en el agar es un polisacárido. que sea estéril y que no contenga sustancias inhibidoras. se solubiliza en agua a ebullición (funde hacia los 98°C) y al enfriarse forma un gel inodoro e insípido (se gelifica alrededor de los 42°C). CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Los elementos citados a continuación. Si se requiere sangre u otros componentes inestables. se los esteriliza por separado por otros procedimientos y se lo agrega al medio que ha sido esterilizado cuando se haya enfriado a 50 ºC. Con la excepción de algunos microorganismos marinos. la fluidez y la presión osmótica que se le quiera brindar a los microorganismos. 15 minutos). Si se desea visualizar movilidad se usa agar blando se le agrega agar al 3 %. En el laboratorio.depende del conocimiento que se tenga de las condiciones del desarrollo en el hábitat natural. Libre de inhibidores del crecimiento. cantidad necesaria de sales y agua. los medios de cultivo pueden present arse en forma líquida. en cuyo caso se los denominacal dos. o en forma sólida si se le agrega agar al caldo. como antibióticos y compuestos fácilmente oxidables al calor. En función de la consistencia se puede clasificar a los medio el líquidos y sólidos. La cantidad de sales y agua que se agregue a un medio de cultivo. Existe en rama o en polvo. En cuanto a los inhibidores. cabe aclarar que un compuesto puede actuar como inhibidor para algunos microorganismos y no para otros. el agar no es empleado como nutriente. Agua destilada o desionizada. aunque pueden no ser los únicos e incluso alguno de ellos puede estar ausente de la preparación. dependiendo de su grado de pureza. Para preparar un medio sólido se le agrega agar al 12-18 %. El agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. que tenga la consistencia y el pH adecuados. Agar. Un buen medio de cultivo es aquel que le provee a los microorganismos los nutrientes indispensables en la concentración adecuada. son los más frecuentemente usados en la preparación de los medios de cultivo. . este procedimiento garantiza la destrucción de todos los microorganismos no deseados que se encuentran presentes durante la preparación del medio de cultivo. al que acompañan algunas impurezas y que se obtiene de ciertas algas marinas. Si los componentes del medio son estables al calor se los lleva al autoclave (121 ºC. se relaciona directamente con el pH. En cuanto a la esterilización.

Los fluidos corporales no solamente contribuyen con factores de crecimiento. minerales y vitaminas. Agentes reductores. La adición de determinadas sustancias al medio de cultivo puede Convertirlo en selectivo (ver más adelante. Sistemas amortiguadores. peptonas. carne. etc. nitógeno y carbono. y sales como fosfatos bisódicos o bipotásicos. ser obtenida en condiciones asépticas directamente de un animal sano. azida sódica. pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales. previenen una desviación del pH. polipéptidos y aminoácidos. de levadura. sales biliares. por tanto.). Peptonas. Fluidos Corporales. mientras que el extracto de levaduras provee vitaminas del grupo B. ciertos órganos o tejidos animales o vegetales (por ejemplo carne. caseína. Proveen proteosas. telurito potásico. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos nitrogenados y sales minerales que carecen de identidad química definida. Los microorganismos más comunes son neutrófilos (el pH óptimo para su crecimiento está próximo a la neutralidad). Las peptonas son muy ricas en péptidos y aminoácidos. Para su preparación. plasma o suero sanguíneo son frecuentemente añadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos patógenos. Indicadores ácido. Indicadores de pH. La sangre no puede ser esterilizada y debe. Cisteína. etc. Ejemplos: extracto de carne. y posteriormente concentrado hasta la forma final de pasta o polvo.Extractos. Agentes selectivos. . semillas. cristal violeta.. sangre desfibrinada. Algunos componentes son incorporados al medio de cultivo Para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano. provee sustancias nitrogenadas. se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja. etc. clasificación de los medios de cultivo). antibióticos.base se añaden a menudo a los medios de cultivo Con objeto de detectar variaciones del pH. Por ejemplo. sino también con sustancias que neutralizan inhibidores del crecimiento de algunas bacterias. En el caso del extracto de carne en polvo o pasta. etc. Sangre completa. Estos preparados deshidratados son frecuentemente empleados en la confección de medios de cultivo.) son extraídos con agua y calor. o sustancias como las peptonas. de malta. gelatina. hígado. tioglicolato y otros son agentes reductores que se añaden a Los medios de cultivo para crear condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios.

se debe verificar que el pH sea el adecuado. Es conveniente añadir todos los ingredientes en el orden indicado y disolverlos de a uno antes de agregar el siguiente. siguiendo las instrucciones del fabricante y luego esterilizarlo. ACTIVIDADES I. En general. la preparación de un medio de cultivo comienza por hacer un estudio de la fórmula que constituye una receta que deberá respetarse estrictamente.Erlenmeyer .autoclave A. actúan como agentes selectivos frente a determinados microorganismos.tubos de ensayo con sus tapones . Preparación de medios de cultivo Materiales: . Primero se agrega agua destilada o desionizada a un recipiente.gradillas .pipetas de 10 ml . En caso que el medio de cultivo debamos hacerlo nosotros. luego se van incorporando todos los ingredientes de la lista en el orden en el que se encuentran.tiras de pH .balanza . Caldo nutritivo (Caldo carne) . Al finalizar la preparación y una vez que ésta se enfríe. la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados. PREPARACIÓN En la actualidad. Generalmente figura en primer término el compuesto que actúa como tampón.drogas correspondientes a cada fórmula . la preparación de un medio de cultivo se reduce simplemente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en agua destilada. como puede ser el PO4H2K. En caso de ser necesario se ajusta con CO3Na2 (1N) o ClH (1N). normalmente bajo la forma de liofilizados que es preciso re hidratar.a la concentración adecuada. que además provee fósforo y potasio.

2 Preparación: 1) Colocar un volumen medido de agua destilada en un recipiente.......... cuando están aún líquidos........... 4) Completar el volumen hasta 1000 ml................ . se apoyan sobre la mesada con un cierto ángulo hasta que solidifiquen. Fórmula: Peptona....... 7) Tapar....... 5 g Extracto de carne....2....... se tapan y esterilizan......s... 6) Colocar 10 ml del caldo en tubos de ensayo y volúmenes apropiados en frascos....... para ello se colocan 5 ml del agar en los tubos de ensayo. ..... 3 g Agua c........... 1000 ml Preparación: 1) Colocar 1000 ml de caldo en un recipiente... la esterilización se lleva a cabo una vez que se ha envasado el caldo agarizado..p...... 5) Esterilizar.. Se prepararán tubos con agar inclinado o en pico de flauta (slant)... B...... Si hace falta corregir con HONa 1M. 1000 ml pH.. 7. . 5) Dejar enfriar y medir pH. Cuando se prepara agar nutritivo no es necesario usar caldo estéril..Es el medio complejo más común para el cultivo de microorganismos. colocar capuchón de papel y esterilizar en autoclave 15 minutos a 1 atm..... Agar nutritivo Fórmula: Agar.. 20 g Caldo nutritivo..... ........ Una vez afuera del autoclave... 2) Agregar el agar calentando a baño maría agitando hasta disolución total... 4) Llevar 10 ml a tubos de ensayo.... 2) Disolver los ingredientes de a uno y por orden... 3) Llevar a ebullición agitando periódicamente con una varilla de vidrio... 3) Ajustar pH hasta 7......

polio.Se prepararán también tubos con agar para punción. Dicha contaminación puede tener dos orígenes: Químico o microbiológico. Su presencia indica el potencial patogénico en aguas. etc. 1979. en el sentido de que posibilitan actividades humanas e industriales directamente productivas que influyen en la tasa de crecimiento económico. Debido a que la concentración de dichos agentes habitualmente es baja. 927 -941). Los abastecimientos de agua se consideran en todos los países como inversiones básicas de interés general. fiebre tifoidea. Por último se prepararán cajas de Petri con agar nutritivo. Dicho grupo se caracteriza por estar formado por microorganismos que habitan el tracto gastrointestinal de los vertebrados. giardiasis. de tal modo que en cercanías de las grandes poblaciones incluso el agua de lluvia es portadora de un elevado número de microorganismos (Guinea. Las bacterias que se utilizan normalmente forman parte de un grupo llamado coliforme. dentro de la familia Enterobacteriaceae (Madigan. o bien medio solidificado y fundido a ebullición en Baño María. hepatitis. luego se lo vuelca asépticamente en caja de Petri estéril. Se deja enfriar el agar hasta 45 ºC. químicos o biológicos del agua que son responsables de su calidad y la hacen inadecuada para sus numerosos usos y aplicaciones. amebiasis. No debe olvidarse que recibe y arrastra partículas cargadas de bacterias. Bacillus. Enterococcus). 2004. En este caso. Se deja solidificar en posición horizontal. El análisis microbiológico por recuento de bacterias indicadoras de contaminación fecal en aguas es de suma importancia al evaluar el estado sanitario del sistema en estudio. su detección directa en aguas . La contaminación es un proceso de alteración o de modificación más o menos importante de los equilibrios físicos. Medio de cultivo caldo brilla Introducción Las disponibilidades en agua constituyen un factor fundamental para el desarrollo económico y la salud pública. una vez que los tubos fueron retirados del autoclave se dejan solidificar en posición vertical. 1-8). es decir la probable existencia de agentes causantes de enfermedades como cólera. Micrococcus) o exógenos (Escherichia coli. Para ello se puede utilizar medio de cultivo recién esterilizado y todavía líquido. El agua natural constituye un reservorio de microorganismos autóctonos (Pseudomonas. teniendo la precaución de flamear previamente la boca del tubo o recipiente a la llama del mechero.

entre otras. agregar 2 g/l de ácido cítrico y se lleva a pH=6 con hidróxido de sodio 1N.0133 g/l. 2000.1 g/l. Sulfato de magnesio 0. Por el contrario en poblaciones bajas (menos de 10 células por mL) es más eficaz la técnica de NMP porque permite la utilización de muestras de mayor tamaño. Verde brillante 0. no proporcionando una enumeración precisa. Muestras de agua Se analizan 250 mL de muestras de agua de diferentes grados de contaminación: agua del Río de la Plata y agua de pozo. 137 -141). Caldo Citrato de Koser: Cloruro de sodio 5 g/l. por la cual se utiliza. Hidrógeno fosfato di potásico 1 g/l. mediante la realización de recuentos paralelos de aguas de diferentes grados de contaminación. a las bacterias coliformes.es complicada. Como dichas clases cuentan con alrededor de 20 estudiantes. . Dentro de los métodos de recuento de bacterias se encuentran dos que son los más ampliamente utilizados: la técnica de Número Más Probable (NMP) y la técnica de recuento en placa. El objetivo del presente trabajo práctico es la comparación de dos métodos de enumeración de bacterias de importancia sanitaria. Bilis de buey desecada 20 g/l. Las muestras deben tomarse en forma estéril. Con la primera sólo se obtiene una estimación de la población de microorganismos contenidos en una muestra. 4-metilumbeliferil-D-glucurónido 0. disolver los componentes hasta obtener una solución límpida. Medios de cultivo Caldo Brila Fluorocult (Merck. el recuento en placa supera en precisión a este método. utilizando las técnicas de NMP y recuento en placa. Cuando la población es muy elevada. Hidrógeno fosfato de diamonio 1 g/l. en medios selectivos para coliformes. 1994.2 g/l. utilizando frascos adecuados. se forman 10 grupos de trabajo de 2 personas cada uno. L -triptofano 1 g/l. que son de fácil detección y cultivo en laboratorio y presentan un tiempo de supervivencia que excede al de los patógenos en ese ambiente (Vullo. Lactosa 10 g/l. Metodología Tiempo estimado de realización y distribución de los grupos de trabajo La experiencia fue diseñada para tres clases de trabajos prácticos de tres horas de duración cada una pertenecientes a la materia de grado Microbiología General e Industrial de la Licenciatura en Ciencias Químicas de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UBA. 275) : Peptona 10 g/l. perteneciente al conurbano bonaerense.

Sembrar 10 mL de la muestra en cada uno de los tubos de doble concentración.1 g/l. Mezcla de cromógenos 0. Los medios con Fluorocult poseen MUG: 4-metilumbeliferil. a partir de cada tubo con gas. Todos deben poseer en su interior una campana de Durham para ver producción de gas.5%(v/v) de HCl(c). Agar -agar 12 g/l.glucuronidasa. Dihidrógenofosfato potásico 1. 1998. 9-53. Ver esquema de la Figura 1.1 mL en los de simple concentración. Coli). Piruvato sódico 1 g/l. Incubar 48 hs. WEF.Agar Chromocult (Merck.Según los resultados positivos por la aparición de turbidez en los tubos con Caldo Citrato de Koser. y ver el desarrollo de color púrpura en la fase orgánica.Seleccionar los tubos que posean gas en el interior de la campana de Durham. Con este patrón de tubos positivos. en Caldo Citrato de Koser. calcular el NMP de bacterias coliformes de origen no fecal. que al clivarse libera un producto (4 -umbeliferona) de fluorescencia azul. Dichos tubos serán considerados positivos. a 37°C. Triptófano 1 g/l. 1994. 3.Incubar los tubos 48 hs a 37°C.Disponer de series de tres tubos con 10 mL cada uno de Caldo Brila -Fluorocult doble concentración y series de tres tubos con 5 mL cada uno del mismo caldo. 2002 178 -179) según: NMP/100 mL= nº tubos positivos x 100 / (mL muestra en tubos negativos x mL muestra totales)½. . 5.2 g/l. Existen muchos grupos bacterianos que poseen dicha enzima.Sembrar con ansa recta. Por lo tanto la aparición de fluorescencia y gas lleva a poder inferir la presencia de bacterias coliformes fecales (E. pero simple concentración. 6. calcular por ambos métodos el NMP de bacterias coliformes fecales / 100 mL de muestra.Exponer los tubos positivos de Caldo Brila -Fluorocult a la luz ultravioleta. Cloruro sódico 5 g/l. Buscar en la tabla (Figura 2) el NMP de bacterias coliformes totales / 100 mL de muestra. 1 mL o 0. Merck. pero dentro de las Enterobacterias sólo Escherichia coli y algunas especies de Salmonella y Shigella cuentan con ella. Para poder considerar estos tubos positivos para coliformes de origen fecal debe agregarse 1 mL de reactivo de Kovacs (p-dimetilamino benzaldehído 5%(p/v) en alcohol amílico o isoamílico con 2.-D-glucurónido. Calcular en forma paralela el NMP/100 mL (AWWA. 307) para la prueba de indol en cada tubo. 2. Laurilsulfato sódico 0. APHA. Hidrógeno fosfato di potásico 3 g/l. 7. Recuento de bacterias del grupo coliforme según la técnica de NMP 1.7 g/l. 4. sustrato de la enzima -D. 1994. 270): Peptona 3 g/l. Hurst.

mientras que las violetas a las fecales. Escherichia coli escinde ambos compuestos dando coloración violeta. fecales y no fecales presentes en la muestra. 2.8. Recuento en placa de bacterias del grupo coliforme 1.Observar y contar las colonias obtenidas. B. Muestra de agua de pozo del con urbano bonaerense Se siembra la muestra sin diluir en placas de Agar Chromocult. Rastrillar el inóculo con espátula de Drigalsky.Incubar a 37°C durante 48 hs.Calcular el número promedio de unidades formadoras de colonias por mL (UFC/mL) de bacterias coliformes totales. 3. El Agar Chromocult identifica coliformes totales (enterobacterias fermentadoras de lactosa) y Escherichia coli a través de dos sustancias cromógenas: Salmon-gal que pone en evidencia la -D-galactosidasa dando colonias de color rojo y X-glucurónido que determina la presencia de la -D glucuronidasa dando colonias azules. El medio tiene también laurilsulfato de sodio para inhibir el desarrollo de Gram positivas y triptófano para realizar la prueba de indol (rec onocimiento de E. Los resultados se resumen en la Tabla 4. detalladas en la Figura 1 e informar los resultados del recuento. coli) 4. violetas indol positivas (Coliformes fecales) y la suma de ambas (Coliformes totales). según la expresión: UFC/mL = Número de colonias promedio de ambas placas Dilución x volumen del inóculo Obtención. Muestra: Río de la Plata Se realizan diluciones seriadas al décimo de la muestra hasta 10-4. Las especies que no poseen ninguna de las enzimas se evidencian a través de colonias transparentes.Efectuar las correcciones por normalización.1 mL de muestra en placas de Petri preparadas con Agar Chromocult. Se siembran en placas de Agar Chromocult y se calcula el número de UFC/mL de las colonias rojas (Coliformes no fecales).Inocular por duplicado 0. violetas indol . Las rojas pertenecen al grupo de las no fecales. manejo e interpretación de resultados Recuento en placa de bacterias del grupo coliforme A. Las colonias rojas y violetas son características de bacterias coliformes. y se calcula el número de UFC/mL de las colonias rojas (Coliformes no fecale s).

Levine EMB Agar. aplicable a la enumeración de microorganismos bajo ciertas condiciones. 1998. En este caso. Los resultados se resumen en la Tabla 5. Medio adecuado para la búsqueda y diferenciación de bacilos entéricos. el resultado oscila entre 2.6 bacterias coliformes totales/100 mL sólo se puede estimar por la técnica de NMP. fue modificada por Levine. y por la USP para la realización de los ensayos límite microbiológico. APHA. Como conclusión general del trabajo. Los valores de recuento en placa ( Tabla 4) están dentro de este intervalo. 9-52). obtenido mediante la técnica de NMP corresponde a la mitad con respecto al valor en placa (Tablas 2 y 4). APHA. no se puede realizar el recuento en placa debido a la baja proporción de bacterias coliformes presentes en la muestra. WEF. aguas servidas. eliminando la . Es recomendado por la American Public Health Association. para el análisis microbiológico de productos lácteos y alimentos. según el error de la técnica. En este caso el intervalo del 95% de confianza se encuentra entre 1 y 13 bacterias coliformes totales/100 mL (AWWA. Así por ejemplo para el caso de agua de río.4 y 1. 1998. Un recuento tan bajo como 3. Para el recuento de coliformes totales. WEF. es necesario conocer el origen y posible nivel de contaminación microbiológica de una muestra de agua a analizar. Fundamento La fórmula original de este medio de cultivo. Los resultados muestran entonces una mayor precisión en el recuento en placa. y otros materiales. ya que el método de NMP es un concepto estadístico. Para el caso de un agua de poz o. se determina que el recuento de bacterias coliformes totales por mL. a partir de muestras clínicas. el NMP calculado es 7. derivado de la teoría de probabilidades.positivas (Coliformes fecales) y la suma de ambas (Coliformes totales).2 x 104 UFC/mL. El intervalo de 95% de confianza para el método de NMP es muy amplio (AWWA. para utilizar el método de enumeración de mayor precisión en cada caso. es decir cuando las muestras son lo suficientemente diluidas como para realizar un recuento en placa. 9-52). Discusión de los resultados Una vez realizada la lectura de los resultados para las distintas muestras.6 x 105 / 100 mL (Tabla 2: dilución 10 -4 de la muestra original) y su intervalo de 95% de confianza oscila entre 3 y 25 x 105 / 100 mL. se dispone de una última clase destinada a la discusión e interpretación de los resultados obtenidos por los distintos grupos de trabajo.

rosa púrpura.sacarosa e incrementando la concentración de lactosa.065 pH final:7. en aerobiosis. originando colonias incoloras y puntiformes. confluentes 700603 .0 Agar 15. inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas. pueden crecer. La combinación utilizada de eosina y azul de metileno. coli. Es un medio selectivo y diferencial.1 ± 0. permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. con brillo metálico.0 Eosina 0. adecuado para el crecimiento de enterobacterias. para la identificación de género y especie. Calentar a ebullición hasta disolución total.0 Fosfato di potásico 2. enterococos) y levad uras. Los microorganismos fermentadores de lactosa.4 g de polvo por litro de agua destilada. estriando la superficie. y también. originan colonias de color azulado negro. por lo cual será necesario realizar pruebas bioquímicas. Fórmula (en gramos por litro) Peptona 10. Las colonias producidas por microorganismos no fermentadores de lactosa son incoloras.0 Lactosa 10. producen colonias con brillo metálico). Instrucciones Suspender 37.4 Azul de metileno 0. lo que permite una mejor diferenciación de E. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 121°C. dejar reposar 5 minutos. Este medio de cultivo. Algunas bacterias Gram positivas (cepas de estafilococos. Resultados Microorganismos Crecimiento Características de las colonias Bueno a excelente Verdosas con brillo metálico y centro negro Escherichia coli ATCC 25922 azulado Klebsiella pneumoniae ATCC Bueno a excelente Mucosas. Incubación De 18-24 horas a 35-37 °C.2 Siembra Directa. es útil para la orientación y no confirmación de especies bacterianas (ya que numerosas cepas de Citrobacter spp.

M. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido. pequeñas. aureus ATCC 25923 Pobre Enterococcus faecalis ATCC 29212 Pobre Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno a excelente Salmonella typhimurium ATCC Bueno a excelente 14028 Características del medio Incoloras Incoloras Incoloras. Medio preparado: a 2-8 ºC.B. Presentación x 100g :Código: B02-104-05 x 500g :Código: B02-104-06 6 x 50 ml: B04-104-84 E. ligeramente opalescente con un precipitado floculento disperso. éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. aeruginosa ATCC 27853 Bueno a excelente Proteus mirabilis ATCC 43071 Bueno a excelente S. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. y aquellos que son incapaces de hacerlo. pequeñas. para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. .) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.A. El color púrpura se restaura por agitación. está dada por los indicadores eosina y azul de metileno. puntiformes Incoloras. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae. La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. ya que es parte esencial del mismo. Este medio (también denominado E.M. Agar. puntiformes Incoloras Incoloras Medio preparado: color púrpura con tonos verdosos.P. Placas preparadas: color púrpura. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa. Fundamento Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine.

por estriado a partir de un inóculo poco denso. Y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda. En profundidad. para favorecer el desarrollo de clamidosporas. Resultados Microorganismos Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Proteus mirabilis ATCC 43071 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Shigella flexneri ATCC 12022 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Características del medio: Tipo de Colonia Verdosas con brillo metálico y centro negro azulado Mucosas. mientras que Acinetobacter spp. . confluentes Incoloras Incoloras.5 Eosina 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0. mezclar. puntiformes Incoloras Incoloras 0. mientras que las que no lo hacen son incoloras.2 ± 0. calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos hasta su disolución. Este medio permite el crecimiento de Candida spp.Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp.2 Siembra En superficie. un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella. en aerobiosis. Reposar 5 minutos. Enterococcus spp.0 Fosfato di potásico 2.0 Lactosa 5. Esterilizar en autoclave a no más de 121°C durante 15 minutos. Fórmula (en gramos por litro) Peptona 10. En este medio se obtiene además. para obtener colonias aisladas. rosa púrpura.4 Azul de metileno pH final: 7. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada. Presentan un característico brillo metálico. la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. Enfriar a 45°C y distribuir agitando suavemente. pequeñas. Crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes.0 Sacarosa 5. Como colonias rosadas y puntiformes. albicans.0 Agar 13. Incubación De 24 a 48 horas a 35-37 °C.065 Instrucciones Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada.

Placas preparadas: color púrpura. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido. El color púrpura se restaura por agitación. La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. ya que es parte esencial del mismo. Medio preparado: a 2-8 ºC. Presentación x 100g :Código: B02-101-05 x 500g :Código: B02-101-06 6 x 50 ml: B04-101-84 . Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10 -35 ºC.