UNIVERSIDAD POPLULAR AUTONOMA DEL ESTADO DE PUEBLA

BIOLOGÍA MOLECULAR

PROFESOR:
SOLON JAVIER GARCES EISELE

ACTIVIDAD 4

ORÍGENES DE REPLICACIÓN

ALUMNA:
MARIA FERNANDA VICENTTIN PERUSQUÍA

ID: 3421378 MATRÍCULA: 74600906

FECHA:
11 DE NOVIEMBRE 2022

OTOÑO 2022
Plásmidos
Los plásmidos son moléculas de ADN circular que se encuentran principalmente en
bacterias, que pueden brindar diferentes cualidades a estas. Su tamaño va de 1,000 a
200,000 pares de bases.

Cada plásmido tiene al menos una secuencia de ADN y todas tienen un origen de
replicación lo cual hace que el ADN se pueda replicar independientemente del cromosoma.
Aunque la mayoría de los plásmidos suelen ser circulares, también se pueden encontrar
lineales.
Entre sus características principales se encuentran que estas moléculas de ADN:

 Codifican funciones consideradas como no esenciales fisiológicas normales de las

bacterias.
 La presencia de plásmidos confiere a las bacterias propiedades para colonizar
ambientes adversos.
 Son capaces de conferir resistencia a una amplia variedad de antibióticos, metales
pesados y otros inhibidores del crecimiento.
Los plásmidos se clasifican principalmente en:
Plásmidos de resistencia: Estos permiten a la bacteria aguantar la presencia de antibióticos,
o bien, como su nombre lo indica “resistencia” a antibióticos.
Plásmidos de fertilidad/ Factores F11: Son capaces de conjugación bacteriana para
transmitirse de célula en célula.
Plásmidos bacteriocinogénicos: Confieren a la bacteria inmunidad a una bacteriocina o
pueden secretar una bacteriocina.
Plásmidos de virulencia: Estos hacen que una bacteria tenga mayor capacidad de comenzar
una enfermedad.
Plásmidos metabólicos (existen 3 tipos diferentes):
1. Degradativos
2. De creación de nuevas rutas metabólicas
3. Responsables de simbiosis entre bacterias

Vectores de clonación
Los vectores de clonación son plásmidos (moléculas de ADN circular extracromosómico y
que se replican independiente del DNA nuclear) que llevan insertados fragmentos de ADN,
típicamente un gen, que nosotros queremos introducir o expresar en el hospedador. Para
poder ser insertado es necesario cortar el vector con enzimas de restricción y una vez
introducido pasa a denominarse: vector recombinante.

Colección de vectores de clonación para diversas necesidades

como la expresión del gen de interés en líneas celulares de
mamífero e in vitro, la expresión de genes marcados, la
expresión simultánea de dos genes.

Existen múltiples sistemas para poder llevar a cabo el proceso, sin embargo, todos ellos
varían en función de la especificad de la célula o del tamaño del inserto.
La transformación consiste en la introducción de material genético en las bacterias gracias
al uso de plásmidos en los cuales se ha insertado el material genético deseado. Los
elementos básicos de los que debe constar un plásmido son: un origen de replicación, el
cual le proporciona autonomía propia e independiente del DNA nuclear, y un gen de
resistencia a un antibiótico, que permite seleccionar a la bacteria transformada de las otras
que no lo están.
La transfección consiste en la introducción de material genético externo en células
eucariotas mediante plásmidos, vectores víricos (transducción) u otras herramientas. Estas
técnicas, se llevan a cabo abriendo poros en la membrana celular (electroporación) o
mediante liposomas que se obtienen mediante la mezcla del material genético con lípidos
catiónicos.
Elementos que forman un vector de clonación
Todos los vectores de clonación poseen, como parte de su estructura, los siguientes
elementos básicos comunes:
Origen de replicación: secuencia en el ADN del vector que provee un sitio único de
reconocimiento a las proteínas que identifican el sitio de inicio de la replicación (ORI). Los
plásmidos se caracterizan por tener un solo sitio ORI en su genoma y realizar una
replicación unidireccional.
Marcador de selección: es un gen que generalmente confiere resistencia a un antibiótico o
genera un fenotipo particular con el cual puede seleccionarse la célula que incorporó el
vector. En general, los marcadores de selección son únicos en los vectores, aunque existen
algunos plásmidos que contienen dos.
Entre los genes de selección más comunes se encuentran los de resistencia
a ampicilina y kanamicina. Algunos vectores plasmídicos poseen un segundo marcador de
selección, el gen lacZ, que se encuentra en el operón Lac de E. coli y codifica la enzima β-
galactosidasa.
Sitio de clonación múltiple: es un fragmento de ADN que contiene una serie de sitios
únicos de reconocimiento para enzimas de restricción, muy cercanos entre sí, con una
amplia gama de posibilidades de insertar cualquier fragmento de ADN.
Marcadores de selección:
A. El gen LacZ es un marcador de selección que codifica para la enzima β-
galactosidasa. Cuando la célula que contiene el plásmido se pone en contacto con el
reactivo x-gal, las colonias de células transformadas se tiñen de color azul.
B. El gen GFP, que expresa la proteína verde fluorescente que proporciona
fluorescencia a la colonia celular cuando es expuesta a la luz ultravioleta.
Bibliografía:
 Berger S.L., Kimmel A.R. Guide to molecular cloning techniques. methods in enzymology,
Vol. 152. Londres: Academic Press, 1987:161 –522.
 Orozco G. Genética y biomedicina molecular. Noriega Limusa, Colección de Textos
Politécnicos, Serie Biotecnologías.
 Surzycki S. Basic techniques in molecular biology. DNA Cloning general considerations,
Capítulo 13; DNA cloning experimental procedures, Capítulo 14. Berlín, Heidelberg:
Springer-Verlag, 2000:298 –319, 339-347, 352-373.
 Betancor M. et al. 2008. Genética Bacteriana. Temas de Bacteriología y Virología Médica.
Capítulo 4:59-80. http://130.206.160.21/rid=1NQMWD86S-1N93KN5-
R6/GeneticaBacteriana.pdf
 Loeza-Lara P. et al. 2004. Mecanismos de replicación de los plásmidos bacterianos. REB 23
(2): 71-78. http://www.facmed.unam.mx/publicaciones/ampb/numeros/2004/06/71-
78_PEDRO_D.pdf
 Brock, 2009. Biología de los microorganismos. 12 Ed. pp.198-199,308-311.