CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo pueden clasificarse según diferentes criterios, pero los más importantes son aquellos que se basan en: a) Su consistencia b) Su utilización c) Su composición d) Su origen

a) SEGÚN SU ESTADO FÍSICO (CONSISTENCIA):
1) Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración. 2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un agente gelificante. Los más utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una proteína animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y además su uso está muy limitado porque su punto de fusión es bajo (licúa a temperatura ambiente) razón por la que no puede utilizarse para cultivos a 37ºC, que es la tempera óptima de crecimiento para muchos microorganismos. Agar-agar: Es un polímero de azúcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molécula insoluble enagua pero soluble en agua caliente; una solución al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39ºC y no se funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y solidifica una vez fundido alrededor de los 45ºC. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgánicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un microorganismo. Aunqu e el agar es una mezcla de polisacáridos, Araki, en 1937, los dividió en dos grupos: - agarosa, con poco sulfato, libre de ácido pirúvico, y - agaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporción de agarosa a agaropectina en el agar varía según el alga de origen. El agar puede utilizarse para diferentes fines, aunque los más importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar bacteriológico, agares purificados y agarosa, utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que se produce, se utiliza en trabajo microbiológico, por lo que es importante la ausencia de metales tóxicos.

3) Medios semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias

SEGÚN SU UTILIZACIÓN.
1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de b acterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio más conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar común, que resulta de la adición de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc. 2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc ) El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate). 3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias. 4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibidores podrían considerarse como una variante más restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adición de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo de una población determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos. 5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies. La adición de un azúcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los gérmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. También lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemólisis), el SS (que es doblemente diferencial), etc. 6) Medios de identificación: Son los destinados a comprobar alguna cualidad específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de

por diversas razones nos interese mantener. y más raramente de vegetales. 7) Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un microorganismo ya aislado. y por consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas: a) haciendo pases periódicos de placa a placa. son medios utilizados en identificación. etc.1%. El caldo-infusión cerebro-corazón (BHI). cualquier medio al que se le haya añadido un elemento diferencial de un microorganismo. En la práctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los más empleados. 2) Medios sintéticos: Son aquellos que contienen en su composición exclusivamente sustancias químicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas. los medios de cultivo pueden ser clasificados en: 1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados. en la investigación y en la industria. con lo cual se consigue simultáneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de identificación. Se emplean en la obtención de vacunas. b) mediante liofilización de una suspensión bacteriana. y los más empleados se preparan a partir de tejidos animales. El agar Kligler. Actualmente están apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios específicos de identificació n para ciertos microorganismos. el medio de Simmons y en general. el sustrato específico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. Su utilización debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior del medio (generalmente en un tubo). donde la reproductibilidad no podrá ser exacta. 9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clínicas que no pueden sembrarse inmediatamente. y c) congelando las cepas en leche descremada estéril al 0. . Son ejemplos típicos de este grupo los medios de Stuart -Amies. Según las sustancias que entren a formar parte en su composición. resultando un medio de composición perfectamente definida. ATENDIENDO A SU COMPOSICIÓN. Cary-Blair. es un ejemplo típico de estos medios. 8) Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa que. Son ejemplos de esto últimos los medios CPS ID3 o Uriline ID (Biomerieux). Los medios más adecuados para la multiplicación suelen ser líquidos.los microorganismos. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el Laboratorio de Microbiología. Su composición no es exactamente definida. utilizados para identificar los gérmenes urinarios más importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilización de sustratos cromogénicos específicos.

etc. c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factore s de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo. aparte de los virus. pero sí puede añadir factores inhibidores del crecimiento . Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza además para la investigación de los diversos tipos de hemólisis ( . ß ó gamma). Se utiliza para el crecimiento de estreptococos. Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de gérmenes que no presentan exigencias particulares. En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgánico complejo (extracto de levadura. extracto de tejidos. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. Para la preparación del agar sangre se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sódico o un preparado enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. las Chlamydias. DESCRIPCIÓN Y UTILIZACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO MEDIOS DE CULTIVO COMUNES . Rickettsias. No es diferencial. como por ejemplo extracto de levadura. La adición de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que están en el interior de los hematíes. haciéndolo exclusivamente en células vivas con unas características determinadas. Son los más corrientemente utilizados. Ejemplos de este tipo son. b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cualitativa y cuantitativamente. y aunque no vamos a enumerarlos todos. Según su origen: a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de o rigen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce exactamente.Ciertos gérmenes no crecen en ningún medio por muy enriquecido que esté éste. etc.).3) Medios semisintéticos: El gran número de factores de crecimiento exigidos para ciertos gérmenes hace que la fabricación de un medio sintético para estos gérmenes sea imposible o demasiado cara. sí son los más conocidos en un laboratorio de Microbiología.

apareciendo del mismo color que el medio subyacente (naranja). (Cistina Lactosa Electrólito Deficiente) está recomendado para el recuento e identificación presuntiva de los microorganismos de las vías urinarias. El agar chocolate puede convertirse quizás en uno de los medios más enriquecidos si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. denominadas de forma diferente según las casas comerciales (Polivitex.E.bacteriano presentes en el suero. . Su bajo contenido en electrolitos evita la invasión de los cultivos po r Proteus. utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocola te enriquecido al cual se ha añadido una mezcla de tres antibióticos específicos que impedirán el crecimiento del resto de la flora acompañante. Por adición de uno o varios antibióticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos. humana). blanco o azulado. Agar C. que son termolábiles. pues facilitan las reacciones hemolíticas o contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados gérmenes. Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base. pero en él pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. Estas mezclas. Agar S. Isovitalex.La presencia de lactosa en su composición le confiere el carácter de medio diferencial.L.D.: El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales.L. En su composición lleva un azúcar (lactosa) y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferen cial.S. Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el aislamiento e identificación de enterobacterias. Es un medio inhibidor de los gérmenes Gram positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para enterobacterias por su contenido en sales biliares. etc. El medio contiene sales biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y gérmenes Gram positivos. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos y meningococos) y Haemophilus. Un ejemplo clásico es el Thayer-Martin. que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. Por esta razón el agar chocolate contiene hemoglobina. La sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al 5%. Las colonias lactosa positivas aparecerán de color amarillo y las lactosa negativas lo harán con un color verdoso. pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies (caballo.) contienen más de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. Los gérmenes que fermenten la lactosa producen una acidificación del medio que hacen aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes. Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que se destruyan las sustancias inhibidoras. conejo.D. Las colonias lactosa negativas serán incoloras. : El medio C.E. aunque la interpretación sea diferente al anterior medio por la incorporación de otro indicador: el azul de bromo timol.

Neisseria o Estreptococos. porque además de indicarnos el comportamiento de los gérmenes con relación a la lactosa. con la simple visualización d el cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos. El crecimiento de Salmonella es excelente. nos muestra los gérmenes que son capaces de producir ácido sulfhídrico. La identificación solo requiere la adición de un reactivo para confirmar o descartar la especie sospechada. Agar Hektoen: Es un medio más diferencial y menos selectivo que el agar SS. ID3. y será exclusivamente a estas colonias a quienes se hagan las pruebas bioquímicas confirmatorias de esta especie. como Brucella. Otros microorganismos diferentes requieren los sistemas de identificación habituales (API. sacarosa y salicilina) permiten ampliar el poder diferencial de este medio. El agar SS es doblemente diferencial. Caldo tioglicolato con resazurina: Es un medio recomendado para controles de esterilidad. C. una colonia incolora y con un punto negro central es sospechosa de Salmonella. p. obteniéndose colonias más numerosas y voluminosas que en los medios selectivos usuales. pero no es diferencial.Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan nunca la lactosa por lo que este medio es excelente para descartar todas las colonias que no cumplan este requisito. P.La presencia de lactosa y rojo de metilo nos permiten diferenciar las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las que no lo hacen (incoloras).P. que se mani fiesta como un precipitado de color negro en el centro de la colonia. azulo marrón). igual que el SS. A él nos referiremos más ampliamente en el capítulo correspondiente Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de gérmenes exigentes. ej) Granada. anaerobiosy . La inhibición tiene lugar. igual que el de Shigella.S. Permite el cultivo de aerobios. Es un medio muy enriquecido. mirabilisy E. faecalis. Hay que señalar que el vibrión colérico crece bien en este medio. Por esta razón debe utilizarse siempre junto con otro medio menos inhibidor como el Hektoen. que permite la identificación de E. Así. sobre E. Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la realización de los antibiogramas o pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos. La presencia de tres azúcares (lactosa. El agar SS es un medio muy inhibidor que a veces impide incluso el crecimiento de ciertas especies de Salmonella y sobre todo de Shigella. mediante la utilización de un sustrato cromogénico específico de este microorganismo. Este medio es capaz de detectar los gérmenes formadores de SH2. que neutralizan el efecto inhibidor de las sales biliares respecto a ciertos gérmenes de cultivo delicado (Shigella en particular). : Medio cromogénico desarrollado por Biomerieux. coli. Islam o New GBS: Medios utilizados para detección de Estreptococos agalactiae. coli y en menor medida sobre Proteus y Citrobacter. Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. esencialmente. Las cualidades del agar Hektoen se deben a su riqueza en peptonas y azúcares.

Su elevado contenido en cloruro sódico permite la inhibición de la mayoría de los otros gérmenes. al aumentar. a la vez que los diferencia del resto. pues impide el crecimiento de Gram positivos y diferencia muy bien a E. Agar Gardnerella: Agar con sangre humana más una mezcla de antibióticos que permiten la observación de colonias betahemolíticas características de Gardnerella vaginalis Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de Campylobacter intestinales creciendo a 42º C en microaerofilia. Agar Kligler : Medio específico para pruebas de identificación de enterobacterias. ya que estegérmen crece bien en medios salados y fermenta el manitol (colonias amarillas). Agar Chapman: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos. Medio de Loeffler: Es un medio específico para el cultivo de Corynebacterium difteriae. Tiene un bajo potencial redox que. Agar Levine ó EMB (Eosina azul de metileno): Se utiliza para aislamiento de enterobacterias. cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo metálico característico. Caldo selenito-F: Se utiliza exclusivamente para enriquecimiento de Salmonellas. . Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el cultivo de anaerobios. Aunque de él hablaremos con más detenimiento en el capítulo de pruebas de identificación bacteriana. Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa positivos. Agar King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas. coli. inhibiendo Gram positivos y la mayoría de enterobacterias.microaerófilos. se manifiesta por un color rosa del medio. Agar Cetrimida. El segundo pone además de manifiesto la pigmentación fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio en diferencial: así se puede identificar presuntivamente el Staphylococcus aureus. Es un medio diferencial e inhibidor a la vez. investigar la formación de gas y comprobar si el microorganismo puede producir sulfato ferroso a partir del tiosulfato sódico. Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sucrosa (DCLS): Similar al agar SS. podemos ir adelantando que se trata de un medio diferencial que permite conocer el comportamiento del microorganismo ante dos azúcares (glucosa y lactosa).

Incubación En aerobiosis. Resultados a-Agar nutritivo: Microorganismos P. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano.0 Agar pH final: 7. para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos.Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract) : Se utiliza para el aislamiento de bacterias del género Legionella Löwenstein-Jensen: Este medio se utiliza para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis. mirabilis ATCC 43071 Crecimiento Bueno-excelente . Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos. aguas y otros materiales de importancia sanitaria. El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes.3 ± 0.0 Cloruro de sodio 8. Fundamento Por las características de sus componentes es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. Contiene verde malaquita para inhibir parcialmente el crecimiento de otras bacterias. El huevo se utiliza como sustancia de enriquecimiento.2 15.0 Instrucciones Suspender 31 g de polvo por litro de agua destilada. La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano. Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2 minutos hasta su disolución. Mezclar y dejar reposar 5 minutos.0 Extracto de carne 3. Siembra En superficie o por la técnica de pour plate. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona 5. a 35-37 ºC durante 24 horas. Nutritivo Agar Medio de cultivo utilizado para propósitos generales. Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos. según el uso a que se destine.

ya que en estos últimos se basan muchos de los principios del aislamiento. para lo cual debemos estar preparados para aislar.  Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación del medio de cultivo en la práctica microbiológica. aureus ATCC 25923 B. OBJETIVOS:  Conocer la clasificación de los medios de cultivo. pneumoniae ATCC 6305 S. cultivar e identificar a la misma. Medio preparado: a 2-8 ºC. faecalis ATCC 29212 P. razón por la cual es difícil aislarlas.E. pyogenes ATCC 19615 S. A menudo nuestro interés es caracterizar una especie bacteriana. Si bien el aislamiento es un paso crucial en este camino. cereus ATCC 10876 E. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. . pneumoniae ATCC 49619 Crecimiento Abundante Abundante Abundante Hemólisis Beta Alfa Alfa Características del medio Medio preparado: ámbar claro a medio ligeramente opalescente. coli ATCC 25922 S.  Adquirir práctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir de sus componentes individuales. Presentación x 100g :Código: B02-122-05 x 500g :Código: B02-122-06 6 x 50 ml: B04-122-84 MEDIOS DE CULTIVO Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos. comenzaremos examinando los medios de cultivo. aeruginosa ATCC 27853 Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente B-Agar nutritivo suplementado con 5% de sangre de carnero: Microorganismos S.

es cualquier medio que proporcione sustancias nutritivas que permitan el desarrollo y reproducción de microorganismos. anaerobios facultativos y microaerófilos. Es decir.2. mesófilos y Termófilos. El conocimiento de las necesidades nutritivas y físicas de los microorganismos es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado. según los cuales se los clasifica en autótrofos. se los clasifica en psicrófilos. quimiotrofos (litotrofos u organotrofos) y fototrofos. INTRODUCCIÓN: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes. Rango de pH: en general el rango óptimo de pH para la mayoría de las bacterias oscila entre 6. La diversidad metabólica de los microorganismos es enorme. Tipo respiratorio: aerobios. factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. por ello. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN SU ORIGEN Los medios de cultivos pueden clasificarse en: . Las características de los microorganismos a tener en cuenta al momento de preparar un medio de cultivo adecuado para su desarrollo en el laboratorio son: Tipo trófico: se refiere a los requerimientos de carbono y energía. anaerobios. Agar nutritivo Temperatura óptima de crecimiento: según el rango de temperatura al cual el Microorganismo presenta su mayor crecimiento. la variedad de medios de cultivo también lo es. Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan. no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos.6 y 7. heterótrofos. Reconocer la necesidad de evitar la contaminación tanto de los medios de cultivo como de los demás elementos utilizados en el laboratorio de microbiología.

por ejemplo. Diferenciales I. suero.Naturales: Son aquellos que existen como tales en la naturaleza. II. . agua. II. leche. como el Caldo carne y agar carne.b. Artificiales: Están compuestos de substancias que son manipuladas por el hombre en el laboratorio. Para esto últ imo se busca establecer condiciones desfavorables de pH. tierra.b Medios selectivos: Estos medios han sido modificados de alguna manera para que. Tales como sangre. como por ejemplo el caldo nutritivo.c. Enriquecidos II. Un medio del cual se conoce exactamente su composición química se denomina sintético o químicamente definido. sangre. yema de huevo etc. etc. Se citan como ejemplos el agar sangre y el agar chocolate. puede ser una simple solución de sales con una fuente de carbono o puede contener muchos compuestos orgánicos. en una flora mixta. Un medio no sintético o complejo e s aquel del que se desconoce su composición química exacta. con el agregado de elementos nutritivos elegidos según las necesidades. Selectivos II. permitan el desarrollo de determinadas especies y al mismo tiempo inhiban la proliferación de la flora acompañante. nutrientes y de temperatura. Se utilizan para el cultivo de microorganismos exigentes en cuanto a sus requerimientos nutricionales. se trata básicamente de extractos de tejidos vegetales. cuya concentración no se conoce con exactitud y que proveen todos los nutrientes necesarios. Especiales II. papa. animales o microbianos. A los medios artificiales a su vez se los puede dividir en sintéticos y complejos.a. o por el agregado de inhibidores.a Medios enriquecidos o mejorados: se obtienen a partir de un medio común. huevos. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS ARTIFICIALES COMPLEJOS SEGÚN SU FINALIDAD I. Comunes Medios Artificiales Complejos II. II. Medios comunes: Permiten el desarrollo de una gran variedad de microorganismos. albúmina. Medios especiales: se los clasifica según su finalidad.

b.diferenciales resultan muy útiles para el aislamiento de un microorganismo separándolo de la flora acompañante. Ejemplos de sustancias inhibidoras son algunos colorantes (cristal violeta. Se logra así la multiplicación de los microorganismos que se desea identificar. en el que el pH de 5. CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN BUEN MEDIO DE CULTIVO Como ya se ha señalado.b. II. algún elemento presente en él permite diferenciarlos. Se ponen en evidencia las colonias de los microorganismos que se desea aislar y a su vez se diferencian de aquellas que pudieran haber desarrollado provenientes de la flora acompañante. coli son oscuras y con brillo metálico. Un ejemplo de este t ipo es el agar con eosina azul de metileno que diferencia Escherichia coli de Enterobacter aerogenes. sobre la base de la diferencia de color de sus respectivas colonias.6 favorece el desarrollo de hongos al mismo tiempo frena el d esarrollo de la mayoría de las bacterias. Estos medio selectivo. en cambio las colonias de E. por el agregado de agentes que inhiben el crecimiento. verde brillante). Cuando se cultivan ambas especies sobre agar nutritivo. . hasta un número suficiente tal que sea posible su aislamiento en medios selectivos apropiados. la provisión de elementos nutritivos en concentración adecuada. Aunque dos o más tipos de microorganismos pueden crecer en este medio.1 Medios selectivos para enriquecimiento: Son m edios en los que los microorganismos crecen en libre competencia.El agar Saburaud es un ejemplo de medio selectivo.c Medios diferenciales: permiten el desarrollo de muchas de las especies que coexisten en una mezcla que se desea aislar. II. Estas diferencias se basan en alguna propiedad bioquímica que unos poseen y otros no. no llegándose a inhibir totalmente el crecimiento del resto de microorganismos. aerogenes son rosadas con un centro azul y rara vez presentan brillo. II.2 Medios selectivos para aislamiento: son medios selectivos sólidos. por ejemplo un indicador. viéndose favorecidos aquellos para los cuales las condiciones de desarrollo son las más apropiadas. los antibióticos. En su mayor parte los medios diferenciales son asimismo selectivos. se utilizan para sembrar directamente con la muestra incógnita o a partir del medio selectivo para enriquecimiento. el alcohol fenil etílico y la azida de sodio. Sin embargo en agar con azul de metileno las colonias de E. forman colonias de color blanco grisáceo.

En el laboratorio.depende del conocimiento que se tenga de las condiciones del desarrollo en el hábitat natural. En cuanto a la esterilización. este procedimiento garantiza la destrucción de todos los microorganismos no deseados que se encuentran presentes durante la preparación del medio de cultivo. El componente dominante en el agar es un polisacárido. Si se requiere sangre u otros componentes inestables. CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Los elementos citados a continuación. cantidad necesaria de sales y agua. Con la excepción de algunos microorganismos marinos. se relaciona directamente con el pH. como antibióticos y compuestos fácilmente oxidables al calor. en cuyo caso se los denominacal dos. Un buen medio de cultivo es aquel que le provee a los microorganismos los nutrientes indispensables en la concentración adecuada. los medios de cultivo pueden present arse en forma líquida. Agar. . En cuanto a los inhibidores. aunque pueden no ser los únicos e incluso alguno de ellos puede estar ausente de la preparación. 15 minutos). la fluidez y la presión osmótica que se le quiera brindar a los microorganismos. que sea estéril y que no contenga sustancias inhibidoras. Si se desea visualizar movilidad se usa agar blando se le agrega agar al 3 %. El agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. La cantidad de sales y agua que se agregue a un medio de cultivo. Si los componentes del medio son estables al calor se los lleva al autoclave (121 ºC. o en forma sólida si se le agrega agar al caldo. cabe aclarar que un compuesto puede actuar como inhibidor para algunos microorganismos y no para otros. Libre de inhibidores del crecimiento. se los esteriliza por separado por otros procedimientos y se lo agrega al medio que ha sido esterilizado cuando se haya enfriado a 50 ºC. se solubiliza en agua a ebullición (funde hacia los 98°C) y al enfriarse forma un gel inodoro e insípido (se gelifica alrededor de los 42°C). que tenga la consistencia y el pH adecuados. son los más frecuentemente usados en la preparación de los medios de cultivo. Para preparar un medio sólido se le agrega agar al 12-18 %. Agua destilada o desionizada. En función de la consistencia se puede clasificar a los medio el líquidos y sólidos. dependiendo de su grado de pureza. por lo que tiene la ventaja de ser sólido a la temperatura de incubación. Existe en rama o en polvo. al que acompañan algunas impurezas y que se obtiene de ciertas algas marinas. el agar no es empleado como nutriente.

. plasma o suero sanguíneo son frecuentemente añadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos patógenos. polipéptidos y aminoácidos. por tanto. tioglicolato y otros son agentes reductores que se añaden a Los medios de cultivo para crear condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios. sino también con sustancias que neutralizan inhibidores del crecimiento de algunas bacterias. En el caso del extracto de carne en polvo o pasta. etc. La sangre no puede ser esterilizada y debe. antibióticos. Las peptonas son muy ricas en péptidos y aminoácidos. Por ejemplo.Extractos. clasificación de los medios de cultivo). sales biliares. pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales. Sistemas amortiguadores. Indicadores de pH. previenen una desviación del pH. Fluidos Corporales. de levadura. y posteriormente concentrado hasta la forma final de pasta o polvo. Algunos componentes son incorporados al medio de cultivo Para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano.) son extraídos con agua y calor. nitógeno y carbono. Estos preparados deshidratados son frecuentemente empleados en la confección de medios de cultivo. Agentes selectivos. etc. Los microorganismos más comunes son neutrófilos (el pH óptimo para su crecimiento está próximo a la neutralidad). peptonas. mientras que el extracto de levaduras provee vitaminas del grupo B. Agentes reductores. La adición de determinadas sustancias al medio de cultivo puede Convertirlo en selectivo (ver más adelante. gelatina. telurito potásico. Peptonas. hígado. ciertos órganos o tejidos animales o vegetales (por ejemplo carne. Sangre completa. semillas. Proveen proteosas. de malta.. Ejemplos: extracto de carne. Los fluidos corporales no solamente contribuyen con factores de crecimiento. azida sódica. cristal violeta. minerales y vitaminas. carne. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos nitrogenados y sales minerales que carecen de identidad química definida. Cisteína. etc. o sustancias como las peptonas.).base se añaden a menudo a los medios de cultivo Con objeto de detectar variaciones del pH. caseína. Para su preparación. Indicadores ácido. se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja. sangre desfibrinada. etc. ser obtenida en condiciones asépticas directamente de un animal sano. provee sustancias nitrogenadas. y sales como fosfatos bisódicos o bipotásicos.

drogas correspondientes a cada fórmula . PREPARACIÓN En la actualidad. Primero se agrega agua destilada o desionizada a un recipiente. Al finalizar la preparación y una vez que ésta se enfríe.pipetas de 10 ml .tubos de ensayo con sus tapones .gradillas .Erlenmeyer . Generalmente figura en primer término el compuesto que actúa como tampón. siguiendo las instrucciones del fabricante y luego esterilizarlo. Es conveniente añadir todos los ingredientes en el orden indicado y disolverlos de a uno antes de agregar el siguiente. la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados. normalmente bajo la forma de liofilizados que es preciso re hidratar. la preparación de un medio de cultivo comienza por hacer un estudio de la fórmula que constituye una receta que deberá respetarse estrictamente. Caldo nutritivo (Caldo carne) .autoclave A. En caso de ser necesario se ajusta con CO3Na2 (1N) o ClH (1N). ACTIVIDADES I.tiras de pH . actúan como agentes selectivos frente a determinados microorganismos. que además provee fósforo y potasio. En general. se debe verificar que el pH sea el adecuado.a la concentración adecuada.balanza . luego se van incorporando todos los ingredientes de la lista en el orden en el que se encuentran. En caso que el medio de cultivo debamos hacerlo nosotros. Preparación de medios de cultivo Materiales: . la preparación de un medio de cultivo se reduce simplemente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en agua destilada. como puede ser el PO4H2K.

......2.... Agar nutritivo Fórmula: Agar. 20 g Caldo nutritivo. 1000 ml Preparación: 1) Colocar 1000 ml de caldo en un recipiente...... se tapan y esterilizan..... Fórmula: Peptona.. 2) Agregar el agar calentando a baño maría agitando hasta disolución total. 6) Colocar 10 ml del caldo en tubos de ensayo y volúmenes apropiados en frascos. 5) Esterilizar... 3) Ajustar pH hasta 7.. 3) Llevar a ebullición agitando periódicamente con una varilla de vidrio............... .....Es el medio complejo más común para el cultivo de microorganismos.... 2) Disolver los ingredientes de a uno y por orden..s.2 Preparación: 1) Colocar un volumen medido de agua destilada en un recipiente. 5 g Extracto de carne..... cuando están aún líquidos.. . colocar capuchón de papel y esterilizar en autoclave 15 minutos a 1 atm. 5) Dejar enfriar y medir pH. 3 g Agua c......... B. 4) Completar el volumen hasta 1000 ml........... Se prepararán tubos con agar inclinado o en pico de flauta (slant)............. la esterilización se lleva a cabo una vez que se ha envasado el caldo agarizado....p.... 7) Tapar.. Cuando se prepara agar nutritivo no es necesario usar caldo estéril...... . Una vez afuera del autoclave.... ..... 7...... 1000 ml pH..... para ello se colocan 5 ml del agar en los tubos de ensayo... se apoyan sobre la mesada con un cierto ángulo hasta que solidifiquen... Si hace falta corregir con HONa 1M................... 4) Llevar 10 ml a tubos de ensayo....

El agua natural constituye un reservorio de microorganismos autóctonos (Pseudomonas. es decir la probable existencia de agentes causantes de enfermedades como cólera. giardiasis. su detección directa en aguas . luego se lo vuelca asépticamente en caja de Petri estéril. En este caso. 2004. teniendo la precaución de flamear previamente la boca del tubo o recipiente a la llama del mechero. No debe olvidarse que recibe y arrastra partículas cargadas de bacterias. Su presencia indica el potencial patogénico en aguas. una vez que los tubos fueron retirados del autoclave se dejan solidificar en posición vertical. 1-8). Los abastecimientos de agua se consideran en todos los países como inversiones básicas de interés general. de tal modo que en cercanías de las grandes poblaciones incluso el agua de lluvia es portadora de un elevado número de microorganismos (Guinea. Micrococcus) o exógenos (Escherichia coli. El análisis microbiológico por recuento de bacterias indicadoras de contaminación fecal en aguas es de suma importancia al evaluar el estado sanitario del sistema en estudio. hepatitis. fiebre tifoidea. La contaminación es un proceso de alteración o de modificación más o menos importante de los equilibrios físicos. Dicho grupo se caracteriza por estar formado por microorganismos que habitan el tracto gastrointestinal de los vertebrados. 927 -941). Enterococcus). Medio de cultivo caldo brilla Introducción Las disponibilidades en agua constituyen un factor fundamental para el desarrollo económico y la salud pública.Se prepararán también tubos con agar para punción. 1979. etc. amebiasis. dentro de la familia Enterobacteriaceae (Madigan. Para ello se puede utilizar medio de cultivo recién esterilizado y todavía líquido. Se deja enfriar el agar hasta 45 ºC. Las bacterias que se utilizan normalmente forman parte de un grupo llamado coliforme. Por último se prepararán cajas de Petri con agar nutritivo. Debido a que la concentración de dichos agentes habitualmente es baja. Bacillus. en el sentido de que posibilitan actividades humanas e industriales directamente productivas que influyen en la tasa de crecimiento económico. Dicha contaminación puede tener dos orígenes: Químico o microbiológico. químicos o biológicos del agua que son responsables de su calidad y la hacen inadecuada para sus numerosos usos y aplicaciones. Se deja solidificar en posición horizontal. polio. o bien medio solidificado y fundido a ebullición en Baño María.

Con la primera sólo se obtiene una estimación de la población de microorganismos contenidos en una muestra. mediante la realización de recuentos paralelos de aguas de diferentes grados de contaminación. disolver los componentes hasta obtener una solución límpida. Por el contrario en poblaciones bajas (menos de 10 células por mL) es más eficaz la técnica de NMP porque permite la utilización de muestras de mayor tamaño. Caldo Citrato de Koser: Cloruro de sodio 5 g/l. Cuando la población es muy elevada. Verde brillante 0. 1994.1 g/l. Medios de cultivo Caldo Brila Fluorocult (Merck.2 g/l. Hidrógeno fosfato de diamonio 1 g/l. que son de fácil detección y cultivo en laboratorio y presentan un tiempo de supervivencia que excede al de los patógenos en ese ambiente (Vullo.es complicada.0133 g/l. en medios selectivos para coliformes. L -triptofano 1 g/l. Las muestras deben tomarse en forma estéril. 275) : Peptona 10 g/l. el recuento en placa supera en precisión a este método. 137 -141). entre otras. Como dichas clases cuentan con alrededor de 20 estudiantes. Dentro de los métodos de recuento de bacterias se encuentran dos que son los más ampliamente utilizados: la técnica de Número Más Probable (NMP) y la técnica de recuento en placa. no proporcionando una enumeración precisa. a las bacterias coliformes. Metodología Tiempo estimado de realización y distribución de los grupos de trabajo La experiencia fue diseñada para tres clases de trabajos prácticos de tres horas de duración cada una pertenecientes a la materia de grado Microbiología General e Industrial de la Licenciatura en Ciencias Químicas de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UBA. agregar 2 g/l de ácido cítrico y se lleva a pH=6 con hidróxido de sodio 1N. 4-metilumbeliferil-D-glucurónido 0. . utilizando frascos adecuados. por la cual se utiliza. perteneciente al conurbano bonaerense. Sulfato de magnesio 0. Hidrógeno fosfato di potásico 1 g/l. 2000. El objetivo del presente trabajo práctico es la comparación de dos métodos de enumeración de bacterias de importancia sanitaria. utilizando las técnicas de NMP y recuento en placa. Muestras de agua Se analizan 250 mL de muestras de agua de diferentes grados de contaminación: agua del Río de la Plata y agua de pozo. Lactosa 10 g/l. Bilis de buey desecada 20 g/l. se forman 10 grupos de trabajo de 2 personas cada uno.

que al clivarse libera un producto (4 -umbeliferona) de fluorescencia azul. en Caldo Citrato de Koser. 1994. Ver esquema de la Figura 1. Incubar 48 hs. y ver el desarrollo de color púrpura en la fase orgánica.Seleccionar los tubos que posean gas en el interior de la campana de Durham. Con este patrón de tubos positivos. 7. Dichos tubos serán considerados positivos.Sembrar 10 mL de la muestra en cada uno de los tubos de doble concentración. sustrato de la enzima -D. APHA. Buscar en la tabla (Figura 2) el NMP de bacterias coliformes totales / 100 mL de muestra.Sembrar con ansa recta.5%(v/v) de HCl(c). Hurst. 270): Peptona 3 g/l. Piruvato sódico 1 g/l. calcular por ambos métodos el NMP de bacterias coliformes fecales / 100 mL de muestra.Exponer los tubos positivos de Caldo Brila -Fluorocult a la luz ultravioleta. Dihidrógenofosfato potásico 1. WEF. Mezcla de cromógenos 0. Para poder considerar estos tubos positivos para coliformes de origen fecal debe agregarse 1 mL de reactivo de Kovacs (p-dimetilamino benzaldehído 5%(p/v) en alcohol amílico o isoamílico con 2. 6.7 g/l. Recuento de bacterias del grupo coliforme según la técnica de NMP 1. 2. .1 g/l. Todos deben poseer en su interior una campana de Durham para ver producción de gas. Merck. a partir de cada tubo con gas. 5. 9-53.Según los resultados positivos por la aparición de turbidez en los tubos con Caldo Citrato de Koser.Disponer de series de tres tubos con 10 mL cada uno de Caldo Brila -Fluorocult doble concentración y series de tres tubos con 5 mL cada uno del mismo caldo. calcular el NMP de bacterias coliformes de origen no fecal. 4. 1 mL o 0. pero dentro de las Enterobacterias sólo Escherichia coli y algunas especies de Salmonella y Shigella cuentan con ella. Triptófano 1 g/l. 1998.-D-glucurónido. Laurilsulfato sódico 0. Calcular en forma paralela el NMP/100 mL (AWWA.Incubar los tubos 48 hs a 37°C. a 37°C. Agar -agar 12 g/l. Coli). 307) para la prueba de indol en cada tubo. 2002 178 -179) según: NMP/100 mL= nº tubos positivos x 100 / (mL muestra en tubos negativos x mL muestra totales)½.glucuronidasa.1 mL en los de simple concentración. Los medios con Fluorocult poseen MUG: 4-metilumbeliferil. Cloruro sódico 5 g/l.Agar Chromocult (Merck.2 g/l. Existen muchos grupos bacterianos que poseen dicha enzima. 1994. pero simple concentración. Hidrógeno fosfato di potásico 3 g/l. 3. Por lo tanto la aparición de fluorescencia y gas lleva a poder inferir la presencia de bacterias coliformes fecales (E.

El medio tiene también laurilsulfato de sodio para inhibir el desarrollo de Gram positivas y triptófano para realizar la prueba de indol (rec onocimiento de E. El Agar Chromocult identifica coliformes totales (enterobacterias fermentadoras de lactosa) y Escherichia coli a través de dos sustancias cromógenas: Salmon-gal que pone en evidencia la -D-galactosidasa dando colonias de color rojo y X-glucurónido que determina la presencia de la -D glucuronidasa dando colonias azules. 2. Escherichia coli escinde ambos compuestos dando coloración violeta. 3. Recuento en placa de bacterias del grupo coliforme 1. según la expresión: UFC/mL = Número de colonias promedio de ambas placas Dilución x volumen del inóculo Obtención.1 mL de muestra en placas de Petri preparadas con Agar Chromocult. manejo e interpretación de resultados Recuento en placa de bacterias del grupo coliforme A. Muestra: Río de la Plata Se realizan diluciones seriadas al décimo de la muestra hasta 10-4. Las especies que no poseen ninguna de las enzimas se evidencian a través de colonias transparentes.8.Observar y contar las colonias obtenidas. fecales y no fecales presentes en la muestra. Los resultados se resumen en la Tabla 4. B. violetas indol . mientras que las violetas a las fecales. Se siembran en placas de Agar Chromocult y se calcula el número de UFC/mL de las colonias rojas (Coliformes no fecales).Incubar a 37°C durante 48 hs. Las colonias rojas y violetas son características de bacterias coliformes.Inocular por duplicado 0. coli) 4. y se calcula el número de UFC/mL de las colonias rojas (Coliformes no fecale s). violetas indol positivas (Coliformes fecales) y la suma de ambas (Coliformes totales). Las rojas pertenecen al grupo de las no fecales. Muestra de agua de pozo del con urbano bonaerense Se siembra la muestra sin diluir en placas de Agar Chromocult. detalladas en la Figura 1 e informar los resultados del recuento. Rastrillar el inóculo con espátula de Drigalsky.Efectuar las correcciones por normalización.Calcular el número promedio de unidades formadoras de colonias por mL (UFC/mL) de bacterias coliformes totales.

6 bacterias coliformes totales/100 mL sólo se puede estimar por la técnica de NMP. eliminando la .6 x 105 / 100 mL (Tabla 2: dilución 10 -4 de la muestra original) y su intervalo de 95% de confianza oscila entre 3 y 25 x 105 / 100 mL. En este caso. Los valores de recuento en placa ( Tabla 4) están dentro de este intervalo. ya que el método de NMP es un concepto estadístico. aguas servidas.4 y 1. En este caso el intervalo del 95% de confianza se encuentra entre 1 y 13 bacterias coliformes totales/100 mL (AWWA. Para el caso de un agua de poz o. Los resultados se resumen en la Tabla 5. El intervalo de 95% de confianza para el método de NMP es muy amplio (AWWA. para utilizar el método de enumeración de mayor precisión en cada caso. WEF. es decir cuando las muestras son lo suficientemente diluidas como para realizar un recuento en placa. aplicable a la enumeración de microorganismos bajo ciertas condiciones. Levine EMB Agar. y otros materiales. se determina que el recuento de bacterias coliformes totales por mL. Para el recuento de coliformes totales. APHA. según el error de la técnica. APHA. Así por ejemplo para el caso de agua de río. 1998. se dispone de una última clase destinada a la discusión e interpretación de los resultados obtenidos por los distintos grupos de trabajo. Un recuento tan bajo como 3. el NMP calculado es 7. Como conclusión general del trabajo. WEF. fue modificada por Levine. Medio adecuado para la búsqueda y diferenciación de bacilos entéricos. 9-52). a partir de muestras clínicas.positivas (Coliformes fecales) y la suma de ambas (Coliformes totales). para el análisis microbiológico de productos lácteos y alimentos. es necesario conocer el origen y posible nivel de contaminación microbiológica de una muestra de agua a analizar. no se puede realizar el recuento en placa debido a la baja proporción de bacterias coliformes presentes en la muestra. Fundamento La fórmula original de este medio de cultivo. derivado de la teoría de probabilidades. 9-52). Es recomendado por la American Public Health Association. el resultado oscila entre 2. Los resultados muestran entonces una mayor precisión en el recuento en placa.2 x 104 UFC/mL. y por la USP para la realización de los ensayos límite microbiológico. Discusión de los resultados Una vez realizada la lectura de los resultados para las distintas muestras. obtenido mediante la técnica de NMP corresponde a la mitad con respecto al valor en placa (Tablas 2 y 4). 1998.

sacarosa e incrementando la concentración de lactosa. Las colonias producidas por microorganismos no fermentadores de lactosa son incoloras.1 ± 0.0 Fosfato di potásico 2. lo que permite una mejor diferenciación de E. pueden crecer. Fórmula (en gramos por litro) Peptona 10. Incubación De 18-24 horas a 35-37 °C. rosa púrpura. producen colonias con brillo metálico). y también. permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. adecuado para el crecimiento de enterobacterias. estriando la superficie. con brillo metálico. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 121°C. confluentes 700603 . en aerobiosis. Resultados Microorganismos Crecimiento Características de las colonias Bueno a excelente Verdosas con brillo metálico y centro negro Escherichia coli ATCC 25922 azulado Klebsiella pneumoniae ATCC Bueno a excelente Mucosas. coli.0 Agar 15. Es un medio selectivo y diferencial.2 Siembra Directa. por lo cual será necesario realizar pruebas bioquímicas.4 Azul de metileno 0. inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas. para la identificación de género y especie.0 Lactosa 10. es útil para la orientación y no confirmación de especies bacterianas (ya que numerosas cepas de Citrobacter spp. Este medio de cultivo. enterococos) y levad uras. originando colonias incoloras y puntiformes. Instrucciones Suspender 37.4 g de polvo por litro de agua destilada. dejar reposar 5 minutos. Los microorganismos fermentadores de lactosa. originan colonias de color azulado negro. Algunas bacterias Gram positivas (cepas de estafilococos. Calentar a ebullición hasta disolución total.0 Eosina 0. La combinación utilizada de eosina y azul de metileno.065 pH final:7.

Fundamento Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine. puntiformes Incoloras Incoloras Medio preparado: color púrpura con tonos verdosos. Presentación x 100g :Código: B02-104-05 x 500g :Código: B02-104-06 6 x 50 ml: B04-104-84 E.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae. aureus ATCC 25923 Pobre Enterococcus faecalis ATCC 29212 Pobre Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno a excelente Salmonella typhimurium ATCC Bueno a excelente 14028 Características del medio Incoloras Incoloras Incoloras. puntiformes Incoloras. Medio preparado: a 2-8 ºC. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido. pequeñas. ya que es parte esencial del mismo.P.B. pequeñas. ligeramente opalescente con un precipitado floculento disperso. La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. Placas preparadas: color púrpura. para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas.M. . y aquellos que son incapaces de hacerlo.A. está dada por los indicadores eosina y azul de metileno. Agar. aeruginosa ATCC 27853 Bueno a excelente Proteus mirabilis ATCC 43071 Bueno a excelente S. El color púrpura se restaura por agitación. Este medio (también denominado E.M.

Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp.0 Agar 13. rosa púrpura. calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos hasta su disolución. albicans. pequeñas. Fórmula (en gramos por litro) Peptona 10. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada. mientras que Acinetobacter spp.065 Instrucciones Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada.4 Azul de metileno pH final: 7.2 ± 0.0 Sacarosa 5. Crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. mezclar. Esterilizar en autoclave a no más de 121°C durante 15 minutos. la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C.5 Eosina 0. para favorecer el desarrollo de clamidosporas. .0 Lactosa 5. Reposar 5 minutos. Enterococcus spp. para obtener colonias aisladas. En este medio se obtiene además. puntiformes Incoloras Incoloras 0. Enfriar a 45°C y distribuir agitando suavemente. confluentes Incoloras Incoloras.0 Fosfato di potásico 2. Y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda. Este medio permite el crecimiento de Candida spp.2 Siembra En superficie. en aerobiosis. Presentan un característico brillo metálico. Como colonias rosadas y puntiformes. En profundidad. por estriado a partir de un inóculo poco denso. Resultados Microorganismos Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Proteus mirabilis ATCC 43071 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Shigella flexneri ATCC 12022 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Características del medio: Tipo de Colonia Verdosas con brillo metálico y centro negro azulado Mucosas. un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella. mientras que las que no lo hacen son incoloras. Incubación De 24 a 48 horas a 35-37 °C. esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.

Presentación x 100g :Código: B02-101-05 x 500g :Código: B02-101-06 6 x 50 ml: B04-101-84 . Medio preparado: a 2-8 ºC. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido. ya que es parte esencial del mismo. Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja.Placas preparadas: color púrpura. El color púrpura se restaura por agitación.

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