INTRODUCCION

MARCO TEORICO
 MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS
MATERIALES:
 Espátula de acero con mango de madera.
 Gradilla para tubos de ensayo 13x100 mm
 Jarra de plástico 1 Litro con agua destilada
 Matraz erlenmeyer 250 mL
 Mechero de alcohol
 Placa de Petri 15x100 mm
 Probeta 100 mL
 Varilla de agitación
 Agar manitol salado
 Agar azida sangre
 Bacterias Gram positivas (1 placa)
 Balanza mecánica
 Adaptador para el sistema al vacío
 Aguja 21G para el sistema al vacío
 Fósforos
 Tubo al vacío Celeste y Rojo
 Mango de asa de siembra
 Piceta con agua destilada
 Puente de coloración
 Peróxido de hidrógeno
 Laminas portaobjetos
 Pipeta pasteur de plástico
 Centrífuga
 Papel Kraft
 Micropipeta de 100 – 1000 uL
 Puntas de micropipeta
PROCEDIMIENTOS 1: AGAR SANGRE Y MANITOL SALADO
 Agar sangre:

40 g ------------- 1000 ml

X ----------------- 100 ml

X = 4 gr. De agar base.

- Sangre es igual al 5 o 6 % ml

- Se prepara a una temperatura de 45° C

 Calibrar la balanza:

- Calibración = 2.3 gr

- Agar base = 4 gr.

- Total = 6.3 gr.

 Agar manitol salado:

111 gr ------------ 1000 ml

X ------------------- 100 ml

X = 11.1 gr. De manitol salado. + 100 ml de H2O

 Calibrar la balanza:

- Calibración = 1.9 gr

- Agar manitol salada= 11.1 gr

- Total = 13.0 gr.

PREPARACION DE MEDIO DE CULTIVO SOLIDOS:

 Medir en la probeta la cantidad de agua destilada que se va a necesitar.

 Colocar el agar pesado al matraz y luego agregar el agua destilada medido
agitar y con ayuda de la varilla de agitación se disuelven los grumos que puedan
formarse. Se cubre el erlenmeyer con un tapón de algodón. Se cubre la torunda
con material impermeable y se esteriliza en autoclave a 121ºC por 15 minutos.
Si se utiliza de inmediato, dejar enfriar a 40- 45 °C.

 Si se va a envasar en las placas petri, es conveniente mantener el mechero

encendido para formar un área de esterilidad al momento del vaciado en las
cajas de petri aproximadamente de 15 mL a 20 mL de agar por placa
procurando que no se forman burbujas. Tapar la placa inmediatamente.

 Si desea que solidifiquen inclinados en tubos de ensayo, colocarlos en una

superficie lisa inclinándolos en un ángulo de 20 a 30 °C sobre el nivel más bajo
de la gradilla.
 Esperar a que el medio solidifique, se rotulan los medios de cultivo, anotando la
fecha y con iniciales el tipo de medio de cultivo. Si las placas no se van a utilizar
el mismo día se sujetan con cinta y se colocan en el refrigerador de manera
invertida para evitar que el vapor condensado caiga sobre el medio de cultivo y
lo pueda contaminar
 Cuando se vayan a utilizar los medios de cultivo preparados, será necesario
secar las placas invertidas en estufa a 37 °C. Antes de realizar el sembrado de
microorganismos.
PRUEBA DE CATALASA
La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias.
Descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. El desprendimiento
de burbujas procedentes del oxígeno indica que la prueba es positiva.
 Colocar una gota de agua oxigenada sobre un portaobjetos con ayuda de
una pipeta Pasteur.
 Suspender la bacteria
 Detectar la formación de burbujas

PRUEBA DE COAGULASA
Permite determinar la capacidad de coagular el plasma por la acción de la
enzima coagulasa. Se utiliza para diferenciar S. aureus (coagulasa positiva) de
otras especies de Staphylococcus.

Mezcle un asa cargada con el microorganismo obtenido de un cultivo en medio sólido,

ó 0,1 mL de un cultivo en un medio líquido, con 0,5 mL de plasma de conejo (o de
humano), contenido en un tubo pequeño de aproximadamente 7 mm de diámetro.
Incube en baño de agua a 37°C y examine periódicamente.

Se considera que la prueba es positiva si el plasma es coagulado en 3 a 4 horas,

aunque algunas cepas con escasa producción de coagulasa sólo coagulan el plasma
después de 24 horas de incubación.