UNIVERSIDAD NACIONAL DANIEL ALCIDES CARRIN

Filial - La Merced

Facultad de Ciencias Agropecuarias

Escuela de Formacin Profesional de Agronoma TEMA: LOS PLASMIDIOS Y SU ROL EN LA EVOLUCION DE LAS BACTERIAS FITOPATOGENAS
CATEDRA CATEDRTICO : : FITOPATOLOGIA GENERAL Ing.Mg.Sc. Robert Rafael Rutte

PRESENTADO POR :

Chocce Unocc Estela Florecin Snchez Ftima Girn Bustamante kid Quispe Llantay Natali Revol Baltazar Leslie Revol Baltazar Maguie Rodriguez Merino Yadit Villaizan ahui Leonid

SEMESTRE

VI

LA MERCED CHANCHAMAYO 2012

DEDICATORIA
A DIOS porque siempre est con nosotros en todo momento. A usted ingeniero por brindarnos parte de su tiempo para ensearnos y formarnos como profesionales.

I. INTRODUCCIN

El trmino plsmido fue presentado por primera vez por el bilogo molecular norteamericano Joshua Lederberg en 1952. Los plsmidos y/o plasmodios, son molculas de ADN extra cromosmico circular o lineal que se replican y transcriben independientes del ADN cromosmico. Estn presentes normalmente en bacterias y en algunas ocasiones en organismos eucariotas. Su tamao vara desde 1 a 250 kb. Los plsmidos a menudo contienen genes o paquetes de genes que le confieren una ventaja selectiva lo cual les da la habilidad de hacer a la bacteria, resistente a los antibiticos. Entre sus tipos tenemos: Plsmidos Movilizables, plsmidos no-conjugativos y plsmidos conjugativos.

II. OBJETIVOS:
Tener claro la definicin de plsmido. Conocer el rol que cumplen los plsmidos en la evolucin de bacterias fitopatogenas. Identificar porque los plsmidos son resistentes a los antibiticos. Conocer la como se clasifican los tipos de plsmidos.

III. MARCO TEORICO: LOS PLASMIDIOS Y SU ROL EN LA EVOLUCION DE LAS BACTERIAS FITOPATOGENAS
1. PLASMIDOS: Los plsmidos y/o plasmodios, son molculas de ADN extra cromosmico circular o lineal que se replican y transcriben independientes del ADN cromosmico. Estn presentes normalmente en bacterias, y en algunas ocasiones en organismos eucariotas como las levaduras. 2. CARACTERSTICAS: Su tamao vara desde 1 a 250 kb. El nmero vara dependiendo de su tipo, desde una sola copia hasta algunos cientos por clula. Las molculas de ADN plasmidico adoptan una conformacin doble hlice. Se han hallado plsmidos en casi todas las bacterias. Los plsmidos no tienes protenas asociadas. El trmino plsmido fue presentado por primera vez por el bilogo molecular norteamericano Joshua Lederberg en 1952. Son considerados genticos dispensables. Sin embargo posee informacin gentica importante para las bacterias. Los plsmidos usados en Ingeniera Gentica suelen contener uno o dos genes que les confieren resistencia a antibiticos y permiten seleccionar clones recombinantes. La replicacin y la transcripcin de los plsmidos dependen de las protenas de su hospedero. Por ejemplo, los genes que codifican para las protenas que las hacen resistentes a los antibiticos estn frecuentemente, en los plsmidos. Hay algunos plsmidos integrativos, es decir que tienen la capacidad de insertarse en el cromosoma bacteriano. Estos rompen momentneamente el cromosoma y se sitan en su interior con lo cual, automticamente la maquinaria celular tambin reproduce el plsmido. Cuando ese plsmido se ha insertado se les da el nombre de episoma.

Los plsmidos se utilizan en ingeniera gentica por su capacidad de reproducirse de manera independiente del ADN cromosomal como as tambin porque es relativamente fcil manipularlos e insertar nuevas secuencias genticas. Hay otros mtodos de seleccin adems de la resistencia a antibiticos, como los basados en fluorescencia o en protenas que destruyen las clulas sin uso de antibiticos. Estos nuevos mtodos de seleccin de plsmidos son de uso frecuente en agrobiotecnologa, debido a la fuerte crtica de grupos ecologistas contra la posibilidad de presencia de antibiticos en los organismos modificados genticamente. 3. RESISTENCIA A LOS ANTIBITICOS: Los plsmidos a menudo contienen genes o paquetes de genes que le confieren una ventaja selectiva lo cual les da la habilidad de hacer a la bacteria, resistente a los antibiticos. Cada plsmido contiene al menos una secuencia de ADN que sirve como un origen de replicacin u ORI (un punto inicial para la replicacin del ADN), lo cual habilita al ADN para ser duplicado independientemente del ADN cromosoma. Los plsmidos de la mayora de las bacterias son circulares, pero tambin se conocen algunos lineales, los cuales re ensamblan superficialmente los cromosomas de la mayora de eucariotas. 4. EPSOMAS: Un episoma es un plsmido que puede integrarse por s mismo al ADN cromosomal del organismo husped. Por esta razn, puede mantenerse en contacto por un largo tiempo, ser duplicado en cada divisin celular del husped y volverse parte bsica de su mapa gentico. Este trmino no se usa ms en plsmidos, debido a que ahora est claro que una regin homologa con el cromosoma elabora un plsmido dentro de un episoma. Los plsmidos usados en ingeniera gentica son llamados vectores. Estos son usados para transferir genes desde un organismo a otro y tpicamente contienen un marcador gentico confiriendo un fenotipo el cual puede ser seleccionado a favor o en contra. La mayora tambin contienen un polivinculador o sitio de clonado mltiple (MCS), el cual es una pequea regin que contiene los sitios de restriccin ms comnmente usados, permitiendo una fcil insercin de fragmentos de ADN en ese lugar. 5. TIPOS: Clasificacin: De acuerdo a la habilidad de transferirse a otra bacteria a) Los plsmidos conjugativos: Contienen tra-genes, los cuales ejecutan complejos procesos de conjugacin, como la transferencia sexual de plsmidos a otra bacteria.

b) Los plsmidos no-conjugativos: Son incapaces de iniciar una conjugacin, de all que ellos pueden transferirse nicamente con la asistencia de los plsmidos conjugativos y lo hacen por accidente.

c) Plsmidos Movilizables: Llevan solo un subtipo de genes requeridos para la transferencia. Ellos pueden parasitar un plsmido conjugativo, transfirindose a una alta frecuencia solo en su presencia. Es posible para plsmidos de diferentes tipos el coexistir en una clula simple. Han sido encontrados siete tipos diferentes de plsmidos. Pero normalmente plsmidos relacionados son incompatibles, en el sentido de que solo uno de ellos sobrevive en la lnea celular, debido a la regulacin de las funciones vitales de los plsmidos. Por lo tanto, los plsmidos pueden ser diferenciados de acuerdo a grupos de compatibilidad. Otra forma de clasificar plsmidos es por funcin. Hay 5 clases principales:

Plsmidos de fertilidad: Los cuales contienen tra-genes, son capaces de conjugarse. Plsmidos de resistencia: Los cuales contienen genes que pueden constituir resistencia contra antibiticos o venenos. Histricamente conocidos como Factores R, antes de que se entendiera la naturaleza de los plsmidos. Col-plsmidos: Los cuales contienen genes que codifican, determinan la produccin de colinas y protenas que pueden matar a otra bacteria. Plsmidos degradativos: Los cuales habilitan la digestin de sustancias inusuales como tolueno o cido saliclico. Plsmidos virulentos: Los cuales convierten la bacteria en un patgeno.

Los plsmidos pueden pertenecer a ms de uno de estos grupos funcionales. Los plsmidos solo pueden coexistir como una o ms copias en cada bacteria, debido a la divisin celular pueden perderse en una de las bacterias segregadas. 6. APLICACIONES: Los plsmidos son necesarios en laboratorios de gentica e ingeniera bioqumica, donde son comnmente usados para multiplicar o como genes particulares expresos. Muchos plsmidos estn disponibles comercialmente para dichos usos. El gen a ser replicado se inserta en copias de un plsmido el cual contiene genes que hacen clulas resistentes a un antibitico en particular. En el paso siguiente el plsmido es insertado en la bacteria por medio de un proceso llamado transformacin. Luego, la bacteria es expuesta a un antibitico particular. Solo la bacteria que toma copias del plsmido sobrevive al antibitico debido a que el plsmido lo hace resistente. En particular, los genes protectores son expresados (usados para hacer protena) y la protena expresada evita la accin del antibitico.

De esta forma, los antibiticos actan como un filtro que seleccionan nicamente la bacteria modificada. Ahora, estas bacterias pueden ser cultivadas en largas cantidades, cosechadas y el plsmido de inters puede ser aislado. Otro uso importante de los plsmidos es fabricar grandes cantidades de protenas.. En este se deja crecer la bacteria que contiene el plsmido que encierra al gen de inters. Solo como la bacteria produce la protena que le confiere si resistencia a los antibiticos, este tambin puede ser usado para producir protenas en grandes cantidades desde el gen insertado. Esta es una forma barata y fcil de producir genes o protenas que este codifica de forma masiva, como por ejemplo insulina, o inclusive antibiticos. 7. CONFORMACIONES: El ADN plsmido puede aparecer en uno de cinco conformaciones, las cuales (para un tamao dado) corren a diferentes velocidades en un gel durante electroforesis. Las conformaciones se muestran abajo en orden de movilidad electrofortica (velocidad para un voltaje dado), del ms lento al ms rpido: Mellado abierto circular: el ADN tiene un solo corte filamentario. Lineal: ADN tiene terminales libres, ya sea porque los filamentos fueron cortados o porque el ADN era linear in vivo. Usted puede modelar este como un cordn que no se ha conectado as mismo. Circular relajado: ADN que interacta completamente con ambos filamentos sin cortar, pero que ha sido enzimticamente relajado. Usted puede modelar este dejando un cordn relajado y luego conectndolo a s mismo. Superespiral desnaturalizado: ADN como el ADN superespiral o superenrollado (ver ms abajo), pero que tiene regiones sin unir que lo hacen ligeramente menos compacto; esto resulta de una excesiva alcalinidad durante la preparacin del plsmido. ADN superespiral: Es un ADN totalmente intacto con los filamentos sin cortar, y con forma de remolino, resultando en una forma compacta. 8. INTERVENCION DE LOS PLASMIDOS EN LAS AGALLAS BACTERIANAS Agrobacterium causa la agalla de la corona de muchas plantas leosas, principalmente frutales de hueso y pepitas, sauces, zarzas y vides (A. tumefaciens), la agalla del tallo de las frambuesas y zarzamoras (A. rubi) y la raz pilosa del manzano (A. rhizogenes). En realidad, el tipo de sntomas que producen Agrobacterium en sus hospedantes no est determinada por sus especies patgenas, sino por el tipo de plsmido que tienen las bacterias que tienen plsmidos inductores de tumores (plsmido Ti) inducen la formacin de la agalla de la corona, mientras que las que poseen

plsmidos inductores de races (plsmido Ri) inducen el sntoma de las races pilosas. Las bacterias que producen agallas penetran en las plantas a travez de heridas y estimulan a las clulas a dividirse y agrandarse, estas pueden ser controladas con la esterilizacin del suelo de los invernaderos, rotacin de cultivos y con aspersiones de caldo bordales. Agrobacterium tumefaciens, tiene forma de bastn, posee flagelos periticos y es capaz de modificar el material gentico de sus hospedantes debido a que introduce parte de su material gentico en sus cromosomas.

IV. CONCLUSIONES: 1. Los plsmidos se encuentran en las bacterias y en ocasiones en organismos eucariotas como en las levaduras. 2. Los plsmidos se han hallado en la mayora de las bacterias.

3. Son utilizados en la ingeniera gentica por su capacidad de reproduccin y es independiente del ADN cromosomal. 4. Es resistente a los antibiticos.

5. Los plsmidos son esenciales en un laboratorio de gentica y ingeniera bioqumica donde se usa para multiplicar o tambin como genes particulares expresos. 6. Otro uso importante es fabricar grandes cantidades de protenas.

V.BIBLIOGRAFIA: LIBROS:
George N. Agrios, FITOPATOLOGIA, Editorial: NIMUSA, MEXICO, 2005. Thomshow, M.F.et al (1980). Host range of agrobacterium tumefaciens is determined by the Ti- plasmid. Nature (London). Genetic requirements for the targeted integration of Agrobacterium T-DNA in Saccharomyces cerevisiae Nucleic Acids Research 2003, 31: 826-832. Thomashow, L. S. y Weller, D. A. (1995). Current concepts in the

use of introduced bacteria for biological control: Mechanisms and antifungal metabolites. En Plant Microbe Interactions. G. Stacey y N. Keen, eds.(Chapman and Hall, New York), pp. 187-235.

PGINAS WED:

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