INVESTIGACION ORIGINAL

Actividad antimicrobiana y efecto antiadherente del peruano

Psidium guajava Guayaba) Hojas en un modelo de biopelícula
cariogénica
Pablo A Millones-Gómez 1, Dora Maurtua-Torres 2, Reyma Bacilio-Amaranto 3, Roger D Calla-Poma 4,
Margarita F Requena-Mendizábal 5, Ana C. Valderrama-Negron 6, Marco A Calderon-Miranda 7, Rubén A Calla-Poma 8,
María E Huauya_Leuyacc 9

A bstrAct
Apuntar: La fitomedicina se ha practicado comúnmente como una forma de medicina tradicional en varias culturas para el tratamiento de enfermedades bucales.
Recientemente, ha ganado importancia como alternativa al tratamiento convencional. Varios extractos de plantas y frutos han sido evaluados recientemente por
su actividad potencial contra microorganismos implicados en el desarrollo de caries dentales. El propósito de este estudio fue evaluar la actividad antimicrobiana y
el efecto antiadherente del extracto orgánico crudo (COE) y tres particiones (acuosa, butanólica y clorofórmica) de
Psidiumguajava ( guayaba) en un modelo de biopelícula cariogénico.
Materiales y métodos: Las hojas de guayaba se obtuvieron de las montañas del norte de Perú, donde crecen silvestres y libres de pesticidas. La
actividad antimicrobiana de los COE y particiones contra Streptococcus mutans y Streptococcus gordonii se determinó midiendo los halos de inhibición,
mientras que el efecto sobre la adhesión de la biopelícula se determinó midiendo la densidad óptica mediante espectrofotometría.
Resultados: Un efecto antibacteriano del COE y la partición clorofórmica contra S. gordonii (p < 0,05), así como un efecto significativo sobre la
adherencia de la biopelícula, con una concentración inhibitoria mínima (CMI) de 0,78 mg / ml, que se mantuvo durante los 7 días de evaluación.
Conclusión: Concluimos que los COE y su partición clorofórmica tienen efectos antimicrobianos y antibióticos contra esta cepa de S. gordonii,
haciéndolos de especial interés para la evaluación como una alternativa prometedora para la prevención de la caries dental.
Significación clínica: Al conocer el efecto antimicrobiano de Psidium guajava, esta sustancia se puede utilizar eficazmente en productos destinados a prevenir la
caries dental y la enfermedad periodontal.
Palabras clave: Biopelícula cariogénica, Caries dental, Psidiumguajava, Streptococcus gordonii, Streptococcus mutans. La
Revista de Práctica Dental Contemporánea ( 2020): 10.5005 / jp-journals-10024-2893

I introducción 1 Vicerrectorado de Investigación, Universidad Alas Peruanas, Lima,

Las bacterias pueden vivir en un estado planctónico o formar biopelículas;
cuando esto último ocurre, aumenta la invirulencia y la resistencia a
sustancias antibacterianas, produciendo diferentes mecanismos de
defensa contra la respuesta inmune del huésped. 1,2 En la búsqueda de
nuevas moléculas con efectos terapéuticos, se han probado diferentes
productos naturales por sus efectos antioxidantes, antiinflamatorios,
anestésicos y antimicrobianos, siendo este último probablemente el más
estudiado. 3-6 La cavidad oral es el hogar de muchas bacterias saprofitas
que contribuyen a las actividades fisiológicas del hospedador, por lo que
no siempre es adecuado utilizar agentes antibacterianos que afecten el
equilibrio de este grupo de microorganismos, y en su lugar conviene
utilizar tratamientos con mecanismos específicos o selectivos. 7-10
El uso de productos de origen natural para estudios de investigación
está aumentando, con el objetivo de encontrar nuevas moléculas con
algún tipo de efecto terapéutico. Se han investigado tanto plantas
peruanas como extranjeras. Guayaba Psidium guajava) es originaria de las
Perú
2,3 Laboratorio de Bacteriología, Universidad Peruana Cayetano Heredia,
Lima, Perú
4,5 Departamento de Rehabilitación Oral, Facultad de Odontología, Universidad
Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú
6,7 Laboratorio de Investigación de Biopolímeros y Metalofarmacéuticos,
Universidad Nacional de Ingeniería, Lima, Perú
8 Departamento de Rehabilitación Oral, Universidad Peruana Cayetano
Heredia, Lima, Perú
9Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Cesar Vallejo, Lima, Perú
Autor correspondiente: Pablo A Millones-Gómez, Vicerrectorado de
Investigación, Universidad Alas Peruanas, Lima, Perú, Tel: +51
944908425, correo electrónico: pa blodent@hotmail.com
Cómo citar este artículo: Millones-Gómez PA, Maurtua-Torres D, Bacilio-
Amaranto R, et al. Actividad antimicrobiana y efecto antiadherente del peruano Psidium

Américas. Crece en zonas tropicales y en Perú se cultiva en zonas como San
Martín, Loreto, Huánuco, Junín, Lima y Cusco. Se utiliza tradicionalmente
como planta medicinal por sus propiedades antidiarreicas, antisépticas,
astringentes y digestivas. 9 Las hojas de guayaba se consideran
guajava Guayaba) Hojas en un modelo de biopelícula cariogénica. J Contemp
Dent Pract 2020; 21 (7): 733–740.
Fuente de apoyo: La Universidad Alas Peruanas brindó financiamiento para
investigación a PMG (Beca No. 101-2018).

estimulantes y antiespasmódicos, 9 y los componentes antibacterianos Conflicto de intereses: Ninguno

responsables de su actividad son quercetina, avicularina

(quercetina-3-α-larabinofuranósido) y guaijaverina. 11-13

El uso de plantas comunes ha guiado la investigación farmacéutica es una planta muy versátil que se ha utilizado como alimento y como
dirigida a combatir los microorganismos patógenos. P. guajava L. agente terapéutico. Las raíces, corteza, hojas, frutos, flores y

© TheAuthor (s). 2020OpenAccessEste artículo se distribuye bajo los términos de CreativeCommonsAttribution4.0International License (https: // creativecommons.org / licencias /
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 Efecto antimicrobiano y antiadherente de las hojas de guayaba peruana

Las semillas se utilizan para diferentes propósitos, especialmente en Coleccion de muestra

infusiones y decocciones para uso oral y tópico. P. guajava se utiliza en el
Diez kilogramos de hojas de P. guajava fue recolectada durante el mes de
tratamiento de síntomas relacionados con el mal funcionamiento de
noviembre de 2018 en zonas rurales de la ciudad de Oxapampa, Perú,
órganos y enfermedades provocadas por la acción de patógenos y / o
utilizando guantes de látex y tomando en cuenta los principios de
microorganismos oportunistas. Se han realizado científicamente
bioseguridad. Se utilizaron podadoras para cortar las ramas, que se
numerosos estudios farmacológicos para evaluar el potencial terapéutico
colocaron dentro de una bolsa de plástico. Luego, seleccionamos las
de esta planta. 14,15
mejores hojas que estaban intactas y limpias. A continuación, todas las
Comunmente llamado guayaba o guayabo, la guayaba es un arbusto hojas se colocaron cuidadosamente dentro de cajas de cartón forradas con
tropical que crece hasta 7 min de altura. Tiene un tronco corto, corteza
papel Kraft (Fig. 1). Por último, se empacaron las hojas para su transporte
escamosa y dosel abierto. Sus hojas son coriáceas con venas prominentes y sus
al Laboratorio de Química de la Universidad Nacional de Ingeniería en
flores son blancas. Su fruto parecido a una baya tiene una pulpa firme y muchas
Lima, Perú. Otra muestra de la planta que incluía la flor fue preparada y
semillas, con un sabor que va de dulce a muy ácido, y puede tener forma de
transportada a la Universidad Cayetano Heredia de Lima para su posterior
pera, redonda u ovoide. 6,16-19
identificación taxonómica.
La constitución química de esta planta incluye taninos, fenoles, Las hojas de la planta de guava fueron identificadas y autenticadas
flavonoides, saponinas, carbohidratos, alcaloides, esteroles, por personal especializado: Dr. Camilo Díaz Santibañez, Catedrático de
terpenoides y compuestos fenólicos. Compuestos de actividad Botánica y Taxonomía, Lima, Perú. Un ejemplar de comprobante
antimicrobiana conocida, tales como ácido 1,2-bencenodicarboxílico, (Espécimen No. PP 2018) fue depositado en el Departamento de
dibut, α-bisabolol, ácido 1,2-bencenodicarboxílico, buty, hexadeca- Farmacognosia, Laboratorio de Investigación y Desarrollo, Universidad
2,6,10,14-tetraeno, cariofileno, germacreno, quercetina, Peruana Cayetano Heredia, Lima, Perú.
quercetina3-O-α-L-arabinofuranósido, quercetina-3-O-β-D-arabinopiranósido,
morin-3-O-liosósido, morin-3- En las hojas se encuentran O-arabinas, quercetina Preparación del extracto crudo y particiones
yquercetina3-O-arabinósido, 11-hidroxi-35-triconte-pentatriacontano,
Cada hoja se lavó y luego se secó en un horno a 37 ° C. Después de 24
hexaeicosano-16-ol, tricoslan-17-en-5-ol y nonacosano-23-en3-ol. de P. guajava. 20-26
horas, las muestras se dejaron secar al aire durante 24 horas más.
Las muestras de hojas secas se colocaron en cuatro matraces de 1 L y
Debido a la importancia medicinal de P. guajava, Se han realizado se agregaron 600 mL de etanol de grado de análisis (EtOH). Las hojas se
varios estudios relacionados con su historia etnobiológica, así como dejaron macerar durante 24 horas. Luego, las muestras se filtraron por
investigaciones científicas relacionadas con la confirmación de sus gravedad y el filtrado se recogió en un embudo refractario y se colocó bajo
efectos farmacológicos generales. 12,27-30 Aún existen pocos estudios una campana de humos hasta que se evaporó el etanol. Finalmente, se
de investigación sobre el uso de esta planta contra patógenos orales y prepararon concentraciones de 25 mg / mL, 30 mg / mL, 40 mg / mL y 50
aún menos contra biofilms orales, aunque en un estudio se evaluó la mg / mL 3,27 ( Figura 2).
actividad antibacteriana contra microorganismos cariogénicos, que Para repartir el extracto crudo, se añadieron 100 ml de metanol
encontró que el efecto sobre Lactobacillus acidophilus es similar al para solubilizar la muestra con agitación hasta que se disolvió la
efecto de la clorhexidina. 31 Shetty y col. 32 evaluó el efecto inhibidor de muestra. Luego, se agregaron 100 ml de cloroformo y se dejó reposar
los extractos de guayaba en Porphyromonas gingivalis y Aggregatibacter la muestra durante 2 horas hasta que se solubilizó en este medio. A
actinomycetemcomitans. Se prepararon extractos etanólicos y continuación, se añadieron 150 ml de Milli-Qwater a una columna y se
acuosos de guayaba y se probaron los efectos inhibidores de estos añadió la muestra solubilizada. Se dejó reposar durante 24 horas, tras
extractos sobre los dos patógenos periodontales. P. gingivalis fue más lo cual se observaron dos fases bien definidas: la fase acuosa y la fase
susceptible al extracto etanólico que al extracto acuoso. Cuando se clorofórmica. Ambas fases se separaron por decantación y el residuo
compararon ambas bacterias, A. actinomycetemcomitans clorofórmico se transfirió a la campana extractora para evaporar
era más susceptible a los extractos de guayaba que P. gingivalis. Por lo tanto, el todas las trazas de cloroformo.
extracto de guayaba puede ser un agente terapéutico potencial para la Luego, se preparó otra columna agregando 600 mL de
periodontitis ya que muestra una actividad significativa contra P. gingivalis y A.
norte- butanol, e inmediatamente después se añadió el residuo
actinomycetemcomitans. acuoso obtenido en el proceso anterior. Después de 24 horas de
Limsonget al. 33 evaluó la actividad antimicrobiana de extractos reposo, se formaron dos fases: un residuo acuoso y un residuo de
derivados de diferentes productos naturales, incluyendo P. guajava butanol. Fueron separados por decantación. El residuo de butanol se
L., que mostró actividad antimicrobiana contra Streptococcus mutans conevaporó bajo una campana extractora y el residuo acuoso se liofilizó
halos de inhibición superiores a 10 mm. Si bien no presentó diferencia durante una semana (Fig. 3). Todas las muestras fueron disueltas en
estadísticamente significativa con la clorhexidina al 0.12%, este hecho dimetilsulfóxido (DMSO) y Mili-Qwater en una proporción de 1: 1 y
representa un hallazgo importante que justifica el estudio de otras fueron entregadas al Laboratorio de Bacteriología de la Universidad
especies de origen natural en la búsqueda de nuevos agentes Peruana Cayetano Heredia para evaluación biológica.
anticariogénicos. El presente estudio puede sentar las bases para la
generación de productos terapéuticos que se puedan aplicar para Evaluación del efecto antibacteriano del
suprimir la formación de biopelículas en lugar de modificar el extracto crudo
ecosistema bacteriano matando los microorganismos saprofitos que
Las cepas S. mutans ATCC 25175 y Streptococcus gordonii Las ATCC 51656
forman el ecosistema.
se activaron y cultivaron para la preparación del inóculo. Las dos cepas se
cultivaron en medio de infusión cerebro-corazón (BHI) durante 24 horas y
METRO ATERIALES Y METRO métodos
luego se llevaron a la turbidez del estándar 0,5 de McFarland. Para evaluar
Diseño del estudio el efecto antibacteriano, se empapó un hisopo con el inóculo previamente
Este estudio invitro, diseño experimental prospectivo, preparado, el cual se sembró en la superficie del agar cuatro veces.
transversal y analítico. Después de que el agar haya reposado durante 5 minutos, filtre

734 The Journal of Contemporary Dental Practice, Volumen 21 Número 7 (julio de 2020)
 Efecto antimicrobiano y antiadherente de las hojas de guayaba peruana

Figuras 1A a C: ( A y B) Recaudación de sucursales; (C) Recolección de hojas

Figuras 2A a D: Preparación del extracto crudo

Figuras 3A a C: Preparación de los tabiques: residuo acuoso, residuo butanólico y residuo cloroformo

Se colocaron discos de papel (Whatman 3; 6 mm de diámetro) sobre el
agar y se impregnaron con 10 μL de cada uno de los extractos de guayaba
por separado. Este procedimiento se repitió seis veces. Se utilizó
clorhexidina (0,12%) como control positivo y el control negativo fue DMSO
diluido 1: 1 con agua Milli-Q. Luego, todas las placas se incubaron con la
concentración indicada de extracto, control positivo y control negativo a 37
° C durante 48 horas en condiciones microaerofílicas ( S. mutans) o
anaeróbico S. gordonii) condiciones (Fig. 4).
Evaluación del efecto antibacteriano de las particiones
Para evaluar las particiones de las hojas de guayaba, se probaron las
siguientes concentraciones: partición acuosa, 50 mg / mL (1 mL),
partición butanólica, 50 mg / mL (1 mL) y partición clorofórmica, 50
mg / mL (1 mL). Thebacteria S. mutanes ATCC25175 y S. gordonii
Se utilizaron ATCC 51656 cultivados en BHI durante 24 horas, y su
turbidez se calibró al estándar 0,5 de McFarland (Fig. 5).
La prueba antibacteriana se realizó sumergiendo un hisopo en el
inóculo previamente preparado. El agar se limpió cuatro veces y se dejó
reposar durante 5 minutos, y luego, se colocaron discos de papel de filtro
de 6 mm (Whatman 3) sobre el agar y se impregnaron con 10 μL de cada
una de las particiones de guayaba por separado. Este procedimiento se
repitió seis veces.
Se utilizó clorhexidina (0,12%) como control positivo y el control
negativo fue una solución de DMSO más agua Milli-Q (1: 1). A continuación,
todas las placas con las particiones se incubaron, con controles positivos y
negativos, a 37 ° C durante 48 horas en condiciones microaerofílicas ( S.
mutans) y anaeróbico S. gordonii) condiciones. Después de 48 horas de
incubación, se examinaron las placas y se midieron los halos de inhibición
con calibres Vernier.
Determinación de la concentración
mínima inhibitoria
Después de determinar los efectos antibacterianos del extracto crudo
y particiones de guayaba, la concentración que mostró el mayor halo
de inhibición en S. gordonii se utilizó para determinar la
concentración mínima inhibitoria (MIC).
Se colocó un total de 140 μL de caldo de soja tripticasa (TSB) en placas
de microtitulación de 96 pocillos de los pocillos 2B a 11B, y luego se
colocaron 140 μL del extracto de guayaba natural en el pozo 2B. Usando
una micropipeta, se colocaron 140 μL del pocillo 2B en el pozo 3B y luego
se homogeneizaron, repitiendo el mismo método hasta llegar al pozo 11B
para completar los 140 μL. Posteriormente, 20 μL del cultivo de la S.
gordonii Se añadieron bacterias ajustadas al estándar 0,5 de McFarland de
los pocillos 2B a 11B. Luego, se incubó la placa

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