CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo pueden clasificarse según diferentes criterios, pero los más importantes son aquellos que se basan en: a) Su consistencia b) Su utilización c) Su composición d) Su origen

a) SEGÚN SU ESTADO FÍSICO (CONSISTENCIA):
1) Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración. 2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un agente gelificante. Los más utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una proteína animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y además su uso está muy limitado porque su punto de fusión es bajo (licúa a temperatura ambiente) razón por la que no puede utilizarse para cultivos a 37ºC, que es la tempera óptima de crecimiento para muchos microorganismos. Agar-agar: Es un polímero de azúcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molécula insoluble enagua pero soluble en agua caliente; una solución al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39ºC y no se funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y solidifica una vez fundido alrededor de los 45ºC. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgánicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un microorganismo. Aunqu e el agar es una mezcla de polisacáridos, Araki, en 1937, los dividió en dos grupos: - agarosa, con poco sulfato, libre de ácido pirúvico, y - agaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporción de agarosa a agaropectina en el agar varía según el alga de origen. El agar puede utilizarse para diferentes fines, aunque los más importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar bacteriológico, agares purificados y agarosa, utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que se produce, se utiliza en trabajo microbiológico, por lo que es importante la ausencia de metales tóxicos.

3) Medios semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias

SEGÚN SU UTILIZACIÓN.
1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de b acterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio más conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar común, que resulta de la adición de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc. 2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc ) El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate). 3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias. 4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibidores podrían considerarse como una variante más restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adición de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo de una población determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos. 5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies. La adición de un azúcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los gérmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. También lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemólisis), el SS (que es doblemente diferencial), etc. 6) Medios de identificación: Son los destinados a comprobar alguna cualidad específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de

y los más empleados se preparan a partir de tejidos animales. Su utilización debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior del medio (generalmente en un tubo). Se emplean en la obtención de vacunas. 9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clínicas que no pueden sembrarse inmediatamente. el sustrato específico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. El agar Kligler. por diversas razones nos interese mantener. 8) Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa que. en la investigación y en la industria. cualquier medio al que se le haya añadido un elemento diferencial de un microorganismo. El caldo-infusión cerebro-corazón (BHI). En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas: a) haciendo pases periódicos de placa a placa. Según las sustancias que entren a formar parte en su composición. . 2) Medios sintéticos: Son aquellos que contienen en su composición exclusivamente sustancias químicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas. es un ejemplo típico de estos medios. b) mediante liofilización de una suspensión bacteriana. En la práctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los más empleados. utilizados para identificar los gérmenes urinarios más importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilización de sustratos cromogénicos específicos. el medio de Simmons y en general.los microorganismos. Son ejemplos típicos de este grupo los medios de Stuart -Amies. Actualmente están apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios específicos de identificació n para ciertos microorganismos. y c) congelando las cepas en leche descremada estéril al 0. Su composición no es exactamente definida. Los medios más adecuados para la multiplicación suelen ser líquidos. etc. ATENDIENDO A SU COMPOSICIÓN. Son ejemplos de esto últimos los medios CPS ID3 o Uriline ID (Biomerieux). son medios utilizados en identificación. los medios de cultivo pueden ser clasificados en: 1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales.1%. 7) Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un microorganismo ya aislado. y más raramente de vegetales. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el Laboratorio de Microbiología. con lo cual se consigue simultáneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de identificación. Cary-Blair. donde la reproductibilidad no podrá ser exacta. resultando un medio de composición perfectamente definida. y por consiguiente no es rigurosamente constante.

Son los más corrientemente utilizados. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. etc.Ciertos gérmenes no crecen en ningún medio por muy enriquecido que esté éste. b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cualitativa y cuantitativamente. las Chlamydias. La adición de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que están en el interior de los hematíes. Rickettsias. En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgánico complejo (extracto de levadura. haciéndolo exclusivamente en células vivas con unas características determinadas. sí son los más conocidos en un laboratorio de Microbiología. aparte de los virus.). Ejemplos de este tipo son. Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza además para la investigación de los diversos tipos de hemólisis ( . No es diferencial. etc. pero sí puede añadir factores inhibidores del crecimiento . c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factore s de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo. Para la preparación del agar sangre se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sódico o un preparado enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. extracto de tejidos. y aunque no vamos a enumerarlos todos. como por ejemplo extracto de levadura. Se utiliza para el crecimiento de estreptococos. Según su origen: a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de o rigen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce exactamente. DESCRIPCIÓN Y UTILIZACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO MEDIOS DE CULTIVO COMUNES . Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de gérmenes que no presentan exigencias particulares.3) Medios semisintéticos: El gran número de factores de crecimiento exigidos para ciertos gérmenes hace que la fabricación de un medio sintético para estos gérmenes sea imposible o demasiado cara. ß ó gamma).

Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el aislamiento e identificación de enterobacterias.E. pues facilitan las reacciones hemolíticas o contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados gérmenes. Es un medio inhibidor de los gérmenes Gram positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para enterobacterias por su contenido en sales biliares.S. Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que se destruyan las sustancias inhibidoras. Agar S. aunque la interpretación sea diferente al anterior medio por la incorporación de otro indicador: el azul de bromo timol. Las colonias lactosa negativas serán incoloras. pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies (caballo. pero en él pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. El medio contiene sales biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y gérmenes Gram positivos.La presencia de lactosa en su composición le confiere el carácter de medio diferencial. La sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al 5%. etc. blanco o azulado. El agar chocolate puede convertirse quizás en uno de los medios más enriquecidos si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. Por esta razón el agar chocolate contiene hemoglobina.L. En su composición lleva un azúcar (lactosa) y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferen cial.D. utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocola te enriquecido al cual se ha añadido una mezcla de tres antibióticos específicos que impedirán el crecimiento del resto de la flora acompañante. humana). Un ejemplo clásico es el Thayer-Martin. (Cistina Lactosa Electrólito Deficiente) está recomendado para el recuento e identificación presuntiva de los microorganismos de las vías urinarias. apareciendo del mismo color que el medio subyacente (naranja). Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base.: El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales. : El medio C. . que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. Los gérmenes que fermenten la lactosa producen una acidificación del medio que hacen aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes.E.bacteriano presentes en el suero. denominadas de forma diferente según las casas comerciales (Polivitex. Agar C. Su bajo contenido en electrolitos evita la invasión de los cultivos po r Proteus.L. conejo. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos y meningococos) y Haemophilus. Por adición de uno o varios antibióticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos. Estas mezclas.D. Las colonias lactosa positivas aparecerán de color amarillo y las lactosa negativas lo harán con un color verdoso.) contienen más de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. que son termolábiles. Isovitalex.

A él nos referiremos más ampliamente en el capítulo correspondiente Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de gérmenes exigentes. Las cualidades del agar Hektoen se deben a su riqueza en peptonas y azúcares. y será exclusivamente a estas colonias a quienes se hagan las pruebas bioquímicas confirmatorias de esta especie. igual que el SS. El crecimiento de Salmonella es excelente. Islam o New GBS: Medios utilizados para detección de Estreptococos agalactiae. La inhibición tiene lugar. Este medio es capaz de detectar los gérmenes formadores de SH2. p. ej) Granada. igual que el de Shigella.Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan nunca la lactosa por lo que este medio es excelente para descartar todas las colonias que no cumplan este requisito.P. coli. Hay que señalar que el vibrión colérico crece bien en este medio. pero no es diferencial. sobre E. que permite la identificación de E. porque además de indicarnos el comportamiento de los gérmenes con relación a la lactosa. esencialmente. con la simple visualización d el cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos. Caldo tioglicolato con resazurina: Es un medio recomendado para controles de esterilidad. : Medio cromogénico desarrollado por Biomerieux. que neutralizan el efecto inhibidor de las sales biliares respecto a ciertos gérmenes de cultivo delicado (Shigella en particular). Otros microorganismos diferentes requieren los sistemas de identificación habituales (API. coli y en menor medida sobre Proteus y Citrobacter. Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. Por esta razón debe utilizarse siempre junto con otro medio menos inhibidor como el Hektoen. como Brucella. una colonia incolora y con un punto negro central es sospechosa de Salmonella.La presencia de lactosa y rojo de metilo nos permiten diferenciar las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las que no lo hacen (incoloras). La presencia de tres azúcares (lactosa. faecalis. que se mani fiesta como un precipitado de color negro en el centro de la colonia. mediante la utilización de un sustrato cromogénico específico de este microorganismo. sacarosa y salicilina) permiten ampliar el poder diferencial de este medio. ID3.S. C. azulo marrón). Así. El agar SS es doblemente diferencial. obteniéndose colonias más numerosas y voluminosas que en los medios selectivos usuales. mirabilisy E. Agar Hektoen: Es un medio más diferencial y menos selectivo que el agar SS. anaerobiosy . El agar SS es un medio muy inhibidor que a veces impide incluso el crecimiento de ciertas especies de Salmonella y sobre todo de Shigella. Es un medio muy enriquecido. La identificación solo requiere la adición de un reactivo para confirmar o descartar la especie sospechada. Permite el cultivo de aerobios. Neisseria o Estreptococos. nos muestra los gérmenes que son capaces de producir ácido sulfhídrico. Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la realización de los antibiogramas o pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos. P.

Agar Gardnerella: Agar con sangre humana más una mezcla de antibióticos que permiten la observación de colonias betahemolíticas características de Gardnerella vaginalis Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de Campylobacter intestinales creciendo a 42º C en microaerofilia. Agar Kligler : Medio específico para pruebas de identificación de enterobacterias. cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo metálico característico. . podemos ir adelantando que se trata de un medio diferencial que permite conocer el comportamiento del microorganismo ante dos azúcares (glucosa y lactosa). investigar la formación de gas y comprobar si el microorganismo puede producir sulfato ferroso a partir del tiosulfato sódico. Tiene un bajo potencial redox que. a la vez que los diferencia del resto. Agar Levine ó EMB (Eosina azul de metileno): Se utiliza para aislamiento de enterobacterias. Agar King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas. Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa positivos. Agar Chapman: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos. coli. se manifiesta por un color rosa del medio. Agar Cetrimida. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio en diferencial: así se puede identificar presuntivamente el Staphylococcus aureus. Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sucrosa (DCLS): Similar al agar SS. ya que estegérmen crece bien en medios salados y fermenta el manitol (colonias amarillas).microaerófilos. Caldo selenito-F: Se utiliza exclusivamente para enriquecimiento de Salmonellas. Aunque de él hablaremos con más detenimiento en el capítulo de pruebas de identificación bacteriana. Es un medio diferencial e inhibidor a la vez. inhibiendo Gram positivos y la mayoría de enterobacterias. al aumentar. El segundo pone además de manifiesto la pigmentación fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV. Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el cultivo de anaerobios. pues impide el crecimiento de Gram positivos y diferencia muy bien a E. Medio de Loeffler: Es un medio específico para el cultivo de Corynebacterium difteriae. Su elevado contenido en cloruro sódico permite la inhibición de la mayoría de los otros gérmenes.

Fundamento Por las características de sus componentes es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. según el uso a que se destine.0 Extracto de carne 3. Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos.0 Instrucciones Suspender 31 g de polvo por litro de agua destilada. para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano. El huevo se utiliza como sustancia de enriquecimiento.2 15.0 Agar pH final: 7. Nutritivo Agar Medio de cultivo utilizado para propósitos generales. Siembra En superficie o por la técnica de pour plate.3 ± 0.Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract) : Se utiliza para el aislamiento de bacterias del género Legionella Löwenstein-Jensen: Este medio se utiliza para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis. Incubación En aerobiosis. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano.0 Cloruro de sodio 8. mirabilis ATCC 43071 Crecimiento Bueno-excelente . El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona 5. Resultados a-Agar nutritivo: Microorganismos P. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. Contiene verde malaquita para inhibir parcialmente el crecimiento de otras bacterias. aguas y otros materiales de importancia sanitaria. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2 minutos hasta su disolución. a 35-37 ºC durante 24 horas.

pneumoniae ATCC 49619 Crecimiento Abundante Abundante Abundante Hemólisis Beta Alfa Alfa Características del medio Medio preparado: ámbar claro a medio ligeramente opalescente.E. comenzaremos examinando los medios de cultivo. para lo cual debemos estar preparados para aislar. pyogenes ATCC 19615 S. cultivar e identificar a la misma. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. Medio preparado: a 2-8 ºC. .  Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación del medio de cultivo en la práctica microbiológica. aeruginosa ATCC 27853 Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente Bueno-excelente B-Agar nutritivo suplementado con 5% de sangre de carnero: Microorganismos S. aureus ATCC 25923 B.  Adquirir práctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir de sus componentes individuales. A menudo nuestro interés es caracterizar una especie bacteriana. OBJETIVOS:  Conocer la clasificación de los medios de cultivo. Si bien el aislamiento es un paso crucial en este camino. razón por la cual es difícil aislarlas. coli ATCC 25922 S. pneumoniae ATCC 6305 S. ya que en estos últimos se basan muchos de los principios del aislamiento. faecalis ATCC 29212 P. Presentación x 100g :Código: B02-122-05 x 500g :Código: B02-122-06 6 x 50 ml: B04-122-84 MEDIOS DE CULTIVO Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos. cereus ATCC 10876 E.

se los clasifica en psicrófilos. factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. mesófilos y Termófilos. no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos. Es decir. Agar nutritivo Temperatura óptima de crecimiento: según el rango de temperatura al cual el Microorganismo presenta su mayor crecimiento. La diversidad metabólica de los microorganismos es enorme. heterótrofos.6 y 7. Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan. Las características de los microorganismos a tener en cuenta al momento de preparar un medio de cultivo adecuado para su desarrollo en el laboratorio son: Tipo trófico: se refiere a los requerimientos de carbono y energía. Reconocer la necesidad de evitar la contaminación tanto de los medios de cultivo como de los demás elementos utilizados en el laboratorio de microbiología. quimiotrofos (litotrofos u organotrofos) y fototrofos. Rango de pH: en general el rango óptimo de pH para la mayoría de las bacterias oscila entre 6. El conocimiento de las necesidades nutritivas y físicas de los microorganismos es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado. por ello. la variedad de medios de cultivo también lo es. anaerobios. anaerobios facultativos y microaerófilos. Tipo respiratorio: aerobios. INTRODUCCIÓN: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes.2. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN SU ORIGEN Los medios de cultivos pueden clasificarse en: . es cualquier medio que proporcione sustancias nutritivas que permitan el desarrollo y reproducción de microorganismos. según los cuales se los clasifica en autótrofos.

Naturales: Son aquellos que existen como tales en la naturaleza. leche. Un medio no sintético o complejo e s aquel del que se desconoce su composición química exacta. Tales como sangre. como por ejemplo el caldo nutritivo. Comunes Medios Artificiales Complejos II. Un medio del cual se conoce exactamente su composición química se denomina sintético o químicamente definido.a Medios enriquecidos o mejorados: se obtienen a partir de un medio común. II. por ejemplo.a.b Medios selectivos: Estos medios han sido modificados de alguna manera para que. Enriquecidos II. huevos. o por el agregado de inhibidores. Medios comunes: Permiten el desarrollo de una gran variedad de microorganismos. permitan el desarrollo de determinadas especies y al mismo tiempo inhiban la proliferación de la flora acompañante. sangre. cuya concentración no se conoce con exactitud y que proveen todos los nutrientes necesarios. Se citan como ejemplos el agar sangre y el agar chocolate. Selectivos II. en una flora mixta. como el Caldo carne y agar carne. se trata básicamente de extractos de tejidos vegetales. puede ser una simple solución de sales con una fuente de carbono o puede contener muchos compuestos orgánicos.b. nutrientes y de temperatura. Medios especiales: se los clasifica según su finalidad. Artificiales: Están compuestos de substancias que son manipuladas por el hombre en el laboratorio. Especiales II. A los medios artificiales a su vez se los puede dividir en sintéticos y complejos. II. II. papa. etc. Diferenciales I.c. suero. albúmina. Se utilizan para el cultivo de microorganismos exigentes en cuanto a sus requerimientos nutricionales. animales o microbianos. . yema de huevo etc. agua. con el agregado de elementos nutritivos elegidos según las necesidades. tierra. Para esto últ imo se busca establecer condiciones desfavorables de pH. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS ARTIFICIALES COMPLEJOS SEGÚN SU FINALIDAD I.

Estos medio selectivo. Se ponen en evidencia las colonias de los microorganismos que se desea aislar y a su vez se diferencian de aquellas que pudieran haber desarrollado provenientes de la flora acompañante. coli son oscuras y con brillo metálico. algún elemento presente en él permite diferenciarlos. aerogenes son rosadas con un centro azul y rara vez presentan brillo. Aunque dos o más tipos de microorganismos pueden crecer en este medio. Sin embargo en agar con azul de metileno las colonias de E. Cuando se cultivan ambas especies sobre agar nutritivo.diferenciales resultan muy útiles para el aislamiento de un microorganismo separándolo de la flora acompañante. los antibióticos.El agar Saburaud es un ejemplo de medio selectivo.b. se utilizan para sembrar directamente con la muestra incógnita o a partir del medio selectivo para enriquecimiento. En su mayor parte los medios diferenciales son asimismo selectivos. CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN BUEN MEDIO DE CULTIVO Como ya se ha señalado. por ejemplo un indicador. Ejemplos de sustancias inhibidoras son algunos colorantes (cristal violeta.2 Medios selectivos para aislamiento: son medios selectivos sólidos. viéndose favorecidos aquellos para los cuales las condiciones de desarrollo son las más apropiadas. Un ejemplo de este t ipo es el agar con eosina azul de metileno que diferencia Escherichia coli de Enterobacter aerogenes. sobre la base de la diferencia de color de sus respectivas colonias.c Medios diferenciales: permiten el desarrollo de muchas de las especies que coexisten en una mezcla que se desea aislar. Estas diferencias se basan en alguna propiedad bioquímica que unos poseen y otros no. II. por el agregado de agentes que inhiben el crecimiento. el alcohol fenil etílico y la azida de sodio. verde brillante). II.1 Medios selectivos para enriquecimiento: Son m edios en los que los microorganismos crecen en libre competencia. .6 favorece el desarrollo de hongos al mismo tiempo frena el d esarrollo de la mayoría de las bacterias. hasta un número suficiente tal que sea posible su aislamiento en medios selectivos apropiados. en el que el pH de 5. no llegándose a inhibir totalmente el crecimiento del resto de microorganismos.b. la provisión de elementos nutritivos en concentración adecuada. en cambio las colonias de E. forman colonias de color blanco grisáceo. Se logra así la multiplicación de los microorganismos que se desea identificar. II.

que sea estéril y que no contenga sustancias inhibidoras. son los más frecuentemente usados en la preparación de los medios de cultivo. se los esteriliza por separado por otros procedimientos y se lo agrega al medio que ha sido esterilizado cuando se haya enfriado a 50 ºC. o en forma sólida si se le agrega agar al caldo. El componente dominante en el agar es un polisacárido. se relaciona directamente con el pH. En cuanto a la esterilización. En el laboratorio. cantidad necesaria de sales y agua.depende del conocimiento que se tenga de las condiciones del desarrollo en el hábitat natural. Si se desea visualizar movilidad se usa agar blando se le agrega agar al 3 %. Existe en rama o en polvo. Si los componentes del medio son estables al calor se los lleva al autoclave (121 ºC. . En función de la consistencia se puede clasificar a los medio el líquidos y sólidos. La cantidad de sales y agua que se agregue a un medio de cultivo. Con la excepción de algunos microorganismos marinos. CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Los elementos citados a continuación. Para preparar un medio sólido se le agrega agar al 12-18 %. Libre de inhibidores del crecimiento. Si se requiere sangre u otros componentes inestables. los medios de cultivo pueden present arse en forma líquida. la fluidez y la presión osmótica que se le quiera brindar a los microorganismos. aunque pueden no ser los únicos e incluso alguno de ellos puede estar ausente de la preparación. por lo que tiene la ventaja de ser sólido a la temperatura de incubación. el agar no es empleado como nutriente. El agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. Agar. en cuyo caso se los denominacal dos. dependiendo de su grado de pureza. al que acompañan algunas impurezas y que se obtiene de ciertas algas marinas. se solubiliza en agua a ebullición (funde hacia los 98°C) y al enfriarse forma un gel inodoro e insípido (se gelifica alrededor de los 42°C). Agua destilada o desionizada. este procedimiento garantiza la destrucción de todos los microorganismos no deseados que se encuentran presentes durante la preparación del medio de cultivo. 15 minutos). En cuanto a los inhibidores. que tenga la consistencia y el pH adecuados. Un buen medio de cultivo es aquel que le provee a los microorganismos los nutrientes indispensables en la concentración adecuada. cabe aclarar que un compuesto puede actuar como inhibidor para algunos microorganismos y no para otros. como antibióticos y compuestos fácilmente oxidables al calor.

etc. Fluidos Corporales. Algunos componentes son incorporados al medio de cultivo Para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano. Sangre completa. pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales. telurito potásico. por tanto. cristal violeta. antibióticos. se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja. gelatina.. . y sales como fosfatos bisódicos o bipotásicos. Cisteína. Peptonas. provee sustancias nitrogenadas. La adición de determinadas sustancias al medio de cultivo puede Convertirlo en selectivo (ver más adelante. clasificación de los medios de cultivo). tioglicolato y otros son agentes reductores que se añaden a Los medios de cultivo para crear condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios. previenen una desviación del pH. caseína.) son extraídos con agua y calor. de malta.Extractos. o sustancias como las peptonas. de levadura. etc. sino también con sustancias que neutralizan inhibidores del crecimiento de algunas bacterias. semillas. sales biliares. y posteriormente concentrado hasta la forma final de pasta o polvo. polipéptidos y aminoácidos. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos nitrogenados y sales minerales que carecen de identidad química definida. nitógeno y carbono. etc. Indicadores ácido. Agentes selectivos. Para su preparación. Agentes reductores. Ejemplos: extracto de carne. Indicadores de pH. Estos preparados deshidratados son frecuentemente empleados en la confección de medios de cultivo. hígado. Proveen proteosas. etc. sangre desfibrinada. minerales y vitaminas. La sangre no puede ser esterilizada y debe. mientras que el extracto de levaduras provee vitaminas del grupo B. plasma o suero sanguíneo son frecuentemente añadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos patógenos. Los fluidos corporales no solamente contribuyen con factores de crecimiento. Las peptonas son muy ricas en péptidos y aminoácidos. peptonas.base se añaden a menudo a los medios de cultivo Con objeto de detectar variaciones del pH. ser obtenida en condiciones asépticas directamente de un animal sano. Los microorganismos más comunes son neutrófilos (el pH óptimo para su crecimiento está próximo a la neutralidad). En el caso del extracto de carne en polvo o pasta.). ciertos órganos o tejidos animales o vegetales (por ejemplo carne. carne. azida sódica. Por ejemplo. Sistemas amortiguadores.

siguiendo las instrucciones del fabricante y luego esterilizarlo. la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados.drogas correspondientes a cada fórmula . como puede ser el PO4H2K. Es conveniente añadir todos los ingredientes en el orden indicado y disolverlos de a uno antes de agregar el siguiente.a la concentración adecuada. PREPARACIÓN En la actualidad. En general. la preparación de un medio de cultivo comienza por hacer un estudio de la fórmula que constituye una receta que deberá respetarse estrictamente.Erlenmeyer .gradillas .tiras de pH . Al finalizar la preparación y una vez que ésta se enfríe. En caso de ser necesario se ajusta con CO3Na2 (1N) o ClH (1N). Primero se agrega agua destilada o desionizada a un recipiente. Preparación de medios de cultivo Materiales: .autoclave A. actúan como agentes selectivos frente a determinados microorganismos. En caso que el medio de cultivo debamos hacerlo nosotros. ACTIVIDADES I. se debe verificar que el pH sea el adecuado. Caldo nutritivo (Caldo carne) .pipetas de 10 ml . Generalmente figura en primer término el compuesto que actúa como tampón. normalmente bajo la forma de liofilizados que es preciso re hidratar.balanza . la preparación de un medio de cultivo se reduce simplemente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en agua destilada. luego se van incorporando todos los ingredientes de la lista en el orden en el que se encuentran. que además provee fósforo y potasio.tubos de ensayo con sus tapones .

......... Si hace falta corregir con HONa 1M. se apoyan sobre la mesada con un cierto ángulo hasta que solidifiquen.2....... ...... 5) Esterilizar.. Se prepararán tubos con agar inclinado o en pico de flauta (slant)... 1000 ml pH.. 5 g Extracto de carne.. 2) Agregar el agar calentando a baño maría agitando hasta disolución total...p.... Fórmula: Peptona... ...........Es el medio complejo más común para el cultivo de microorganismos...... 7.. 4) Completar el volumen hasta 1000 ml... Una vez afuera del autoclave. 7) Tapar.......... B.. para ello se colocan 5 ml del agar en los tubos de ensayo.......... 5) Dejar enfriar y medir pH...... cuando están aún líquidos.... .... 3) Ajustar pH hasta 7.......... 3) Llevar a ebullición agitando periódicamente con una varilla de vidrio............s....... ....... 3 g Agua c.......... Cuando se prepara agar nutritivo no es necesario usar caldo estéril... la esterilización se lleva a cabo una vez que se ha envasado el caldo agarizado.... 2) Disolver los ingredientes de a uno y por orden.. 20 g Caldo nutritivo. Agar nutritivo Fórmula: Agar. se tapan y esterilizan.2 Preparación: 1) Colocar un volumen medido de agua destilada en un recipiente.. 6) Colocar 10 ml del caldo en tubos de ensayo y volúmenes apropiados en frascos.. 1000 ml Preparación: 1) Colocar 1000 ml de caldo en un recipiente... colocar capuchón de papel y esterilizar en autoclave 15 minutos a 1 atm.. 4) Llevar 10 ml a tubos de ensayo.

hepatitis. Dicha contaminación puede tener dos orígenes: Químico o microbiológico. El análisis microbiológico por recuento de bacterias indicadoras de contaminación fecal en aguas es de suma importancia al evaluar el estado sanitario del sistema en estudio. Se deja solidificar en posición horizontal. teniendo la precaución de flamear previamente la boca del tubo o recipiente a la llama del mechero. 927 -941). de tal modo que en cercanías de las grandes poblaciones incluso el agua de lluvia es portadora de un elevado número de microorganismos (Guinea. su detección directa en aguas . Bacillus. es decir la probable existencia de agentes causantes de enfermedades como cólera. etc. Se deja enfriar el agar hasta 45 ºC. una vez que los tubos fueron retirados del autoclave se dejan solidificar en posición vertical. La contaminación es un proceso de alteración o de modificación más o menos importante de los equilibrios físicos. luego se lo vuelca asépticamente en caja de Petri estéril. Por último se prepararán cajas de Petri con agar nutritivo. o bien medio solidificado y fundido a ebullición en Baño María. polio. amebiasis. Dicho grupo se caracteriza por estar formado por microorganismos que habitan el tracto gastrointestinal de los vertebrados. Los abastecimientos de agua se consideran en todos los países como inversiones básicas de interés general. 1979. químicos o biológicos del agua que son responsables de su calidad y la hacen inadecuada para sus numerosos usos y aplicaciones. Las bacterias que se utilizan normalmente forman parte de un grupo llamado coliforme. Enterococcus). dentro de la familia Enterobacteriaceae (Madigan. Para ello se puede utilizar medio de cultivo recién esterilizado y todavía líquido. 2004. giardiasis. No debe olvidarse que recibe y arrastra partículas cargadas de bacterias. Debido a que la concentración de dichos agentes habitualmente es baja. En este caso. Micrococcus) o exógenos (Escherichia coli.Se prepararán también tubos con agar para punción. fiebre tifoidea. Medio de cultivo caldo brilla Introducción Las disponibilidades en agua constituyen un factor fundamental para el desarrollo económico y la salud pública. 1-8). en el sentido de que posibilitan actividades humanas e industriales directamente productivas que influyen en la tasa de crecimiento económico. Su presencia indica el potencial patogénico en aguas. El agua natural constituye un reservorio de microorganismos autóctonos (Pseudomonas.

se forman 10 grupos de trabajo de 2 personas cada uno.1 g/l. Bilis de buey desecada 20 g/l. que son de fácil detección y cultivo en laboratorio y presentan un tiempo de supervivencia que excede al de los patógenos en ese ambiente (Vullo. Hidrógeno fosfato di potásico 1 g/l. Como dichas clases cuentan con alrededor de 20 estudiantes. disolver los componentes hasta obtener una solución límpida. Caldo Citrato de Koser: Cloruro de sodio 5 g/l. perteneciente al conurbano bonaerense. . El objetivo del presente trabajo práctico es la comparación de dos métodos de enumeración de bacterias de importancia sanitaria. Sulfato de magnesio 0. Las muestras deben tomarse en forma estéril. por la cual se utiliza. 275) : Peptona 10 g/l. Medios de cultivo Caldo Brila Fluorocult (Merck. Verde brillante 0. Dentro de los métodos de recuento de bacterias se encuentran dos que son los más ampliamente utilizados: la técnica de Número Más Probable (NMP) y la técnica de recuento en placa. Lactosa 10 g/l. entre otras. utilizando las técnicas de NMP y recuento en placa. mediante la realización de recuentos paralelos de aguas de diferentes grados de contaminación. Muestras de agua Se analizan 250 mL de muestras de agua de diferentes grados de contaminación: agua del Río de la Plata y agua de pozo.0133 g/l. el recuento en placa supera en precisión a este método. 2000. no proporcionando una enumeración precisa. Cuando la población es muy elevada. en medios selectivos para coliformes. Por el contrario en poblaciones bajas (menos de 10 células por mL) es más eficaz la técnica de NMP porque permite la utilización de muestras de mayor tamaño. L -triptofano 1 g/l. Hidrógeno fosfato de diamonio 1 g/l. utilizando frascos adecuados.es complicada.2 g/l. 137 -141). a las bacterias coliformes. 1994. Con la primera sólo se obtiene una estimación de la población de microorganismos contenidos en una muestra. agregar 2 g/l de ácido cítrico y se lleva a pH=6 con hidróxido de sodio 1N. Metodología Tiempo estimado de realización y distribución de los grupos de trabajo La experiencia fue diseñada para tres clases de trabajos prácticos de tres horas de duración cada una pertenecientes a la materia de grado Microbiología General e Industrial de la Licenciatura en Ciencias Químicas de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UBA. 4-metilumbeliferil-D-glucurónido 0.

WEF. Hurst. Todos deben poseer en su interior una campana de Durham para ver producción de gas. 4. Calcular en forma paralela el NMP/100 mL (AWWA. Dichos tubos serán considerados positivos. Agar -agar 12 g/l. a 37°C. Con este patrón de tubos positivos. Mezcla de cromógenos 0. Por lo tanto la aparición de fluorescencia y gas lleva a poder inferir la presencia de bacterias coliformes fecales (E.5%(v/v) de HCl(c). 1994. 5. 6. Triptófano 1 g/l. Merck. 9-53. que al clivarse libera un producto (4 -umbeliferona) de fluorescencia azul. en Caldo Citrato de Koser.Sembrar con ansa recta. Incubar 48 hs.-D-glucurónido.glucuronidasa. y ver el desarrollo de color púrpura en la fase orgánica.Según los resultados positivos por la aparición de turbidez en los tubos con Caldo Citrato de Koser.Incubar los tubos 48 hs a 37°C. 1994. 1 mL o 0. a partir de cada tubo con gas. Laurilsulfato sódico 0. Buscar en la tabla (Figura 2) el NMP de bacterias coliformes totales / 100 mL de muestra. calcular por ambos métodos el NMP de bacterias coliformes fecales / 100 mL de muestra. 2002 178 -179) según: NMP/100 mL= nº tubos positivos x 100 / (mL muestra en tubos negativos x mL muestra totales)½. Los medios con Fluorocult poseen MUG: 4-metilumbeliferil. Para poder considerar estos tubos positivos para coliformes de origen fecal debe agregarse 1 mL de reactivo de Kovacs (p-dimetilamino benzaldehído 5%(p/v) en alcohol amílico o isoamílico con 2. . 307) para la prueba de indol en cada tubo.7 g/l. APHA.Seleccionar los tubos que posean gas en el interior de la campana de Durham.1 g/l. Cloruro sódico 5 g/l. pero simple concentración.Agar Chromocult (Merck. Dihidrógenofosfato potásico 1. Piruvato sódico 1 g/l. Coli). Recuento de bacterias del grupo coliforme según la técnica de NMP 1.Disponer de series de tres tubos con 10 mL cada uno de Caldo Brila -Fluorocult doble concentración y series de tres tubos con 5 mL cada uno del mismo caldo.2 g/l. Hidrógeno fosfato di potásico 3 g/l. sustrato de la enzima -D. pero dentro de las Enterobacterias sólo Escherichia coli y algunas especies de Salmonella y Shigella cuentan con ella.Sembrar 10 mL de la muestra en cada uno de los tubos de doble concentración. 270): Peptona 3 g/l.Exponer los tubos positivos de Caldo Brila -Fluorocult a la luz ultravioleta. calcular el NMP de bacterias coliformes de origen no fecal. Existen muchos grupos bacterianos que poseen dicha enzima. Ver esquema de la Figura 1. 3.1 mL en los de simple concentración. 7. 1998. 2.

Los resultados se resumen en la Tabla 4. coli) 4. Muestra de agua de pozo del con urbano bonaerense Se siembra la muestra sin diluir en placas de Agar Chromocult.8. fecales y no fecales presentes en la muestra. Recuento en placa de bacterias del grupo coliforme 1. Las rojas pertenecen al grupo de las no fecales.Calcular el número promedio de unidades formadoras de colonias por mL (UFC/mL) de bacterias coliformes totales. Escherichia coli escinde ambos compuestos dando coloración violeta. manejo e interpretación de resultados Recuento en placa de bacterias del grupo coliforme A. El medio tiene también laurilsulfato de sodio para inhibir el desarrollo de Gram positivas y triptófano para realizar la prueba de indol (rec onocimiento de E. Se siembran en placas de Agar Chromocult y se calcula el número de UFC/mL de las colonias rojas (Coliformes no fecales).Incubar a 37°C durante 48 hs.Inocular por duplicado 0.1 mL de muestra en placas de Petri preparadas con Agar Chromocult. El Agar Chromocult identifica coliformes totales (enterobacterias fermentadoras de lactosa) y Escherichia coli a través de dos sustancias cromógenas: Salmon-gal que pone en evidencia la -D-galactosidasa dando colonias de color rojo y X-glucurónido que determina la presencia de la -D glucuronidasa dando colonias azules.Observar y contar las colonias obtenidas. Las colonias rojas y violetas son características de bacterias coliformes. Muestra: Río de la Plata Se realizan diluciones seriadas al décimo de la muestra hasta 10-4. 2.Efectuar las correcciones por normalización. B. Rastrillar el inóculo con espátula de Drigalsky. Las especies que no poseen ninguna de las enzimas se evidencian a través de colonias transparentes. violetas indol positivas (Coliformes fecales) y la suma de ambas (Coliformes totales). y se calcula el número de UFC/mL de las colonias rojas (Coliformes no fecale s). 3. según la expresión: UFC/mL = Número de colonias promedio de ambas placas Dilución x volumen del inóculo Obtención. detalladas en la Figura 1 e informar los resultados del recuento. mientras que las violetas a las fecales. violetas indol .

6 x 105 / 100 mL (Tabla 2: dilución 10 -4 de la muestra original) y su intervalo de 95% de confianza oscila entre 3 y 25 x 105 / 100 mL. ya que el método de NMP es un concepto estadístico. se dispone de una última clase destinada a la discusión e interpretación de los resultados obtenidos por los distintos grupos de trabajo. según el error de la técnica. Como conclusión general del trabajo. Levine EMB Agar. y por la USP para la realización de los ensayos límite microbiológico. es necesario conocer el origen y posible nivel de contaminación microbiológica de una muestra de agua a analizar. Así por ejemplo para el caso de agua de río. es decir cuando las muestras son lo suficientemente diluidas como para realizar un recuento en placa. Fundamento La fórmula original de este medio de cultivo. Para el caso de un agua de poz o. En este caso. Es recomendado por la American Public Health Association. fue modificada por Levine. 9-52). Para el recuento de coliformes totales.4 y 1. derivado de la teoría de probabilidades. 9-52).2 x 104 UFC/mL. el resultado oscila entre 2. aguas servidas. En este caso el intervalo del 95% de confianza se encuentra entre 1 y 13 bacterias coliformes totales/100 mL (AWWA. APHA.positivas (Coliformes fecales) y la suma de ambas (Coliformes totales). Un recuento tan bajo como 3. WEF. para utilizar el método de enumeración de mayor precisión en cada caso. Discusión de los resultados Una vez realizada la lectura de los resultados para las distintas muestras. Los resultados muestran entonces una mayor precisión en el recuento en placa. WEF. APHA. a partir de muestras clínicas. 1998. aplicable a la enumeración de microorganismos bajo ciertas condiciones. obtenido mediante la técnica de NMP corresponde a la mitad con respecto al valor en placa (Tablas 2 y 4). Los valores de recuento en placa ( Tabla 4) están dentro de este intervalo. el NMP calculado es 7. se determina que el recuento de bacterias coliformes totales por mL. no se puede realizar el recuento en placa debido a la baja proporción de bacterias coliformes presentes en la muestra. y otros materiales. Los resultados se resumen en la Tabla 5. Medio adecuado para la búsqueda y diferenciación de bacilos entéricos. El intervalo de 95% de confianza para el método de NMP es muy amplio (AWWA.6 bacterias coliformes totales/100 mL sólo se puede estimar por la técnica de NMP. para el análisis microbiológico de productos lácteos y alimentos. eliminando la . 1998.

Los microorganismos fermentadores de lactosa. inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas. producen colonias con brillo metálico). y también. Incubación De 18-24 horas a 35-37 °C. por lo cual será necesario realizar pruebas bioquímicas.0 Lactosa 10.0 Eosina 0. coli. originando colonias incoloras y puntiformes. Algunas bacterias Gram positivas (cepas de estafilococos. enterococos) y levad uras. Es un medio selectivo y diferencial.1 ± 0. lo que permite una mejor diferenciación de E.4 Azul de metileno 0. La combinación utilizada de eosina y azul de metileno. originan colonias de color azulado negro. confluentes 700603 . Las colonias producidas por microorganismos no fermentadores de lactosa son incoloras. Resultados Microorganismos Crecimiento Características de las colonias Bueno a excelente Verdosas con brillo metálico y centro negro Escherichia coli ATCC 25922 azulado Klebsiella pneumoniae ATCC Bueno a excelente Mucosas. Instrucciones Suspender 37.0 Agar 15. en aerobiosis.sacarosa e incrementando la concentración de lactosa.065 pH final:7. Este medio de cultivo. con brillo metálico. Calentar a ebullición hasta disolución total. para la identificación de género y especie. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 121°C.2 Siembra Directa. estriando la superficie. permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. Fórmula (en gramos por litro) Peptona 10.4 g de polvo por litro de agua destilada. dejar reposar 5 minutos. adecuado para el crecimiento de enterobacterias. rosa púrpura.0 Fosfato di potásico 2. pueden crecer. es útil para la orientación y no confirmación de especies bacterianas (ya que numerosas cepas de Citrobacter spp.

M. Este medio (también denominado E. Medio preparado: a 2-8 ºC. pequeñas. éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. El color púrpura se restaura por agitación. ligeramente opalescente con un precipitado floculento disperso. pequeñas.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.M. puntiformes Incoloras Incoloras Medio preparado: color púrpura con tonos verdosos.A.P. está dada por los indicadores eosina y azul de metileno. . ya que es parte esencial del mismo. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10 -35 ºC. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa.B. Fundamento Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine. y aquellos que son incapaces de hacerlo. La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. Agar. aeruginosa ATCC 27853 Bueno a excelente Proteus mirabilis ATCC 43071 Bueno a excelente S. Placas preparadas: color púrpura. aureus ATCC 25923 Pobre Enterococcus faecalis ATCC 29212 Pobre Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno a excelente Salmonella typhimurium ATCC Bueno a excelente 14028 Características del medio Incoloras Incoloras Incoloras. para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido. puntiformes Incoloras. Presentación x 100g :Código: B02-104-05 x 500g :Código: B02-104-06 6 x 50 ml: B04-104-84 E.

2 Siembra En superficie. pequeñas. Y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda.0 Agar 13. Enfriar a 45°C y distribuir agitando suavemente. un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella. confluentes Incoloras Incoloras. Esterilizar en autoclave a no más de 121°C durante 15 minutos.065 Instrucciones Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada.Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. en aerobiosis. Resultados Microorganismos Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Proteus mirabilis ATCC 43071 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Shigella flexneri ATCC 12022 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Características del medio: Tipo de Colonia Verdosas con brillo metálico y centro negro azulado Mucosas. puntiformes Incoloras Incoloras 0. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. mientras que las que no lo hacen son incoloras. para obtener colonias aisladas. .5 Eosina 0. Fórmula (en gramos por litro) Peptona 10.0 Sacarosa 5. Como colonias rosadas y puntiformes. En este medio se obtiene además. mezclar.0 Lactosa 5. la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. Reposar 5 minutos. albicans. calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos hasta su disolución. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada.0 Fosfato di potásico 2. mientras que Acinetobacter spp. esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0. Crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes.4 Azul de metileno pH final: 7. rosa púrpura. Enterococcus spp. por estriado a partir de un inóculo poco denso. Presentan un característico brillo metálico.2 ± 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. para favorecer el desarrollo de clamidosporas. En profundidad. Incubación De 24 a 48 horas a 35-37 °C.

La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido. El color púrpura se restaura por agitación. Presentación x 100g :Código: B02-101-05 x 500g :Código: B02-101-06 6 x 50 ml: B04-101-84 . ya que es parte esencial del mismo.Placas preparadas: color púrpura. Medio preparado: a 2-8 ºC. Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10 -35 ºC.

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