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GENÉTICA MÉDICA

RICHARD MAITA HINOSTROZA Créditos:


MEDICO ASISTENTE PHD Santiago Ramón y Cajal
SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA PHD Javier Hernández Losa.
HOSPITAL NACIONAL RAMIRO PRIALÉ PRIALÉ Hospital Vall d'Hebron Barcelona

HUANCAYO - MAYO DEL 2018


BIOLOGÍA DEL CANCER
BIOLOGÍA DEL CANCER
• Cancer es una enfermedad en el cual un grupo de celulas
aberrantes crecen de manera incontrolada y no estan sujetas a
los procesos biologicos de la división celular.
• Cancer se define como un crecimiento incontrolado de celulas
de manera continuada e ilimitada.
• Un tumor se define como un crecimiento aberrante de celulas
– Tumores Benignos se circunscriben y se confinan en su
localización original.
– Tumores malignos. Son capaces de invadir tejidos
adyacentes o invadir el resto del cuerpo.
• Los tumores se clasifican por el tipo celular del que proceden.
• Los tumores pueden producirse por cualquier celula de
cualquier parte del cuerpo.
Las celulas normales se transforman en
tumorales

Selection within tumor for


“most cancerous” cells
Progression Driven by CIN
• Proposed model of molecular progression for tumors
following the CIN pathway

Sequence of key mutational events in the CIN pathway:


APC KRAS SMAD 2/4 p53

Normal Early Intermediate Late • Aneuploid


epithelium adenoma adenoma adenoma Adenocarcinoma • Microsatellite stable
(MSS)
Macroscopic progression

APC = adenomatous polyposis coli; KRAS = Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog; SMAD = mothers against decapentaplegic homolog.
1. Ahnen D. Am J Gastroenterol. 2011;106:190-198. Illustration adapted from reference.
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INMORTALIZATION
TELOMERASE
INSENSIBILITY
INHIBITOR FACT. CELL CYCLE

GROWTH FACTOR RECEPTORS


GROWTH
AUTONOMY SIGNAL TRANSDUCTION

APOPTOSIS p53
RESISTANCE “Survival”

NEOVASCULARIZATION FACTORS ALLOW


GROWTH AND STABILITY OF NEW
VESSELS

ADHESION MOLECULES
MIGRATION AND BLOOD SURVIVAL
METASTASIS ANCORAGE MOLECULES
MECANISMOS DE DEFENSA
Oncogenes & Tumor suppressors

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Oncogenes vs genes supresores
tumorales
Una de las diferencias importantes entre Oncogenes y Genes
supresores tumorales es que los oncogenes se activan dando una
ganancia de función de los denominados proto-oncogenes,
mientras que los genes supresores tumorales son alterados por
una inactivación que da lugar a una perdida de su función.

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ORIGEN CLONAL DEL CANCER
Cancer posee un origen Clonal
El cáncer es una enfermedad multigénica y multipaso que se origina a partir de una sola
célula anormal (origen clonal) con una secuencia de ADN alterada (mutación).
Los cánceres evolucionan mediante un proceso reiterativo de expansión clonal,
diversificación genética y selección clonal dentro de los paisajes adaptativos de los
ecosistemas tisulares. La dinámica es compleja, con patrones muy variables de diversidad
genética y arquitectura climática resultante
Driver and Passenger Mutations
A driver mutation is a mutation within a gene that confers a
selective growth advantage (thus promoting cancer
development), while passenger mutations are those that do not
provide a growth advantage.

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Inestabilidad Genomica (CIN)
Se refiere a la tendencia a acumular alteraciones
(mutaciones) en el genoma a lo largo de las diferentes
divisiones celulares.
Estas alteraciones pueden ser cambios de secuencia de
AN, reordenamientos cromosomicos o aneuploidia.
Es un evento clave en el desarrollo de la tumorogenesis,
puesto que acelera la acumulación de cambios geneticos
responsables de la progresión tumoral.
Multiples formas de daño del ADN provocan dicha
inestabilidad genomica y tumoregenesis.

13
Tumor heterogeneity

14
Tumor heterogeneity and
personalised medicine

15
MEDICINA PERSONALIZADA
Personilized Medicine

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CONCEPTOS BÁSICOS
Biología Molecular: Definición
• Parte de la biología que estudia los procesos vitales de los seres
vivos en función de las características de su estructura
molecular.
• Es la rama de la biología que trata de entender a nivel
molecular, las interacciones que existen entre diferentes
sistemas celulares (DNA, RNA y Proteínas)
• La Biología Molecular estudia el flujo de información desde el
ADN, pasando por ARN hasta las proteínas (Dogma central de
Biología Molecular)
• La biologia molecular tiene solapamientos con otras areas, en
especial la genética y la bioquímica.

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DNA
Ácido desoxirribonucleico: es una molécula
que almacena las instrucciones genéticas
utilizadas en el desarrollo y funcionamiento
de todos los organismos vivos conocidos y
muchos virus;
Es el almacenamiento a largo plazo de
información biológica;
Químicamente se compone de 4 nucleótidos
(A, T, C, G) que forman dos cadenas largas
que forman una estructura de doble hélice.
En la doble hélice, los nucleótidos siempre se
emparejan de la misma manera:
 A pairs with T
 G pairs with C

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Haploid vs Diploid Cells
• Haploid cells – cells with one set of chromosomes (one gene for
each trait):
– Symbolized by N
– All gametes (sex cells) are haploid
• Diploid cells – cells having homologous chromosomes (two genes
for each trait) :
– Symbolized by 2N
– All somatic cells are diploid

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What is A Gene ?
Un segmento de ADN que codifica la información para
sintetizar una proteína;
la unidad física y funcional básica de la herencia;
En humanos, los genes varían en tamaño desde unos cientos
de bases de ADN hasta más de 2 millones de bases;
El Proyecto del Genoma Humano ha estimado que los
humanos tienen entre 20,000 y 25,000 genes;
Cada persona tiene dos copias de cada gen, una heredada de
cada padre. La mayoría de los genes son iguales en todas las
personas, pero una pequeña cantidad de genes (menos del 1
por ciento del total) son ligeramente diferentes entre las
personas.

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What Is An Allele?
Un gen puede existir en diferentes formas llamadas alelos;
Los genes mutan y pueden tomar dos o más formas
alternativas; un alelo es una de estas formas de un gen. Por
ejemplo, el gen para el color de los ojos tiene diversas
variaciones (alelos), como un alelo para el color del ojo azul o
un alelo para los ojos marrones;
Un alelo puede ser dominante sobre el otro, alelo recesivo;
Si una célula lleva dos copias de un gen, es diploide para ese
gen;

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Alleles

Heterozygotes have one copy of each allele -


Homozygotes have 2 copies of one allele -

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Genotype vs Phenotype

Genotype is the combination of alleles found in an


organism –the organism’s full hereditary information;
Phenotype is the visible expression of the genotype – the
organism observed properties (morphology,
development, behavior);
Wild-type phenotype is the most common or generally
accepted standard
Mutant alleles are usually recessive
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La complejidad del Genoma Humano

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MUTACIONES Y
POLIMORFISMOS
Chromosomal mutations

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Copy-Number Variations
Copy number variation is a
type of structural variation,
specifically, it is a type
of duplication or deletion even
t that affects a considerable
number of base pairs.
In mammals, copy number
variations play an important
role in generating necessary
variation in the population as
well as disease phenotype

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Aneuploidy
Aneuploidy is the presence of an abnormal number
of chromosomes in a cell, for example a human cell having
45 or 47 chromosomes instead of the usual 46
An extra or missing chromosome is a common cause
of genetic disorders, including some human birth defects.
Some cancer cells also have abnormal numbers of
chromosomes.
Aneuploidy originates during cell division when the
chromosomes do not separate properly between the two
cells.

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HERRAMIENTAS
Gel Electrophoresis
The basic principle is that DNA,
RNA, and proteins can all be
separated by means of an electric
field.
In agarose gel electrophoresis,
DNA and RNA can be separated on
the basis of size by running the
DNA through an agarose gel.
Proteins can be separated on the
basis of size by using an SDS-PAGE
gel, or on the basis of size and
their electric charge by using what
is known as a 2D gel
electrophoresis.
GENERALIDADES DE LA PCR

• PCR (Polymerase Chain Reaction).

• Descrita por Kary Mullis en 1989 y fue premio Nobel en 1993.

• Consiste en la amplificacion de un fragmento de ADN


específico en presencia de otros fragmentos de ADN.

• Requerimientos de la reacción:
• ADN polimerasa “Termus aquaticus”
• Nucleotidos.
• ADN molde o cebador.
• ADN que se quiere amplificar.
GENERALIDADES DE LA PCR

• Desnaturalización inicial
T = 94°C 5-10 minutos

1. Desnaturalizar.
T = 94°C

2. Anillamiento. 30-45
T = 50-60°C Ciclos

3. Extensión.
T = 72°C

• Extensión Final
T = 72°C 10 minutos
Cantidad copias 2n n= nº de Ciclos
Primers
Un cebador es una cadena de ácido nucleico que sirve como
punto de partida para la síntesis de ADN.
Estos cebadores son generalmente oligonucleótidos cortos,
químicamente sintetizados, con una longitud de
aproximadamente veinte bases. Están hybredized a un ADN
objetivo, que luego es copiado por la polimerasa.
La replicación comienza en el extremo 3 'del cebador y copia el
filamento opuesto.
DETECCI ÓN DE ADENOVI RUS

• Desarrollo de primers específicos para el gen que codifica


para la proteína Hexón.

• Capaz de detectar 19 serotipos de adenovirus.

• Tamaño del amplicón de 139 pares de bases.

Condiciones de PCR
H 20 M 1.1 M 1.2 C+ C- 94°C, 7 minutos.
94°C, 1 minuto
55°C, 1 minuto. 40 ciclos
72°C, 1.5 minutos
72°C. 10 minutos
139 pb

Echevarria M et al. J.Clin.Microbiol.36:(11);3323-3326. 1998


REORDENAM
REORDENAM I ENTODEL
I ENTO DEL TCR-GAM
TCR-GAM MM
AA

Analisis de Fragmentos
Gene-Scan
Gene-Scan Agarosa
Agarosa

ivo
gat o
Ne tiv
ol ega
M u tr a 1

Co r a 2
Blanco

es a 1

est a 2

ntr l N
Blanco

M u co

Contro
M uestr

M uestr
Blanco
n
Bla
M uestra
M uestra 1 1

M uestra
M uestra 2 2

Control
Control Negativo
Negativo

JJM
JJM van
van Dongen
Dongen et et
al.al. Leukemia
Leukemia (2003)
(2003) 17,17, 2257–2317
2257–2317
Instrumentación.

 Termociclador. Conforman el
Composición del equipo:  Lector de mismo
fluorescencia. instrumento.
 Recolector de datos.

Energía de
excitación.

Canales de
lectura.
Detección traslocación PAX3/PAX7-FKHR
(Rhabdomiosarcoma Alveolar)

PCR Genérica (PAX3/7)

PCR Específica (PAX3)


Metodos de Secuenciación del ADN
Ejemplo: Deleción del Exon 19 del gen EGFR

Del E746-A750

Al 1

Al 2

ATTCGGATTACCATCGTA
ATTCGGACATCGTA
Inmunohistoquímica
• Inmunología + histología + química

Demostración de antígenos (proteínas) en tejidos /


células mediante anticuerpos específicos

Y
Cromógeno-

Complejo avidina – biotina


enzima conjugado

Anticuerpo secundario –
biotina

Anticuerpo primario

Antígeno celular
Patrones de tinción
Ventajas
• Tejido parafinado, tejido
congelado, citologías

• Preservación de la morfología:
– Identificar qué células expresan
el antígeno
– Localizar la localización celular
del antígeno

• Elevada sensibilidad y
especificidad
HMB45
Limitaciones
• Técnicas
– Especificidad
• Fondo, tinciones inespecíficas

– Sensibilidad
• Recuperación antigénica
• Sistemas de amplificación

AUTOMATIZACIÓN
SISTEMAS DE AMPLIFICACIÓN
• Interpretación
– Cuantificación

ANÁLISIS DE IMAGEN
Hibridación in situ
• Fluorescente (FISH)
– DNA
• Cromogénica (CISH), plata (SISH)
– RNA, DNA
Tipos de sondas FISH

• Centroméricas (alteraciones
numéricas)
• Locus específicas (amplificaciones,
traslocaciones, deleciones) HER2
– Fusión
– “Split” (separación)
• Teloméricas (deleciones)
• Pintado cromosómico

Bcl 2
Sondas centroméricas
Centrómero Cr A Gen en Cr A

Centrómero Cr B Centrómero Cr A

Normal Normal

Trisomía Amplificación
Cr A gen A
Sondas de fusión
Cr A Cr B t(A;B)
Sondas de “split”
Cr A Cr B t(A;B)
Muchas Gracias

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