CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo pueden clasificarse según diferentes criterios, pero los más importantes son aquellos que se basan en: a) Su consistencia b) Su utilización c) Su composición d) Su origen

a) SEGÚN SU ESTADO FÍSICO (CONSISTENCIA):
1) Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración. 2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un agente gelificante. Los más utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una proteína animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y además su uso está muy limitado porque su punto de fusión es bajo (licúa a temperatura ambiente) razón por la que no puede utilizarse para cultivos a 37ºC, que es la tempera óptima de crecimiento para muchos microorganismos. Agar-agar: Es un polímero de azúcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molécula insoluble enagua pero soluble en agua caliente; una solución al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39ºC y no se funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y solidifica una vez fundido alrededor de los 45ºC. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgánicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un microorganismo. Aunqu e el agar es una mezcla de polisacáridos, Araki, en 1937, los dividió en dos grupos: - agarosa, con poco sulfato, libre de ácido pirúvico, y - agaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporción de agarosa a agaropectina en el agar varía según el alga de origen. El agar puede utilizarse para diferentes fines, aunque los más importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar bacteriológico, agares purificados y agarosa, utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que se produce, se utiliza en trabajo microbiológico, por lo que es importante la ausencia de metales tóxicos.

3) Medios semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias

SEGÚN SU UTILIZACIÓN.
1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de b acterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio más conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar común, que resulta de la adición de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc. 2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc ) El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate). 3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias. 4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibidores podrían considerarse como una variante más restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adición de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo de una población determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos. 5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies. La adición de un azúcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los gérmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. También lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemólisis), el SS (que es doblemente diferencial), etc. 6) Medios de identificación: Son los destinados a comprobar alguna cualidad específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de

en la investigación y en la industria. el sustrato específico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. Su composición no es exactamente definida. es un ejemplo típico de estos medios. y por consiguiente no es rigurosamente constante. En la práctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los más empleados. b) mediante liofilización de una suspensión bacteriana. Son ejemplos de esto últimos los medios CPS ID3 o Uriline ID (Biomerieux). resultando un medio de composición perfectamente definida. etc. Según las sustancias que entren a formar parte en su composición. Los medios más adecuados para la multiplicación suelen ser líquidos. los medios de cultivo pueden ser clasificados en: 1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados. 7) Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un microorganismo ya aislado. El agar Kligler. donde la reproductibilidad no podrá ser exacta. Su utilización debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior del medio (generalmente en un tubo). 2) Medios sintéticos: Son aquellos que contienen en su composición exclusivamente sustancias químicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas. 8) Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa que. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el Laboratorio de Microbiología. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas: a) haciendo pases periódicos de placa a placa. Actualmente están apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios específicos de identificació n para ciertos microorganismos. 9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clínicas que no pueden sembrarse inmediatamente. Cary-Blair. utilizados para identificar los gérmenes urinarios más importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilización de sustratos cromogénicos específicos. ATENDIENDO A SU COMPOSICIÓN. .los microorganismos. por diversas razones nos interese mantener.1%. el medio de Simmons y en general. y c) congelando las cepas en leche descremada estéril al 0. y más raramente de vegetales. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales. cualquier medio al que se le haya añadido un elemento diferencial de un microorganismo. El caldo-infusión cerebro-corazón (BHI). Se emplean en la obtención de vacunas. y los más empleados se preparan a partir de tejidos animales. con lo cual se consigue simultáneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de identificación. Son ejemplos típicos de este grupo los medios de Stuart -Amies. son medios utilizados en identificación.

Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza además para la investigación de los diversos tipos de hemólisis ( . pero sí puede añadir factores inhibidores del crecimiento . Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de gérmenes que no presentan exigencias particulares. etc. c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factore s de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo. No es diferencial. ß ó gamma). las Chlamydias.3) Medios semisintéticos: El gran número de factores de crecimiento exigidos para ciertos gérmenes hace que la fabricación de un medio sintético para estos gérmenes sea imposible o demasiado cara. Rickettsias. La adición de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que están en el interior de los hematíes. haciéndolo exclusivamente en células vivas con unas características determinadas. extracto de tejidos. Ejemplos de este tipo son. DESCRIPCIÓN Y UTILIZACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO MEDIOS DE CULTIVO COMUNES . Se utilizan para obtener resultados reproducibles. y aunque no vamos a enumerarlos todos. como por ejemplo extracto de levadura. sí son los más conocidos en un laboratorio de Microbiología. aparte de los virus. En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgánico complejo (extracto de levadura. Según su origen: a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de o rigen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce exactamente.Ciertos gérmenes no crecen en ningún medio por muy enriquecido que esté éste. Para la preparación del agar sangre se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sódico o un preparado enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. etc.). b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cualitativa y cuantitativamente. Son los más corrientemente utilizados. Se utiliza para el crecimiento de estreptococos.

Los gérmenes que fermenten la lactosa producen una acidificación del medio que hacen aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes.: El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales. Por esta razón el agar chocolate contiene hemoglobina. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos y meningococos) y Haemophilus. apareciendo del mismo color que el medio subyacente (naranja). Agar C. La sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al 5%. utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocola te enriquecido al cual se ha añadido una mezcla de tres antibióticos específicos que impedirán el crecimiento del resto de la flora acompañante. Por adición de uno o varios antibióticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos. El medio contiene sales biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y gérmenes Gram positivos.) contienen más de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. aunque la interpretación sea diferente al anterior medio por la incorporación de otro indicador: el azul de bromo timol.S. : El medio C. Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el aislamiento e identificación de enterobacterias. Estas mezclas.D. (Cistina Lactosa Electrólito Deficiente) está recomendado para el recuento e identificación presuntiva de los microorganismos de las vías urinarias. El agar chocolate puede convertirse quizás en uno de los medios más enriquecidos si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. Las colonias lactosa positivas aparecerán de color amarillo y las lactosa negativas lo harán con un color verdoso. En su composición lleva un azúcar (lactosa) y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferen cial. blanco o azulado.L. Su bajo contenido en electrolitos evita la invasión de los cultivos po r Proteus. Las colonias lactosa negativas serán incoloras. pues facilitan las reacciones hemolíticas o contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados gérmenes. humana). Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que se destruyan las sustancias inhibidoras. Isovitalex. pero en él pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. Agar S.L. Es un medio inhibidor de los gérmenes Gram positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para enterobacterias por su contenido en sales biliares. pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies (caballo.La presencia de lactosa en su composición le confiere el carácter de medio diferencial. Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base. denominadas de forma diferente según las casas comerciales (Polivitex. etc. que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. . conejo. Un ejemplo clásico es el Thayer-Martin. que son termolábiles.bacteriano presentes en el suero.D.E.E.

ID3. mirabilisy E. pero no es diferencial. Permite el cultivo de aerobios. P. p. faecalis. Así. que se mani fiesta como un precipitado de color negro en el centro de la colonia. sacarosa y salicilina) permiten ampliar el poder diferencial de este medio. como Brucella. Islam o New GBS: Medios utilizados para detección de Estreptococos agalactiae. El agar SS es un medio muy inhibidor que a veces impide incluso el crecimiento de ciertas especies de Salmonella y sobre todo de Shigella. ej) Granada. una colonia incolora y con un punto negro central es sospechosa de Salmonella. anaerobiosy . La identificación solo requiere la adición de un reactivo para confirmar o descartar la especie sospechada. Por esta razón debe utilizarse siempre junto con otro medio menos inhibidor como el Hektoen.Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan nunca la lactosa por lo que este medio es excelente para descartar todas las colonias que no cumplan este requisito. coli y en menor medida sobre Proteus y Citrobacter.P. Es un medio muy enriquecido. igual que el SS. con la simple visualización d el cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos. que neutralizan el efecto inhibidor de las sales biliares respecto a ciertos gérmenes de cultivo delicado (Shigella en particular). Este medio es capaz de detectar los gérmenes formadores de SH2. esencialmente. igual que el de Shigella. : Medio cromogénico desarrollado por Biomerieux. mediante la utilización de un sustrato cromogénico específico de este microorganismo. sobre E. que permite la identificación de E. nos muestra los gérmenes que son capaces de producir ácido sulfhídrico. La presencia de tres azúcares (lactosa. Agar Hektoen: Es un medio más diferencial y menos selectivo que el agar SS. Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la realización de los antibiogramas o pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos. Las cualidades del agar Hektoen se deben a su riqueza en peptonas y azúcares. Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. Hay que señalar que el vibrión colérico crece bien en este medio. azulo marrón). C. El crecimiento de Salmonella es excelente.S. Otros microorganismos diferentes requieren los sistemas de identificación habituales (API. El agar SS es doblemente diferencial. coli. A él nos referiremos más ampliamente en el capítulo correspondiente Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de gérmenes exigentes. Neisseria o Estreptococos. Caldo tioglicolato con resazurina: Es un medio recomendado para controles de esterilidad. La inhibición tiene lugar. obteniéndose colonias más numerosas y voluminosas que en los medios selectivos usuales.La presencia de lactosa y rojo de metilo nos permiten diferenciar las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las que no lo hacen (incoloras). y será exclusivamente a estas colonias a quienes se hagan las pruebas bioquímicas confirmatorias de esta especie. porque además de indicarnos el comportamiento de los gérmenes con relación a la lactosa.

Caldo selenito-F: Se utiliza exclusivamente para enriquecimiento de Salmonellas. inhibiendo Gram positivos y la mayoría de enterobacterias. Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa positivos. Agar King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas. cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo metálico característico. se manifiesta por un color rosa del medio. ya que estegérmen crece bien en medios salados y fermenta el manitol (colonias amarillas). Agar Levine ó EMB (Eosina azul de metileno): Se utiliza para aislamiento de enterobacterias. Es un medio diferencial e inhibidor a la vez. podemos ir adelantando que se trata de un medio diferencial que permite conocer el comportamiento del microorganismo ante dos azúcares (glucosa y lactosa). pues impide el crecimiento de Gram positivos y diferencia muy bien a E.microaerófilos. Agar Gardnerella: Agar con sangre humana más una mezcla de antibióticos que permiten la observación de colonias betahemolíticas características de Gardnerella vaginalis Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de Campylobacter intestinales creciendo a 42º C en microaerofilia. Agar Kligler : Medio específico para pruebas de identificación de enterobacterias. Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el cultivo de anaerobios. investigar la formación de gas y comprobar si el microorganismo puede producir sulfato ferroso a partir del tiosulfato sódico. Agar Chapman: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos. Tiene un bajo potencial redox que. Su elevado contenido en cloruro sódico permite la inhibición de la mayoría de los otros gérmenes. El segundo pone además de manifiesto la pigmentación fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV. Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sucrosa (DCLS): Similar al agar SS. . al aumentar. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio en diferencial: así se puede identificar presuntivamente el Staphylococcus aureus. Agar Cetrimida. Medio de Loeffler: Es un medio específico para el cultivo de Corynebacterium difteriae. Aunque de él hablaremos con más detenimiento en el capítulo de pruebas de identificación bacteriana. a la vez que los diferencia del resto. coli.

La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano. Contiene verde malaquita para inhibir parcialmente el crecimiento de otras bacterias.0 Agar pH final: 7. El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes. Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos.Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract) : Se utiliza para el aislamiento de bacterias del género Legionella Löwenstein-Jensen: Este medio se utiliza para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona 5. Siembra En superficie o por la técnica de pour plate. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2 minutos hasta su disolución. aguas y otros materiales de importancia sanitaria. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. según el uso a que se destine.3 ± 0. a 35-37 ºC durante 24 horas.0 Extracto de carne 3. Fundamento Por las características de sus componentes es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. Incubación En aerobiosis. Nutritivo Agar Medio de cultivo utilizado para propósitos generales. Resultados a-Agar nutritivo: Microorganismos P. mirabilis ATCC 43071 Crecimiento Bueno-excelente . No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. El huevo se utiliza como sustancia de enriquecimiento. para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos.2 15.0 Instrucciones Suspender 31 g de polvo por litro de agua destilada.0 Cloruro de sodio 8.

faecalis ATCC 29212 P. pyogenes ATCC 19615 S. Si bien el aislamiento es un paso crucial en este camino.E. razón por la cual es difícil aislarlas.  Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación del medio de cultivo en la práctica microbiológica. pneumoniae ATCC 49619 Crecimiento Abundante Abundante Abundante Hemólisis Beta Alfa Alfa Características del medio Medio preparado: ámbar claro a medio ligeramente opalescente. . OBJETIVOS:  Conocer la clasificación de los medios de cultivo. Presentación x 100g :Código: B02-122-05 x 500g :Código: B02-122-06 6 x 50 ml: B04-122-84 MEDIOS DE CULTIVO Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos. A menudo nuestro interés es caracterizar una especie bacteriana. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. coli ATCC 25922 S. comenzaremos examinando los medios de cultivo. cereus ATCC 10876 E.  Adquirir práctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir de sus componentes individuales. Medio preparado: a 2-8 ºC. aeruginosa ATCC 27853 Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente B-Agar nutritivo suplementado con 5% de sangre de carnero: Microorganismos S. para lo cual debemos estar preparados para aislar. pneumoniae ATCC 6305 S. ya que en estos últimos se basan muchos de los principios del aislamiento. cultivar e identificar a la misma. aureus ATCC 25923 B.

El conocimiento de las necesidades nutritivas y físicas de los microorganismos es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado. INTRODUCCIÓN: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes. Rango de pH: en general el rango óptimo de pH para la mayoría de las bacterias oscila entre 6.2. Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan. la variedad de medios de cultivo también lo es. Es decir. mesófilos y Termófilos.6 y 7. Agar nutritivo Temperatura óptima de crecimiento: según el rango de temperatura al cual el Microorganismo presenta su mayor crecimiento. anaerobios facultativos y microaerófilos. es cualquier medio que proporcione sustancias nutritivas que permitan el desarrollo y reproducción de microorganismos. factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos. Tipo respiratorio: aerobios. se los clasifica en psicrófilos. por ello. según los cuales se los clasifica en autótrofos. La diversidad metabólica de los microorganismos es enorme. heterótrofos. Las características de los microorganismos a tener en cuenta al momento de preparar un medio de cultivo adecuado para su desarrollo en el laboratorio son: Tipo trófico: se refiere a los requerimientos de carbono y energía. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN SU ORIGEN Los medios de cultivos pueden clasificarse en: . Reconocer la necesidad de evitar la contaminación tanto de los medios de cultivo como de los demás elementos utilizados en el laboratorio de microbiología. anaerobios. quimiotrofos (litotrofos u organotrofos) y fototrofos.

II. se trata básicamente de extractos de tejidos vegetales. como el Caldo carne y agar carne. Un medio del cual se conoce exactamente su composición química se denomina sintético o químicamente definido. Un medio no sintético o complejo e s aquel del que se desconoce su composición química exacta. papa. agua. Medios comunes: Permiten el desarrollo de una gran variedad de microorganismos.c. Medios especiales: se los clasifica según su finalidad.a Medios enriquecidos o mejorados: se obtienen a partir de un medio común. Selectivos II. Especiales II. Se utilizan para el cultivo de microorganismos exigentes en cuanto a sus requerimientos nutricionales. etc. animales o microbianos. o por el agregado de inhibidores. Artificiales: Están compuestos de substancias que son manipuladas por el hombre en el laboratorio. . cuya concentración no se conoce con exactitud y que proveen todos los nutrientes necesarios. tierra. II. por ejemplo. con el agregado de elementos nutritivos elegidos según las necesidades. Diferenciales I. Para esto últ imo se busca establecer condiciones desfavorables de pH. suero. II.Naturales: Son aquellos que existen como tales en la naturaleza. A los medios artificiales a su vez se los puede dividir en sintéticos y complejos. Enriquecidos II. nutrientes y de temperatura. Tales como sangre.b. permitan el desarrollo de determinadas especies y al mismo tiempo inhiban la proliferación de la flora acompañante. huevos. sangre. puede ser una simple solución de sales con una fuente de carbono o puede contener muchos compuestos orgánicos. Se citan como ejemplos el agar sangre y el agar chocolate. yema de huevo etc. leche.b Medios selectivos: Estos medios han sido modificados de alguna manera para que.a. como por ejemplo el caldo nutritivo. albúmina. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS ARTIFICIALES COMPLEJOS SEGÚN SU FINALIDAD I. Comunes Medios Artificiales Complejos II. en una flora mixta.

en el que el pH de 5. Aunque dos o más tipos de microorganismos pueden crecer en este medio. sobre la base de la diferencia de color de sus respectivas colonias. en cambio las colonias de E. Estos medio selectivo. aerogenes son rosadas con un centro azul y rara vez presentan brillo. Ejemplos de sustancias inhibidoras son algunos colorantes (cristal violeta.6 favorece el desarrollo de hongos al mismo tiempo frena el d esarrollo de la mayoría de las bacterias. Un ejemplo de este t ipo es el agar con eosina azul de metileno que diferencia Escherichia coli de Enterobacter aerogenes. Se logra así la multiplicación de los microorganismos que se desea identificar. por el agregado de agentes que inhiben el crecimiento. Estas diferencias se basan en alguna propiedad bioquímica que unos poseen y otros no. por ejemplo un indicador. II. .c Medios diferenciales: permiten el desarrollo de muchas de las especies que coexisten en una mezcla que se desea aislar. no llegándose a inhibir totalmente el crecimiento del resto de microorganismos. algún elemento presente en él permite diferenciarlos. forman colonias de color blanco grisáceo. la provisión de elementos nutritivos en concentración adecuada.2 Medios selectivos para aislamiento: son medios selectivos sólidos.El agar Saburaud es un ejemplo de medio selectivo.b. viéndose favorecidos aquellos para los cuales las condiciones de desarrollo son las más apropiadas. Cuando se cultivan ambas especies sobre agar nutritivo. verde brillante). coli son oscuras y con brillo metálico. II. los antibióticos. hasta un número suficiente tal que sea posible su aislamiento en medios selectivos apropiados. II.1 Medios selectivos para enriquecimiento: Son m edios en los que los microorganismos crecen en libre competencia. Sin embargo en agar con azul de metileno las colonias de E. Se ponen en evidencia las colonias de los microorganismos que se desea aislar y a su vez se diferencian de aquellas que pudieran haber desarrollado provenientes de la flora acompañante. se utilizan para sembrar directamente con la muestra incógnita o a partir del medio selectivo para enriquecimiento. CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN BUEN MEDIO DE CULTIVO Como ya se ha señalado. el alcohol fenil etílico y la azida de sodio.b. En su mayor parte los medios diferenciales son asimismo selectivos.diferenciales resultan muy útiles para el aislamiento de un microorganismo separándolo de la flora acompañante.

por lo que tiene la ventaja de ser sólido a la temperatura de incubación. el agar no es empleado como nutriente. La cantidad de sales y agua que se agregue a un medio de cultivo. cabe aclarar que un compuesto puede actuar como inhibidor para algunos microorganismos y no para otros. aunque pueden no ser los únicos e incluso alguno de ellos puede estar ausente de la preparación. El agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. cantidad necesaria de sales y agua. En el laboratorio. dependiendo de su grado de pureza. este procedimiento garantiza la destrucción de todos los microorganismos no deseados que se encuentran presentes durante la preparación del medio de cultivo. Existe en rama o en polvo. Libre de inhibidores del crecimiento. CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Los elementos citados a continuación. Si se desea visualizar movilidad se usa agar blando se le agrega agar al 3 %. Si los componentes del medio son estables al calor se los lleva al autoclave (121 ºC. Agua destilada o desionizada. al que acompañan algunas impurezas y que se obtiene de ciertas algas marinas.depende del conocimiento que se tenga de las condiciones del desarrollo en el hábitat natural. Un buen medio de cultivo es aquel que le provee a los microorganismos los nutrientes indispensables en la concentración adecuada. Para preparar un medio sólido se le agrega agar al 12-18 %. como antibióticos y compuestos fácilmente oxidables al calor. Si se requiere sangre u otros componentes inestables. En cuanto a la esterilización. Agar. que sea estéril y que no contenga sustancias inhibidoras. la fluidez y la presión osmótica que se le quiera brindar a los microorganismos. los medios de cultivo pueden present arse en forma líquida. . 15 minutos). en cuyo caso se los denominacal dos. En cuanto a los inhibidores. Con la excepción de algunos microorganismos marinos. se relaciona directamente con el pH. se solubiliza en agua a ebullición (funde hacia los 98°C) y al enfriarse forma un gel inodoro e insípido (se gelifica alrededor de los 42°C). son los más frecuentemente usados en la preparación de los medios de cultivo. En función de la consistencia se puede clasificar a los medio el líquidos y sólidos. El componente dominante en el agar es un polisacárido. que tenga la consistencia y el pH adecuados. se los esteriliza por separado por otros procedimientos y se lo agrega al medio que ha sido esterilizado cuando se haya enfriado a 50 ºC. o en forma sólida si se le agrega agar al caldo.

Indicadores ácido. o sustancias como las peptonas. Agentes reductores. pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales.Extractos. y sales como fosfatos bisódicos o bipotásicos. Cisteína. polipéptidos y aminoácidos. Indicadores de pH. de levadura. etc. por tanto. antibióticos.). peptonas. mientras que el extracto de levaduras provee vitaminas del grupo B. etc. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos nitrogenados y sales minerales que carecen de identidad química definida. de malta. Proveen proteosas. . etc. caseína. carne. Sistemas amortiguadores. etc. semillas. minerales y vitaminas. Ejemplos: extracto de carne. nitógeno y carbono. azida sódica.base se añaden a menudo a los medios de cultivo Con objeto de detectar variaciones del pH. Fluidos Corporales. La adición de determinadas sustancias al medio de cultivo puede Convertirlo en selectivo (ver más adelante. clasificación de los medios de cultivo). La sangre no puede ser esterilizada y debe. provee sustancias nitrogenadas. Los fluidos corporales no solamente contribuyen con factores de crecimiento. Peptonas. Las peptonas son muy ricas en péptidos y aminoácidos. tioglicolato y otros son agentes reductores que se añaden a Los medios de cultivo para crear condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios. Agentes selectivos. sales biliares. telurito potásico. sangre desfibrinada. En el caso del extracto de carne en polvo o pasta. cristal violeta. se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja. y posteriormente concentrado hasta la forma final de pasta o polvo. ser obtenida en condiciones asépticas directamente de un animal sano. previenen una desviación del pH. Para su preparación. sino también con sustancias que neutralizan inhibidores del crecimiento de algunas bacterias. Los microorganismos más comunes son neutrófilos (el pH óptimo para su crecimiento está próximo a la neutralidad). Estos preparados deshidratados son frecuentemente empleados en la confección de medios de cultivo. ciertos órganos o tejidos animales o vegetales (por ejemplo carne..) son extraídos con agua y calor. gelatina. Por ejemplo. plasma o suero sanguíneo son frecuentemente añadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos patógenos. Sangre completa. hígado. Algunos componentes son incorporados al medio de cultivo Para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano.

a la concentración adecuada. Es conveniente añadir todos los ingredientes en el orden indicado y disolverlos de a uno antes de agregar el siguiente. se debe verificar que el pH sea el adecuado. actúan como agentes selectivos frente a determinados microorganismos. la preparación de un medio de cultivo se reduce simplemente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en agua destilada.autoclave A. En general. ACTIVIDADES I.Erlenmeyer . normalmente bajo la forma de liofilizados que es preciso re hidratar. Preparación de medios de cultivo Materiales: . PREPARACIÓN En la actualidad. la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados.pipetas de 10 ml .gradillas . Primero se agrega agua destilada o desionizada a un recipiente. luego se van incorporando todos los ingredientes de la lista en el orden en el que se encuentran. En caso de ser necesario se ajusta con CO3Na2 (1N) o ClH (1N). Caldo nutritivo (Caldo carne) .tiras de pH .balanza .tubos de ensayo con sus tapones . como puede ser el PO4H2K. Al finalizar la preparación y una vez que ésta se enfríe. Generalmente figura en primer término el compuesto que actúa como tampón. siguiendo las instrucciones del fabricante y luego esterilizarlo.drogas correspondientes a cada fórmula . la preparación de un medio de cultivo comienza por hacer un estudio de la fórmula que constituye una receta que deberá respetarse estrictamente. En caso que el medio de cultivo debamos hacerlo nosotros. que además provee fósforo y potasio.

2....s. 3) Llevar a ebullición agitando periódicamente con una varilla de vidrio........... Agar nutritivo Fórmula: Agar.... 5) Esterilizar... 3) Ajustar pH hasta 7... 7. Fórmula: Peptona........... 1000 ml Preparación: 1) Colocar 1000 ml de caldo en un recipiente. para ello se colocan 5 ml del agar en los tubos de ensayo...Es el medio complejo más común para el cultivo de microorganismos..... 4) Completar el volumen hasta 1000 ml..... .... Cuando se prepara agar nutritivo no es necesario usar caldo estéril...... la esterilización se lleva a cabo una vez que se ha envasado el caldo agarizado.p. .... 6) Colocar 10 ml del caldo en tubos de ensayo y volúmenes apropiados en frascos. Si hace falta corregir con HONa 1M..... 5 g Extracto de carne..... 1000 ml pH............... ... 5) Dejar enfriar y medir pH.. colocar capuchón de papel y esterilizar en autoclave 15 minutos a 1 atm.... 3 g Agua c......... se tapan y esterilizan. se apoyan sobre la mesada con un cierto ángulo hasta que solidifiquen............. 2) Agregar el agar calentando a baño maría agitando hasta disolución total. 4) Llevar 10 ml a tubos de ensayo...... .. Una vez afuera del autoclave............2 Preparación: 1) Colocar un volumen medido de agua destilada en un recipiente.. 20 g Caldo nutritivo.. 2) Disolver los ingredientes de a uno y por orden..... Se prepararán tubos con agar inclinado o en pico de flauta (slant)... B... cuando están aún líquidos...... 7) Tapar..

927 -941). fiebre tifoidea. Los abastecimientos de agua se consideran en todos los países como inversiones básicas de interés general. o bien medio solidificado y fundido a ebullición en Baño María. es decir la probable existencia de agentes causantes de enfermedades como cólera. Se deja solidificar en posición horizontal. Bacillus. Su presencia indica el potencial patogénico en aguas. En este caso. 1-8). Micrococcus) o exógenos (Escherichia coli. 2004. Dicha contaminación puede tener dos orígenes: Químico o microbiológico. etc. Por último se prepararán cajas de Petri con agar nutritivo. Enterococcus). químicos o biológicos del agua que son responsables de su calidad y la hacen inadecuada para sus numerosos usos y aplicaciones. una vez que los tubos fueron retirados del autoclave se dejan solidificar en posición vertical. giardiasis. El agua natural constituye un reservorio de microorganismos autóctonos (Pseudomonas. Las bacterias que se utilizan normalmente forman parte de un grupo llamado coliforme. 1979. Medio de cultivo caldo brilla Introducción Las disponibilidades en agua constituyen un factor fundamental para el desarrollo económico y la salud pública. hepatitis. Se deja enfriar el agar hasta 45 ºC. Dicho grupo se caracteriza por estar formado por microorganismos que habitan el tracto gastrointestinal de los vertebrados. dentro de la familia Enterobacteriaceae (Madigan. en el sentido de que posibilitan actividades humanas e industriales directamente productivas que influyen en la tasa de crecimiento económico. amebiasis. El análisis microbiológico por recuento de bacterias indicadoras de contaminación fecal en aguas es de suma importancia al evaluar el estado sanitario del sistema en estudio. de tal modo que en cercanías de las grandes poblaciones incluso el agua de lluvia es portadora de un elevado número de microorganismos (Guinea. No debe olvidarse que recibe y arrastra partículas cargadas de bacterias. luego se lo vuelca asépticamente en caja de Petri estéril.Se prepararán también tubos con agar para punción. polio. teniendo la precaución de flamear previamente la boca del tubo o recipiente a la llama del mechero. Debido a que la concentración de dichos agentes habitualmente es baja. su detección directa en aguas . Para ello se puede utilizar medio de cultivo recién esterilizado y todavía líquido. La contaminación es un proceso de alteración o de modificación más o menos importante de los equilibrios físicos.

Sulfato de magnesio 0. Como dichas clases cuentan con alrededor de 20 estudiantes.2 g/l. agregar 2 g/l de ácido cítrico y se lleva a pH=6 con hidróxido de sodio 1N. Verde brillante 0. se forman 10 grupos de trabajo de 2 personas cada uno.1 g/l. perteneciente al conurbano bonaerense. Medios de cultivo Caldo Brila Fluorocult (Merck. no proporcionando una enumeración precisa. Metodología Tiempo estimado de realización y distribución de los grupos de trabajo La experiencia fue diseñada para tres clases de trabajos prácticos de tres horas de duración cada una pertenecientes a la materia de grado Microbiología General e Industrial de la Licenciatura en Ciencias Químicas de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UBA. 275) : Peptona 10 g/l. Muestras de agua Se analizan 250 mL de muestras de agua de diferentes grados de contaminación: agua del Río de la Plata y agua de pozo. utilizando las técnicas de NMP y recuento en placa. 4-metilumbeliferil-D-glucurónido 0. 2000. . utilizando frascos adecuados. Caldo Citrato de Koser: Cloruro de sodio 5 g/l. Por el contrario en poblaciones bajas (menos de 10 células por mL) es más eficaz la técnica de NMP porque permite la utilización de muestras de mayor tamaño. Dentro de los métodos de recuento de bacterias se encuentran dos que son los más ampliamente utilizados: la técnica de Número Más Probable (NMP) y la técnica de recuento en placa. 137 -141). Hidrógeno fosfato de diamonio 1 g/l. a las bacterias coliformes. 1994. el recuento en placa supera en precisión a este método. en medios selectivos para coliformes. que son de fácil detección y cultivo en laboratorio y presentan un tiempo de supervivencia que excede al de los patógenos en ese ambiente (Vullo. Bilis de buey desecada 20 g/l. Con la primera sólo se obtiene una estimación de la población de microorganismos contenidos en una muestra. Las muestras deben tomarse en forma estéril. Lactosa 10 g/l. por la cual se utiliza.0133 g/l. entre otras. disolver los componentes hasta obtener una solución límpida. Hidrógeno fosfato di potásico 1 g/l. Cuando la población es muy elevada.es complicada. mediante la realización de recuentos paralelos de aguas de diferentes grados de contaminación. El objetivo del presente trabajo práctico es la comparación de dos métodos de enumeración de bacterias de importancia sanitaria. L -triptofano 1 g/l.

en Caldo Citrato de Koser. Laurilsulfato sódico 0. Cloruro sódico 5 g/l. calcular el NMP de bacterias coliformes de origen no fecal. Existen muchos grupos bacterianos que poseen dicha enzima. Ver esquema de la Figura 1. Merck. 7.Agar Chromocult (Merck. 2002 178 -179) según: NMP/100 mL= nº tubos positivos x 100 / (mL muestra en tubos negativos x mL muestra totales)½. 5. APHA. Los medios con Fluorocult poseen MUG: 4-metilumbeliferil. Dihidrógenofosfato potásico 1. pero simple concentración.Según los resultados positivos por la aparición de turbidez en los tubos con Caldo Citrato de Koser. 1998.Sembrar 10 mL de la muestra en cada uno de los tubos de doble concentración. 270): Peptona 3 g/l. 3. 1 mL o 0. 307) para la prueba de indol en cada tubo.1 mL en los de simple concentración. Calcular en forma paralela el NMP/100 mL (AWWA.Incubar los tubos 48 hs a 37°C.Seleccionar los tubos que posean gas en el interior de la campana de Durham. 6. Recuento de bacterias del grupo coliforme según la técnica de NMP 1. pero dentro de las Enterobacterias sólo Escherichia coli y algunas especies de Salmonella y Shigella cuentan con ella. Para poder considerar estos tubos positivos para coliformes de origen fecal debe agregarse 1 mL de reactivo de Kovacs (p-dimetilamino benzaldehído 5%(p/v) en alcohol amílico o isoamílico con 2.5%(v/v) de HCl(c). a 37°C.glucuronidasa.Disponer de series de tres tubos con 10 mL cada uno de Caldo Brila -Fluorocult doble concentración y series de tres tubos con 5 mL cada uno del mismo caldo.-D-glucurónido. a partir de cada tubo con gas. WEF. sustrato de la enzima -D. Todos deben poseer en su interior una campana de Durham para ver producción de gas. 4. Mezcla de cromógenos 0. 9-53. Dichos tubos serán considerados positivos. Incubar 48 hs. 2.Sembrar con ansa recta. . Por lo tanto la aparición de fluorescencia y gas lleva a poder inferir la presencia de bacterias coliformes fecales (E.7 g/l. 1994. Hurst. Hidrógeno fosfato di potásico 3 g/l. y ver el desarrollo de color púrpura en la fase orgánica.1 g/l.Exponer los tubos positivos de Caldo Brila -Fluorocult a la luz ultravioleta. que al clivarse libera un producto (4 -umbeliferona) de fluorescencia azul. Triptófano 1 g/l. Piruvato sódico 1 g/l. Agar -agar 12 g/l.2 g/l. 1994. calcular por ambos métodos el NMP de bacterias coliformes fecales / 100 mL de muestra. Con este patrón de tubos positivos. Coli). Buscar en la tabla (Figura 2) el NMP de bacterias coliformes totales / 100 mL de muestra.

violetas indol . Las especies que no poseen ninguna de las enzimas se evidencian a través de colonias transparentes.Inocular por duplicado 0. Rastrillar el inóculo con espátula de Drigalsky. B. coli) 4. 2. según la expresión: UFC/mL = Número de colonias promedio de ambas placas Dilución x volumen del inóculo Obtención. fecales y no fecales presentes en la muestra. Los resultados se resumen en la Tabla 4. Las rojas pertenecen al grupo de las no fecales. El medio tiene también laurilsulfato de sodio para inhibir el desarrollo de Gram positivas y triptófano para realizar la prueba de indol (rec onocimiento de E.Efectuar las correcciones por normalización. Recuento en placa de bacterias del grupo coliforme 1.8. Muestra: Río de la Plata Se realizan diluciones seriadas al décimo de la muestra hasta 10-4.Incubar a 37°C durante 48 hs. Muestra de agua de pozo del con urbano bonaerense Se siembra la muestra sin diluir en placas de Agar Chromocult. manejo e interpretación de resultados Recuento en placa de bacterias del grupo coliforme A. Las colonias rojas y violetas son características de bacterias coliformes. Se siembran en placas de Agar Chromocult y se calcula el número de UFC/mL de las colonias rojas (Coliformes no fecales). y se calcula el número de UFC/mL de las colonias rojas (Coliformes no fecale s).Observar y contar las colonias obtenidas. detalladas en la Figura 1 e informar los resultados del recuento.Calcular el número promedio de unidades formadoras de colonias por mL (UFC/mL) de bacterias coliformes totales. Escherichia coli escinde ambos compuestos dando coloración violeta. mientras que las violetas a las fecales. violetas indol positivas (Coliformes fecales) y la suma de ambas (Coliformes totales). El Agar Chromocult identifica coliformes totales (enterobacterias fermentadoras de lactosa) y Escherichia coli a través de dos sustancias cromógenas: Salmon-gal que pone en evidencia la -D-galactosidasa dando colonias de color rojo y X-glucurónido que determina la presencia de la -D glucuronidasa dando colonias azules. 3.1 mL de muestra en placas de Petri preparadas con Agar Chromocult.

se determina que el recuento de bacterias coliformes totales por mL. es decir cuando las muestras son lo suficientemente diluidas como para realizar un recuento en placa. ya que el método de NMP es un concepto estadístico. se dispone de una última clase destinada a la discusión e interpretación de los resultados obtenidos por los distintos grupos de trabajo. Fundamento La fórmula original de este medio de cultivo. 1998. Un recuento tan bajo como 3. Como conclusión general del trabajo. Levine EMB Agar. eliminando la . WEF. 9-52). Los resultados se resumen en la Tabla 5.positivas (Coliformes fecales) y la suma de ambas (Coliformes totales). según el error de la técnica. Medio adecuado para la búsqueda y diferenciación de bacilos entéricos. Para el caso de un agua de poz o. En este caso. obtenido mediante la técnica de NMP corresponde a la mitad con respecto al valor en placa (Tablas 2 y 4). APHA. Los resultados muestran entonces una mayor precisión en el recuento en placa. derivado de la teoría de probabilidades.4 y 1. fue modificada por Levine. Para el recuento de coliformes totales. 9-52).6 bacterias coliformes totales/100 mL sólo se puede estimar por la técnica de NMP.6 x 105 / 100 mL (Tabla 2: dilución 10 -4 de la muestra original) y su intervalo de 95% de confianza oscila entre 3 y 25 x 105 / 100 mL. para el análisis microbiológico de productos lácteos y alimentos. no se puede realizar el recuento en placa debido a la baja proporción de bacterias coliformes presentes en la muestra. para utilizar el método de enumeración de mayor precisión en cada caso. Los valores de recuento en placa ( Tabla 4) están dentro de este intervalo. Así por ejemplo para el caso de agua de río. Es recomendado por la American Public Health Association. es necesario conocer el origen y posible nivel de contaminación microbiológica de una muestra de agua a analizar. El intervalo de 95% de confianza para el método de NMP es muy amplio (AWWA. APHA. y por la USP para la realización de los ensayos límite microbiológico. aplicable a la enumeración de microorganismos bajo ciertas condiciones. Discusión de los resultados Una vez realizada la lectura de los resultados para las distintas muestras. a partir de muestras clínicas. el NMP calculado es 7. En este caso el intervalo del 95% de confianza se encuentra entre 1 y 13 bacterias coliformes totales/100 mL (AWWA.2 x 104 UFC/mL. WEF. aguas servidas. 1998. el resultado oscila entre 2. y otros materiales.

0 Eosina 0.0 Fosfato di potásico 2. adecuado para el crecimiento de enterobacterias.1 ± 0. originan colonias de color azulado negro.065 pH final:7. coli. por lo cual será necesario realizar pruebas bioquímicas. producen colonias con brillo metálico). dejar reposar 5 minutos. lo que permite una mejor diferenciación de E.2 Siembra Directa. rosa púrpura.0 Agar 15. Las colonias producidas por microorganismos no fermentadores de lactosa son incoloras. para la identificación de género y especie.0 Lactosa 10. y también. enterococos) y levad uras. La combinación utilizada de eosina y azul de metileno. pueden crecer. Resultados Microorganismos Crecimiento Características de las colonias Bueno a excelente Verdosas con brillo metálico y centro negro Escherichia coli ATCC 25922 azulado Klebsiella pneumoniae ATCC Bueno a excelente Mucosas. Es un medio selectivo y diferencial. Algunas bacterias Gram positivas (cepas de estafilococos. Los microorganismos fermentadores de lactosa. Instrucciones Suspender 37. Fórmula (en gramos por litro) Peptona 10. Este medio de cultivo. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 121°C. Calentar a ebullición hasta disolución total. permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. con brillo metálico. estriando la superficie. originando colonias incoloras y puntiformes.4 Azul de metileno 0. inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas. es útil para la orientación y no confirmación de especies bacterianas (ya que numerosas cepas de Citrobacter spp. confluentes 700603 .sacarosa e incrementando la concentración de lactosa.4 g de polvo por litro de agua destilada. Incubación De 18-24 horas a 35-37 °C. en aerobiosis.

aeruginosa ATCC 27853 Bueno a excelente Proteus mirabilis ATCC 43071 Bueno a excelente S. para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. Placas preparadas: color púrpura.B. .M. está dada por los indicadores eosina y azul de metileno. puntiformes Incoloras. aureus ATCC 25923 Pobre Enterococcus faecalis ATCC 29212 Pobre Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno a excelente Salmonella typhimurium ATCC Bueno a excelente 14028 Características del medio Incoloras Incoloras Incoloras. y aquellos que son incapaces de hacerlo. Este medio (también denominado E.P. puntiformes Incoloras Incoloras Medio preparado: color púrpura con tonos verdosos. pequeñas. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae. pequeñas. éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. ligeramente opalescente con un precipitado floculento disperso. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa. El color púrpura se restaura por agitación. Medio preparado: a 2-8 ºC. La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. Fundamento Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine.A. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. ya que es parte esencial del mismo. Presentación x 100g :Código: B02-104-05 x 500g :Código: B02-104-06 6 x 50 ml: B04-104-84 E. Agar. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.

puntiformes Incoloras Incoloras 0.5 Eosina 0. confluentes Incoloras Incoloras. Como colonias rosadas y puntiformes. Esterilizar en autoclave a no más de 121°C durante 15 minutos. Enterococcus spp. pequeñas.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos hasta su disolución.2 Siembra En superficie. para favorecer el desarrollo de clamidosporas.0 Fosfato di potásico 2. mezclar. Resultados Microorganismos Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Proteus mirabilis ATCC 43071 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Shigella flexneri ATCC 12022 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Características del medio: Tipo de Colonia Verdosas con brillo metálico y centro negro azulado Mucosas. albicans. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada. mientras que las que no lo hacen son incoloras. en aerobiosis.Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. Fórmula (en gramos por litro) Peptona 10.0 Lactosa 5.4 Azul de metileno pH final: 7. por estriado a partir de un inóculo poco denso.0 Agar 13. mientras que Acinetobacter spp. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. Y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda. En profundidad. Crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes.065 Instrucciones Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada.2 ± 0. un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella. En este medio se obtiene además. . Presentan un característico brillo metálico.0 Sacarosa 5. esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0. Enfriar a 45°C y distribuir agitando suavemente. rosa púrpura. para obtener colonias aisladas. Incubación De 24 a 48 horas a 35-37 °C. Reposar 5 minutos.

ya que es parte esencial del mismo. El color púrpura se restaura por agitación. La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido.Placas preparadas: color púrpura. Medio preparado: a 2-8 ºC. Presentación x 100g :Código: B02-101-05 x 500g :Código: B02-101-06 6 x 50 ml: B04-101-84 . Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10 -35 ºC.

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