CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo pueden clasificarse según diferentes criterios, pero los más importantes son aquellos que se basan en: a) Su consistencia b) Su utilización c) Su composición d) Su origen

a) SEGÚN SU ESTADO FÍSICO (CONSISTENCIA):
1) Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración. 2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un agente gelificante. Los más utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una proteína animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y además su uso está muy limitado porque su punto de fusión es bajo (licúa a temperatura ambiente) razón por la que no puede utilizarse para cultivos a 37ºC, que es la tempera óptima de crecimiento para muchos microorganismos. Agar-agar: Es un polímero de azúcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molécula insoluble enagua pero soluble en agua caliente; una solución al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39ºC y no se funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y solidifica una vez fundido alrededor de los 45ºC. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgánicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un microorganismo. Aunqu e el agar es una mezcla de polisacáridos, Araki, en 1937, los dividió en dos grupos: - agarosa, con poco sulfato, libre de ácido pirúvico, y - agaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporción de agarosa a agaropectina en el agar varía según el alga de origen. El agar puede utilizarse para diferentes fines, aunque los más importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar bacteriológico, agares purificados y agarosa, utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que se produce, se utiliza en trabajo microbiológico, por lo que es importante la ausencia de metales tóxicos.

3) Medios semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias

SEGÚN SU UTILIZACIÓN.
1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de b acterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio más conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar común, que resulta de la adición de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc. 2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc ) El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate). 3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias. 4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibidores podrían considerarse como una variante más restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adición de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo de una población determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos. 5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies. La adición de un azúcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los gérmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. También lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemólisis), el SS (que es doblemente diferencial), etc. 6) Medios de identificación: Son los destinados a comprobar alguna cualidad específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de

ATENDIENDO A SU COMPOSICIÓN. 8) Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa que. Los medios más adecuados para la multiplicación suelen ser líquidos. Según las sustancias que entren a formar parte en su composición. El agar Kligler. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el Laboratorio de Microbiología.los microorganismos. el sustrato específico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. 9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clínicas que no pueden sembrarse inmediatamente. con lo cual se consigue simultáneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de identificación. 2) Medios sintéticos: Son aquellos que contienen en su composición exclusivamente sustancias químicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas. Se emplean en la obtención de vacunas. por diversas razones nos interese mantener. Cary-Blair. b) mediante liofilización de una suspensión bacteriana. el medio de Simmons y en general. y por consiguiente no es rigurosamente constante. y c) congelando las cepas en leche descremada estéril al 0. Actualmente están apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios específicos de identificació n para ciertos microorganismos. donde la reproductibilidad no podrá ser exacta. resultando un medio de composición perfectamente definida. Son ejemplos de esto últimos los medios CPS ID3 o Uriline ID (Biomerieux). etc. En la práctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los más empleados. y más raramente de vegetales. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales.1%. Son ejemplos típicos de este grupo los medios de Stuart -Amies. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas: a) haciendo pases periódicos de placa a placa. en la investigación y en la industria. cualquier medio al que se le haya añadido un elemento diferencial de un microorganismo. los medios de cultivo pueden ser clasificados en: 1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados. son medios utilizados en identificación. 7) Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un microorganismo ya aislado. . El caldo-infusión cerebro-corazón (BHI). y los más empleados se preparan a partir de tejidos animales. Su utilización debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior del medio (generalmente en un tubo). Su composición no es exactamente definida. es un ejemplo típico de estos medios. utilizados para identificar los gérmenes urinarios más importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilización de sustratos cromogénicos específicos.

haciéndolo exclusivamente en células vivas con unas características determinadas. etc. Se utiliza para el crecimiento de estreptococos. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. Rickettsias. pero sí puede añadir factores inhibidores del crecimiento . b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cualitativa y cuantitativamente. Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de gérmenes que no presentan exigencias particulares.3) Medios semisintéticos: El gran número de factores de crecimiento exigidos para ciertos gérmenes hace que la fabricación de un medio sintético para estos gérmenes sea imposible o demasiado cara. No es diferencial. aparte de los virus. extracto de tejidos. Para la preparación del agar sangre se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sódico o un preparado enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factore s de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo. DESCRIPCIÓN Y UTILIZACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO MEDIOS DE CULTIVO COMUNES .Ciertos gérmenes no crecen en ningún medio por muy enriquecido que esté éste. ß ó gamma). Son los más corrientemente utilizados.). En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgánico complejo (extracto de levadura. Ejemplos de este tipo son. sí son los más conocidos en un laboratorio de Microbiología. La adición de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que están en el interior de los hematíes. Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza además para la investigación de los diversos tipos de hemólisis ( . Según su origen: a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de o rigen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce exactamente. y aunque no vamos a enumerarlos todos. etc. las Chlamydias. como por ejemplo extracto de levadura.

) contienen más de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. En su composición lleva un azúcar (lactosa) y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferen cial. Las colonias lactosa positivas aparecerán de color amarillo y las lactosa negativas lo harán con un color verdoso. Agar S. Las colonias lactosa negativas serán incoloras. apareciendo del mismo color que el medio subyacente (naranja). Es un medio inhibidor de los gérmenes Gram positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para enterobacterias por su contenido en sales biliares. Estas mezclas. Un ejemplo clásico es el Thayer-Martin. Los gérmenes que fermenten la lactosa producen una acidificación del medio que hacen aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes. Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base. que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. : El medio C. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos y meningococos) y Haemophilus.L.D. Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el aislamiento e identificación de enterobacterias. aunque la interpretación sea diferente al anterior medio por la incorporación de otro indicador: el azul de bromo timol.S. Por adición de uno o varios antibióticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos. pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies (caballo. utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocola te enriquecido al cual se ha añadido una mezcla de tres antibióticos específicos que impedirán el crecimiento del resto de la flora acompañante. El medio contiene sales biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y gérmenes Gram positivos.bacteriano presentes en el suero. que son termolábiles. La sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al 5%. Su bajo contenido en electrolitos evita la invasión de los cultivos po r Proteus.La presencia de lactosa en su composición le confiere el carácter de medio diferencial. (Cistina Lactosa Electrólito Deficiente) está recomendado para el recuento e identificación presuntiva de los microorganismos de las vías urinarias.E. . pues facilitan las reacciones hemolíticas o contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados gérmenes. blanco o azulado.E. Agar C. conejo. humana). pero en él pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizás en uno de los medios más enriquecidos si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre.L. etc. denominadas de forma diferente según las casas comerciales (Polivitex. Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que se destruyan las sustancias inhibidoras. Por esta razón el agar chocolate contiene hemoglobina.D.: El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales. Isovitalex.

Otros microorganismos diferentes requieren los sistemas de identificación habituales (API. ej) Granada. que se mani fiesta como un precipitado de color negro en el centro de la colonia. igual que el de Shigella. ID3. faecalis.Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan nunca la lactosa por lo que este medio es excelente para descartar todas las colonias que no cumplan este requisito. como Brucella. Permite el cultivo de aerobios. obteniéndose colonias más numerosas y voluminosas que en los medios selectivos usuales. Caldo tioglicolato con resazurina: Es un medio recomendado para controles de esterilidad. La presencia de tres azúcares (lactosa. sobre E. anaerobiosy . Las cualidades del agar Hektoen se deben a su riqueza en peptonas y azúcares. esencialmente. La identificación solo requiere la adición de un reactivo para confirmar o descartar la especie sospechada.S. sacarosa y salicilina) permiten ampliar el poder diferencial de este medio. Neisseria o Estreptococos. La inhibición tiene lugar. Este medio es capaz de detectar los gérmenes formadores de SH2. igual que el SS. El agar SS es doblemente diferencial. mediante la utilización de un sustrato cromogénico específico de este microorganismo. Islam o New GBS: Medios utilizados para detección de Estreptococos agalactiae. El crecimiento de Salmonella es excelente. Así. Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la realización de los antibiogramas o pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos. Es un medio muy enriquecido. que neutralizan el efecto inhibidor de las sales biliares respecto a ciertos gérmenes de cultivo delicado (Shigella en particular). mirabilisy E. Hay que señalar que el vibrión colérico crece bien en este medio.La presencia de lactosa y rojo de metilo nos permiten diferenciar las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las que no lo hacen (incoloras). que permite la identificación de E. y será exclusivamente a estas colonias a quienes se hagan las pruebas bioquímicas confirmatorias de esta especie. p. pero no es diferencial. azulo marrón). El agar SS es un medio muy inhibidor que a veces impide incluso el crecimiento de ciertas especies de Salmonella y sobre todo de Shigella. Agar Hektoen: Es un medio más diferencial y menos selectivo que el agar SS. A él nos referiremos más ampliamente en el capítulo correspondiente Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de gérmenes exigentes. coli y en menor medida sobre Proteus y Citrobacter. porque además de indicarnos el comportamiento de los gérmenes con relación a la lactosa. Por esta razón debe utilizarse siempre junto con otro medio menos inhibidor como el Hektoen. : Medio cromogénico desarrollado por Biomerieux. coli.P. P. Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. con la simple visualización d el cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos. C. una colonia incolora y con un punto negro central es sospechosa de Salmonella. nos muestra los gérmenes que son capaces de producir ácido sulfhídrico.

Tiene un bajo potencial redox que.microaerófilos. investigar la formación de gas y comprobar si el microorganismo puede producir sulfato ferroso a partir del tiosulfato sódico. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio en diferencial: así se puede identificar presuntivamente el Staphylococcus aureus. Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sucrosa (DCLS): Similar al agar SS. Medio de Loeffler: Es un medio específico para el cultivo de Corynebacterium difteriae. pues impide el crecimiento de Gram positivos y diferencia muy bien a E. Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el cultivo de anaerobios. . Caldo selenito-F: Se utiliza exclusivamente para enriquecimiento de Salmonellas. inhibiendo Gram positivos y la mayoría de enterobacterias. Agar Chapman: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos. Agar Gardnerella: Agar con sangre humana más una mezcla de antibióticos que permiten la observación de colonias betahemolíticas características de Gardnerella vaginalis Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de Campylobacter intestinales creciendo a 42º C en microaerofilia. cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo metálico característico. Agar Cetrimida. al aumentar. se manifiesta por un color rosa del medio. ya que estegérmen crece bien en medios salados y fermenta el manitol (colonias amarillas). El segundo pone además de manifiesto la pigmentación fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV. podemos ir adelantando que se trata de un medio diferencial que permite conocer el comportamiento del microorganismo ante dos azúcares (glucosa y lactosa). Agar Kligler : Medio específico para pruebas de identificación de enterobacterias. a la vez que los diferencia del resto. Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa positivos. coli. Agar Levine ó EMB (Eosina azul de metileno): Se utiliza para aislamiento de enterobacterias. Agar King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas. Aunque de él hablaremos con más detenimiento en el capítulo de pruebas de identificación bacteriana. Su elevado contenido en cloruro sódico permite la inhibición de la mayoría de los otros gérmenes. Es un medio diferencial e inhibidor a la vez.

a 35-37 ºC durante 24 horas.2 15. Incubación En aerobiosis. Fundamento Por las características de sus componentes es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. Resultados a-Agar nutritivo: Microorganismos P. Contiene verde malaquita para inhibir parcialmente el crecimiento de otras bacterias. La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano. El huevo se utiliza como sustancia de enriquecimiento.Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract) : Se utiliza para el aislamiento de bacterias del género Legionella Löwenstein-Jensen: Este medio se utiliza para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis. Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2 minutos hasta su disolución. según el uso a que se destine. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona 5. El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano.0 Cloruro de sodio 8.0 Extracto de carne 3.0 Agar pH final: 7. Nutritivo Agar Medio de cultivo utilizado para propósitos generales. para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. aguas y otros materiales de importancia sanitaria.3 ± 0. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Siembra En superficie o por la técnica de pour plate.0 Instrucciones Suspender 31 g de polvo por litro de agua destilada. Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos. mirabilis ATCC 43071 Crecimiento Bueno-excelente .

E. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. cereus ATCC 10876 E. aureus ATCC 25923 B. razón por la cual es difícil aislarlas. pneumoniae ATCC 49619 Crecimiento Abundante Abundante Abundante Hemólisis Beta Alfa Alfa Características del medio Medio preparado: ámbar claro a medio ligeramente opalescente. coli ATCC 25922 S. A menudo nuestro interés es caracterizar una especie bacteriana. faecalis ATCC 29212 P. ya que en estos últimos se basan muchos de los principios del aislamiento. Si bien el aislamiento es un paso crucial en este camino. OBJETIVOS:  Conocer la clasificación de los medios de cultivo. pyogenes ATCC 19615 S. aeruginosa ATCC 27853 Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente B-Agar nutritivo suplementado con 5% de sangre de carnero: Microorganismos S. comenzaremos examinando los medios de cultivo.  Adquirir práctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir de sus componentes individuales. para lo cual debemos estar preparados para aislar.  Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación del medio de cultivo en la práctica microbiológica. pneumoniae ATCC 6305 S. . Medio preparado: a 2-8 ºC. Presentación x 100g :Código: B02-122-05 x 500g :Código: B02-122-06 6 x 50 ml: B04-122-84 MEDIOS DE CULTIVO Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos. cultivar e identificar a la misma.

por ello. quimiotrofos (litotrofos u organotrofos) y fototrofos. Es decir. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN SU ORIGEN Los medios de cultivos pueden clasificarse en: . Agar nutritivo Temperatura óptima de crecimiento: según el rango de temperatura al cual el Microorganismo presenta su mayor crecimiento. heterótrofos. la variedad de medios de cultivo también lo es. Rango de pH: en general el rango óptimo de pH para la mayoría de las bacterias oscila entre 6. anaerobios facultativos y microaerófilos. factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan. INTRODUCCIÓN: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes. El conocimiento de las necesidades nutritivas y físicas de los microorganismos es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado. La diversidad metabólica de los microorganismos es enorme.6 y 7. Tipo respiratorio: aerobios. es cualquier medio que proporcione sustancias nutritivas que permitan el desarrollo y reproducción de microorganismos. no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos. según los cuales se los clasifica en autótrofos. Reconocer la necesidad de evitar la contaminación tanto de los medios de cultivo como de los demás elementos utilizados en el laboratorio de microbiología. Las características de los microorganismos a tener en cuenta al momento de preparar un medio de cultivo adecuado para su desarrollo en el laboratorio son: Tipo trófico: se refiere a los requerimientos de carbono y energía. anaerobios. se los clasifica en psicrófilos. mesófilos y Termófilos.2.

Para esto últ imo se busca establecer condiciones desfavorables de pH. agua. Artificiales: Están compuestos de substancias que son manipuladas por el hombre en el laboratorio. Comunes Medios Artificiales Complejos II. sangre.a. suero. por ejemplo. como por ejemplo el caldo nutritivo. etc.b Medios selectivos: Estos medios han sido modificados de alguna manera para que. en una flora mixta. animales o microbianos. Se citan como ejemplos el agar sangre y el agar chocolate. Diferenciales I.c. tierra. Se utilizan para el cultivo de microorganismos exigentes en cuanto a sus requerimientos nutricionales. Un medio no sintético o complejo e s aquel del que se desconoce su composición química exacta. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS ARTIFICIALES COMPLEJOS SEGÚN SU FINALIDAD I.a Medios enriquecidos o mejorados: se obtienen a partir de un medio común. huevos. con el agregado de elementos nutritivos elegidos según las necesidades. Medios comunes: Permiten el desarrollo de una gran variedad de microorganismos. Enriquecidos II.b. . papa. puede ser una simple solución de sales con una fuente de carbono o puede contener muchos compuestos orgánicos. albúmina. II. yema de huevo etc. Tales como sangre. II. Especiales II. cuya concentración no se conoce con exactitud y que proveen todos los nutrientes necesarios. leche. se trata básicamente de extractos de tejidos vegetales. Un medio del cual se conoce exactamente su composición química se denomina sintético o químicamente definido. Selectivos II. Medios especiales: se los clasifica según su finalidad. A los medios artificiales a su vez se los puede dividir en sintéticos y complejos. II. nutrientes y de temperatura. como el Caldo carne y agar carne.Naturales: Son aquellos que existen como tales en la naturaleza. permitan el desarrollo de determinadas especies y al mismo tiempo inhiban la proliferación de la flora acompañante. o por el agregado de inhibidores.

II. Se logra así la multiplicación de los microorganismos que se desea identificar. por el agregado de agentes que inhiben el crecimiento.1 Medios selectivos para enriquecimiento: Son m edios en los que los microorganismos crecen en libre competencia. aerogenes son rosadas con un centro azul y rara vez presentan brillo. los antibióticos. Ejemplos de sustancias inhibidoras son algunos colorantes (cristal violeta. Estos medio selectivo. el alcohol fenil etílico y la azida de sodio.b. la provisión de elementos nutritivos en concentración adecuada. no llegándose a inhibir totalmente el crecimiento del resto de microorganismos. se utilizan para sembrar directamente con la muestra incógnita o a partir del medio selectivo para enriquecimiento.2 Medios selectivos para aislamiento: son medios selectivos sólidos. Cuando se cultivan ambas especies sobre agar nutritivo. II. Se ponen en evidencia las colonias de los microorganismos que se desea aislar y a su vez se diferencian de aquellas que pudieran haber desarrollado provenientes de la flora acompañante. Un ejemplo de este t ipo es el agar con eosina azul de metileno que diferencia Escherichia coli de Enterobacter aerogenes. por ejemplo un indicador.c Medios diferenciales: permiten el desarrollo de muchas de las especies que coexisten en una mezcla que se desea aislar. II. Estas diferencias se basan en alguna propiedad bioquímica que unos poseen y otros no. algún elemento presente en él permite diferenciarlos.b.El agar Saburaud es un ejemplo de medio selectivo. Sin embargo en agar con azul de metileno las colonias de E. hasta un número suficiente tal que sea posible su aislamiento en medios selectivos apropiados. en cambio las colonias de E. sobre la base de la diferencia de color de sus respectivas colonias.diferenciales resultan muy útiles para el aislamiento de un microorganismo separándolo de la flora acompañante. forman colonias de color blanco grisáceo. coli son oscuras y con brillo metálico. viéndose favorecidos aquellos para los cuales las condiciones de desarrollo son las más apropiadas. Aunque dos o más tipos de microorganismos pueden crecer en este medio. verde brillante). CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN BUEN MEDIO DE CULTIVO Como ya se ha señalado.6 favorece el desarrollo de hongos al mismo tiempo frena el d esarrollo de la mayoría de las bacterias. en el que el pH de 5. En su mayor parte los medios diferenciales son asimismo selectivos. .

En función de la consistencia se puede clasificar a los medio el líquidos y sólidos. El componente dominante en el agar es un polisacárido. Agar. la fluidez y la presión osmótica que se le quiera brindar a los microorganismos. En cuanto a la esterilización. Existe en rama o en polvo. los medios de cultivo pueden present arse en forma líquida. Un buen medio de cultivo es aquel que le provee a los microorganismos los nutrientes indispensables en la concentración adecuada. por lo que tiene la ventaja de ser sólido a la temperatura de incubación.depende del conocimiento que se tenga de las condiciones del desarrollo en el hábitat natural. Agua destilada o desionizada. 15 minutos). Si se desea visualizar movilidad se usa agar blando se le agrega agar al 3 %. La cantidad de sales y agua que se agregue a un medio de cultivo. CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Los elementos citados a continuación. Si se requiere sangre u otros componentes inestables. cantidad necesaria de sales y agua. se relaciona directamente con el pH. Para preparar un medio sólido se le agrega agar al 12-18 %. en cuyo caso se los denominacal dos. se solubiliza en agua a ebullición (funde hacia los 98°C) y al enfriarse forma un gel inodoro e insípido (se gelifica alrededor de los 42°C). este procedimiento garantiza la destrucción de todos los microorganismos no deseados que se encuentran presentes durante la preparación del medio de cultivo. o en forma sólida si se le agrega agar al caldo. . cabe aclarar que un compuesto puede actuar como inhibidor para algunos microorganismos y no para otros. El agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. dependiendo de su grado de pureza. Con la excepción de algunos microorganismos marinos. Si los componentes del medio son estables al calor se los lleva al autoclave (121 ºC. al que acompañan algunas impurezas y que se obtiene de ciertas algas marinas. Libre de inhibidores del crecimiento. el agar no es empleado como nutriente. que sea estéril y que no contenga sustancias inhibidoras. se los esteriliza por separado por otros procedimientos y se lo agrega al medio que ha sido esterilizado cuando se haya enfriado a 50 ºC. En cuanto a los inhibidores. aunque pueden no ser los únicos e incluso alguno de ellos puede estar ausente de la preparación. como antibióticos y compuestos fácilmente oxidables al calor. que tenga la consistencia y el pH adecuados. son los más frecuentemente usados en la preparación de los medios de cultivo. En el laboratorio.

. Ejemplos: extracto de carne. La adición de determinadas sustancias al medio de cultivo puede Convertirlo en selectivo (ver más adelante. sino también con sustancias que neutralizan inhibidores del crecimiento de algunas bacterias. Cisteína. Sangre completa. caseína. En el caso del extracto de carne en polvo o pasta. semillas. Algunos componentes son incorporados al medio de cultivo Para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano. Peptonas. pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales. Indicadores ácido.Extractos. etc. nitógeno y carbono. Agentes selectivos. previenen una desviación del pH. etc.). . sangre desfibrinada. tioglicolato y otros son agentes reductores que se añaden a Los medios de cultivo para crear condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios. ser obtenida en condiciones asépticas directamente de un animal sano. etc. Indicadores de pH. Proveen proteosas. etc. peptonas. polipéptidos y aminoácidos. minerales y vitaminas. Estos preparados deshidratados son frecuentemente empleados en la confección de medios de cultivo. de malta. gelatina. Las peptonas son muy ricas en péptidos y aminoácidos. La sangre no puede ser esterilizada y debe. telurito potásico. ciertos órganos o tejidos animales o vegetales (por ejemplo carne. provee sustancias nitrogenadas. por tanto. carne. Por ejemplo. clasificación de los medios de cultivo). o sustancias como las peptonas. hígado. mientras que el extracto de levaduras provee vitaminas del grupo B. Fluidos Corporales. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos nitrogenados y sales minerales que carecen de identidad química definida.) son extraídos con agua y calor. y sales como fosfatos bisódicos o bipotásicos. antibióticos. Agentes reductores. y posteriormente concentrado hasta la forma final de pasta o polvo. azida sódica. Los fluidos corporales no solamente contribuyen con factores de crecimiento. Para su preparación. sales biliares. cristal violeta. de levadura.base se añaden a menudo a los medios de cultivo Con objeto de detectar variaciones del pH. Sistemas amortiguadores. Los microorganismos más comunes son neutrófilos (el pH óptimo para su crecimiento está próximo a la neutralidad). se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja. plasma o suero sanguíneo son frecuentemente añadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos patógenos.

luego se van incorporando todos los ingredientes de la lista en el orden en el que se encuentran. como puede ser el PO4H2K. Caldo nutritivo (Caldo carne) . Preparación de medios de cultivo Materiales: . la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados. la preparación de un medio de cultivo se reduce simplemente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en agua destilada.a la concentración adecuada. Generalmente figura en primer término el compuesto que actúa como tampón. actúan como agentes selectivos frente a determinados microorganismos.gradillas . ACTIVIDADES I. siguiendo las instrucciones del fabricante y luego esterilizarlo. se debe verificar que el pH sea el adecuado.autoclave A. la preparación de un medio de cultivo comienza por hacer un estudio de la fórmula que constituye una receta que deberá respetarse estrictamente. Al finalizar la preparación y una vez que ésta se enfríe. En general.pipetas de 10 ml . Primero se agrega agua destilada o desionizada a un recipiente. que además provee fósforo y potasio. PREPARACIÓN En la actualidad.Erlenmeyer .tiras de pH .balanza . En caso que el medio de cultivo debamos hacerlo nosotros. Es conveniente añadir todos los ingredientes en el orden indicado y disolverlos de a uno antes de agregar el siguiente.tubos de ensayo con sus tapones . En caso de ser necesario se ajusta con CO3Na2 (1N) o ClH (1N).drogas correspondientes a cada fórmula . normalmente bajo la forma de liofilizados que es preciso re hidratar.

... la esterilización se lleva a cabo una vez que se ha envasado el caldo agarizado.... 3) Llevar a ebullición agitando periódicamente con una varilla de vidrio..2 Preparación: 1) Colocar un volumen medido de agua destilada en un recipiente. 5) Dejar enfriar y medir pH.. colocar capuchón de papel y esterilizar en autoclave 15 minutos a 1 atm..... 4) Completar el volumen hasta 1000 ml.. 3 g Agua c. Cuando se prepara agar nutritivo no es necesario usar caldo estéril.........p... 4) Llevar 10 ml a tubos de ensayo....... 2) Agregar el agar calentando a baño maría agitando hasta disolución total..Es el medio complejo más común para el cultivo de microorganismos..... 6) Colocar 10 ml del caldo en tubos de ensayo y volúmenes apropiados en frascos.... 2) Disolver los ingredientes de a uno y por orden. 7) Tapar....... Fórmula: Peptona. ... 20 g Caldo nutritivo........ 7.. cuando están aún líquidos...............2. B... ....... ... Agar nutritivo Fórmula: Agar... . se apoyan sobre la mesada con un cierto ángulo hasta que solidifiquen.... se tapan y esterilizan... 3) Ajustar pH hasta 7............ Una vez afuera del autoclave..... 5) Esterilizar....s.... para ello se colocan 5 ml del agar en los tubos de ensayo........... Si hace falta corregir con HONa 1M.............. 1000 ml pH.... 1000 ml Preparación: 1) Colocar 1000 ml de caldo en un recipiente.. Se prepararán tubos con agar inclinado o en pico de flauta (slant). 5 g Extracto de carne.

Las bacterias que se utilizan normalmente forman parte de un grupo llamado coliforme. en el sentido de que posibilitan actividades humanas e industriales directamente productivas que influyen en la tasa de crecimiento económico. Su presencia indica el potencial patogénico en aguas. El agua natural constituye un reservorio de microorganismos autóctonos (Pseudomonas. de tal modo que en cercanías de las grandes poblaciones incluso el agua de lluvia es portadora de un elevado número de microorganismos (Guinea. Se deja enfriar el agar hasta 45 ºC. En este caso. es decir la probable existencia de agentes causantes de enfermedades como cólera. amebiasis. químicos o biológicos del agua que son responsables de su calidad y la hacen inadecuada para sus numerosos usos y aplicaciones. Bacillus. polio. dentro de la familia Enterobacteriaceae (Madigan. 1-8). o bien medio solidificado y fundido a ebullición en Baño María. 1979. hepatitis. 2004. teniendo la precaución de flamear previamente la boca del tubo o recipiente a la llama del mechero. No debe olvidarse que recibe y arrastra partículas cargadas de bacterias. fiebre tifoidea. una vez que los tubos fueron retirados del autoclave se dejan solidificar en posición vertical. El análisis microbiológico por recuento de bacterias indicadoras de contaminación fecal en aguas es de suma importancia al evaluar el estado sanitario del sistema en estudio. Micrococcus) o exógenos (Escherichia coli. Medio de cultivo caldo brilla Introducción Las disponibilidades en agua constituyen un factor fundamental para el desarrollo económico y la salud pública. Enterococcus). 927 -941). Dicha contaminación puede tener dos orígenes: Químico o microbiológico. luego se lo vuelca asépticamente en caja de Petri estéril. La contaminación es un proceso de alteración o de modificación más o menos importante de los equilibrios físicos. Se deja solidificar en posición horizontal. Dicho grupo se caracteriza por estar formado por microorganismos que habitan el tracto gastrointestinal de los vertebrados. su detección directa en aguas . giardiasis. Por último se prepararán cajas de Petri con agar nutritivo.Se prepararán también tubos con agar para punción. Debido a que la concentración de dichos agentes habitualmente es baja. Los abastecimientos de agua se consideran en todos los países como inversiones básicas de interés general. etc. Para ello se puede utilizar medio de cultivo recién esterilizado y todavía líquido.

Por el contrario en poblaciones bajas (menos de 10 células por mL) es más eficaz la técnica de NMP porque permite la utilización de muestras de mayor tamaño.es complicada. Bilis de buey desecada 20 g/l. perteneciente al conurbano bonaerense. que son de fácil detección y cultivo en laboratorio y presentan un tiempo de supervivencia que excede al de los patógenos en ese ambiente (Vullo. en medios selectivos para coliformes. Medios de cultivo Caldo Brila Fluorocult (Merck. entre otras. Verde brillante 0. a las bacterias coliformes. el recuento en placa supera en precisión a este método.0133 g/l. 137 -141). agregar 2 g/l de ácido cítrico y se lleva a pH=6 con hidróxido de sodio 1N. . utilizando las técnicas de NMP y recuento en placa. Muestras de agua Se analizan 250 mL de muestras de agua de diferentes grados de contaminación: agua del Río de la Plata y agua de pozo. Lactosa 10 g/l. 1994. por la cual se utiliza. Las muestras deben tomarse en forma estéril. Como dichas clases cuentan con alrededor de 20 estudiantes. 275) : Peptona 10 g/l.1 g/l. Metodología Tiempo estimado de realización y distribución de los grupos de trabajo La experiencia fue diseñada para tres clases de trabajos prácticos de tres horas de duración cada una pertenecientes a la materia de grado Microbiología General e Industrial de la Licenciatura en Ciencias Químicas de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UBA. mediante la realización de recuentos paralelos de aguas de diferentes grados de contaminación. Caldo Citrato de Koser: Cloruro de sodio 5 g/l. 2000. Hidrógeno fosfato di potásico 1 g/l. Cuando la población es muy elevada. disolver los componentes hasta obtener una solución límpida.2 g/l. utilizando frascos adecuados. L -triptofano 1 g/l. Sulfato de magnesio 0. Con la primera sólo se obtiene una estimación de la población de microorganismos contenidos en una muestra. Dentro de los métodos de recuento de bacterias se encuentran dos que son los más ampliamente utilizados: la técnica de Número Más Probable (NMP) y la técnica de recuento en placa. 4-metilumbeliferil-D-glucurónido 0. Hidrógeno fosfato de diamonio 1 g/l. El objetivo del presente trabajo práctico es la comparación de dos métodos de enumeración de bacterias de importancia sanitaria. se forman 10 grupos de trabajo de 2 personas cada uno. no proporcionando una enumeración precisa.

pero dentro de las Enterobacterias sólo Escherichia coli y algunas especies de Salmonella y Shigella cuentan con ella. 5. Todos deben poseer en su interior una campana de Durham para ver producción de gas. 2. Calcular en forma paralela el NMP/100 mL (AWWA. 9-53.-D-glucurónido. 2002 178 -179) según: NMP/100 mL= nº tubos positivos x 100 / (mL muestra en tubos negativos x mL muestra totales)½.Según los resultados positivos por la aparición de turbidez en los tubos con Caldo Citrato de Koser. y ver el desarrollo de color púrpura en la fase orgánica.2 g/l. que al clivarse libera un producto (4 -umbeliferona) de fluorescencia azul. Dichos tubos serán considerados positivos.1 mL en los de simple concentración. a 37°C. 1994. 4.7 g/l. calcular el NMP de bacterias coliformes de origen no fecal.5%(v/v) de HCl(c). Hidrógeno fosfato di potásico 3 g/l. Laurilsulfato sódico 0. Recuento de bacterias del grupo coliforme según la técnica de NMP 1.Agar Chromocult (Merck. Cloruro sódico 5 g/l. pero simple concentración. Ver esquema de la Figura 1. Mezcla de cromógenos 0. WEF. 6.glucuronidasa. Triptófano 1 g/l.Incubar los tubos 48 hs a 37°C. Incubar 48 hs. Merck.Sembrar 10 mL de la muestra en cada uno de los tubos de doble concentración.Disponer de series de tres tubos con 10 mL cada uno de Caldo Brila -Fluorocult doble concentración y series de tres tubos con 5 mL cada uno del mismo caldo. calcular por ambos métodos el NMP de bacterias coliformes fecales / 100 mL de muestra. a partir de cada tubo con gas. 1998.1 g/l.Seleccionar los tubos que posean gas en el interior de la campana de Durham. Para poder considerar estos tubos positivos para coliformes de origen fecal debe agregarse 1 mL de reactivo de Kovacs (p-dimetilamino benzaldehído 5%(p/v) en alcohol amílico o isoamílico con 2. Con este patrón de tubos positivos. Buscar en la tabla (Figura 2) el NMP de bacterias coliformes totales / 100 mL de muestra. Piruvato sódico 1 g/l.Sembrar con ansa recta. sustrato de la enzima -D. APHA. Los medios con Fluorocult poseen MUG: 4-metilumbeliferil. Existen muchos grupos bacterianos que poseen dicha enzima. Agar -agar 12 g/l. 7. 270): Peptona 3 g/l. 1 mL o 0. 3. Hurst. 1994.Exponer los tubos positivos de Caldo Brila -Fluorocult a la luz ultravioleta. Dihidrógenofosfato potásico 1. Por lo tanto la aparición de fluorescencia y gas lleva a poder inferir la presencia de bacterias coliformes fecales (E. 307) para la prueba de indol en cada tubo. en Caldo Citrato de Koser. . Coli).

según la expresión: UFC/mL = Número de colonias promedio de ambas placas Dilución x volumen del inóculo Obtención. y se calcula el número de UFC/mL de las colonias rojas (Coliformes no fecale s). 3. mientras que las violetas a las fecales. violetas indol positivas (Coliformes fecales) y la suma de ambas (Coliformes totales). El Agar Chromocult identifica coliformes totales (enterobacterias fermentadoras de lactosa) y Escherichia coli a través de dos sustancias cromógenas: Salmon-gal que pone en evidencia la -D-galactosidasa dando colonias de color rojo y X-glucurónido que determina la presencia de la -D glucuronidasa dando colonias azules. Las rojas pertenecen al grupo de las no fecales.Incubar a 37°C durante 48 hs. fecales y no fecales presentes en la muestra. Muestra: Río de la Plata Se realizan diluciones seriadas al décimo de la muestra hasta 10-4.Calcular el número promedio de unidades formadoras de colonias por mL (UFC/mL) de bacterias coliformes totales. coli) 4.Observar y contar las colonias obtenidas. Muestra de agua de pozo del con urbano bonaerense Se siembra la muestra sin diluir en placas de Agar Chromocult.1 mL de muestra en placas de Petri preparadas con Agar Chromocult. Recuento en placa de bacterias del grupo coliforme 1. Las especies que no poseen ninguna de las enzimas se evidencian a través de colonias transparentes. Escherichia coli escinde ambos compuestos dando coloración violeta. 2. Los resultados se resumen en la Tabla 4. B.Efectuar las correcciones por normalización. Las colonias rojas y violetas son características de bacterias coliformes. detalladas en la Figura 1 e informar los resultados del recuento. manejo e interpretación de resultados Recuento en placa de bacterias del grupo coliforme A. El medio tiene también laurilsulfato de sodio para inhibir el desarrollo de Gram positivas y triptófano para realizar la prueba de indol (rec onocimiento de E. Rastrillar el inóculo con espátula de Drigalsky.Inocular por duplicado 0. Se siembran en placas de Agar Chromocult y se calcula el número de UFC/mL de las colonias rojas (Coliformes no fecales). violetas indol .8.

APHA. Medio adecuado para la búsqueda y diferenciación de bacilos entéricos. derivado de la teoría de probabilidades. Discusión de los resultados Una vez realizada la lectura de los resultados para las distintas muestras. 9-52). ya que el método de NMP es un concepto estadístico. WEF.positivas (Coliformes fecales) y la suma de ambas (Coliformes totales). y otros materiales. se dispone de una última clase destinada a la discusión e interpretación de los resultados obtenidos por los distintos grupos de trabajo. WEF. En este caso el intervalo del 95% de confianza se encuentra entre 1 y 13 bacterias coliformes totales/100 mL (AWWA. 1998. Los resultados se resumen en la Tabla 5. según el error de la técnica. Levine EMB Agar. APHA.6 x 105 / 100 mL (Tabla 2: dilución 10 -4 de la muestra original) y su intervalo de 95% de confianza oscila entre 3 y 25 x 105 / 100 mL. para el análisis microbiológico de productos lácteos y alimentos. En este caso. aguas servidas. Para el recuento de coliformes totales.4 y 1. es decir cuando las muestras son lo suficientemente diluidas como para realizar un recuento en placa. Como conclusión general del trabajo. el resultado oscila entre 2. se determina que el recuento de bacterias coliformes totales por mL. no se puede realizar el recuento en placa debido a la baja proporción de bacterias coliformes presentes en la muestra. Es recomendado por la American Public Health Association. Los valores de recuento en placa ( Tabla 4) están dentro de este intervalo. es necesario conocer el origen y posible nivel de contaminación microbiológica de una muestra de agua a analizar. El intervalo de 95% de confianza para el método de NMP es muy amplio (AWWA. Los resultados muestran entonces una mayor precisión en el recuento en placa. obtenido mediante la técnica de NMP corresponde a la mitad con respecto al valor en placa (Tablas 2 y 4). Un recuento tan bajo como 3. eliminando la . para utilizar el método de enumeración de mayor precisión en cada caso. aplicable a la enumeración de microorganismos bajo ciertas condiciones. Para el caso de un agua de poz o. a partir de muestras clínicas. 9-52). Fundamento La fórmula original de este medio de cultivo.2 x 104 UFC/mL.6 bacterias coliformes totales/100 mL sólo se puede estimar por la técnica de NMP. 1998. y por la USP para la realización de los ensayos límite microbiológico. Así por ejemplo para el caso de agua de río. fue modificada por Levine. el NMP calculado es 7.

permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa.4 g de polvo por litro de agua destilada. Calentar a ebullición hasta disolución total. es útil para la orientación y no confirmación de especies bacterianas (ya que numerosas cepas de Citrobacter spp. por lo cual será necesario realizar pruebas bioquímicas.sacarosa e incrementando la concentración de lactosa. y también. confluentes 700603 . Algunas bacterias Gram positivas (cepas de estafilococos.0 Agar 15.0 Eosina 0. Los microorganismos fermentadores de lactosa. enterococos) y levad uras. estriando la superficie. lo que permite una mejor diferenciación de E. rosa púrpura. para la identificación de género y especie. La combinación utilizada de eosina y azul de metileno.065 pH final:7. pueden crecer.0 Fosfato di potásico 2.4 Azul de metileno 0. coli. Es un medio selectivo y diferencial. inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas. originando colonias incoloras y puntiformes.2 Siembra Directa. Resultados Microorganismos Crecimiento Características de las colonias Bueno a excelente Verdosas con brillo metálico y centro negro Escherichia coli ATCC 25922 azulado Klebsiella pneumoniae ATCC Bueno a excelente Mucosas. originan colonias de color azulado negro. adecuado para el crecimiento de enterobacterias. producen colonias con brillo metálico). con brillo metálico. Instrucciones Suspender 37.0 Lactosa 10. Este medio de cultivo. Las colonias producidas por microorganismos no fermentadores de lactosa son incoloras. en aerobiosis. Fórmula (en gramos por litro) Peptona 10. Incubación De 18-24 horas a 35-37 °C.1 ± 0. dejar reposar 5 minutos. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 121°C.

está dada por los indicadores eosina y azul de metileno. pequeñas. aeruginosa ATCC 27853 Bueno a excelente Proteus mirabilis ATCC 43071 Bueno a excelente S. El color púrpura se restaura por agitación. ya que es parte esencial del mismo. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10 -35 ºC.M. Fundamento Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine.B. puntiformes Incoloras. Placas preparadas: color púrpura. Medio preparado: a 2-8 ºC. .M. pequeñas. aureus ATCC 25923 Pobre Enterococcus faecalis ATCC 29212 Pobre Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno a excelente Salmonella typhimurium ATCC Bueno a excelente 14028 Características del medio Incoloras Incoloras Incoloras. para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja.P. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido. Presentación x 100g :Código: B02-104-05 x 500g :Código: B02-104-06 6 x 50 ml: B04-104-84 E.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. ligeramente opalescente con un precipitado floculento disperso. Este medio (también denominado E.A. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa. Agar. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae. éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. y aquellos que son incapaces de hacerlo. puntiformes Incoloras Incoloras Medio preparado: color púrpura con tonos verdosos.

Reposar 5 minutos. para favorecer el desarrollo de clamidosporas. En este medio se obtiene además.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. pequeñas. Como colonias rosadas y puntiformes.4 Azul de metileno pH final: 7. para obtener colonias aisladas. confluentes Incoloras Incoloras.Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp.0 Sacarosa 5. albicans. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. Enterococcus spp. Incubación De 24 a 48 horas a 35-37 °C. la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. .5 Eosina 0. Esterilizar en autoclave a no más de 121°C durante 15 minutos. rosa púrpura. esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.0 Fosfato di potásico 2. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada. puntiformes Incoloras Incoloras 0. Y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda. mientras que las que no lo hacen son incoloras. en aerobiosis.0 Lactosa 5. por estriado a partir de un inóculo poco denso. un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella. mientras que Acinetobacter spp. Crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes.2 ± 0. Resultados Microorganismos Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Proteus mirabilis ATCC 43071 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Shigella flexneri ATCC 12022 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Características del medio: Tipo de Colonia Verdosas con brillo metálico y centro negro azulado Mucosas.065 Instrucciones Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada.0 Agar 13. Enfriar a 45°C y distribuir agitando suavemente. Fórmula (en gramos por litro) Peptona 10. mezclar.2 Siembra En superficie. En profundidad. Presentan un característico brillo metálico. calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos hasta su disolución.

Presentación x 100g :Código: B02-101-05 x 500g :Código: B02-101-06 6 x 50 ml: B04-101-84 .Placas preparadas: color púrpura. La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. Medio preparado: a 2-8 ºC. ya que es parte esencial del mismo. Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido. El color púrpura se restaura por agitación.

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