CONCEPTO E HISTORIA:

Biotecnología:​ Es la aplicación de principios de la ciencia y la ingeniería así como el conjunto de técnicas que
involucran la manipulación de sistemas biológicos, organismos vivos (​PRINCIPALMENTE UNICELULARES​), sus
componentes sub-celulares o derivados para crear o modificar, productos o procesos para usos específicos, procesos
o proporcionar bienes o servicios. En el siglo XXI se va a convertir en la principal herramienta para el desarrollo de
cualquier actividad humana.

Biotecnologia segun OCDE: ​Aplicacion de principios de la ciencia y la ingenieria para el tratameinto de materiales
organicos e inorganicos por sistemas biologicos para producir bienes y servicios.

Biotecnologia ROJA: ​Se usa en procesos medicos.

● Desarrollo de antibioticos y vacunas.
● Diagnosticos moleculares.
● Terapias regenerativas.
● Desarrollo de ingenieria genetica.

Biotecnologia BLANCA: ​Aquella aplicada a procesos industriales (Biotecnologia INDUSTRIAL).

● Crear productos quimicos
● Crear catalizadores biologicos industriales
● Platiscos biodegrables y biocombustibles.
● Objetivo: Creacion de productos facilmente degradables, que consuman menos energia y generen
menos desechos.

Biotecnologia VERDE: ​Aplicada a procesos agricolas.

● Obtencion de plantas trasgenicas capaces de crecer en condiciones desfavorables.
● Plantas resistentes a plagas.

Biotecnologia AZUL: ​Aplicada a ambientes marinos y acuaticos.

● En fase temprana de desarrollo
● Productos alimentarios, cosmeticos.
● Cuidados sanitarios.

Biotecnologia AMARILLA: ​Uso de organismos vivos en la industria Alimentaria.

● Uso de enzimas para la produccion de alimentos nuevos.

Biotecnologia MARRON: ​Aplicada a la veterinaria.

● Farmacos y vacunas para el mejoramiento animal.

Biotecnologia GRIS: ​Ingenieria genetica y y biologia molecular para mejorar el medio ambiente.
● Biorremediacion.
● Biofiltros.

Biotecnología ROSADA: ​Propiedad intelectual y bioseguridad en la biotecnología.

● Bioseguridad ética.
● Patentes.
● Propiedad intelectual.

Biotecnología DORADA: ​Uso de herramientas bioinformáticas y nanotecnología.

● nanorobots
● Drogas ‘’in silico’’.
● nanoparticulas.

Tres etapas:
● Tradicional o de Primera generación:​ Antes de cristo.
 ❏ Domesticación de animales (crianza selectiva).
❏ Fermentación de pan, queso, yogurt y bebidas alcohólicas.
● Clásica o de Segunda generación: ​Inicios de la manipulación genética.
● Moderna o de Tercera generación: ​Aplicación de la ingeniería genética. SURGE EN LA DECADA
DE LOS 80.

Genetech: ​Primer compañia biotecnologica. Primer proteina humana fabricada en una bacteria (‘’ERA DE LA
BIOTECNOLOGIA’’). Fundada por Swanson y Voyer.

Karol y Ereki: ​PADRE DE LA BIOTECNOLOGIA. Fue un ingeniero agropecuario.

Leyes de mendel:​ 1865

De Vries, Carl Correns y Erich von Tschermak​ redescubren las “Leyes de Mendel”:​ 1900

•William Bateson define los términos​ “genética”, “heterocigoto”, “homocigoto”, “alelomorfo” ​(más tarde
determinado como alelo: 1902

Edward Lawrie Tatum y George Wells Beadle demostraron que los​ genes ARN mensajero codifican proteínas​:
1941

Rosalind Franklin, ​captura con rayos X la estructura del DNA​: 1952

James D. Watson y Francis Crick determinaron que la estructura del ADN es una​ doble hélice en direcciones
antiparalelas​: 1953

Frederick Sanger, Walter Gilbert, y Allan Maxam secuencian ADN completo del genoma​ del bacteriófago​: 1977

Inicia el​ proyecto del Genoma Humano: ​1988

● Culmina el 14 de Abril del 2003
● • A través del Corte o empalme (“Splicing”) alternativo
● 30,000 genes:​De los cuales:
❏ 25,000 codifican para proteínas
❏ 1,200 son pseudogenes
❏ 3,000 codifican solo para RNAs
❏ Son el 25 % del genoma completo

Genotipo: ​Un genotipo es la colección de genes de un individuo (aplicación genómica)

Fenotipo: ​Se refiere al producto de la expresión génica, es decir, la(s) proteína(s).

Genoma: ​El genoma es el conjunto de instrucciones genéticas que se encuentra en una célula.
● 23 pares de cromosomas ( en núcleo)
● 1 pequeño cromosoma mitocondrial

Ingeniería genética: ​Permite aislar, modificar y transferir genes. Es el conjunto de metodologías que permite
transferir genes de un organismo a otro. Permite clonar (multiplicar) fragmentos de ADN y expresar genes (producir
las proteínas para las cuales estos genes codifican) en organismos diferentes al de origen.

Emmanuelle Charpentier y Jennifer A. Doudna: Desarrollo de la técnica de edición genómica ​CRISPR/Cas9,​ ganando
el premio nobel de química.
● Es una herramienta molecular utilizada para ​“editar” o “corregir” .
● Sería algo así como unas tijeras moleculares que son capaces de cortar cualquier molécula de ADN
haciéndolo además de una manera muy precisa y totalmente controlada.
 ● También se está ya utilizando para crear modelos de animales para estudiar enfermedades
complejas como la ​esquizofrenia,​ para las que antes no existían modelos animales.
● Con la tecnología CRISPR/Cas9 se inaugura ​UNA NUEVA ERA ​de ingeniería genética en la que se
puede editar, corregir, alterar, el genoma de cualquier célula

TERAPIA GÉNICA:
Es el conjunto de procedimientos experimentales que modifican la expresión génica mediante la
introducción de gen foráneo en un conjunto de células o tejidos para prevenir o curar enfermedades con
componente genético y MULTIFACTORIALES​, y cuyo objetivo es restablecer la función del gen mutado.

Componentes indisociables:
● Un gen de interés.
● La célula blanca (preferente donde un gen sea exclusivo de una sola célula).
● Un vector.

1990: PRIMER ENSAYO CLÍNICO DE TERAPIA GÉNICA, en un paciente con inmunodeficiencia combinada severa

Terapia génica de línea somática: La única terapia génica admite hoy en día.
Vectores retrovirales: El sistemas ​más eficientes ​para la liberación in-vivo de un gen en células humanas
Vectores adenovirales: Permiten traslucir fragmentos mayores de DNA. La expresión transitoria que se consigue y
la necesidad de reinyección del vector adenoviral, provoca una fuerte respuesta inmunológica del paciente.

DIAGNÓSTICO Y PRONÓSTICO DE ENFERMEDADES:

Introducción:
● El material genético de todos los organismos, contiene la secuencia de genes que dicta las funciones,
características propias de cada especie.
● Las pequeñas variantes que encontramos en nuestro material genético nos hacen únicos entre
individuos dentro de una misma especie.
● Muchas veces esas variantes, pueden estar relacionadas con simples variantes fenotípicas y en
algunas otras ocasiones, con el desarrollo, predisposición o protección ante ciertas enfermedades.
● Las variantes en nuestro material genético, pueden evaluarse a través de diferentes técnicas
moleculares que nos ayudan a dar tratamientos personalizados.
❏ Tratamientos basados en el genoma.
 ❏ Atención específica para las características propias de un individuo.

Generalidades de los ácidos nucleicos:

● Estructura de un nucleótido:
❏ Parte Ácida.
➔ Grupo fosfato (1-3).
❏ Parte Neutra
➔ Pentosa.
➔ Ribosa.
➔ Desoxirribosa.
❏ Parte básica:
➔ Base nitrogenada:
- Purinas.
- Pirimidinas.
● Cadenas de nucleótidos:
❏ Tipos de enlaces:
➔ Covalentes: entre base, azúcar y fosfato •
➔ Enlace fosfodiéster: entre nucleótido y nucleótido
➔ Puentes de Hidrógeno: Entre base y base.

Sentido de las cadenas de nucleótidos: 5’→3’ | Cadenas complementarias en contrasentido.

● Leyes de Chargaff:
❏ La Ley de Chargaff se basa en la relación cuantitativa de los Nucleótidos que forman la doble
hélice del ADN, establece que la cantidad de Adenina (A) es igual a la cantidad de Timina (T),
y la cantidad de Guanina (G) es igual a la cantidad de Citosina (C).
❏ Complementariedad de bases nitrogenadas.
➔ A=T. Dos puentes de hidrógeno.
➔ C≡G. Tres puentes de hidrógeno.

● Complementariedad de Bases En la Transcripción:

● Diferencias estructurales entre DNA y RNA:

● DNA:

● RNA:

● Organización del DNA:

1. Genes.
2. Doble hélice.
 3. Nucleosoma.
4. Cuentas (Collar de perlas).
5. Cromatina condensada.
6. Cromosomas.
● Gen:
❏ Partícula de material genético que, junto con otras, se halla dispuesta en un orden fijo a lo
largo de un cromosoma, y que determina la aparición de los caracteres hereditarios en los
seres vivos.
● Partes del gen:

Variantes génicas:

● Tipos de variantes génicas:

❏ Mutaciones
➔ <1% de la población.
➔ Suelen estar asociados con una enfermedad.
❏ Polimorfismos
➔ >1% de la población.
➔ No siempre están asociados a una enfermedad.

● Tipos de mutaciones:

● Cromosomas humanos:
 ❏ Células haploides:
➔ 23 cromosomas.
➔ Óvulos.
➔ Espermatozoides.
❏ Células diploides:
➔ 23 pares de cromosomas = 46 cromosomas.
➔ Todas las células somáticas.
➔ 1 par sexual.

● Mutaciones cromosómicas:
❏ Numéricas
➔ Poliploidías:
- Triploidías.
- Tetraploidias.
➔ Aneuploidías:
- Monosomía.
- Trisomía.
- Tetrasomía.
- Producción de mosaicos.

❏ Estructurales
➔ Inversión.
➔ Deleción:
- Intersticial.
- Terminal
- Cromosoma en anillo.
➔ Translocaciones: •
- Recíprocas.
- Robertsonianas.

● Tipos de mutaciones ​Alteraciones del marco de lectura:

❏ Mutaciones por deleción
➔ Eliminación de nucleótidos que cambian la secuencia del DNA del marco de lectura.
❏ Mutaciones por inserción
➔ Agregación de uno o más nucleótidos en el marco de lectura del gen que hacen que
cambie la secuencia de codones.
❏ Mutaciones por sustitución.
➔ Silenciosas: Se cambia un nucleótido que da como resultado un codón diferente al
silvestre, pero que codifica para el mismo aminoácido.
➔ Con sentido: Se cambia un nucleótido que produce un codón diferente al silvestre
que codifica para un aminoácido distinto.
➔ Sin sentido: Se cambia un nucleótido que produce un codón de paro prematuro.
Como resultado, la proteína resultante esta truncada y con menor o nula
funcionalidad.

● Mutaciones puntuales:
 ● Ejemplo:

● Sustitución:

Ejemplo:

● Mutación
por
sustitución:
Con sentido:
 ● Ejemplo de mutación por sustitución Mutación con sentido:

● Ejemplo de mutación por sustitución

● Mutaciones que alteran el marco de lectura:

❏ Inserción
➔ Agregación de 1 o más nucleótidos.
❏ Deleción
➔ Eliminación de 1 o más nucleótidos.

● Ejemplo de mutación por deleción:

● Ejemplo de mutación
por Inserción:

Técnicas moleculares para diagnóstico y pronóstico:

● Hibridación de ácidos nucleicos.

❏ Desnaturalización.
❏ Alineamiento.
 ❏ Extensión.

● Técnicas moleculares:
❏ Principales técnicas
➔ Cariotipos.
➔ PCR.
➔ Microarreglos.
➔ Secuenciación.
❏ Propósitos
➔ Identificar variantes genéticas asociadas a enfermedades.
➔ Cuantificar ácidos nucleicos de patógenos.
➔ Medir la efectividad de algún tratamiento.
➔ Identificar predisposición para una enfermedad.
➔ Identificar factores genéticos protectores ante alguna patología.

● Cariotipos​:
❏ Citogenética
➔ Identificación de número y estructura de cromosomas.

● PCR
❏ Reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
❏ Tipos de PCR:
➔ Punto final.
➔ Tiempo real.
➔ Con retrotranscriptasa.
➔ Anidada.
➔ Multiplex.
➔ Para polimorfismos RFLPs.
➔ Discriminación alélica.

● Microarreglos:
❏ De identificación de polimorfismos.
❏ De identificación de expresión génica.
❏ Diagnóstico de enfermedades.
❏ Identificación de mutaciones​.

● Secuenciación
❏ Identificación de nuevas mutaciones.
❏ Identificación de edición de mRNA.
❏ Cuantificación de RNA para expresión génica.

DESARROLLO DE FÁRMACOS

VACUNAS GÉNICAS

● UNA ​VACUNA ​Es un antígeno (por lo general una proteína o un polisacárido) procedente de un
organismo patógeno, que una vez administrado en el organismo receptor estimula su sistema
inmunológico y le protege de la infección.
 ● Antígeno en una vacuna:​ Es una molécula que desencadena la respuesta inmunológica, como
preparación a una infección futura.

● La ​inmunidad colectiva​ se da cuando un grupo de personas adquiere inmunidad frente a un virus, lo

que frena su propagación.

Requisitos de una vacuna:

● Conferir protección completa y duradera.
● Preferiblemente de por vida, contra la enfermedad.
● Sin efectos adversos o nocivos para el paciente.
● Estable.
● Bajo precio, para su utilización masiva.

Vigilancia:
● Materias primas, auditorías a los proveedores.
● Los bancos de células y sistemas de siembra.
● El cumplimiento de las buenas prácticas de manufactura.
● La liberación y supervisión de lote a lote por autoridades nacionales de regulación.
● Consistencia de producción y mejora de la vigilancia, pre y post-comercialización

Clasificación de las vacunas:

● Vivas:
❏ Microorganismos vivos.
❏ Siguen activos infecciosamente.
❏ Se encuentran atenuados.
❏ Provocan fuertes respuestas inmunes protectoras y pueden conferir inmunidad de por vida
después de sólo una o dos dosis.
❏ Triple viral:
 ➔ Rubéola, sarampión, paperas​.

● Inactivas:
❏ Microorganismos enteros o Subunidades inmunógenas inactivas.
❏ Son antígenos inmunógenos no replicantes.
❏ No confieren inmunidad total.
❏ Se requiere de vacunas de refuerzo.
❏ Ejemplo:
➔ • Hepatitis A, Poliomielitis.

● Genéticas (recombinantes):
❏ Utiliza: Gen que codifica para la proteína inmunizante.
❏ Reduce costos de producción

● Vacunas toxoides​:
❏ Compuestas por toxinas producidas por los microorganismos que se detoxifican, eliminando
su poder patógeno, pero conservando su capacidad inmunógena.
● Víricas:
❏ Virus vivos o atenuados:
➔ Polio oral.
➔ Fiebre Amarilla.
➔ Rotavirus.
➔ Sarampión.
➔ Ruebola.
➔ Parotiditis.
❏ Virus muertos o inactivos:
➔ Polio inyectable.
➔ Encefalitis japonesa.
➔ Hepatitis A.
➔ Rabia.
➔ Gripe.
➔ Hepatitis B.
➔ Virus del Papiloma Humano.

● Vacunas bacterianas:
❏ Bacterias vivas o atenuadas:
➔ BCG (Tuberculosis).
➔ Fiebre tifoidea oral.

❏ Bacterias muertas o inactivas:

➔ Tosferina acelular,
➔ Haemophilus Influenzae tipo B.
➔ Meningococo C y ACWY.
➔ Neumococo 10 y 13 valentes.
➔ Cólera oral.
➔ Fiebre tifoidea parenteral.
➔ Neumococo 23 valente.
➔ Meningococo B.
➔ Difteria.
➔ Tétanos.

● Primera vacuna de la historia: ​Viruela.

● Primera vacuna recombinante: ​Hepatitis B.

Vacunas DNA recombinantes:

 ● Tipos de vacunas recombinantes:
❏ DNA recombinantes.
❏ Proteínas recombinantes.
❏ Vectores virales.

1. Se elige el gen que codifica a la proteína del virus de interés.

2. Se introduce en un vehículo.
3. El vehículo se implanta en células bacterianas/levaduras.
4. Se expresa y establece una respuesta inmune.
5. Se separa y filtra.

● Al ​administrar la vacuna​ de ácidos nucleicos, las células leen este material genético, lo procesan y
producen el antígeno.
● El ​antígeno estimula la producción de anticuerpos neutralizantes​, que buscarán a este antígeno
y lo etiquetaron para su eliminación.
● Se genera ​memoria inmunológica​: Funcionan como centinelas que le indican a las células inmunes
la presencia de la amenaza.

Vacunas de Proteínas recombinantes ​Virus like particles (VLPs) (Es decir, partículas "cuasi-idénticas" a los
virus);

● Son más seguras y fáciles de producir.

● Requieren incorporar adyuvantes para potenciar respuesta contundente, porque los antígenos por sí
solos pueden no ser suficientes para inducir la inmunidad necesaria a largo plazo.
● Hepatitis B o la del Papiloma humano.

● Seleccionar el gen del virus (Incluyen los componentes

o antígenos que estimulan mejor el sistema inmunitario).
● Ejm. Proteína de cápside de virus.
● Tiene la capacidad de autoensamblarse.
● Este gen se expresa en otro organismo (“recombinante”)
en grandes cantidades.
● Se purifican y se usan como vacunas.

Vacunas de Vectores Virales ;

● Virus como vector viral

❏ Vector replicante (Pueden perder los genes introducidos).
❏ No replicante (Se eliminan regiones claves para la replicación del virus vector).
➔ Atenuados para que no causen enfermedad.
➔ Modificados para transportar genes del virus.
➔ Partículas parecidas a virus.
● Estas vacunas conservan toda la estructura de interés, sin genoma viral.
● No se replica ni causan enfermedad.
● Inducen fuertes respuestas inmunes y son estables.

Vacunas de virus inactivadas o vivas atenuadas:

● La técnica ​“desoptimización de codones”​ permite generar virus atenuados.
● Esta técnica permite generar virus con secuencias nucleotídicas poco óptimas.
● Al conocer la secuencia del virus.
● El ​consorcio Codagenix​ comenzó a desarrollar vacuna basada en esta tecnología ⁓ Ya se han
diseñado múltiples genomas candidatos.
 ● Cada uno de estos virus es cultivado y probado in vivo, antes de iniciar pruebas en ensayos clínicos.

Vacunas de ácido nucleico:

● Consorcio INOVIO INO-4800.
● Posible candidato para inmunización.
● En preparación para comenzar los estudios clínicos en humanos muy pronto.
● 1ra vacuna basada en DNA en avanzar a fase de estudio con personas.

Vacunas de Subunidades de proteínas:

● La proteína Spike (S o S1 recombinante).
● Un consorcio en el Baylor College of Medicine se encuentra actualmente desarrollando una vacuna
basada en el dominio RBD.

Vacunas basadas en vectores de virus:

● Para COVID-19, en desarrollo:
❏ Vectores no-replicantes:
➔ 16 vacunas.
❏ Replicantes:
➔ 14 vacunas.

Vacunas basadas en vectores de virus:

● COVID-19: El grupo Chen Wei (NCT04313127).
❏ Ya comenzó pruebas clínicas en humanos con una rapidez sin precedentes.
❏ La vacuna COVID-19/aAPC se está desarrollando a través de la modificación de células
artificiales presentadoras de antígeno (aAPC).
❏ Usan un lentivirus que incorpora minigenes del SARS-CoV-2 y genes inmunomoduladores.
❏ El ensayo clínico de fase I que consta de 100 participantes comenzó el 15 de febrero de 2020
y la fecha estimada de finalización del estudio es el 31 de diciembre de 2024
(NCT04299724).

Cultivo de virus en células vivas:

● Los virus son parásitos intracelulares obligados, por ello se replican en cultivos celulares.
● Cultivan virus enteros, recombinantes o productos virales en células diferentes a los hospedadores
naturales.
● Dependiendo de la especie del virus y el tipo celular que se utiliza como sustrato, la replicación viral
puede resultar en la lisis de la célula hospedadora y la formación de placas de lisis virales.

● Para replicar se usan:

❏ Huevos embrionados.
❏ Animales de laboratorio.
❏ Cultivos celulares.

● Huevos embrionarios:
❏ Huevos de gallina o de pato.
❏ Se perfora la cáscara del huevo.
❏ Se inyecta en él una suspensión viral o un tejido que presuntamente contiene un virus y se
incuba a 37 °C.
❏ El desarrollo viral se detecta por la muerte del embrión o lesiones en las distintas membranas
del huevo.

● Animales de Laboratorio:
❏ Más usados en virología: ratones, ratas, cobayos, hámsters y conejos.
❏ Poco uso:
➔ Por el costo del mantenimiento de los bioterios.
➔ Riesgo en la manipulación.
 ➔ Aspectos éticos.
❏ Usos:​ Patogenia, oncogenicidad e inmunidad viral, ensayos de vacunas y en la preparación
de antisueros para diagnóstico.

● Cultivos celulares víricos:

❏ Muchos virus se replican de forma activa en cultivos celulares.
❏ Los sistemas de cultivo celular son monocapas de células vivas que sostienen el crecimiento
de los virus.
❏ La replicación del virus se detecta mediante el efecto citopático en la monocapa celular.
❏ Citopático: Alteraciones morfológicas visibles características en una línea susceptible debido
a la replicación del virus.
❏ Las líneas celulares pueden propagarse y/o mantenerse en el laboratorio, aunque lo más
habitual es adquirir los cultivos celulares monocapa comerciales.

● Cultivos celulares:
❏ Cultivos primarios:
➔ Un corte de tejido animal se prepara y cultiva.
❏ Líneas celulares diploides:
➔ Son aquellas que mantienen la infección vírica hasta de 20 a 50 pasadas y proceden
de células fetales o de recién nacidos.
❏ Líneas celulares continuas:
➔ Que se pueden mantener durante una cantidad indefinida de pasajes sucesivos, por
eso se dice que son inmortales. Proceden de cánceres o son células transformadas
in vitro.