1 UNIVERSIDAD DEL QUINDÍO

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS Y TECNOLOGÍAS

PROGRAMA DE QUÍMICA

Actividad: Práctica de laboratorio

Tema: Siembra y aislamiento de microorganismos
Fecha: miércoles 9 y jueves 10 de septiembre de 2020
Docente: Clara María Mejía Doria Qca UQ M.Sc. UTP, Ph.D. (c)
Jorge Mario Londoño Caicedo Biól. UQ MSc. UNAL

LABORATORIO N°3. TÉCNICAS Y MÉTODOS DE SIEMBRA, AISLAMIENTO,

SELECCIÓN Y RECUENTO DE MICROORGANISMOS

OBJETIVOS
 Comprender las diferentes técnicas de siembra y aislamiento en caja de petri y tubos de ensayo.
 Entender los conceptos de cultivo puro y cultivo mixto.
 Obtener colonias separadas utilizando uno o más métodos de aislamiento.
 Estudiar la morfología y el aspecto físico de las colonias.
 Comprender el término recuento.
 Preparar correctamente los medios de siembra.

INTRODUCCIÓN
La mayoría de los microorganismos no se encuentran aislados, sino integrado a poblaciones mixtas. Para
llevar a cabo el estudio de los microorganismos y de sus características, es necesario separarlos, para trabajar
con especies aisladas, logrando cultivos axénicos (puros). Un cultivo axénico se obtiene artificialmente en el
laboratorio. A la hora de obtener un cultivo axénico se han de tomar precauciones, ya que los
microorganismos están por todas partes, en la naturaleza, en el laboratorio, en los instrumentos y los
recipientes usados en los experimentos. Estos microorganismos no deseados o contaminantes deben ser
eliminados de un cultivo para que éste pueda ser axénico. El segundo paso para obtener un cultivo axénico es
inocular o introducir, una sola célula de un microorganismo en un medio sólido o líquido, esterilizado
previamente. De esta manera, se aíslan un solo microorganismo del resto y se podrá multiplicar en
condiciones favorables. Un clon está constituido por una población de células descendientes de un solo
microorganismo. Una colonia es un clon lo suficientemente grande como para ser visible sobre la superficie de
un medio sólido. Un cultivo microbiano que ha estado creciendo por cierto tiempo en el mismo tubo o matraz,
debe ser transferido a un medio de cultivo nuevo, de otra manera el crecimiento y sobrevivencia no pueden
continuar. En esta transferencia se deben considerar dos aspectos básicos referentes a: 1. no introducir
microorganismos indeseables (contaminantes) y 2. concentración o carga microbiana de la muestra (inóculo) a
sembrar.

Uno de los principales usos de las técnicas de aislamiento microbiano, además de la obtención de un cultivo
puro, es lograr observar el tipo de colonias, el aspecto físico (color) y el olor; todas estas características
aunadas a la morfología bacteriana y su diferenciación mediante la tinción de Gram, son la base fundamental
para realizar la identificación del microorganismo.

En la transferencia de microorganismos se emplean diferentes instrumentos: agujas, asas de inoculación,

hisopos, pipetas o pipetas Pasteur, los cuales deberán esterilizarse previamente. La utilización de estos
dispositivos, así como de los diferentes medios de cultivo tienen aplicaciones específicas.

Existen diversos métodos para conseguir la separación, la mayoría de ellos basados en la inmovilización de las
células microbianas en la superficie de los medios de cultivo sólidos. Estas son algunas de las técnicas de
aislamiento y siembra de microorganismos:

1. Aislamiento por extensión en superficie.

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2. Aislamiento por agotamiento o por estría múltiple.
3. Aislamiento por dilución en masa.

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4. Siembra en cultivo líquido con asa y pipeta.

5. Siembra en tubo con agar inclinado y no inclinado semisólido

ANÁLISIS DE CASO

La empresa Jugolight ubicada en Quimbaya, le envía a su laboratorio una muestra de una bebida a base de
mora para el análisis de mesófilos aerobios y coliformes totales. Después de la recepción de la muestra usted
realiza los análisis respectivos y se generan los siguientes resultados:

Dilución-
Duplicado A Duplicado B
PCA

Dilución 10-1

Dilución 10-2

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MB
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Dilución 10-3

Dilución 10-4

Dilución-
Duplicado A Duplicado B
PDA

Dilución 10-1

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MB
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Dilución 10-2

Dilución 10-3

Dilución 10-4

Tubos Dilución
Brilla 10-1 10-2 10-3

1 X X

2 X
3 X X

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4 X

5 X X

PROCEDIMIENTO

1. Describa la técnica de siembra y de recuento que empleó en el análisis. Realice los esquemas
correspondientes.
2. Usted como coordinador de control de calidad del laboratorio microbiológico debe realizar el reporte de
los resultados, ¿cómo lo haría? Realice un informe técnico de máximo dos hojas.

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