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CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

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CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo pueden clasificarse según diferentes criterios, pero los más importantes son aquellos que se basan en: a) Su consistencia b) Su utilización c) Su composición d) Su origen

a) SEGÚN SU ESTADO FÍSICO (CONSISTENCIA):
1) Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración. 2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un agente gelificante. Los más utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una proteína animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y además su uso está muy limitado porque su punto de fusión es bajo (licúa a temperatura ambiente) razón por la que no puede utilizarse para cultivos a 37ºC, que es la tempera óptima de crecimiento para muchos microorganismos. Agar-agar: Es un polímero de azúcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molécula insoluble enagua pero soluble en agua caliente; una solución al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39ºC y no se funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y solidifica una vez fundido alrededor de los 45ºC. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgánicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un microorganismo. Aunqu e el agar es una mezcla de polisacáridos, Araki, en 1937, los dividió en dos grupos: - agarosa, con poco sulfato, libre de ácido pirúvico, y - agaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporción de agarosa a agaropectina en el agar varía según el alga de origen. El agar puede utilizarse para diferentes fines, aunque los más importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar bacteriológico, agares purificados y agarosa, utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que se produce, se utiliza en trabajo microbiológico, por lo que es importante la ausencia de metales tóxicos.

3) Medios semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias

SEGÚN SU UTILIZACIÓN.
1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de b acterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio más conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar común, que resulta de la adición de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc. 2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc ) El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate). 3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias. 4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibidores podrían considerarse como una variante más restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adición de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo de una población determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos. 5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies. La adición de un azúcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los gérmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. También lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemólisis), el SS (que es doblemente diferencial), etc. 6) Medios de identificación: Son los destinados a comprobar alguna cualidad específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de

Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el Laboratorio de Microbiología. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales. Cary-Blair. 2) Medios sintéticos: Son aquellos que contienen en su composición exclusivamente sustancias químicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas. donde la reproductibilidad no podrá ser exacta. cualquier medio al que se le haya añadido un elemento diferencial de un microorganismo. 7) Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un microorganismo ya aislado. Son ejemplos de esto últimos los medios CPS ID3 o Uriline ID (Biomerieux). . resultando un medio de composición perfectamente definida. y los más empleados se preparan a partir de tejidos animales. el medio de Simmons y en general. son medios utilizados en identificación. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas: a) haciendo pases periódicos de placa a placa. y más raramente de vegetales. por diversas razones nos interese mantener. 9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clínicas que no pueden sembrarse inmediatamente. y por consiguiente no es rigurosamente constante.los microorganismos. Se emplean en la obtención de vacunas. El caldo-infusión cerebro-corazón (BHI). Son ejemplos típicos de este grupo los medios de Stuart -Amies. 8) Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa que. Su utilización debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior del medio (generalmente en un tubo). Actualmente están apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios específicos de identificació n para ciertos microorganismos. es un ejemplo típico de estos medios. b) mediante liofilización de una suspensión bacteriana. y c) congelando las cepas en leche descremada estéril al 0. en la investigación y en la industria. Su composición no es exactamente definida. los medios de cultivo pueden ser clasificados en: 1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados. Según las sustancias que entren a formar parte en su composición. En la práctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los más empleados. con lo cual se consigue simultáneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de identificación. el sustrato específico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. utilizados para identificar los gérmenes urinarios más importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilización de sustratos cromogénicos específicos. etc.1%. ATENDIENDO A SU COMPOSICIÓN. Los medios más adecuados para la multiplicación suelen ser líquidos. El agar Kligler.

etc. extracto de tejidos. b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cualitativa y cuantitativamente. Rickettsias. ß ó gamma). Según su origen: a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de o rigen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce exactamente. Ejemplos de este tipo son. En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgánico complejo (extracto de levadura. Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de gérmenes que no presentan exigencias particulares. DESCRIPCIÓN Y UTILIZACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO MEDIOS DE CULTIVO COMUNES . c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factore s de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo.3) Medios semisintéticos: El gran número de factores de crecimiento exigidos para ciertos gérmenes hace que la fabricación de un medio sintético para estos gérmenes sea imposible o demasiado cara. pero sí puede añadir factores inhibidores del crecimiento . No es diferencial. Para la preparación del agar sangre se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sódico o un preparado enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. y aunque no vamos a enumerarlos todos. como por ejemplo extracto de levadura. haciéndolo exclusivamente en células vivas con unas características determinadas. etc. Se utiliza para el crecimiento de estreptococos. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza además para la investigación de los diversos tipos de hemólisis ( . las Chlamydias. La adición de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que están en el interior de los hematíes.Ciertos gérmenes no crecen en ningún medio por muy enriquecido que esté éste. Son los más corrientemente utilizados. sí son los más conocidos en un laboratorio de Microbiología.). aparte de los virus.

El medio contiene sales biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y gérmenes Gram positivos. Es un medio inhibidor de los gérmenes Gram positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para enterobacterias por su contenido en sales biliares.L. aunque la interpretación sea diferente al anterior medio por la incorporación de otro indicador: el azul de bromo timol. Estas mezclas.S. : El medio C. (Cistina Lactosa Electrólito Deficiente) está recomendado para el recuento e identificación presuntiva de los microorganismos de las vías urinarias.bacteriano presentes en el suero. . Su bajo contenido en electrolitos evita la invasión de los cultivos po r Proteus. Por esta razón el agar chocolate contiene hemoglobina.La presencia de lactosa en su composición le confiere el carácter de medio diferencial. humana). pero en él pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. etc. Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que se destruyan las sustancias inhibidoras. Isovitalex. Agar S.L. utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocola te enriquecido al cual se ha añadido una mezcla de tres antibióticos específicos que impedirán el crecimiento del resto de la flora acompañante. Por adición de uno o varios antibióticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos.: El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales. La sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al 5%. conejo. que son termolábiles. Las colonias lactosa positivas aparecerán de color amarillo y las lactosa negativas lo harán con un color verdoso. Los gérmenes que fermenten la lactosa producen una acidificación del medio que hacen aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes. En su composición lleva un azúcar (lactosa) y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferen cial.E. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos y meningococos) y Haemophilus. El agar chocolate puede convertirse quizás en uno de los medios más enriquecidos si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies (caballo. blanco o azulado.D. Las colonias lactosa negativas serán incoloras. apareciendo del mismo color que el medio subyacente (naranja).) contienen más de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. denominadas de forma diferente según las casas comerciales (Polivitex. Agar C.E. Un ejemplo clásico es el Thayer-Martin. Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base. Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el aislamiento e identificación de enterobacterias. pues facilitan las reacciones hemolíticas o contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados gérmenes.D.

igual que el SS.Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan nunca la lactosa por lo que este medio es excelente para descartar todas las colonias que no cumplan este requisito. Permite el cultivo de aerobios. ID3. sacarosa y salicilina) permiten ampliar el poder diferencial de este medio. La inhibición tiene lugar. ej) Granada. porque además de indicarnos el comportamiento de los gérmenes con relación a la lactosa. Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. que se mani fiesta como un precipitado de color negro en el centro de la colonia. Neisseria o Estreptococos. Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la realización de los antibiogramas o pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos. : Medio cromogénico desarrollado por Biomerieux. como Brucella. mediante la utilización de un sustrato cromogénico específico de este microorganismo. Islam o New GBS: Medios utilizados para detección de Estreptococos agalactiae. una colonia incolora y con un punto negro central es sospechosa de Salmonella. anaerobiosy . Las cualidades del agar Hektoen se deben a su riqueza en peptonas y azúcares. igual que el de Shigella. faecalis. y será exclusivamente a estas colonias a quienes se hagan las pruebas bioquímicas confirmatorias de esta especie.P.S. El agar SS es doblemente diferencial. C. Otros microorganismos diferentes requieren los sistemas de identificación habituales (API. Así. obteniéndose colonias más numerosas y voluminosas que en los medios selectivos usuales. Por esta razón debe utilizarse siempre junto con otro medio menos inhibidor como el Hektoen. A él nos referiremos más ampliamente en el capítulo correspondiente Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de gérmenes exigentes. Es un medio muy enriquecido. La presencia de tres azúcares (lactosa. que permite la identificación de E. pero no es diferencial. que neutralizan el efecto inhibidor de las sales biliares respecto a ciertos gérmenes de cultivo delicado (Shigella en particular). El crecimiento de Salmonella es excelente. mirabilisy E. P. nos muestra los gérmenes que son capaces de producir ácido sulfhídrico. con la simple visualización d el cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos. Agar Hektoen: Es un medio más diferencial y menos selectivo que el agar SS. El agar SS es un medio muy inhibidor que a veces impide incluso el crecimiento de ciertas especies de Salmonella y sobre todo de Shigella. coli y en menor medida sobre Proteus y Citrobacter. Este medio es capaz de detectar los gérmenes formadores de SH2. Hay que señalar que el vibrión colérico crece bien en este medio.La presencia de lactosa y rojo de metilo nos permiten diferenciar las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las que no lo hacen (incoloras). coli. azulo marrón). p. sobre E. esencialmente. La identificación solo requiere la adición de un reactivo para confirmar o descartar la especie sospechada. Caldo tioglicolato con resazurina: Es un medio recomendado para controles de esterilidad.

Es un medio diferencial e inhibidor a la vez. Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa positivos. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio en diferencial: así se puede identificar presuntivamente el Staphylococcus aureus. investigar la formación de gas y comprobar si el microorganismo puede producir sulfato ferroso a partir del tiosulfato sódico. Agar Kligler : Medio específico para pruebas de identificación de enterobacterias. Agar Gardnerella: Agar con sangre humana más una mezcla de antibióticos que permiten la observación de colonias betahemolíticas características de Gardnerella vaginalis Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de Campylobacter intestinales creciendo a 42º C en microaerofilia. Agar King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas. Agar Chapman: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos.microaerófilos. . cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo metálico característico. pues impide el crecimiento de Gram positivos y diferencia muy bien a E. Medio de Loeffler: Es un medio específico para el cultivo de Corynebacterium difteriae. Caldo selenito-F: Se utiliza exclusivamente para enriquecimiento de Salmonellas. a la vez que los diferencia del resto. El segundo pone además de manifiesto la pigmentación fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV. podemos ir adelantando que se trata de un medio diferencial que permite conocer el comportamiento del microorganismo ante dos azúcares (glucosa y lactosa). ya que estegérmen crece bien en medios salados y fermenta el manitol (colonias amarillas). Tiene un bajo potencial redox que. Su elevado contenido en cloruro sódico permite la inhibición de la mayoría de los otros gérmenes. Aunque de él hablaremos con más detenimiento en el capítulo de pruebas de identificación bacteriana. al aumentar. Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sucrosa (DCLS): Similar al agar SS. inhibiendo Gram positivos y la mayoría de enterobacterias. Agar Cetrimida. Agar Levine ó EMB (Eosina azul de metileno): Se utiliza para aislamiento de enterobacterias. coli. Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el cultivo de anaerobios. se manifiesta por un color rosa del medio.

Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract) : Se utiliza para el aislamiento de bacterias del género Legionella Löwenstein-Jensen: Este medio se utiliza para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis. para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos.3 ± 0. según el uso a que se destine. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. Siembra En superficie o por la técnica de pour plate. Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2 minutos hasta su disolución. Fundamento Por las características de sus componentes es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. mirabilis ATCC 43071 Crecimiento Bueno-excelente . Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos. aguas y otros materiales de importancia sanitaria. El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes. Resultados a-Agar nutritivo: Microorganismos P. Incubación En aerobiosis. El huevo se utiliza como sustancia de enriquecimiento. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona 5. Nutritivo Agar Medio de cultivo utilizado para propósitos generales.2 15.0 Extracto de carne 3. a 35-37 ºC durante 24 horas. Contiene verde malaquita para inhibir parcialmente el crecimiento de otras bacterias.0 Cloruro de sodio 8.0 Instrucciones Suspender 31 g de polvo por litro de agua destilada. La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano.0 Agar pH final: 7. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano.

comenzaremos examinando los medios de cultivo. pyogenes ATCC 19615 S. aeruginosa ATCC 27853 Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente B-Agar nutritivo suplementado con 5% de sangre de carnero: Microorganismos S. razón por la cual es difícil aislarlas. Presentación x 100g :Código: B02-122-05 x 500g :Código: B02-122-06 6 x 50 ml: B04-122-84 MEDIOS DE CULTIVO Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos. Si bien el aislamiento es un paso crucial en este camino.E. Medio preparado: a 2-8 ºC. aureus ATCC 25923 B. pneumoniae ATCC 49619 Crecimiento Abundante Abundante Abundante Hemólisis Beta Alfa Alfa Características del medio Medio preparado: ámbar claro a medio ligeramente opalescente. OBJETIVOS:  Conocer la clasificación de los medios de cultivo.  Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación del medio de cultivo en la práctica microbiológica. cultivar e identificar a la misma. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. ya que en estos últimos se basan muchos de los principios del aislamiento. cereus ATCC 10876 E. para lo cual debemos estar preparados para aislar. coli ATCC 25922 S.  Adquirir práctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir de sus componentes individuales. pneumoniae ATCC 6305 S. . faecalis ATCC 29212 P. A menudo nuestro interés es caracterizar una especie bacteriana.

Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan.6 y 7. por ello. La diversidad metabólica de los microorganismos es enorme. anaerobios facultativos y microaerófilos. Reconocer la necesidad de evitar la contaminación tanto de los medios de cultivo como de los demás elementos utilizados en el laboratorio de microbiología. no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos.2. heterótrofos. es cualquier medio que proporcione sustancias nutritivas que permitan el desarrollo y reproducción de microorganismos. la variedad de medios de cultivo también lo es. anaerobios. quimiotrofos (litotrofos u organotrofos) y fototrofos. Es decir. El conocimiento de las necesidades nutritivas y físicas de los microorganismos es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado. Agar nutritivo Temperatura óptima de crecimiento: según el rango de temperatura al cual el Microorganismo presenta su mayor crecimiento. se los clasifica en psicrófilos. según los cuales se los clasifica en autótrofos. Rango de pH: en general el rango óptimo de pH para la mayoría de las bacterias oscila entre 6. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN SU ORIGEN Los medios de cultivos pueden clasificarse en: . mesófilos y Termófilos. Tipo respiratorio: aerobios. factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Las características de los microorganismos a tener en cuenta al momento de preparar un medio de cultivo adecuado para su desarrollo en el laboratorio son: Tipo trófico: se refiere a los requerimientos de carbono y energía. INTRODUCCIÓN: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes.

Un medio no sintético o complejo e s aquel del que se desconoce su composición química exacta. papa.c. por ejemplo. albúmina. en una flora mixta. Se utilizan para el cultivo de microorganismos exigentes en cuanto a sus requerimientos nutricionales. Selectivos II. o por el agregado de inhibidores. II. Artificiales: Están compuestos de substancias que son manipuladas por el hombre en el laboratorio. Un medio del cual se conoce exactamente su composición química se denomina sintético o químicamente definido. Para esto últ imo se busca establecer condiciones desfavorables de pH. Medios especiales: se los clasifica según su finalidad. Tales como sangre. sangre. con el agregado de elementos nutritivos elegidos según las necesidades. etc. tierra. cuya concentración no se conoce con exactitud y que proveen todos los nutrientes necesarios. . agua. Enriquecidos II. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS ARTIFICIALES COMPLEJOS SEGÚN SU FINALIDAD I. Medios comunes: Permiten el desarrollo de una gran variedad de microorganismos. Se citan como ejemplos el agar sangre y el agar chocolate. nutrientes y de temperatura. A los medios artificiales a su vez se los puede dividir en sintéticos y complejos. se trata básicamente de extractos de tejidos vegetales. leche. puede ser una simple solución de sales con una fuente de carbono o puede contener muchos compuestos orgánicos. permitan el desarrollo de determinadas especies y al mismo tiempo inhiban la proliferación de la flora acompañante.a Medios enriquecidos o mejorados: se obtienen a partir de un medio común. yema de huevo etc. suero. como el Caldo carne y agar carne. Comunes Medios Artificiales Complejos II.Naturales: Son aquellos que existen como tales en la naturaleza. II.b. Especiales II.a.b Medios selectivos: Estos medios han sido modificados de alguna manera para que. animales o microbianos. Diferenciales I. como por ejemplo el caldo nutritivo. huevos. II.

verde brillante).b. II. se utilizan para sembrar directamente con la muestra incógnita o a partir del medio selectivo para enriquecimiento. la provisión de elementos nutritivos en concentración adecuada. II. coli son oscuras y con brillo metálico. sobre la base de la diferencia de color de sus respectivas colonias. II.2 Medios selectivos para aislamiento: son medios selectivos sólidos. .1 Medios selectivos para enriquecimiento: Son m edios en los que los microorganismos crecen en libre competencia. no llegándose a inhibir totalmente el crecimiento del resto de microorganismos. Sin embargo en agar con azul de metileno las colonias de E. hasta un número suficiente tal que sea posible su aislamiento en medios selectivos apropiados. el alcohol fenil etílico y la azida de sodio. Se logra así la multiplicación de los microorganismos que se desea identificar.diferenciales resultan muy útiles para el aislamiento de un microorganismo separándolo de la flora acompañante. Estos medio selectivo. en el que el pH de 5. Un ejemplo de este t ipo es el agar con eosina azul de metileno que diferencia Escherichia coli de Enterobacter aerogenes. Estas diferencias se basan en alguna propiedad bioquímica que unos poseen y otros no. Se ponen en evidencia las colonias de los microorganismos que se desea aislar y a su vez se diferencian de aquellas que pudieran haber desarrollado provenientes de la flora acompañante.6 favorece el desarrollo de hongos al mismo tiempo frena el d esarrollo de la mayoría de las bacterias.b. Ejemplos de sustancias inhibidoras son algunos colorantes (cristal violeta. viéndose favorecidos aquellos para los cuales las condiciones de desarrollo son las más apropiadas. En su mayor parte los medios diferenciales son asimismo selectivos.El agar Saburaud es un ejemplo de medio selectivo. CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN BUEN MEDIO DE CULTIVO Como ya se ha señalado. forman colonias de color blanco grisáceo. Aunque dos o más tipos de microorganismos pueden crecer en este medio. por ejemplo un indicador. aerogenes son rosadas con un centro azul y rara vez presentan brillo. Cuando se cultivan ambas especies sobre agar nutritivo. en cambio las colonias de E. algún elemento presente en él permite diferenciarlos. por el agregado de agentes que inhiben el crecimiento. los antibióticos.c Medios diferenciales: permiten el desarrollo de muchas de las especies que coexisten en una mezcla que se desea aislar.

se solubiliza en agua a ebullición (funde hacia los 98°C) y al enfriarse forma un gel inodoro e insípido (se gelifica alrededor de los 42°C). En cuanto a la esterilización. En función de la consistencia se puede clasificar a los medio el líquidos y sólidos. Agar. CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Los elementos citados a continuación. se los esteriliza por separado por otros procedimientos y se lo agrega al medio que ha sido esterilizado cuando se haya enfriado a 50 ºC. al que acompañan algunas impurezas y que se obtiene de ciertas algas marinas. los medios de cultivo pueden present arse en forma líquida. cabe aclarar que un compuesto puede actuar como inhibidor para algunos microorganismos y no para otros. El componente dominante en el agar es un polisacárido. Si los componentes del medio son estables al calor se los lleva al autoclave (121 ºC. el agar no es empleado como nutriente. la fluidez y la presión osmótica que se le quiera brindar a los microorganismos.depende del conocimiento que se tenga de las condiciones del desarrollo en el hábitat natural. Para preparar un medio sólido se le agrega agar al 12-18 %. aunque pueden no ser los únicos e incluso alguno de ellos puede estar ausente de la preparación. . Si se requiere sangre u otros componentes inestables. este procedimiento garantiza la destrucción de todos los microorganismos no deseados que se encuentran presentes durante la preparación del medio de cultivo. El agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. Existe en rama o en polvo. En cuanto a los inhibidores. cantidad necesaria de sales y agua. Si se desea visualizar movilidad se usa agar blando se le agrega agar al 3 %. se relaciona directamente con el pH. Con la excepción de algunos microorganismos marinos. En el laboratorio. Agua destilada o desionizada. o en forma sólida si se le agrega agar al caldo. por lo que tiene la ventaja de ser sólido a la temperatura de incubación. Un buen medio de cultivo es aquel que le provee a los microorganismos los nutrientes indispensables en la concentración adecuada. 15 minutos). como antibióticos y compuestos fácilmente oxidables al calor. dependiendo de su grado de pureza. son los más frecuentemente usados en la preparación de los medios de cultivo. que sea estéril y que no contenga sustancias inhibidoras. en cuyo caso se los denominacal dos. La cantidad de sales y agua que se agregue a un medio de cultivo. que tenga la consistencia y el pH adecuados. Libre de inhibidores del crecimiento.

Estos preparados deshidratados son frecuentemente empleados en la confección de medios de cultivo. La sangre no puede ser esterilizada y debe. . Fluidos Corporales.. tioglicolato y otros son agentes reductores que se añaden a Los medios de cultivo para crear condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios. caseína. telurito potásico. Indicadores de pH. minerales y vitaminas. semillas. o sustancias como las peptonas. Las peptonas son muy ricas en péptidos y aminoácidos. Indicadores ácido. Los microorganismos más comunes son neutrófilos (el pH óptimo para su crecimiento está próximo a la neutralidad). Cisteína. Sistemas amortiguadores. sales biliares. En el caso del extracto de carne en polvo o pasta. se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja. mientras que el extracto de levaduras provee vitaminas del grupo B. gelatina. plasma o suero sanguíneo son frecuentemente añadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos patógenos. Por ejemplo. antibióticos. de malta. Proveen proteosas.) son extraídos con agua y calor. Ejemplos: extracto de carne. cristal violeta. azida sódica. peptonas. pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales. Algunos componentes son incorporados al medio de cultivo Para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano. ser obtenida en condiciones asépticas directamente de un animal sano. Para su preparación. La adición de determinadas sustancias al medio de cultivo puede Convertirlo en selectivo (ver más adelante. y sales como fosfatos bisódicos o bipotásicos. previenen una desviación del pH.Extractos. sangre desfibrinada. etc. Agentes selectivos. Peptonas. carne. clasificación de los medios de cultivo).). Son mezclas complejas de compuestos orgánicos nitrogenados y sales minerales que carecen de identidad química definida. etc. provee sustancias nitrogenadas. ciertos órganos o tejidos animales o vegetales (por ejemplo carne. y posteriormente concentrado hasta la forma final de pasta o polvo. Sangre completa. etc. polipéptidos y aminoácidos. etc. hígado. Los fluidos corporales no solamente contribuyen con factores de crecimiento. por tanto. Agentes reductores. de levadura. sino también con sustancias que neutralizan inhibidores del crecimiento de algunas bacterias.base se añaden a menudo a los medios de cultivo Con objeto de detectar variaciones del pH. nitógeno y carbono.

ACTIVIDADES I. En caso que el medio de cultivo debamos hacerlo nosotros. Primero se agrega agua destilada o desionizada a un recipiente. luego se van incorporando todos los ingredientes de la lista en el orden en el que se encuentran. la preparación de un medio de cultivo comienza por hacer un estudio de la fórmula que constituye una receta que deberá respetarse estrictamente.Erlenmeyer . Es conveniente añadir todos los ingredientes en el orden indicado y disolverlos de a uno antes de agregar el siguiente.autoclave A.a la concentración adecuada. PREPARACIÓN En la actualidad. siguiendo las instrucciones del fabricante y luego esterilizarlo. En caso de ser necesario se ajusta con CO3Na2 (1N) o ClH (1N). normalmente bajo la forma de liofilizados que es preciso re hidratar. actúan como agentes selectivos frente a determinados microorganismos. Generalmente figura en primer término el compuesto que actúa como tampón. la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados. se debe verificar que el pH sea el adecuado. como puede ser el PO4H2K.tubos de ensayo con sus tapones .drogas correspondientes a cada fórmula .tiras de pH . Caldo nutritivo (Caldo carne) .balanza .gradillas .pipetas de 10 ml . Preparación de medios de cultivo Materiales: . En general. la preparación de un medio de cultivo se reduce simplemente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en agua destilada. Al finalizar la preparación y una vez que ésta se enfríe. que además provee fósforo y potasio.

.................. se tapan y esterilizan. .. 1000 ml Preparación: 1) Colocar 1000 ml de caldo en un recipiente.... Si hace falta corregir con HONa 1M.... ... colocar capuchón de papel y esterilizar en autoclave 15 minutos a 1 atm...2.s........ B. Agar nutritivo Fórmula: Agar. 3 g Agua c.. 7....... 3) Llevar a ebullición agitando periódicamente con una varilla de vidrio........ 4) Completar el volumen hasta 1000 ml. para ello se colocan 5 ml del agar en los tubos de ensayo........ 4) Llevar 10 ml a tubos de ensayo........ 2) Agregar el agar calentando a baño maría agitando hasta disolución total....... 5) Dejar enfriar y medir pH... 2) Disolver los ingredientes de a uno y por orden...... Cuando se prepara agar nutritivo no es necesario usar caldo estéril...... se apoyan sobre la mesada con un cierto ángulo hasta que solidifiquen... Una vez afuera del autoclave........ Se prepararán tubos con agar inclinado o en pico de flauta (slant).... 3) Ajustar pH hasta 7. 6) Colocar 10 ml del caldo en tubos de ensayo y volúmenes apropiados en frascos....Es el medio complejo más común para el cultivo de microorganismos... 7) Tapar. la esterilización se lleva a cabo una vez que se ha envasado el caldo agarizado.....p...... 5 g Extracto de carne.... ..... 1000 ml pH... 5) Esterilizar.. ..... 20 g Caldo nutritivo.... cuando están aún líquidos... Fórmula: Peptona...2 Preparación: 1) Colocar un volumen medido de agua destilada en un recipiente....

No debe olvidarse que recibe y arrastra partículas cargadas de bacterias. Las bacterias que se utilizan normalmente forman parte de un grupo llamado coliforme. Debido a que la concentración de dichos agentes habitualmente es baja. 1-8). luego se lo vuelca asépticamente en caja de Petri estéril. químicos o biológicos del agua que son responsables de su calidad y la hacen inadecuada para sus numerosos usos y aplicaciones. Medio de cultivo caldo brilla Introducción Las disponibilidades en agua constituyen un factor fundamental para el desarrollo económico y la salud pública. Dicho grupo se caracteriza por estar formado por microorganismos que habitan el tracto gastrointestinal de los vertebrados. Los abastecimientos de agua se consideran en todos los países como inversiones básicas de interés general. El análisis microbiológico por recuento de bacterias indicadoras de contaminación fecal en aguas es de suma importancia al evaluar el estado sanitario del sistema en estudio. Dicha contaminación puede tener dos orígenes: Químico o microbiológico. En este caso. de tal modo que en cercanías de las grandes poblaciones incluso el agua de lluvia es portadora de un elevado número de microorganismos (Guinea. El agua natural constituye un reservorio de microorganismos autóctonos (Pseudomonas. una vez que los tubos fueron retirados del autoclave se dejan solidificar en posición vertical. 2004.Se prepararán también tubos con agar para punción. Enterococcus). 927 -941). es decir la probable existencia de agentes causantes de enfermedades como cólera. Bacillus. en el sentido de que posibilitan actividades humanas e industriales directamente productivas que influyen en la tasa de crecimiento económico. Por último se prepararán cajas de Petri con agar nutritivo. fiebre tifoidea. Micrococcus) o exógenos (Escherichia coli. hepatitis. Su presencia indica el potencial patogénico en aguas. etc. o bien medio solidificado y fundido a ebullición en Baño María. dentro de la familia Enterobacteriaceae (Madigan. 1979. Para ello se puede utilizar medio de cultivo recién esterilizado y todavía líquido. amebiasis. polio. teniendo la precaución de flamear previamente la boca del tubo o recipiente a la llama del mechero. La contaminación es un proceso de alteración o de modificación más o menos importante de los equilibrios físicos. su detección directa en aguas . giardiasis. Se deja enfriar el agar hasta 45 ºC. Se deja solidificar en posición horizontal.

2 g/l. utilizando frascos adecuados. no proporcionando una enumeración precisa.1 g/l. mediante la realización de recuentos paralelos de aguas de diferentes grados de contaminación. entre otras.0133 g/l. Dentro de los métodos de recuento de bacterias se encuentran dos que son los más ampliamente utilizados: la técnica de Número Más Probable (NMP) y la técnica de recuento en placa. 2000. Metodología Tiempo estimado de realización y distribución de los grupos de trabajo La experiencia fue diseñada para tres clases de trabajos prácticos de tres horas de duración cada una pertenecientes a la materia de grado Microbiología General e Industrial de la Licenciatura en Ciencias Químicas de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UBA. Hidrógeno fosfato de diamonio 1 g/l. Lactosa 10 g/l. El objetivo del presente trabajo práctico es la comparación de dos métodos de enumeración de bacterias de importancia sanitaria. por la cual se utiliza. Hidrógeno fosfato di potásico 1 g/l. 4-metilumbeliferil-D-glucurónido 0.es complicada. 275) : Peptona 10 g/l. Verde brillante 0. Las muestras deben tomarse en forma estéril. L -triptofano 1 g/l. Con la primera sólo se obtiene una estimación de la población de microorganismos contenidos en una muestra. el recuento en placa supera en precisión a este método. Caldo Citrato de Koser: Cloruro de sodio 5 g/l. . en medios selectivos para coliformes. se forman 10 grupos de trabajo de 2 personas cada uno. 1994. Sulfato de magnesio 0. Por el contrario en poblaciones bajas (menos de 10 células por mL) es más eficaz la técnica de NMP porque permite la utilización de muestras de mayor tamaño. agregar 2 g/l de ácido cítrico y se lleva a pH=6 con hidróxido de sodio 1N. Como dichas clases cuentan con alrededor de 20 estudiantes. a las bacterias coliformes. Medios de cultivo Caldo Brila Fluorocult (Merck. Muestras de agua Se analizan 250 mL de muestras de agua de diferentes grados de contaminación: agua del Río de la Plata y agua de pozo. 137 -141). disolver los componentes hasta obtener una solución límpida. utilizando las técnicas de NMP y recuento en placa. perteneciente al conurbano bonaerense. Bilis de buey desecada 20 g/l. Cuando la población es muy elevada. que son de fácil detección y cultivo en laboratorio y presentan un tiempo de supervivencia que excede al de los patógenos en ese ambiente (Vullo.

9-53. y ver el desarrollo de color púrpura en la fase orgánica. Dihidrógenofosfato potásico 1. Calcular en forma paralela el NMP/100 mL (AWWA. Hurst. Con este patrón de tubos positivos. 2.Disponer de series de tres tubos con 10 mL cada uno de Caldo Brila -Fluorocult doble concentración y series de tres tubos con 5 mL cada uno del mismo caldo. 1994. Los medios con Fluorocult poseen MUG: 4-metilumbeliferil.5%(v/v) de HCl(c).Incubar los tubos 48 hs a 37°C. en Caldo Citrato de Koser. Ver esquema de la Figura 1. pero simple concentración. Triptófano 1 g/l. 307) para la prueba de indol en cada tubo. Existen muchos grupos bacterianos que poseen dicha enzima. Recuento de bacterias del grupo coliforme según la técnica de NMP 1.-D-glucurónido. . 6. sustrato de la enzima -D. Por lo tanto la aparición de fluorescencia y gas lleva a poder inferir la presencia de bacterias coliformes fecales (E.glucuronidasa. calcular el NMP de bacterias coliformes de origen no fecal.7 g/l.2 g/l.Según los resultados positivos por la aparición de turbidez en los tubos con Caldo Citrato de Koser. pero dentro de las Enterobacterias sólo Escherichia coli y algunas especies de Salmonella y Shigella cuentan con ella. a 37°C.Sembrar 10 mL de la muestra en cada uno de los tubos de doble concentración.Exponer los tubos positivos de Caldo Brila -Fluorocult a la luz ultravioleta. Piruvato sódico 1 g/l. Hidrógeno fosfato di potásico 3 g/l. Coli). Merck. Buscar en la tabla (Figura 2) el NMP de bacterias coliformes totales / 100 mL de muestra. WEF. Laurilsulfato sódico 0. 270): Peptona 3 g/l. Incubar 48 hs.Agar Chromocult (Merck. 5.Seleccionar los tubos que posean gas en el interior de la campana de Durham. 7. APHA. 1994. Agar -agar 12 g/l. Todos deben poseer en su interior una campana de Durham para ver producción de gas. 1998.Sembrar con ansa recta. Dichos tubos serán considerados positivos. 3. 4.1 g/l. que al clivarse libera un producto (4 -umbeliferona) de fluorescencia azul. a partir de cada tubo con gas. Cloruro sódico 5 g/l. Mezcla de cromógenos 0. 1 mL o 0.1 mL en los de simple concentración. 2002 178 -179) según: NMP/100 mL= nº tubos positivos x 100 / (mL muestra en tubos negativos x mL muestra totales)½. calcular por ambos métodos el NMP de bacterias coliformes fecales / 100 mL de muestra. Para poder considerar estos tubos positivos para coliformes de origen fecal debe agregarse 1 mL de reactivo de Kovacs (p-dimetilamino benzaldehído 5%(p/v) en alcohol amílico o isoamílico con 2.

Las colonias rojas y violetas son características de bacterias coliformes. Muestra: Río de la Plata Se realizan diluciones seriadas al décimo de la muestra hasta 10-4. manejo e interpretación de resultados Recuento en placa de bacterias del grupo coliforme A.Calcular el número promedio de unidades formadoras de colonias por mL (UFC/mL) de bacterias coliformes totales. 3.1 mL de muestra en placas de Petri preparadas con Agar Chromocult.Efectuar las correcciones por normalización. y se calcula el número de UFC/mL de las colonias rojas (Coliformes no fecale s). violetas indol . fecales y no fecales presentes en la muestra. detalladas en la Figura 1 e informar los resultados del recuento. Las rojas pertenecen al grupo de las no fecales. mientras que las violetas a las fecales. El Agar Chromocult identifica coliformes totales (enterobacterias fermentadoras de lactosa) y Escherichia coli a través de dos sustancias cromógenas: Salmon-gal que pone en evidencia la -D-galactosidasa dando colonias de color rojo y X-glucurónido que determina la presencia de la -D glucuronidasa dando colonias azules. 2. violetas indol positivas (Coliformes fecales) y la suma de ambas (Coliformes totales). B. Escherichia coli escinde ambos compuestos dando coloración violeta. Rastrillar el inóculo con espátula de Drigalsky. Muestra de agua de pozo del con urbano bonaerense Se siembra la muestra sin diluir en placas de Agar Chromocult.Incubar a 37°C durante 48 hs. según la expresión: UFC/mL = Número de colonias promedio de ambas placas Dilución x volumen del inóculo Obtención. Las especies que no poseen ninguna de las enzimas se evidencian a través de colonias transparentes. El medio tiene también laurilsulfato de sodio para inhibir el desarrollo de Gram positivas y triptófano para realizar la prueba de indol (rec onocimiento de E. Recuento en placa de bacterias del grupo coliforme 1. Se siembran en placas de Agar Chromocult y se calcula el número de UFC/mL de las colonias rojas (Coliformes no fecales). Los resultados se resumen en la Tabla 4. coli) 4.8.Observar y contar las colonias obtenidas.Inocular por duplicado 0.

6 x 105 / 100 mL (Tabla 2: dilución 10 -4 de la muestra original) y su intervalo de 95% de confianza oscila entre 3 y 25 x 105 / 100 mL. WEF. Los resultados se resumen en la Tabla 5.4 y 1. Discusión de los resultados Una vez realizada la lectura de los resultados para las distintas muestras. Fundamento La fórmula original de este medio de cultivo. En este caso. Para el recuento de coliformes totales.6 bacterias coliformes totales/100 mL sólo se puede estimar por la técnica de NMP. para el análisis microbiológico de productos lácteos y alimentos. el NMP calculado es 7. Así por ejemplo para el caso de agua de río. obtenido mediante la técnica de NMP corresponde a la mitad con respecto al valor en placa (Tablas 2 y 4). el resultado oscila entre 2. ya que el método de NMP es un concepto estadístico. 1998. En este caso el intervalo del 95% de confianza se encuentra entre 1 y 13 bacterias coliformes totales/100 mL (AWWA. 9-52). Los valores de recuento en placa ( Tabla 4) están dentro de este intervalo. se determina que el recuento de bacterias coliformes totales por mL.2 x 104 UFC/mL. Un recuento tan bajo como 3. Para el caso de un agua de poz o.positivas (Coliformes fecales) y la suma de ambas (Coliformes totales). Los resultados muestran entonces una mayor precisión en el recuento en placa. Como conclusión general del trabajo. aplicable a la enumeración de microorganismos bajo ciertas condiciones. según el error de la técnica. eliminando la . aguas servidas. derivado de la teoría de probabilidades. fue modificada por Levine. a partir de muestras clínicas. Es recomendado por la American Public Health Association. Levine EMB Agar. APHA. para utilizar el método de enumeración de mayor precisión en cada caso. 9-52). es necesario conocer el origen y posible nivel de contaminación microbiológica de una muestra de agua a analizar. WEF. es decir cuando las muestras son lo suficientemente diluidas como para realizar un recuento en placa. 1998. se dispone de una última clase destinada a la discusión e interpretación de los resultados obtenidos por los distintos grupos de trabajo. APHA. y por la USP para la realización de los ensayos límite microbiológico. y otros materiales. Medio adecuado para la búsqueda y diferenciación de bacilos entéricos. El intervalo de 95% de confianza para el método de NMP es muy amplio (AWWA. no se puede realizar el recuento en placa debido a la baja proporción de bacterias coliformes presentes en la muestra.

inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas. Es un medio selectivo y diferencial.1 ± 0. pueden crecer. es útil para la orientación y no confirmación de especies bacterianas (ya que numerosas cepas de Citrobacter spp. dejar reposar 5 minutos. Los microorganismos fermentadores de lactosa. Las colonias producidas por microorganismos no fermentadores de lactosa son incoloras.0 Lactosa 10. adecuado para el crecimiento de enterobacterias.0 Eosina 0. Este medio de cultivo. permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 121°C. para la identificación de género y especie. y también.2 Siembra Directa. originando colonias incoloras y puntiformes. Instrucciones Suspender 37. con brillo metálico.4 g de polvo por litro de agua destilada. lo que permite una mejor diferenciación de E.sacarosa e incrementando la concentración de lactosa. confluentes 700603 . Resultados Microorganismos Crecimiento Características de las colonias Bueno a excelente Verdosas con brillo metálico y centro negro Escherichia coli ATCC 25922 azulado Klebsiella pneumoniae ATCC Bueno a excelente Mucosas. coli. en aerobiosis. originan colonias de color azulado negro. por lo cual será necesario realizar pruebas bioquímicas. producen colonias con brillo metálico). rosa púrpura. enterococos) y levad uras.0 Fosfato di potásico 2. Calentar a ebullición hasta disolución total. Fórmula (en gramos por litro) Peptona 10. Incubación De 18-24 horas a 35-37 °C. Algunas bacterias Gram positivas (cepas de estafilococos.065 pH final:7. La combinación utilizada de eosina y azul de metileno.4 Azul de metileno 0.0 Agar 15. estriando la superficie.

M. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido. aureus ATCC 25923 Pobre Enterococcus faecalis ATCC 29212 Pobre Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno a excelente Salmonella typhimurium ATCC Bueno a excelente 14028 Características del medio Incoloras Incoloras Incoloras. La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. aeruginosa ATCC 27853 Bueno a excelente Proteus mirabilis ATCC 43071 Bueno a excelente S. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa.P. puntiformes Incoloras. Fundamento Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine. y aquellos que son incapaces de hacerlo. está dada por los indicadores eosina y azul de metileno. pequeñas. Placas preparadas: color púrpura. pequeñas. puntiformes Incoloras Incoloras Medio preparado: color púrpura con tonos verdosos. . éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas.A. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. ya que es parte esencial del mismo.B. Medio preparado: a 2-8 ºC. Presentación x 100g :Código: B02-104-05 x 500g :Código: B02-104-06 6 x 50 ml: B04-104-84 E. Agar. Este medio (también denominado E. para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. El color púrpura se restaura por agitación. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.M. ligeramente opalescente con un precipitado floculento disperso.

Reposar 5 minutos. en aerobiosis. esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0. rosa púrpura.0 Agar 13. En este medio se obtiene además. En profundidad. Y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda. pequeñas.2 Siembra En superficie.0 Fosfato di potásico 2. Crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes. Enterococcus spp. Incubación De 24 a 48 horas a 35-37 °C. .4 Azul de metileno pH final: 7.5 Eosina 0.0 Lactosa 5. mientras que las que no lo hacen son incoloras. Esterilizar en autoclave a no más de 121°C durante 15 minutos. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. albicans.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos hasta su disolución. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada. Resultados Microorganismos Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Proteus mirabilis ATCC 43071 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Shigella flexneri ATCC 12022 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Características del medio: Tipo de Colonia Verdosas con brillo metálico y centro negro azulado Mucosas.2 ± 0.065 Instrucciones Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada. para obtener colonias aisladas. Presentan un característico brillo metálico. Fórmula (en gramos por litro) Peptona 10. por estriado a partir de un inóculo poco denso. la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. para favorecer el desarrollo de clamidosporas. confluentes Incoloras Incoloras. mezclar. Como colonias rosadas y puntiformes. mientras que Acinetobacter spp. un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.0 Sacarosa 5. Enfriar a 45°C y distribuir agitando suavemente. puntiformes Incoloras Incoloras 0.Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp.

El color púrpura se restaura por agitación. Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. Presentación x 100g :Código: B02-101-05 x 500g :Código: B02-101-06 6 x 50 ml: B04-101-84 . Medio preparado: a 2-8 ºC. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido. La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja.Placas preparadas: color púrpura. ya que es parte esencial del mismo.

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