Microbiología Español

Machine Translated by Google
Prescott, Harley y Klein
Microbiología
Séptima edición
Universidad Joanne M.
Willey Hofstra
Linda M. Sherwood
Universidad Estatal de Montana
Christopher J. Woolverton
Universidad Estatal de Kent
PRESCOTT, HARLEY Y LA MICROBIOLOGÍA DE KLEIN, SÉPTIMA EDICIÓN
Publicado por McGraw-Hill, una unidad comercial de The McGraw-Hill Companies, Inc., 1221 Avenue of the Americas, Nueva York,
NY 10020. Copyright © 2008 de The McGraw-Hill Companies, Inc. Todos los derechos reservados. Ninguna parte de esta publicación
puede reproducirse o distribuirse de ninguna forma ni por ningún medio, ni almacenarse en una base de datos o sistema de
recuperación, sin el consentimiento previo por escrito de The McGraw-Hill Companies, Inc., incluidos, entre otros, en cualquier red u
otro almacenamiento o transmisión electrónica, o transmisión para el aprendizaje a distancia.
Es posible que algunos accesorios, incluidos los componentes electrónicos e impresos, no estén disponibles para los clientes fuera
de los Estados Unidos.
Este libro está impreso en papel reciclado sin ácidos que contiene un 10 % de residuos posconsumo.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 DOW/DOW 0 9 8 7 6
ISBN 978–0–07–299291–5
MHID 0–07–299291–3
Editorial: Colin Wheatley/ Janice Roerig-Blong

Editora sénior de desarrollo: Lisa A. Bruflodt
Gerente sénior de marketing: Tami Petsche
Gerente sénior de proyectos: Jayne Klein
Supervisora principal de producción: Sandy Ludovissy
Gerente sénior de proyectos de medios: Jodi K. Banowetz
Productor sénior de medios: Eric A. Weber
Diseñador: John Joran

(USO) Imagen de portada: Dennis Kunkel Microscopy, Inc.
Coordinador principal de investigación fotográfica: Carrie K. Burger
Investigación fotográfica: Mary Reeg
Productor del suplemento: Mary Jane Lampe
Compositor: Carlisle Publishing Services
Tipo de letra: 10/12 Times Roman
Impresora: RR Donnelley Willard, OH
La sección de créditos de este libro comienza en la página C-1 y se considera una extensión de la página de derechos de autor.
Datos de catalogación en publicación de la Biblioteca del Congreso
Willey, Joanne M.
Prescott, Harley y la microbiología de Klein / Joanne M. Willey, Linda M. Sherwood, Christopher J.
Woolverton. — 7ª ed.
pags. cm.
Incluye índice.
ISBN 978–0–07–299291–5 - ISBN 0–07–299291–3 (copia impresa: papel alcalino)
1. Microbiología. I. Sherwood, Linda M. II. Woolverton, Christopher J. III. PrescottLansing M.
Microbiología. IV. Título.
QR41.2.P74 2008
616.9'041—dc22 2006027152
chip
www.mhhe.com
Este texto está dedicado a nuestros mentores: John Waterbury, Richard

Losick, Thomas Bott, Hank Heath, Pete Magee, Lou Rigley, Irv Snyder
y R. Balfour Sartor. Y a nuestros alumnos.
—Joanne M. Willey
—Linda M. Sherwood
—Christopher J. Woolverton
Contenidos breves
Parte I Introducción a la Microbiología 21 Bacterias: los deinococos y las no proteobacterias

Gram negativos 519
1 Historia y alcance de la microbiología 1
22 Bacterias: Las proteobacterias 539
2 El estudio de la estructura microbiana: microscopía y
Preparación de espécimen 17 23 Bacterias: las grampositivas de bajo GC 571
3 Estructura y función de las células procarióticas 39 24 Bacterias: Los Gram Positivos Altos en GC 589
4 Estructura y función de las células eucarióticas 79 25 Los Protistas 605
26 Los Hongos (Eumycota) 629
Parte II Nutrición Microbiana, Crecimiento,

y control Parte VIII Ecología y Simbiosis
5 Nutrición microbiana 101 27 Ciclos biogeoquímicos e introducción
6 Crecimiento microbiano 119 Ecología microbiana 643
7 Control de Microorganismos por Medios Físicos y Químicos 28 Microorganismo en agua dulce y marina
149 Entornos 667
Agentes
29 Microorganismos en Ambientes Terrestres 687
Parte III Metabolismo Microbiano 30 interacciones microbianas 717
8 Metabolismo: energía, enzimas y regulación 167
191 Parte IX Resistencia no específica (innata)

9 Metabolismo: liberación y conservación de energía
225
y respuesta inmunitaria
10 Metabolismo: el uso de la energía en la biosíntesis
31 Resistencia del huésped no específica (innata) 743
32 Inmunidad específica (adaptativa) 773

Parte IV Biología Molecular Microbiana
y Genética
Parte X Enfermedades microbianas y su control
11 Genética microbiana: estructura génica, replicación y
Expresión 247 33 Patogenicidad de los microorganismos 815
12 Genética Microbiana: Regulación de la Expresión Génica 291 34 Quimioterapia antimicrobiana 835
13 Genética microbiana: mecanismos de variación genética 317 35 Microbiología Clínica e Inmunología 859
36 La epidemiología de las enfermedades infecciosas 885
Parte V Tecnología del ADN y Genómica 37 Enfermedades humanas causadas por virus y priones 913
14 Tecnología de ADN recombinante 357 38 Enfermedades humanas causadas por bacterias 947
15 Genómica microbiana 383 39 Enfermedades humanas causadas por hongos y protistas 997
Parte VI Los Virus Parte XI Microbiología Alimentaria e Industrial

16 Los Virus: Introducción y Características Generales 407 40 Microbiología de los Alimentos 1023
17 Los Virus: Virus de Bacterias y Archaea 427 41 Microbiología Industrial y Aplicada 1049
18 Los Virus: Virus Eucarióticos y Otros Acelulares

Agentes infecciosos 447 Apéndice IA Revisión de la química de las
moléculas biológicas A-1
Parte VII La Diversidad del Mundo Microbiano
19 Evolución microbiana, taxonomía y diversidad 471 Apéndice II Metabólico Común
20 Las arqueas 503 caminos A-13
IV
Contenido
Acerca de los autores xi 4.7 Cloroplastos ÿ 90

Prefacio xii Diversidad microbiana y ecología 4.2: El origen de
la célula eucariótica 91
4.8 el núcleo y la división celular 91
4.9 Revestimientos celulares 94
Parte I Introducción a la Microbiología
externos 4.10 Cilios y flagelos 4.11 95
1 Historia y alcance de la microbiología Miembros del mundo 1 Comparación de células procarióticas y eucarióticas
96
1.1 microbiano El descubrimiento de los microorganismos 1
1.2 El conflicto por la generación espontánea La edad 3
1.3 de oro de la microbiología ÿ Técnicas y aplicaciones 6 Parte II Nutrición Microbiana, Crecimiento,
1.4 1.1: El método científico ÿ Enfermedad 1.2: Postulados 8 y control
moleculares de Koch El desarrollo de la microbiología
industrial 10 5 Nutrición microbiana 101
11 5.1 101
Los Requerimientos Nutricionales Comunes
1.5
5.2 Requisitos de carbono, hidrógeno, oxígeno y electrones
y ecología microbiana 12
102
1.6 El alcance y la relevancia de la microbiología 13
5.3 Tipos nutricionales de microorganismos 102
1.7 El futuro de la microbiología 14
5.4 Requerimientos de Nitrógeno, Fósforo,
y azufre 104
2 El estudio de la estructura microbiana: microscopía y preparación
5.5 Factores de crecimiento 105
de muestras 2.1 Lentes y curvatura de la luz 2.2 El microscopio 17 5.6 105
Absorción de nutrientes por los medios
óptico 2.3 Preparación y tinción
electrónica 2.5 Nuevasdetécnicas
muestrasen2.4 Microscopía
microscopía 17
5.7 de cultivo celular ÿ Aspectos destacados 110
18
históricos 5.1: El descubrimiento del agar como agente
25
solidificante y el aislamiento de cultivos puros
28 112
31 5.8 Aislamiento de cultivos puros ÿ 113
Técnicas y aplicaciones 5.2: El enriquecimiento y aislamiento
3 Estructura y función de las células procarióticas 39 de cultivos puros 116
3.1 Descripción general de la estructura de las células procarióticas 39

3.2 Membranas de las3.1:
y ecología células procarióticas ÿ Diversidad microbiana 42 6 Crecimiento microbiano 119
6.1 El ciclo celular procariótico 119
Microbios monstruosos 43 6.2 La curva de crecimiento 123
3.3 La matriz citoplasmática ÿ 48 6.3 Medición del crecimiento microbiano 128
Diversidad microbiana y ecología 3.2: 6.4 El cultivo continuo de microorganismos 131
Imanes vivos Los 51 6.5 La influencia de los factores ambientales en
3.4 plásmidos nucleoides 52
Crecimiento 132
3.5 La pared celular 53
ÿ Diversidad microbiana y ecología 6.1:
3.6 bacteriana Paredes celulares 55 Vida por encima de 100°C 138
3.7 de arqueas Secreción de 62 6.6 Crecimiento Microbiano en Ambientes Naturales 142
3.8 proteínas en procariotas Componentes 63
3.9 externos a la pared celular 7 Control de Microorganismos por Agentes
sesenta y cinco
3.10 Quimiotaxis 3.11 La 71 149

Físicos y Químicos
endospora bacteriana 73 7.1 149
Definiciones de términos de uso frecuente ÿ
Técnicas y aplicaciones 7.1: Seguridad en el
4 Estructura y función de las células eucarióticas 79 laboratorio de microbiología El patrón de 150
4.1 Descripción general de la estructura de las células eucarióticas 79 7.2 muerte microbiana 151
4.2 4.3 La membrana de plasma y la estructura de la membrana 81 7.3 Condiciones que influyen en la eficacia de los
La Matriz Citoplasmática, Microfilamentos, agentes antimicrobianos El uso de métodos 152
Filamentos intermedios y microtúbulos ÿ Enfermedad 83 7.4 físicos en el control El uso de agentes químicos en 153
4.1: Organelos de las vías biosintéticas-secretoras y 84 7.5 158
el control ÿ Técnicas y aplicaciones 7.2: Universal
4.4 endocíticas Ribosomas eucarióticos Mitocondrias
84 Precauciones para Laboratorios de Microbiología 160
4.5 88 7.6 Evaluación del agente antimicrobiano
4.6 88 Eficacia 164
v
nosotros Contenido
Parte III Metabolismo Microbiano ÿ Cositas microbianas 11.2:

ARN catalítico (ribozimas) 268
11.7 El código genético 275

8 Metabolismo: energía, enzimas y regulación 167
11.8 Traducción 276
8.1 Una visión general del metabolismo 8.2 167
Energía y trabajo 8.3 Las 8.4
termodinámica leyes de la libre y
Energía 169
reaccionesmetabolismo
8.5 El papel 8.6
del Reacciones
ATP en el de 169
12 Genética microbiana: regulación de genes
Expresión 291
oxidación-reducción, electrones 170
12.1 Niveles de Regulación de la Expresión Génica 292
171
12.2 Regulación de la iniciación de la transcripción ÿ Aspectos 293
históricos destacados 12.1:
Transportadores y sistemas de transporte de 172
El descubrimiento de la regulación 294
8.7 electrones Enzimas Naturaleza y significado de la 174
génica 12.3 Regulación de la elongación de la transcripción 302
8.8 regulación metabólica 8.9 Canalización metabólica 8.10
12.4 Regulación a nivel de traducción 12.5 Sistemas 305
Control de la actividad enzimática 180
reguladores globales 12.6 Regulación de la expresión 307
180
génica en Eucarya
181
y arqueas 313
9 Metabolismo: liberación y conservación de energía 191 13 Genética Microbiana: Mecanismos

9.1 Procesos de combustible quimioorganotróficos 191 de Variación Genética 317
9.2 Respiración aeróbica 193 13.1 Mutaciones y sus bases químicas 317
9.3 La descomposición de la glucosa en piruvato 194 13.2 Detección y aislamiento de mutantes 324
9.4 El ciclo del ácido tricarboxílico 198
13.3 Reparación del ADN 326
9.5 Transporte de electrones y fosforilación
13.4 Creación de variabilidad genética 13.5 329
oxidativa Respiración anaeróbica 200
Elementos transponibles 13.6 Plásmidos 332
9.6 Fermentaciones ÿ Aspectos históricos 205
bacterianos 334
9.7 destacados 9.1: 207
13.7 Conjugación bacteriana 337
210
13.8 Transformación del ADN 342
Microbiología y catabolismo de
13.9 Transducción 345
9.8 carbohidratos y polímeros de reserva intracelular durante la
13.10 Mapeo del genoma 13.11 349
Primera Guerra Mundial 9.9 Catabolismo de lípidos 9.10 210
Catabolismo de proteínas y aminoácidos 9.11 Quimiolitotrofia 9.12
Fototrofia 211 Recombinación y mapeo del genoma en virus
350
212
212
214 Parte V Tecnología del ADN y Genómica
ÿ Diversidad microbiana y ecología 9.2:
Drenaje de ácido minero 215 14 Tecnología de ADN recombinante 357
14.1 Perspectivas históricas ADN 357
10 Metabolismo: el uso de la energía en la biosíntesis 225 14.2 sintético 14.3 La reacción en 361
10.1 Principios que rigen la biosíntesis 10.2 Los 226 cadena de la polimerasa 14.4 Electroforesis en gel 362
metabolitos precursores 10.3 La fijación de CO2 por 227 14.5 Clonación de vectores y creación de ADN 366
autótrofos 10.4 Síntesis de azúcares y polisacáridos 228 recombinante 366

10.5 Síntesis de aminoácidos 10.6 Síntesis de purinas, 230 14.6 Construcción de bibliotecas genómicas 370
pirimidinas, 235 14.7 Inserción de ADN recombinante en células huésped 371
14.8 Expresión de genes extraños en células huésped 371
y nucleótidos 10.7 241 ÿ Técnicas y aplicaciones 14.1: Visualización de proteínas
con fluorescencia verde 374
Síntesis de lípidos 242
14.9 Aplicaciones de la ingeniería genética 375
ÿ Técnicas y aplicaciones 14.2: Tumores vegetales e
Parte IV Biología Molecular ingeniería genética de la naturaleza 14.10 Impacto 378
Microbiana y Genética
social de la tecnología del ADN recombinante 380
11 Genética Microbiana: Estructura Genética, 15 Genómica microbiana 383

Replicación y expresión ÿ Aspectos 247
15.1 Introducción 383
destacados históricos 11.1:
15.2 Determinación de secuencias de ADN 384
La aclaración de la estructura del ADN 248
15.3 Secuenciación aleatoria del genoma completo 15.4 384
11.1 El ADN como material genético 11.2 El flujo de 249
Bioinformática 388
información genética 11.3 Estructura de los ácidos 251
15.5 Genómica funcional 388
nucleicos 11.4 Replicación del ADN 11.5 Estructura 252
15.6 Genómica comparativa 15.7 391
génica 11.6 Transcripción 253
Proteómica 393
264
15.8 Perspectivas de los genomas microbianos 395
268
15.9 Genómica ambiental 402
Contenido vienes
Parte VI Los Virus 20 Las arqueas 503

20.1 Introducción a Archaea 20.2 503
16 Los Virus: Introducción y General Phylum Crenarchaeota 20.3 Phylum 507
Características 407 Euryarchaeota ÿ Diversidad microbiana y 508
16.1 Desarrollo temprano de la virología ÿ 407 ecología 20.1:
Puntos destacados históricos 16.1: La enfermedad y la Filogenia arqueológica: ¿algo más que
Colonización de América 408 Crenarchaeota y Euryarchaeota? 511
16.2 Propiedades generales de los virus 16.3 409 ÿ Diversidad microbiana y ecología 20.2:
Archaea metanótrofa 513
La estructura de los virus 16.4 Reproducción 409
de virus 16.5 El cultivo de virus 16.6 Purificación 417
y análisis de virus 16.7 Principios de la 417 21 Bacterias: Deinococos y no
taxonomía de virus ÿ Cositas microbianas 16.2: 419 proteobacterias Gram negativas 21.1 Aquificae y 519
El origen de los virus 423 Thermotogae 21.2 Bacterias fotosintéticas Deinococcus- 519
423 Thermus ÿ Diversidad microbiana y ecología 21.1: 520
21.3 520
17 Los Virus: Virus de Bacterias y Archaea 427
El mecanismo de la motilidad deslizante 527
17.1 Clasificación de virus bacterianos y archaeales Fagos 428
21.4 Phylum Planctomycetes 21.5 530
17.2 virulentos de ADN de doble cadena ÿ Diversidad microbiana 428
Phylum Chlamydiae 21.6 Phylum 531
y ecología 17.1:
429 Spirochaetes 21.7 Phylum 532
Crecimiento independiente del huésped de un virus Archaeal
436 Bacteroidetes 534
17.3 Fagos de ADN monocatenario 17.4
Fagos de ARN 17.5 Bacteriófagos templados 437
y lisogenia 17.6 Genomas de bacteriófagos 438 22 Bacterias: Las proteobacterias 539
444 22.1 540
Clase Alphaproteobacteria
22.2 Clase Betaproteobacteria 22.3 546
18 Los virus: virus eucarióticos y otros agentes infecciosos Clase Gammaproteobacteria ÿ Diversidad 551
acelulares 18.1 Taxonomía de los virus eucarióticos 18.2 447 microbiana y ecología 22.1:
447 Bioluminiscencia bacteriana 559
Reproducción de virus de vertebrados ÿ Diversidad microbiana
448 22.4 Clase Deltaproteobacteria 22.5 562
y ecología 18.1:
Clase Epsilonproteobacteria 567
SARS: evolución de un virus 451
ÿ Técnicas y Aplicaciones 18.2: 23 Bacterias: las grampositivas de bajo GC 571
Construcción de un 458
23.1 Introducción general 23.2 571
virus 18.3 Infecciones citocidas y daño celular 18.4 459
Clase Mollicutes (los micoplasmas) 571
Infecciones virales
Virus persistentes,
y cáncer latentes
18.6 Virus y lentas
de plantas 18.5
18.7 Virus de 461
23.3 Estructura de peptidoglicano y endosporas ÿ 572
hongos y protistas 18.8 Virus de insectos 18.9 Viroides y virusoides
18.10 Priones 461
Cositas microbianas 23.1: Esporas en el 576
463
espacio 23.4 Clase Clostridia 23.5 Clase Bacilli 576
466
578
466
467
24 Bacterias: Los Gram Positivos Altos en GC 24.1 589
468
Propiedades Generales de los Actinomycetes 24.2 589
Suborden Actinomicineae 24.3 Suborden Micrococcineae 593
593
Parte VII La Diversidad del Mundo Microbiano
24.4 Suborden Corynebacterineae 24.5 595
19 Evolución microbiana, taxonomía y diversidad 471 Suborden Micromonosporineae 24.6 Suborden 597
19.1 Evolución microbiana 471 Propionibacterineae 24.7 Suborden 598
19.2 Introducción a la clasificación microbiana Streptomycineae 24.8 Suborden 598
y taxonomía 19.3 477 Streptosporangineae 24.9 Suborden Frankineae 601
Rangos taxonómicos 480 601
19.4 Técnicas para determinar la taxonomía y filogenia 24.10 Orden Bifidobacteriales 602
microbiana 19.5 Evaluación de la filogenia 481
microbiana 19.6 Las principales divisiones de la vida 19.7 488 25 Los Protistas 605
Manual de bacteriología sistemática de Bergey ÿ Diversidad 489 25.1 Distribución 606
y ecología microbiana 19.1: 493 25.2 Nutrición 606
25.3 Morfología 25.4 607
Listas de nomenclatura "oficiales": una carta
Enquistamiento y desenquistamiento 25.5 608
de Bergey's 19.8 A Survey of Procariotic 494
Reproducción 25.6 Clasificación de protistas 608
Phylogeny and Diversity
609
494
viii Contenido
ÿ Enfermedad 25.1: Floraciones de algas nocivas (FAN) 621 ÿ Diversidad microbiana y ecología 30.2: Coevolución
ÿ Técnicas y aplicaciones 25.2: Importancia práctica de de los animales y sus comunidades microbianas intestinales 725
las diatomeas 624 30.2 Interacciones entre humanos y microbios 734
30.3 Microbiota normal del cuerpo humano 735
26 Los Hongos (Eumycota) 629 ÿ Técnicas y aplicaciones 30.3: Probióticos para
26.1 Distribución 630 humanos y animales 739
26.2 Importancia 26.3 630

Estructura 631 Parte IX Resistencia no específica (innata)
26.4 Nutrición y Metabolismo 632
y respuesta inmunitaria
26.5 Reproducción 26.6 632
Características de las divisiones fúngicas 635 31 Resistencia del huésped no específica (innata) 743
31.1 Descripción general de la resistencia del huésped 743
Parte VIII Ecología y Simbiosis 31.2 Células, tejidos y órganos del sistema inmunitario 31.3 744
Fagocitosis 31.4 Inflamación 752
27 Ciclos biogeoquímicos y ecología microbiana 756
introductoria 27.1 Fundamentos de diversidad 643 31.5 Barreras Físicas en Inespecíficas (Innatas)
microbiana y ecología 643 Resistencia 758
ÿ Diversidad microbiana y ecología 27.1: Ecología 31.6 Mediadores químicos en inespecíficos (innatos)
microbiana versus microbiología ambiental 27.2 Ciclos 644 Resistencia 762
biogeoquímicos 27.3 El entorno físico 27.4 Ecología microbiana y sus 644
métodos: una descripción general 653 773
32 Inmunidad específica (adaptativa) 32.1
Descripción general de la inmunidad específica (adaptativa) 774
659
32.2 Antígenos 32.3 Tipos de inmunidad específica (adaptativa) 774
ÿ Técnicas y Aplicaciones 27.2: Termofílico
32.4 Reconocimiento de la extrañeza ÿ Técnicas y aplicaciones 776
Microorganismos y Biotecnología Moderna 660
32.1: Selección de donantes para trasplantes de tejidos u 778
órganos 32.5 Biología de células T 32.6 Biología de células
28 Microorganismos en agua dulce y marina 779
B 32.7 anticuerpos
Entornos 667
781
28.1 Entornos marinos y de agua dulce 667
786
ÿ Enfermedad 28.1: Nuevos agentes en medicina—
789
El mar como nueva frontera 668
32.8 Acción de los anticuerpos 799
28.2 Adaptaciones microbianas al agua marina y dulce
ÿ Técnicas y Aplicaciones 32.2: Monoclonal
Entornos 671
Tecnología de anticuerpos 800
28.3 Microorganismos en ambientes marinos 28.4 673
32.9 Resumen: El papel de los anticuerpos y los linfocitos
Microorganismos en ambientes de agua dulce 682
en la defensa inmunitaria 802
32.10 Tolerancia inmunológica adquirida 802
29 Microorganismos en ambientes terrestres Los suelos 687
32.11 Trastornos inmunológicos 803
29.1 como ambiente para microorganismos 29.2 687
Suelos, plantas y nutrientes 689

ÿ Microbial Tidbits 29.1: Un involuntario Parte X Enfermedades
Experimento de nitrógeno a escala global 691 microbianas y su control
29.3 Microorganismos en el entorno del suelo 29.4 Microorganismos 692
y la formación de diferentes suelos 33 Patogenicidad de los microorganismos 815
693 33.1 815
Relaciones huésped-parásito
29.5 Asociaciones de Microorganismos con Plantas Vasculares 818
33.2 Patogenia de las enfermedades
696 820
virales 33.3 Resumen de la patogenia
ÿ Diversidad microbiana y ecología 29.2: Las micorrizas y la 824
evolución de las plantas vasculares 697
bacteriana 33.4 Toxigenicidad
ÿ Técnicas y aplicaciones 33.1: Detección y eliminación
29.6 Microorganismos del suelo y la atmósfera 708 de endotoxinas 830
ÿ Diversidad microbiana y ecología 29.3: suelos, termitas, 830
33.5 Defensa del huésped contra la invasión microbiana 33.6
Microbios intestinales y metano atmosférico ÿ Técnicas y 709
Mecanismos microbianos para escapar de las defensas del
aplicaciones 29.4: Mantener fresco el aire interior con
huésped 832
microorganismos del suelo 29.7 La biosfera subterránea 710
29.8 Microorganismos del suelo y salud humana 711

713 34 Quimioterapia antimicrobiana 835
34.1 El desarrollo de la quimioterapia 835
30 interacciones microbianas 717 ÿ Técnicas y aplicaciones 34.1: El uso
de antibióticos en la investigación microbiológica 837
30.1 Interacciones microbianas ÿ 717
34.2 Características generales de los medicamentos antimicrobianos 837
Diversidad microbiana y ecología 30.1: Wolbachia
720 34.3 Determinación del nivel de actividad antimicrobiana 34.4 840
pipientis: ¿El microbio más infeccioso del mundo?
Medicamentos antibacterianos 841
Contenido ix
34.5 Factores que influyen en la eficacia de los medicamentos 38.3 Enfermedades por contacto directo ÿ 964
antimicrobianos 34.6 Resistencia a los 849 Enfermedad 38.2: biopelículas ÿ 969
849 Enfermedad 38.3: estafilococos resistentes a los antibióticos ÿ 972

medicamentos ÿ Enfermedad 34.2: Abuso de antibióticos y
Enfermedad 38.4: una breve historia de la sífilis 38.4 Enfermedades 974
resistencia a los medicamentos
850 transmitidas por los alimentos y el agua 979
34.7 Medicamentos antimicóticos 854 ÿ Técnicas y aplicaciones 38.5: Toxinas clostridiales como
855 agentes terapéuticos: beneficios de las proteínas más
34.8 Medicamentos antivirales
tóxicas de la naturaleza 983
34.9 Medicamentos antiprotozoarios 856
38,6 Enfermedades
Sepsis y Shock
Zoonóticas
Séptico
38,7
38,5 987
Infecciones Dentales 987
35 Microbiología Clínica e Inmunología 859
991
35.1 Especímenes ÿ 859
Técnicas y aplicaciones 35.1: Prácticas microbianas
estándar 861
39 Enfermedades humanas causadas por hongos y protistas 997
39.1 Hongos patógenos y protistas 997
35.2 Identificación de microorganismos a partir de muestras 864
ÿ Microbial Tidbits 35.2: Biosensores: 39.2 Enfermedades transmitidas por 999
El futuro es ahora 871 el aire 39.3 Enfermedades transmitidas por 1001
875 artrópodos ÿ Enfermedad 39.1: Una breve historia de 1002
35.3 Inmunología clínica ÿ Técnicas y
la malaria 39.4 Enfermedades por contacto directo 39.5 1008
aplicaciones 35.3: Historia e importancia de la
serotipificación 876 Enfermedades transmitidas por los alimentos y el agua 39.6 1012
35.4 Pruebas de susceptibilidad 35.5 882 Enfermedades oportunistas ÿ Enfermedad 39.2: La aparición de 1016
882 la candidiasis 1018
Computadoras en microbiología clínica
36 La epidemiología de las enfermedades infecciosas 885 Parte XI Microbiología Alimentaria e Industrial

36.1 Terminología epidemiológica ÿ Aspectos 886
históricos destacados 36.1: John Snow: el primero 40 Microbiología de los alimentos 40.1 1023
Epidemiólogo 36.2 886 1024
Crecimiento de microorganismos en los alimentos
Frecuencia de medición: las herramientas del epidemiólogo 887 40.2 Crecimiento microbiano y deterioro de los alimentos 1026
36.3 Reconocimiento de una enfermedad infecciosa en una Aspectos históricos
Control del
destacados
deterioro de
40.1:
losUn
alimentos
ejército 40.3
viaja ÿboca 1028
población ÿ Hitos históricos 36.2:“Tifoidea 888
abajo 40.4 Enfermedades transmitidas por los alimentos
María” 889 1030
36.4 Reconocimiento de una epidemia 36.5 El ciclo 889 1032
de las enfermedades infecciosas: Historia de una enfermedad ÿ Aspectos 891 ÿ Aspectos destacados históricos 40.2: Fiebre tifoidea y
destacados históricos 36.3: Los primeros indicios de propagación carne enlatada 1033
de una enfermedad infecciosa de persona a persona 896 40.5 Detección de patógenos transmitidos por alimentos 1035
36.6 Virulencia y modo de transmisión 897 40.6 Microbiología de alimentos fermentados 1036
36.7 Enfermedades infecciosas y patógenos emergentes y reemergentes 36.8 ÿ Técnicas y Aplicaciones 40.3: Chocolate:
Control de epidemias ÿ Aspectos destacados históricos 36.4: 897 El lado dulce de la fermentación 1037
Las primeras inmunizaciones 36.9 Preparación contra el bioterrorismo ÿ 900 ÿ Técnicas y Aplicaciones 40.4: Cultivos iniciadores,
902 Infecciones por bacteriófagos y plásmidos 40.7 1039
Aspectos destacados históricos 36.5: 1346—El primer ataque de
guerra biológica registrado 36.10 Viajes globales y consideraciones sanitarias 905 Microorganismos como alimentos y enmiendas alimentarias
1046
905
907 41 Microbiología Industrial y Aplicada 1049
36.11 Infecciones nosocomiales 908 41.1 Purificación de agua y análisis sanitario 1050
ÿ Técnicas y aplicaciones 41.1: Enfermedades transmitidas
37 Enfermedades humanas causadas por virus y priones 913 por el agua, suministros de agua y filtración lenta con arena 1051
37.1 Enfermedades transmitidas por 914 41.2 Tratamiento de Aguas Residuales 1054
el aire ÿ Enfermedad 37.1: Síndromes de Reye y Guillain-Barré 918 41.3 Microorganismos utilizados en microbiología
37.2 Enfermedades transmitidas por artrópodos ÿ Enfermedad 37.2: Fiebres 922 industrial ÿ Técnicas y aplicaciones 1060
hemorrágicas virales— 41.2: El potencial de las arqueas termófilas en
Una historia microbiana Lección 923 biotecnología 41.4 Crecimiento de microorganismos 1061
37.3 Enfermedades de contacto directo 925 en ambientes controlados 41.5 Productos principales de la
37.4 Enfermedades transmitidas por los alimentos y el agua 939 microbiología industrial 41.6 Biodegradación y 1064
ÿ Aspectos históricos destacados 37.3: Una breve historia de la 941 biorremediación por 1070
poliomielitis 37.5 Enfermedades zoonóticas 941
37.6 Enfermedades priónicas 944 Comunidades 1075
ÿ Diversidad microbiana y ecología 41.3: Metanógenos—
38 Enfermedades humanas causadas por bacterias 947 Un nuevo papel para un grupo microbiano único 1078
38.1 Enfermedades transmitidas por el aire 948 41.7 Bioaumentación ÿ Diversidad microbiana y ecología 41.4: Un 1080
38.2 Enfermedades transmitidas por artrópodos 960 hongo con un apetito voraz
1081
ÿ Aspectos históricos destacados 38.1: Los peligros
de la investigación microbiológica 960
X Contenido
41.8 Microbios como productos 1082

ÿ Técnicas y aplicaciones 41.5: Estreptavidina-biotina
Unión y biotecnología 41.9 1084
Impactos de la biotecnología microbiana 1086
Apéndice I Una revisión de la química

de las moléculas biológicas A-1
Apéndice II Metabólico Común

caminos A-13
Glosario G-1
Créditos C-1
Índice I-1
Sobre los autores
años, ha impartido cursos de microbiología general, genética, biología, genética

Joanne M. Willey ha sido una microbiana y fisiología microbiana. ella ha servido
profesor de la Universidad de Hofstra en como editor de Focus on Microbiology Education de ASM, y ha
Long Island, Nueva York desde participó y contribuyó a numerosas conferencias ASM para
1993, y recientemente fue ascendido Docentes de Grado (ASMCUE). Ella también ha trabajado con
a profesor titular. La Dra. Willey recibió su Maestros de K-12 desarrollarán una unidad basada en un kit para introducir la microbiología
licenciatura en Biología de en el plan de estudios de la escuela primaria, y es coautor con
la Universidad de Pensilvania, Barbara Hudson un manual de laboratorio de microbiología general, Exploraciones
donde su interés en la microbiología en microbiología: un enfoque de descubrimiento, publicado por Prentice-Hall. Su
comenzó con el trabajo sobre cianobacterias asociación con McGraw-Hill comenzó cuando ella
crecimiento en corrientes eutróficas. Ella preparó las guías de estudio para la quinta y sexta ediciones de Microbiología. Sus
obtuvo su Ph.D. en biológico intereses no académicos se centran principalmente en su familia.
oceanografía (especialidad en microbiología marina) de la También le gusta leer, hacer caminatas, hacer jardinería y viajar. Ella puede
Instituto Tecnológico de Massachusetts-Woods Hole Oceanográfico
ser contactado en lsherwood@montana.edu.
Programa Conjunto de la Institución en 1987. Luego fue a la Universidad de Harvard,
donde pasó cuatro años como becaria posdoctoral estudiando Christopher J. Woolverton
la bacteria filamentosa del suelo Streptomyces coelicolor. doctor willey es profesor de Ciencias Biológicas
continúa investigando activamente este fascinante microbio y ha y miembro de la facultad de posgrado en
es coautor de varias publicaciones que se centran en su complejo ciclo de desarrollo. Ciencias Biológicas y
Es miembro activo de la American Society for Microbiology y ha formado parte del La Escuela de Ciencias Biomédicas de la
consejo editorial de la Universidad Estatal de Kent en
revista Applied and Environmental Microbiology desde 2000. Dr. Kent, Ohio. Dr. Woolverton también
Willey enseña regularmente microbiología a estudiantes de biología, así como a se desempeña como Director de la KSU
estudiantes aliados de la salud. También imparte cursos de biología celular, Centro de Preparación para la Salud Pública,
microbiología marina y técnicas de laboratorio en genética molecular. que supervisa su Centro de Capacitación
La Dra. Willey vive en la costa norte de Long Island con su esposo. BSL-3. Obtuvo su licenciatura en Wilkes College,
y dos hijos. Es una ávida corredora y le gusta esquiar, caminar, navegar y leer. Wilkes-Barre, Pensilvania y una maestría y un doctorado. en Medicina
Puede comunicarse con ella en biojmw@hofstra.edu. Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad de West Virginia. Pasó
dos años como becario postdoctoral en la Universidad de Carolina del Norte en
Linda M. Sherwood es una Chapel Hill estudiando telefonía móvil.
miembro del Departamento de Microbiología inmunología. Los intereses de investigación del Dr. Woolverton se centran en
de la Universidad Estatal de Montana. su la detección y el control de patógenos bacterianos. Dra. Woolverton
interés en y sus colegas han desarrollado el primer biosensor de cristal líquido para la detección
La microbiología fue impulsada por la e identificación inmediata de microorganismos, y un sistema de polímeros naturales
último curso que tomó para completar un para la detección controlada de antibióticos.
Licenciatura en Psicología en entrega. Publica y frecuentemente da conferencias sobre estas dos tecnologías. El
Universidad del Oeste de Illinois. Ella Dr. Woolverton ha enseñado microbiología a estudiantes de ciencias y a estudiantes
pasó a completar una maestría en relacionados con la salud, así como cursos de posgrado en
Microbiología en la Universidad de Inmunología y Fisiología Microbiana. es un miembro activo
Alabama, donde estudió la utilización de histidina por de ASM, sirviendo en los consejos editoriales de Microbiología de ASM
Pseudomonas acidvorans. Posteriormente obtuvo un Ph.D. en Genética en la Educación y enfoque en la educación en microbiología. Ha participado y contribuido
Universidad Estatal de Michigan, donde estudió la esporulación en en numerosas conferencias de ASM para educadores universitarios, sirviendo como
Saccharomyces cerevisiae. Dejó brevemente el mundo microbiano para copresidente de la 2001
estudiar la biología molecular de las moscas de la fruta del burro en el estado de Michigan conferencia. Dr. Woolverton reside en Kent, Ohio con su esposa
Universidad antes de mudarse a la Universidad Estatal de Montana. La Dra. Sher y tres hijas. Cuando no está en el laboratorio o en el salón de clases, disfruta
Wood siempre ha tenido un gran interés por la enseñanza y su formación en senderismo, andar en bicicleta, jugar con la tecnología y simplemente pasar el tiempo
psicología le ha ayudado a comprender los modelos actuales de con su familia. Su dirección de correo electrónico es cwoolver@kent.edu.
la cognición y el aprendizaje y sus implicaciones para la enseñanza. Sobre el
xi
Prefacio
Prescott, Harley, and Klein's Microbiology ha adquirido la reputación de cubrir la amplia indujo el uso de la primera persona para describir el flujo de información
disciplina de la microbiología en profundidad . (p. ej., ver los inicios de los capítulos) y planteamos preguntas dentro del texto,
no se encuentra en ningún otro libro de texto. La séptima edición presenta una incitando a los estudiantes a reflexionar sobre el tema en cuestión. Cada capítulo es
nuevo equipo de autores. Como nuevos autores, nos enfrentamos a la abrumadora dividido en encabezados de sección numerados y organizado en un formato de esquema.
tarea de hacer un libro de texto superior aún mejor. Traemos más de 40 Algunos capítulos se han reorganizado significativamente para
años de experiencia combinada en investigación y docencia. Nuestro gran interés por la presentar el material en un formato más lógico (p. ej., capítulos 12, 28,
enseñanza se ha visto fomentado por nuestra participación en talleres y conferencias y 39). Como en ediciones anteriores, la terminología clave está en negrita y
diseñados para explorar, implementar y evaluar claramente definido. Además, algunas palabras ahora están resaltadas en rojo.
diversos enfoques pedagógicos. Por lo tanto, uno de nuestros objetivos para esta edición fuente: estos incluyen nombres de científicos con los que los estudiantes
era hacer que el libro fuera más accesible para los estudiantes. Para lograr esto, nos debe ser conocido, así como los nombres de las técnicas y los microbios.
enfocamos en tres áreas específicas: legibilidad, material gráfico, Cada término del extenso glosario, que incluye más de 200 nuevos
y la integración de varios temas clave a lo largo del texto. y entradas revisadas, incluye una referencia de página.
NUESTRAS FORTALEZAS
Obra de arte
Para involucrar a los estudiantes de hoy, un libro de texto debe hacer más que ofrecer texto
Legibilidad e imágenes que describen adecuadamente el tema en cuestión. Nuestra meta
Hemos conservado el estilo de escritura relativamente simple y directo utilizado es hacer que los estudiantes quieran leer el texto porque encuentran el
en ediciones anteriores de Microbiology de Prescott, Harley y Klein. material interesante y atractivo. La séptima edición trae una
Sin embargo, para la séptima edición, hemos agregado elementos de estilo diseñados nuevo programa de arte que presenta representaciones tridimensionales y
para involucrar aún más a los estudiantes. Por ejemplo, tenemos la introducción colores brillantes y atractivos. Sin embargo, no sólo las cifras existentes
actualizado, se han añadido más de 200 figuras nuevas. el actualizado
De la glucólisis
O
El programa de arte también incluye nuevas características pedagógicas como mapas
C O conceptuales (ver figuras 8.1, 12.1 y 31.1) y anotación de claves .
piruvato
C O 1 El piruvato se descarboxila (es decir, pierde un
carbono en forma de CO2). Los dos carbonos vías y procesos (véanse las figuras 9.9 y 11.17).
CH3 restantes están unidos a la coenzima A por un enlace
de alta energía. La energía de este enlace se utilizará
para impulsar la siguiente reacción. Acetil-CoA es un
SOBRE metabolito precursor.
9 El malato se oxida, NADHH _

1 abrazadera ÿ
generando más NADH y Filamento
Centro
CO2 principal
regenerando oxaloacetato, 1 La polimerasa central de cadena principal sintetiza ADN a medida
que es necesario para aceptar O
que la helicasa DnaB desenrolla las cadenas de ADN originales. La
Con el abrazadera ÿ
los dos carbonos del acetil-CoA ADN de los padres polimerasa del núcleo de cadena rezagada está a punto de completarse
CoA CS Acetil CoA esperando ser
y continuar el ciclo. 2 Los dos carbonos restantes del cargado ADN helicasa
hebras en un fragmento de Okazaki. La ADN primasa comienza la síntesis del
piruvato se combinan con los cuatro complejo ÿ cebador de ARN para sintetizar el siguiente fragmento de Okazaki.
El oxaloacetato también es CH3 carbonos del oxalacetato. Esto crea el Rezagado
ADN primasa
un metabolito precursor. oxaloacetato Citrato citrato de molécula de 6 carbonos. playa
Previamente sintetizado
ARRULLO
ARRULLO Fragmento de Okazaki
NADHH _ QUÉ 2
CH2
RNA primero
CH2 HO C ARRULLO
SOBRE
ARRULLO 3 El citrato cambia la
CH2
disposición de los átomos para
formar ácido isocítrico.
9 ARRULLO
malato
3
ARRULLO
Ácido isocítrico
HO CH 6 carbonos
4 carbonos ARRULLO 2 Una vez completado el nuevo cebador de ARN, la ADN primasa
escenario
escenario se disocia y el complejo ÿ (cargador de abrazadera) carga una
HC
CH2 abrazadera ÿ en el cebador de plantilla.
Abrazadera ÿ siendo cargada
ARRULLO
HC ARRULLO sobre imprimación de plantilla
H2O 8
Ciclo TCA HO CH
ARRULLO
8 El fumarato ARRULLO SOBRE
reacciona con H2O
para formar malato.
5 carbonos 4
CH
escenario NADHH _
ARRULLO
HC
Con el
ARRULLO CH2 CO2
4 Se elimina otro
Fumarato CH2
7 carbono, creando el
3 La polimerasa central de la hebra retrasada alcanza el fragmento
ARRULLO QUÉ metabolito precursor de 5
FADH2 carbonos: de Okazaki sintetizado previamente y se disocia del ADN.
ARRULLO- Descartado
CH2 O cetoglutarato. En el
abrazadera ÿ
MODA 5 -cetoglutarato proceso, se forma NADH.
CH2 C O
CoA NAD
El succinato se oxida a 6
7 ARRULLO
CH2
fumarato. FAD sirve como ADN polimerasa I
succinato NADHH _ (no se muestra) finalmente
aceptor de electrones. CH2
elimina la imprimación y llena
el espacio
C CO2
PIB GTP
CoA del sistema operativo
5 El último carbono de la glucosa se

Pi Succinil CoA libera como dióxido de carbono.
4 La polimerasa central de hebra retrasada se asocia con la pinza ÿ
6 La CoA se escinde de la Se forma más NADH para su uso en
recién cargada y comienza la síntesis de un nuevo fragmento de
molécula de alta energía el ETS, y se forma el metabolito
Okazaki.
succinil-CoA. La energía liberada precursor de 4 carbonos succinil-CoA.
se usa para formar GTP, que
puede usarse para producir ATP o
usarse directamente para
suministrar energía a procesos
como la traducción.
xi
Prefacio XIII
Integración Temática CAMBIOS A LA SÉPTIMA EDICIÓN

Con el advenimiento de la genómica y el mayor alcance de la biología celular, las
La séptima edición de Prescott, Harley, and Klein's Microbiology es el resultado de
divisiones entre las subdisciplinas de la microbiología se han vuelto borrosas; por
una extensa revisión y análisis de ediciones previas, el aporte de los revisores y
ejemplo, el ecólogo microbiano también debe ser
conversaciones informales con nuestros
bien versado en fisiología microbiana, evolución y los principios
colegas. Como nuevo equipo de autores, nos comprometimos a mantener
y prácticas de biología molecular. Además, el microbiólogo
la cobertura en profundidad por la que se conoce a Microbiología , mientras que en
debe estar familiarizado con todos los grupos principales de microorganismos:
al mismo tiempo, aportando una nueva perspectiva no sólo a aspectos específicos
virus, bacterias, arqueas, protistas y hongos. A los estudiantes nuevos en microbiología
temas, sino también a la presentación general.
se les pide que asimilen vocabulario, hechos y, lo que es más importante, conceptos,
de una variedad aparentemente amplia de temas. los
desafío para el profesor de microbiología es integrar esencial Cobertura actualizada
conceptos a lo largo de la presentación del material mientras se transmite Cada año se realizan avances emocionantes en microbiología. Mientras nosotros
la belleza de los microbios y la emoción de este campo dinámico. entender que no todos estos son apropiados para la discusión en
Si bien las ediciones anteriores de Microbiología se destacaron por incorporar un libro de texto introductorio, hemos incorporado la información más actualizada y
la genética y el metabolismo a lo largo del texto, en esta edición descubrimientos recientes y emocionantes para mantener descripciones precisas de
hemos intentado acercar la diversidad del mundo microbiano estructuras y procesos y para ilustrar
en cada capítulo. Por supuesto, esto fue más fácil de hacer en aquellos puntos esenciales. Algunos ejemplos específicos incluyen una descripción actual de
capítulos dedicados a la evolución microbiana, la diversidad y la ecología la estructura y función de la ADN polimerasa III, la
(capítulos 19 a 30), pero nos desafiamos a nosotros mismos para incluir la diversidad papel de los virus en los ecosistemas marinos, la naturaleza ubicua de
microbiana en capítulos que tradicionalmente se basan en E. coli. Entonces, sistemas de secreción de tipo III, una cobertura actualizada de la respuesta
aunque los capítulos sobre genética (capítulos 11 a 13) principalmente inflamatoria y la comprensión actual de los orígenes del VIH y
procesos de revisión a medida que se revelan en E. coli, también exploramos Epidemiología de la influenza aviar.
también otros sistemas, como la regulación de la esporulación en
Bacillus subtilis y quorum sensing en V. fischerii (ver figuras
12.19 a 12.21). Mayor énfasis en la evolución y diversidad
También pensamos que era importante tejer el hilo de la evolución a lo largo microbiana
del texto. Comenzamos en el primer capítulo con una discusión sobre el árbol de la La evolución microbiana, la diversidad y la ecología ya no son subdisciplinas que los
vida universal (ver figura 1.1), con varios interesados en la genética microbiana deben ignorar.
versiones de "el gran árbol" que aparecen en capítulos posteriores. Es importante fisiología o patogenia. Por ejemplo, en los últimos 10
recordar a los estudiantes que las estructuras y los procesos evolucionaron años, enfermedades polimicrobianas, comunicación intercelular y
a su estado actual; que la selección natural está siempre en el trabajo (por ejemplo, Las biopelículas han sido reconocidas como importantes procesos microbianos.
el título y el tono del capítulo 13, ahora llamado Genética microbiana: mecanismos que vinculan estrechamente la evolución con la genética, la ecología con la fisiología y
de variaciones genéticas, han sido cambiados). ecología a la patogenia. La séptima edición se esfuerza por integrar
Finalmente, la séptima edición de Microbiología explora teorías sobre el origen de la estos temas a lo largo del texto. Comenzamos el capítulo 1 con una discusión sobre
vida a una profundidad que no se ve en otros textos de microbiología (capítulo 19). el árbol de la vida universal y, siempre que sea posible, traiga
diversas especies microbianas en discusiones para que los estudiantes puedan
De hecho, la profundidad de la cobertura ha sido uno de los pilares de comienzan a apreciar la tremenda variación en la microbiota
Microbiología de Prescott, Harley y Klein. El texto fue fundado mundo. El Capítulo 19 ahora cubre la evolución microbiana en mayor
en dos principios fundamentales: (1) los estudiantes necesitan una introducción profundidad que otros textos. Ha sido retitulado Microbial Evolution,
al conjunto de la microbiología antes de concentrarse en estudios especializados Taxonomía y Diversidad y el contenido significativamente revisado para
áreas, y (2) esta introducción debe proporcionar el nivel de comprensión requerido que la evolución microbiana se presenta como un componente clave de la
para que los estudiantes comprendan la base conceptual de los hechos. Seguimos microbiología. También introducimos y frecuentemente recordamos a los estudiantes de
comprometidos con este enfoque. Por lo tanto, la la enormidad de la diversidad microbiana. Al igual que ediciones anteriores, el
La séptima edición continúa brindando una introducción equilibrada y completa a La séptima edición presenta capítulos específicos que revisan los miembros del
todas las áreas principales de la microbiología. Este libro es adecuado mundo microbiano. Los capítulos específicamente dedicados a la ecología (capítulos
para cursos con orientaciones que van desde microbiología básica hasta 27 a 29) han sufrido
Microbiología médica y aplicada. Estudiantes preparándose para carreras revisiones significativas. Seguimos usando la clasificación.
en medicina, odontología, enfermería y profesiones relacionadas con la salud esquema expuesto en la segunda edición del Manual de Bacteriología Sistemática
encuentran el texto tan útil como aquellos que aspiran a carreras en investigación, de Bergey; Además, hemos introducido el Sistema Balti more de clasificación de
la enseñanza y la industria. Aunque dos cursos de biología y otro de virus y la Sociedad Internacional
se supone que la química es importante, proporcionamos una descripción general sólida del nuevo esquema de clasificación de los protistólogos para eucariotas en
de la química relevante en el apéndice I. capítulos 18 y 25, respectivamente.
xiv Prefacio
ciones de Microbiología puede notar que, además de las preguntas que

bacterias
cuestionan la retención de hechos clave, se han agregado nuevas
preguntas diseñadas para estimular más la reflexión.
Flavobacteria
clorobio
leptonema
Clostridium CAMBIOS DE CONTENIDO POR PARTE
Bacilo
heliobacteria
Termoplasma
Arqueoglobo
Arthrobacter Cada capítulo ha sido revisado minuciosamente y casi todos han sido
pOPS19
Haloferax
cloroflexo
Termo
revisados de manera significativa. En algunos capítulos, hay cambios tanto
termotoga Metanospirillum
pOPS66 Médico de Marina. 1 temperatura baja en la organización como en el contenido (p. ej., los capítulos 11 a 13),
Aquifex PSLPSL gp. 1 temperatura baja
Raíz 22 12
gp. 2 baja temperatura
EM17
mientras que muchos otros capítulos conservan el mismo orden de
Sulfolobus
presentación pero el contenido se ha actualizado. Un resumen de material
arqueas
nuevo importante por partes incluye:
Homo
Zea (maíz)
criptomonas 0.1 cambios por sitio
Aclia
Costaria Parte I
porfira
Giardia Capítulo 1: Introducción ampliada a los tres dominios de la vida y los

microbios que se encuentran en cada dominio.
Capítulo 3: Mayor cobertura de la diferencia entre la estructura celular de
las arqueas y las bacterias.
eucaria
Capítulo 4—Discusión reorganizada y actualizada de la ruta biosintética-
secretora y la endocitosis.
Escritura para la comprensión de los estudiantes
Nuestro objetivo como nuevo equipo de autores era conservar el estilo de

escritura directo de las ediciones anteriores y, al mismo tiempo, hacer que el
texto fuera más legible para el estudiante universitario promedio. Por lo tanto,
hemos agregado elementos de estilo diseñados para ayudar al lector a
comprender el contexto más amplio del tema en cuestión. Por ejemplo, el texto
de apertura de varios capítulos va acompañado de un mapa conceptual, lo
que permite al estudiante visualizar las relaciones entre los temas componentes
que se encuentran dentro de un capítulo. Partes del texto ahora están escritas
en primera persona; queremos que los estudiantes aprecien que nosotros,
como autores, entendemos que el aprendizaje es un proceso que necesita ser guiado.
Programa de arte significativamente mejorado El

estudiante de hoy debe participar visualmente. El material gráfico de cada
capítulo de la séptima edición ha sido revisado y actualizado para incluir
imágenes tridimensionales realistas diseñadas para despertar el interés y la
curiosidad de los estudiantes. Este nuevo programa utiliza colores brillantes y
Parte II
atractivos que le dan al texto un aspecto atractivo. Hemos aprovechado la
oportunidad para actualizar y anotar varias imágenes para que los estudiantes Capítulo 6—Discusión actualizada del ciclo celular procariótico, incluidos
puedan visualizar un proceso complejo paso a paso. Se han agregado nuevas los modelos actuales de división y septación cromosómica; cobertura
funciones pedagógicas, como mapas conceptuales y anotaciones de vías actualizada y ampliada de biopelículas y detección de quórum.
clave. Las representaciones tridimensionales ayudan al estudiante a apreciar
la belleza y la elegancia de la celda, al mismo tiempo que hacen que el material
Parte III
sea más comprensible.
Capítulo 8: una nueva sección que brinda una descripción general del
metabolismo y un marco para las discusiones más detalladas sobre el
metabolismo que siguen; la quimiotaxis se presenta como un ejemplo
Preguntas para repaso y reflexión Nuestra creencia
de regulación de una respuesta conductual mediante la modificación
de que los conceptos son tan importantes como los hechos, si no más, también covalente de enzimas.
se refleja en las preguntas para repaso y reflexión que aparecen a lo largo de Capítulo 9—Discusión reorganizada del metabolismo quimioorganotrófico
cada capítulo. Aquellos que han usado ediciones anteriores para ilustrar las conexiones entre las vías utilizadas
Prefacio XV
y cómo estos caminos suministran los materiales necesarios para un abolismo; Parte VIII
adición de una discusión sobre la fototrofia basada en rodopsina.
Capítulo 27—Reescrito y retitulado Ciclos biogeoquímicos
Capítulo 10—Reorganizado para correlacionar más claramente N-, P- y
e Introducción a la Ecología Microbiana. Cobertura ampliada de
Mecanismos de asimilación de S con la síntesis de aminoácidos.
El ciclo biogeoquímico ahora incluye el ciclo del fósforo.
y nucleótidos; la discusión de la síntesis de peptidoglucanos se incluye en la
La discusión sobre la ecología microbiana enfatiza la importancia
discusión de la biosíntesis de polisacáridos.
y aplicación de enfoques independientes de la cultura. La discusión sobre la
purificación del agua y el tratamiento de aguas residuales ha sido
Parte IV se trasladó al capítulo 41, Microbiología aplicada e industrial.

Capítulo 28—Ampliado y reorganizado para cubrir la microbiota
Capítulo 11—Reorganizado para centrarse únicamente en la estructura del genoma
comunidades que se encuentran en los principales biomas dentro de los ecosistemas marinos y
y replicación, estructura génica y expresión génica.
ambientes de agua dulce. El papel de los océanos en la regulación
Capítulo 12—Se enfoca exclusivamente en la regulación de la expresión génica;
se introduce el calentamiento global.
reorganizado según el nivel en el que la regulación
El Capítulo 29—Reorganizado para presentar primero los suelos como un medio
ocurre; discusión actualizada y ampliada de riboswitches y
ambiente, es seguido por un tratamiento más profundo y actualizado de
Regulación por pequeñas moléculas de ARN.
micorrizas, rizobios y patógenos de plantas. Se aproxima a
Capítulo 13—Abarca mutación, reparación y recombinación en el
estudiando el ambiente del subsuelo y los nuevos descubrimientos en
contexto de procesos que introducen variación genética en las poblaciones.
este campo en crecimiento ahora están incluidos.
Capítulo 30—Interacciones microbianas previamente presentadas en
El capítulo 27 se ha movido a este capítulo, donde están
Parte V presentado junto con las interacciones humano-microbio (anteriormente
Capítulo 14—Comienza con un mapa conceptual y luego se basa en él presentado con inmunidad innata), ayudando a transmitir el concepto de que el
describir los principales pasos involucrados en la construcción de cuerpo humano es un ecosistema.
moléculas de ADN recombinante con énfasis en que

La tecnología del ADN no se limita a unos pocos modelos e industriales.
Parte IX
microorganismos
Capítulo 31: “Resistencia no específica del huésped” reorganizada y actualizada como
Capítulo 15—Reescrito para explorar las muchas formas en que la genómica ha
un capítulo propio (la microflora normal ahora está en el capítulo
cambiado la microbiología. Secciones ampliadas en
30); secciones mejoradas sobre sustancias antimicrobianas naturales.
bioinformática y genómica funcional, y una nueva sección introduce la genómica
Capítulo 32—Reorganizado y actualizado para mejorar los vínculos entre las
ambiental (metagenómica).
actividades inmunitarias innatas y adquiridas; conceptos integrados de inmunología
médica.
Parte VI Capítulo 33—La mayoría de los mecanismos de virulencia se han actualizado o
Capítulo 16—Una nueva sección que describe la reproducción del virus en ampliado; Se agregó una sección sobre las defensas del huésped frente a la
términos generales, por lo que este capítulo ahora puede ser independiente como un invasión microbiana para vincular los procesos de enfermedades infecciosas con el huésped.
Introducción a los virus. inmunidad.
Parte VII Parte X

Capítulo 19—Reescrito y retitulado Evolución microbiana, taxonomía y diversidad; el Capítulo 34—El contenido se enfoca en el mecanismo de acción de cada
capítulo se abre ahora con un análisis en profundidad agente antimicrobiano; sección añadida sobre fármacos antiprotozoarios.
debate sobre el origen de la vida. También se ha discutido sobre técnicas Capítulo 35—Ahora incluye microbiología clínica e inmunología; reorganizado y
moleculares y su importancia en la taxonomía microbiana. actualizado para reflejar la clínica actual
ha sido ampliado. prácticas de laboratorio.
Capítulo 20—De acuerdo con descubrimientos recientes que describen el Capítulo 36—Nuevo enfoque sobre el importante papel de la epidemiología
ubicuidad de las arqueas, la séptima edición presenta las diferencias entre los en medicina preventiva, por lo que las vacunas ahora están cubiertas en
microbios en los dominios bacteriano y arqueal este capítulo (anteriormente se encontraba en el capítulo 32); nueva sección sobre
en el capítulo 3. Por lo tanto, el capítulo 20 ahora presenta un análisis más profundo Se agregó preparación para bioterrorismo.
mire algunos de los detalles de la fisiología arqueal, la genética, Capítulo 37—Reorganizado y actualizado para reflejar la patogenia viral; agentes
taxonomía y diversidad. selectos (potencialmente bioterroristas) destacados; influenza
Capítulo 25—El capítulo protista ha sido completamente reescrito en sección aumentada para incluir la información más actualizada sobre la influenza
acuerdo con la reclasificación de Eucarya de 2005 por parte de la aviar; Se actualizaron las secciones de etiología, patogenia y tratamiento del VIH;
Sociedad Internacional de Protistólogos. Se pone énfasis en nueva sección sobre zoonosis virales.
protistas médica y ambientalmente importantes. Por lo tanto, el capítulo titulado Capítulo 38—Cobertura ampliada de la patogenia bacteriana; agentes selectos
Las algas encontradas en ediciones anteriores ha sido eliminado y los protistas (bioterrorismo potencial) destacados; nuevas secciones
fotosintéticos ahora se tratan en el capítulo 25. sobre la enfermedad estreptocócica del grupo B y las zoonosis bacterianas.
xvi Prefacio
Capítulo 39—Reorganizado y actualizado para reflejar las rutas de transmisión Notas con referencias cruzadas
de enfermedades (similar a los capítulos 37 y 38); nuevas secciones sobre
• Las notas en el texto en letra azul remiten a los estudiantes a otras partes del
cyclospora y microsporidia. libro para reseñar.
Parte XI
Preguntas de repaso y reflexión dentro de la narrativa
Capítulo 40—Discusión ampliada de las bacterias del ácido láctico, probióticos:
• Las preguntas de revisión a lo largo de cada capítulo ayudan a los estudiantes
fermentación del chocolate que ahora se presenta en un cuadro de Técnicas
a dominar los conceptos de la sección antes de pasar a otros temas.
y aplicaciones.
Capítulo 41—Revisado para incluir la purificación de agua y el tratamiento de
aguas residuales. Nueva sección sobre nanotecnología; sección ampliada el color que emiten después del tratamiento con una mezcla especial de colorantes (figura 2.13a). 2.3 PREPARACIÓN Y TINCIÓN DE LAS MUESTRAS Aunque los
Por lo tanto, los microorganismos pueden verse y contarse directamente en un nicho ecológico
sobre la bioquímica de la biorremediación. relativamente intacto. microorganismos vivos pueden examinarse directamente con el
Identificación de microorganismos a partir de muestras: Técnicas inmunológicas (sección 35.2) microscopio óptico, a menudo deben fijarse y teñirse para aumentar
la visibilidad, acentuar las características morfológicas específicas y
preservarlos para estudios futuros.
1. Haz una lista de las partes de un microscopio óptico y describe sus funciones.
2. Defina resolución, apertura numérica, distancia de trabajo y fluorocromo. Fijación

HERRAMIENTAS PARA EL APRENDIZAJE 3. Si se observa una muestra con un objetivo de 5X en un microscopio con un ocular de 15X,
Las células teñidas que se ven en un microscopio deben parecerse lo más posible a las células
¿cuántas veces se ha ampliado la imagen?
vivas. La fijación es el proceso mediante el cual las estructuras internas y externas de las células y
4. ¿Cómo depende la resolución de la longitud de onda de la luz, el índice de refracción y
los microorganismos se conservan y fijan en su posición. Inactiva las enzimas que podrían alterar la
la apertura numérica? ¿Cómo se relacionan la resolución y la magnificación?
Vista previa del capítulo 5. ¿Cuál es la función del aceite de inmersión?
morfología celular y fortalece las estructuras celulares para que no cambien durante la tinción y la
observación. Por lo general, un microorganismo muere y se adhiere firmemente al portaobjetos del

6. ¿Por qué la mayoría de los microscopios de luz no usan lentes oculares de 30X para obtener un mayor aumento?
microscopio durante la fijación.
¿catión?
• Cada capítulo comienza con una vista previa: una lista de conceptos 7. Describa brevemente cómo funcionan los microscopios de campo oscuro, contraste de
Hay dos tipos fundamentalmente diferentes de fijación.
fase, contraste de interferencia diferencial y epifluorescencia y el tipo de imagen que
importantes discutidos en el capítulo. proporciona cada uno. Dar un uso específico para cada tipo.
La fijación por calor se usa rutinariamente para observar procariotas. Por lo general, una película
de células (un frotis) se calienta suavemente a medida que se pasa un portaobjetos
1ElHistoria y alcance
de la microbiología
Louis Pasteur, uno de los más grandes científicos del siglo XIX, sostenía que Fuente de energía
“La ciencia no conoce país, porque el conocimiento pertenece a la humanidad, y es
Quimioorganotrofo - moléculas orgánicas
una antorcha que ilumina el mundo”.
Quimiolitotrofo: moléculas inorgánicas
Fotótrofo: luz
AVANCE atp
• La microbiología se define no solo por el tamaño de sus sujetos, sino también por la son necesarios para la producción de pan, queso, cerveza, antibióticos, Fuente de carbono
técnicas que utiliza para estudiarlos. vacunas, vitaminas, enzimas y muchos otros productos importantes. De autótrofo — CO2 Precursor monómeros
y otros macromoléculas
• Los microorganismos incluyen entidades acelulares (p. ej., virus), células procaríticas hecho, la biotecnología moderna descansa sobre una base microbiológica. metabolitos
Heterótrofas: moléculas orgánicas
bloques de construcción
y células eucarióticas. Los microorganismos celulares se encuentran en los tres
dominios de la vida: Bacteria, Archaea, Eucarya. • El desarrollo de la microbiología Aunque la mayoría de los microorganismos desempeñan funciones
como disciplina científica ha dependido de la disponibilidad del microscopio y de la beneficiosas o benignas, algunos dañan a los humanos y han alterado Fuente de electrones
capacidad de aislar y desarrollar cultivos puros de microorganismos. El desarrollo la sociedad durante milenios. Las enfermedades microbianas, sin duda, Organótrofos: moléculas orgánicas
Potencia reductora (electrones)
de estas técnicas surgió en gran parte de estudios que refutan la Teoría de la jugaron un papel importante en eventos históricos como la caída del
Litótrofa: moléculas inorgánicas
Generación Espontánea y otros que establecen que los microorganismos pueden Imperio Romano y la conquista del Nuevo Mundo. En 1347, la peste o
causar enfermedades. peste negra, una enfermedad transmitida por artrópodos, golpeó a
Europa con una fuerza brutal y mató a 1/3 de la población (alrededor Figura 8.1 Descripción general del metabolismo. Las estructuras celulares de los organismos se ensamblan a partir de varias macromoléculas (p. ej., ácidos nucleicos y
• La microbiología es una gran disciplina; ha tenido y seguirá teniendo un gran de 25 millones de personas) en cuatro años. Durante los siguientes 80 proteínas). Las macromoléculas se sintetizan a partir de monómeros y otros bloques de construcción (p. ej., nucleótidos y aminoácidos), que son los productos de rutas bioquímicas
impacto en otras áreas de la biología y del ser humano en general. años, la enfermedad atacó una y otra vez, acabando finalmente con el que comienzan con metabolitos precursores (p. ej., piruvato y -cetoglutarato). En los autótrofos, los metabolitos precursores surgen de las vías de fijación de CO2 y vías
bienestar.
75 % de la población europea. El efecto de la peste fue tan grande que relacionadas; en heterótrofos, surgen de reacciones de las vías metabólicas centrales. El poder reductor y el ATP se consumen en muchas rutas metabólicas. Todos los
algunos historiadores creen que cambió la cultura europea y preparó organismos pueden definirse metabólicamente en términos de su fuente de energía, fuente de carbono y fuente de electrones. En el caso de los quimioorganotrofos, la fuente de
el camino para el Renacimiento. Hoy continúa la lucha de los energía es una molécula orgánica que también es fuente de carbono y electrones. Para los quimiolitotrofos, la fuente de energía es una molécula inorgánica que también es la
microbiólogos y otros contra asesinos como el SIDA y la malaria. fuente de electrones; la fuente de carbono puede ser CO2 (autótrofos) o una molécula orgánica (heterótrofos). Para los fotótrofos, la fuente de energía es la luz, la fuente de
tamaño En términos de número y masa, se estima En este capítulo introductorio, presentamos el mundo microbiano carbono puede ser CO2 o moléculas orgánicas, y la fuente de electrones puede ser agua (fotótrofos oxigénicos) u otra molécula reducida como el sulfuro de hidrógeno (fotótrofos
La importancia
que losde los microorganismos
microbios no%
contienen el 50 puede exagerarse.
del carbono biológico y el 90 para brindar una idea general de los organismos y agentes que estudian anoxigénicos).
% del nitrógeno biológico de la Tierra; superan con creces a todos los los microbiólogos. Luego describimos el desarrollo histórico de la ciencia
demás grupos de organismos del planeta. Además, se encuentran en de la microbiología y su relación con la medicina y otras áreas de la
todas partes: desde los respiraderos geotérmicos en las profundidades del biología. Finalmente, discutimos el alcance, la relevancia y el futuro de la
océano hasta el hielo ártico más frío, en la piel de cada persona. Son los microbiología moderna.
1 Aislar el ADN para
principales contribuyentes al funcionamiento de la biosfera, siendo
ser clonado.
indispensables para el ciclo de los elementos esenciales para la vida.
También son una fuente de nutrientes en la base de todas las cadenas y
redes alimentarias ecológicas. Lo que es más importante, ciertos
1.1 MIEMBROS DEL MUNDO MICROBIANO BACTERIAS ARQUEA
microorganismos llevan a cabo la fotosíntesis, rivalizando con las plantas
en su función de capturar dióxido de carbono y liberar oxígeno a la La microbiología a menudo se ha definido como el estudio de organismos 2 Usar una restricción
enzima o PCR para
atmósfera. Esos mi crobios que habitan en los seres humanos también y agentes demasiado pequeños para ser vistos claramente a simple vista,
generar fragmentos de
desempeñan funciones importantes, como ayudar al cuerpo a digerir los es decir, el estudio de microorganismos. Debido a que los objetos de ADN.
alimentos y producir vitaminas B y K. Además, la sociedad en general se beneficiamenos
de losdemicroorganismos,
un milímetro de ya que no se pueden ver con claridad y deben ser
diámetro
Gene
Las proteínas reguladoras genéticas pueden Gene
Transcripción
unirse al ADN y controlar si
comienza la transcripción. Transcripción Las proteínas reguladoras genéticas
pueden unirse al ADN y controlar si
En los campos de observación, el azar favorece sólo a las mentes preparadas. Atenuación: la transcripción puede terminar muy 3 Generar un recombinante
pronto después de haber comenzado debido a la comienza o no la transcripción. molécula insertando
(En el campo de la observación, el azar favorece sólo a las mentes preparadas.) vector lineal
formación de un terminador transcripcional. El nivel de compactación de la cromatina fragmentos de ADN en un
Vector vector de clonación.
-Louis Pasteur Unión de un metabolito a un riboswitch en puede influir en la transcripción.
El ARNm puede causar la terminación prematura
de la transcripción.
ARNm ARNm
Traducción Las proteínas represoras de la traducción 4 Introducir recombinante
pueden unirse al ARNm y evitar que Traducción El ARN antisentido puede unirse al ARNm y molécula en un nuevo huésped.
comience la traducción. controlar si comienza o no la traducción. Nuevo anfitrión
El ARN antisentido puede unirse al ARNm y

controlar si comienza o no la traducción.
La unión de un metabolito a un ribointerruptor en el Proteína

ARNm puede bloquear la traducción.
Proteína postraducción Inhibición de retroalimentación y covalente
postraducción Las moléculas pequeñas pueden las modificaciones (reversibles e
unirse (de forma no covalente) a una proteína y Figura 14.1 Pasos en la clonación de un gen. Cada paso que se muestra en
irreversibles) pueden regular la
afectar su función. Un ejemplo es la inhibición función de las proteínas. esta descripción general se analiza con más detalle en el Capítulo 14.
por retroalimentación, en la que el producto de
una vía metabólica inhibe la primera enzima de
la vía.
Proteína funcional
La estructura y función de un
la proteína puede ser alterada por cambios
covalentes en la proteína. Estos pueden ser
Mapas conceptuales reversibles (p. ej., fosforilación/desfosforilación)
o irreversibles (p. ej., eliminación de residuos de
aminoácidos).
Estas se denominan modificaciones
• Muchos capítulos incluyen un mapa conceptual, nuevo postraduccionales.
Proteína funcional (B)
en esta edición, que describe temas críticos.

Figura 12.1 Expresión génica y mecanismos reguladores
(a)
comunes en los tres dominios de la vida.
xviii Prefacio
Resúmenes de los capítulos

Resumen 37
• Los resúmenes al final de los capítulos están organizados por encabezados
numerados y brindan una instantánea de los conceptos importantes de

se ha utilizado para estudiar las interacciones entre las proteínas chaperonas GroES
y GroEL de E. coli , para cartografiar plásmidos mediante la localización de enzimas
1. ¿Cómo funciona un microscopio confocal? ¿Por qué proporciona mejores los capítulos.
imágenes de especímenes gruesos que el microscopio compuesto estándar?
de restricción unidas a sitios específicos, para seguir el comportamiento de bacterias
2. Describa brevemente el microscopio de sonda de barrido y compare y con
vivas y otras células, y para visualizar proteínas de membrana (figura 2.29). ).
Compare sus versiones más populares: el microscopio de efecto túnel y el
microscopio de fuerza atómica. ¿Para qué sirven estos microscopios?
Resumen
2.1 Lentes y la curvatura de la luz a. Un rayo de B. La mayoría de los colorantes son colorantes básicos cargados positivamente o colorantes ácidos
negativos y se unen a las partes ionizadas de las células. C. En la tinción simple se usa un solo
luz que pasa del aire al vidrio, o viceversa, se desvía en un proceso conocido
como refracción. colorante para teñir los microorganismos. D. Los procedimientos de tinción diferencial, como la tinción
B. Las lentes enfocan los rayos de luz en un punto focal y amplían las imágenes (figura 2.2). de Gram y la tinción acidorresistente, distinguen entre grupos microbianos tiñéndolos de manera
diferente (figura 2.15). mi. Algunas técnicas de tinción son específicas para estructuras particulares
2.2 El microscopio de luz a. En un como cápsulas bacterianas, flagelos y endosporas (figura 2.14).
microscopio compuesto como el microscopio de campo claro, la imagen primaria está formada por una
lente objetivo y ampliada por el ocular o lente ocular para producir la imagen final (figura 2.3).
2.4 Microscopía electrónica a. El
B. Un condensador de subplatina enfoca un cono de luz sobre la muestra. C. La microscopio electrónico de transmisión usa lentes magnéticos para formar una imagen a partir de
electrones que han pasado a través de una sección muy delgada de una muestra (figura 2.19).
resolución del microscopio aumenta a medida que disminuye la longitud de onda de la radiación
La resolución es alta porque la longitud de onda de los electrones es muy corta.
utilizada para iluminar la muestra. La resolución máxima de un microscopio óptico es de
aproximadamente 0,2 md. El microscopio de campo oscuro utiliza únicamente luz refractada para
B. El contraste de la sección delgada se puede aumentar mediante el tratamiento con soluciones de
formar una imagen (figura 2.7), y los objetos brillan contra un fondo negro. mi. El microscopio de
metales pesados como tetróxido de osmio, uranio y plomo. C. Las muestras también se preparan
contraste de fase convierte las variaciones en el índice de refracción y la densidad de las células
para el TEM mediante tinción negativa, sombreado con metal o grabado por congelación. D. El
en cambios en la intensidad de la luz y, por lo tanto, hace visibles las células incoloras y sin teñir (figura
microscopio electrónico de barrido (figura 2.23) se utiliza para estudiar las características de la
2.9). F. El microscopio de contraste de interferencia diferencial utiliza dos haces de luz para crear
imágenes tridimensionales de alto contraste de especímenes vivos. gramo. El microscopio de superficie externa de los microorganismos.
fluorescencia ilumina una muestra marcada con fluorocromo y forma una imagen a partir de su
fluorescencia (figura 2.12).
2.5 Nuevas Técnicas en Microscopía a. El
microscopio láser de barrido confocal (figura 2.25) se utiliza para estudiar especímenes gruesos y
complejos. B. Los microscopios de sonda de barrido alcanzan aumentos muy altos que permiten
2.3 Preparación y tinción de las muestras a. Por lo a los científicos observar moléculas biológicas (figuras 2.27 y 2.29).
general, las muestras deben fijarse y teñirse antes de verlas en el microscopio de campo claro.
Términos clave
colorantes ácidos tinción diferencial 26 tinción Tinción de Gram 26 resolución 18
26 tinción ácido-resistente de endosporas 26 oculares fijación por calor microscópio electrónico escaneando
26 microscopio de fuerza atómica 18 fijación 25 tinción de 25 mordiente 26 (SEM) 30
36 colorantes básicos 26 microscopio flagelos 28 microscopio de tinción negativa 26 microscopio de sonda de barrido 35
de campo claro 18 tinción de fluorescencia 23 luz apertura numérica 19 lentes microscopio de túnel de barrido 35
cápsula 26 fijación química 26 fluorescente 23 fluorocromos 24 objetivo 18 lentes oculares sombreado 29 tinción simple 26 condensador
distancia focal 18 punto focal 18 18 de subplatina 18 microscopio electrónico
grupos de cromóforos 26 grabado por congelación 30 parfocal 18 de transmisión
microscopio láser de barrido confocal microscopio de contraste de fase 21

(CSLM) 34 refracción 17 índice de refracción 17 (TEM) 29
microscopio de campo oscuro distancia de trabajo 20
21 microscopio de contraste de interferencia

diferencial (DIC) 23
Material de fin de capítulo

• Los términos clave resaltan la terminología del capítulo y 38 Capítulo 2 El estudio de la estructura microbiana
enumere la ubicación del término en el capítulo.
• Las preguntas de pensamiento crítico complementan las preguntas

Preguntas de pensamiento crítico
de revisión y reflexión que se encuentran a lo largo de cada capítulo;
1. Si preparó una muestra de un espécimen para microscopía óptica, la tiñó con la tinción de Gram y no incluidos en el artículo y por qué ese tipo particular de microscopía fue el método de elección para
pudo ver nada cuando miró a través de su microscopio óptico, enumere las cosas que pudo haber la investigación. ¿Qué otras cifras le gustaría ver utilizadas en este estudio? Describa los pasos
están diseñados para estimular las habilidades analíticas de hecho incorrectamente. que los investigadores tomarían para obtener tales fotografías o figuras.
2. En un artículo de revista, busque un ejemplo de una micrografía óptica, una micrografía electrónica
resolución de problemas. • Más información incluye una breve lista de barrido o de transmisión, o una imagen confocal. Discuta por qué la figura era
de trabajos recientes y relevantes para el estudiante y profesor
interesado. Se pueden encontrar referencias adicionales en el sitio Aprende más
web de Prescott en www.mhhe. com/ prescott7. Binning, G. y Rohrer, H. 1985. El microscopio de efecto túnel. ciencia Soy. 253(2):50–56. Rochow, TG 1994. Introducción a la microscopía por medio de luz, electrones, rayos X o acústica. Nueva
York: Pleno.
Dufrêne, YF 2003. La microscopía de fuerza atómica proporciona un nuevo medio para observar Scherrer, René. 1984. Reacción de tinción de Gram, tipos de Gram y paredes celulares de bacterias.
células microbianas. Noticias de ASM 69 (9): 438–42. Tendencias Bioquímica. ciencia 9:242–45.
Hörber, JKH y Miles, MJ 2003. Evolución de la sonda de exploración en biología. Ciencia Stephens, DJ y Allan, VJ 2003. Técnicas de microscopía de luz para la im
302:1002–5. envejecimiento. Ciencia 300: 82–6.
Lillie, RD 1969. Tinciones biológicas de HJ Conn, 8ª ed. baltimore: williams &

Wilkins.
Visite el sitio web de Prescott en www.mhhe.com/prescott7

para obtener referencias adicionales.
Prefacio xix
RECURSOS PARA ESTUDIANTES otros tipos de medios que se pueden usar para crear conferencias personalizadas,
pruebas y cuestionarios mejorados visualmente, sitios web de cursos atractivos o
Guía de estudio del estudiante materiales de apoyo impresos atractivos.
La Guía de estudio del estudiante es un recurso valioso que proporciona objetivos
de aprendizaje, esquemas de estudio, actividades de aprendizaje y material de ¡Accede a tu libro, accede a todos los libros!
autoevaluación para ayudar a los estudiantes a dominar el contenido del curso. La biblioteca de Presentation Center incluye miles de activos de muchos títulos de
McGraw-Hill. Este recurso en constante crecimiento brinda a los instructores el poder
de utilizar activos específicos de un libro de texto adoptado, así como el contenido
Ejercicios de laboratorio en microbiología La séptima
de todos los demás libros de la biblioteca.
edición de Ejercicios de laboratorio en microbiología de John P. Harley se ha
preparado para acompañar el texto. Al igual que el texto, el manual de laboratorio ¡Nada podría ser más fácil!
proporciona una introducción equilibrada en cada área de la microbiología. Los Al acceder desde el lado del instructor del sitio web ARIS de su libro de texto, el
ejercicios probados en clase son modulares y cortos para que un instructor pueda motor de búsqueda dinámico de Presentation Center le permite explorar por
elegir fácilmente los ejercicios que se ajusten a su curso. disciplina, curso, capítulo del libro de texto, tipo de recurso o palabra clave.
Simplemente busque, seleccione y descargue los archivos que necesita para crear
materiales de curso atractivos. Todos los activos tienen derechos de autor de
McGraw-Hill Higher Education, pero los instructores pueden usarlos para fines de
ARÍS
clase.
ARIS de McGraw-Hill: sistema de evaluación, revisión e instrucción para la
• Biblioteca de arte : los archivos digitales mejorados en color de todas las
microbiología de Prescott, Harley y Klein, www.mhhe.com/ prescott7. Este recurso
ilustraciones del libro se pueden incorporar fácilmente en presentaciones de
en línea proporciona materiales de estudio útiles que respaldan cada capítulo del
conferencias, exámenes o materiales de clase personalizados. Las etiquetas
libro. Las características incluyen:
grandes en negrita hacen que las imágenes sean apropiadas para su uso en
salas de conferencias grandes. • Biblioteca de arte TextEdit: cada pieza de
Autocuestionarios arte lineal se coloca en una presentación de PowerPoint que permite al usuario
Animaciones (con cuestionarios) revisar, mover o eliminar etiquetas según lo desee para la creación de
Flashcards presentaciones personalizadas o para fines de prueba. • Biblioteca de
Estudios de casos fotografías: al igual que la Biblioteca de arte, se encuentran disponibles
clínicos ¡Contenido adicional del curso y más! archivos digitales de todas las fotografías del libro. • Biblioteca de tablas: todas
las tablas que aparecen en el libro son pro
RECURSOS PARA INSTRUCTORES vided en forma electrónica.
• Biblioteca de animaciones : las presentaciones a todo color que involucran

ARIS (www.mhhe.com/prescott7) figuras de procesos clave en el libro han cobrado vida a través de animaciones.
ARIS de McGraw-Hill: sistema de evaluación, revisión e instrucción para la Estas animaciones ofrecen flexibilidad para los instructores y fueron diseñadas
microbiología de Prescott, Harley y Klein es un completo tutorial en línea, tarea para usarse en conferencias o para el autoaprendizaje. Los instructores pueden
electrónica y sistema de gestión de cursos. Los instructores pueden crear y compartir pausar, rebobinar, avanzar rápidamente y activar/desactivar el audio para crear
materiales y tareas del curso con colegas con unos pocos clics del mouse. presentaciones dinámicas. • Reseñas de conferencias en PowerPoint: estas
presentaciones listas para usar combinan ilustraciones y notas de conferencias
Todas las conferencias, tareas, cuestionarios y tutoriales de PowerPoint están para cada uno de los 41 capítulos del libro. Las presentaciones se pueden usar
directamente vinculados a materiales específicos del texto. Los profesores también tal cual o se pueden personalizar para reflejar los temas y la organización de la
pueden editar preguntas, importar su propio contenido y crear anuncios y fechas de conferencia que prefiera. • Esquemas de PowerPoint: el arte, las fotos y las
vencimiento para las tareas. ARIS tiene calificaciones e informes automáticos de tablas de cada capítulo se insertan en presentaciones de PowerPoint en blanco
tareas, cuestionarios y exámenes fáciles de asignar. Toda la actividad de los a las que puede agregar sus propias notas.
estudiantes dentro de ARIS de McGraw-Hill se registra automáticamente y está
disponible para el instructor a través de un libro de calificaciones completamente
integrado que se puede descargar a Excel. Comuníquese con su representante local
de McGraw-Hill Publisher para obtener más información sobre cómo comenzar con
CD-ROM de recursos y pruebas del instructor Este CD
ARIS.
multiplataforma contiene el Manual del instructor y el banco de pruebas, ambos
disponibles en formato Word y PDF. El Manual del instructor contiene resúmenes de
Centro de presentación ARIS
capítulos, objetivos y pautas de respuesta para las preguntas de pensamiento crítico.
¡Cree materiales didácticos donde, cuando y como quiera! El Test Bank proporciona preguntas que se pueden utilizar para las tareas asignadas
o la preparación de exámenes. El banco de pruebas computarizado permite al
ARIS Presentation Center es una biblioteca digital en línea que contiene recursos usuario crear rápidamente exámenes personalizados. Este programa fácil de usar
tales como fotografías, ilustraciones, animaciones, presentaciones en PowerPoint y
XX Prefacio
permite a los instructores buscar preguntas por tema, formato o nivel de Colin R. Jackson, Universidad del Sudeste de Luisiana
dificultad; editar preguntas existentes o agregar nuevas; y codificar Shubha Kale Ireland, Universidad Xavier de Luisiana Judith
preguntas y claves de respuesta para múltiples versiones de la misma prueba. Kandel, Universidad Estatal de California–Fullerton James
Kettering, Universidad de Loma Linda Madhukar B.
Khetmalas, Universidad Tecnológica de Texas Peter J. King,
Transparencias Hay
Universidad Estatal Stephen F. Austin Tina M. Knox,
disponible un juego de 250 transparencias de acetato a todo color para Universidad de Illinois–Urbana Duncan Krause, Universidad
complementar las conferencias en el aula. Estos se han mejorado para la de Georgia Don Lehman, Universidad de Delaware Rita B.
proyección y están disponibles para los usuarios de la séptima edición. Moyes, Universidad Texas A&M Ronald D. Porter,
Universidad Estatal de Pensilvania Sabine Rech, Universidad
Estatal de San José Pratibha Saxena, Universidad de Texas
AGRADECIMIENTOS en Austin Geoffrey B. Smith, New Mexico State University
Fred Stutzenberger, Clemson University Karen Sullivan,
Participantes del grupo de
Louisiana State University Jennifer R. Walker, University of
enfoque Jeffrey Isaacson, Nebraska Wesleyan
Georgia William Whalen, Xavier University of Louisiana John
University Janice Knepper, Villanova University Donald
M. Zamora, Middle Tennessee State University
Lehman, University of Delaware Susan Lovett,
Brandeis University Anne Morris Hooke, Miami
University of Ohio Mark Schneegurt, Wichita State
University Daniel Smith, Seattle University Michael
Troyan, Pennsylvania State University Russell
Vreeland, Universidad de West Chester Stephen Revisores internacionales
Wagner, Universidad Estatal Stephen F. Austin Darla Judy Gnarpe, Universidad de Alberta
Wise, Universidad de Concord Shaun Heaphy, Universidad de Leicester
Edward E. Ishiguro, Universidad de Victoria Kuo-
Kau Lee, Universidad Nacional del Océano de Taiwán
revisores Jong-Kang Liu, Universidad Nacional Sun Yat-sen Cheryl
L. Patten, Universidad de New Brunswick Clive Sweet,
Phillip M. Achey, Universidad de Florida
Universidad de Birmingham Chris Upton, Universidad de
Shivanti Anandan, Universidad de Drexel
Victoria Fanus Venter, Universidad de Pretonia Shang-
Cynthia Anderson, Mt. San Antonio College
Shyng Yang, Universidad Nacional de Taiwán Guang-yu
Michelle L. Badon, Universidad de Texas Larry L.
Zheng, Universidad Normal de Beijing
Barton, Universidad de Nuevo México Mary Burke,
Universidad Estatal de Oregón Frank B. Dazzo,
Michigan Universidad Estatal Johnny El-Rady, Como nuevo grupo de autores, nos encontramos con una curva de
Universidad del Sur de Florida Paul G. Engelkirk, aprendizaje muy empinada que no hubiéramos podido superar sin la
Central Texas College Robert H. Findlay, ayuda de nuestros editores, Lisa Bruflodt, Jayne Klein, Janice Roerig-
Universidad de Alabama Steven Foley, Universidad Blong y Colin Wheatley. También nos gustaría agradecer a nuestra
de Central Arkansas Bernard Lee Frye, Universidad editora de fotos Mary Reeg y el tremendo talento y paciencia mostrado
de Texas en Arlington Amy M. Grunden, Carolina del por los artistas. También estamos muy agradecidos al profesor Norman
Norte Universidad Estatal Janet L. Haynes, Universidad Pace por sus útiles debates y a los muchos revisores que brindaron
de Long Island Diane Herson, Universidad de Delaware críticas y análisis útiles. Finalmente, agradecemos a nuestros cónyuges
D. Mack Ivey, Universidad de Arkansas e hijos que brindaron apoyo y toleraron nuestras ausencias (mentales si
no físicas) mientras completábamos este exigente proyecto.
1ElHistoria y alcance
de la microbiología
Louis Pasteur, uno de los más grandes científicos del siglo XIX,
sostenía que “La ciencia no conoce país, porque el conocimiento pertenece
a la humanidad, y es una antorcha que ilumina el mundo”.
AVANCE
son necesarios para la producción de pan, queso, cerveza,
• La microbiología se define no solo por el tamaño de sus sujetos, sino también por la
antibióticos, vacunas, vitaminas, enzimas y muchos otros productos
técnicas que utiliza para estudiarlos.
importantes. De hecho, la biotecnología moderna descansa sobre
• Los microorganismos incluyen entidades acelulares (p. ej., virus), células procaríticas
una base microbiológica.
y células eucarióticas. Los microorganismos celulares se encuentran en los tres
Aunque la mayoría de los microorganismos desempeñan funciones
dominios de la vida: Bacteria, Archaea, Eucarya. • El desarrollo de la microbiología
beneficiosas o benignas, algunos dañan a los humanos y han alterado
como disciplina científica ha dependido de la disponibilidad del microscopio y de la
la sociedad durante milenios. Las enfermedades microbianas, sin duda,
capacidad de aislar y desarrollar cultivos puros de microorganismos. El desarrollo
jugaron un papel importante en eventos históricos como la caída del
de estas técnicas surgió en gran parte de estudios que refutan la Teoría de la
Imperio Romano y la conquista del Nuevo Mundo. En 1347, la peste o
Generación Espontánea y otros que establecen que los microorganismos pueden
causar enfermedades.
peste negra, una enfermedad transmitida por artrópodos, golpeó a
Europa con una fuerza brutal y mató a 1/3 de la población (alrededor
de 25 millones de personas) en cuatro años. Durante los siguientes 80
• La microbiología es una gran disciplina; ha tenido y seguirá teniendo un gran
impacto en otras áreas de la biología y el bienestar humano en general.
años, la enfermedad atacó una y otra vez, acabando finalmente con el
75 % de la población europea. El efecto de la peste fue tan grande que
algunos historiadores creen que cambió la cultura europea y preparó
el camino para el Renacimiento. Hoy continúa la lucha de los
microbiólogos y otros contra asesinos como el SIDA y la malaria.
tamaño En términos de número y masa, se estima En este capítulo introductorio, presentamos el mundo
La importancia de los microorganismos
que los microbios contienen el 50 % delno puede
carbono exagerarse.
biológico y el 90 microbiano para brindar una idea general de los organismos y
% del nitrógeno biológico de la Tierra; superan con creces a todos los agentes que estudian los microbiólogos. Luego describimos el
demás grupos de organismos del planeta. Además, se encuentran en desarrollo histórico de la ciencia de la microbiología y su relación
todas partes: desde los respiraderos geotérmicos en las profundidades del con la medicina y otras áreas de la biología. Finalmente, discutimos
océano hasta el hielo ártico más frío, en la piel de cada persona. Son los el alcance, la relevancia y el futuro de la microbiología moderna.
principales contribuyentes al funcionamiento de la biosfera, siendo
indispensables para el ciclo de los elementos esenciales para la vida.
También son una fuente de nutrientes en la base de todas las cadenas y
redes alimentarias ecológicas. Lo que es más importante, ciertos
microorganismos llevan a cabo la fotosíntesis, rivalizando con las plantas 1.1 MIEMBROS DEL MUNDO MICROBIANO
en su función de capturar dióxido de carbono y liberar oxígeno a la La microbiología a menudo se ha definido como el estudio de organismos
atmósfera. Esos mi crobios que habitan en los seres humanos también y agentes demasiado pequeños para ser vistos claramente a simple vista,
desempeñan funciones importantes, como ayudar al cuerpo a digerir los es decir, el estudio de microorganismos. Debido a que los objetos de
alimentos y producir vitaminas B y K. Además, la sociedad en general se beneficiamenos
de losdemicroorganismos,
un milímetro de ya que no se pueden ver con claridad y deben ser
diámetro
En los campos de observación, el azar favorece sólo a las mentes preparadas.

(En el campo de la observación, el azar favorece sólo a las mentes preparadas.)
-Louis Pasteur
2 Capítulo 1 Historia y alcance de la microbiología
examinada con un microscopio, la microbiología se ocupa principalmente

de organismos y agentes cada vez más pequeños. bacterias
Sin embargo, algunos microorganismos, particularmente algunos microbios
eucarióticos, son visibles sin microscopios. Por ejemplo, los microbiólogos
Flavobacteria
estudian el moho del pan y las algas filamentosas, aunque son visibles a
simple vista, al igual que las dos bacterias Thiomargarita y Epulopiscium. clorobio
leptonema
Diversidad microbiana y ecología 3.1: Microbios monstruosos La dificultad
Clostridium
para establecer los límites de la microbiología ha llevado a sugerir Bacilo
heliobacteria
otros criterios para definir el campo. Por ejemplo, una característica Termoplasma
Arqueoglobo
Arthrobacter
importante de los microorganismos, incluso los que son grandes y pOPS19
Haloferax
multicelulares, es que son relativamente simples en su construcción, cloroflexo
Termo
termotoga Metanospirillum
carecen de células altamente diferenciadas y tejidos diferenciados. Otra pOPS66 Médico de Marina. 1 temperatura baja

sugerencia, hecha por Roger Stanier, es que el campo también se defina Raíz 22 gp.122 baja temperatura
en términos de sus técnicas. Los microbiólogos generalmente aíslan EM17

Sulfolobus
primero un microorganismo específico de una población y luego lo cultivan.
arqueas
Por lo tanto, la microbiología emplea técnicas, como la esterilización y el
Homo
uso de medios de cultivo, que son necesarias para el aislamiento y
crecimiento exitoso de microorganismos. Zea
criptomonas
Los microorganismos son diversos y su clasificación siempre ha sido Aclia
Costaria
un desafío para los taxónomos microbianos. Sus primeras descripciones porfira
como plantas o animales eran demasiado simples. Por ejemplo, algunos
Giardia
microbios son móviles como los animales, pero también tienen paredes
celulares y son fotosintéticos como las plantas. Dichos microbios no
pueden ubicarse fácilmente en un reino u otro. Otro factor importante en la
clasificación de los microorganismos es que unos están compuestos por
células procariotas y otros por células eucariotas. eucaria
Células procarióticas [del griego pro, antes, y karyon, nuez o núcleo;
organismos con un núcleo primordial] tienen una morfología mucho más
simple que las células eucarióticas y carecen de un verdadero núcleo
delimitado por membranas. Por el contrario, las células eucariotas [del
Figura 1.1 Árbol filogenético universal. Estas relaciones evolutivas
griego, eu, verdadero, y karyon, nuez o grano] tienen un núcleo encerrado se basan en comparaciones de secuencias de ARNr. El hombre (Homo)
en una membrana; son más complejos morfológicamente y suelen ser más está resaltado en rojo.
grandes que los procariotas. Estas observaciones finalmente llevaron al
desarrollo de un esquema de clasificación que dividía a los organismos en
cinco reinos: Monera, Protista, Fungi, Animalia y Plantae. Los microbiólogos creen que los organismos deben dividirse en tres
Los microorganismos (excepto los virus, que son acelulares y tienen su dominios: Bacteria (la verdadera bacteria o eubacteria), Archaea,1 y
propio sistema de clasificación) se ubicaron en los tres primeros reinos. Eucarya (todos los organismos eucarióticos) (figura 1.1).
Este sistema, que usaremos aquí, y los resultados que conducen a él se
En las últimas décadas se han logrado grandes avances en tres áreas discuten en el capítulo 19. A continuación se presenta una breve
que afectan profundamente la clasificación microbiana. En primer lugar, se descripción de los tres dominios y de los microorganismos ubicados en ellos.
ha aprendido mucho sobre la estructura detallada de las células microbianas
Las bacterias2 son procariotas que suelen ser organismos
mediante el uso de microscopía electrónica. Segundo, los microbiólogos unicelulares. La mayoría tiene paredes celulares que contienen la molécula
han determinado las características bioquímicas y fisiológicas de muchos estructural peptidoglicano. Son abundantes en el suelo, el agua y el aire y
microorganismos diferentes. En tercer lugar, se compararon las secuencias también son habitantes importantes de nuestra piel, boca e intestinos.
de ácidos nucleicos y proteínas de una amplia variedad de organismos. La Algunas bacterias viven en ambientes que tienen temperaturas extremas,
comparación del ARN ribosómico (ARNr), iniciada por Carl Woese en la
década de 1970, fue fundamental para demostrar que existen dos grupos
muy diferentes de organismos procarióticos: Bacteria y Archaea, que
habían sido clasificados juntos como Monera en los cinco grupos. sistema 1
Aunque esto se discutirá más adelante en el capítulo 19, debe notarse aquí que se han
de reino Más tarde, estudios basados en comparaciones de ARNr sugirieron usado varios nombres para Archaea. Los dos más importantes son las arqueobacterias y
que Protista no era una unidad taxonómica cohesiva y que debería dividirse las arqueobacterias. En este texto, usaremos solo el nombre Archaea.
2
en tres o más reinos. Estos estudios y otros han llevado a muchos En este texto, el término bacteria (s., bacteria) se utilizará para referirse a las procariotas
que pertenecen al dominio Bacteria, y el término archaea (s., archaeon) se utilizará para
taxónomos a concluir que el sistema de cinco reinos es demasiado simple.
referirse a las procariotas que pertenecen al dominio Archaea. Cabe señalar que en
Se han sugerido varias alternativas, pero actualmente, la mayoría algunas publicaciones se utiliza el término bacteria para referirse a todos los procariotas.
Ese no es el caso en este texto.
El descubrimiento de los microorganismos 3
pH o salinidad. Aunque algunas bacterias causan enfermedades, muchas juegan

1. Describir el campo de la microbiología en términos del tamaño de su materia
funciones más beneficiosas, como elementos cíclicos en la biosfera,
rial y la naturaleza de sus técnicas.
descomponen materia vegetal y animal muerta y producen vitaminas. Las cianobacterias
2. Describir y contrastar las células procariotas y eucariotas.
producen cantidades significativas de oxígeno.
3. Describir y contrastar el sistema de clasificación de cinco reinos con el
a través del proceso de fotosíntesis.
sistema de tres dominios. ¿Por qué cree que los virus no están incluidos en ninguno de los dos?
Archaea son procariotas que se distinguen de
¿sistema?
Las bacterias por muchas características, más notablemente su ribosoma único
secuencias de ARN. También carecen de peptidoglicano en su célula.
paredes y tienen lípidos de membrana únicos. Algunos tienen inusual
características metabólicas, como los metanógenos, que generan gas metano. Muchas 1.2 EL DESCUBRIMIENTO DE MICROORGANISMOS
arqueas se encuentran en ambientes extremos. Las arqueas patógenas aún no han
Incluso antes de que se vieran los microorganismos, algunos investigadores
sido identificadas.
sospecharon su existencia y su responsabilidad en la enfermedad. Entre otros, el
El dominio Eucarya incluye microorganismos clasificados como protistas u
filósofo romano Lucrecio (alrededor del 98-55 a. C.) y el
hongos. Los animales y las plantas también se colocan en este dominio.
el médico Girolamo Fracastoro (1478–1553) sugirió que las enfermedades eran
Los protistas son generalmente más grandes que los procariotas e incluyen algas
causadas por seres vivos invisibles. Las primeras observaciones microscópicas
unicelulares, protozoos, mohos mucilaginosos y mohos acuáticos. Algas
parecen haber sido hechas entre 1625
son protistas fotosintéticos que junto con las cianobacterias
y 1630 sobre abejas y gorgojos del italiano Francesco Stelluti,
producen alrededor del 75% del oxígeno del planeta. Ellos también son los
utilizando un microscopio probablemente suministrado por Galileo. En 1665, el
base de las cadenas alimentarias acuáticas. Los protozoos son unicelulares,
primer dibujo de un microorganismo fue publicado en Robert
protistas similares a animales que generalmente son móviles. Muchos de vida libre
Micrografía de Hooke . Sin embargo, la primera persona en publicar observaciones
los protozoos funcionan como los principales cazadores y herbívoros del mundo
extensas y precisas de microorganismos fue el microscopista aficionado Antony van
microbiano. Obtienen nutrientes al ingerir materia orgánica.
Leeuwenhoek (1632-1723) de
y otros microbios. Se pueden encontrar en muchos ambientes diferentes y algunos
Delft, Países Bajos (figura 1.3a). Leeuwenhoek ganó su
son habitantes normales de los tractos intestinales.
viviendo como un pañero y mercería (un comerciante en ropa de hombre
de animales, donde ayudan en la digestión de materiales complejos
y accesorios), pero pasó gran parte de su tiempo libre construyendo
como la celulosa. Unos pocos causan enfermedades en humanos y otros animales.
microscopios simples compuestos de lentes de vidrio convexas dobles
Los mohos mucilaginosos son protistas que son como protozoos en una etapa
sostenida entre dos platos de plata (figura 1.3b). sus microscopios
de su ciclo de vida, pero son como hongos en otro. en el protozoario
podría aumentar alrededor de 50 a 300 veces, y puede haber iluminado sus
fase, buscan y engullen partículas de comida, consumiendo vegetación en
especímenes líquidos colocándolos entre dos
descomposición y otros microbios. Los mohos de agua, como su
pedazos de vidrio y brillando la luz sobre ellos en un ángulo de 45° con respecto a la
su nombre lo indica, se encuentran en la superficie del agua dulce
plano del espécimen. Esto habría proporcionado una forma de campo oscuro
fuentes y suelo húmedo. Se alimentan de vegetación en descomposición como
iluminación en la que los organismos aparecían como objetos brillantes
troncos y mantillo. Algunos mohos de agua han producido devastadores
contra un fondo oscuro e hizo que las bacterias fueran claramente visibles
infecciones de las plantas, incluida la Gran Hambruna de la Papa
(figura 1.3c). A partir de 1673, Leeuwenhoek envió información detallada
1846–1847. Los hongos son un grupo diverso de microorganismos que
cartas describiendo sus descubrimientos a la Royal Society of
van desde formas unicelulares (levaduras) hasta mohos y hongos.
Londres. Está claro por sus descripciones que vio tanto bacterias como protozoos.
Los mohos y las setas son hongos multicelulares que forman
estructuras filiformes llamadas hifas. Absorben los nutrientes de
Por importantes que fueran las observaciones de Leeuwenhoek, el desarrollo de
su entorno, incluidas las moléculas orgánicas que utilizan
la microbiología esencialmente languideció durante los siguientes 200 años.
como fuente de carbono y energía. Debido a sus capacidades metabólicas, muchos
años. Se avanzó poco principalmente porque los microscópicos
hongos desempeñan funciones beneficiosas, incluida la fabricación de
las observaciones de microorganismos no proporcionan información suficiente para
el pan sube, produce antibióticos y descompone los organismos muertos. Otros hongos
comprender su biología. Para que la disciplina se desarrolle,
causan enfermedades en las plantas y en los humanos
técnicas para aislar y cultivar microbios en el laboratorio
y otros animales.
eran necesarios. Muchas de estas técnicas comenzaron a desarrollarse como
Los virus son entidades acelulares que deben invadir una célula huésped en
Los científicos lidiaban con el conflicto sobre la Teoría de la
orden de replicar. Son los más pequeños de todos los microbios (los
Generación espontánea. Este conflicto y los estudios posteriores
más pequeño es 10.000 veces más pequeño que una bacteria típica), pero
sobre el papel que desempeñan los microorganismos en la causa de la enfermedad
su pequeño tamaño desmiente su poder: causan muchos animales y
condujo en última instancia a lo que ahora se conoce como la Edad de Oro de la Microbiología.
enfermedades de las plantas y han causado epidemias que han dado forma a la
historia humana. Las enfermedades que causan incluyen la viruela, la rabia, la
1. Da algunos ejemplos del tipo de información que crees que se puede proporcionar
influenza, el SIDA, el resfriado común y algunos tipos de cáncer.
por observaciones microscópicas de microorganismos.
El desarrollo de la microbiología como ciencia se describe en
2. Da algunos ejemplos del tipo de información que crees que se puede proporcionar
secciones 1.2 a 1.5. La figura 1.2 presenta un resumen de algunos de los
aislando microorganismos de su ambiente natural y cultivándolos en el
principales acontecimientos de este proceso y su relación con otros hitos históricos.
laboratorio.
1546 Fracastoro sugiere que los 1590–1608 Jansen

organismos invisibles causan desarrolla el primer 1665 Hooke publica
1688 Redi refuta la
enfermedades. microscopio compuesto útil. Micrographia.
generación espontánea de
gusanos.
1676 Leeuwenhoek
descubre los “animacules”.
1765-1776 Spallanzoni ataca
la generación espontánea.
1543 Publicación de
El trabajo de Copérnico 1600-1601
sobre el sistema solar
de Shakespeare 1687 de Newton 1786 Miller produce la
heliocéntrico Aldea primera clasificación de
Principios publicados
bacterias.
1776 americano
Revolución 1798 Jenner introduce la
vacunación contra la viruela
1815 Batalla de Waterloo; vacuna contra la viruela.
Napoleón derrotado
1848 Marx comunista 1838–1839 Schwann y

1859 de Darwin Manifiesto
Schleiden proponen la teoría
Origen de las especies celular.
1857 Pasteur describe la 1847–1850 Semmelweis 1835–1844 Bassi descubre la

1861-1865
fermentación. introduce antisépticos para enfermedad del gusano de seda
americano
prevenir enfermedades. causada por hongos.
Guerra civil
1861 Pasteur desaprueba la
generación espontánea.
1866 de Dostoievski 1867 Lister publica sobre

Crimen y castigo cirugía antiséptica.
1876–1877 Koch 1880 Laveran descubre

1870–1871 Franco demuestra el ántrax Plasmodium, la causa de la
guerra alemana causado por Bacillus malaria.
1881 Koch cultiva
anthracis.
bacterias en gelatina;
1876 Bell inventa el Pasteur desarrolla una
teléfono vacuna contra el ántrax.
1882 Koch descubre

1879 de Edison 1884 de Mark Twain
Mycobacterium tuberculosis.
primera bombilla aventuras de
Finn arándano
1884 Publicación de los
1885-1886 Primer vehículo postulados de Koch; Metchnikoff
de motor de Dainter describe la fagocitosis; autoclave
desarrollado; Tinción de Gram
1888 Hertz descubre las desarrollada.
1889 fiebre de la tierra
ondas de radio
de Oklahoma
1885 Pasteur
desarrolla la vacuna
1887 Richard Julius Petri
1887-1890 contra la rabia; Escherich
1889 Beijerinck aísla desarrolla la placa de Petri descubre Escherichia coli.
Winogradsky estudia el
la bacteria del nódulo (placa).
azufre y las bacterias
de la raíz. nitrificantes.
1890 Torre Eiffel 1890 Antitoxina de Von Behring para

terminada la difteria y el tétanos
1891 Yellowstone se 1894 Kitasato y Yersin descubren

convierte en el primer Yersinia pesits.
1896 van Ermengem 1899 Beijerinck demuestra que
parque nacional
discovers Clostridium el virus causa la enfermedad
1895 La mesa descubre el
botulinum. del mosaico del tabaco.
complemento.
1895 Röntgen 1896 Etiopía obtiene la 1898 español

descubre los rayos X independencia guerra americana
Figura 1.2(a) Algunos eventos importantes en el desarrollo de la microbiología (1546–1899). Los hitos en microbiología están
marcados en rojo; otros eventos históricos están en negro.
4
1900 Reed prueba la 1902 Landsteiner

fiebre amarilla transmitida por descubre sangre
mosquito. grupos
1903 Wright y otros descubren 1905 Schaudian y Hoffmann
anticuerpos.
muestran que Treponema pallidum
causa la sífilis.
1906 Wassermann
desarrolla la prueba de fijación
1900 Planck desarrolla la del complemento para la sífilis.
teoría cuántica 1903 Primer avión propulsado
por los hermanos Wright 1905 Teoría de la 1910 Ricketts muestra la
relatividad de Einstein fiebre maculosa de las Montañas

Rocosas causada por un microbio.
1908 primero
Modelo T Ford
1911 Rous descubre que un
virus puede causar cáncer.
1914 Comienza la Primera Guerra Mundial
revolución rusa de 1917

1927 Vuelo
1915-1917 D'Herelle y
transatlántico de Lindberg
Twort descubren virus
bacterianos.
1928 Griffith descubre la 1923 Primera edición de 1921 Fleming

transformación bacteriana. descubre la
Caída de la bolsa de valores de 1929 Manual de Bergey.
lisozima.
1929 Fleming
descubre la penicilina.
1931 Van Niel estudia las

bacterias fotosintéticas.
1935 Domagk
descubre las
1933 Ruska desarrolla el
microscopio electrónico. sulfonamidas.
1937 Chatton divide los organismos
vivos en procariotas y eucariotas.
1933 Hitler se convierte
Canciller de Alemania
1937 Krebs descubre el ciclo
1941 Beadle y Tatum proponen
del ácido cítrico
1939 Comienza la Segunda
la teoría de un gen, una enzima.
Guerra Mundial
1945 Bomba atómica

lanzada sobre Hiroshima 1944 Waksman descubre la estreptomicina.
1957 Sputnik
lanzado por 1950 Comienza la Guerra
Unión Soviética 1949 Enders, Weller y
de Corea
Robbins cultivan poliovirus
en cultivo de tejido humano.
1955 Jacob y Wollman 1953 Watson y Crick

1959 Yalow descubren el plásmido proponen la doble hélice
desarrolla el del factor F. del ADN.
radioinmunoensayo.
1961 Primer 1961 Jacob y Monod proponen

humano en el el operón lac .
1979 Insulina sintetizada usando
espacio 1977 Woese divide a los
1962 Primera quinolona ADN recombinante; viruela
sintetizada. procariotas en Bacteria y declarada oficialmente erradicada.
Crisis de los
Archaea.
misiles cubanos de 1962
1970 Arber y Smith
1980 Desarrollo de
descubren las endonucleasas
microscopios de túnel de
de restricción.
1969 Neil Armstrong camina barrido.
sobre la luna
1973 Vietnam 1979 tres millas 1980 Primeros

La guerra termina desastre de la isla ordenadores domésticos
Figura 1.2(b) Algunos eventos importantes en el desarrollo de la microbiología (1900–1980). Los hitos en microbiología están
marcados en rojo; otros eventos históricos están en negro.
5
1982 Se desarrolla la 1983-1984 VIH aislado e identificado por

vacuna recombinante contra Gallo y Montagnier; Mullis desarrolla técnica PCR.
la hepatitis B.
1986 Primera vacuna
desarrollada por ingeniería
genética aprobada para uso
humano.
1990 Comienzan las
primeras pruebas de
terapia génica humana.
1981 Primer lanzamiento
del transbordador espacial 1992 Primeros ensayos en
1982 Implantación del humanos de terapia antisentido.
primer corazón artificial 1985 Gorbachov se convierte en
secretario general del partido 1995 Vacuna contra la varicela
comunista aprobada para uso en EE. UU.;
1991 soviético
Unión se derrumba Genoma de Haemophilus influenzae secuenciado.
1998 Agua encontrada

en la luna
1996 Methanococcus jannaschii

y genomas de levadura
secuenciados.
2000 Descubrimiento de que 1997 Se descubre la bacteria

Vibrio cholerae tiene dos
más grande conocida, Thiomargarita
cromosomas.
namibiensis .
2001 Ataque bioterrorista con ántrax

en Nueva York, Washington DC y Florida.
2001 Comercio mundial

2002 Poliovirus infeccioso sintetizado
Ataque central
a partir de productos químicos básicos.
Brote de SARS de 2003 en

China.
2005 Cepa de VIH "superresistente"
aislada en la ciudad de Nueva York.
2003 Segunda guerra con

Irak
Figura 1.2(c) Algunos eventos importantes en el desarrollo de la microbiología (1981–2005). Los hitos en microbiología están marcados en rojo; otros eventos históricos
están en negro.
producir gusanos espontáneamente. Sin embargo, las moscas se sintieron atraídas por
1.3 EL CONFLICTO POR LA GENERACIÓN
el recipiente cubierto con gasa y depositaron sus huevos en la gasa; estos huevos
ESPONTÁNEA
produjeron gusanos. Por lo tanto, la generación de gusanos por la carne en
Desde los primeros tiempos, la gente había creído en la generación espontánea , descomposición resultó de la presencia de huevos de mosca, y la carne no generó
que los organismos vivos podían desarrollarse a partir de materia inerte. gusanos espontáneamente como se creía anteriormente.
Incluso Aristóteles (384-322 a. C.) pensó que algunos de los invertebrados más Experimentos similares realizados por otros ayudaron a desacreditar la teoría de los
simples podrían surgir por generación espontánea. Este punto de vista finalmente fue organismos más grandes.
desafiado por el médico italiano Francesco Redi (1626-1697), quien llevó a cabo una El descubrimiento de los microorganismos por parte de Leeuwenhoek renovó la
serie de experimentos sobre la carne en descomposición y su capacidad para producir controversia. Algunos propusieron que los microorganismos surgieron por generación
gusanos de forma espontánea. Redi colocó la carne en tres recipientes. Uno estaba espontánea, aunque los organismos más grandes no. Señalaron que los extractos
descubierto, el segundo estaba cubierto con papel y el tercero estaba cubierto con una hervidos de heno o carne darían lugar a microorganismos después de reposar durante
gasa fina que excluiría las moscas. Las moscas pusieron sus huevos en la carne un tiempo. En 1748, el sacerdote inglés John Needham (1713-1781) informó sobre los
descubierta y se desarrollaron gusanos. Los otros dos trozos de carne no resultados de sus experimentos sobre la generación espontánea. Caldo de cordero
hervido Needham
El conflicto por la generación espontánea 7
y luego tapó herméticamente los matraces. Eventualmente muchos de los frascos dejó que se enfríen. No se produjo ningún crecimiento a pesar de que el contenido de los
se volvió turbia y contenía microorganismos. Pensaba que la materia orgánica contenía matraces estuvo expuesto al aire. Pasteur señaló que
una fuerza vital que podía conferir las propiedades de la vida a la materia inerte. Unos no hubo crecimiento porque el polvo y los gérmenes habían quedado atrapados en
años más tarde, el sacerdote italiano las paredes de los cuellos curvos. Si los cuellos estaban rotos, el crecimiento comenzaba
y el naturalista Lazzaro Spallanzani (1729-1799) mejoraron inmediatamente. Pasteur no solo había resuelto la controversia
Diseño experimental de Needham mediante el primer sellado de frascos de vidrio que en 1861, pero también había mostrado cómo mantener las soluciones estériles.
contenía agua y semillas. Si los matraces sellados se colocaban en agua hirviendo durante
3/4 de hora, no se producía crecimiento mientras el
los frascos permanecieron sellados. Propuso que el aire transportaba gérmenes al
medio de cultivo, pero también comentó que el aire exterior podría ser
necesarios para el crecimiento de los animales que ya están en el medio. Los partidarios
de la generación espontánea sostuvieron que calentar el aire
en frascos sellados destruyó su capacidad de sustentar la vida. Lente
Varios investigadores intentaron contrarrestar tales argumentos.
Muestra
Theodore Schwann (1810–1882) permitió que el aire entrara en un matraz que contenía poseedor
una solución nutritiva estéril después de que el aire hubiera pasado a través de un
tubo al rojo vivo. El matraz permaneció estéril. Posteriormente Jorge
Friedrich Schroder y Theodor von Dusch permitieron que el aire entrara en un
matraz de medio esterilizado por calor después de haber pasado a través de estéril Enfocar
tornillo
lana de algodón. No se produjo crecimiento en el medio a pesar de que el
el aire no ha sido calentado. A pesar de estos experimentos, el naturalista francés Felix
Pouchet afirmó en 1859 haber llevado a cabo experimentos que probaron de manera
concluyente que podía ocurrir un crecimiento microbiano.
sin contaminación del aire. Esta afirmación provocó que Louis Pasteur
(1822-1895) para resolver el asunto de una vez por todas. Pasteur (figura 1.4) primero
filtró aire a través de algodón y descubrió que habían quedado atrapados objetos que
parecían esporas de plantas. Si un trozo de algodón fuera Encargarse de
colocados en un medio estéril después de haber filtrado el aire a través de él, se produjo
un crecimiento microbiano. Luego colocó soluciones nutritivas en matraces,
calentó sus cuellos en una llama, y los sacó en una variedad de
curvas, manteniendo los extremos de los cuellos abiertos a la atmósfera (B)
(figura 1.5). Luego, Pasteur hirvió las soluciones durante unos minutos y
(a) (C)
Figura 1.3 Antony van Leeuwenhoek. (a) Una pintura al óleo de Leeuwenhoek (1632–1723). (b) Una réplica de bronce del Leeuwenhoek
microscopio. La foto del recuadro muestra cómo se sostiene. (c) Los dibujos de bacterias de la boca humana de Leeuwenhoek.
Figura 1.5 El experimento de generación espontánea.
Matraces de cuello de cisne de Pasteur utilizados en sus

experimentos sobre la generación espontánea de microorganismos.
Fuente: Annales Sciences Naturelle, 4.ª serie, vol. 16, pág. 1–98,
Pasteur, L., 1861, “Memorias sobre los corpúsculos organizados que
existen en la atmósfera: examen de la doctrina de las generaciones espontáneas”.
también identificó el papel de la inmunidad en la prevención de enfermedades y el control de
Figura 1.4 Luis Pasteur. Pasteur (1822–1895) trabajando en su laboratorio. microbios, desarrolló vacunas e introdujo técnicas utilizadas para prevenir infecciones durante
la cirugía.
Reconocimiento de la relación entre los

El físico inglés John Tyndall (1820–1893) asestó un golpe final a la generación espontánea
microorganismos y la enfermedad Aunque Fracastoro
en 1877 al demostrar que el polvo sí contenía gérmenes y que, si no había polvo, el caldo
permanecía estéril incluso si se exponía directamente al aire. Durante el curso de sus estudios, y algunos otros habían sugerido que los organismos invisibles producían
Tyndall proporcionó evidencia de la existencia de formas de bacterias excepcionalmente enfermedades, la mayoría creía que la enfermedad se debía a causas
resistentes al calor. Trabajando de forma independiente, el botánico alemán Ferdinand Cohn tales como fuerzas sobrenaturales, vapores venenosos llamados mias
(1828–1898) descubrió la existencia de endosporas bacterianas resistentes al calor. La mas y desequilibrios entre los cuatro humores que se pensaba que eran
endospora bacteriana (sección 3.11) presente en el cuerpo. El papel de los cuatro humores (sangre, flema,
bilis amarilla [cólera] y bilis negra [melancolía]) en la enfermedad ha sido
ampliamente aceptado desde la época del médico griego Galeno (129-199).
El apoyo a la idea de que los microorganismos causan enfermedades, es decir, la teoría de los
1. ¿Cómo establecieron finalmente Pasteur y Tyndall la generación espontánea? gérmenes de la enfermedad, comenzó a acumularse a principios del siglo XIX. Agostino Bassi
¿controversia? (1773–1856) mostró por primera vez que un microorganismo podía causar enfermedades
cuando demostró en 1835 que una enfermedad del gusano de seda se debió a una infección
2. ¿Por qué la creencia en la generación espontánea fue un obstáculo para el desarrollo
desarrollo de la microbiología como disciplina científica? por hongos. También sugirió que muchas enfermedades se debían a infecciones microbianas.
En 1845, MJ Berkeley demostró que la gran plaga de la patata de Irlanda fue causada por un
moho acuático, y en 1853, Heinrich de Bary demostró que los hongos del carbón y la roya
causaban enfermedades en los cultivos de cereales. Después de sus éxitos en el estudio de la
1.4 LA EDAD DE ORO DE LA MICROBIOLOGÍA
fermentación, el gobierno francés le pidió a Pasteur que investigara la enfermedad pèbrine de
El trabajo de Pasteur con matraces de cuello de cisne marcó el comienzo de la Edad de Oro de los gusanos de seda que estaba perturbando la industria de la seda. Después de varios años
la Microbiología. En 60 años (1857–1914), se descubrieron varios microbios causantes de de trabajo, demostró que la enfermedad se debía a un parásito protozoario. La enfermedad se
enfermedades, se lograron grandes avances en la comprensión del metabolismo microbiano y controló criando orugas a partir de huevos producidos por polillas sanas.
se mejoraron las técnicas para aislar y caracterizar los microbios. Científicos

La edad de oro de la microbiología 9
La evidencia indirecta de la teoría de los gérmenes de la enfermedad provino de la

obra del cirujano inglés Joseph Lister (1827-1912) sobre la
Prevención de infecciones de heridas. Lister, impresionado con Pasteur
estudios sobre la participación de microorganismos en la fermentación y
putrefacción, desarrolló un sistema de cirugía antiséptica diseñado para
evitar que los microorganismos entren en las heridas. Los instrumentos fueron
esterilizado por calor, y se usó fenol en apósitos quirúrgicos y en
veces rociado sobre el área quirúrgica. El enfoque fue notablemente exitoso y
transformó la cirugía después de que Lister publicara su
hallazgos en 1867. También proporcionó una fuerte evidencia indirecta de la
papel de los microorganismos en la enfermedad porque el fenol, que mata
bacterias, también previno infecciones de heridas.
Postulados de Koch
La primera demostración directa del papel de las bacterias en la causa de la
enfermedad provino del estudio del ántrax realizado por el médico alemán
Robert Koch (1843-1910). Koch (figura 1.6) usó los criterios propuestos por su antiguo
maestro, Jacob Henle (1809–1885), para establecer
la relación entre Bacillus anthracis y ántrax, y publicó sus hallazgos en 1876 (Técnicas
y Aplicaciones 1.1 brevemente ).
discute el método científico). Koch inyectó a ratones sanos
material de animales enfermos, y los ratones se enfermaron. Después Figura 1.6 Robert Koch. Koch (1843–1910) examinando un
transfiriendo ántrax por inoculación a través de una serie de 20 ratones, él espécimen en su laboratorio.
incubó un trozo de bazo que contenía el bacilo del ántrax en carne de res
suero. Los bacilos crecieron, se reprodujeron y produjeron endosporas.
Cuando los bacilos aislados o sus esporas se inyectaron en ratones, se desarrolló un postura, algunos organismos, como Mycobacterium leprae, el causante
thrax. Sus criterios para probar la relación causal entre un microorganismo y una agente de la lepra, no se puede aislar en cultivo puro.
enfermedad específica se conocen como los de Koch.

postulados (tabla 1.1). La prueba de Koch de que B. anthracis causó un thrax fue El desarrollo de técnicas para estudiar
confirmada de forma independiente por Pasteur y sus colaboradores. patógenos microbianos
Descubrieron que después del entierro de animales muertos, las esporas de ántrax Durante los estudios de Koch sobre enfermedades bacterianas, se hizo necesario
sobrevivieron y fueron llevados a la superficie por las lombrices. Saludable para aislar patógenos bacterianos sospechosos en cultivo puro, un cultivo que contiene
luego, los animales ingirieron las esporas y se enfermaron. solo un tipo de microorganismo. Al principio Koch
Aunque Koch usó el enfoque general descrito en los postulados durante sus bacterias cultivadas en las superficies estériles de papas cortadas y hervidas,
estudios sobre el ántrax, no los esbozó por completo hasta pero esto no fue satisfactorio porque las bacterias no siempre crecían bien.
su trabajo sobre la causa de la tuberculosis (tabla 1.1). En 1884, informó Eventualmente desarrolló medios de cultivo usando
que esta enfermedad fue causada por una bacteria en forma de bastón, Mycobac extractos de carne y proteínas digeridas debido a su similitud con
terium tuberculosis; fue galardonado con el Premio Nobel de Fisiología fluidos corporales. Primero trató de solidificar los medios agregando gelatina.
o Medicina en 1905 por su obra. Los postulados de Koch se convirtieron rápidamente Se desarrollaron colonias bacterianas separadas después de que la superficie del
la piedra angular de conectar muchas enfermedades a su agente causal. medio solidificado había sido rayada con una muestra bacteriana. los
Sin embargo, su uso a veces no es factible (Enfermedad 1.2). para en La muestra también se puede mezclar con medio de gelatina licuada.
Tabla 1.1 Aplicación de Koch de sus postulados para demostrar que Mycobacterium tuberculosis es la causante
Agente de la Tuberculosis.
Postulado Experimentación
1. El microorganismo debe estar presente en todos los casos de la Koch desarrolló una técnica de tinción para examinar tejido humano. Tuberculosis M.
enfermedad pero ausente en los organismos sanos. podrían identificarse células en el tejido enfermo.
2. Los microorganismos sospechosos deben aislarse y cultivarse en Koch cultivó M. tuberculosis en cultivo puro en suero sanguíneo coagulado.
un cultivo puro.
3. La misma enfermedad debe resultar cuando el aislado Koch inyectó células del cultivo puro de M.tuberculosis en cobayos.
El microorganismo se inocula en un huésped sano. Posteriormente, los conejillos de indias murieron de tuberculosis.
4. El mismo microorganismo debe aislarse nuevamente de Koch aisló M. tuberculosis de los cobayos muertos y fue
el huésped enfermo. capaz de volver a cultivar el microbio en cultivo puro en suero sanguíneo coagulado.
1.1 El método científico
Aunque los biólogos emplean una variedad de enfoques para realizar Problema
En la investigación, los microbiólogos y otros biólogos orientados a la
experimentación a menudo utilizan el enfoque general conocido como método científico.
método. Primero recopilan observaciones del proceso a estudiar.
y luego desarrollar una hipótesis tentativa, una conjetura educada, para Desarrollar hipótesis
explique las observaciones (vea la figura del recuadro). Este paso a menudo es
inductivo y creativo porque no existe una técnica detallada y automática para
generar hipótesis. A continuación deciden qué
Seleccione la información necesaria
se requiere información para probar la hipótesis y recopilar esta información a
para probar la hipótesis
través de la observación o experimentos cuidadosamente diseñados.
Una vez recopilada la información, deciden si la
hipótesis ha sido apoyada o falsada. Si no ha pasado
la prueba, se rechaza la hipótesis y se construye una nueva explicación o hipótesis. Recolectar información por
Si la hipótesis pasa la prueba, se somete a una prueba más severa. El procedimiento observación o experimento
a menudo se hace más
eficiente construyendo y probando hipótesis alternativas y
luego refinar la hipótesis que sobrevive a la prueba. Este enfoque general suele
Analizar información
denominarse método hipotético-deductivo. Uno deduce predicciones de la hipótesis
actualmente aceptada y prueba
ellos. En la deducción, la conclusión sobre casos específicos se sigue lógicamente
de una premisa general ("si..., entonces..." razonamiento).
contrario. La
Se inducción
llega a una
esconclusión
lo Hipótesis Hipótesis
No soportado soportado
general después de
teniendo en cuenta muchos ejemplos específicos. Ambos tipos de razonamiento son
utilizado por los científicos.
A la hora de realizar un experimento, es imprescindible utilizar un control Expuesto a
grupo, así como un grupo experimental. El grupo de control es tratado más pruebas
exactamente lo mismo que el grupo experimental excepto que la manipulación

experimental no se realiza en él. De esta manera uno puede ser
Asegúrese de que cualquier cambio en el grupo experimental se deba a la Hipótesis Continuado
manipulación experimental y no a algún otro factor que no se haya tenido en cuenta. o teoría apoyo
cuenta. No soportado
Si una hipótesis continúa sobreviviendo a las pruebas, puede aceptarse como
una teoría válida. Una teoría es un conjunto de proposiciones y conceptos que
proporciona una explicación fiable, sistemática y rigurosa de un aspecto de la Teoría
naturaleza. Es importante notar que las hipótesis y teorías nunca son
absolutamente probado. Los científicos simplemente ganan más y más confianza
en su precisión a medida que continúan sobreviviendo a las pruebas, encajan con
Más pruebas
nuevas observaciones y experimentos, y explican satisfactoriamente lo observado
fenómenos. En última instancia, si el apoyo a una hipótesis o teoría se vuelve muy
fuerte, se considera que es una ley científica. Ejemplos
incluyen las leyes de la termodinámica discutidas en la sección 8.3. Continuado
apoyo
Ley
Cuando el medio de gelatina se endureció, las bacterias individuales con éxito para hacer jaleas durante algún tiempo. El agar no fue atacado
produjeron colonias separadas. A pesar de sus ventajas, la gelatina no era por la mayoría de las bacterias y no se fundió hasta alcanzar una
un agente solidificante ideal porque puede ser digerido por muchos temperatura de 100°C. Además, una vez derretido, no solidificó.
bacterias y se funde a temperaturas superiores a 28°C. Fannie hasta alcanzar una temperatura de 50°C, eliminando la necesidad de
Eilshemius Hesse, la esposa de Fannie Eilshemius Hesse, la esposa de manejar líquido hirviendo y dar tiempo para la manipulación del
Walther Hesse, uno de los asistentes de Koch (figura 1.7). Sugirió el medio. Algunos de los medios desarrollados por Koch y sus asociados,
uso de agar como agente solidificante; había estado usando como el caldo nutritivo y el agar nutritivo, todavía se utilizan ampliamente.
La edad de oro de la microbiología 11
1.2 Postulados moleculares de Koch
Aunque los criterios que desarrolló Koch para probar una relación causal entre un 2. Inactivación del gen o genes asociados con la sospecha
microorganismo y una enfermedad específica han sido el rasgo de virulencia debería disminuir sustancialmente la patogenicidad.
de gran importancia en microbiología médica, no siempre es posible aplicarlos en el 3. Reemplazo del gen mutado con el gen de tipo salvaje normal
estudio de enfermedades humanas. por ejemplo, algunos debe restaurar completamente la patogenicidad.
los patógenos no se pueden cultivar en cultivo puro fuera del huésped; porque 4. El gen debe expresarse en algún momento durante la infección
otros patógenos crecen solo en humanos, su estudio requeriría experimentación en y proceso de la enfermedad.
personas. La identificación, aislamiento y clonación de 5. Anticuerpos o células del sistema inmunitario dirigidos contra el gen
genes responsables de la virulencia de patógenos han hecho posible una nueva los productos deben proteger al huésped.
forma molecular de los postulados de Koch que resuelve algunas de estas dificultades.
El enfoque molecular no siempre se puede aplicar debido a problemas como la falta
El énfasis está en los genes de virulencia presentes en el agente infeccioso más que
de un sistema animal apropiado. También es difícil emplear los postulados moleculares
en el agente mismo. Los postulados moleculares
cuando el patógeno no está
puede resumirse brevemente de la siguiente manera:
bien caracterizada genéticamente.
1. El rasgo de virulencia en estudio debe asociarse mucho más
con cepas patógenas de la especie que con cepas no patógenas
son.
Si el agente pasa a través de un filtro diseñado para atrapar células bacterianas,

el agente debe ser algo más pequeño que una bacteria.
Beijerinck propuso que el agente era un “virus filtrable”.
Finalmente, se demostró que los virus eran diminutos, acelulares e infecciosos.
agentes Desarrollo temprano de la virología (sección 16.1)
Estudios inmunológicos
En este período también se avanzó en determinar cómo los animales
resistencia a enfermedades y en el desarrollo de técnicas para proteger a los
seres humanos y al ganado contra patógenos. Durante los estudios sobre pollo
cólera, Pasteur y Roux descubrieron que incubar sus cultivos durante largos
intervalos entre transferencias atenuaría las bacterias, lo que significaba que
habían perdido su capacidad de causar la enfermedad.
Si a los pollos se les inyectaran estos cultivos atenuados,
se mantuvo saludable pero desarrolló la capacidad de resistir la enfermedad. Él
Figura 1.7 Fannie Eilshemius (1850–1934) y Walther
llamó al cultivo atenuado una vacuna [latín vacca, vaca] en honor
Hessen (1846-1911). Fannie Hesse le sugirió a su esposo
de Edward Jenner porque, muchos años antes, Jenner había usado
Walther (médico y bacteriólogo) que debería intentar usar agar en
material de las lesiones de viruela bovina para proteger a las personas contra la viruela.
su medio de cultivo cuando los medios más típicos no satisfacían sus necesidades.
Poco tiempo después, Pasteur y Chamberland desarrollaron una vacuna atenuada
contra el ántrax de dos maneras: tratando cultivos con bicromato de potasio e
usado. Otra herramienta importante desarrollada en el laboratorio de Koch incubando la bacteria a 42 o 43 °C.
era un recipiente para contener medios solidificados: la placa de petri Control de epidemias: Vacunas e inmunizaciones (sección 36.8)
(plato), llamado así por Richard Petri, quien lo ideó. Estos desarrollos estimularon Pasteur luego preparó la vacuna contra la rabia con un enfoque diferente.
directamente el progreso en todas las áreas de la bacteriología. El patógeno fue atenuado al crecer en un huésped anormal,
Medios de cultivo (sección 5.7); Aislamiento de cultivos puros (sección 5.8) El conejo. Después de que los conejos infectados habían muerto, sus cerebros y columna vertebral
Los patógenos virales también se estudiaron durante este tiempo. El Se quitaron los cordones y se secaron. Durante el curso de estos estudios,
descubrimiento de los virus y su papel en las enfermedades fue posible Joseph Meister, un niño de nueve años que había sido mordido por un
cuando Charles Chamberland (1851-1908), uno de los socios de Pasteur, perro rabioso, fue llevado a Pasteur. Dado que la muerte del niño era segura en
construyó un filtro bacteriano de porcelana en 1884. Dimitri ausencia de tratamiento, Pasteur accedió a intentar la vacunación.
Ivanowski y Martinus Beijerinck (pronunciado “by-a-rink”) Joseph fue inyectado 13 veces durante los siguientes 10 días con preparaciones
usó el filtro para estudiar la enfermedad del mosaico del tabaco. Encontraron que cada vez más virulentas del virus atenuado. Sobrevivió.
extractos de plantas y savia de plantas enfermas eran infecciosos, incluso En agradecimiento por el desarrollo de vacunas de Pasteur, la gente
después de ser filtrado con el filtro de Chamberland. porque la infección de todo el mundo contribuyeron a la construcción del
Instituto Pasteur de París, Francia. Una de las tareas iniciales de la

Instituto fue la producción de vacunas.
Después del descubrimiento de que el bacilo de la difteria producía un
toxina, Emil von Behring (1854-1917) y Shibasaburo Kitasato
(1852-1931) inyectó toxina inactivada en conejos, induciendo
para producir una antitoxina, una sustancia en la sangre que
inactivar la toxina y proteger contra la enfermedad. Luego se preparó una antitoxina
tetánica y ambas antitoxinas se usaron en el
trato de las personas.
El trabajo de antitoxina proporcionó evidencia de que la inmunidad podría resultar
de sustancias solubles en la sangre, ahora conocidas como anticuerpos (inmunidad
humoral). Quedó claro que las células sanguíneas también eran
importante en la inmunidad (inmunidad celular) cuando Elie Metchnikoff
(1845-1916) descubrió que algunos leucocitos de la sangre podían engullir
bacterias causantes de enfermedades (figura 1.8). Llamó a estas células fagocitos y al
proceso fagocitosis [del griego phagein, comer].
1. Discuta las contribuciones de Lister, Pasteur y Koch a la teoría de los gérmenes

de enfermedad y al tratamiento o prevención de enfermedades.
2. ¿Qué otras contribuciones hizo Koch a la microbiología?
Figura 1.8 Elie Metchnikoff. Metnikoff (1845-1916)
3. Describe los postulados de Koch. ¿Qué es un cultivo puro? ¿Por qué son importantes las culturas
puras para los postulados de Koch? se muestra aquí en el trabajo en su laboratorio.
4. ¿La microbiología se habría desarrollado más lentamente si Fannie Hesse no hubiera
sugirió el uso de agar? Da tu razonamiento. que todas las fermentaciones se debieron a la actividad de levaduras específicas
5. ¿Cuáles son los postulados moleculares de Koch? ¿Por qué son importantes? y bacterias, y publicó varios artículos sobre fermentación entre 1857 y 1860. Su éxito
6. Algunas personas pueden estar infectadas por un patógeno y no desarrollar la enfermedad. En condujo a un estudio de las enfermedades del vino.
De hecho, algunos se convierten en portadores crónicos del patógeno. ¿Cómo impacta y el desarrollo de la pasteurización para conservar el vino durante
esta observación en los postulados de Koch? ¿Cómo podrían modificarse los postulados almacenamiento. Los estudios de Pasteur sobre la fermentación continuaron durante casi 20
para dar cuenta de la existencia de portadores crónicos?
años. Uno de sus descubrimientos más importantes fue que algunos microorganismos
7. Describe el método científico con tus propias palabras. ¿Cómo difiere una teoría? fermentadores eran anaerobios y sólo podían vivir en
de una hipotesis? ¿Por qué es importante tener un grupo de control? la ausencia de oxígeno, mientras que otros podían vivir aeróbicamente o anaeróbicamente.
8. ¿Cómo contribuyeron von Behring y Metchnikoff al desarrollo de Control del deterioro de los alimentos (sección 40.3)
¿inmunología? La ecología microbiana se desarrolló cuando algunos de los primeros microbiólogos
optaron por investigar el papel ecológico de los microorganismos. En particular, estudiaron
la implicación microbiana en la
1.5 EL DESARROLLO DE LA INDUSTRIA ciclos de carbono, nitrógeno y azufre que tienen lugar en el suelo y
MICROBIOLOGÍA Y ECOLOGÍA MICROBIANA hábitats acuáticos. El microbiólogo ruso Sergei Winogradsky
(1856-1953) hizo muchas contribuciones a la microbiología del suelo. Él
Aunque los humanos habían explotado microbios sin saberlo durante miles de años, la
descubrió que las bacterias del suelo podían oxidar el hierro, el azufre y el amoníaco
microbiología industrial se desarrolló en gran parte
para obtener energía, y que muchas bacterias podían incorporar
del trabajo de Louis Pasteur y otros sobre las fermentaciones alcohólicas que produjeron
CO2 en materia orgánica como lo hacen los organismos fotosintéticos.
vino y otras bebidas alcohólicas. En
Winogradsky también aisló bacterias anaeróbicas del suelo fijadoras de nitrógeno
1837, cuando Theodore Schwann y otros propusieron que la levadura
y estudió la descomposición de la celulosa. Martinus Beijerinck
células eran responsables de la conversión de azúcares en alcohol, la
(1851-1931) fue uno de los grandes microbiólogos generales que
Los principales químicos de la época creían que los microorganismos no estaban
hecho contribuciones fundamentales a la ecología microbiana y muchos
involucrados. Estaban convencidos de que la fermentación se debía a una inestabilidad
otros campos. Aisló la bacteria aeróbica fijadora de nitrógeno
química que degradaba los azúcares a alcohol. Pasteur no
Azotobacter, una bacteria del nódulo de la raíz también capaz de fijar nitrógeno (más
estar de acuerdo; creía que las fermentaciones eran realizadas por organismos vivos. En
tarde llamado Rhizobium) y bacterias reductoras de sulfato.
1856 M. Bigo, un industrial de Lille, Francia, donde
Beijerinck y Winogradsky también desarrollaron la técnica de cultivo de enriquecimiento
Pasteur trabajó, solicitó la ayuda de Pasteur. Su negocio producía etanol a partir de la
y el uso de medios selectivos, que han sido
fermentación de azúcares de remolacha, y la producción de alcohol había disminuido
de gran importancia en microbiología. Ciclo biogeoquímico
recientemente y el producto se había agriado.
(sección 27.2); Medios de cultivo (sección 5.7)
Pasteur descubrió que la fermentación estaba fallando porque el
la levadura normalmente responsable de la formación de alcohol había sido reemplazada
1. Describa brevemente el trabajo de Pasteur sobre fermentaciones microbianas.
por microorganismos que producían ácido láctico en lugar de
2. ¿Cómo contribuyeron Winogradsky y Beijerinck al estudio de la ecología microbiana?
etanol. Al resolver este problema práctico, Pasteur demostró
El alcance y la relevancia de la microbiología 13
3. A menudo se hace referencia a Leeuwenhoek como el padre de la microbiología. Sin embargo,

alergias y enfermedades autoinmunes como la artritis reumatoide.
muchos historiadores creen que Louis Pasteur, Robert Koch, o tal vez ambos, Técnicas y aplicaciones 32.2: Tecnología de anticuerpos monoclonales
merecen ese honor. ¿Quién cree que es el padre de la microbiología? ¿Por qué? La microbiología agrícola se ocupa del impacto de
4. Considere los descubrimientos descritos en las secciones 1.2 a 1.5. ¿Cuál cree que microorganismos en la agricultura. Los microbiólogos agrícolas intentan
para combatir las enfermedades de las plantas que atacan cultivos alimentarios importantes, el trabajo
¿Cuáles fueron los más importantes para el desarrollo de la microbiología? ¿Por qué?
sobre métodos para aumentar la fertilidad del suelo y el rendimiento de los cultivos, y estudiar la
papel de los microorganismos que viven en el tracto digestivo de los rumiantes
1.6 ALCANCE Y PERTINENCIA
como el ganado. Actualmente existe un gran interés en el uso de bacterias
DE MICROBIOLOGIA
y patógenos virales de insectos como sustitutos de pesticidas químicos.
Como enfatizó el difunto científico y escritor Steven Jay Gould , vivimos La ecología microbiana se ocupa de las relaciones entre los microorganismos y los
en la Era de las Bacterias. Fueron los primeros organismos vivos en nuestro componentes de su vida y
planeta y vivir virtualmente en todos los lugares donde la vida es posible. Es más, hábitats no vivos. Los ecologistas microbianos estudian las contribuciones globales y
toda la biosfera depende de sus actividades, e influyen locales de los microorganismos al carbono, nitrógeno y
la sociedad humana de innumerables maneras. Porque los microorganismos juegan ciclos de azufre El estudio de los efectos de la contaminación sobre los microorganismos.
roles tan diversos, la microbiología moderna es una gran disciplina con también es importante debido al impacto que estos organismos tienen en
muchas especialidades diferentes; tiene un gran impacto en campos como el entorno. Los ecologistas microbianos están empleando microorganismos en la
medicina, ciencias agrícolas y de los alimentos, ecología, genética, bioquímica y biología biorremediación para reducir la contaminación.
molecular. Una indicación de la importancia Los científicos que trabajan en microbiología alimentaria y láctea intentan prevenir el
de microbiología es el premio Nobel otorgado por trabajos en fisiología o deterioro microbiano de los alimentos y la transmisión de enfermedades transmitidas por
medicamento. Alrededor de un tercio de estos han sido otorgados a científicos. los alimentos, como el botulismo y la salmonelosis. también usan
trabajando en problemas microbiológicos (vea el interior de la portada). microorganismos para elaborar alimentos como quesos, yogures, encurtidos,
La microbiología tiene aspectos tanto básicos como aplicados (figura 1.9). y cerveza. En el futuro, los propios microorganismos pueden volverse
Los aspectos básicos se refieren a la biología de los microorganismos. una fuente de nutrientes más importante para el ganado y los seres humanos.
mismos e incluyen campos tales como bacteriología, virología, micología (estudio de Microbiología de los alimentos (capítulo 40)
hongos), ficología o algología (estudio de algas), pro tozoología, citología y fisiología En 1929, Alexander Fleming descubrió que el hongo
microbiana, genética microbiana Penicillium produjo lo que él llamó penicilina, el primer antibiótico
y biología molecular, ecología microbiana y taxonomía microbiana. que podría controlar con éxito las infecciones bacterianas. Aunque tomó
Los aspectos aplicados se refieren a problemas prácticos tales como Segunda Guerra Mundial para que los científicos aprendieran a producirlo en masa, los
tratamiento de enfermedades, agua y aguas residuales, deterioro de alimentos y científicos pronto encontraron otros microorganismos capaces de producir antibióticos
producción y usos industriales de microbios. Es importante tener en cuenta adicionales, así como compuestos como el ácido cítrico, la vitamina
que los aspectos básicos y aplicados de la microbiología están entrelazados. B12 y glutamato monosódico. Hoy en día, los microbiólogos industriales
La investigación básica a menudo se lleva a cabo en campos aplicados y aplicaciones. utilizar microorganismos para fabricar productos como antibióticos, vacunas,
a menudo surgen de la investigación básica. Una discusión de algunos de los principales esteroides, alcoholes y otros disolventes, vitaminas, aminoácidos y enzimas. Los
campos de la microbiología y las ocupaciones que ofrecen a continuación. microbiólogos industriales identifican microbios útiles para la industria. También diseñan
Uno de los campos más activos e importantes de la microbiología. microbios con rasgos deseables e idean
es la microbiología médica, que se ocupa de las enfermedades de los seres humanos sistemas para cultivarlos y aislar los productos que elaboran.
y animales Los microbiólogos médicos identifican los agentes que causan Los microbiólogos que trabajan en fisiología microbiana y bioquímica estudian muchos
enfermedades infecciosas y planificar medidas para su control y eliminación. Con frecuencia aspectos de la biología de los microorganismos. Ellos
están involucrados en el seguimiento de nuevos, puede estudiar la síntesis de antibióticos y toxinas, energía microbiana
patógenos no identificados como el agente que causa la variante producción, las formas en que los microorganismos sobreviven a las duras condiciones
la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (la versión humana de la “enfermedad de las vacas ambientales, la fijación de nitrógeno microbiano y los efectos de
locas”), el hantavirus, el virus del Nilo Occidental y el virus responsable del SARS. Estos agentes químicos y físicos sobre el crecimiento y la supervivencia microbiana.
microbiólogos también estudian las formas en que La genética microbiana y la biología molecular se centran en la naturaleza de
qué microorganismos causan enfermedades. Enfermedades virales transmitidas por artrópodos información genética y cómo regula el desarrollo y la función de las células y los
(sección 37.2); Diversidad Microbiana y Ecología 18.1: SARS: Evolución de un virus organismos. El uso de microorganismos ha sido
La microbiología de la salud pública está estrechamente relacionada con la muy útil para comprender la estructura y función de los genes. Microbiano
microbiología médica. Los microbiólogos de salud pública tratan de identificar y controlar Los genetistas juegan un papel importante en la microbiología aplicada porque
la propagación de enfermedades transmisibles. A menudo monitorean desarrollan técnicas que son útiles en microbiología agrícola,
establecimientos comunitarios de alimentos y suministros de agua en un intento microbiología industrial, microbiología de alimentos y lácteos, y medicina.
para mantenerlos seguros y libres de agentes de enfermedades infecciosas.

La inmunología se ocupa de cómo el sistema inmunitario protege al cuerpo de los
1. Describa brevemente las principales subdisciplinas de la microbiología.
patógenos y la respuesta de las enfermedades infecciosas.
2. ¿Por qué crees que los microorganismos son tan útiles para los biólogos como experimentales?
agentes Es una de las áreas de más rápido crecimiento en la ciencia; por ejemplo, las modelos?
técnicas para la producción y uso de anticuerpos monoclonales se han desarrollado con
3. Haz una lista de todas las actividades o negocios que se te ocurran en tu comunidad
extrema rapidez. La inmunología también se ocupa
que dependen directamente de la microbiología.
con problemas prácticos de salud tales como la naturaleza y el tratamiento de
(a) Rita Colwell (b) RGE Murray (c) Stanley Falkow
(d) Marta Howe (e) Federico Neidhardt f) Jean Brenchley
Figura 1.9 Contribuyentes importantes a la microbiología. (a) Rita Colwell ha estudiado la genética y ecología de bacterias marinas como
como Vibrio cholerae y ayudó a establecer el campo de la biotecnología marina. (b) RGE Murray ha contribuido en gran medida a la comprensión de
envolturas de células bacterianas y taxonomía bacteriana. (c) Stanley Falkow ha mejorado nuestra comprensión de cómo los patógenos bacterianos causan
enfermedad. (d) Martha Howe ha hecho contribuciones fundamentales a nuestro conocimiento del bacteriófago Mu. (e) Frederick Neidhardt ha
contribuyó a la microbiología a través de su trabajo sobre la regulación de la fisiología y el metabolismo de E. coli, y como coautor de
libros de texto (f) Jean Brenchley ha estudiado la regulación del metabolismo del glutamato y la glutamina, ayudó a fundar el Estado de Pensilvania
Instituto Universitario de Biotecnología, y ahora está encontrando usos biotecnológicos para microorganismos psicrofílicos (amantes del frío).
¿Cuáles son algunas de las áreas más prometedoras para la futura investigación
1.7 EL FUTURO DE LA MICROBIOLOGÍA
microbiológica y sus posibles impactos prácticos? Qué
Como se ha mostrado en las secciones anteriores, la microbiología ha tenido una ¿Qué tipos de desafíos enfrentan los microbiólogos? una discusión de
profunda influencia en la sociedad. ¿Qué hay del futuro? escritor de ciencia A continuación se presentan algunos aspectos del futuro de la microbiología.
Bernard Dixon es muy optimista sobre el futuro de la microbiología para La microbiología médica, la microbiología de la salud pública y la inmunología
dos razones. Primero, la microbiología tiene una misión más clara que seguirán siendo áreas de intensa investigación. Nuevas enfermedades infecciosas
muchas otras disciplinas científicas. En segundo lugar, la microbiología tiene grandes están surgiendo continuamente y las viejas enfermedades son una vez
significado práctico. Dixon señala que se requiere microbiología volviendo a generalizarse y ser destructivo. El SIDA, el SARS, las fiebres
tanto para hacer frente a la amenaza de enfermedades infecciosas humanas nuevas como reemergentes. hemorrágicas y la tuberculosis son excelentes ejemplos de nuevos
enfermedades y desarrollar tecnologías industriales más eficientes y respetuosas y enfermedades infecciosas reemergentes. Los microbiólogos tendrán que
con el medio ambiente. responder a estas amenazas, muchas de ellas actualmente desconocidas. Ellos
El futuro de la microbiología 15
También deberá encontrar formas de detener la propagación de enfermedades organismos Un mayor conocimiento de la naturaleza de estas relaciones simbióticas
infecciosas establecidas, así como la propagación de múltiples resistencias a los puede ayudar a mejorar nuestra apreciación del mundo vivo. Eso
antibióticos, que pueden hacer que un patógeno sea resistente a los tratamientos médicos actuales.
también dará lugar a nuevos enfoques en el tratamiento de enfermedades infecciosas en
tratamiento. También se pedirá a los microbiólogos que creen nuevos ganado y en humanos.
medicamentos y vacunas, para estudiar la asociación entre infecciones Los campos de la genómica y la proteómica han y seguirán
agentes y enfermedades crónicas (por ejemplo, autoinmune y cardiovascular tener un tremendo impacto en la microbiología. Los genomas de
enfermedades), y para ampliar nuestra comprensión de las defensas del huésped y muchos microorganismos ya han sido secuenciados y
cómo los patógenos interactúan con las células huésped. Será necesario utilizar muchos más se determinarán en los próximos años. Estas secuencias son ideales
técnicas en biología molecular y tecnología de ADN recombinante para resolver para aprender cómo se relaciona el genoma con la célula.
muchos de estos problemas. estructura y función y para proporcionar información sobre cuestiones fundamentales
Microbiología industrial y microbiología ambiental de la biología, como la complejidad de las estructuras celulares.
también enfrentan muchos desafíos y oportunidades. Los microorganismos son se desarrollan y cómo las células se comunican entre sí y responden al entorno. El
cada vez más importante en la industria y el control ambiental, análisis del genoma y su actividad requerirá avances continuos en el campo de la
y debemos aprender a usarlos en una variedad de nuevas formas. Para bioinformática
ejemplo, los microorganismos pueden servir como fuentes de alta calidad y el uso de computadoras para investigar problemas biológicos.
alimentos y otros productos prácticos como enzimas para uso industrial Quizás el mayor desafío al que se enfrenten los microbiólogos será
aplicaciones También se pueden utilizar para degradar contaminantes y evaluar las implicaciones de los nuevos descubrimientos y
desechos tóxicos y como vectores para tratar enfermedades y mejorar la productividad desarrollos El ritmo de estos descubrimientos y desarrollos es
agrícola. También existe una necesidad continua de proteger los alimentos muy rápido, y a veces es difícil para los no científicos seguirlos y evaluarlos. Los
y cultivos del daño microbiano. microbiólogos deberán comunicarse
El desarrollo de técnicas, especialmente técnicas basadas en ADN, que permiten una visión equilibrada de lo positivo y lo negativo a largo plazo
el estudio de microorganismos en su entorno natural ha estimulado enormemente la impactos de estos desarrollos en la sociedad.
investigación en ecología microbiana. Claramente, el futuro de la microbiología es brillante. El microbiólogo René
Varias áreas de investigación seguirán siendo importantes. Dubos ha resumido bien la emoción y la promesa de la microbiología:
La comprensión de la diversidad microbiana es un área que requiere más
investigación. Se estima que menos del 1% de los microbios de la Tierra tienen
sido cultivado. Se requerirán mayores esfuerzos para cultivar microbios previamente Qué extraordinario que, en todo el mundo, los microbiólogos estén ahora
no cultivados. También queda mucho trabajo por hacer sobre los microorganismos involucrados en actividades tan diferentes como la
que viven en entornos extremos. el descubrimiento de estudio de la estructura genética, el control de enfermedades y los procesos
microorganismos nuevos e inusuales bien pueden conducir a nuevos avances en el industriales basados en la extraordinaria capacidad de los microorganismos
desarrollo de nuevos agentes antimicrobianos, para descomponer y sintetizar complejos
procesos y biorremediación. Otra área de creciente interés moléculas orgánicas. La microbiología es una de las profesiones más
para los ecólogos microbianos son las biopelículas. Los microbios a menudo forman biopelículas gratificantes porque brinda a sus practicantes
en las superficies, y al hacerlo exhiben una fisiología que difiere de la oportunidad de estar en contacto con todos los demás naturales
la observada cuando viven libres o planctónicamente. Por ejemplo, ciencias y así contribuir de muchas maneras diferentes a
Los microbios en una biopelícula suelen ser más resistentes a los agentes letales que el mejoramiento de la vida humana.
están cuando no están en una biopelícula. Las biopelículas no sólo son de interés para
ecólogos microbianos; pueden formarse en tejidos humanos, en catéteres domésticos
y en otros dispositivos médicos hechos por el hombre. En 1. ¿Cuáles cree que son las cinco áreas de investigación más importantes a seguir?
De hecho, los ecologistas microbianos y los microbiólogos médicos ahora entienden en microbiologia? Da razones para tus elecciones.
que los microorganismos son socios esenciales con mayor o menor
Resumen
1.1 Miembros del mundo microbiano entidades acelulares que no se ubican en ninguno de los dominios pero se clasifican por
un sistema separado.
un. La microbiología estudia organismos microscópicos que a menudo son unicelulares, o si
pluricelulares, no tienen tejidos muy diferenciados. La disciplina también 1.2 El descubrimiento de los microorganismos
definido por las técnicas que utiliza, en particular, las utilizadas para aislar y cultivar
un. Antony van Leeuwenhoek fue la primera persona en describir extensamente los
microorganismos.
microorganismos.
B. Las células procarióticas difieren de las células eucarióticas en que carecen de una membrana delimitada
núcleo, y de otras maneras también. 1.3 El conflicto por la generación espontánea
C. Los microbiólogos dividen los organismos en tres dominios: bacterias, arqueas y un. Los experimentos de Redi y otros refutan la teoría de la generación espontánea con
Eucarya. respecto a los organismos más grandes.
D. Los dominios Bacteria y Archaea consisten en microorganismos procarióticos. los B. La generación espontánea de microorganismos fue refutada por Spallan zani, Pasteur,
Los microbios eucarióticos (protistas y hongos) se colocan en Eucarya. Los virus son Tyndall y otros.
dieciséis
Capítulo 1 Historia y alcance de la microbiología
1.4 La edad de oro de la microbiología B. El papel de los microorganismos en los ciclos del carbono, nitrógeno y azufre fue primero
Estudiado por Winogradsky y Beijerinck.
un. El apoyo a la teoría de los gérmenes de la enfermedad provino del trabajo de Bassi, Pasteur,
Koch y otros. Lister proporcionó evidencia indirecta con su desarrollo de la cirugía antiséptica. 1.6 Alcance y relevancia de la microbiología
un. En el siglo XX, la microbiología contribuyó en gran medida a los campos de la medicina, la
B. Los postulados de Koch y los postulados de Koch molecular se utilizan para demostrar una relación
genética, la agricultura, la ciencia de los alimentos, la bioquímica y la biología molecular. B.
directa entre un patógeno sospechoso y una enfermedad. C. Koch desarrolló las técnicas
Existe una amplia variedad de campos en microbiología, y muchos tienen un gran impacto en la
necesarias para cultivar bacterias en medios sólidos y aislar cultivos puros de patógenos. D. Pasteur
sociedad. Estos incluyen las disciplinas más aplicadas, como la microbiología médica, de salud
fabricó vacunas contra el ántrax y la rabia; Von Behring y
pública, industrial, alimentaria y láctea. La ecología microbiana, la fisiología, la bioquímica y la
genética son ejemplos de campos básicos de investigación microbiológica.
Kitasato preparó antitoxinas para la difteria y el tétanos.
mi. Metchnikoff descubrió que algunos leucocitos de la sangre podían fagocitarse y descomponerse.
1.7 El futuro de la microbiología
patógenos bacterianos destruidos.
un. Los microbiólogos se enfrentarán a muchos desafíos futuros emocionantes e importantes, como
1.5 El desarrollo de la microbiología industrial y la ecología microbiana encontrar nuevas formas de combatir las enfermedades, reducir la contaminación y alimentar a
un. Pasteur demostró que las fermentaciones eran causadas por microorganismos y que algunos la población mundial.
microorganismos podían vivir en ausencia de oxígeno.
Términos clave
algas 3 hongos 3 célula procariótica 2 generación espontánea 6 virus

arqueas 3 Postulados de Koch 9 protistas 3 protozoos 3 3
bacterias 2 microbiología 1 mohos mucilaginosos 3 moldes de agua 3
célula eucariota 1 microorganismo 1
1. Considere el impacto de los microbios en el curso de la historia mundial. La historia está llena de 2. Las vacunas contra diversas enfermedades infantiles han contribuido a la entrada
ejemplos de instancias o circunstancias en las que un grupo de personas perdió la lucha contra de las mujeres, en particular las madres, en el lugar de trabajo a tiempo completo.
otro. De hecho, cuando se examinan más de cerca, los “perdedores” a menudo tienen la
un. ¿Esta afirmación está respaldada por datos que comparan la disponibilidad y el alcance de
desgracia de estar expuestos, ser más susceptibles o incapaces de hacer frente a un agente
la vacunación con las estadísticas de empleo en diferentes lugares o en diferentes momentos?
infeccioso. Así, debilitados en su fuerza física o desmoralizados por el curso de una enfermedad
devastadora, fueron vencidos fácilmente por los “conquistadores” humanos.
B. Antes de las vacunas contra el sarampión, las paperas y la varicela, ¿cuál era el tiempo de
incubación y la duración de estas enfermedades infantiles? ¿Qué impacto tendrían tales
un. Elija un ejemplo de una batalla u otra actividad humana como la exploración de un nuevo enfermedades en las madres con varios niños en edad escolar primaria en el hogar si
territorio y determine el impacto de los microorganismos, ya sea autóctonos o transportados tuvieran trabajos de tiempo completo y carecieran de un apoyo sustancial para el cuidado
a la región, en esa actividad.
de los niños? C. ¿Cuál sería la consecuencia si toda una generación de niños (o un grupo de
B. Discuta el efecto que los microbios tuvieron en el resultado de su ejemplo. C. Sugiera si el niños en un país) no fuera vacunado contra ninguna enfermedad?
advenimiento de los antibióticos, la tecnología de almacenamiento y preparación de alimentos o ¿Qué predice que sucedería si estos niños fueran a la universidad y vivieran en un dormitorio
la tecnología de esterilización habrían marcado una diferencia en la muy cerca de otros que hubieran recibido todas las vacunas infantiles recomendadas?
Salir.
Aprende más
Brock, TD 1961. Hitos en microbiología. Englewood Cliffs, Nueva Jersey: Prentice-Hall. Fredricks, DN y Relman, DA 1996. Identificación basada en secuencias de patógenos microbianos:
una reconsideración de los postulados de Koch. clin. Microbiol. Apocalipsis 9(1):18–33.
Brock, TD 1988. Robert Koch: Una vida en medicina y bacteriología. Madison, Wisc.: Science Tech
Publishers.
Geison, GL 1995. La ciencia privada de Louis Pasteur. Princeton, Nueva Jersey: Princeton University
Chung, KT y Ferris, DH 1996. Martinus Willem Beijerinck (1851–1931): pionero de la microbiología
Press.
general. Noticias ASM 62 (10): 539–43.
de Kruif, P. 1937. Cazadores de microbios. Nueva York: Harcourt, Brace. Stanier, RY 1978. ¿Qué es la microbiología? En Essays in microbiology, JR Norris y MH Richmond,
editores, 1/1–32/1. Nueva York: John Wiley and Sons.
Dixon, B. 1997. Microbiología presente y futuro. Noticias ASM 63(3):124–25.
Woese, CR 2000. Interpretación del árbol filogenético universal. proc. nacional Academia
Ford, BJ 1998. Las primeras opiniones. ciencia Soy. 278(4):50–53.
ciencia 97(15):8392–96.

30.3 correspondiente a una cabeza 17
2El
Estructura:
Estudio de microbios
Microscopía y muestra
Preparación
Clostridium botulinum es una bacteria en forma de bastón que forma endosporas y
libera toxina botulínica, la causa de la intoxicación alimentaria por botulismo. En esta
micrografía de contraste de fase, las endosporas son objetos ovales brillantes ubicados en los extremos
de las varillas; se han liberado algunas endosporas de las células que las formaron.
AVANCE
• Los microscopios de luz usan lentes de vidrio para doblar y enfocar los rayos de luz para alquilar investigación microbiológica. Cerramos el capítulo con una breve
producir imágenes ampliadas de objetos pequeños. La resolución máxima de un introducción a dos nuevas formas de microscopía: microscopía confocal y
microscopio óptico es de unos 0,2 m. microscopía de sonda de barrido.
• Se han desarrollado muchos tipos de microscopios ópticos, incluidos
Microscopios de campo claro, campo oscuro, contraste de fase y fluorescencia.
Cada uno produce una imagen distintiva. 2.1 LAS LENTES Y LA DOBLACIÓN DE LA LUZ
• La microscopía de campo claro requiere la aplicación de tinciones a los microorganismos
Para entender cómo funciona un microscopio óptico, uno debe saber
para facilitar su visualización. Las tinciones también se usan para determinar
algo sobre la forma en que las lentes se doblan y enfocan la luz para
la naturaleza de las paredes celulares bacterianas o para visualizar procariotas específicas
formar imágenes. Cuando un rayo de luz pasa de un medio a otro, se produce
estructuras tales como flagelos y cápsulas.
la refracción , es decir, el rayo se desvía en la interfaz.
• El aumento útil de un microscopio óptico está limitado por su poder de resolución. El
El índice de refracción es una medida de cuánto una sustancia
poder de resolución está limitado por la longitud de onda de
reduce la velocidad de la luz; la dirección y la magnitud de la flexión están
el rayo de luz.
determinadas por los índices de refracción de los dos medios que forman la
• Los microscopios electrónicos utilizan haces de electrones en lugar de luz para
interfaz. Cuando la luz pasa del aire al vidrio, un medio
lograr una resolución muy alta (hasta 0,5 nm) y aumentos.
con un mayor índice de refracción, se frena y se dobla hacia la
• Las nuevas formas de microscopía están mejorando nuestra capacidad para observar
normal, una línea perpendicular a la superficie (figura 2.1). como luz
microorganismos y moléculas. Dos ejemplos son el microscopio láser de barrido
deja el vidrio y vuelve al aire, un medio con una refracción más baja
confocal y el microscopio de sonda de barrido.
ÿ1
pequeños no se pueden ver claramente con el sin ayuda
La microbiología generalmente se de
ocupa ÿ2 ÿ4
ojo. Por la naturaleza estade los organismos,
disciplina, el micropor lo que ÿ3
alcance es de crucial importancia. Por eso es importante entender
cómo funciona el microscopio y la forma en que se toman las muestras
preparado para el examen.
En este capítulo comenzamos con un tratamiento detallado del Figura 2.1 La curvatura de la luz por un prisma. Normales (líneas
microscopio de campo claro estándar y luego describimos otros perpendiculares a la superficie del prisma) se indican con guiones
tipos de microscopios de luz. A continuación discutimos la preparación y líneas. Cuando la luz entra en el vidrio, se desvía hacia la primera normal.
tinción de muestras para su examen con el microscopio óptico. (el ángulo 2 es menor que 1). Cuando la luz sale del cristal y vuelve a
A esto le sigue una descripción de la transmisión y el escaneo. aire, se dobla lejos de la segunda normal (4 es mayor que 3).
microscopios electrónicos, ambos de los cuales se utilizan ampliamente en cur Como resultado, el prisma desvía la luz que lo atraviesa.
Hay más animales viviendo en la escoria de los dientes en

la boca de un hombre que hombres en todo un reino.
—Antony van Leeuwenhoek
18 Capítulo 2 El estudio de la estructura microbiana
Los visores son todos microscopios compuestos. Es decir, la imagen ampliada

formada por la lente del objetivo se amplía aún más en uno o más
más lentes adicionales.
F
El microscopio de campo claro
El microscopio ordinario se llama microscopio de campo brillante porque forma
una imagen oscura contra un fondo más brillante. los
microscopio consta de un cuerpo de metal resistente o soporte compuesto de
una base y un brazo al que se unen las piezas restantes (figura 2.3). Una fuente
de luz, ya sea un espejo o un iluminador eléctrico,
F se encuentra en la base. Dos perillas de enfoque, las perillas de ajuste fino y
grueso, están ubicadas en el brazo y pueden mover el
Figura 2.2 Función de la lente. Una lente funciona como un la platina o el revólver para enfocar la imagen.
colección de prismas. Los rayos de luz de una fuente distante se enfocan en El escenario se coloca aproximadamente a la mitad del brazo y sostiene
el punto focal F. El punto focal se encuentra a una distancia f, la distancia focal, portaobjetos de microscopio mediante simples clips deslizantes o un mecanismo
desde el centro de la lente. clip de escenario Una etapa mecánica permite al operador mover una diapositiva
alrededor sin problemas durante la visualización mediante el uso de perillas de control de escenario.
El condensador de subplatina se monta dentro o debajo de la platina

Tabla 2.1 Unidades de medida comunes
y enfoca un cono de luz en la diapositiva. Su posición a menudo es fija
en microscopios más simples, pero se puede ajustar verticalmente en modelos más
Unidad Abreviatura Valor
avanzados.
2
1 centímetro cm 10 metro o 0.394 pulgadas
La parte superior curva del brazo sujeta el conjunto del cuerpo, para
1 milímetro milímetro 10 3 metros
que una pieza nasal y uno o más oculares o lentes oculares
1 micrómetro metro 10 6 metros
están adjuntos. Los microscopios más avanzados tienen oculares para
1 nanómetro Nuevo Méjico 10 9 metros
Oh 10 10 metros ambos ojos y se llaman microscopios binoculares. El cuerpo como conjunto contiene
1 angstrom
una serie de espejos y prismas para que el
El cilindro que sujeta el ocular puede inclinarse para facilitar la visualización (figura
índice, acelera y se dobla lejos de lo normal. Así un 2.4). El revólver sostiene de tres a cinco lentes objetivo de
el prisma desvía la luz porque el vidrio tiene un índice de refracción diferente diferente potencia de aumento y se puede girar para colocar cualquier objetivo
del aire, y la luz incide en su superficie en ángulo. debajo del conjunto del cuerpo. Idealmente, un microscopio debería
Las lentes actúan como una colección de prismas que funcionan como una unidad. Cuándo ser parafocal, es decir, la imagen debe permanecer enfocada cuando se cambian
la fuente de luz está distante, de modo que los rayos de luz paralelos inciden en la lente, los objetivos.
una lente convexa enfocará estos rayos en un punto específico, el foco La imagen que se ve cuando se observa una muestra con un microscopio
punto (F en la figura 2.2). La distancia entre el centro de la lente compuesto es creada por el objetivo y las lentes oculares.
y el punto focal se llama distancia focal ( f en la figura 2.2). trabajando juntos. La luz de la muestra iluminada se enfoca
Nuestros ojos no pueden enfocar objetos que estén a menos de 25 cm o 10 por la lente del objetivo, creando una imagen ampliada dentro del microscopio
pulgadas (tabla 2.1). Esta limitación se puede superar mediante el uso de un (figura 2.4). La lente ocular magnifica aún más esta imagen primaria. El aumento
lente convexa como una lupa simple (o microscopio) y sosteniéndola total se calcula multiplicando
cerca de un objeto. Una lupa proporciona una imagen clara en los aumentos del objetivo y del ocular juntos. Por ejemplo,
rango mucho más cercano, y el objeto parece más grande. La fuerza de la lente es si se utiliza un objetivo de 45 con un ocular de 10, el aumento total de la muestra
será de 450 .
relacionado con la distancia focal; una lente con una distancia focal corta ampliará
un objeto más que una lente más débil que tiene una distancia focal más larga.
Resolución del microscopio

1. Defina refracción, índice de refracción, punto focal y distancia focal.
2. Describe la trayectoria de un rayo de luz a través de un prisma o lente. La parte más importante del microscopio es el objetivo,
3. ¿Cómo se relaciona la potencia de la lente con la distancia focal? que debe producir una imagen clara, no sólo una magnificada. Por lo tanto
La resolución es extremadamente importante. La resolución es la capacidad de un
lente para separar o distinguir entre objetos pequeños que son
muy juntos.
2.2 EL MICROSCOPIO DE LUZ
La resolución se describe matemáticamente mediante una ecuación
Los microbiólogos actualmente emplean una variedad de microscopios de luz desarrollada en la década de 1870 por Ernst Abbé, un físico alemán responsable
en su trabajo; Los microscopios de campo brillante, de campo oscuro, de contraste para gran parte de la teoría óptica que subyace al diseño del microscopio. los
de fase y de fluorescencia son los más utilizados. Micro moderno La ecuación de Abbé establece que la distancia mínima (d) entre dos
El microscopio de luz 19
Ajuste interpupilar
ocular
(ocular)
Cuerpo
Muserola Brazo
Lente objetivo (4)
Platina mecánica Perilla de ajuste

de enfoque grueso
Condensador de subetapa Perilla de
ajuste de enfoque fino
Control de diafragma de apertura
Perillas de ajuste de escenario
Base con fuente de luz
Palanca de diafragma de campo
Control de intensidad de luz
Figura 2.3 Microscopio de campo claro. Las partes de un microscopio de campo brillante moderno. El microscopio ilustrado es algo más sofisticado que los que se
encuentran en muchos laboratorios de estudiantes. Por ejemplo, es binocular (tiene dos oculares) y tiene una platina mecánica, un condensador de subplatina ajustable y
un iluminador incorporado.
objetos que los revela como entidades separadas depende de la longitud de onda
de la luz ( ) utilizada para iluminar el espécimen y de la apertura numérica de la
lente (n sen ), que es la capacidad de la lente para captar luz.
0.5
d=n
pecado
A medida que d se vuelve más pequeño, la resolución aumenta y se pueden

discernir detalles más finos en una muestra; d se vuelve más pequeño a medida
que disminuye la longitud de onda de la luz utilizada y aumenta la apertura
numérica (NA). Por tanto, la mayor resolución se obtiene utilizando una lente con
la mayor NA posible y luz de la longitud de onda más corta, luz en el extremo azul
del espectro visible (en el rango de 450 a 500 nm; ver figura 6.25).
Camino de luz
La apertura numérica (n sen ) de una lente es un concepto complejo que

puede ser difícil de entender. Está definido por dos componentes: n es el índice
de refracción del medio en el que trabaja la lente (p. ej., aire) y es la mitad del
ángulo del cono de luz que entra en un objetivo (figura 2.5). Cuando este cono
tiene un ángulo estrecho y se estrecha hasta convertirse en una punta afilada, no
Figura 2.4 La trayectoria de la luz de un microscopio. La trayectoria de la se extiende mucho después de salir de la diapositiva y, por lo tanto, no separa
luz en un microscopio avanzado de campo claro (ver también figura 2.19). adecuadamente las imágenes de
objetos muy juntos. Si el cono de luz tiene un ángulo muy amplio tenga en cuenta la apertura numérica de su condensador, como se desprende
y se propaga rápidamente después de pasar a través de un espécimen, de cerca de la siguiente ecuación.
los objetos empaquetados aparecen muy separados y se resuelven. El ángulo
del cono de luz que puede entrar en una lente depende del índice de refracción
dmicroscopio =
(n) del medio en el que trabaja la lente, así como de (NAobjetivo + NAcondensador)
sobre el objetivo mismo. El índice de refracción del aire es 1,00 y sen
El condensador es una gran lente captadora de luz que se utiliza para
no puede ser mayor que 1 (el máximo es 90° y sen 90° es
proyectar un amplio cono de luz a través de la diapositiva y hacia el objetivo.
1,00). Por lo tanto, ninguna lente que trabaje en el aire puede tener una apertura
lente. La mayoría de los microscopios tienen un condensador con un número
numérica superior a 1,00. La única forma práctica de aumentar la apertura
apertura entre 1.2 y 1.4. Sin embargo, la apertura numérica del condensador no
numérica por encima de 1,00 y, por lo tanto, lograr una resolución más alta, es
estará muy por encima de 0,9 a menos que la parte superior del
aumentar el índice de refracción con aceite de inmersión, un líquido incoloro
el condensador está aceitado hasta el fondo del portaobjetos. durante la rutina
con el mismo índice de refracción que el vidrio (tabla 2.2). Si se reemplaza el
operación del microscopio, el condensador por lo general no está engrasado y
aire con aceite de inmersión, muchos rayos de luz que no entraron en el
esto limita la resolución general, incluso con una inmersión en aceite
objetivo debido a la reflexión y la refracción en las superficies de la lente objetivo
objetivo.
y diapositiva ahora lo hará (figura 2.6). Se produce un aumento en la apertura
Aunque la resolución del microscopio debe considerar tanto
numérica y la resolución.
el condensador y la lente del objetivo, en la mayoría de los casos el límite de
La apertura numérica está relacionada con otra característica de un
La resolución de un microscopio óptico se calcula utilizando el Abbé
lente objetivo, la distancia de trabajo. La distancia de trabajo de un
ecuación, que considera sólo la lente del objetivo. El maximo
El objetivo es la distancia entre la superficie frontal de la lente y
poder de resolución teórico de un microscopio con objetivo de inmersión en
la superficie del cubreobjetos (si se usa uno) o la muestra cuando
aceite (apertura numérica de 1,25) y luz azul-verde
está en un enfoque nítido. Objetivos con grandes aperturas numéricas y
es de aproximadamente 0,2 m.
gran poder de resolución tienen distancias de trabajo cortas (tabla 2.2).
La discusión anterior se ha centrado en el poder de resolución
(0,5)(530nm)
de la lente del objetivo. La resolución de un microscopio completo debe re = = 212 nm o 0,2 m
1.25
En el mejor de los casos, un microscopio de campo brillante puede distinguir entre dos
puntos de aproximadamente 0,2 m de distancia (el mismo tamaño que una bacteria muy pequeña).
Objetivo
distancia de trabajo ÿ
ÿ
Deslice con
muestra
Diapositiva Aire Petróleo Cubrir
vidrio
Figura 2.5 Apertura numérica en microscopía. el angular
la apertura es la mitad del ángulo del cono de luz que entra en una lente
de un espécimen, y la apertura numérica es n sin la ilustración . En el
de la derecha, la lente tiene mayor angular y numérico Figura 2.6 El objetivo de inmersión en aceite. Una inmersión en aceite
aberturas; su resolución es mayor y su distancia de trabajo menor. objetivo operando en aire y con aceite de inmersión.
Tabla 2.2 Las propiedades de los objetivos del microscopio
Objetivo
Propiedad Exploración Bajo consumo Alto Voltaje Inmersión en aceite
Aumento 4 10 40–45 90–100

Apertura numérica 0.10 0.25 0,55–0,65 1,25–1,4
Distancia focal aproximada (f) 40mm 16mm 4mm 1,8–2,0 mm
distancia de trabajo 17-20mm 4-8mm 0,5–0,7 mm 0,1 mm
Poder de resolución aproximado con luz de 2,3 metros 0,9 metros 0,35 metros 0,18 metros
450 nm (luz azul)

Dado el límite de resolución de un microscopio óptico, la mayor refractada por la muestra forma una imagen (figura 2.7). El campo
Ampliación útil: el nivel de ampliación necesario para aumentar el tamaño del que rodea un espécimen aparece negro, mientras que el objeto en sí es
objeto resoluble más pequeño para que sea visible con brillantemente iluminada (figura 2.8a,b). El microscopio de campo oscuro
el microscopio de luz—puede ser determinado. Nuestro ojo solo puede detectar puede revelar una estructura interna considerable en microorganismos eucarióticos
una mota de 0,2 mm de diámetro y, en consecuencia, el límite útil de más grandes (figura 2.8b). También se utiliza para identificar ciertas bacterias
el aumento es de unas 1.000 veces la apertura numérica del como la delgada y distintiva Treponema pallidum.
lente objetivo La mayoría de los microscopios estándar vienen con 10 oculares y (figura 2.8a), el agente causal de la sífilis.
tienen un límite superior de alrededor de 1000 con inmersión en aceite. El ocular
A15 se puede utilizar con buenos objetivos para lograr
El microscopio de contraste de fase
un aumento útil de 1.500 . Cualquier aumento adicional no
no permitir que una persona vea más detalles. De hecho, un microscopio de luz Las células vivas no pigmentadas no son claramente visibles en el microscopio
se puede construir para producir un aumento final de 10.000, pero sería de campo claro porque hay poca diferencia en el contraste entre las células y el
simplemente estar magnificando un desenfoque. Sólo el microscopio electrónico agua. Como se discutirá en la sección 2.3, uno
proporciona una resolución suficiente para que los aumentos más altos sean útiles. La solución a este problema es matar y teñir las células antes de la observación
para aumentar el contraste y crear variaciones de color entre
estructuras celulares. Pero, ¿y si un investigador debe ver células vivas

El microscopio de campo oscuro para observar un proceso dinámico como el movimiento o
El microscopio de campo oscuro permite al observador observar seres vivos, fagocitosis? En esta situación se puede utilizar la microscopía de contraste de
células y organismos no teñidos simplemente cambiando la forma en fase. Un microscopio de contraste de fase convierte ligeras diferencias en el
que están iluminados. Un cono hueco de luz se enfoca en índice de refracción y la densidad celular en fácilmente detectables.
la muestra de tal manera que los rayos no reflejados y no refractados variaciones en la intensidad de la luz y es una excelente manera de observar
no entres en el objetivo. Sólo la luz que ha sido reflejada o células vivas (figura 2.8c–e).
Objetivo
Muestra
Abate
condensador
(a)
Parada de campo oscuro
(B)
Figura 2.7 Microscopía de campo oscuro. La forma más sencilla de convertir un microscopio a microscopía de campo oscuro es colocar (a) una parada de campo oscuro
debajo (b) del sistema de lentes del condensador. Luego, el condensador produce un cono hueco de luz de modo que la única luz que ingresa al objetivo
proviene del espécimen.
(c) Pseudomonas: microscopía de contraste de fase
(a) T. pallidum: microscopía de campo oscuro
(d) Desulfotomaculum: microscopía de contraste de fase
micronúcleo macronúcleo
(b) Volvox y Spirogyra: microscopía de campo oscuro
Figura 2.8 Ejemplos de microscopía de contraste de fase y de campo

oscuro. (a) Treponema pallidum, la espiroqueta que causa
sífilis; microscopía de campo oscuro. (b) Volvox y Spirogyra; campo oscuro
microscopía (175). Nótense las colonias hijas dentro de las maduras.
Colonia Volvox (centro) y los cloroplastos espirales de Spirogyra (izquierda
y derecha). (c) Una micrografía de contraste de fase de células de Pseudomonas,
que van de 1 a 3 m de longitud. (d) Desulfotomaculum acetoxidans con endosporas;
contraste de fase (2.000). (e) Paramecio
teñido para mostrar un gran macronúcleo central con un pequeño micronúcleo
esférico a un lado; microscopía de contraste de fase (100). (e) Paramecio: microscopía de contraste de fase
y las ondas no desviadas estarán desfasadas aproximadamente 1/2 longitud de

Imagen oscura con resultados de fondo brillante
onda y se cancelarán entre sí cuando se unan para formar una imagen (figura
2.10). El fondo, formado por luz no desviada, es brillante, mientras que el objeto
Plano de imagen
sin teñir aparece oscuro y bien definido.
Este tipo de microscopía se llama microscopía de contraste de fase oscura.
Los filtros de color a menudo se utilizan para mejorar la imagen (figura 2.8d).
La microscopía de contraste de fase es especialmente útil para estudiar la
motilidad microbiana, determinar la forma de las células vivas y detectar
componentes bacterianos como endosporas y cuerpos de inclusión que
contienen polihidroxialcanoatos (p. ej., polihidroxibutirato), polimetafosfato,
azufre o otras sustancias. Estos son claramente visibles (figura 2.8d) porque
El contraste de amplitud lo producen los rayos
de luz que se encuentran en fase inversa. tienen índices de refracción marcadamente diferentes a los del agua. Los
microscopios de contraste de fase también se utilizan ampliamente en el estudio
de células eucarióticas. La matriz citoplasmática: cuerpos de inclusión (sección
3.3)
Anillo de fase
El microscopio de contraste de interferencia diferencial El microscopio
de contraste de interferencia diferencial (DIC) es similar al microscopio de

contraste de fase en que crea una imagen al detectar diferencias en los índices
Placa de fase de refracción y el espesor.

Los prismas generan dos haces de luz polarizada plana en ángulo recto entre
La mayoría de los rayos de sí. En un diseño, el haz del objeto pasa a través de la muestra, mientras que el
luz difractados pasan a
haz de referencia pasa a través de un área despejada del portaobjetos. Después
Los rayos de luz través de la placa de fase sin
directos avanzan 1/4 de cambios porque pierden el anillo de atravesar la muestra, los dos haces se combinan e interfieren entre sí para
longitud de onda a de fase. formar una imagen. Un espécimen vivo, sin teñir, aparece de colores brillantes
medida que pasan a y tridimensional (figura 2.11). Estructuras como paredes celulares, endosporas,
través del anillo de fase. Los rayos difractados se
retardan 1/4 de longitud de onda gránulos, vacuolas y núcleos eucarióticos son claramente visibles.
después de pasar a través de los
objetos.
Condensador
El microscopio de fluorescencia Los
microscopios considerados hasta ahora producen una imagen a partir de la luz

que pasa a través de una muestra. Un objeto también se puede ver porque en
realidad emite luz, y esta es la base de la microscopía de fluorescencia. Cuando
algunas moléculas absorben energía radiante, se excitan y luego liberan gran
parte de su energía atrapada en forma de luz. Cualquier luz emitida por una
Tope anular
molécula excitada tendrá una longitud de onda más larga (o será de menor
energía) que la radiación originalmente absorbida. La luz fluorescente es
Figura 2.9 Microscopía de contraste de fase. La óptica de un emitida muy rápidamente por la molécula excitada a medida que libera su
microscopio de contraste de fase oscura. energía atrapada y regresa a un estado más estable.
El microscopio de fluorescencia expone una muestra a luz ultravioleta,

El condensador de un microscopio de contraste de fase tiene un tope violeta o azul y forma una imagen del objeto con la luz fluorescente resultante.
anular, un disco opaco con un anillo transparente delgado, que produce un cono La microscopía de fluorescencia más utilizada es la microscopía de
hueco de luz (figura 2.9). A medida que este cono pasa a través de una celda, epifluorescencia, también llamada microscopía de fluorescencia de luz incidente
algunos rayos de luz se desvían debido a las variaciones en la densidad y el o luz reflejada. Los microscopios de epifluorescencia emplean una lente objetivo
índice de refracción dentro de la muestra y se retrasan aproximadamente 1/4 que también actúa como condensador (figura 2.12). Una lámpara de arco de
de la longitud de onda. La luz desviada se enfoca para formar una imagen del vapor de mercurio u otra fuente produce un intenso haz de luz que pasa a
objeto. Los rayos de luz no desviados golpean un anillo de fase en la placa de través de un filtro excitador. El filtro excitador transmite solo la longitud de onda
fase, un disco óptico especial ubicado en el objetivo, mientras que los rayos deseada de la luz de excitación. La luz de excitación es dirigida hacia el
desviados no pasan por el anillo y atraviesan el resto de la placa. Si el anillo de microscopio por un espejo especial llamado espejo dicromático. Este espejo
fase se construye de tal manera que la luz no desviada que lo atraviesa avanza refleja luz de longitudes de onda más cortas (es decir, la luz de excitación),
1/4 de longitud de onda, la luz desviada
Placa
de fase
Bacteria El rayo desviado por la El rayo desviado Los rayos

muestra está desfasado está desfasado 1/2 desviados y no
1/4 de longitud de onda. longitud de onda. desviados se anulan
entre sí.
Figura 2.10 La producción de contraste en microscopía de fase. El comportamiento de los rayos de luz desviados y no desviados o no difractados
en el microscopio de contraste de fase oscuro. Debido a que los rayos de luz tienden a cancelarse entre sí, la imagen de la muestra será oscura contra
un fondo más brillante.
longitudes de onda largas
Filtro de barrera (bloquea

Filtro excitador la radiación ultravioleta pero
(elimina longitudes deja pasar la luz visible)
de onda largas)
El espejo dicromático
refleja longitudes de onda
lámpara de
arco de mercurio cortas; transmite longitudes de
onda más largas
longitudes de onda largas

longitudes de onda cortas
recubierto de fluorocromo
espécimen (absorbe
radiación de longitud de
Figura 2.11 Microscopía de contraste de interferencia diferencial. onda corta y emite
luz de longitud de onda más larga)
Una micrografía del protozoario Amoeba proteus. La imagen tridimensional
contiene muchos detalles y está coloreada artificialmente ( 160).
Figura 2.12 Microscopía de epifluorescencia. Los principios de
funcionamiento de un microscopio de epifluorescencia.
pero deja pasar la luz de longitudes de onda más largas. La luz de

excitación continúa hacia abajo, pasando a través de la lente del objetivo los patógenos (p. ej., Mycobacterium tuberculosis, la causa de la
hacia la muestra, que generalmente se tiñe con moléculas de tinte tuberculosis) pueden identificarse después de teñirlos con fluorocromos
especiales llamadas fluorocromos (tabla 2.3). El fluorocromo absorbe o marcarlos específicamente con anticuerpos fluorescentes mediante
la energía luminosa de la luz de excitación y emite una intensa procedimientos de inmunofluorescencia. En estudios ecológicos, el
fluorescencia. La luz fluorescente emitida viaja hacia arriba a través de microscopio de fluorescencia se usa para observar microorganismos
la lente del objetivo hacia el microscopio. Debido a que la luz fluorescente teñidos con sondas marcadas con fluorocromos o fluorocromos que se
emitida tiene una longitud de onda más larga, pasa a través del espejo unen a constituyentes celulares específicos (tabla 2.3). Además, los
dicromático hacia un filtro de barrera, que bloquea cualquier luz de ecologistas microbianos utilizan la microscopía de epifluorescencia para
excitación residual. Finalmente, la luz emitida pasa a través del filtro de barrera hacia los oculares.
visualizar microbios fotosintéticos, ya que sus pigmentos emiten
El microscopio de fluorescencia se ha convertido en una herramienta fluorescencia de forma natural cuando se excitan con luz de longitudes
esencial en microbiología médica y ecología microbiana. Bacteriano de onda específicas. Incluso es posible distinguir bacterias vivas de bacterias muertas por
Preparación y tinción de muestras 25
Tabla 2.3 Fluorocromos de uso común
fluorocromo Usos
naranja de acridina tiñe el ADN; naranja fluorescente
Diamidino-2-fenilindol (DAPI) tiñe el ADN; verde fluorescente
Isotiocianato de fluoresceína (FITC) A menudo unido a anticuerpos que se unen a componentes celulares específicos oa sondas de ADN; verde fluorescente
Isotiocianato de tetrametil rodamina A menudo unido a anticuerpos que se unen a componentes celulares específicos; rojo fluorescente
(TRITC o rodamina)
(a) (B) (C)

10 micras 10 micras 10 micras
Figura 2.13 Tintes y Etiquetas Fluorescentes. (a) Tintes que hacen que las células vivas emitan fluorescencia verde y las muertas rojas; (b) La auramina se usa para
teñir especies de Mycobacterium en una modificación de la técnica ácido-resistente; (c) Los anticuerpos fluorescentes marcan moléculas específicas. En este caso, el
El anticuerpo se une a una molécula que es exclusiva de Streptococcus pyogenes.
el color que emiten después del tratamiento con una mezcla especial de
2.3 PREPARACIÓN Y TINCIÓN DE LAS MUESTRAS
manchas (figura 2.13a). Por lo tanto, los microorganismos pueden ser vistos
y contados directamente en un nicho ecológico relativamente intacto. Aunque los microorganismos vivos se pueden examinar directamente con
el microscopio óptico, a menudo deben fijarse y teñirse para aumentar la visibilidad, acentuar
Identificación de microorganismos a partir de especímenes: Técnicas inmunológicas
características morfológicas específicas y
(sección 35.2)
conservarlos para futuros estudios.
1. Haz una lista de las partes de un microscopio óptico y describe sus funciones.
2. Defina resolución, apertura numérica, distancia de trabajo y fluorocromo. Fijación

3. Si se observa una muestra con un objetivo de 5X en un microscopio con un ocular de
Las células teñidas que se ven en un microscopio deben parecerse a las células vivas.
15X, ¿cuántas veces se ha ampliado la imagen?
lo más cerca posible. La fijación es el proceso por el cual el interior
4. ¿Cómo depende la resolución de la longitud de onda de la luz, el índice de refracción,
y las estructuras externas de las células y los microorganismos se conservan
y apertura numerica? ¿Cómo se relacionan la resolución y la magnificación?
y fijado en su posición. Inactiva las enzimas que podrían alterar la célula
5. ¿Cuál es la función del aceite de inmersión?
morfología y endurece las estructuras celulares para que no cambien
6. ¿Por qué la mayoría de los microscopios de luz no usan lentes oculares de 30X para obtener un mayor aumento?
durante la tinción y la observación. Un microorganismo por lo general muere
¿catión?
y unido firmemente al portaobjetos del microscopio durante la fijación.
7. Describa brevemente cómo el campo oscuro, el contraste de fase, la interferencia diferencial
Hay dos tipos fundamentalmente diferentes de fijación.
el trabajo de los microscopios de contraste y epifluorescencia y el tipo de imagen
La fijación por calor se usa rutinariamente para observar procariotas. Por lo general, una
proporcionada por cada uno. Dar un uso específico para cada tipo.
película de células (un frotis) se calienta suavemente a medida que se pasa un portaobjetos
a través de una llama. La fijación por calor conserva la morfología general pero Tinción diferencial La tinción
no las estructuras dentro de las células. La fijación química se utiliza para
de Gram, desarrollada en 1884 por el médico danés Christian Gram, es el
proteger la subestructura celular fina y la morfología de los microorganismos
método de tinción más empleado en bacteriología. Es un ejemplo de tinción
más grandes y delicados. Los fijadores químicos penetran en las células y
diferencial : procedimientos que se utilizan para distinguir organismos en
reaccionan con los componentes celulares, generalmente proteínas y lípidos,
función de sus propiedades de tinción. El uso de la tinción de Gram divide a
para volverlos inactivos, insolubles e inmóviles. Las mezclas fijadoras comunes las bacterias en dos clases: gram negativas y gram positivas.
contienen componentes tales como etanol, ácido acético, cloruro mercúrico,
formaldehído y glutaraldehído.
El procedimiento de tinción de Gram se ilustra en la figura 2.15. En el
primer paso, el frotis se tiñe con el colorante básico violeta cristal, el colorante
primario. A esto le sigue el tratamiento con una solución de yodo que funciona
Colorantes y tinción simple Los
como mordiente. El yodo aumenta la interacción entre la célula y el tinte, de
muchos tipos de colorantes utilizados para teñir microorganismos tienen dos
modo que la célula se tiñe con más fuerza.
características en común: tienen grupos cromóforos, grupos con dobles
A continuación, el frotis se decolora lavándolo con etanol o acetona.
enlaces conjugados que dan color al colorante, y pueden unirse a las células
Este paso genera el aspecto diferencial de la tinción de Gram; las bacterias
mediante enlaces iónicos, covalentes o hidrofóbicos. . La mayoría de los
grampositivas retienen el cristal violeta, mientras que las bacterias
colorantes se utilizan para teñir directamente la célula o el objeto de interés,
gramnegativas pierden su cristal violeta y se vuelven incoloras. Finalmente, el
pero algunos colorantes (p. ej., tinta china y nigrosina) se utilizan en la tinción
frotis se contrasta con un colorante básico simple de color diferente al cristal
negativa, en la que se tiñe el fondo pero no la célula; las células no teñidas
violeta. La safranina, la contratinción más común, colorea las bacterias
aparecen como objetos brillantes sobre un fondo oscuro.
gramnegativas de rosa a rojo y deja a las bacterias grampositivas de color
púrpura oscuro (figuras 2.14c y 2.15b). La pared celular bacteriana (sección 3.6)
Los colorantes que se unen a las células mediante interacciones iónicas
La tinción acidorresistente es otro procedimiento de tinción diferencial
son probablemente los colorantes más utilizados. Estos colorantes ionizables
importante. Se usa más comúnmente para identificar Mycobacterium
se pueden dividir en dos clases generales según la naturaleza de su grupo
tuberculosis y M. leprae (figura 2.14d), los patógenos responsables de la
cargado.
tuberculosis y la lepra, respectivamente. Estas bacterias tienen paredes
1. Los colorantes básicos (azul de metileno, fucsina básica, violeta cristal, celulares con alto contenido de lípidos; en particular, los ácidos micólicos, un
safranina, verde malaquita) tienen grupos cargados positivamente grupo de hidroxilípidos de cadena ramificada, que evitan que los tintes se
(generalmente alguna forma de nitrógeno pentavalente) y generalmente adhieran fácilmente a las células. Sin embargo, M. tuberculosis y M. leprae
se venden como sales de cloruro. Los tintes básicos se unen a moléculas pueden teñirse mediante procedimientos duros como el método de Ziehl-
cargadas negativamente como ácidos nucleicos, muchas proteínas y las Neelsen, que utiliza calor y fenol para introducir fucsina básica en las células.
superficies de las células procariotas. Una vez que la fucsina básica ha penetrado, M. tuberculosis y M. leprae no se
2. Los colorantes ácidos (eosina, rosa de bengala y fucsina ácida) poseen decoloran fácilmente con alcohol acidificado (ácido-alcohol), por lo que se dice
grupos cargados negativamente, como carboxilos (-COOH) e hidroxilos que son resistentes a los ácidos. Las bacterias que no son resistentes a los
fenólicos (-OH). Los tintes ácidos, debido a su carga negativa, se unen a ácidos se decoloran con el alcohol ácido y, por lo tanto, se tiñen de azul con la
estructuras celulares cargadas positivamente. contratinción de azul de metileno.
La eficacia de tinción de los colorantes ionizables puede verse alterada

por el pH, ya que la naturaleza y el grado de carga de los componentes Tinción de estructuras específicas Se
celulares cambian con el pH. Así, los tintes ácidos se tiñen mejor en condiciones han desarrollado muchos procedimientos de tinción especiales para estudiar
ácidas cuando las proteínas y muchas otras moléculas llevan una carga estructuras específicas con el microscopio óptico. Una de las más sencillas es
positiva; los tintes básicos son más efectivos a pH más altos. la tinción de cápsulas (figura 2.14f), una técnica que revela la presencia de
También son útiles los colorantes que se unen a través de enlaces cápsulas, una red generalmente hecha de polisacáridos que rodea a muchas
covalentes o debido a sus características de solubilidad. Por ejemplo, el ADN bacterias y algunos hongos. Las células se mezclan con tinta china o colorante
se puede teñir mediante el procedimiento de Feulgen en el que el compuesto de nigrosina y se extienden en una película delgada sobre un portaobjetos.
de tinción (reactivo de Schiff) se une covalentemente a sus azúcares Después del secado al aire, las células aparecen como cuerpos más claros en
desoxirribosa. Sudan III (Sudan Black) tiñe selectivamente los lípidos porque medio de un fondo negro azulado porque las partículas de tinta y tinte no
es soluble en lípidos pero no se disuelve en las porciones acuosas de la célula. pueden penetrar ni en la célula ni en su cápsula. Así, la tinción de la cápsula
es un ejemplo de tinción negativa. La extensión de la región clara está
Los microorganismos a menudo se pueden teñir de manera muy determinada por el tamaño de la cápsula y de la propia célula.
satisfactoria mediante tinción simple, en la que se usa un solo tinte (figura 2.14a, b).Hay poca distorsión de la forma de la celda, y la celda se puede contrarrestar
El valor de la tinción simple radica en su simplicidad y facilidad de uso. Se para una visibilidad aún mayor. Componentes externos a la pared celular:
cubre el frotis fijado con colorante durante un breve período de tiempo, se lava cápsulas, capas mucosas y capas S (sección 3.9)
el exceso de colorante con agua y se seca el portaobjetos. Los colorantes La tinción de endosporas, al igual que la tinción acidorresistente,
básicos como el cristal violeta, el azul de metileno y la carbolfucsina se utilizan también requiere un tratamiento duro para llevar el tinte a un objetivo, en este
con frecuencia en la tinción simple para determinar el tamaño, la forma y la caso, una endospora. Una endospora es una estructura excepcionalmente
disposición de las células procariotas. resistente producida por algunos géneros bacterianos (p. ej., Bacillus y Clostrid
Preparación y tinción de muestras 27
Manchas simples Tinciones diferenciales Manchas especiales
(a) Tinción de cristal violeta (C) tinción de Gram (F) Mancha de cápsula de tinta china de
de Escherichia coli Las células moradas son gram positivas. Cryptococcus neoformans
Los glóbulos rojos son gram negativos.
(B) tinción de azul de metileno (D) Mancha acidorresistente (gramo) Tinción flagelar de Proteus vulgaris.
de Corynebacterium Los glóbulos rojos son resistentes a los ácidos. Se utilizó una tinción básica para
Las células azules no son resistentes a los ácidos. construir los flagelos.
(Y) Tinción de endosporas, mostrando endosporas (rojo)

y células vegetativas (azul)
Figura 2.14 Tipos de manchas microbiológicas.
io). Es capaz de sobrevivir durante largos períodos en un ambiente desfavorable. no se tiñen bien con la mayoría de los tintes, pero una vez teñidos, resisten
ambiente y se llama endospora porque se desarrolla fuertemente la decoloración. Esta propiedad es la base de la mayoría de las endosporas.
dentro de la célula bacteriana madre. La morfología y la ubicación de las métodos de tinción (figura 2.14e). En el procedimiento de Schaeffer-Fulton, las
endosporas varían según la especie y, a menudo, son valiosas para la identificación; endosporas se tiñen primero calentando las bacterias con verde de malaquita,
Las endosporas pueden ser esféricas a elípticas y más pequeñas o que es una tinción muy fuerte que puede penetrar
mayor que el diámetro de la bacteria original. Las endosporas son endosporas Después del tratamiento con verde de malaquita, el resto de la célula
Pasos en la tinción Estado de las bacterias
Paso 1: Cristal violeta (tinción Las células se tiñen de púrpura.
primaria)
Paso 2: Yodo Las células permanecen de color púrpura.
(mordiente)
Paso 3: Alcohol Las células grampositivas

(decolorante) permanecen moradas; Las
células gramnegativas se
vuelven incoloras.
(B)
10 micras
Paso 4: safranina Las células grampositivas
(contratinción) permanecen moradas; Las
células gramnegativas
aparecen rojas.
(a)
Figura 2.15 Tinción de Gram. (a) Pasos en el procedimiento de tinción de Gram. (b) Resultados de una tinción de Gram. Las células Gram-positivas
(moradas) son Staphylococcus aureus; las células Gram-negativas (rojizas-rosadas) son Escherichia coli.
se lava con agua para eliminar el tinte y se contrasta con safranina. Esta 2.4 MICROSCOPIA ELECTRÓNICA
técnica produce una endospora verde que descansa en un glóbulo de
Durante siglos, el microscopio óptico ha sido el instrumento más importante para el estudio
color rosa a rojo. La endospora bacteriana (sección 3.11); Clase Clostridia
(sección 23.4); y clase bacilos (sección 23.5) de los microorganismos. Sin embargo, incluso los mejores microscopios ópticos tienen un
La tinción de flagelos proporciona información valiosa desde el punto de vista límite de resolución de aproximadamente 0,2 m, lo que compromete en gran medida su
taxonómico sobre la presencia y el patrón de distribución de los flagelos en las células utilidad para estudios detallados de muchos microorganismos. Los virus, por ejemplo, son
procarióticas (figura 2.14g: véase también la figura 3.39). Los flagelos procarióticos son demasiado pequeños para ser vistos con microscopios ópticos. Se pueden observar
orgánulos de locomoción finos y filiformes que son tan delgados (alrededor de 10 a 30 nm procariotas, pero debido a que generalmente tienen solo 1 a 2 m de diámetro, solo se pueden
de diámetro) que solo se pueden ver directamente con el microscopio electrónico. Para ver su forma general y sus principales características morfológicas. La estructura interna
observarlos con el microscopio óptico, se aumenta el grosor de los flagelos recubriéndolos detallada de los microorganismos más grandes tampoco se puede estudiar de manera
con mordientes como ácido tánico y alumbre de potasio, y luego se tiñen con línea pararosani efectiva mediante microscopía óptica. Estas limitaciones surgen de la naturaleza de las
(método Leifson) o fucsina básica (método Gray). Componentes externos a la pared celular: ondas de luz visible, no de la inadecuación del propio microscopio de luz. Los microscopios
flagelos y motilidad (sección 3.9) electrónicos tienen una resolución mucho mayor. Han transformado la microbiología y se
han sumado enormemente a nuestro conocimiento. La naturaleza del microscopio electrónico
y las formas en que se preparan las muestras para la observación se revisan brevemente en
esta sección.
1. Definir fijación, colorante, cromóforo, colorante básico, colorante ácido, tinción
simple, tinción diferencial, mordiente, tinción negativa y tinción acidorresistente.
2. Describa los dos tipos generales de fijación. ¿Cuál usaría normalmente para
procariotas? para protozoos?
3. ¿Por qué uno esperaría que los colorantes básicos fueran más efectivos en condiciones alcalinas?
El microscopio electrónico de transmisión Los
4. Describa el procedimiento de tinción de Gram y explique cómo funciona. ¿Qué
microscopios electrónicos utilizan un haz de electrones para iluminar y
paso del procedimiento podría omitirse sin perder la capacidad de distinguir entre
crear imágenes ampliadas de las muestras. Recuerde que la resolución
bacterias grampositivas y gramnegativas? ¿Por qué?
de un microscopio óptico aumenta con la disminución de la longitud de
5. ¿Cómo visualizaría cápsulas, endosporas y flagelos?
onda de la luz que utiliza para la iluminación. Los electrones reemplazan a la luz como
Microscopio de electrones 29
rango de luz son desviados por colisiones con moléculas de aire. La muestra dispersa algunos
microscopio electrones, pero los que pasan se utilizan para formar
una imagen ampliada del espécimen en una pantalla fluorescente. A
Gama de
La región más densa en la muestra dispersa más electrones y, por lo tanto, aparece más
microscopio electrónico
oscura en la imagen ya que menos electrones golpean esa región.
100 micras área de la pantalla; se dice que estas regiones son "densas en electrones".
Por el contrario, las regiones transparentes a los electrones son más brillantes. La imagen
también se puede capturar en una película fotográfica como registro permanente.
La tabla 2.4 compara algunas de las características importantes de la luz
Células epiteliales y microscopios electrónicos de transmisión. El TEM tiene un distintivo
10 micras características que imponen severas restricciones sobre la naturaleza de las muestras que
las células rojas de la sangre se pueden ver y los medios por los cuales esas muestras deben ser
preparado. Dado que los electrones son desviados por las moléculas de aire y son
fácilmente absorbido y dispersado por materia sólida, solo extremadamente delgado
bacterias típicas
1 micra rebanadas (20 a 100 nm) de una muestra microbiana se pueden ver en
el TEM medio. Una rebanada tan delgada no se puede cortar a menos que la muestra
tenga algún tipo de soporte; se brinda el apoyo necesario
micoplasmas por plastico. Después de la fijación con productos químicos como glutaraldehído o
100nm
tetróxido de osmio para estabilizar la estructura celular, la muestra se deshidrata con
virus disolventes orgánicos (p. ej., acetona o etanol). La deshidratación completa es esencial
porque la mayoría de los plásticos utilizados para
10nm incrustación no son solubles en agua. A continuación, la muestra se sumerge en
(100Å) Proteínas
plástico epóxico líquido sin polimerizar hasta que esté completamente permeado, y luego
Exploración
tunelización el plástico se endurece para formar un bloque sólido. Delgado
1 nanómetro
Aminoácidos
microscopio Las secciones se cortan de este bloque con un cuchillo de vidrio o de diamante usando
(10 A)
un instrumento especial llamado ultramicrótomo.
Átomos
0,1 nanómetro Al igual que con la microscopía de campo claro, las células generalmente deben teñirse
(1Å)
antes de que se puedan ver claramente. La probabilidad de dispersión de electrones
está determinada por la densidad (número atómico) de los átomos de la muestra. Las
Figura 2.16 Los límites de la resolución microscópica. Las dimensiones se indican moléculas biológicas están compuestas principalmente por
con una escala logarítmica (cada división principal representa un cambio de tamaño átomos con números atómicos bajos (H, C, N y O) y electrones
diez veces mayor). A la derecha de la escala están las la dispersión es bastante constante en toda la celda no teñida. Por lo tanto, los
tamaños aproximados de células, bacterias, virus, moléculas y átomos. especímenes se preparan para la observación empapando secciones delgadas con
soluciones de sales de metales pesados como citrato de plomo y
acetato de uranilo. Los iones de plomo y uranio se unen a las estructuras celulares.
y hacerlos más opacos a los electrones, aumentando así el contraste en
rayo de luz. Se pueden enfocar, tanto como la luz en un el material. Átomos pesados de osmio del tetróxido de osmio
microscopio óptico, pero su longitud de onda es de alrededor de 0,005 nm, fijador también "teñir" las células y aumentar su contraste. el manchado
aproximadamente 100.000 veces más corta que la de la luz visible. Luego, las secciones delgadas se montan en pequeñas rejillas de cobre y se observan.
Por lo tanto, los microscopios electrónicos tienen una resolución práctica Otras dos técnicas importantes para preparar especímenes son
aproximadamente 1000 veces mejor que el microscopio óptico; con muchas tinción negativa y sombreado. En la tinción negativa, la muestra se extiende en una
En los microscopios electrónicos, se pueden distinguir puntos a menos de 0,5 nm, y el película delgada con ácido fosfotúngstico
aumento útil supera con creces los 100.000 (figura 2.16). El valor del microscopio o acetato de uranilo. Al igual que en la tinción negativa para microscopía de luz, los
electrónico es evidente en metales pesados no penetran en la muestra sino que la vuelven
Al comparar las fotografías de la figura 2.17, la morfología microbiana ahora se puede el fondo oscuro, mientras que el espécimen aparece brillante en
estudiar con gran detalle. fotografías. La tinción negativa es una forma excelente de estudiar la
Un moderno microscopio electrónico de transmisión (TEM) es estructura de virus, vacuolas de gas bacteriano y otros objetos similares (figura 2.17c).
complejo y sofisticado (figura 2.18), pero los principios básicos En el sombreado, un espécimen se cubre con un
detrás de su funcionamiento puede entenderse fácilmente. Un tungsteno calentado película delgada de platino u otro metal pesado por evaporación a una
filamento en el cañón de electrones genera un haz de electrones que es ángulo de unos 45° desde la horizontal, de modo que el metal golpee el
luego se centró en la muestra por el condensador (figura 2.19). microorganismo en un solo lado. En una imagen de uso común
Dado que los electrones no pueden pasar a través de una lente de vidrio, se utilizan método, el área recubierta con metal aparece oscura en las fotografías,
electroimanes en forma de rosquilla llamados lentes magnéticas para enfocar mientras que el lado sin recubrir y la región de sombra creada por el
el haz. La columna que contiene las lentes y la muestra debe el objeto es luz (figura 2.20). Esta técnica es particularmente útil
estar bajo alto vacío para obtener una imagen clara porque los electrones en el estudio de la morfología del virus, flagelos procarióticos y ADN.
Vesícula de
membrana Cabeza
fotosintética
nucleoide
Cola
fibras
de la cola
100nm
(a) (B) (C)
Figura 2.17 Microscopía de luz y electrónica. Una comparación de la resolución microscópica de luz y electrónica. (a) Rhodospirillum rubrum en
microscopio óptico de contraste de fase (600). (b) Una sección delgada de R. rubrum en un microscopio electrónico de transmisión (100 000). (c) Una
micrografía electrónica de transmisión de un bacteriófago T4 teñido negativamente.
turas las células congeladas, que son muy frágiles y se rompen a lo largo
de las líneas de mayor debilidad, por lo general por la mitad de las
membranas internas (figura 2.21). El espécimen se deja en alto vacío
Pistola de electrones
durante un minuto o más para que parte del hielo se sublime y descubra
más detalles estructurales. Finalmente, las superficies expuestas se
sombrean y se recubren con capas de platino y carbono para formar una
Portamuestras réplica de la superficie. Una vez que se ha extraído químicamente la
La imagen
final se puede
muestra, esta réplica se estudia en el TEM y proporciona una vista
mostrar en tridimensional detallada de la estructura intracelular (figura 2.22). Una
fluorescente ventaja del grabado por congelación es que minimiza el peligro de artefactos
pantalla o
porque las células se congelan rápidamente en lugar de someterse a fijación
fotografiado.
Pantalla
química, deshidratación e incrustación plástica.
fluorescente
El microscopio electrónico de barrido Los

microscopios electrónicos de transmisión forman una imagen a partir de la
radiación que ha pasado a través de una muestra. El microscopio
electrónico de barrido (SEM) funciona de manera diferente. Produce una
Figura 2.18 Microscopio electrónico de transmisión. El cañón de
imagen de los electrones liberados por los átomos en la superficie de un objeto.
electrones está en la parte superior de la columna central y las lentes
El SEM se ha utilizado para examinar las superficies de los microorganismos
magnéticas están dentro de la columna. La imagen en la pantalla
con gran detalle; muchos SEM tienen una resolución de 7 nm o menos.
fluorescente se puede ver a través de una lupa colocada sobre la ventana
La preparación de muestras para SEM es relativamente fácil y, en
de visualización. La cámara está en un compartimento debajo de la pantalla.
algunos casos, el material secado al aire se puede examinar directamente.
Sin embargo, en la mayoría de los casos, los microorganismos primero
El TEM también revelará la forma de los orgánulos dentro de los deben fijarse, deshidratarse y secarse para preservar la estructura de la
microorganismos si las muestras se preparan mediante el procedimiento de superficie y evitar el colapso de las células cuando se exponen al alto vacío
grabado por congelación . Primero, las células se congelan rápidamente del SEM. Antes de verlas, las muestras secas se montan y recubren con
en nitrógeno líquido y luego se calientan a 100°C en una cámara de vacío. una fina capa de metal para evitar la acumulación de carga eléctrica en la
A continuación, un cuchillo que ha sido preenfriado con nitrógeno líquido (196°C) frac
superficie y dar una mejor imagen.
Nuevas Técnicas en Microscopía 31
electrón de transmisión Para crear una imagen, el SEM escanea un electrón estrecho y cónico
microscopio de luz
Microscopio haz de un lado a otro sobre el espécimen (figura 2.23). Cuando el
rayo golpea un área particular, los átomos de la superficie descargan una pequeña
lluvia de electrones llamados electrones secundarios, y estos son
Pistola de electrones
atrapado por un detector especial. Los electrones secundarios que ingresan al
Lámpara
detector golpea un centelleador haciendo que emita destellos de luz que un
fotomultiplicador convierte a una corriente eléctrica y amplifica.
La señal se envía a un tubo de rayos catódicos y produce una imagen
como una imagen de televisión, que se puede ver o fotografiar.
Lentes condensadores
El número de electrones secundarios que llegan al detector depende de la
naturaleza de la superficie de la muestra. Cuando el electrón
haz golpea un área elevada, una gran cantidad de electrones secundarios
entrar en el detector; por el contrario, menos electrones escapan de una depresión en
la superficie y llegan al detector. Así, las áreas elevadas aparecen más claras en la
pantalla y las depresiones son más oscuras. un realista
Muestra
imagen tridimensional de los resultados de la superficie del microorganismo
(figura 2.24). La ubicación real in situ de los microorganismos en
nichos ecológicos como la piel humana y el revestimiento del intestino
lente objetivo
también se puede examinar.
1. ¿Por qué el microscopio electrónico de transmisión tiene una resolución mucho

mayor que el microscopio óptico?
2. Describa en términos generales cómo funciona el TEM. ¿Por qué el TEM debe usar un
alto vacío y secciones muy delgadas?

Imagen
3. A menudo, el material se incluye en parafina antes de seccionarlo para microscopía óptica.
¿Por qué no se puede usar este enfoque cuando se prepara una muestra para el TEM?
Lentes oculares 4. ¿Bajo qué circunstancias sería deseable preparar especímenes para
el TEM mediante el uso de tinción negativa? ¿Sombreado? ¿Grabado por congelación?
5. ¿Cómo funciona el microscopio electrónico de barrido y de qué manera?

¿Su función difiere de la del TEM? El SEM se utiliza para estudiar
¿Qué aspectos de la morfología?
Ojo 2.5 TÉCNICAS MÁS NUEVAS EN MICROSCOPIA

Pantalla de visualización
Microscopia confocal
Figura 2.19 Operación del microscopio electrónico de transmisión. Al igual que las cuentas grandes y pequeñas ilustradas en la figura 2.25a, las muestras
Una descripción general de la operación TEM y una comparación de la operación biológicas son tridimensionales. Cuando tridimensional
de luz y microscopios electrónicos de transmisión. los objetos se ven con microscopios de luz tradicionales, la luz de
Tabla 2.4 Características de los microscopios de luz y electrónicos de transmisión
Rasgo microscopio de luz Microscopio electrónico de transmisión
Aumento práctico más alto Alrededor de 1000– Más de 100.000

Mejor resolucióna 1500 0,2 m 0,5nm
fuente de radiación Luz visible Rayo de electrones
medio de viaje Aire Alto vacío
tipo de lente Vidrio Electroimán
fuente de contraste Absorción de luz diferencial Dispersión de electrones
Mecanismo de enfoque Ajuste la posición de la lente mecánicamente Ajustar la corriente a la lente magnética
Método de cambio de aumento Cambiar la lente del objetivo o el ocular Ajustar la corriente a la lente magnética
Montaje de muestras Portaobjetos de vidrio Rejilla metálica (generalmente cobre)
a
El límite de resolución de un ojo humano es de aproximadamente 0,2 mm.
Fimbria Fimbria
flagelo
(a) P. mirabilis (b) colifago T4
Figura 2.20 Sombreado de especímenes para el TEM. Ejemplos de especímenes vistos en el TEM después del sombreado con uranio metálico.
a) Proteus mirabilis (42.750); nota flagelos y fimbrias. (b) colifago T4 (72.000).
Plano de fractura
Filo del cuchillo vesicular
estructura
Núcleo
vesicular
estructura
Plasma nuclear exterior
Membrana nuclear membrana
membrana
Membrana nuclear interna
(a)
platino y carbono Carbón

Caras de fractura Dirección de sombreado
(B) (D)
Sublimación
Réplica de carbono
platino/carbono
mezcla
(C) (Y)
Figura 2.21 Técnica de grabado por congelación. En los pasos (a) y (b), una célula eucariótica congelada se fractura con un bisturí frío. El grabado por
sublimación se representa en (c). El sombreado con platino más carbono y la formación de réplicas se muestran en (d) y (e). Ver texto para más detalles.
Electrón
pistola
Tubo de rayos
catódicos para visualización.
bobina de
exploración
Tubo de rayos
Lentes de
catódicos para
condensador
fotografía.
circuito de
escaneo
electrones
primarios
Detector
electrones
Multiplicador de fotos
secundarios
Muestra
Figura 2.22 Ejemplo de grabado por congelación. Una

preparación grabada por congelación de la bacteria Thiobacillus kabobis. Portamuestras
Tenga en cuenta las diferencias en la estructura entre la superficie

Sistema de vacío
exterior, S; la membrana externa de la pared celular, OM; la membrana
citoplasmática, CM; y el citoplasma, C. Bar 0,1 m.
Figura 2.23 El microscopio electrónico de barrido. Consulte el texto para
obtener una explicación.
Flagelos
periplasmáticos
(a) S. aureus (b) Cristispira
Figura 2.24 Micrografías electrónicas de barrido de bacterias. (a) Staphylococcus aureus (32.000). (b) Cristispira, una espiroqueta del estilo cristalino de la ostra,
Ostrea virginica. Las fibrillas axiales o flagelos periplásmicos son visibles alrededor del cilindro protoplásmico (6000).
Figura 2.25 Microscopía óptica y confocal. Dos perlas examinadas por microscopía óptica y confocal. Las imágenes del microscopio óptico son
generada a partir de la luz que emana de muchas áreas de un objeto tridimensional. Las imágenes confocales se crean a partir de la luz que emana de
un único plano de enfoque. Múltiples planos dentro del objeto pueden ser examinados y usados para construir imágenes claras y finamente detalladas. (a) El
planos observables por microscopía confocal. (b) La imagen del microscopio óptico de las dos cuentas que se muestran en (a). Tenga en cuenta que ninguna cuenta es transparente.
y que la cuenta más pequeña es difícil de reconocer como tal. (c) Una computadora conectada a un microscopio confocal puede crear una imagen compuesta de las dos cuentas
usando información digitalizada recopilada de múltiples planos dentro de las cuentas. El resultado es una imagen mucho más clara y detallada. (d) La computadora también puede usar
información digitalizada recolectada de múltiples planos dentro de las perlas para generar una
reconstrucción tridimensional de las cuentas. (e) Vistas generadas por computadora de un espécimen: el panel superior izquierdo es la imagen de un solo xy
plano (es decir, mirando hacia abajo desde la parte superior de la muestra). Las dos líneas representan los dos planos xz representados en los otros dos paneles. La línea vertical indica
el plano xz que se muestra en el panel superior derecho (es decir, una vista desde el lado derecho de la muestra) y la línea horizontal indica el plano xz que se muestra en el panel
inferior (es decir, una vista desde la cara frontal). del espécimen). (f) Una reconstrucción tridimensional de un
Biopelícula de Pseudomonas aeruginosa. La biopelícula se expuso a un agente antibacteriano y luego se tiñó con tintes que distinguen a los seres vivos
(verde) de células muertas (rojas). Las células en la superficie de la biopelícula han muerto, pero las de las capas inferiores de la biopelícula todavía están
vivo.
todas las áreas del objeto, no solo el plano de enfoque, ingresan al microscopio y se información digitalizada de cada plano de la muestra que se examina. Esta
utilizan para crear una imagen. La imagen resultante es información se puede utilizar para crear una imagen compuesta muy clara y detallada
turbio y borroso (figura 2.25b). Este problema ha sido resuelto por (figura 2.25c) o para crear una
el desarrollo del microscopio láser de barrido confocal reconstrucción tridimensional del espécimen (figura 2.25d).
(CSLM), o simplemente, microscopio confocal. El microscopio confocal utiliza un Las imágenes de las secciones transversales planas xz del espécimen también pueden ser
rayo láser para iluminar una muestra, generalmente una que generado, dando al observador puntos de vista de la muestra de tres
ha sido teñido con fluorescencia. Un componente principal del microscopio confocal perspectivas (figura 2.25e). La microscopía confocal tiene numerosos
es una apertura colocada sobre la lente del objetivo, aplicaciones, incluido el estudio de biopelículas, que pueden formarse en
que elimina la luz parásita de partes de la muestra que se encuentran muchos tipos diferentes de superficies, incluidas las médicas internas
por encima y por debajo del plano de enfoque (figura 2.26). Así el único dispositivos tales como reemplazos de la articulación de la cadera. Como se muestra en la figura 2.25f,
la luz utilizada para crear la imagen proviene del plano de enfoque, y una es difícil matar todas las células en una biopelícula. Esto los convierte en una
se forma una imagen mucho más clara y nítida. preocupación particular para el campo médico porque la formación de biopelículas
Las computadoras son parte integral del proceso de creación de imágenes en los dispositivos médicos puede provocar infecciones que son difíciles de
confocales. Una computadora conectada al microscopio confocal recibe tratar. Crecimiento microbiano en entornos naturales: biopelículas (sección 6.6)
Láser
luz
Lente
Espejo
Abertura
Detector
Escáner
Objetivo
plano de enfoque
Célula
Figura 2.26 Diagrama de rayos de un microscopio de barrido láser confocal. Las líneas amarillas representan la luz láser utilizada para la iluminación.
Las líneas rojas simbolizan la luz que surge del plano de enfoque, y las líneas azules representan la luz de partes de la muestra por encima y por debajo.
el plano focal Consulte el texto para obtener una explicación.
Microscopía de sonda de barrido La corriente de neling, como se le llama, es extraordinariamente sensible a la

Aunque los microscopios óptico y electrónico se han vuelto bastante sofisticados y distancia y disminuirá unas mil veces si la sonda está
han alcanzado un estado avanzado de desarrollo, alejado de la superficie una distancia equivalente al diámetro de un átomo.
todavía se están creando nuevos y potentes microscopios. Una nueva clase de
Los microscopios, llamados microscopios de sonda de barrido, miden las La disposición de los átomos en la superficie de la muestra se determina
características de la superficie moviendo una sonda afilada sobre la superficie del objeto. moviendo la punta de la sonda hacia adelante y hacia atrás sobre la superficie.
El microscopio de efecto túnel, inventado en 1980, es un excelente ejemplo de mientras se mantiene a una altura constante por encima de la muestra ajustando
microscopio de sonda de barrido. puede lograr la distancia de la sonda para mantener una corriente de túnel constante.
aumentos de 100 millones y permiten a los científicos ver los átomos A medida que la punta se mueve hacia arriba y hacia abajo siguiendo los contornos
en la superficie de un sólido. Los electrones que rodean la superficie de la superficie, una computadora registra y analiza su movimiento para crear
los átomos hacen un túnel o se proyectan desde el límite de la superficie una imagen tridimensional precisa de los átomos de la superficie. los
Distancia corta. El microscopio de efecto túnel tiene una sonda en forma de aguja El mapa de superficie se puede mostrar en una pantalla de computadora o trazar en
con una punta tan afilada que a menudo solo hay un átomo papel. La resolución es tan grande que los átomos individuales se observan
en su punta. La sonda se baja hacia la superficie de la muestra hasta que su nube fácilmente. Los inventores del microscopio, Gerd Binnig y Heinrich Rohrer,
de electrones toca la de los átomos de la superficie. si un compartieron el Premio Nobel de Física de 1986 por su
se aplica un pequeño voltaje entre la punta y la muestra, los electrones trabajo, junto con Ernst Ruska, el diseñador del primer microscopio electrónico de
fluir a través de un estrecho canal en las nubes de electrones. este tun transmisión.
El microscopio de efecto túnel ya está teniendo un gran impacto en entre la punta de la sonda y la constante de superficie. Lo hace ejerciendo
la biología. Se puede utilizar para ver directamente el ADN y otras una cantidad muy pequeña de fuerza en la punta, lo suficiente para
moléculas biológicas (figura 2.27). Dado que el microscopio puede mantener una distancia constante, pero no la fuerza suficiente para dañar
examinar objetos cuando están sumergidos en agua, puede ser la superficie. El movimiento vertical de la punta generalmente se sigue
particularmente útil para estudiar moléculas biológicas. midiendo la desviación de un rayo láser que golpea la palanca que
Más recientemente se ha desarrollado un segundo tipo de microscopio sostiene la sonda (figura 2.28). A diferencia del microscopio de túnel de
de sonda de barrido. El microscopio de fuerza atómica mueve una barrido, el microscopio de fuerza atómica se puede utilizar para estudiar
sonda afilada sobre la superficie de la muestra mientras mantiene la distancia superficies que no conducen bien la electricidad. El microscopio de fuerza atómica
Fotodiodo Láser
El voladizo se mueve hacia
arriba y hacia abajo

mientras se mantiene la punta
en una constante
altura sobre la
superficie del
El movimiento espécimen.
del voladizo es
Viga voladiza
detectado por la luz
reflejada desde su Propina
superficie.
Muestra
Escáner
Figura 2.28 Microscopía de fuerza atómica: los elementos

básicos de un microscopio de fuerza atómica. La punta utilizada
para sondear la muestra está unida a un voladizo. A medida que la
sonda pasa sobre las "colinas y valles" de la superficie de la muestra,
el voladizo se desvía verticalmente. Se utiliza un rayo láser dirigido al
voladizo para monitorear estos movimientos verticales. La luz reflejada
por el voladizo es detectada por el fotodiodo y utilizada para generar
una imagen de la muestra.
Figura 2.27 Microscopía de túnel de barrido de ADN. Se muestra la

doble hélice del ADN con aproximadamente tres vueltas (color falso;
2,000,000).
(a) (B)
Figura 2.29 La proteína de membrana acuaporina visualizada por microscopía de fuerza atómica. La acuaporina es una proteína que atraviesa la
membrana y permite que el agua se mueva a través de la membrana. (a) Cada estructura circular representa la vista de la superficie de una sola
proteína acuaporina. (b) Una sola molécula de acuaporina observada con más detalle y con mayor aumento.
Resumen 37
se ha utilizado para estudiar las interacciones entre las proteínas chaperonas GroES
1. ¿Cómo funciona un microscopio confocal? ¿Por qué proporciona mejores
y GroEL de E. coli , para cartografiar plásmidos mediante la localización de enzimas
imágenes de especímenes gruesos que el microscopio compuesto estándar?
de restricción unidas a sitios específicos, para seguir el comportamiento de bacterias
2. Describa brevemente el microscopio de sonda de barrido y compare y con
vivas y otras células, y para visualizar proteínas de membrana (figura 2.29). ).
Compare sus versiones más populares: el microscopio de efecto túnel y el
microscopio de fuerza atómica. ¿Para qué sirven estos microscopios?
Resumen
2.1 Lentes y la flexión de la luz B. La mayoría de los colorantes son colorantes básicos cargados positivamente o colorantes ácidos
negativos y se unen a las partes ionizadas de las células. C. En la tinción simple se usa un solo
un. Un rayo de luz que pasa del aire al vidrio, o viceversa, se desvía en un proceso conocido
como refracción. colorante para teñir los microorganismos. D. Los procedimientos de tinción diferencial, como la tinción de
B. Las lentes enfocan los rayos de luz en un punto focal y amplían las imágenes (figura 2.2). Gram y la tinción acidorresistente, distinguen entre grupos microbianos tiñéndolos de manera diferente
(figura 2.15). mi. Algunas técnicas de tinción son específicas para estructuras particulares como
2.2 El microscopio de luz a. En un cápsulas bacterianas, flagelos y endosporas (figura 2.14).
microscopio compuesto como el microscopio de campo claro, la imagen primaria está formada por una
lente objetivo y ampliada por el ocular o lente ocular para producir la imagen final (figura 2.3).
2.4 Microscopía electrónica a. El
B. Un condensador de subplatina enfoca un cono de luz sobre la muestra. C. La microscopio electrónico de transmisión usa lentes magnéticos para formar una imagen a partir de
electrones que han pasado a través de una sección muy delgada de una muestra (figura 2.19). La
resolución del microscopio aumenta a medida que disminuye la longitud de onda de la radiación utilizada
resolución es alta porque la longitud de onda de los electrones es muy corta.
para iluminar la muestra. La resolución máxima de un microscopio óptico es de aproximadamente
0,2 md. El microscopio de campo oscuro utiliza únicamente luz refractada para formar una imagen
B. El contraste de la sección delgada se puede aumentar mediante el tratamiento con soluciones de metales
(figura 2.7), y los objetos brillan contra un fondo negro. mi. El microscopio de contraste de fase convierte
pesados como tetróxido de osmio, uranio y plomo. C. Las muestras también se preparan para el TEM
las variaciones en el índice de refracción y la densidad de las células en cambios en la intensidad de
mediante tinción negativa, sombreado con metal o grabado por congelación. D. El microscopio electrónico
la luz y, por lo tanto, hace visibles las células incoloras y sin teñir (figura 2.9). F. El microscopio de contraste
de barrido (figura 2.23) se utiliza para estudiar las características de la superficie externa de los
de interferencia diferencial utiliza dos haces de luz para crear imágenes tridimensionales de alto
contraste de especímenes vivos. gramo. El microscopio de fluorescencia ilumina una muestra marcada microorganismos.
con fluorocromo y forma una imagen a partir de su fluorescencia (figura 2.12).
2.5 Nuevas Técnicas en Microscopía a. El
microscopio láser de barrido confocal (figura 2.25) se utiliza para estudiar especímenes gruesos y
complejos. B. Los microscopios de sonda de barrido alcanzan aumentos muy altos que permiten a los
2.3 Preparación y tinción de muestras científicos observar moléculas biológicas (figuras 2.27 y 2.29).
un. Por lo general, las muestras deben fijarse y teñirse antes de verlas en el microscopio de campo claro.
Términos clave
colorantes ácidos tinción diferencial 26 tinción Tinción de Gram 26 resolución 18
26 tinción ácido-resistente de endosporas 26 oculares fijación de calor 25 microscópio electrónico escaneando
26 microscopio de fuerza atómica 18 fijación 25 morder 26 (SEM) 30
36 colorantes básicos 26 microscopio tinción negativa 26 apertura microscopio de sonda de barrido 35
de campo claro 18 tinción de cápsula tinción de flagelos 28 numérica 19 lentes objetivo microscopio de túnel de barrido 35 sombreado
26 fijación química 26 microscopio de fluorescencia 23 luz 18 lentes oculares 18 29 tinción simple 26 condensador de
fluorescente 23 fluorocromos 24 subplatina 18 microscopio electrónico de
grupos de cromóforos 26 parfocal 18 transmisión
microscopio láser de barrido confocal distancia focal 18 microscopio de contraste de fase 21

(CSLM) 34 punto focal 18 refracción 17 (TEM) 29
microscopio de campo oscuro grabado por congelación 30 índice de refracción 17 distancia de trabajo 20
21 microscopio de contraste de interferencia

diferencial (DIC) 23

1. Si preparó una muestra de un espécimen para microscopía óptica, teñida con el incluido en el artículo y por qué ese tipo particular de microscopía fue el
tinción de Gram, y no pudo ver nada cuando miró a través de su microscopio óptico, haga una lista método de elección para la investigación. ¿Qué otras figuras te gustaría ver?
de las cosas que pudo haber hecho incorrectamente. utilizado en este estudio? Describa los pasos que los investigadores tomarían para
para obtener tales fotografías o figuras.
2. En un artículo de revista, busque un ejemplo de una micrografía óptica, una micrografía electrónica
de barrido o de transmisión, o una imagen confocal. Discuta por qué la figura era
Aprende más
Binning, G. y Rohrer, H. 1985. El microscopio de efecto túnel. ciencia Soy. Rochow, TG 1994. Introducción a la microscopía por medio de luz, electrones, rayos X,
253(2):50–56. o acústica. Nueva York: Pleno.
Dufrêne, YF 2003. La microscopía de fuerza atómica proporciona un nuevo medio para observar Scherrer, René. 1984. Reacción de tinción de Gram, tipos de Gram y paredes celulares de bacterias.
células microbianas. Noticias de ASM 69 (9): 438–42. Tendencias Bioquímica. ciencia 9:242–45.
Hörber, JKH y Miles, MJ 2003. Evolución de la sonda de exploración en biología. Ciencia Stephens, DJ y Allan, VJ 2003. Técnicas de microscopía de luz para la im
302:1002–5. envejecimiento. Ciencia 300: 82–6.
Lillie, RD 1969. Tinciones biológicas de HJ Conn, 8ª ed. baltimore: williams &

Wilkins.

correspondiente a una cabeza 39
Las especies bacterianas pueden diferir en sus patrones de distribución de flagelos. Estas
Las células de Pseudomonas tienen un solo flagelo polar que se utiliza para la locomoción.
AVANCE
• Los procariotas se pueden distinguir de los eucariotas en términos de su sión de Archaea se proporciona en el capítulo 20. Un comentario sobre
tamaño, estructura celular y composición molecular. La mayoría de los procariotas carecen La nomenclatura es necesaria para evitar confusiones. La palabra procariote se
extensos y complejos sistemas de membranas internas. usará en un sentido general para incluir tanto a Bacte ria como a Archaea; el
• Aunque se observan algunas estructuras celulares tanto en eucariotas como en término bacteria se referirá específicamente a un
células procariotas, algunas estructuras son exclusivas de los procariotas. miembro de Bacteria y archaeon a miembro de Archaea. Miembros del mundo
• Los procariotas se pueden dividir en dos grandes grupos: bacterias y arqueas. Aunque similar microbiano (sección 1.1)
en estructura general, Bacteria y Archaea
exhiben diferencias importantes en sus paredes celulares y membranas.
• La mayoría de las bacterias se pueden dividir en dos grandes grupos en función de la célula
estructura de la pared; las diferencias en la estructura de la pared celular se correlacionan con 3.1 UNA VISIÓN GENERAL DE LAS PROCARIÓTICAS
la reacción al procedimiento de tinción de Gram. ESTRUCTURA CELULAR
• Muchos procariotas son móviles; varios mecanismos para la motilidad han
sido identificado.
Debido a que gran parte de este capítulo está dedicado a la discusión de los
componentes celulares individuales, se requiere una descripción general
• Algunas bacterias forman endosporas resistentes para sobrevivir en un entorno hostil
preliminar de la célula procariótica como un todo.
condiciones mentales en un estado latente.
Forma, disposición y tamaño

Uno podría esperar que organismos pequeños y relativamente simples como
muestra que los procariotas son uno de los más importantes los procariotas serían uniformes en forma y tamaño. Este no es el
Incluso un examen
grupos por superficial del mundo
cualquier criterio: microbiano
número de organismos, general caso, ya que el mundo microbiano ofrece una variedad casi infinita en términos
importancia ecológica, o importancia práctica para los humanos. De hecho, gran de morfología (figuras 3.1 y 3.2). Sin embargo, más comúnmente
parte de nuestra comprensión de los fenómenos en bioquímica Los procariotas encontrados tienen una de dos formas. Los cocos (s., coc cus)
y la biología molecular proviene de la investigación sobre procariotas. Aunque son células aproximadamente esféricas. Pueden existir como individuos.
en este texto se dedica un espacio considerable a los microorganismos células, sino que también se asocian en arreglos característicos que
eucarióticos, el enfoque principal está en los procariotas. Por lo tanto, los son frecuentemente útiles en su identificación. Los diplococos (s., diplo
La unidad sobre morfología microbiana comienza con la estructura de los coccus) surgen cuando los cocos se dividen y permanecen juntos para formar
procariotas. Como se mencionó en el capítulo 1, hay dos muy diferentes pares Largas cadenas de cocos resultan cuando las células se adhieren después de repetidos
grupos de procariotas: Bacteria y Archaea. Aunque se sabe considerablemente divisiones en un plano; este patrón se ve en los géneros
menos sobre la estructura celular de las arqueas y la bioquímica, ciertas Streptococcus, Enterococcus y Lactococcus (figura 3.1b).
características distinguen los dos dominios. Cuando sea Staphylococcus se divide en planos aleatorios para generar irregular
posible, se anotarán estas distinciones. Un disco más detallado racimos parecidos a uvas (figura 3.1a). Divisiones en dos o tres planos
La era en la que los trabajadores tendían a ver las bacterias como bolsas muy pequeñas de enzimas pasó hace mucho tiempo.
—Howard J. Rogers
40 Capítulo 3 Estructura y función de las células procarióticas
(b) S. agalactiae (c) B. megaterio
(a) S. aureus
(d) R. rojo e) V. cholerae
Figura 3.1 Formas comunes de células procarióticas. (a) Staphylococcus aureus cocos dispuestos en racimos; micrografía electrónica de barrido con
realce de color; el diámetro medio de la celda es de aproximadamente 1 m. (b) Streptococcus agalactiae, la causa de las infecciones por estreptococos del grupo
B; cocos dispuestos en cadenas; micrografía electrónica de barrido de color mejorado (4.800). (c) Bacillus megaterium, una bacteria en forma de bastón dispuesta
en cadenas, tinción de Gram (600). (d) Rhodospirillum rubrum, contraste de fase (500). (e) Vibrio cholera, bastoncillos curvos con flagelos polares; micrografía
electrónica de barrido.
puede producir grupos simétricos de cocos. Los miembros del género se unen después de la división para formar pares o cadenas (p. ej., Bacillus
Micrococcus a menudo se dividen en dos planos para formar grupos cuadrados megaterium se encuentra en cadenas largas).
de cuatro células llamadas tétradas. En el género Sarcina, los cocos se dividen Aunque los procariotas suelen ser simples esferas o bastones, no son
en tres planos produciendo paquetes cúbicos de ocho células. infrecuentes otras formas y disposiciones celulares. Los vibriones se parecen
La otra forma común es la de un bastón, a veces llamado bacilo (pl., más a los bastones, ya que tienen forma de coma (figura 3.1e).
bacilli). Bacillus megaterium es un ejemplo típico de bacteria con forma de Los procariotas en forma de espiral pueden clasificarse como espirillas, que
bastón (figura 3.1c). Los bacilos difieren considerablemente en su relación suelen tener penachos de flagelos en uno o ambos extremos de la célula
largo-ancho, siendo los cocobacilos tan cortos y anchos que parecen cocos. (figura 3.1d y 3.2c), o espiroquetas. Las espiroquetas son más flexibles y
La forma del extremo de la varilla a menudo varía entre especies y puede ser tienen una disposición flagelar interna única. Los actinomicetos normalmente
plana, redondeada, en forma de cigarro o bifurcada. Aunque muchas varillas forman largos filamentos llamados hifas que pueden ramificarse para producir
ocurren individualmente, algunas re una red llamada micelio (figura 3.2a). En este sentido, son
Una descripción general de la estructura de la célula procariótica 41
(a) Actinomyces b) M. pneumoniae (c) Espiroplasma
Licitación
hifa
f) G. ferruginea
Figura 3.2 Procariotas de formas

inusuales. Ejemplos de procariotas con
formas bastante diferentes de los tipos de
bacilos y cocos. (a) Actinomyces, SEM (21
hifa
000). (b) Mycoplasma pneumoniae, SEM (62
000). (c) Espiroplasma, SEM (13.000). ( d )
Hyphomicrobium con hifas y yemas,
micrografía electrónica con tinción negativa.
(e) Archaeon cuadrado de Walsby. (f)
(d) Hifomicrobio (e) Archaeon cuadrado de Walsby Gallionella ferruginea con tallo.
similar a los hongos filamentosos, un grupo de microbios eucarióticos. El son miembros del género Mycoplasma, un interesante grupo de bacterias
Hyphomicrobium de forma ovalada a pera (figura 3.2d) produce una yema que carecen de paredes celulares. Durante muchos años, se pensó que
al final de una larga hifa. Otras bacterias, como Gallionella , producen tallos eran los procariotas más pequeños con unos 0,3 m de diámetro,
sin vida (figura 3.2f). Algunos procariotas en realidad son planos. Por aproximadamente el tamaño de los poxvirus. Sin embargo, se han
ejemplo, Anthony Walsby ha descubierto arqueas cuadradas que viven en descubierto procariotas incluso más pequeñas. Las nanobacterias varían
estanques de sal (figura 3.2e). Tienen forma de cajas planas, de cuadradas desde alrededor de 0,2 ma menos de 0,05 m de diámetro. Solo se han
a rectangulares, de aproximadamente 2 m por 2 a 4 m, y solo 0,25 m de cultivado unas pocas cepas, y estas parecen ser organismos muy pequeños,
espesor. Finalmente, algunos procariotas son de forma variable y carecen parecidos a bacterias. El descubrimiento de las nanobacterias fue bastante
de una forma característica única (figura 3.2b). Estos se denominan sorprendente porque los cálculos teóricos predijeron que las células más
pequeñas tenían entre 0,14 y 0,2 m de diámetro. En el otro extremo del
pleomórficos aunque, como Corynebacterium, pueden tener una forma
generalmente similar a una varilla. Phylum Spirochaetes (sección 21.6) continuo se encuentran bacterias como las espiroquetas, que pueden
Las bacterias varían tanto en tamaño como en forma (figura 3.3). alcanzar los 500 m de longitud, y la bacteria fotosintética Oscillatoria, que
Escherichia coli es un bacilo de tamaño medio, de 1,1 a 1,5 m de ancho por tiene unos 7 m de diámetro (el mismo diámetro que un glóbulo rojo). Una
2,0 a 6,0 m de largo. Cerca del extremo pequeño del continuo de tamaño enorme bacteria vive en el intestino de
Muestra Diámetro aproximado o citoplasma circundante por membranas. Los ribosomas y masas más grandes
ancho × largo en nm llamadas cuerpos de inclusión están dispersos por la matriz citoplásmica. Muchos
procariotas usan flagelos para la locomoción. Además, muchos están rodeados por
oscilatorio una cápsula o capa mucosa externa a la pared celular.
glóbulo rojo 7,000
En las secciones restantes de este capítulo describimos las principales

estructuras procarióticas con más detalle. Comenzamos con la membrana plasmática,
una estructura que define a todas las células. Luego procedemos hacia adentro para
considerar las estructuras ubicadas dentro del citoplasma.
E. coli 1300 × 4000
Luego, la discusión se mueve hacia afuera, primero a la pared celular y luego a las
estructuras fuera de la pared celular. Finalmente, consideramos una estructura
exclusiva de las bacterias, la endospora bacteriana.
1. ¿Qué formas características pueden asumir las bacterias? Describir las formas en
Estreptococo 800–1000 qué células bacterianas se agrupan.

2. Dibuja una célula bacteriana y rotula todas las estructuras importantes.
virus de la viruela 230 × 320

Virus de la gripe 85
bacteriófago T2 E.coli 65 × 95 3.2 MEMBRANAS DE CÉLULAS PROCARIÓTICAS
Virus del mosaico del tabaco 15 × 300
Las membranas son un requisito absoluto para todos los organismos vivos.
virus de la poliomielitis 27
Las células deben interactuar de manera selectiva con su entorno, ya sea el entorno
interno de un organismo multicelular o un entorno externo menos protegido y más
Figura 3.3 Tamaños de procariotas y virus. Los tamaños de bacterias
variable. Las células no solo deben ser capaces de adquirir nutrientes y eliminar
seleccionadas en relación con un glóbulo rojo y virus.
desechos, sino que también deben mantener su interior en un estado constante y
altamente organizado frente a los cambios externos.
el pez cirujano marrón, Acanthurus nigrofuscus. Epulopiscium fishelsoni crece hasta

600 por 80 m, un poco más pequeño que un guión impreso. Más recientemente, se La membrana plasmática abarca el citoplasma de las células procariotas y
descubrió una bacteria aún más grande, Thiomargarita namibiensis, en los sedimentos eucariotas. Es el principal punto de contacto con el entorno de la célula y, por tanto,
oceánicos (Microbial Diversity & Ecology 3.1). Por lo tanto, algunas bacterias son es responsable de gran parte de su relación con el mundo exterior. Las membranas
mucho más grandes que la célula eucariótica promedio (las células vegetales y plasmáticas de las células procariotas son particularmente importantes porque deben
animales típicas tienen alrededor de 10 a 50 m de diámetro). cumplir una increíble variedad de funciones. Además de retener el citoplasma, la
membrana plasmática también sirve como una barrera selectivamente permeable:
permite que ciertos iones y moléculas pasen, ya sea dentro o fuera de la célula,
mientras previene el movimiento de otros.
Organización de las células procariotas
Las células procariotas son morfológicamente más simples que las Así, la membrana evita la pérdida de componentes esenciales por fugas al tiempo que
células eucariotas, pero no son solo versiones más simples de los eucariotas. permite el movimiento de otras moléculas.
Aunque muchas estructuras son comunes a ambos tipos de células, algunas son Debido a que muchas sustancias no pueden cruzar la membrana plasmática sin
exclusivas de los procariotas. Las principales estructuras procarióticas y sus funciones ayuda, debe ayudar a dicho movimiento cuando sea necesario.
se resumen e ilustran en la tabla 3.1 y la figura 3.4, respectivamente. Nótese que Los sistemas de transporte se utilizan para tareas como la absorción de nutrientes, la
ningún procariota posee todas estas estructuras en todo momento. Algunos se excreción de desechos y la secreción de proteínas. La membrana plasmática
encuentran solo en ciertas células en ciertas condiciones o en ciertas fases del ciclo procariótica también es la ubicación de una variedad de procesos metabólicos
de vida. Sin embargo, a pesar de estas variaciones, los procariotas son consistentes cruciales: respiración, fotosíntesis y la síntesis de lípidos y constituyentes de la pared
en su estructura fundamental y componentes más importantes. celular. Finalmente, la membrana contiene moléculas receptoras especiales que
ayudan a los procariotas a detectar y responder a los químicos en su entorno.
Claramente, la membrana plasmática es esencial para la supervivencia de los
Las células procarióticas casi siempre están limitadas por una pared celular microorganismos. Absorción de nutrientes por la célula (sección 5.6)
químicamente compleja. En el interior de esta pared se encuentra la membrana plasmática.
Esta membrana se puede invaginar para formar estructuras membranosas internas Como será evidente en la siguiente discusión, todas las membranas
simples, como la membrana captadora de luz de algunas bacterias fotosintéticas. aparentemente tienen un diseño básico común. Sin embargo, las membranas
Dado que la célula procariota no contiene orgánulos internos delimitados por procarióticas pueden diferir drásticamente en cuanto a los lípidos que contienen. De
membranas, su interior parece morfológicamente simple. El material genético se hecho, la química de membranas se puede utilizar para identificar especies bacterianas
localiza en una región discreta, el nucleoide, y por lo general no se separa del particulares. Para entender estas diferencias químicas y entender las muchas
funciones de los
Tabla 3.1 Funciones de las estructuras procarióticas
Membrana de plasma Barrera selectivamente permeable, límite mecánico de la célula, transporte de nutrientes y desechos, ubicación de muchos
procesos metabólicos (respiración, fotosíntesis), detección de señales ambientales para la quimiotaxis
vacuola de gas Flotabilidad para flotar en ambientes acuáticos
Ribosomas Síntesis de proteínas
Cuerpos de inclusión Almacenamiento de carbono, fosfato y otras sustancias.
nucleoide Localización de material genético (ADN)
Espacio periplásmico Contiene enzimas hidrolíticas y proteínas de unión para el procesamiento y la absorción de nutrientes.
Pared celular Da forma a los procariotas y los protege del estrés osmótico.
Cápsulas y capas de limo Resistencia a la fagocitosis, adherencia a superficies
Fimbrias y pili Adhesión a superficies, apareamiento bacteriano
flagelos Movimiento
endospora Supervivencia en condiciones ambientales adversas
Plasma
Cápsula Ribosomas Pared celular membrana
Asesino
nucleoide
Fimbrias Cromosoma Inclusión flagelo

(GOTA) cuerpo
Figura 3.4 Morfología de una célula procariótica.
membrana plasmática, es necesario familiarizarse con El modelo de mosaico fluido de la estructura de la membrana
estructura de membrana En esta sección, el diseño básico común El modelo más ampliamente aceptado para la estructura de la membrana es el
de todas las membranas se discute. A esto le sigue una consideración de las modelo de mosaico fluido de Singer y Nicholson (figura 3.5), que
diferencias significativas entre las membranas bacterianas y arqueales. propone que las membranas son bicapas lipídicas dentro de las cuales flotan
las proteínas. El modelo se basa en estudios de eucariotas y bac
Membranas de células procarióticas 45
Oligosacárido
glicolípido Proteína
integral
Proteína
integral
Hélice ÿ
hidrofóbica
Hopanoide
fosfolípido
Proteína
periférica
Figura 3.5 Estructura de la membrana del plasma bacteriano. Este diagrama del modelo de mosaico fluido de la estructura de la membrana bacteriana muestra
las proteínas integrales (azul) flotando en una bicapa lipídica. Las proteínas periféricas (púrpura) se asocian libremente con la superficie de la membrana interna.
Las pequeñas esferas representan los extremos hidrofílicos de los fosfolípidos de la membrana y las colas onduladas, las cadenas de ácidos grasos hidrofóbicos. Pueden estar
presentes otros lípidos de membrana, como los hopanoides (rojo). En aras de la claridad, los fosfolípidos se muestran en un tamaño proporcionalmente mucho mayor que en las
membranas reales.
membranas materiales, y se utilizaron una variedad de enfoques experimentales NH+3

para establecerlo. Los estudios de microscopía electrónica de transmisión
Etanolamina CH2
(TEM) fueron particularmente importantes. Cuando las membranas son teñidas
y examinadas por TEM, se puede ver que las membranas celulares son CH2 Extremo
estructuras muy delgadas, de alrededor de 5 a 10 nm de espesor, y que O polar e hidrófilo
aparecen como dos líneas oscuras a cada lado de un interior no teñido. Se ha -O correos
interpretado que este aspecto característico significa que el lípido de la
O
membrana está organizado en dos láminas de moléculas dispuestas de extremo
a extremo (figura 3.5). Cuando las membranas se escinden mediante la técnica CH2
Glicerol
de grabado por congelación, se pueden dividir por el centro de la bicapa lipídica, CH CH2
exponiendo la estructura interna compleja.
O O
Dentro de la bicapa lipídica, son visibles pequeñas partículas globulares; se ha
jefe jefe
sugerido que estos son proteínas de membrana que se encuentran dentro de Ácidos grasos
la bicapa lipídica de la membrana. El uso de microscopía de fuerza atómica ha R R Cadenas largas de
proporcionado poderosas imágenes para apoyar esta interpretación. ácidos grasos

hidrofóbicos no polares
Microscopía electrónica (sección 2.4); Nuevas técnicas en microscopía: microscopía
de sonda de barrido (sección 2.5)
La naturaleza química de los lípidos de membrana es fundamental para su
Figura 3.6 Estructura de un lípido de membrana polar.
capacidad de formar bicapas. La mayoría de los lípidos asociados a la
Fosfatidiletanolamina, un fosfolípido anfipático que se encuentra a menudo en las
membrana son estructuralmente asimétricos, con extremos polares y no polares
membranas bacterianas. Los grupos R son cadenas largas de ácidos grasos no
(figura 3.6) y se denominan anfipáticos. Los extremos polares interactúan con
polares.
el agua y son hidrofílicos; los extremos hidrófobos no polares son insolubles
en agua y tienden a asociarse entre sí. En ambientes acuosos, los lípidos
anfipáticos pueden interactuar para formar una bicapa. Las superficies exteriores y constituyen alrededor del 20 al 30% de la proteína de membrana total.
de la membrana bicapa son hidrofílicas, mientras que los extremos hidrofóbicos Alrededor del 70 al 80% de las proteínas de membrana son proteínas
están enterrados en el interior lejos del agua circundante (figura 3.5). Lípidos integrales. Estos no se extraen fácilmente de las membranas y son insolubles
(apéndice I) en soluciones acuosas cuando están libres de lípidos. Las proteínas integrales,
Se han identificado dos tipos de proteínas de membrana en función de su como los lípidos de membrana, son anfipáticas; sus regiones hidrofóbicas están
capacidad para separarse de la membrana. Las proteínas periféricas están enterradas en el lípido mientras que las porciones hidrofílicas se proyectan
débilmente conectadas a la membrana y pueden eliminarse fácilmente (figura desde la superficie de la membrana (figura 3.5). Las proteínas integrales
3.5). Son solubles en soluciones acuosas. pueden difundirse lateralmente en la membrana a nuevas ubicaciones, pero no cambian
girar a través de la capa lipídica. Los carbohidratos a menudo se unen a la Los pliegues de la membrana plasmática son comunes en muchas bacterias
superficie externa de las proteínas de la membrana plasmática, donde tienen y pueden volverse extensos y complejos en bacterias fotosintéticas como las
funciones importantes. Proteínas (anexo I) cianobacterias y las bacterias moradas o en bacterias con una actividad
respiratoria muy alta, como las bacterias nitrificantes. Estas estructuras
membranosas internas pueden ser agregados de vesículas esféricas,
Membranas bacterianas
vesículas aplanadas o membranas tubulares. Su función puede ser
Las membranas bacterianas son similares a las membranas eucariotas en proporcionar una superficie de membrana más grande para una mayor
que muchos de sus lípidos anfipáticos son fosfolípidos (figura 3.6), pero por lo actividad metabólica. Una estructura membranosa a veces reportada en
general se diferencian de las membranas eucariotas en que carecen de bacterias es el mesosoma. Los mesosomas parecen ser invaginaciones de la
esteroles (lípidos que contienen esteroides) como el colesterol (figura 3.7a). membrana plasmática en forma de vesículas, túbulos o láminas. Aunque se le
Sin embargo, muchas membranas bacterianas contienen moléculas similares ha atribuido una variedad de funciones
a los esteroles llamadas hopanoides (figura 3.7b). Los hopanoides se
sintetizan a partir de los mismos precursores que los esteroides y, al igual que
los esteroles en las membranas eucarióticas, probablemente estabilizan la
membrana. Los hopanoides también son de interés para los ecologistas y
geólogos: se ha estimado que la masa total de hopanoides en los sedimentos
es de alrededor de 1011 a 12 toneladas, casi tanto como la masa total de
carbono orgánico en todos los organismos vivos (1012 toneladas) y hay
evidencia de que los hopanoides han contribuido significativamente a la formación de petróleo.
La imagen emergente de las membranas plasmáticas bacterianas es la
de un sistema altamente organizado y asimétrico que también es flexible y
dinámico. Numerosos estudios han demostrado que los lípidos no se
distribuyen homogéneamente en la membrana plasmática. Más bien, hay
dominios en los que se concentran lípidos particulares. También se ha
demostrado que la composición lipídica de las membranas bacterianas varía
con la temperatura ambiental de tal forma que la membrana permanece fluida
durante el crecimiento. Por ejemplo, las bacterias que crecen a temperaturas
más bajas tendrán ácidos grasos con puntos de fusión más bajos en los
fosfolípidos de su membrana.
La influencia de los factores ambientales en el crecimiento: Temperatura (sección 6.5)
(a)
Aunque los procariotas no contienen orgánulos membranosos complejos
como las mitocondrias o los cloroplastos, se pueden observar estructuras
membranosas internas en algunas bacterias (figura 3.8).
HO
(a) El colesterol (un esteroide) se encuentra en los eucariotas
OH OH
OH OH
(B)
Figura 3.8 Membranas bacterianas internas. Membranas de bacterias

(b) Un bacteriohopanetetrol (un hopanoide), como se encuentra en las bacterias nitrificantes y fotosintéticas. (a) Nitrocystis oceanus con membranas paralelas
que atraviesan toda la célula. Nótese el nucleoplasma (n) con estructura
Figura 3.7 Esteroides de membrana y Hopanoides. Ejemplos comunes. fibrilar. (b) Ectothiorhodospira mobilis con un extenso sistema de membrana
intracitoplasmática (60 000).
Membranas de células procarióticas 47
mesosomas, muchos bacteriólogos creen que son artefactos generados Los grupos que contienen fosfato, azufre y azúcar se pueden unir al tercer
durante la fijación química de bacterias para microscopía electrónica. carbono de los diéteres y tetraéteres, convirtiéndolos en lípidos polares.
Estos predominan en la membrana y del 70 al 93% de los lípidos de la
membrana son polares. Los lípidos restantes no son polares y suelen ser
Membranas Arqueales derivados del escualeno (figura 3.10).
A pesar de estas diferencias significativas en los lípidos de la
Una de las características más distintivas de Archaea es la naturaleza de
membrana, el diseño básico de las membranas de las arqueas es similar
los lípidos de su membrana. Se diferencian tanto de Bacteria como de
al de las bacterias y los eucariotas: hay dos superficies hidrofílicas y un
Eucarya en que tienen hidrocarburos de cadena ramificada unidos al
núcleo hidrofóbico. Cuando se utilizan diéteres C20 , se forma una
glicerol por enlaces éter en lugar de ácidos grasos conectados por
membrana bicapa regular (figura 3.11a). Cuando la membrana se
enlaces éster (figura 3.9). A veces, dos grupos de glicerol se unen para
construye con tetraéteres C40 , se forma una membrana monocapa con
formar un tetraéter extremadamente largo. Por lo general, las cadenas de
mucha más rigidez (figura 3.11b). Como cabría esperar de
hidrocarburo diéter tienen una longitud de 20 carbonos y las cadenas de
tetraéter tienen 40 carbonos. Las células pueden ajustar la longitud total
de los tetraéteres ciclando las cadenas para formar anillos pentacíclicos (figura 3.9).
Un lípido bacteriano o eucariótico escualeno

Glicerol Enlace éster Ácido esteárico
O
CH2 CO
O
CH jefe
tetrahidroescualeno
CH2OH _
Figura 3.10 Lípidos no polares de Archaea. Dos ejemplos de los lípidos no polares
más predominantes son el isoprenoide C30 escualeno y uno de sus derivados
Glicerolípidos arqueales
Enlace de éter hidroisoprenoideos, el tetrahidroescualeno.
Phytanol
CH2 O
DAR
CH2OH _
Diéter de fitanilglicerol
HO CH2
O CH (a)
CH2 O
O CH2
CH O
CH2OH _
Tetraéter de dibifitanildiglicerol
CH2 O HO CH2
CH O O CH
CH2OH _ O CH2
Tetraéter con cadenas bipentacíclicas de bifitanilo C40

(B)
Figura 3.9 Lípidos de la membrana de las arqueas. Una ilustración
de la diferencia entre los lípidos de las arqueas y los de las bacterias. Figura 3.11 Ejemplos de Membranas Arqueales. (a) Una membrana compuesta
Los lípidos arqueológicos son derivados de los éteres de isopranil glicerol en lugar de proteínas integrales y una bicapa de diéteres C20 . (b) Una monocapa rígida
de los ésteres de ácidos grasos de glicerol en las bacterias. Se dan tres ejemplos de compuesta de proteínas integrales y tetraéteres C40 .
glicerolípidos de arqueas comunes.
su necesidad de estabilidad, las membranas de los termófilos extremos Cuerpos de inclusión

como Thermoplasma y Sulfolobus, que crecen mejor a temperaturas superiores a
Cuerpos de inclusión, gránulos de material orgánico o inorgánico que
85°C, son casi completamente monocapas de tetraéter. Las arqueas que viven en
a menudo son claramente visibles en un microscopio óptico, están presentes en el
ambientes moderadamente cálidos tienen una
matriz citoplasmática. Estos cuerpos generalmente se utilizan para el almacenamiento
membrana mixta que contiene algunas regiones con monocapas y
(por ejemplo, compuestos de carbono, sustancias inorgánicas y energía), y
algunos con bicapas. Phylum Euryarchaeota: termoplasmas (sección también reducen la presión osmótica al unir moléculas en partículas
20.3); Phylum Crenarchaeota: Sulfolobus (sección 20.2) formulario. Algunos cuerpos de inclusión se encuentran libres en el citoplasma, por
ejemplo, gránulos de polifosfato, gránulos de cianoficina y algunos
1. Enumerar las funciones de la membrana plasmática procariótica. gránulos de glucógeno. Otros cuerpos de inclusión están encerrados por una capa.
2. Describa con palabras y con un diagrama rotulado el modelo de mosaico fluido para celda de aproximadamente 2,0 a 4,0 nm de espesor, que tiene una sola capa y puede
membranas consistir en proteínas o una estructura membranosa compuesta de proteínas
3. Comparar y contrastar membranas bacterianas y arqueas. y fosfolípidos. Ejemplos de cuerpos de inclusión cerrados son
4. Discuta las formas en que las bacterias y las arqueas ajustan el contenido de lípidos de sus gránulos de polihidroxibutirato, algo de glucógeno y azufre
membranas en respuesta a las condiciones ambientales. gránulos, carboxisomas y vacuolas de gas. Muchos cuerpos de inclusión se utilizan
para el almacenamiento; su cantidad variará con el estado nutricional de la célula. Por
ejemplo, los gránulos de polifosfato
3.3 LA MATRIZ CITOPLÁSMICA

La matriz citoplasmática es la sustancia en la que se encuentra el nucleoide,
Los ribosomas y los cuerpos de inclusión están suspendidos. Carece de organelos
unidos por bicapas lipídicas (a menudo llamadas membranas unitarias),
y es en gran parte agua (alrededor del 70% de la masa bacteriana es agua). Hasta que
recientemente, se pensó que carecía de citoesqueleto. La membrana plasmática y
todo lo que contiene se llama protoplasto; por tanto, la matriz citoplasmática es una
parte importante del protoplasto.
El citoesqueleto procariótico
Cuando se examina con el microscopio electrónico, el citoplasma
La matriz de los procariotas está repleta de ribosomas. Durante muchos años
Se pensó que los procariotas carecían del alto nivel de organización citoplásmica
presente en las células eucarióticas porque carecían
un citoesqueleto. Recientemente homólogos de los tres elementos del citoesqueleto (a) (B)
eucariótico (microfilamentos, filamentos intermedios y
microtúbulos) se han identificado en bacterias, y uno ha sido Figura 3.12 El citoesqueleto procariótico. visualización de
identificados en arqueas (tabla 3.2). Los filamentos del citoesqueleto de la proteína citoesquelética similar a MreB (Mbl) de Bacillus subtilis. el mbl
Los procariotas son estructuralmente similares a sus contrapartes eucarióticas y llevan La proteína se ha fusionado con proteína verde fluorescente y proteína viva.
a cabo funciones similares: participan en la división celular, localizan proteínas en las células han sido examinadas por microscopía de fluorescencia. (a) Flechas
ciertos sitios de la célula y determinan apuntan a los cables helicoidales del citoesqueleto que se extienden a lo largo de
forma de celda (tabla 3.2 y figura 3.12). El ciclo celular procariótico: las celdas. (b) Tres de las celdas de (a) se muestran con mayor aumento.
Citocinesis (sección 6.1)
Tabla 3.2 Proteínas del citoesqueleto procariótico
Proteína procariota (contraparte eucariota) Función Comentarios
FtsZ (tubulina) División celular Ampliamente observado en bacterias y arqueas

MreB (actina) forma de celda Observado en muchas bacterias en forma de bastón; en
Bacillus subtilis se llama Mbl
Crescentina (proteínas de filamento intermedio) forma de celda Descubierto en Caulobacter crescentus

La matriz citoplasmática 49
agotarse en hábitats de agua dulce con limitaciones de fosfato. A

sigue una breve descripción de varios cuerpos de inclusión importantes.
Los cuerpos de inclusión orgánicos suelen contener glucógeno
o poli-hidroxialcanoatos (por ejemplo, poli-hidroxibutirato).
El glucógeno es un polímero de unidades de glucosa compuesto de cadenas largas
formado por (1ÿ4) enlaces glucosídicos y cadenas ramificadas conectadas a ellos por
(1ÿ6) enlaces glucosídicos. El poli-hidroxibutirato (PHB) contiene moléculas de
-hidroxibutirato unidas
por enlaces éster entre los grupos carboxilo e hidroxilo de moléculas adyacentes. Por
lo general, sólo uno de estos polímeros se encuentra en
una especie, pero algunas bacterias fotosintéticas tienen tanto glucógeno
y PHB. El polihidroxibutirato se acumula en distintos cuerpos, de alrededor de 0,2 a
0,7 m de diámetro, que se tiñen fácilmente con
Sudán negro para microscopía óptica y se ven como "agujeros" vacíos
en el microscopio electrónico (figura 3.13a). Esto se debe a que el
los disolventes utilizados para preparar muestras para microscopía electrónica
disuelven estos cuerpos de inclusión hidrofóbicos. El glucógeno se dispersa
más uniformemente en toda la matriz como pequeños gránulos (alrededor de 20 a
(a)
100 nm de diámetro) y, a menudo, solo se puede ver con el electrón
microscopio. Si las células contienen una gran cantidad de glucógeno, la tinción
con una solución de yodo los volverá de color marrón rojizo. glucógeno
y los cuerpos de inclusión de PHB son reservorios de almacenamiento de carbono que
proporcionan material para energía y biosíntesis. Muchas bacterias también almacenan
carbono como gotitas de lípidos. Carbohidratos (anexo I)
Las cianobacterias, un grupo de bacterias fotosintéticas, tienen dos
cuerpos de inclusión orgánicos distintivos. Los gránulos de cianoficina (figura 3.13b)
están compuestos de grandes polipéptidos que contienen cantidades aproximadamente
iguales de los aminoácidos arginina y ácido aspártico.
Los gránulos a menudo son lo suficientemente grandes para ser visibles en el
microscopio óptico y almacenan nitrógeno adicional para las bacterias. Carboxisomas
están presentes en muchas cianobacterias y otras bacterias fijadoras de CO2.
Son poliédricos, de unos 100 nm de diámetro, y contienen la enzima ribulosa-1,5-
bisfosfato carboxilasa, llamada Rubisco.
Rubisco es la enzima crítica para la fijación de CO2, el proceso de convertir el CO2 de
la atmósfera en azúcar. La enzima asume
una disposición paracristalina en el carboxisoma, que sirve como
una reserva de la enzima. Los carboxisomas también pueden ser un sitio de CO2
fijación. La fijación de CO2 por autótrofos (sección 10.3)
tilacoides
Figura 3.13 Cuerpos de inclusión en bacterias. (a) electrón

micrografía de Bacillus megaterium (30.500). Poli- -
cuerpo de inclusión de hidroxibutirato, PHB; pared celular, CW; nucleoide, N;
membrana plasmática, PM; “mesosoma”, M; y ribosomas, R.
(b) Ultraestructura de la cianobacteria Anacystis nidulans. los
la bacteria se divide y se forma parcialmente un tabique, LI y LII.
Se pueden ver varias características estructurales, incluidas las capas de la pared celular,
LIII y LIV; gránulos de polifosfato, pp; un cuerpo poliédrico, pb;
material de cianoficina, c; y membrana plasmática, pm. tilacoides
correr a lo largo de la celda. (c) Chromatium vinosum, un color púrpura 0,1 ÿm
bacteria de azufre, con gránulos de azufre intracelular, campo claro

microscopía (2,000). (B) (C)
Un cuerpo de inclusión orgánico muy notable es la vacuola de gas, de constituyentes celulares como los ácidos nucleicos. En algunas células actúan como
una estructura que proporciona flotabilidad a algunos procariotas acuáticos. una reserva de energía, y el polifosfato puede servir como fuente de energía
Las vacuolas de gas están presentes en muchas bacterias fotosintéticas y en algunas fuente en las reacciones. Estos gránulos a veces se denominan
otros procariotas acuáticos como Halobacterium (un archaeon amante de la sal) y Thiothrix gránulos metacromáticos porque muestran la metacromática
(una bacteria filamentosa). Las vacuolas de gas son efecto; es decir, aparecen en rojo o en un tono diferente de azul cuando
agregados de enormes números de pequeños, huecos, cilíndricos teñido con los tintes azules azul de metileno o azul de toluidina.
estructuras llamadas vesículas de gas (figura 3.14). Las paredes de las vesículas de gas son Algunos procariotas utilizan gránulos de azufre para almacenar azufre temporalmente
compuesto enteramente de una sola proteína pequeña. Estas subunidades proteicas (figura 3.13c). Por ejemplo, las bacterias fotosintéticas pueden
se ensamblan para formar un cilindro cerrado rígido que es hueco e impermeable al agua utilizar sulfuro de hidrógeno como donante de electrones fotosintético y acumular el azufre
pero libremente permeable a los gases atmosféricos. resultante en el espacio periplásmico o en
Los procariotas con vacuolas de gas pueden regular su flotabilidad para flotar glóbulos citoplasmáticos especiales. Fototrofia: La reacción de la luz en la fotosíntesis
a la profundidad necesaria para la intensidad de luz adecuada, la concentración de oxígeno anoxigénica (sección 9.12)
y los niveles de nutrientes. Descienden simplemente colapsando vesículas y flotan hacia Los cuerpos de inclusión inorgánicos se pueden utilizar para otros fines
arriba cuando se construyen otras nuevas. que el almacenamiento. Un excelente ejemplo es el magnetosoma, que
En los procariotas se observan dos tipos principales de cuerpos de inclusión es utilizado por algunas bacterias para orientarse en el campo magnético de la Tierra.
inorgánicos : gránulos de polifosfato y gránulos de azufre. Muchas bacterias almacenan Muchos de estos cuerpos de inclusión contienen hierro en forma de magnetita (Microbial
fosfato como gránulos de polifosfato o volutina. Diversity & Ecology 3.2).
gránulos (figura 3.13b). El polifosfato es un polímero lineal de ortofosfatos unidos por
enlaces éster. Por lo tanto, los gránulos de volutina funcionan como depósitos de Ribosomas
almacenamiento de fosfato, un componente importante
Como se mencionó anteriormente, la matriz citoplasmática a menudo está repleta de
ribosomas; también pueden estar unidos al plasma de forma suelta.
membrana. Los ribosomas son estructuras muy complejas hechas de ambos
proteína y ácido ribonucleico (ARN). Son el sitio de la proteína.
síntesis; Los ribosomas citoplasmáticos sintetizan proteínas destinadas a
permanecen dentro de la célula, mientras que los ribosomas de la membrana plasmática
Elabora proteínas para su transporte al exterior. El recién formado
El polipéptido se pliega en su forma final ya sea cuando es sintetizado por
el ribosoma o poco después de la finalización de la síntesis de proteínas. los
la forma de cada proteína está determinada por su secuencia de aminoácidos.
Proteínas especiales llamadas chaperonas moleculares, o simplemente chaperones,
ayudan al polipéptido a plegarse hasta su forma adecuada. Proteína
La síntesis, que incluye un tratamiento detallado de los ribosomas y las chaperonas, se
analiza con considerable extensión en el capítulo 11.
Los ribosomas procarióticos son más pequeños que los ribosomas citoplasmáticos o
asociados al retículo endoplásmico de las células eucarióticas.
Los ribosomas procarióticos se denominan ribosomas 70S (a diferencia de
80S en eucariotas), tienen dimensiones de alrededor de 14 a 15 nm por 20
nm, un peso molecular de aproximadamente 2,7 millones, y son
construido de una subunidad 50S y una 30S (figura 3.15). La S en los 70S
y valores similares representan la unidad Svedberg. Esta es la unidad de la
coeficiente de sedimentación, una medida de la velocidad de sedimentación en una
centrífuga; cuanto más rápido viaja una partícula cuando se centrifuga,
mayor es su valor de Svedberg o coeficiente de sedimentación. los
El coeficiente de sedimentación es una función de la concentración molecular de una partícula.
peso, volumen y forma (ver figura 16.19). mas pesado y mas
las partículas compactas normalmente tienen números de Svedberg más grandes o se
sedimentan más rápido.
1. Describa brevemente la naturaleza y función de la matriz citoplasmática.

2. Enumerar y describir las funciones de las proteínas del citoesqueleto, cuerpos de inclusión y
Figura 3.14 Vesículas y vacuolas de gas. Una fractura por congelación ribosomas.
preparación de Anabaena flosaquae (89.000). racimos de la 3. Enumere los tipos más comunes de cuerpos de inclusión.
vesículas en forma de cigarro forman vacuolas de gas. Tanto longitudinales como
4. Relacionar la estructura de una vacuola de gas con su función.
se pueden ver vistas transversales de vesículas de gas (flechas).
(un)
(un)
0,5 ÿm
subunidad 30S subunidad 50S
Figura 3.15 Ribosoma procariótico. Se muestran las dos subunidades de

fibras de ADN
un ribosoma bacteriano. La subunidad 50S incluye rRNA 23S
(gris) y 5S rRNA (azul claro), mientras que 16S rRNA (cian) se encuentra en
Membrana
la subunidad 30S. Una molécula de tRNA (oro) se muestra en el sitio A.
Para generar este diagrama de cinta, se cultivaron cristales de ribosomas
Célula rota
bacterianos purificados, se expusieron a rayos X y se analizó el patrón
de difracción resultante.
3.4 EL NUCLEOIDE
(B)
Probablemente, la diferencia más llamativa entre procariotas y eucariotas es la
forma en que se empaqueta su material genético.
Las células eucarióticas tienen dos o más cromosomas contenidos dentro de Figura 3.16 Nucleoides y cromosomas procarióticos.
un orgánulo delimitado por una membrana, el núcleo. Por el contrario, los Los cromosomas procarióticos se encuentran en el nucleoide, un área en el
procariotas carecen de un núcleo delimitado por membranas. El cromosoma citoplasma. (a) Una micrografía electrónica de transmisión con color realzado
procariótico está ubicado en una región de forma irregular llamada nucleoide de una sección delgada de una célula de E. coli en división. Las áreas rojas
(también se usan otros nombres: cuerpo nuclear, cuerpo de cromatina, región son los nucleoides presentes en las dos células hijas. (b) Cromosoma liberado
nuclear) (figura 3.16). Por lo general, los procariotas contienen un solo círculo de una célula de E. coli suavemente lisada. Tenga en cuenta lo apretado que
de ácido desoxirribonucleico (ADN) de doble cadena , pero algunos tienen debe estar el ADN dentro de la célula.
un cromosoma de ADN lineal y algunos, como Vibrio cholerae y Borrelia

burgdorferi (los agentes causantes del cólera y la enfermedad de Lyme,
respectivamente), tienen más de un cromosoma. Es posible aislar nucleoides puros. El análisis químico de los nucleoides
purificados revela que están compuestos por aproximadamente un 60 % de
Tanto los estudios con microscopía electrónica como de luz han sido ADN, un 30 % de ARN y un 10 % de proteína en peso. En Escherichia coli, el
importantes para comprender la estructura y función de los nucleoides, círculo cerrado de ADN mide aproximadamente 1400 m o entre 230 y 700 veces
especialmente durante el crecimiento y la división celular activos. El nucleoide más que la célula (figura 3.16b).
tiene un aspecto fibroso en las micrografías electrónicas; las fibras son probablemente Obviamente,
ADN. debe empaquetarse de manera muy eficiente para que quepa
En las células en crecimiento activo, el nucleoide tiene proyecciones que se dentro del nucleoide. El ADN se enrolla y enrolla extensamente (ver figura 11.8),
extienden hacia la matriz citoplasmática. Presumiblemente, estas proyecciones probablemente con la ayuda de ARN y una variedad de proteínas nucleoides.
contienen ADN que se transcribe activamente para producir ARNm. Otros Estos incluyen proteínas de condensación, que se conservan tanto en Bacteria
estudios han demostrado que se puede observar más de un nucleoide dentro como en Archaea. A diferencia de los eucariotas y algunas arqueas, las
de una sola célula cuando el material genético se ha duplicado pero aún no se bacterias no utilizan proteínas histonas para empaquetar su ADN.
ha producido la división celular (figura 3.16a).
plásmidos 53
Hay algunas excepciones a la imagen anterior. plásmidos y sus propiedades se dan en la tabla 3.3. Conjugativo
Las regiones que contienen ADN unido a la membrana están presentes en dos los plásmidos son de particular interés. Tienen genes para la construcción de
géneros del inusual filo bacteriano Planctomycetes (véase la figura 21.12). Pirellula tiene estructuras parecidas a pelos llamadas pelos y pueden transferir copias de
una sola membrana que rodea una región, el pirelulosoma, que contiene un nucleoide a otras bacterias durante la conjugación. Quizás el plásmido conjugativo mejor estudiado
fibrilar y partículas similares a ribosomas. El cuerpo nuclear de Gemmata es el factor F (factor de fertilidad o F
plásmido) de E. coli, que fue el primer factor conjugativo que se describió. El factor F
obscuriglobusis delimitada por dos membranas. Más trabajo será contiene genes que dirigen la formación de
necesarios para determinar las funciones de estas membranas y cómo pelos sexuales que unen una célula F+ (una célula que contiene un plásmido F) a una
generalizado este fenómeno es. Phylum Planctomycetes (sección 21.4) Célula F (una célula que carece de un plásmido F). Otro gen codificado por plásmido
Los productos ayudan a la transferencia de ADN de la célula F+ a la célula F. La F
1. Describe la estructura y función del nucleoide y el ADN que contiene. El factor también tiene varios segmentos llamados secuencias de inserción que le
2. Enumere tres géneros que son excepcionales en términos de su cromosoma o permiten integrarse en el cromosoma de la célula huésped. Así, el factor F es un
estructura nucleoide. Sugiera cómo las diferencias observadas en estos géneros episoma. Elementos transponibles (sección 13.5); Conjugación bacteriana (sección 13.7)
podría afectar la forma en que funcionan.
Los factores de resistencia (factores R, plásmidos R) son otra

grupo de plásmidos importantes. Confieren resistencia antibiótica a
las celdas que los contienen. Los factores R suelen tener genes que
3.5 PLÁSMIDOS
código para enzimas capaces de destruir o modificar antibióticos.
Además del material genético presente en el nucleoide, muchos Algunos plásmidos R tienen un solo gen de resistencia, mientras que otros tienen hasta
los procariotas (y algunas levaduras y otros hongos) contienen moléculas de ADN ocho. A menudo, los genes de resistencia están dentro
extracromosómicas llamadas plásmidos. De hecho, la mayoría de los elementos genéticos móviles llamados transposones, y por lo tanto es posible que
Los genomas de bacterias y arqueas secuenciados hasta ahora incluyen plásmidos. En evolucionen plásmidos de resistencia múltiple. Los factores R generalmente
algunos casos, numerosos plásmidos diferentes dentro de un solo no se integran en el cromosoma huésped.
se han identificado especies. Por ejemplo, B. burgdorferi, lleva Los factores R son de gran preocupación para los funcionarios de salud pública
12 plásmidos lineales y 9 circulares. Los plásmidos juegan muchos importantes porque pueden propagarse rápidamente a través de una población de células.
roles en la vida de los organismos que los tienen. También tienen Esto es posible por varias razones. Una es que muchos factores R también
demostrado ser invaluable para microbiólogos y genetistas moleculares en son plásmidos conjugativos. Sin embargo, un factor R no conjugativo puede
construir y transferir nuevas combinaciones genéticas y en propagarse a otras células si está presente en una célula que también contiene un
genes de clonación, como se describe en el capítulo 14. Esta sección analiza plásmido conjugativo. En tal celda, el factor R a veces puede ser
los diferentes tipos de plásmidos procarióticos. se transfiere cuando se transfiere el plásmido conjugativo, es decir, se
Los plásmidos son pequeñas moléculas de ADN de doble cadena que pueden está “movilizado”. Aún más preocupante es el hecho de que algunos factores R
existen independientemente del cromosoma. Tanto circular como lineal. se transfieren fácilmente entre especies. Cuando los humanos y otros
Se han documentado plásmidos, pero la mayoría de los plásmidos conocidos son los animales consumen antibióticos, el crecimiento de bacterias huésped con R
circular. Los plásmidos lineales poseen estructuras o secuencias especiales. se promueven los factores. Los factores R se pueden transferir a más
en sus extremos para evitar su degradación y permitir su replicación. Los plásmidos géneros patógenos como Salmonella o Shigella, causando incluso
tienen relativamente pocos genes, generalmente menos de mayores problemas de salud pública. Farmacorresistencia (sección 34.6)
30. Su información genética no es esencial para el huésped y las células Se han descubierto varios otros tipos importantes de plásmidos. Estos incluyen
que carecen de ellos suelen funcionar con normalidad. Sin embargo, muchos plásmidos plásmidos que codifican bacteriocina, virulencia
portan genes que confieren una ventaja selectiva a sus huéspedes. plásmidos y plásmidos metabólicos. Los plásmidos que codifican bacteriocinas pueden
en ciertos ambientes. dar a las bacterias que los albergan una ventaja competitiva en el mundo microbiano.
Los plásmidos son capaces de replicarse de forma autónoma. Copia única Las bacteriocinas son proteínas bacterianas que destruyen otras bacterias. Suelen
los plásmidos producen solo una copia por célula huésped. Los plásmidos multicopia actuar sólo contra
pueden estar presentes en concentraciones de 40 o más por célula. cepas estrechamente relacionadas. Algunas bacteriocinas matan las células formando
Algunos plásmidos son capaces de integrarse en el cromosoma y son canales en la membrana plasmática, violando así la permeabilidad selectiva crítica
así replicado con el cromosoma. Estos plásmidos se denominan requerida para la viabilidad celular. También pueden degradar el ADN y el ARN o atacar
episomas. Los plásmidos se heredan de manera estable durante la división celular, pero al peptidoglucano y debilitar la célula.
no siempre se reparten por igual en las células hijas y muro. Los plásmidos Col contienen genes para la síntesis de bacteriocinas.
a veces se pierden. La pérdida de un plásmido se llama curado. Puede conocidas como colicinas, que están dirigidas contra E. coli. Otros plásmidos portan
ocurren espontáneamente o son inducidas por tratamientos que inhiben la replicación genes para bacteriocinas contra otras especies. Por ejemplo, las cloacinas matan
del plásmido pero no la reproducción de la célula huésped. Algunos comúnmente especies de Enterobacter . Algunos plásmidos Col son
Los tratamientos de curado utilizados son mutágenos de acridina, UV e ionizantes. conjugativos y portan genes de resistencia. Cabe señalar que no
radiación, falta de timina, antibióticos y crecimiento por encima de las temperaturas todos los genes de bacteriocina están en plásmidos. Por ejemplo, los genes de bacterias
óptimas. ocinas de Pseudomonas aeruginosa, que codifican proteínas
Los plásmidos pueden clasificarse en términos de su modo de existencia, llamadas piocinas, se encuentran en el cromosoma. Las bacteriocinas producidas por
propagación y función. Un breve resumen de los tipos de bacterias. la flora normal de los humanos (y otros animales) también son
Cuadro 3.3 Principales tipos de plásmidos bacterianos
Número de copia
Aproximado (Copias/ fenotípico
Escribe Representantes Tamaño (kpb) Cromosoma) Anfitriones Característicasa
Factor de fertilidadb factor F 95–100 1–3 E. coli, Salmonella, Sexo pilus, conjugación
Citrobacter
Plásmidos R RP4 54 1–3 Pseudomonas y muchas Sex pilus, conjugación, otras bacterias
gramnegativas resistencia a amperio,
Km, Nm, Tet
R1 80 1–3 Bacterias Gram-negativo Resistencia a Amp, Km,
Su, Cm, Sm
R6 98 1–3 E. coli, Proteus do, sm, cm, tet, km,
mirabilis Nuevo Méjico
R100 90 1–3 E. coli, Shigella, Cm, Sm, Do, Tet, Hg

Salmonella, Proteus
pSH6 21 estafilococo aureus Gm, Tet, Km
pSJ23a 36 S. aureus Pn, Asa, Hg, Gm, Km, Nm,

Me, etc.
pAD2 25 enterococo faecalis Em, Km, Sm

col plásmidos ColE1 9 10–30 E. coli Producción de colicina E1
ColE2 10–15 Shigela Colicina E2
CloDF13 Enterobacter cloacae Cloacina DF13
Plásmidos de Virulencia Ent (P307) 83 E. coli Producción de enterotoxinas
plásmido K88 E. coli Antígenos de adherencia

ColV-K30 2 E. coli sideróforo para hierro
consumo; resistencia a
mecanismos inmunes
pZA10 56 S. aureus Enterotoxina B
Tú 200 Agrobacterium Inducción de tumores
tumefaciens
Plásmidos Metabólicos CAM 230 Pseudomonas Degradación de alcanfor
DEBERÁ 56 Pseudomonas Degradación de salicilato
PEAJE 75 Pseudomonas putida Degradación de tolueno
pJP4 Pseudomonas Degradación del ácido 2,4-

diclorofenoxiacético
E. coli, Klebsiella, Degradación de lactosa
Salmonella
Providencia ureasa
sim rizobio Fijación de nitrógeno y

simbiosis.
a
Abreviaturas utilizadas para la resistencia a antibióticos y metales: Amp, ampicilina; Asa, arseniato; Cm, cloranfenicol; em, eritromicina; Gm, gentamicina; mercurio, mercurio; Km, kanamicina; Nm, neomicina; Pn, lápiz; Sm,
estreptomicina; Su, sulfonamidas; Tet, tetraciclina.
B
Muchos plásmidos R, plásmidos metabólicos y otros también son conjugativos.
componentes de nuestras defensas contra patógenos invasores. de Rhizobium para inducir la nodulación de leguminosas y llevar a cabo nitrógeno
Los plásmidos de virulencia codifican factores que hacen que sus huéspedes sean más fijación.
patógeno. Por ejemplo, las cepas enterotoxigénicas de E. coli causan
diarrea del viajero porque contienen un plásmido que codifica para
1. Dé las principales características de los plásmidos. ¿En qué se diferencian de los cromosomas?
una enterotoxina. Los plásmidos metabólicos portan genes para enzimas que
2. ¿Qué es un episoma? ¿Un plásmido conjugativo?
degradan sustancias como compuestos aromáticos (tolueno), pesticidas (ácido 2,4-
3. Describa cada uno de los siguientes plásmidos y explique su importancia: F
diclorofenoxiacético) y azúcares (lactosa).
factor, factor R, plásmido Col, plásmido de virulencia y plásmido metabólico.
Los plásmidos metabólicos incluso portan los genes necesarios para algunas cepas
La pared celular bacteriana 55
3.6 LA PARED CELULAR BACTERIANA La pared celular de los gramnegativos es bastante compleja. Tiene una capa de
péptidoglicano de 2 a 7 nm cubierta por una membrana externa de 7 a 8 nm de espesor.
La pared celular es la capa, generalmente bastante rígida, que se encuentra justo afuera Debido a que la capa de peptidoglicano es más gruesa, las paredes de las células
la membrana plasmática. Es una de las procariotas más importantes. grampositivas son más resistentes a la presión osmótica que las de
estructuras por varias razones: ayuda a determinar la forma de la Bacterias Gram-negativo. Los microbiólogos a menudo llaman envoltura celular a
célula; ayuda a proteger la célula de la lisis osmótica; puede proteger el todas las estructuras desde la membrana plasmática hacia el exterior .
célula de sustancias tóxicas; y en patógenos, puede contribuir a Por lo tanto, esto incluye la membrana plasmática, la pared celular y
patogenicidad La importancia de la pared celular se refleja en la estructuras como cápsulas (pág. 65) cuando están presentes. Preparación y tinción de
hecho de que relativamente pocos procariotas carecen de paredes celulares. los que hacen muestras: tinción diferencial (sección 2.3)
tienen otras características que cumplen la función de la pared celular. el procariótico Una característica importante de la envoltura celular es un espacio que se ve con
La pared celular también es el sitio de acción de varios antibióticos. Por lo tanto,
frecuencia entre la membrana plasmática y la membrana externa en micrografías
es importante entender su estructura. electrónicas de bacterias gramnegativas, y es
Las paredes celulares de Bacteria y Archaea son distintivas y están
a veces se observa entre la membrana plasmática y la pared
otro ejemplo de las características importantes que distinguen a estos en bacterias grampositivas. Este espacio se llama periplasma
organismos En esta sección, nos centramos en las paredes celulares bacterianas. Un espacio. La sustancia que ocupa el espacio periplásmico es el
Primero se proporciona una descripción general de la estructura de la pared celular bacteriana. Esto es
periplasma. La naturaleza del espacio periplásmico y del periplasma difiere en las
seguido de discusiones más detalladas de aspectos particulares de la célula bacterias grampositivas y gramnegativas. Estas diferencias se señalan en las
Estructura y función de la pared. Las paredes celulares de las arqueas se discuten en
discusiones más detalladas que siguen.
sección 3.7.
Estructura de peptidoglicano
Descripción general de la estructura de la pared celular bacteriana
El peptidoglucano, o mureína, es un enorme polímero similar a una malla
Después de que Christian Gram desarrollara la tinción de Gram en 1884, pronto compuesto por muchas subunidades idénticas. El polímero contiene
se hizo evidente que la mayoría de las bacterias se podían dividir en dos grupos dos derivados del azúcar, N-acetilglucosamina y ácido N-acetilmurámico (el éter lactilo
principales en función de su respuesta al procedimiento de tinción de Gram de la N-acetilglucosamina), y varios aminoácidos diferentes. Tres de estos aminoácidos
(ver tabla 19.9). Las bacterias Gram-positivas se tiñeron de púrpura, mientras que no son
las bacterias gramnegativas se tiñeron de rosa o rojo con la técnica. encontrado en proteínas: ácido D-glutámico, D-alanina y ácido meso diaminopimélico.
La verdadera diferencia estructural entre estos dos grupos no La presencia de D-aminoácidos protege
aclararse hasta la llegada del microscopio electrónico de transmisión. La pared celular contra la degradación por la mayoría de las peptidasas, que reconocen sólo
de las bacterias grampositivas consiste en una sola de 20 a 80 los isómeros L de los residuos de aminoácidos. La subunidad de peptidoglicano
capa homogénea de nm de espesor de peptidoglicano (mureína) que se encuentra presente en la mayoría de las bacterias gramnegativas y muchas grampositivas se
fuera de la membrana plasmática (figura 3.17). Por el contrario, el muestra en la figura 3.18. La columna vertebral de este
PAGS
La pared celular gramnegativa
PM Célula
SI muro
La pared celular grampositiva
METRO
Membrana externa
PM peptidoglicano peptidoglicano
PAGS
EN Membrana de plasma
Membrana de plasma
periplásmico
Pared celular espacio
Figura 3.17 Paredes celulares grampositivas y gramnegativas. La envoltura grampositiva es de Bacillus licheniformis (izquierda), y la micrografía gramnegativa es de
Aquaspirillum serpens (derecha). METRO; capa de peptidoglicano o mureína; OM, membrana externa; PM, plasma
membrana; P, espacio periplásmico; W, pared de peptidoglucanos grampositivos.
MASCULINO ROCÍN COOH COOH

CH3
H2N HC H2N HC
CH2OH H NH CO
O
H CH2 CH2
H
H O H
OH
O CH2 CH2
O H H H
H
O
CH2 CH2
H NHCO CH2OH
CH2 H2N CH
O
CH3 Ácido D-láctico COOH
CO H3C
OH NH2
(un) (B)
PEQUEÑA
CH3 CH L–alanina Figura 3.19 Diaminoácidos presentes en el peptidoglicano. (a) L-
QUÉ
lisina. (b) ácido meso-diaminopimélico.
PEQUEÑA
jefe Ácido D-glutámico NAM NAG

HC CH2 CH2
L -Ala
COOH
D -Glu D -Ala
PEQUEÑA
SALTO SALTO
CH COOH meso– D -Ala D -Glu

HC (CH2)3
Ácido diaminopimélico
QUÉ NH2 L -Ala
NAM NAG
PEQUEÑA
(a)
HC CH3 D-alanina
NAM NAG
QUÉ
L -Ala
Puede estar conectado al puente peptídico
D -GluNH2 D -Ala
o al ácido diaminopimélico en otra cadena
tetrapeptídica L -Lys L -Lys
Gly Gly Gly Gly Gly
D -Ala D -GluNH2
interpuente peptídico
Figura 3.18 Composición de la subunidad de peptidoglicano. La L -Ala
subunidad de peptidoglicano de E. coli, la mayoría de las otras bacterias
NAM NAG
gramnegativas y muchas bacterias grampositivas. NAG es N- (B)
acetilglucosamina. NAM es ácido N-acetilmurámico (NAG con ácido
láctico unido por un enlace éter). La cadena lateral del tetrapéptido está Figura 3.20 Enlaces cruzados de peptidoglicano. (a) E. coli
compuesta por aminoácidos D y L alternos, ya que el ácido peptidoglicano con entrecruzamiento directo, típico de muchas bacterias
mesodiaminopimélico está conectado a través de su carbono L. NAM y la gram negativas. (b) peptidoglicano de Staphylococcus aureus. S. aureus
cadena tetrapeptídica unida a ella se muestran en diferentes tonos de color es una bacteria grampositiva. NAM es ácido N-acetilmurámico.
para mayor claridad. NAG es N-acetilglucosamina. Gly es glicina. Aunque las cadenas
de polisacáridos se dibujan una frente a la otra para mayor claridad, dos
cadenas que se encuentran una al lado de la otra pueden estar unidas entre
sí (ver figura 3.21).
El polímero está compuesto por residuos alternantes de N-
acetilglucosamina y ácido N - acetilmurámico. Una cadena peptídica de
cuatro aminoácidos D y L alternos está conectada al grupo carboxilo del
ácido N acetilmurámico. Muchas bacterias reemplazan el ácido meso- pero en su lugar se puede utilizar un puente peptídico (figura 3.20).
diaminopimélico con otro diaminoácido, generalmente L-lisina (figura 3.19). La mayoría de los peptidoglicanos de la pared celular de los gramnegativos
Carbohidratos (apéndice I); Estructura de peptidoglucanos y endosporas (sección 23.3); carecen del péptido en terbridge. Este entrecruzamiento da como
Proteínas (anexo I) resultado un enorme saco de peptidoglicolato que en realidad es una red
Para hacer un polímero fuerte similar a una malla, las cadenas de densa e interconectada (figura 3.21). Estos sacos se han aislado de
subunidades de peptidoglicano unidas deben unirse mediante enlaces bacterias grampositivas y son lo suficientemente fuertes como para
cruzados entre los péptidos. A menudo, el grupo carboxilo de la D-alanina conservar su forma e integridad (figura 3.22), pero son relativamente
terminal está conectado directamente al grupo amino del ácido diaminopimélico, porosos, elásticos y algo estirables.
Paredes celulares Gram-positivas unidos por grupos fosfato (figura 3.23 y figura 3.24). Los aminoácidos como
Las bacterias grampositivas normalmente tienen paredes celulares gruesas la D-alanina o los azúcares como la glucosa se unen a los grupos glicerol y
y compuestas principalmente de peptidoglicano. El peptidoglicano en ribitol. Los ácidos teicoicos están conectados covalentemente al propio
bacterias grampositivas a menudo contiene un puente peptídico (figura 3.21 peptidoglicano oa los lípidos de la membrana plasmática; en este último
y figura 3.23). Además, las paredes celulares de los grampositivos suelen caso se denominan ácidos lipoteicoicos. Los ácidos teicoicos parecen
contener grandes cantidades de ácidos teicoicos, polímeros de glicerol o ribitol . extenderse a la superficie del peptidoglucano y, debido a que tienen carga
negativa, ayudan a que la célula grampositiva
Ácido N-acetilmurámico
N-acetilglucosamina
cadena
peptídica
Interpuente de
pentaglicina
Figura 3.21 Estructura del peptidoglicano. Un diagrama esquemático Figura 3.22 Pared celular Gram-positiva aislada. La pared de péptido
de un modelo de peptidoglicano. Se muestran las cadenas de polisacáridos, glucano de Bacillus megaterium, una bacteria grampositiva.
las cadenas laterales de tetrapéptidos y los puentes peptídicos. Las esferas de látex tienen un diámetro de 0,25 m.
ácido lipoteicoico Acido teicoico
Espacio
periplásmico
Figura 3.23 La envoltura Gram-positiva.

Una enzima llamada sortasa cataliza la unión de estas proteínas de superficie al

O peptidoglucano grampositivo. Las sortasas se adhieren a la membrana plasmática
de la célula bacteriana.
EN O
O
CH2 Paredes celulares Gram-negativas
HCOR Incluso una breve inspección de la figura 3.17 muestra que los gramnegativos
Las paredes celulares son mucho más complejas que las paredes grampositivas. los
CH2
delgada capa de peptidoglicano junto a la membrana plasmática y
O
delimitado a ambos lados por el espacio periplásmico puede constituir
EN O no más del 5 al 10% del peso de la pared. En E. coli es alrededor de 2
O nm de espesor y contiene sólo una o dos láminas de peptidoglicano.
El espacio periplásmico de las bacterias gramnegativas también es
CH2
sorprendentemente diferente al de las bacterias grampositivas. Se extiende en
O RCH
tamaño desde 1 nm hasta 71 nm. Algunos estudios recientes indican
CH2 que puede constituir alrededor del 20 al 40% del volumen celular total,
O y por lo general es de 30 a 70 nm de ancho. Cuando las paredes celulares se rompen

con cuidado o eliminado sin perturbar el plasma subyacente
O PAGS O-
membrana, se liberan enzimas periplásmicas y otras proteínas
O
y puede ser fácilmente estudiado. Algunas proteínas periplásmicas participan
en la adquisición de nutrientes, por ejemplo, enzimas hidrolíticas y
proteínas de transporte. Algunas proteínas periplásmicas están involucradas en la
Figura 3.24 Estructura del ácido teicoico. El segmento de un ácido teicoico conservación de la energía. Por ejemplo, las bacterias desnitrificantes, que
hecho de fosfato, glicerol y una cadena lateral, R. R puede convertir el nitrato en gas nitrógeno, y las bacterias que utilizan inorgánicos
representan D-alanina, glucosa u otras moléculas. moléculas como fuentes de energía (quimiolitotrofos) tienen electrones
Transportan proteínas en su periplasma. Otras proteínas periplasmáticas
participan en la síntesis de peptidoglicanos y en la modificación de
pared su carga negativa. Las funciones de estas moléculas siguen siendo compuestos tóxicos que podrían dañar la célula. quimiolitotrofia (sección 9.10); Ciclo
claro, pero pueden ser importantes para mantener la estructura de biogeoquímico: El ciclo del nitrógeno (sección 27.2)
la pared. Los ácidos teicoicos no están presentes en las bacterias gramnegativas. La membrana externa se encuentra fuera de la fina capa de peptidoglicano.
El espacio periplásmico de las bacterias grampositivas, cuando se observa, se (figuras 3.25 y 3.26) y está vinculado a la celda de dos formas. los
encuentra entre la membrana plasmática y la pared celular y es primero es por la lipoproteína de Braun, la proteína más abundante en el
más pequeño que el de las bacterias gramnegativas. Incluso si es grampositivo membrana externa. Esta pequeña lipoproteína se une covalentemente a
las bacterias carecen de un espacio periplásmico obvio y discreto, pueden tener el peptidoglicano subyacente, y está incrustado en la membrana externa por su
periplasma. El periplasma tiene relativamente pocas proteínas; esto probablemente extremo hidrofóbico. La membrana externa y el péptido glicano están tan firmemente
se deba a que el saco de peptidoglicano es poroso y cualquier proteína secretada unidos por esta lipoproteína que pueden ser
por la célula suele pasar a través de él. Las enzimas secretadas por bacterias aislado como una unidad. El segundo mecanismo de vinculación implica la
grampositivas se denominan exoenzimas. Suelen servir para degradar muchos sitios de adhesión que unen la membrana externa y el plasma
nutrientes poliméricos que de otro modo serían demasiado grandes para el transporte membrana. Las dos membranas parecen estar en contacto directo en
a través de la membrana plasmática. Aquellas proteínas que quedan en el estos sitios. En E. coli, áreas de contacto de 20 a 100 nm entre el
El espacio periplásmico suele estar unido a la membrana plasmática. se pueden ver dos membranas. Los sitios de adhesión pueden ser regiones de
Los estafilococos y la mayoría de las otras bacterias grampositivas tienen un contacto directo o posiblemente verdaderas fusiones de membrana. Se ha propuesto
capa de proteínas en la superficie de su pared celular peptidoglicano. que las sustancias pueden pasar directamente al interior de la célula a través de
Estas proteínas están involucradas en las interacciones de la célula con su estos sitios de adhesión, en lugar de viajar a través del periplasma.
ambiente. Algunos se unen de forma no covalente al unirse al Posiblemente los constituyentes más inusuales de la membrana externa.
peptidoglicano, ácidos teicoicos u otros receptores. por ejemplo, el son sus lipopolisacáridos (LPSs). Estas moléculas grandes y complejas contienen
Las proteínas de la capa S (v. pág. 66) se unen de forma no covalente a los lípidos y carbohidratos y constan de tres
polímeros dispersos por toda la pared. Enzimas implicadas en el peptidoglucano partes: (1) lípido A, (2) el polisacárido central y (3) el lado O
La síntesis y el recambio también parecen interactuar de forma no covalente con cadena. El LPS de Salmonella ha sido el más estudiado, y su
la pared celular Otras proteínas de superficie están unidas covalentemente a la aquí se describe la estructura general (figura 3.27). La región del lípido A contiene
peptidoglicano. Muchas proteínas unidas covalentemente, como la M dos derivados del azúcar glucosamina, cada uno con tres
proteína de estreptococos patógenos, tienen un papel en la virulencia, como ácidos grasos y fosfato o pirofosfato unidos. el graso
como ayuda en la adhesión a los tejidos del huésped e interfiere con las defensas Los ácidos adhieren el lípido A a la membrana externa, mientras que el resto de la
del huésped. En los estafilococos, estas proteínas de superficie están covalentemente molécula de LPS se proyecta desde la superficie. El polisacárido central se une al
unido al puente de pentaglicina del peptidoglicano de la pared celular. lípido A. En Salmonella se construye de
Cadenas laterales
específicas de O
de
Porín
Lipopolisacárido (LPS)
lipoproteína de Braun
Membrana externa
Espacio
periplasmático
y peptidoglicano
Membrana de plasma
fosfolípido peptidoglicano
Proteína integral
Figura 3.25 La envoltura Gram-negativa.
lipopolisacárido
Porín
fosfolípido
lipoproteína de Braun peptidoglicano
Figura 3.26 Modelo químico de la membrana externa de E. coli y estructuras asociadas. Esta sección transversal está a escala. La porina OmpF tiene dos canales en el frente
(flechas continuas) y un canal en la parte posterior (flecha abierta) del complejo de proteína trimérica. Las moléculas de LPS pueden ser más largas que las que se muestran aquí.
hombre abe
Rha
Galón norte
O cadena lateral
hombre abe
Rha
Galón
Glc NAG
Galón
glc Galón
Siempre Polisacárido central
Hep PP etanolamina
QUIÉN
OMS OMS P etanolamina
PAGS GlcN GlcN PAGS
Ácido graso Lípido A
(a) (B)
Figura 3.27 Estructura del lipopolisacárido. (a) El lipopolisacárido de Salmonella. Este diagrama ligeramente simplificado ilustra una forma del LPS.
Abreviaturas: Abe, abequose; Gal, galactosa; Glc, glucosa; GlcN, glucosamina; hep, heptulosa; KDO, 2-ceto-3-desoxioctonato; Hombre, manosa; NAG, N-
acetilglucosamina; P, fosfato; Rha, L-ramnosa. El lípido A está enterrado en la membrana externa. (b) Modelo molecular de un lipopolisacárido de Escherichia
coli. El lípido A y el polisacárido central son rectos; la cadena lateral O está doblada en ángulo en este modelo.
10 azúcares, muchos de ellos de estructura inusual. La cadena lateral O o las bacterias negativas pueden cambiar rápidamente la naturaleza antigénica de
antígeno O es una cadena de polisacárido que se extiende hacia afuera desde sus cadenas laterales O, frustrando así las defensas del huésped. Es importante
el núcleo. Tiene varios azúcares peculiares y varía en composición entre cepas destacar que la porción de lípido A de LPS a menudo es tóxica; como resultado,
bacterianas. el LPS puede actuar como una endotoxina y causar algunos de los síntomas
LPS tiene muchas funciones importantes. Dado que el polisacárido central que surgen en las infecciones por bacterias gramnegativas. Si la bacteria ingresa
suele contener azúcares cargados y fosfato (figura 3.27), el LPS contribuye a al torrente sanguíneo, la endotoxina LPS puede causar una forma de shock
la carga negativa de la superficie bacteriana. Como componente principal de la séptico para el cual no existe un tratamiento directo. Resumen de la patogénesis
hoja exterior de la membrana externa, el lípido A también ayuda a estabilizar la bacteriana (sección 33.3)
estructura de la membrana externa. A pesar del papel del LPS en la creación de una barrera de permeabilidad,
LPS puede contribuir a la adhesión bacteriana a las superficies y la formación la membrana externa es más permeable que la membrana plasmática y permite
de biopelículas. Una función importante del LPS es que ayuda a crear una el paso de moléculas pequeñas como la glucosa y otros monosacáridos. Esto
barrera de permeabilidad. Se cree que la geometría del LPS (figura 3.27b) y las se debe a la presencia de proteínas de porina (figuras 3.25 y 3.26). La mayoría
interacciones entre las moléculas de LPS vecinas restringen la entrada de sales de las proteínas de porina se agrupan para formar un trímero en la membrana
biliares, antibióticos y otras sustancias tóxicas que podrían matar o dañar a la externa (figura 3.25 y figura 3.28).
bacteria. El LPS también desempeña un papel en la protección de las bacterias Cada proteína porina atraviesa la membrana externa y tiene más o menos forma
gramnegativas patógenas de las defensas del huésped. La cadena lateral O de de tubo; su canal angosto permite el paso de moléculas más pequeñas que
LPS también se denomina antígeno O porque provoca una respuesta inmunitaria. alrededor de 600 a 700 daltons. Sin embargo, moléculas más grandes como la
Esta respuesta implica la producción de anticuerpos que se unen a la forma de vitamina B12 también atraviesan la membrana externa. Moléculas tan grandes
LPS específica de la cepa que provocó la respuesta. Sin embargo, muchos no pasan a través de las porinas; en cambio, los transportistas específicos los
gramos transportan a través de la membrana externa.
(a) trímero de porina (b) Vista lateral de OmpF
Figura 3.28 Proteínas de porina. Dos vistas de la porina OmpF de E. coli. (a) Estructura de porina observada al mirar hacia abajo en el exterior
superficie de la membrana externa (es decir, vista superior). Las tres proteínas de porina que forman la proteína forman cada una un canal. Cada porina se puede dividir
en tres bucles: el bucle verde forma el canal, el bucle azul interactúa con otras proteínas de porina para ayudar a formar el trímero y el bucle naranja
bucle estrecha el canal. La flecha indica el área de una molécula de porina vista desde un lado en el panel (b). Vista lateral de un monómero de porina
mostrando la estructura de barril característica de las proteínas de porina.
El mecanismo de la tinción de Gram En ciertas situaciones, la presión osmótica puede exceder la capacidad de adaptación
de la célula. En estos casos, la protección adicional es proporcionada por el
Aunque se han dado varias explicaciones para los resultados de la reacción de tinción
pared celular. Cuando las células están en soluciones hipotónicas, aquellas en las que
de Gram, parece probable que la diferencia entre
la concentración de soluto es menor que la del citoplasma: agua
bacterias grampositivas y gramnegativas se debe a la
se mueve dentro de la célula, causando que se hinche. Sin la pared celular, el
naturaleza de sus paredes celulares. Si se elimina la pared celular de las bacterias
La presión sobre la membrana plasmática llegaría a ser tan grande que
grampositivas, se tiñen de gramnegativas. Además, las bacterias genéticamente sin
se rompería y la célula estallaría, un proceso llamado ly sis. Por el contrario, en
pared, como los micoplasmas, también tiñen Gram
soluciones hipertónicas, el agua sale y el
negativo. El peptidoglucano en sí no se tiñe; en cambio parece
el citoplasma se arruga, un proceso llamado plasmólisis.
para actuar como una barrera de permeabilidad evitando la pérdida de cristal violeta.
La naturaleza protectora de la pared celular se demuestra más claramente cuando
Durante el procedimiento, las bacterias primero se tiñen con cristal violeta y luego se
las células bacterianas se tratan con lisozima o penicilina.
tratan con yodo para promover la retención del tinte. Cuándo
La enzima lisozima ataca al peptidoglucano hidrolizando el
Luego, las bacterias grampositivas se tratan con etanol, el alcohol
enlace que conecta el ácido N-acetilmurámico con la N-acetilglucosamina (figura 3.18).
se cree que reduce los poros del peptidoglicano espeso. Por lo tanto, la
La penicilina funciona mediante un mecanismo diferente. Inhibe la síntesis de
el complejo colorante-yodo se retiene durante esta corta decoloración
peptidoglicanos. Si las bacterias son tratadas
paso y las bacterias permanecen de color púrpura. Por el contrario, recuerde que el
con cualquiera de estas sustancias mientras están en una solución hipotónica,
peptidoglicano gram negativo es muy delgado, no tan altamente entrecruzado,
se lisará. Sin embargo, si están en una solución isotónica, pueden sobrevivir y crecer
y tiene poros más grandes. El tratamiento con alcohol también puede extraer suficiente
normalmente. Si son grampositivos, tratamiento con
lípido de la membrana externa gramnegativa para aumentar su
lisozima o penicilina da como resultado la pérdida completa de la pared celular,
la porosidad aún más. Por estas razones, el alcohol elimina más fácilmente
y la célula se convierte en un protoplasto. Cuando las bacterias gramnegativas
el complejo púrpura cristal violeta-yodo de bacterias gram-negativas. Por lo tanto, las
se exponen a lisozima o penicilina, la capa de peptidoglicano se
bacterias gramnegativas se tiñen fácilmente de rojo o
perdido, pero la membrana externa permanece. Estas células se denominan
rosa por la contratinción de safranina.
esferoplastos. Debido a que carecen de una pared celular completa, ambos protoplastos
y los esferoplastos son osmóticamente sensibles. Si son transferidos
La pared celular y la protección osmótica
a una solución diluida, se lisarán debido a la entrada descontrolada de agua
Los microbios tienen varios mecanismos para responder a los cambios en (figura 3.29). Medicamentos antibacterianos (sección 34.4)
presión osmótica. Esta presión surge cuando la concentración de Aunque la mayoría de las bacterias requieren una pared celular intacta para sobrevivir,
los solutos dentro de la célula difieren de los del exterior, y las respuestas adaptativas algunos no tienen ninguno. Por ejemplo, los micoplasmas carecen de una célula
trabajan para igualar las concentraciones de soluto. Sin embargo, en pared y son osmóticamente sensibles, pero a menudo pueden crecer en diluciones
inhibición de la penicilina
de síntesis de pared.
Incubación en isotónica Transferir a Hinchazón debido
medio medio diluido a la entrada de H2O lisis
Protoplasto
H2O
Figura 3.29 Formación y lisis de protoplastos. Formación de protoplastos inducida por incubación con penicilina en medio isotónico.
La transferencia a un medio diluido dará como resultado la lisis.
medios o ambientes terrestres porque sus membranas plasmáticas son más resistentes a la
0,1 micras
CW
presión osmótica que las de las bacterias que tienen paredes. La razón precisa de esto no
está clara, aunque CM
la presencia de esteroles en las membranas de muchas especies puede CPL

proporcionar mayor fuerza. Sin una pared celular rígida, los micoplasmas
tienden a ser pleomórficos o de forma variable. (a)
1. Haz una lista de las funciones de la pared celular.
2. Describe en detalle la composición y estructura del peptidoglicano. ¿Por qué 0,1 micras
SL
El peptidoglicano contiene los isómeros D inusuales de alanina y ácido glutámico. CM
en lugar de los isómeros L observados en las proteínas?
CPL
3. Compara y contrasta las paredes celulares de las bacterias grampositivas y las
bacterias gramnegativas. Incluya dibujos etiquetados en su discusión.
(B)
4. Defina o describa lo siguiente: membrana externa, espacio periplásmico,
periplasma, envoltura, ácido teicoico, sitio de adhesión, lipopolisacárido, porina
Figura 3.30 Envolturas celulares de Archaea. Representaciones
proteínas, protoplastos y esferoplastos.
esquemáticas y micrografías electrónicas de (a) Methanobacterium
5. Diseñe un experimento que ilustre el papel de la pared celular en la protección
formicicum, y (b) Thermoproteus tenax. CW, pared celular; SL, superficie
contra la lisis.
capa; CM, membrana celular o membrana plasmática; CPL, citoplasma.
6. Con algunas excepciones, las paredes celulares de las bacterias grampositivas carecen
porins.¿Por qué es este el caso?
cautiverio. Otras arqueas, como Methanosarcina y los amantes de la sal

3.7 PAREDES CELULARES ARQUEALES Halococcus, contienen polisacáridos complejos similares al sulfato de condroitina del tejido
conectivo animal. Filo Euryarchaeota:
Antes de que fueran distinguidos como un dominio único de la vida, el
Los metanógenos; Las halobacterias (sección 20.3)
Las arqueas se caracterizaron por ser grampositivas o gram
Muchas arqueas que se tiñen de gram negativas tienen una capa de glicoproteína o
negativo. Sin embargo, su reacción de tinción no se correlaciona como
proteína fuera de su membrana plasmática (figura 3.30b).
confiablemente con una estructura particular de la pared celular como lo hace la reacción de
La capa puede tener un espesor de 20 a 40 nm. A veces hay dos
Gram de las bacterias. La estructura y la química de las paredes de las arqueas difieren
capas: una capa densa en electrones y una vaina que la rodea. Algunos
de las de las bacterias. Las paredes celulares de las arqueas carecen de peptidoglicato y
metanógenos (Methanolobus), arqueas amantes de la sal (Halobac terium) y termófilos
también exhiben una variedad considerable en términos de su composición química. Algunas
extremos (Sulfolobus, Thermoproteus,
de las principales características de las paredes celulares de las arqueas
se describen en esta sección. y Pyrodictium) tienen glicoproteínas en sus paredes. A diferencia de,
otros metanógenos (Methanococcus, Methanomicrobium y
Muchas arqueas tienen una pared con una sola capa gruesa y homogénea.
Methanogenium) y el termófilo extremo Desulfurococcus
capa similar a la de las bacterias grampositivas (figura 3.30a).
tienen paredes proteicas. Phylum Crenarchaeota (sección 20.2); Filo Eur yarchaeota:
Estas arqueas a menudo se tiñen de gram positivas. Su química de pared
metabolizadores de S0 extremadamente termofílicos (sección 20.3)
varía de una especie a otra, pero por lo general consiste en heteropolisacáridos complejos.
Por ejemplo, Methanobacterium y algunos
1. ¿En qué se diferencian las paredes celulares de Archae de las de Bacteria?
otras arqueas generadoras de metano (metanógenos) tienen paredes que contienen
2. ¿Qué es la pseudomureína? ¿En qué se parece al peptidoglicano? ¿Cómo es diferente?
pseudomureína (figura 3.31), un polímero similar al peptidoglicano
3. Las arqueas con paredes celulares que consisten en una capa gruesa y homogénea
que tiene L-aminoácidos en lugar de D-aminoácidos en sus enlaces cruzados,
de polisacáridos complejos a menudo retienen el tinte cristal violeta cuando se tiñen
Ácido N-acetiltalosaminurónico en lugar de ácido N-acetilmurámico,
con el procedimiento de tinción de Gram. ¿Por qué crees que esto es así?
y (1ÿ3) enlaces glucosídicos en lugar de (1ÿ4) enlaces glucosídicos
Secreción de Protien en Procariotas 63
CH2OH NHAc
O NH4
H O SecYEG
OH O
H H H
O H ÿ (1 ÿ 3) QUÉ ÿ (1 ÿ 3)
OH H H OH
ÿ (1 ÿ 3) H NHAc H
Membrana
de plasma
Glú (NH2)
Alabama
Citoplasma
Lys-Glu atp
(Glú) Seco
Lista
Favorito Alabama ADP+ Pi

Glú (NH2) SecB
H H NHAc COOH
H O H ÿ (1 ÿ 3) OH H
QUÉ H ÿ (1 ÿ 3) preproteína
H H
O
H
ÿ (1 ÿ 3) H O
OH O
O NHAc CH2OH Figura 3.32 La ruta dependiente de Sec. La ruta dependiente de
Ácido N-acetiltalosaminurónico N-acetilglucosamina

Sec de E. coli.
Figura 3.31 La estructura de la pseudoureína. Los aminoácidos y los

transportado a través de la membrana plasmática. Una vez que atraviesa la
grupos amino entre paréntesis no siempre están presentes.
membrana plasmática, la proteína pasa a través del peptidoglucano
Ac representa el grupo acetilo. relativamente poroso hacia el entorno externo o se incrusta o se une al
peptidoglucano. Las bacterias gramnegativas tienen más obstáculos que
sortear cuando secretan proteínas. Ellos también deben transportar las
proteínas a través de la membrana plasmática, pero para completar el proceso
3.8 SECRECIÓN DE PROTEÍNAS EN PROCARIOTAS de secreción, las proteínas deben poder escapar del ataque de las enzimas
Las membranas de la envoltura de las células procarióticas (es decir, la degradadoras de proteínas en el espacio periplásmico y deben transportarse
membrana plasmática de Archaea y bacterias grampositivas y el plasma y las a través de la membrana externa. Tanto en las bacterias grampositivas como
membranas externas de bacterias gramnegativas) presentan una barrera en las gramnegativas, la vía principal para el transporte de proteínas a través
considerable para el movimiento de moléculas grandes dentro o fuera de la de la membrana plasmática es la vía dependiente de Sec (dependiente de la
célula. Sin embargo, como se discutirá en la sección 3.9, muchas estructuras secreción) (figura 3.32). En las bacterias gramnegativas, las proteínas pueden
importantes están ubicadas fuera del muro. ¿Cómo se transportan fuera de la transportarse a través de la membrana externa mediante varios mecanismos
célula las moléculas grandes a partir de las cuales se fabrican algunas de diferentes, algunos de los cuales evitan por completo la vía dependiente de
estas estructuras para ensamblarlas? Además, los procariotas liberan Sec, moviendo las proteínas directamente desde el citoplasma hacia el exterior
exoenzimas y otras proteínas a su entorno. ¿Cómo atraviesan estas proteínas de la célula (figura 3.33). Todas las vías de secreción de proteínas descritas
la(s) membrana(s) de la envoltura celular? aquí requieren el gasto de energía en algún paso del proceso. La energía
Claramente, los procariotas deben poder secretar proteínas. La investigación generalmente proviene de la hidrólisis de moléculas de alta energía como ATP
sobre las vías de secreción de proteínas se ha disparado en las últimas y GTP, pero otra forma de energía, la fuerza motriz del protón, a veces también
décadas en parte debido a la importancia fundamental de la secreción de juega un papel. El papel del ATP en el metabolismo (sección 8.5); Transporte
proteínas, pero también porque ciertos mecanismos de secreción de proteínas de electrones y fosforilación oxidativa (sección 9.5)
son comunes a las bacterias patógenas. Además, la comprensión de la
secreción de proteínas puede aprovecharse para el desarrollo de vacunas y
una variedad de procesos industriales. Debido a que se sabe relativamente La vía dependiente de Sec La vía
poco sobre los sistemas de secreción de proteínas de las arqueas, esta
dependiente de Sec, a veces llamada vía de secreción general, está muy
sección proporciona una descripción general de las vías de secreción de proteínas bacterianas.
conservada y se ha identificado en los tres dominios de la vida (figura 3.32).
Transloca proteínas a través de la membrana plasmática o las integra en la
Descripción general de la secreción de proteínas bacterianas
propia membrana. Las proteínas que se transportarán a través de la membrana
La secreción de proteínas presenta diferentes dificultades dependiendo de si plasmática por esta vía se sintetizan como proteínas presecretoras
la bacteria es grampositiva o gramnegativa. Para que las bacterias denominadas preproteínas. La preproteína tiene un péptido señal en su
grampositivas secreten proteínas, las proteínas deben ser
Tipo i Tipo III Tipo II Tipo V Tipo IV
exterior de la celda
TolC
Exterior
yop membrana
Legumbres
periplásmico
YscJ
espacio
SecD
Hacer encaje
EFGY
Plasma
Segundo
ADP membrana
+ Pi
ADP
atp ADP ADP ADP
atp
+ Pi + Pi
atp
+ Pi atp
+ Pi atp
atp
Citoplasma
acompañante acompañante
Proteína
Figura 3.33 Los sistemas de secreción de proteínas de las bacterias gramnegativas. Los cinco sistemas de secreción de las bacterias gramnegativas son
mostrado. Las vías dependiente de Sec y Tat transportan proteínas desde el citoplasma al espacio periplásmico. Los sistemas tipo II, tipo V y algunas veces
tipo IV completan el proceso de secreción iniciado por la vía dependiente de Sec. El sistema Tat parece entregar proteínas
sólo a la vía de tipo II. Los sistemas tipo I y tipo III evitan las vías dependientes de Sec y Tat, moviendo las proteínas directamente desde el
citoplasma, a través de la membrana externa, al espacio extracelular. El sistema de tipo IV puede funcionar con la vía dependiente de Sec o
puede trabajar solo para transportar proteínas al espacio extracelular. Las proteínas translocadas por la ruta dependiente de Sec y la ruta de tipo III son
entregadas a esos sistemas por proteínas chaperonas.
amino-terminal, que es reconocido por la maquinaria Sec. no la proteína chaperona) a través de la membrana plasmática utilizando
Poco después de sintetizar el péptido señal, proteínas especiales hidrólisis de ATP. Cuando la preproteína emerge del plasma
llamadas proteínas chaperonas (p. ej., SecB) lo unen. Esto ayuda a retrasar membrana, libre de chaperonas, una enzima llamada peptidasa señal elimina el
plegamiento de proteínas, ayudando así a la preproteína a alcanzar la Sec péptido señal. Luego, la proteína se pliega en el
maquinaria de transporte en la conformación necesaria para el transporte. forma adecuada y se forman enlaces disulfuro cuando es necesario.
Existe evidencia de que la translocación de proteínas puede comenzar antes
la finalización de su síntesis por los ribosomas. Se cree que ciertas proteínas Sec
(SecY, SecE y SecG) forman un canal en el Secreción de proteínas en bacterias Gram-negativas
membrana a través de la cual pasa la preproteína. otra proteina Actualmente se han identificado cinco vías de secreción de proteínas en
(SecA) se une a las proteínas SecYEG y la preproteína SecB bacterias gramnegativas (figura 3.33). Recuerda que los gramnegativos
complejo. SecA actúa como un motor para translocar la preproteína (pero las bacterias tienen una segunda membrana externa que las proteínas deben cruzar.
Componentes externos a la pared celular sesenta y cinco
Las bacterias gramnegativas utilizan las vías tipo II y tipo V para transportar proteínas a factores directamente en las células huésped de plantas y animales que estos patógenos
través de la membrana externa después de que la proteína haya sido translocada atacan. Estos factores de virulencia incluyen toxinas, inhibidores de la fagocitosis,
primero a través de la membrana plasmática por la vía dependiente de Sec. Las vías de estimuladores de la reorganización del citoesqueleto en la célula huésped y promotores
tipo I y tipo III no interactúan con las proteínas que primero son translocadas por el del suicidio de la célula huésped (apoptosis).
sistema Sec, por lo que se dice que son independientes de Sec. La vía de tipo IV a veces Sin embargo, en algunos casos, el factor de virulencia simplemente se secreta al medio
está vinculada a la vía dependiente de Sec, pero normalmente funciona por sí sola. extracelular. Los sistemas de tipo III también transportan otras proteínas, incluidas (1)
algunas de las proteínas a partir de las cuales se construye el sistema, (2) proteínas que
La vía de secreción de proteínas de tipo II está presente en varios patógenos regulan el proceso de secreción y (3) proteínas que ayudan en la inserción de proteínas
de plantas y animales, incluidos Erwinia carotovora, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas secretadas en el objetivo. células. Los sistemas de tipo III son estructuralmente complejos
aeruginosa y Vibrio cholerae. Es responsable de la secreción de proteínas como las y, a menudo, tienen forma de jeringa (figura 3.33). La porción delgada en forma de aguja
enzimas degradantes pululanasas, celulasas, pectinasas, proteasas y lipasas, así como se extiende desde la superficie celular; una base cilíndrica está conectada tanto a la
otras proteínas como la toxina del cólera y las proteínas pili. Los sistemas de tipo II son membrana externa como a la membrana plasmática y se parece un poco al cuerpo basal
bastante complejos y pueden contener de 12 a 14 proteínas, la mayoría de las cuales flagelar (v. pág. 67). Se cree que las proteínas pueden moverse a través de un canal de
parecen ser proteínas integrales de membrana (figura 3.33). Aunque algunos translocación.
componentes de los sistemas de tipo II atraviesan la membrana plasmática,
aparentemente translocan proteínas solo a través de la membrana externa. En la mayoría Ejemplos importantes de bacterias con sistemas de tipo III son Salmonella, Yersinia,
de los casos, la vía dependiente de Sec primero transloca la proteína a través de la Shigella, E. coli, Bordetella, Pseudomonas aeruginosa y Erwinia. La participación de los
membrana plasmática y luego el sistema de tipo II completa el proceso de secreción. En sistemas de tipo III en la virulencia bacteriana se analiza con más detalle en el capítulo
bacterias gramnegativas y grampositivas, otro sistema de translocación de la membrana 33.
plasmática llamado vía Tat puede mover proteínas a través de la membrana plasmática. Las vías de secreción de proteínas de tipo IV son únicas porque se utilizan para
secretar proteínas y también para transferir ADN de una bacteria donante a un receptor
durante la conjugación bacteriana. Los sistemas de tipo IV están compuestos por muchas
proteínas diferentes y, al igual que los sistemas de tipo III, estas proteínas forman una
En los gramnegativos, estas proteínas luego se entregan al sistema de tipo II. La vía Tat estructura similar a una jeringa.
es distinta del sistema Sec en que transloca proteínas ya plegadas. Los sistemas de tipo IV y la conjugación se describen con más detalle en el capítulo 13.
Las vías de secreción de proteínas de tipo V son los sistemas de secreción de

proteínas descubiertos más recientemente. Ellos también dependen de la vía dependiente
1. Dar las principales características y funciones de la secreción de proteínas.
de Sec para mover las proteínas a través de la membrana plasmática. Sin embargo, una
vías descritas en esta sección.
vez en el espacio periplásmico, muchas de estas proteínas pueden formar un canal en
2. ¿Qué vía de secreción está más extendida?
la membrana externa a través del cual se transportan; estas proteínas se denominan
3. ¿Qué es un péptido señal? ¿Por qué crees que el péptido señal de una proteína
autotransportadores. Otras proteínas son secretadas por la vía de tipo V con la ayuda de
no se elimina hasta que la proteína se transloca a través de la membrana
una proteína auxiliar separada.
plasmática?
La vía de secreción de la proteína ABC, que deriva su nombre del casete de

unión de ATP , es omnipresente en los procariotas, es decir, está presente en bacterias
grampositivas y gramnegativas, así como en Archaea. A veces se le llama vía de
3.9 COMPONENTES EXTERNOS A LA PARED CELULAR
secreción de proteína tipo I (figura 3.33). En bacterias gramnegativas patógenas,
participa en la secreción de toxinas (-hemolisina), así como proteasas, lipasas y péptidos Los procariotas tienen una variedad de estructuras fuera de la pared celular que pueden
específicos. Las proteínas secretadas suelen contener señales de secreción C-terminal funcionar como protección, fijación a objetos y movimiento celular. Se discuten varios de
que ayudan a dirigir la proteína recién sintetizada a la maquinaria de tipo I, que se estos.
extiende por la membrana plasmática, el espacio periplásmico y la membrana externa.
Estos sistemas translocan proteínas en un solo paso a través de ambas membranas, sin
pasar por la vía dependiente de Sec. Las bacterias grampositivas utilizan una versión Cápsulas, capas de limo y capas S Algunos procariotas
modificada del sistema tipo I para trasladar proteínas a través de la membrana plasmática. tienen una capa de material fuera de la pared celular. Esta capa tiene diferentes nombres
El análisis del genoma de Bacillus subtilis ha identificado 77 transportadores ABC. Esto dependiendo de sus características. Cuando la capa está bien organizada y no se lava
puede reflejar el hecho de que los transportadores ABC transportan una amplia variedad fácilmente, se llama cápsula (figura 3.34a). Se denomina capa de limo cuando se trata
de solutos además de proteínas, incluidos azúcares y aminoácidos, así como también de una zona de material difuso, desorganizado, que se elimina con facilidad. Cuando la
exportan fármacos desde el interior de la célula. capa consta de una red de polisacáridos que se extiende desde la superficie de la célula,
se denomina gly cocalyx (figura 3.34b), un término que puede abarcar tanto las cápsulas
como las capas de limo porque generalmente están compuestas de polisacáridos. Sin
embargo, algunas capas de baba y cápsulas están construidas con otros materiales. Por
Varios patógenos gramnegativos tienen la vía de secreción de proteína tipo III, ejemplo, Bacillus anthracis tiene una
otro sistema de secreción que pasa por alto la vía dependiente de Sec. La mayoría de
los sistemas de tipo III inyectan virulencia
Intestinal bacterias
tejido
glicocalix
a) K. pneumoniae
Figura 3.35 Glicocálix bacteriano. bacterias conectadas a

entre sí y a la pared intestinal, por sus glucocálices, los
extensas redes de fibras que se extienden desde las células (17,500).
baldosas y está compuesto de proteína o glicoproteína (figura 3.36).

En las bacterias gramnegativas, la capa S se adhiere directamente al exterior.
(b) Bacteroides
membrana; está asociado con la superficie de peptidoglicano en bacterias gram
positivas. Puede proteger a la célula contra las fluctuaciones de iones y pH, el estrés
Figura 3.34 Cápsulas bacterianas. a) Klebsiella pneumoniae
osmótico, las enzimas o la bacteria depredadora.
con su cápsula teñida para su observación en el microscopio óptico
Bdellovibrio. La capa S también ayuda a mantener la forma y la rigidez envolvente
( 1.500). (b) Glicocalix de Bacteroides (gly), TEM (71.250).
de algunas células. Puede promover la adhesión celular a las superficies.
Finalmente, la capa S parece proteger a algunos patógenos bacterianos.
cápsula proteica compuesta de ácido poli-D-glutámico. contra las defensas del huésped, contribuyendo así a su virulencia. Clase
Las cápsulas son claramente visibles en el microscopio óptico cuando son negativas. Deltaproteobacteria: Orden Bdellovibrionales (sección 22.4)
se emplean colorantes o colorantes de cápsula especiales (figura 3.34a); ellos

también se puede estudiar con el microscopio electrónico (figura 3.34b).
Pili y fimbrias
Aunque las cápsulas no son necesarias para el crecimiento y la reproducción Muchos procariotas tienen apéndices cortos, finos y parecidos a pelos que son
en cultivos de laboratorio, confieren varias ventajas cuando más delgado que los flagelos. Estos generalmente se llaman fimbrias (s., fimbria).
los procariotas crecen en sus hábitats normales. Ayudan a patógenos Aunque muchas personas usan los términos fimbriae y pili indistintamente,
Las bacterias resisten la fagocitosis de los fagocitos del huésped. Estreptococo distinguiremos entre fimbriae y sex pili. A
pneumoniae proporciona un ejemplo dramático. Cuando le falta una cápsula, La célula puede estar cubierta con hasta 1000 fimbrias, pero solo son visibles en un
se destruye fácilmente y no causa enfermedad, mientras que la variante capsulada microscopio electrónico debido a su pequeño tamaño (figura 3.37).
mata rápidamente a los ratones. Las cápsulas contienen una gran cantidad de Son tubos delgados compuestos por subunidades de proteínas dispuestas
agua y puede proteger contra la desecación. Excluyen virus y helicoidalmente y tienen un diámetro de aproximadamente 3 a 10 nm y una longitud
la mayoría de los materiales tóxicos hidrofóbicos como los detergentes. El glicocáliz de hasta varios micrómetros. Al menos algunos tipos de fimbrias adhieren bacterias a
también ayuda a adherirse a las superficies sólidas, incluidas las superficies de los superficies sólidas como rocas en arroyos y tejidos huésped.
tejidos en huéspedes vegetales y animales (figura 3.35). Bacterias deslizantes a menudo Las fimbrias son responsables de más que apego. Tipo IV
producir limo, que en algunos casos, se ha demostrado que facilita Las fimbrias están presentes en uno o ambos polos de las células bacterianas. Ellos pueden
motilidad. Diversidad microbiana y ecología 21.1: El mecanismo de motilidad ayuda en el apego a los objetos, y también son necesarios para la contracción
deslizante; fagocitosis (sección 31.3); Resumen de la patogenia bacteriana (sección 33.3) motilidad que ocurre en algunas bacterias como P. aeruginosa,
Muchos procariotas tienen una capa de estructura regular llamada capa S en Neisseria gonorrhoeae y algunas cepas de E. coli. El movimiento es
su superficie. En las bacterias, la capa S es externa a la célula. por movimientos espasmódicos breves e intermitentes de hasta varios micrómetros en
muro. En archaea, la capa S puede ser la única estructura de pared fuera de longitud y normalmente se ve en superficies muy húmedas. Existe evidencia de
la membrana plasmática. La capa S tiene un patrón algo así como que las fimbrias se retraen activamente para mover estas bacterias. Escribe
Componentes externos a la pared celular 67
plásmidos y son necesarios para la conjugación. Algunos virus bacterianos

se unen específicamente a los receptores de los pelos sexuales al comienzo de
su ciclo reproductivo. Conjugación bacteriana (sección 13.7)
Flagelos y motilidad
La mayoría de los procariotas móviles se mueven mediante el uso de flagelos (s., flagellum),
apéndices locomotores filiformes que se extienden hacia afuera desde el
membrana plasmática y pared celular. Los flagelos bacterianos son los mejores.
estudiados y son el centro de esta discusión.
Los flagelos bacterianos son estructuras delgadas y rígidas, de unos 20 nm
de ancho y hasta 15 o 20 m de largo. Los flagelos son tan delgados que no pueden
observarse directamente con un microscopio de campo claro, pero deben
teñirse con técnicas especiales diseñadas para aumentar su
espesor. La estructura detallada de un flagelo solo puede verse
en el microscopio electrónico (figura 3.37).
Las especies bacterianas a menudo difieren distintivamente en sus patrones de
distribución de flagelos y estos patrones son útiles para identificar
bacterias Las bacterias monotrichous (trichous significa cabello) tienen una
flagelo; si se encuentra en un extremo, se dice que es un flagelo polar (figura
3.38a). Bacteria anfítrica (amphi significa en
Figura 3.36 La capa S. Una micrografía electrónica de la capa S de ambos lados) tienen un solo flagelo en cada polo. A diferencia de,
la bacteria Deinococcus radiodurans después del sombreado. Las bacterias lophotrichous (lopho significa penacho) tienen un grupo de flagelos
en uno o ambos extremos (figura 3.38b). Los flagelos se distribuyen bastante
uniformemente sobre toda la superficie de peritrichous (peri significa
Fimbrias
alrededor) bacterias (figura 3.38c).
Ultraestructura flagelar
Los estudios de microscopía electrónica de transmisión han demostrado que la
flagelo bacteriano se compone de tres partes. (1) El más largo
y la porción más obvia es el filamento flagelar, que se extiende desde la superficie
celular hasta la punta. (2) Se incrusta un cuerpo basal en la celda; y (3) un
segmento corto y curvo, el flagelar
gancho, une el filamento a su cuerpo basal y actúa como un flexible
acoplamiento. El filamento es un cilindro hueco y rígido construido de
subunidades de la proteína flagelina, que varía en tamaño molecular
flagelos peso de 30.000 a 60.000 daltons, dependiendo de la especie bacteriana. El
filamento termina con una proteína protectora. Algunas bacterias tienen vainas que
rodean sus flagelos. Por ejemplo,
Bdellovibrio tiene una estructura membranosa que rodea el filamento. Vibrio
cholerae tiene una vaina de lipopolisacárido.
El gancho y el cuerpo basal son bastante diferentes del filamento.
(figura 3.39). Ligeramente más ancho que el filamento, el gancho está hecho de
Figura 3.37 Flagelos y fimbrias. Los flagelos largos y diferentes subunidades proteicas. El cuerpo basal es la parte más compleja.
las numerosas fimbrias más cortas son muy evidentes en esta micrografía de un flagelo. En E. coli y la mayoría de las bacterias gramnegativas, la base
electrónica de la bacteria Proteus vulgaris (39.000). El cuerpo tiene cuatro anillos conectados a una varilla central (figura 3.39a, d). los
Los anillos L y P externos se asocian con las capas de lipopolisacárido y
péptidoglucano, respectivamente. El anillo M interno hace contacto con el
Las fimbrias IV también están involucradas en la motilidad deslizante de las mixobacterias. membrana de plasma. Las bacterias grampositivas tienen sólo dos basales
Estas bacterias también son de interés porque tienen una vida compleja. anillos corporales: un anillo interno conectado a la membrana plasmática y
ciclos que incluyen la formación de un cuerpo fructífero. Clase uno externo probablemente unido al peptidoglicano (figura 3.39b).
Deltaproteobacteria: Orden Myxococcales (sección 22.4).
Muchas bacterias tienen entre 1 y 10 pili sexuales (s., pilus) por célula. Síntesis Flagelar
Estas son estructuras parecidas a cabellos que difieren de las fimbrias de las La síntesis de flagelos bacterianos es un proceso complejo que involucra al menos
siguientes maneras. Pili a menudo son más grandes que las fimbrias (alrededor de 9 a 10 de 20 a 30 genes. Además del gen de la flagelina, 10 o
nm de diámetro). Están determinados genéticamente por conjugación. más genes codifican proteínas de cuerpo de gancho y basales; otros genes
se ocupan del control de la construcción o función flagelar. Cómo la célula regula o

determina la ubicación exacta de
flagelos no se conoce.
Cuando se eliminan los flagelos, la regeneración del flagelo
Luego se puede estudiar el filamento. El transporte de muchos componentes
5mm _ flagelares se lleva a cabo mediante un aparato en el cuerpo basal que es
un sistema especializado de secreción de proteína tipo III. Se piensa que
Las subunidades de flagelina se transportan a través del hueco del filamento.
núcleo interno. Cuando alcanzan la punta, las subunidades se agregan
espontáneamente bajo la dirección de una cubierta de filamento especial.
de modo que el filamento crece en su punta en lugar de en la base (figura 3.40). La
síntesis de filamentos es un excelente ejemplo de autoensamblaje. Muchas
estructuras se forman espontáneamente a través de la asociación de sus partes
componentes sin la ayuda de ningún
enzimas especiales u otros factores. La información requerida para
a) Pseudomonas: flagelación polar monotrica la construcción de filamentos está presente en la estructura de la flagelina
subunidad en sí.
El mecanismo del movimiento flagelar

Los flagelos procarióticos funcionan de manera diferente a los flagelos eucarióticos.
El filamento tiene la forma de una hélice rígida y la célula se mueve
cuando esta hélice gira. Pruebas considerables muestran que las flagelas actúan
como las hélices de un barco. Mutantes bacterianos con

los flagelos rectos o las regiones anzuelos anormalmente largas no pueden nadar.
Cuando las bacterias se atan a un portaobjetos de vidrio utilizando anticuerpos para
filamentos o proteínas de gancho, el cuerpo de la célula gira rápidamente alrededor del
flagelo estacionario. Si se unen perlas de poliestireno-látex a
flagelos, las cuentas giran alrededor del eje flagelar debido a la rotación flagelar. El
motor flagelar puede girar muy rápidamente. El motor de E. coli gira 270 revoluciones
por segundo; Vibrio alginolyticus
5mm _
promedia 1.100 rps. Cilios y flagelos (sección 4.10)
La dirección de rotación flagelar determina la naturaleza del movimiento
(b) Spirillum - flagelación lophotrichous bacteriano. Los flagelos polares, monotricos, giran en sentido contrario a las agujas
del reloj (visto desde fuera de la célula) durante la normalidad.
movimiento hacia adelante, mientras que la propia célula gira lentamente en el sentido de
las agujas del reloj. El filamento flagelar helicoidal giratorio empuja la célula hacia adelante.
en una corrida con el flagelo detrás (figura 3.41). Las bacterias monotricas se
detienen y dan vueltas aleatoriamente invirtiendo la direccin de rotacin flagelar.
Bacterias peritricicamente flageladas
operar de una manera algo similar. Para avanzar, los flagelos
girar en sentido antihorario. Mientras lo hacen, se doblan en sus ganchos para
forman un haz giratorio que impulsa a la célula hacia adelante. La rotación de los
flagelos en el sentido de las agujas del reloj rompe el haz y la célula da vueltas.
Debido a que las bacterias nadan a través de la rotación de sus flagelos rígidos,
debe haber algún tipo de motor en la base. Una varilla se extiende desde el
gancho y termina en el anillo M, que puede girar libremente en el plasma
membrana (figura 3.42). Se cree que el anillo S está unido a
la pared celular en células grampositivas y no rota. La P y la L
anillos de bacterias gramnegativas actuarían como cojinetes para la varilla giratoria.
(c) P. vulgaris - flagelación peritrichous Hay alguna evidencia de que el cuerpo basal es un pasivo
estructura y gira dentro de un complejo proteico incrustado en la membrana de
Figura 3.38 Distribución flagelar. Ejemplos de varios manera muy parecida a como el rotor de un motor eléctrico gira en el centro de
patrones de flagelación como se ve en el microscopio óptico. un anillo de electroimanes (el estator).
(a) Monotrichous polar (Pseudomonas). (b) Lofotricous El mecanismo exacto que impulsa la rotación del cuerpo basal no es
(Spirillum). (c) Peritrichous (Proteus vulgaris, 600). totalmente claro. La Figura 3.42 proporciona una representación más detallada de
Componentes externos a la pared celular 69
Filamento
Gancho
anillo L
Membrana externa
Capa de
Anillo P
peptidoglicano
Espacio
vara
anillo S periplásmico
Membrana
de plasma
anillo M
(a) 22 nm (B)
30nm
(c) Las flechas indican ganchos y cuerpos basales . (D)
Figura 3.39 La ultraestructura de flagelos bacterianos. Cuerpos basales flagelares y ganchos en (a) bacterias gramnegativas y (b) grampositivas. (c)
Flagelos teñidos negativamente de Escherichia coli (66.000). (d) Una vista ampliada del cuerpo basal de un flagelo de E. coli (485.000). Los cuatro anillos (L,
P, S y M) se pueden ver claramente. La flecha superior está en la unión del gancho y el filamento.
el cuerpo basal en bacterias gramnegativas. La parte del rotor del motor Existe alguna evidencia de que MotA y FliG interactúan directamente
parece estar formada principalmente por una varilla, el anillo M y un anillo C durante la rotación flagelar. Esta rotación es impulsada por gradientes de
unidos a él en el lado citoplásmico del cuerpo basal. protones o sodio en procariotas, no directamente por ATP como es el caso
Estos dos anillos están hechos de varias proteínas; FliG es particularmente de los flagelos eucarióticos. La cadena de transporte de electrones y la
importante en la generación de rotación flagelar. Las dos proteínas más fosforilación oxidativa (sección 9.5)
importantes en la parte del estator del motor son MotA y MotB. El flagelo es un dispositivo de natación muy eficaz. Desde el punto de
Estos forman un canal de protones a través de la membrana plasmática, y vista de la bacteria, nadar es toda una tarea porque el agua circundante
MotB también ancla el complejo Mot al peptidoglucano de la pared celular. parece tan espesa y viscosa como la melaza. La célula
LPS
Flagelina
Proteína de
la tapa del filamento
Membrana externa
peptidoglicano
Membrana
de plasma
ARNm
Ribosoma
Figura 3.40 Crecimiento de los filamentos flagelares. Las subunidades de flagelina viajan a través del núcleo flagelar y se unen a la punta en crecimiento. Su unión está dirigida por la
proteína de la tapa del filamento.
debe perforar el agua con sus flagelos en forma de sacacorchos, y si cesa la actividad flagelar,
se detiene casi instantáneamente. A pesar de tal resistencia ambiental al movimiento, las
correr hacia adelante bacterias pueden nadar de 20 a casi 90 m/segundo. Esto es equivalente a viajar de 2 a más
de 100 celdas por segundo. En contraste, un humano excepcionalmente rápido de 6 pies

(un)
podría correr alrededor de 5 cuerpos por segundo.
(un)
Las bacterias pueden moverse por mecanismos distintos a la rotación flagelar. Las
espiroquetas son bacterias helicoidales que se desplazan a través de sustancias viscosas
Caída
como la mucosidad o el lodo mediante movimientos de flexión y giro provocados por un
(b)
filamento axial especial compuesto por flagelos periplásmicos. La motilidad de natación de
(b)
la bacteria helicoidal Spiroplasma se logra mediante la formación de torceduras en el cuerpo
celular que recorren la longitud de la bacteria. Muchas bacterias emplean un tipo muy diferente
de motilidad, la motilidad de deslizamiento : cianobacterias, mixobacterias y citofagas, y
correr hacia adelante
algunos mycoplasmas. Aunque no hay estructuras externas visibles asociadas con la motilidad
(C) deslizante, permite el movimiento a lo largo de superficies sólidas a velocidades de hasta 3 m/

segundo. Diversidad microbiana y ecología 21.1: El mecanismo de motilidad deslizante;
(C) Phylum Spirochaetes (sección 21.6); bacterias fotosintéticas (sección 21.3); Clase
Deltaproteobacteria: Orden Myxo coccales (sección 22.4); Clase Mollicutes (los micoplasmas)
(sección 23.2)
Caída
1. Describa brevemente las cápsulas, las capas mucosas, los glucocálices y las capas S.
¿Cuáles son sus funciones?
(D)
2. Distinguir entre fimbrias y sexo pili, y dar la función de cada uno.
3. Ser capaz de discutir lo siguiente: patrones de distribución de flagelos, estructura y
Figura 3.41 Motilidad flagelar. La relación de la rotación flagelar con el síntesis de flagelos, y la forma en que operan los flagelos para mover una bacteria.
movimiento bacteriano. Las partes (a) y (b) describen el movimiento de las
4. ¿Qué es el autoensamblaje? ¿Por qué tiene sentido que el filamento flagelar se
bacterias polares monótricas. Las partes (c) y (d) ilustran los movimientos de ensamble de esta manera?
los organismos peritricos.
quimiotaxis 71
Filamento
Gancho
anillo L
Anillo P
Membrana externa Figura 3.42 Mecanismo de Movimiento Flagelar.

Capa de peptidoglicano Este diagrama de un flagelo gramnegativo muestra algunos de los
componentes más importantes y el flujo de protones que impulsa la
vara
Espacio periplásmico rotación. Cinco de las muchas proteínas flagelares están marcadas
H+ anillo S (MotA, MotB, FliG, FliM, FliN).
anillo M
Membrana de plasma
MotB
MotA
Solapa
anillo C
FliM, N
3.10 QUIMOTAXIS
están presentes juntos, la bacteria comparará ambas señales y responderá
Las bacterias no siempre se mueven sin rumbo, sino que son atraídas por al químico con la concentración más efectiva.
nutrientes como azúcares y aminoácidos, y son repelidas por muchas Los atrayentes y repelentes son detectados por quimiorreceptores,
sustancias nocivas y productos de desecho bacterianos. Las bacterias proteínas especiales que unen químicos y transmiten señales a los otros
también pueden responder a otras señales ambientales como la temperatura componentes del sistema quimiosensor. Hasta el momento se han
(termotaxia), la luz (fototaxis), el oxígeno (aerotaxis), la presión osmótica descubierto unos 20 quimiorreceptores atrayentes y 10 quimiorreceptores
(osmotaxis) y la gravedad; (Diversidad microbiana y ecología 3.2.) El para repelentes. Estas proteínas quimiorreceptoras pueden estar ubicadas
movimiento hacia los atrayentes químicos y lejos de los repelentes se en el espacio periplásmico o en la membrana plasmática. Algunos
conoce como quimiotaxis. Tal comportamiento es una ventaja obvia para receptores participan en las etapas iniciales del transporte de azúcar al interior de la
las bacterias. El comportamiento quimiotáctico de las bacterias se ha estudiado
La quimiotaxis se puede demostrar observando bacterias en el utilizando el microscopio de seguimiento, un microscopio con una platina
gradiente químico que se produce cuando un tubo capilar delgado se llena móvil que automáticamente mantiene a la vista una bacteria individual. En
con un atrayente y se baja a una suspensión bacteriana. A medida que el ausencia de un gradiente químico, E. coli y otras bacterias se mueven al
atrayente se difunde desde el extremo del capilar, las bacterias se acumulan azar. Durante unos segundos, la bacteria viajará en una línea recta o
y ascienden por el tubo. El número de bacterias dentro del capilar después ligeramente curva llamada carrera. Cuando una bacteria se está
de un corto período de tiempo refleja la fuerza de atracción y la tasa de ejecutando, sus flagelos se organizan en un paquete coordinado en forma
quimiotaxis. La quimiotaxis positiva y negativa también se puede estudiar de sacacorchos (figura 3.41c). Luego, los flagelos "se separan" y la bacteria
con cultivos en placas de Petri (figura 3.43). Si las bacterias se colocan en se detiene y cae. La caída da como resultado la reorientación aleatoria de
el centro de un plato de agar semisólido que contiene un atrayente, las la bacteria, de modo que a menudo mira en una dirección diferente. Por lo
bacterias agotarán el suministro local y luego nadarán hacia afuera tanto, cuando comienza la siguiente carrera, suele ir en una dirección
siguiendo el gradiente de atrayente que han creado. El resultado es un diferente (figura 3.45a).
anillo de bacterias en expansión. Cuando se coloca un disco de repelente Por el contrario, cuando la bacteria se expone a un atrayente, da vueltas
en una placa de Petri de agar semisólido y bacterias, las bacterias se con menos frecuencia (o tiene recorridos más largos) cuando viaja hacia el
alejarán nadando del repelente, creando una zona clara alrededor del disco atrayente. Aunque las volteretas aún pueden alejar a la bacteria del
(figura 3.44). atrayente, con el tiempo, la bacteria se acerca más y más al atrayente
Las bacterias pueden responder a niveles muy bajos de atrayentes (figura 3.45b). La respuesta opuesta ocurre con un repelente. La frecuencia
(alrededor de 108 M para algunos azúcares), la magnitud de su respuesta de volteo disminuye (el tiempo de ejecución se alarga) cuando la bacteria
aumenta con la concentración del atrayente. Por lo general, detectan se aleja del repelente.
repelentes solo en concentraciones más altas. Si un atrayente y un repelente
Figura 3.43 Quimiotaxis bacteriana

positiva. La quimiotaxis se puede
demostrar en una placa de agar que
contiene varios nutrientes.
Quimiotaxis positiva por E. coli a la
izquierda. El anillo exterior está
compuesto por bacterias que consumen Colonia de
bacterias
serina. El segundo anillo estaba formado móviles pero no
por E. coli que consumía aspartato, un quimiotácticas
atrayente menos potente. La colonia
superior derecha está compuesta por colonia de
bacterias móviles
mutantes móviles, pero no quimiotácticos. quimiotácticas
La colonia inferior derecha está formada
por bacterias inmóviles.
Colonia de
bacterias
inmóviles
Caída Correr
(a)
(B)
Figura 3.44 Quimiotaxis bacteriana negativa. Quimiotaxis negativa por
E. coli en respuesta al acetato repelente. Los discos brillantes son Figura 3.45 Movimiento dirigido en bacterias. (a) Movimiento aleatorio de
tapones de agar concentrado que contienen acetato que se han colocado en una bacteria en ausencia de un gradiente de concentración. La frecuencia
agar diluido inoculado con E. coli. La concentración de acetato aumenta de de caída es bastante constante. (b) Movimiento en un gradiente atrayente.
cero en la parte superior derecha a 3 M en la parte superior izquierda. Tenga La frecuencia de volteo se reduce cuando la bacteria asciende por el
en cuenta el aumento del tamaño de las zonas libres de bacterias con el gradiente. Por lo tanto, los recorridos en la dirección del aumento del
aumento de acetato. Las bacterias han migrado durante 30 minutos. atrayente son más largos.
La endospora bacteriana 73
Claramente, la bacteria debe tener algún mecanismo para detectar La corteza, que puede ocupar hasta la mitad del volumen de esporas,
que se está acercando al atrayente (o se está alejando del descansa debajo de la capa de esporas. Está hecho de un peptidoglicano que es
repelente). El comportamiento de la bacteria está determinado por el tiempo menos entrecruzado que el de las células vegetativas. La pared celular de la espora
Cambios en la concentración química. La bacteria se mueve hacia (o pared central) está dentro de la corteza y rodea el protoplasto o
el atrayente porque detecta que la concentración del atrayente está aumentando. núcleo de esporas. El núcleo tiene estructuras celulares normales, como los ribosomas.
Asimismo, se aleja de un repelente porque detecta que la concentración del repelente y un nucleoide, pero es metabólicamente inactivo.
está disminuyendo. Todavía no se sabe con precisión por qué la endospora es tan resistente al calor
Los quimiorreceptores de la bacteria juegan un papel fundamental en este proceso. y otros agentes letales. Tanto como el 15% de los
Los eventos moleculares que permiten a las células bacterianas detectar un gradiente El peso seco de la espora consiste en ácido dipicolínico complejado con
químico y responder adecuadamente se presentan en el capítulo 8. iones de calcio (figura 3.48), que se encuentra en el núcleo. Tiene
Durante mucho tiempo se pensó que el ácido dipicolínico estaba directamente involucrado en
1. Defina quimiotaxis, carrera y volteretas.
2. Explique de manera general cómo las bacterias se mueven hacia sustancias como nu
trients y lejos de materiales tóxicos.
Central
3.11 LA ENDOSPORA BACTERIANA

Varias bacterias grampositivas pueden formar una resistencia especial, subterminal
estructura latente llamada endospora. Se desarrollan endosporas Hinchado
esporangio
dentro de células bacterianas vegetativas de varios géneros: Bacillus y
Clostridium (bastones), Sporosarcina (cocos), y otros. Estas estructuras son
extraordinariamente resistentes a las tensiones ambientales tales como
calor, radiación ultravioleta, radiación gamma, desinfectantes químicos y desecación.
De hecho, algunas endosporas han permanecido viables durante unos 100.000 años. Terminal
Por su resistencia y la
Dado que varias especies de bacterias formadoras de endosporas son patógenos Figura 3.46 Ejemplos de ubicación y tamaño de endosporas.
peligrosos, las endosporas son de gran importancia práctica en
Microbiología alimentaria, industrial y médica. Esto se debe a que es esencial poder
esterilizar soluciones y objetos sólidos. Las endosporas a menudo sobreviven a la
ebullición durante una hora o más; por lo tanto
se deben usar autoclaves para esterilizar muchos materiales. endosporas
son también de considerable interés teórico. Debido a que las bacterias fabrican estas
estructuras intrincadas de una manera muy organizada a lo largo de

un período de unas pocas horas, la formación de esporas es muy adecuada para la investigación
en la construcción de estructuras biológicas complejas. En el medio ambiente, las

endosporas ayudan a sobrevivir cuando la humedad o los nutrientes son insuficientes. Ribosomas
escaso. El uso de métodos físicos en el control: Calor (sección 7.4)
Las endosporas se pueden examinar con microscopios ópticos y electrónicos.
nucleoide
Debido a que las endosporas son impermeables a la mayoría de las manchas,
Pared del núcleo
a menudo se ven como áreas incoloras en bacterias tratadas con azul de metileno y
Corteza
otras tinciones simples; tinciones especiales de endosporas son
Capa de esporas
utilizado para hacerlos claramente visibles. Posición de la endospora en el
Exosporium
La célula madre (esporangio) difiere con frecuencia entre las especies, por lo que
tiene un valor considerable en la identificación. Las endosporas pueden ser
ubicado en el centro, cerca de un extremo (subterminal), o definitivamente terminal
(figura 3.46). A veces una endospora es tan grande que Figura 3.47 Estructura de la endospora. Bacillus Anthracis
hincha el esporangio. Preparación y tinción de muestras (sección 2.3) endospora (151.000).
Las micrografías electrónicas muestran que la estructura de las endosporas es
compleja (figura 3.47). La espora a menudo está rodeada por una cubierta delgada y
delicada llamada exosporium. Una capa de esporas se encuentra debajo
el exosporium, se compone de varias capas de proteínas, y puede
HOOC COOH
ser bastante grueso. Es impermeable a muchas moléculas tóxicas y es norte
responsable de la resistencia de la espora a los productos químicos. El abrigo también

se cree que contiene enzimas que intervienen en la germinación. Figura 3.48 Ácido dipicolínico.
norte
norte
0.25
horas
División celular
muro
espora libre
norte
Exosporium
C
I
Capa de esporas SM
VIENES Formación de
Corteza Lisis de filamentos axiales
10.5 CAROLINA DEL SUR
Centro esporangio,
horas OFM liberación de ADN de
4
horas
esporas. membrana plasmática
Capa de esporas
NOSOTROS
Finalización de la yl
síntesis de la capa, Formación
aumento de la de tabiques
refringibilidad y y desarrollo
resistencia al calor. de esporas.
Exosporium
tercero
Engullimiento de la
V
forespora
Síntesis de la capa
IV
Corteza formación de la corteza
OFM
C norte
CAROLINA DEL SUR
8
horas
IFM
IFM
OFM
norte
5.5
horas
norte
6.5
horas
Figura 3.49 Formación de endosporas: ciclo de vida de Bacillus megaterium. Las etapas se indican con números romanos. Los números dentro de un
círculo en las fotografías se refieren a las horas desde el final de la fase logarítmica de crecimiento: 0,25 h: una célula vegetativa típica; 4 h: celda en etapa II,
septación; 5,5 h: célula en etapa III, inmersión; 6,5 h: células en etapa IV, formación de la corteza; 8 h: célula en etapa V, formación de la cubierta; 10,5 h:
célula en estadio VI, espora madura en el esporangio. Abreviaturas utilizadas: C, corteza; IFM y OFM, membranas de esporas internas y externas; M,
mesosoma; N, nucleoide; S, tabique; SC, capas de esporas. Barras 0,5 m.
La endospora bacteriana 75
resistencia al calor, pero mutantes resistentes al calor que carecen de dipicolínico

ácido han sido aislados. El calcio ayuda en la resistencia a la humedad
calor, agentes oxidantes y, a veces, calor seco. Puede ser que
el dipicolinato de calcio estabiliza los ácidos nucleicos de la espora. Además, pequeñas
proteínas de unión al ADN solubles en ácido especializadas
(SASPs), se encuentran en la endospora. Saturan el ADN de las esporas
y protéjalo del calor, la radiación, la desecación y los productos químicos.
La deshidratación del protoplasto parece ser muy importante en
resistencia al calor. La corteza puede eliminar osmóticamente el agua de
el protoplasto, protegiéndolo así del calor y la radiación
daño. La capa de esporas también parece proteger contra las enzimas.
y productos químicos como el peróxido de hidrógeno. Finalmente, las esporas contienen
algunas enzimas reparadoras del ADN. El ADN se repara una vez que la espora
germina y la célula vuelve a estar activa. En resumen, la resistencia al calor en
0,5mm _
dosporas probablemente se deba a varios factores:
dipicolinato de calcio y estabilización de proteínas solubles en ácido de
ADN, deshidratación de protoplastos, cubierta de esporas, reparación de ADN,
Figura 3.50 Germinación de endosporas. Clostridium pecti novorum emergiendo
mayor estabilidad de las proteínas celulares en bacterias adaptadas al crecimiento a
de la espora durante la germinación.
altas temperaturas, y otros.
La formación de endosporas, también llamada esporogénesis o esporulación,
normalmente comienza cuando cesa el crecimiento debido a la falta de
es un proceso que prepara las esporas para la germinación y generalmente resulta de
nutrientes Es un proceso complejo y puede dividirse en siete
tratamientos como el calentamiento. Le sigue la germinación,
etapas (figura 3.49). Se forma un filamento axial de material nuclear
la ruptura del estado latente de la espora. Este proceso se caracteriza por la hinchazón
(etapa I), seguida de un plegamiento hacia adentro de la membrana celular para
de las esporas, la ruptura o la absorción de la cubierta de las esporas,
encierran parte del ADN y producen el tabique de la espora (etapa
pérdida de resistencia al calor y otros estreses, pérdida de refringibilidad, liberación de
II). La membrana sigue creciendo y engulle a los inmaduros.
componentes de esporas y aumento de la actividad metabólica.
endospora en una segunda membrana (etapa III). A continuación, se coloca la corteza
Muchos metabolitos o nutrientes normales (p. ej., aminoácidos y azúcares) pueden
abajo en el espacio entre las dos membranas, y tanto el calcio
desencadenar la germinación después de la activación. A la germinación le sigue la
y se acumula ácido dipicolínico (etapa IV). Abrigos de proteína
tercera etapa, el crecimiento. El protoplasto de la espora produce
luego se forman alrededor de la corteza (etapa V), y la maduración de
nuevos componentes, emerge de los restos de la capa de esporas, y
se produce la endospora (etapa VI). Finalmente, las enzimas líticas destruyen
vuelve a convertirse en una bacteria activa.
el esporangio liberando la espora (etapa VII). La esporulación requiere unas 10 horas
en Bacillus megaterium. Normativa mundial
1. Describa la estructura de la endospora bacteriana usando un diagrama rotulado.
sistemas: Esporulación en Bacillus subtilus (sección 12.5)
2. Describa brevemente la formación y germinación de endosporas. ¿Cuál es la
La transformación de esporas latentes en vegetativas activas.
importancia de la endospora? ¿Qué podría explicar su resistencia al calor?
parece un proceso casi tan complejo como la esporogénesis. ocurre
3. ¿Cómo se podría demostrar que una bacteria forma endosporas verdaderas?
en tres etapas: (1) activación, (2) germinación y (3) crecimiento
4. ¿Por qué crees que la deshidratación del protoplasto es un factor importante en
(figura 3.50). A menudo, una espora no germinará con éxito, incluso
la capacidad de las endosporas para resistir el estrés ambiental?
en un medio rico en nutrientes, a menos que haya sido activado. Activación
Resumen
3.1 Descripción general de la estructura de las células procarióticas 3.2 Membranas de células procarióticas
un. Los procariotas pueden ser esféricos (cocos), bastoncillos (bacilos), espirales o filamentosos; pueden un. La membrana plasmática cumple muchas funciones, incluida la de actuar como una barrera
formar brotes y tallos; o incluso pueden no tener ninguna característica semipermeable, realizar la respiración y la fotosíntesis, y detectar y responder a las sustancias
forma alguna (pleomorfa) (figura 3.1 y 3.2). químicas del medio ambiente.
B. Las células procarióticas pueden permanecer juntas después de la división para formar pares, cadenas y B. El modelo de mosaico fluido propone que las membranas celulares son bicapas lipídicas en
racimos de varios tamaños y formas. qué proteínas integrales están enterradas (figura 3.5). Las proteínas periféricas están sueltas
asociado a la membrana.
C. Los procariotas son estructuralmente mucho más simples que los eucariotas, pero tienen
estructuras únicas. La tabla 3.1 resume las principales funciones de procariotas C. Las membranas bacterianas están compuestas de fosfolípidos construidos de grasas
estructuras celulares. ácidos conectados al glicerol por enlaces éster (figura 3.6). Las membranas bacterianas normalmente
carecen de esteroles, pero a menudo contienen hopanoides (figura 3.7).
D. La membrana plasmática de algunas bacterias se invagina para formar sistemas de membrana 3.7 Paredes celulares de arqueas
simples que contienen ensamblajes fotosintéticos y respiratorios. Otras bacterias, como las
un. Las paredes celulares de las arqueas no contienen peptidoglicano (figura
cianobacterias, tienen membranas internas (figura 3.8). mi. Las membranas de las arqueas
3.30). B. Archaea exhibe una gran diversidad en la composición de su pared celular. Algunas
están compuestas de lípidos de glicerol diéter y diglicerol tetraéter (figura 3.9). Las membranas
paredes celulares de arqueas están compuestas de heteropolisacáridos, algunas están
compuestas de diéter de glicerol son bicapas lipídicas. Las membranas compuestas por
compuestas de glicoproteína y otras están compuestas de proteína.
tetraéteres de diglicerol son monocapas lipídicas (figura 3.11). La estructura general de una
membrana monocapa es similar a la de una membrana bicapa en que la membrana tiene un
3.8 Secreción de proteínas en procariotas
núcleo hidrofóbico y sus superficies son hidrofílicas.
un. La vía de secreción de proteínas dependiente de Sec (figura 3.32) se ha observado en todos
los dominios de la vida. Transporta proteínas a través o hacia la membrana citoplásmica.
3.3 La matriz citoplasmática

B. Las bacterias gramnegativas tienen sistemas adicionales de secreción de proteínas que les
un. El citoplasma de los procariotas contiene proteínas que son similares en estructura y función a
permiten mover proteínas desde el citoplasma, a través de las membranas citoplasmática y
las proteínas del citoesqueleto observadas en los eucariotas. B. La matriz citoplasmática de
externa, hacia el exterior de la célula (figura 3.33). Algunos de estos sistemas funcionan con
los procariotas contiene cuerpos de inclusión. La mayoría se utilizan para almacenamiento
la vía dependiente de Sec para lograr esto (Tipo II, Tipo V y, por lo general, Tipo IV). Algunas
(inclusiones de glucógeno, inclusiones de PHB, gránulos de cianoficina, carboxisomas y
vías funcionan solas para mover proteínas a través de ambas membranas (tipos I y III).
gránulos de polifosfato), pero otros se utilizan para otros fines (magnetosomas y vacuolas de
gas).
C. Los transportadores ABC (sistema de secreción de proteínas de tipo I) son utilizados por todos los
C. El citoplasma de los procariotas está repleto de ribosomas 70S (figura 3.15).
procariotas para la translocación de proteínas.
3.4 El nucleoide
3.9 Componentes externos a la pared celular
un. El material genético procariótico se encuentra en un área llamada nucleoide y no suele estar
un. Las cápsulas, las capas mucosas y los glucocálices son capas de material que se encuentran
encerrado por una membrana (figura 3.16). B. En la mayoría de los procariotas, el nucleoide
fuera de la pared celular. Pueden proteger a los procariotas de ciertas condiciones ambientales,
contiene un solo cromosoma. El cromosoma consta de una molécula de ADN circular de doble permitir que los procariotas se adhieran a las superficies y proteger a las bacterias patógenas
cadena, cerrada covalentemente. de las defensas del huésped (figuras 3.34 y 3.35).
B. Las capas S se observan en algunas bacterias y muchas arqueas. Están compuestos por
proteínas o glicoproteínas y tienen una forma geométrica característica. En muchas arqueas,
3.5 Plásmidos la capa S sirve como pared celular (figura 3.36). C. Pili y fimbriae son apéndices similares a
un. Los plásmidos son moléculas de ADN extracromosómicas. Se encuentran en muchos pelos. Las fimbrias funcionan principalmente adhiriéndose a las superficies, pero algunos tipos de
procariotas fimbrias bacterianas están involucradas en una motilidad espasmódica. Los pili sexuales
B. Aunque los plásmidos no son necesarios para la supervivencia en la mayoría de las condiciones, participan en la transferencia de ADN de una bacteria a otra (figura 3.37). D. Muchos
pueden codificar rasgos que confieren una ventaja selectiva en algunos entornos. C. Los procariotas son móviles, generalmente por medio de hilos, locomotoras o ganelos llamados
episomas son plásmidos que pueden existir libremente en el citoplasma o pueden integrarse en el flagelos (figura 3.38).
cromosoma. D. Los plásmidos conjugativos codifican genes que promueven su transferencia
desde una célula mi. Las especies bacterianas difieren en el número y distribución de sus flagelos. F. En las
a otro. bacterias, el filamento flagelar es una hélice rígida que gira como una hélice para empujar a la
mi. Los factores de resistencia son plásmidos que tienen genes que confieren resistencia a bacteria a través del agua (figura 3.41).
antibióticos
3.10 Quimiotaxis
F. Col plásmidos contienen genes para la síntesis de colicinas, proteínas que matan E. coli. Otros
plásmidos codifican factores de virulencia o capacidades metabólicas. un. Los procariotas móviles pueden responder a gradientes de atrayentes y repelentes, un
fenómeno conocido como quimiotaxis. B. Una bacteria logra el movimiento hacia un atrayente
3.6 La pared celular bacteriana aumentando el tiempo que pasa moviéndose hacia el atrayente, acortando el tiempo que pasa
un. La gran mayoría de los procariotas tienen una pared celular fuera de la membrana plasmática dando vueltas. Por el contrario, una bacteria aumenta su tiempo de ejecución cuando se aleja
para darles forma y protegerlos del estrés osmótico. B. Las paredes bacterianas son de un repelente.
químicamente complejas y por lo general contienen peptidoglucano (figuras 3.17–3.21). C. Las

bacterias a menudo se clasifican como grampositivas o gramnegativas según las diferencias
3.11 La endospora bacteriana
en la estructura de la pared celular y su respuesta a la tinción de Gram. D. Las paredes de los
grampositivos tienen capas gruesas y homogéneas de peptidoglicano y ácidos teicoicos un. Algunas bacterias sobreviven a condiciones ambientales adversas formando endosporas,
(figura 3.23). Las bacterias gramnegativas tienen una capa delgada de peptidoglicano rodeada por estructuras latentes resistentes al calor, la desecación y muchos productos químicos (figura
una membrana externa compleja que contiene lipopolisacáridos (LPS) y otros componentes 3.47).
(figura 3.25). mi. Se cree que el mecanismo de la tinción de Gram depende del peptidoglicano, B. Tanto la formación de endosporas como la germinación son procesos complejos que comienzan
que se une fuertemente al cristal violeta, evitando la pérdida del cristal violeta durante el en respuesta a ciertas señales ambientales e involucran numerosas etapas (figuras 3.49 y
lavado con etanol. 3.50).

Resumen 77
Términos clave
Activación de la ruta de secreción de la fimbrias 66 micelio 40 correr 71
proteína ABC 65 75 filamento flagelar 67 nucleoide 52 ruta dependiente de sec 63

anfipático 45 gancho flagelar 67 O antígeno 60 autoensamblaje 68 pili sexual 67
anfítrico 67 filamento flagelina 67 flagelo 67 O cadena lateral 60 péptido señal 63
axial 70 mosaico fluido modelo 44 membrana exterior 55
bacilo 40 crecimiento 75 Capa S 66
bacteriocina 53 vacuola de gas 50 penicilina 61 capa de limo 65
cuerpo basal 67 vesículas de gas péptido interpuente 56 esferoplasto 61
cápsula 65 50 germinación 75 peptidoglicano 55 proteínas espirilla 40
carboxisomas 49 motilidad deslizante 70 periféricas 45 periplasma espiroqueta 40
envoltura celular 55 glucocáliz 65 glucógeno 55 espacio periplásmico 55 esporangio 73
quimiorreceptores 71 49 hopanoides 46 peritrichous 67 membrana pared celular de la

quimiotaxis 71 hidrofílico 45 hidrofóbico plasmática 42 plásmido 53 espora 73 cubierta de
coco 39 45 cuerpo de inclusión plasmólisis 61 pleomórfico la espora 73 núcleo de
Col plásmido 53 48 proteínas integrales 41 flagelo polar 67 la espora 73
conjugativo plásmido 53 45 lípido A 58 polihidroxibutirato (PHB) 49 esporogénesis 75 esporulación 75
núcleo polisacárido 58 lipopolisacáridos (LPS) gránulos de polifosfato 50 Unidad de Svedberg

corteza 73 58 lofotricous 67 lisis 61 proteínas de porina 60 50 Ácido teicoico 57
curado 53 lisozima 61 magnetosomas 50 protoplasto 48 pseudomureína 62 factor caer 71
gránulos de cianoficina 49 gránulos metabólicos de plásmido (factor R, vía de secreción de proteína tipo I 65 vía de
matriz citoplasmática 48 ácido monocromático 54 67 secreción de proteína tipo II 65 vía de
desoxirribonucleico (ADN) 52 diplococcus secreción de proteína tipo III 65 vía de
39 endospora 73 episoma 53 exoenzima secreción de proteína tipo IV 65 vía de
58 exosporio 73 secreción de proteína tipo V 65 vibrio 40
plásmido R) 53
ribosoma 50 plásmido de virulencia 54
murein 55 varilla 40
gránulos de volutina 50
factor F 53
1. Proponer un modelo para el ensamblaje de un flagelo en una envoltura de células grampositivas. 3. El peptidoglicano de las bacterias se ha comparado con la cota de malla que se lleva debajo de la
¿Cómo sería necesario modificar ese modelo para el ensamblaje de un flagelo en una envoltura armadura de un caballero medieval. Proporciona protección y flexibilidad. ¿Puedes describir otras
de células gramnegativas? estructuras en biología que tengan una función análoga? ¿Cómo se reemplazan o modifican para
adaptarse al crecimiento del habitante?
2. Si no pudieras usar un microscopio, ¿cómo determinarías si una célula es procariota o eucariota?
Suponga que el organismo se puede cultivar fácilmente en el laboratorio.
Aprende más
Cañón, GC; Bradburne, CE; Aldrich, HC; Panadero, SH; Heinhorst, S.; y Shively, JM 2001. Frankel, RB y Bazylinski, DA 2004. Misterios del magnetosoma. Noticias ASM 70 (4): 176–83.
Microcompartments in prokaryotes: Carboxysomes and related polyhedra. aplicación Env.
Microbiol. 67(12):5351–61.
Ghuysen, J.-M. y Hekenbeck, R., editores. 1994. Pared celular bacteriana. Nueva York:
Drews, G. 1992. Membranas intracitoplasmáticas en células bacterianas: Organización, función y Elsevier.
biosíntesis. En Estructura y función procariótica, S. Mohan, C.

Gital, Z. 2005. La nueva biología celular bacteriana: partes móviles y archi subcelular
Dow y JA Coles, editores, 249–74. Nueva York: Cambridge University Press. tecture Celda 120: 577–86.
Harshey, RM 2003. Motilidad bacteriana en una superficie: muchas formas de lograr un objetivo común. Nikaido, H. 2003. Revisión de la base molecular de la permeabilidad de la membrana externa
año Rev. Microbiol. 57:249–73. bacteriana. Microbiol. mol. Biol. 67(4):593–656 .
Henderson, IR; Navarro-García, F.; Desvaux, M.; Fernández, RC; y Parkinson, JS 2004. Amplificación de señal en quimiotaxis bacteriana a través de recep
Ala'Aldeen, D. 2004. Vía de secreción de proteína tipo V: el autotransportador para el trabajo en equipo. Noticias de ASM 70 (12): 575–82.
historia. Microbiol. mol. Biol. Rev. 68(4):692–744.

Robinow, C. y Kellenberger, E. 1994. El nucleoide bacteriano revisado. Micro
Hoppert, M. y Mayer, F. 1999. Prokaryotes. Científico estadounidense 87: 518–25. biológico Rev. 58(2):211–32.
Kerfeld, CA; Sawaya, MR; Tanaka, A.; Nguyen, CV; Philips, M.; Beeby, M.; Sára, M. y Sleytr, UB 2000. Proteínas de la capa S. J. Bacteriol. 182(4):859–68.
y Yeates, TO 2005. Estructuras proteicas que forman la cubierta de organelos bacterianos
Scherrer, R. 1984. Reacción de tinción de Gram, tipos de Gram y paredes celulares de bacterias.
primitivos. Ciencia 309: 936–38. Tendencias Bioquímica. ciencia 9:242–45.
Kostakioti, M.; Newman, CL; Thanassi, DG; y Stathopoulos, C. 2005. Mecanismos de exportación de
Schulz, HN y Jorgensen, BB 2001. Bacterias grandes. año Rev. Microbiol.
proteínas a través de la membrana externa bacteriana. J. Bacteriol. 55:105–37.
187(13):4306–14.
Trun, NJ y Marko, JF 1998. Arquitectura de un cromosoma bacteriano. MAPE
Macnab, RM 2003. Cómo las bacterias ensamblan flagelos. año Rev. Microbiol.
Noticias 64 (5): 276–83.
57:77–100.
Walsby, AE 1994. Vesículas de gas. Microbiol. Rev. 58(1):94–144.
Mattick, JS 2002. Pili tipo IV y motilidad espasmódica. año Rev. Microbiol.
56:289–314. Walsby, AE 2005. Archaea con celdas cuadradas. Tendencias Microbiol. 13(5):193–95.
Wätermann, M. y Steinbüchel, A. 2005. Cuerpos de lípidos neutros en procariotas: conocimientos

Nicholson, WL; Munakata, N.; Horneck, G.; Melosh, HJ; y Setlow, pág. 2000.
recientes sobre la estructura, la formación y la relación con los depósitos de lípidos eucariotas.
Resistencia de las endosporas de Bacillus a ambientes terrestres y extraterrestres extremos.
J. Bacteriol. 187(11):3607–19.
Microbiol. mol. Biol. 64(3):548–72 .

A menudo hacemos hincapié en los procariotas y los virus, pero también en los microorganismos eucariotas.
tener un impacto importante en el bienestar humano. Por ejemplo, el parásito protozoario
Trypanosoma brucei gambiense es una causa de la enfermedad del sueño africana. los
organismo invade el sistema nervioso y la víctima frecuentemente muere después de sufrir
varios años de síntomas como debilidad, dolor de cabeza, apatía, emaciación,
somnolencia y coma.
AVANCE
• Las células eucarióticas se diferencian más obviamente de las células procarióticas El capítulo 4 se centra en la estructura de las células eucarióticas y su relación
en que tienen una variedad de orgánulos membranosos complejos en la matriz con la función celular. Debido a que muchos estudios valiosos sobre la ultraestructura
citoplásmica y la mayoría de su material genético dentro de ella. de células eucarióticas han utilizado organismos distintos de
núcleos delimitados por membranas. Cada orgánulo tiene una estructura distintiva microorganismos, se presentan algunos trabajos sobre células no microbianas.
directamente relacionada con funciones específicas. Al final del capítulo, las células procariotas y eucariotas son
• Un citoesqueleto compuesto de microtúbulos, microfilamentos y filamentos intermedios comparada con cierta profundidad.
ayuda a dar forma a las células eucariotas; el citoesqueleto también participa en
los movimientos celulares, intracelulares
transporte y reproducción.
• Cuando los eucariotas se reproducen, el material genético se distribuye entre las

células mediante procesos complejos y altamente organizados denominados
mitosis y meiosis.
4.1 UNA VISIÓN GENERAL DE EUCARYOTIC
ESTRUCTURA CELULAR
• A pesar de las grandes diferencias entre eucariotas y procariotas
con respecto a cosas tales como la morfologa, son similares en el La diferencia más obvia entre eucariotas y procariotas.
nivel bioquímico.
células está en su uso de membranas. Las células eucariotas tienen núcleos
delimitados por membranas, y las membranas también juegan un papel destacado.
parte en la estructura de muchos otros orgánulos (figuras 4.2 y
4.3). Los orgánulos son estructuras intracelulares que realizan funciones específicas.
En el capítuloy función
estructura 3 se dedica
celular una atención
porque considerable
los procariotas a las procariotas.
son inmensamente funciones en las células análogas a las funciones de los órganos en el cuerpo.
importantes en microbiología y han ocupado una gran parte El nombre orgánulo (pequeño órgano) fue acuñado porque los biólogos
de la atención de los microbiólogos en el pasado. Sin embargo, protistas y vio un paralelo entre la relación de los orgánulos con una célula y
Los hongos también son microorganismos y han sido ampliamente estudiados. la de los órganos a todo el cuerpo. No es satisfactorio definir los organelos como
Estos eucariotas a menudo son extraordinariamente complejos, interesantes en estructuras unidas a la membrana porque esto excluiría componentes como los
por derecho propio, y miembros destacados de los ecosistemas (figura ribosomas y los flagelos bacterianos. A
4.1). Además, muchos protistas y hongos son organismos modelo importantes, comparación de las figuras 4.2 y 4.3 con las figuras 3.4 y 3.13a
además de ser excepcionalmente útiles en microbiología industrial. Un número de muestra cuán estructuralmente compleja es la célula eucariota. Esta complejidad
protistas y hongos también son importantes humanos se debe principalmente al uso de membranas internas para varios
patógenos; basta pensar en la candidiasis, la malaria o la propósitos La división del interior de la célula eucariótica por membranas hace
enfermedad del sueño para apreciar la importancia de los eucariotas en posible la colocación de diferentes componentes bioquímicos.
Microbiología médica. Entonces, aunque este texto enfatiza las notas procariotas, y funciones fisiológicas en compartimentos separados para que
los microorganismos eucariotas también exigen atención y son es más fácil que se lleven a cabo simultáneamente bajo un control independiente y
discutido brevemente en este capítulo. una coordinación adecuada. Grandes superficies de membrana
La clave de todo problema biológico hay que buscarla finalmente en la célula.

—EB Wilson
80 Capítulo 4 Estructura y función de las células eucarióticas
(a) Paramecio (b) Frústulas de diatomeas
(c) Penicilio (d) Penicilio (e) Estentor
Figura 4.1 Ejemplos representativos de microorganismos eucarióticos.

(a) Paramecio visto con microscopía de contraste de interferencia (115). (b) Frustulas de diatomeas
mixtas (100). (c) colonias de Penicillium, y (d) una vista microscópica de las hifas y conidios del moho
(220). (e) Estentor. Los protozoos ciliados están extendidos y se alimentan activamente,
microscopía de campo oscuro (100). (f) Amanita muscaria, un gran hongo venenoso (5). f) Amanita muscaria
hacen posible una mayor actividad respiratoria y fotosintética debido a que estos Principales organelos eucarióticos. Nuestra discusión detallada de la estructura de la
procesos se localizan exclusivamente en las membranas. los célula eucariota comienza con la membrana eucariota. Nosotros entonces
complejo de membrana intracitoplasmática también sirve como transporte proceder a los orgánulos dentro del citoplasma, y finalmente a los componentes fuera
sistema para mover materiales entre diferentes ubicaciones de celdas. Por lo tanto de la membrana.
Es probable que se necesiten abundantes sistemas de membranas en las células
eucarióticas debido a su gran volumen y a la necesidad de una adecuada
1. ¿Qué es un orgánulo?
regulación, actividad metabólica y transporte.
2. ¿Por qué la compartimentación del interior celular es ventajosa para las células
Las figuras 4.2 y 4.3 ilustran la mayoría de los orgánulos que se discutirán aquí.
eucarióticas?
La Tabla 4.1 resume brevemente las funciones del
La membrana de plasma y la estructura de la membrana 81
Pared celular
4.2 LA MEMBRANA DE PLASMA Y LA
ESTRUCTURA DE LA MEMBRANA
Como se discutió en el capítulo 3, el modelo de mosaico fluido de la estructura

de la membrana se basa en gran medida en estudios de membranas eucarióticas.
Núcleo En los eucariotas, los principales lípidos de la membrana son los fosfoglicéridos,
los esfingolípidos y el colesterol (figura 4.4). La distribución de estos lípidos es
mitocondrias asimétrica. Los lípidos de la monocapa externa difieren de los de la monocapa
interna. Aunque la mayoría de los lípidos en monocapas individuales se mezclan
libremente entre sí, existen microdominios que difieren en la composición de
Retículo lípidos y proteínas. Uno de esos microdominios es la balsa lipídica, que está
vacuola
endoplásmico enriquecida en colesterol y lípidos con muchos ácidos grasos saturados, incluidos
algunos esfingolípidos. La balsa de lípidos se extiende por la bicapa de la
membrana y los lípidos de las monocapas adyacentes interactúan.
Estas balsas de lípidos parecen participar en una variedad de procesos celulares

(p. ej., movimiento celular y transducción de señales). También pueden participar
en la entrada de algunos virus en sus células anfitrionas y en el ensamblaje de
Figura 4.2 Ultraestructura de células eucarióticas. La levadura algunos virus antes de que se liberen de sus células anfitrionas.
Saccharomyces (7200). Tenga en cuenta el núcleo, la mitocondria, la
vacuola, el retículo endoplásmico y la pared celular.
flagelo
Cicatriz de brote
Ribosomas
mitocondria
Retículo
endoplásmico
Núcleo
Película
nucléolo
Pared celular
Membrana celular
aparato de Golgi
vacuola de agua
vacuola de almacenamiento
centríolos
centríolos
(a) Célula fúngica (levadura)
Membrana celular
glicocalix
(B) célula protozoaria
Figura 4.3 Estructura de dos células eucarióticas representativas. Ilustraciones de una célula de levadura (hongo) (a) y el protozoario flagelado Peranema (b).
Tabla 4.1 Funciones de los orgánulos eucarióticos
Membrana de plasma Límite celular mecánico, barrera selectivamente permeable con sistemas de transporte, media célula-célula
interacciones y adhesión a superficies, secreción
Matriz citoplasmática Ambiente para otros orgánulos, ubicación de muchos procesos metabólicos.
Microfilamentos, filamentos Estructura y movimientos celulares, forman el citoesqueleto.
intermedios y microtúbulos
Retículo endoplásmico Transporte de materiales, síntesis de proteínas y lípidos

Ribosomas Síntesis de proteínas
aparato de Golgi Envasado y secreción de materiales para diversos fines, formación de lisosomas.
lisosomas digestión intracelular
mitocondrias Producción de energía mediante el uso del ciclo del ácido tricarboxílico, transporte de electrones, fosforilación oxidativa,
y otros caminos
cloroplastos Fotosíntesis: captura de energía luminosa y formación de carbohidratos a partir de CO2 y agua
Núcleo Repositorio de información genética, centro de control de células
nucléolo Síntesis de ARN ribosomal, construcción de ribosomas.
Pared celular y película Fortalecer y dar forma a la célula.
Cilios y flagelos movimiento celular
vacuola Almacenamiento y transporte temporal, digestión (vacuolas de alimentos), balance hídrico (vacuola contráctil)
O
O CH3
PAGS norte
CH3
O O O CH3
Colas hidrofóbicas O
O
O
(a) Fosfoglicérido
O
OH CH3
PAGS norte
CH3
O O CH3
O
NUEVA HAMPSHIRE
O
(b) esfingolípido
OH
(c) esterol
Figura 4.4 Ejemplos de lípidos de membrana eucariota. (a) Fosfatidilcolina, un fosfoglicérido. (b) Esfingomielina, un
esfingolípido. (c) Colesterol, un esterol.
La matriz citoplasmática, los microfilamentos, los filamentos intermedios y los microtúbulos 83
a través de la célula huésped y para impulsarse hacia un nuevo huésped

4.3 LA MATRIZ CITOPLÁSMICA,
( Enfermedad 4.1: Moverse). Clasificación de protistas:
MICROFILAMENTOS , INTERMEDIOS
Eumycetozoa y Stramenopiles (sección 25.6)
FILAMENTOS Y MICROTÚBULOS Los microtúbulos tienen forma de cilindros delgados de unos 25 nm de
Los muchos orgánulos de las células eucarióticas se encuentran en el citoplasma. diámetro. Son estructuras complejas formadas por dos subunidades proteicas
matriz. La matriz es una de las más importantes y complejas. esféricas: -tubulina y -tubulina. Las dos proteínas
partes de la celula. Es el “ambiente” de los orgánulos y el tienen el mismo peso molecular y difieren sólo ligeramente en términos de
ubicación de muchos procesos bioquímicos importantes. Se observan varios su secuencia de aminoácidos y estructura terciaria. Cada tubulina es
cambios físicos en las células: cambios de viscosidad, cambios citoplásmicos. aproximadamente de 4 a 5 nm de diámetro. Estas subunidades se ensamblan en
streaming y otros, también se deben a la actividad de la matriz. un arreglo helicoidal para formar un cilindro con un promedio
Un componente principal de la matriz citoplasmática es una vasta red de de 13 subunidades en una vuelta o circunferencia (figura 4.5).
filamentos interconectados llamados citoesqueleto. los Los microtúbulos cumplen al menos tres propósitos: (1) ayudan
El citoesqueleto juega un papel tanto en la forma como en el movimiento celular. mantienen la forma celular, (2) están involucrados con los microfilamentos en la célula
Tres tipos de filamentos forman el citoesqueleto: microfilamentos, microtúbulos y movimientos, y (3) participar en el transporte intracelular
filamentos intermedios (figura 4.5). procesos. Los microtúbulos se encuentran en estructuras celulares largas y
Los microfilamentos son filamentos de proteína diminutos, de 4 a 7 nm de delgadas que requieren soporte, como los axopodios (largos, delgados y rígidos).
diámetro, que pueden estar dispersos dentro del citoplasma pseudopodia) de protistas (figura 4.6). Los microtúbulos también están presentes
matriz u organizada en redes y arreglos paralelos. Los microfilamentos están en las estructuras que participan en los movimientos de las células o los orgánulos:
compuestos por una proteína de actina que es similar a la huso mitótico, cilios y flagelos.
actina proteína contráctil del tejido muscular. Los microfilamentos son Los filamentos intermedios son elementos heterogéneos del
involucrados en el movimiento celular y los cambios de forma, como el movimiento citoesqueleto. Tienen alrededor de 10 nm de diámetro y se ensamblan a partir de
de gránulos de pigmento, movimiento ameboide y protoplásmico un grupo de proteínas que se pueden dividir en varias
fluyendo en moldes de limo. Curiosamente, algunos patógenos utilizan clases Los filamentos intermedios que tienen diferentes funciones se ensamblan
las proteínas de actina de sus huéspedes eucarióticos se muevan rápidamente a partir de una o más de estas clases de proteínas. El papel
Membrana de plasma
Endoplásmico rugoso
retículo
Ribosoma
De filamentos intermedios
De filamentos intermedios
microtúbulo
mitocondria
Microfilamento
Microfilamento microtúbulo
Figura 4.5 Matriz citoplasmática y citoesqueleto eucariotas. La matriz citoplasmática de las células eucarióticas contiene muchos
orgánulos importantes. El citoesqueleto ayuda a formar un marco dentro del cual se encuentran los orgánulos. El citoesqueleto está compuesto por tres
elementos: microfilamentos, microtúbulos y filamentos intermedios.
4.1 Moverse
Listeria monocytogenes es una bacteria grampositiva con forma de bastoncillo
responsable de la enfermedad listeriosis. La listeriosis es una infección transmitida por
los alimentos que generalmente es leve pero puede causar una enfermedad grave (meningitis,
sepsis y muerte fetal) en personas inmunocomprometidas y mujeres embarazadas. L. Listeria
monocytogenes es un patógeno intracelular que tiene

una serie de importantes factores de virulencia. Un factor de virulencia es la
proteína ActA, que la bacteria libera después de entrar en una célula huésped.
ActA hace que las proteínas de actina se polimericen en filamentos que forman un
cola en un extremo de la bacteria (ver la figura del recuadro). Como mas y mas
cola de actina
de las proteínas de actina se polimerizan, la cola en crecimiento empuja a la bacteria
a través de la célula huésped a velocidades de hasta 11 m/minuto. La bacteria puede
incluso ser impulsada a través de la superficie celular y hacia
Célula huésped
celdas vecinas.
Listeria motilidad y filamentos de actina. Una célula de Listeria es impulsada

a través de la superficie celular por un haz de filamentos de actina.
1. Compara las membranas de Eucarya, Bacteria y Archaea. Cómo son

¿similar? ¿Cómo se diferencian?
2. ¿Qué son las balsas lipídicas? ¿Qué papel juegan en las células eucariotas?
3. Defina matriz citoplasmática, microfilamento, microtúbulo y tubulina. Discutir

las funciones de los microfilamentos, los filamentos intermedios y los microtúbulos.
4. Describa el citoesqueleto. ¿Cuáles son sus funciones?
4.4 ORGANELOS DE LA BIOSINTÉTICA

VÍAS SECRETORIAS Y ENDOCÍTICAS
Además del citoesqueleto, la matriz citoplasmática está impregnada de un intrincado
complejo de orgánulos membranosos y
vesículas que mueven materiales hacia la célula desde el exterior (vía endocítica) y
Figura 4.6 Microtúbulos citoplasmáticos. Micrografía electrónica desde el interior de la célula hacia afuera, así como desde
de una sección transversal a través del axopodio de un protista conocido ubicación a ubicación dentro de la célula (vía biosintética-secretora). En esta sección
como heliozoo (48.000). Tenga en cuenta la matriz paralela de microtúbulos se describen algunos de estos orgánulos. Esta
organizados en forma de espiral. va seguido de un resumen de cómo funcionan los orgánulos en el
vías biosintéticas-secretoras y endocíticas.
de filamentos intermedios, si los hay, en microorganismos eucarióticos es

poco claro. Hasta ahora, han sido identificados y estudiados sólo en El retículo endoplásmico
animales: se ha demostrado que se forman algunos filamentos intermedios El retículo endoplásmico (RE) (figura 4.3 y figura 4.7) está
la lámina nuclear, una estructura que proporciona soporte a la envoltura nuclear (ver una red irregular de ramificación y fusión membranosa
pág. 91); y otros filamentos intermedios ayudan túbulos, alrededor de 40 a 70 nm de diámetro, y muchos sacos aplanados
unir las células para formar tejidos. llamadas cisternas (s., cisterna). La naturaleza del RE varía con
Orgánulos de las vías biosintéticas-secretoras y endocíticas 85
el estado funcional y fisiológico de la célula. En las células que sintetizan una a través de la célula, también participa en la síntesis de muchos de los materiales
gran cantidad de proteínas con fines como la secreción, una gran parte del RE que transporta. Los lípidos y las proteínas son sintetizados por enzimas y
está tachonado en su superficie exterior con ribosomas y se denomina retículo ribosomas asociados al RE. Las cadenas polipeptídicas sintetizadas en los
endoplásmico rugoso (RER). Otras células, como las que producen grandes ribosomas unidos al RER pueden insertarse en la membrana del RE o en su luz
cantidades de lípidos, tienen un RE que carece de ribosomas. Esto es ER suave para transportarse a otra parte. El RE es también un sitio importante de síntesis
(SER). de membrana celular.
El retículo endoplásmico tiene muchas funciones importantes.
No solo transporta proteínas, lípidos y otros materiales
El aparato de Golgi El aparato
de Golgi se compone de cisternas aplanadas en forma de saco apiladas unas

sobre otras (figura 4.8). Estas membranas, como el RE liso, carecen de ribosomas
unidos. Por lo general, hay alrededor de 4 a 8 cisternas en una pila, aunque
puede haber muchas más. Cada una tiene un grosor de 15 a 20 nm y está
separada de otras cisternas por 20 a 30 nm. Una red compleja de túbulos y
retículo vesículas (de 20 a 100 nm de diámetro) se ubica en los bordes de las cisternas.
endoplásmico La pila de cisternas tiene una polaridad definida porque hay dos caras que son
rugoso
bastante diferentes entre sí. Los sacos de la cara cis o de formación a menudo
se asocian con el RE y difieren de los sacos de la cara trans o de maduración en
grosor, contenido de enzimas y grado de formación de vesículas.
Retículo
endoplásmico
liso
El aparato de Golgi está presente en la mayoría de las células eucarióticas,

pero muchos hongos y protozoos ciliados carecen de una estructura bien formada.
A veces, el Golgi consta de una sola pila de cisternas; sin embargo, muchas
celdas pueden contener hasta 20, ya veces más, pilas separadas. Estas pilas de
cisternas, a menudo llamadas dictiosomas, pueden agruparse en una región o
dispersarse por la célula.
El aparato de Golgi empaqueta los materiales y los prepara para la secreción,

Figura 4.7 El retículo endoplásmico. Una micrografía electrónica de y la naturaleza exacta de su función varía según el organismo. Por ejemplo, las
transmisión del cuerpo lúteo en un ovario humano que muestra
escamas superficiales de algunos protistas radiolarios y fotosintéticos flagelados
variaciones estructurales en el retículo endoplásmico eucariótico.
parecen estar construidos dentro del aparato de Golgi y luego transportados a la
Obsérvese la presencia tanto del retículo endoplásmico rugoso
superficie en vesículas.
revestido de ribosomas como del retículo endoplásmico liso sin
El Golgi a menudo participa en el desarrollo de las membranas celulares.
ribosomas (26 500).
túbulos periféricos
Rostro trans o maduro
Vesicula secretora
Dictiosoma
(una pila de
cisternas o
laminillas
aplanadas)
Cis o cara de formación
(a) (B)
Figura 4.8 Estructura del aparato de Golgi. Aparato de Golgi de Euglena gracilis. Las pilas de cisternas se muestran en la micrografía electrónica
(165.000) en (a) y esquemáticamente en (b).
y en el envasado de productos celulares. El crecimiento de algunos hongos. Una característica interesante e importante de la vía secretora biosintética es
Las hifas ocurren cuando las vesículas de Golgi contribuyen con su contenido a su mecanismo de garantía de calidad. Proteínas
la pared en la punta de la hifa. Los protistas (capítulo 25) que no se doblan o se han doblado mal no se transportan a su destino previsto. En
su lugar, se secretan en el citosol,
donde son el objetivo de la destrucción mediante la unión de varios polipéptidos
lisosomas pequeños de ubiquitina, como se detalla en la figura 4.9.
Los lisosomas, o estructuras muy parecidas a ellos, se encuentran en la mayoría de La ubiquitina marca la proteína para su degradación, lo que se logra mediante un
organismos eucarióticos, incluidos protistas, hongos, plantas y animales. Los enorme complejo cilíndrico llamado proteasoma 26S.
lisosomas son aproximadamente esféricos y están encerrados en una sola La proteína se descompone en péptidos más pequeños en un proceso dependiente
membrana; promedian alrededor de 500 nm de diámetro, pero van desde de ATP a medida que se liberan las ubiquitinas. el proteasoma
50 nm a varios m de tamaño. Participan en la digestión intracelular y contienen las también participa en la producción de péptidos para la presentación de antígenos
enzimas necesarias para digerir todo tipo de durante muchas respuestas inmunológicas descritas en el capítulo 31.
macromoléculas Estas enzimas, llamadas hidrolasas, catalizan la
hidrólisis de moléculas y funcionan mejor bajo condiciones ligeramente ácidas
condiciones (generalmente alrededor de pH 3.5 a 5.0). Los lisosomas mantienen una La vía endocítica
ambiente ácido bombeando protones en su interior. La endocitosis se utiliza para introducir materiales en la célula desde el exterior.
Durante la endocitosis, una célula absorbe solutos o partículas encerrando
en vesículas arrancadas de la membrana plasmática. En la mayoría
La vía biosintética-secretora casos, estos materiales se envían a un lisosoma donde se digieren. La endocitosis
La vía biosintética-secretora se utiliza para mover materiales . ocurre regularmente en todas las células como un mecanismo para
a los lisosomas, así como desde el interior de la célula a la célula moléculas de reciclaje en la membrana. Además, algunas células tienen
membrana o exterior celular. El proceso es complejo y no completamente vías endocíticas especializadas que les permiten concentrar materiales fuera de la
entendido. El movimiento de proteínas es de particular importancia. célula antes de introducirlos. Otros utilizan vías endocíticas
y es el centro de esta discusión. vías como mecanismo de alimentación. Muchos virus y otros patógenos intracelulares
Las proteínas destinadas a la membrana celular, los lisosomas o la secreción utilizan vías endocíticas para entrar en las células huésped.
son sintetizadas por los ribosomas adheridos al retículo endoplásmico rugoso (RER) Se han descrito numerosos tipos de endocitosis.
(figura 4.7). Estas proteínas tienen secuencias de aminoácidos que las dirigen a la La fagocitosis implica el uso de protuberancias de la superficie celular para rodear
luz del RER. y engullir partículas. Lo llevan a cabo ciertas células del sistema inmunitario y
por donde se desplazan hasta liberarse en pequeñas vesículas que muchos microbios eucarióticos. Las vesículas endocíticas formadas por fagocitosis
brote de la sala de emergencias. A medida que las proteínas pasan por el RE, se se denominan fagosomas.
a menudo modificado por la adición de azúcares, un proceso conocido como (figura 4.10). Otros tipos de endocitosis también implican la invaginación de la
glicosilación. membrana plasmática. A medida que la membrana se invagina,
Las vesículas liberadas del RE viajan a la cara cis del encierra líquido, materia soluble y, en algunos casos, partículas en
Aparato de Golgi (figura 4.8). Un modelo popular de la vía secretora biosintética la vesícula endocítica resultante. Un ejemplo de endocitosis por
postula que estas vesículas se fusionan para formar el cis la invaginación es endocitosis dependiente de clatrina. La endocitosis dependiente
cara del Golgi. Luego, las proteínas proceden a la cara trans de de clatrina comienza con fosas recubiertas, que son regiones de membrana
Golgi por un proceso llamado maduración cisternal. como las proteinas especializadas recubiertas con la proteína clatrina en
proceden del lado cis al trans, se modifican aún más. el lado citoplasmático. Las vesículas endocíticas se formaron cuando estos
Algunas de estas modificaciones se dirigen a las proteínas para su ubicación final. regiones invaginadas se denominan vesículas recubiertas. Los pozos recubiertos
Por ejemplo, las proteínas lisosomales se modifican mediante la adición de fosfatos tienen receptores en su lado extracelular que se unen específicamente a
a sus azúcares de manosa. macromoléculas, concentrándolas antes de que sean endocitosadas.
Las vesículas de transporte se liberan de la cara trans del Por lo tanto, este mecanismo endocítico se denomina endocitosis mediada por
Golgi. Algunos entregan su contenido a los lisosomas. Otros entregan receptores. Se utiliza endocitosis dependiente de clatrina.
proteínas y otros materiales a la membrana celular. Dos tipos de ingerir cosas tales como hormonas, factores de crecimiento, hierro y colesterol. Otro
Las vesículas transportan materiales a la membrana celular. Un tipo entrega ejemplo de endocitosis por invaginación es la endocitosis dependiente de cave
constitutivamente proteínas de manera no regulada, liberando olae. Las caveolas ("pequeñas cuevas") son diminutas,
al exterior de la célula cuando la vesícula de transporte se fusiona con invaginaciones en forma de matraz de la membrana plasmática (alrededor de 50 a
la membrana plasmática. Otras vesículas, llamadas vesículas secretoras, 80 nm de diámetro) que están enriquecidas en colesterol y en la proteína de
se encuentran sólo en eucariotas multicelulares, donde se observan en células membrana caveolina. Las vesículas se forman cuando las caveolas pellizcan
secretoras como los mastocitos y otras células del apagado se llaman vesículas caveolares. Endocitosis dependiente de caveolas
sistema inmunitario. Las vesículas secretoras almacenan las proteínas que se ha estado implicado en la transducción de señales, el transporte de pequeños
liberarán hasta que la célula reciba una señal adecuada. Una vez recibido, moléculas como el ácido fólico, así como el transporte de macromoléculas. Hay
las vesículas secretoras se mueven hacia la membrana plasmática, se fusionan con ella, pruebas de que toxinas como la toxina del cólera entran
y liberan su contenido al exterior de la celda. Células, tejidos y órganos del sistema sus células diana a través de caveolas. Las caveolas también parecen ser utilizadas por
inmunitario (sección 31.2) muchos virus, bacterias y protozoos para entrar en las células huésped.
Orgánulos de las vías biosintéticas-secretoras y endocíticas 87
ubiquitina
atp
1 Ligadura de proteínas E1, enzima activadora de ubiquitina

de ubiquitina
Pi ADP
E2, enzima conjugadora de ubiquitina
Proteína E3, ubiquitina-proteína ligasa
3 Degradación de la
proteína conjugada con
Cadena de poliubiquitina ubiquitina
unida
19S
2 Reconocimiento atp
de la proteína conjugada 20S
con ubiquitina
19S
Proteasoma 26S Pi ADP
Regeneración de Péptidos degradados

ubiquitina
4 Liberación y reciclaje de
ubiquitina
(a)
Figura 4.9 Degradación de proteínas por proteasoma. (a) El

primer paso en esta ruta de degradación de proteínas es etiquetar
la proteína objetivo con un pequeño polipéptido llamado ubiquitón.
Esto requiere la acción de dos enzimas y se consume energía. Una
vez marcada, la proteína es reconocida por el proteosoma 26S. Pasa
al proteasoma cilíndrico grande y se divide en péptidos más
pequeños, que se liberan en el citoplasma. Los aminoácidos de los
péptidos pequeños se pueden reciclar y utilizar en la síntesis de
nuevas proteínas. Los polipéptidos de ubiquitina se regeneran y
pueden participar en la degradación de otras proteínas. (b) Un
modelo del proteasoma 26S, que muestra su estructura cilíndrica y
la ubicación de la proteína etiquetada dentro del cilindro. (b) Proteasomas
Con la excepción de las vesículas caveolares, todas las demás vesículas Implica el movimiento de los orgánulos a una ubicación más central en la célula
endocíticas eventualmente entregan su contenido a los lisosomas. Sin embargo, y la recuperación selectiva de proteínas de membrana.
la ruta utilizada varía. Las vesículas recubiertas se fusionan con pequeños Los fagosomas toman una ruta ligeramente diferente a los lisosomas; se
orgánulos que contienen enzimas lisosomales. Estos orgánulos se denominan fusionan con endosomas tardíos en lugar de con endosomas tempranos (figura 4.10).
endosomas tempranos (figura 4.10). Los endosomas tempranos maduran en Los materiales para la digestión también pueden llegar a los lisosomas por
endosomas tardíos, que se fusionan con vesículas de transporte del aparato de otra ruta que no implique endocitosis. Las células digieren y reciclan
Golgi y liberan enzimas lisosomales adicionales. Los endosomas tardíos selectivamente los componentes citoplasmáticos (incluidos los orgánulos como
eventualmente se convierten en lisosomas. El desarrollo de endosomas en las mitocondrias) mediante un proceso denominado autofagia. Se cree que los
lisosomas no se comprende bien. Parece que la maduración en componentes celulares a digerir están rodeados por
Fluido extracelular 3. ¿Qué es un proteasoma? ¿Por qué es importante para el buen funcionamiento del
¿retículo endoplásmico?
Membrana 4. ¿Qué son los lisosomas? ¿Cómo participan en la digestión intracelular?

de plasma 5. Describa la ruta biosintética-secretora. ¿A qué destinos lleva esta ruta proteínas y
otros materiales?
citosol 6. Defina endocitosis. Describir la vía endocítica y las tres rutas.
Lípidos de
que entregan materiales a los lisosomas para la digestión. ¿Qué tipo de
membrana
ENDOCITOSIS endocitosis no entrega el material ingerido a los lisosomas?
7. Defina autofagia, autofagosoma, fagosoma, fagocitosis y resid
cuerpo doble.
Bacteria
8. Numerosos patógenos utilizan la endocitosis mediada por caveolas para entrar en
mitocondria sus células huésped. ¿Por qué esta vía de entrada podría ser ventajosa para los
patógenos que la utilizan?
endosoma temprano AUTOFAGIA
FAGOCITOSIS
4.5 RIBOSOMAS EUCARIÓTICOS

El ribosoma eucariótico (es decir, uno que no se encuentra en las mitocondrias y los
endosoma tardío
cloroplastos) es más grande que el ribosoma 70S procariótico. Es un dímero de una
fagosoma autofagosoma
subunidad 60S y 40S, de unos 22 nm de diámetro, y tiene un coeficiente de sedimentación
de 80S y un peso molecular de 4 millones. Los ribosomas eucarióticos pueden estar
asociados con el retículo endoplásmico o libres en la matriz citoplasmática. Cuando se unen
al retículo endoplásmico para formar el RE rugoso, se unen a través de sus subunidades
60S.
lisosoma
Tanto los ribosomas libres como los unidos al RE sintetizan proteínas.
Las proteínas producidas en los ribosomas del RER a menudo se secretan o se insertan en
Figura 4.10 La vía endocítica. Los materiales ingeridos por procesos endocíticos la membrana del RE como proteínas integrales de la membrana. Los ribosomas libres son
(excepto la endocitosis dependiente de caveolas) se entregan a los lisosomas. La ruta los sitios de síntesis de proteínas no secretoras y no de membrana. Algunas proteínas
hacia los lisosomas difiere según el tipo de endocitosis. Además, los componentes celulares sintetizadas por los ribosomas libres se insertan en orgánulos como el núcleo, la mitocondria
se reciclan cuando los autofagosomas los entregan a los lisosomas para su digestión. Este y el cloroplasto. Como se discutió en los capítulos 3 y 11, las chaperonas moleculares
proceso se llama autofagia. ayudan al plegamiento correcto de las proteínas después de la síntesis. También ayudan al
transporte de proteínas a los orgánulos eucarióticos, como las mitocondrias.
una doble membrana, como se muestra en la figura 4.10. Se desconoce el origen de la

membrana, pero se ha sugerido que se utiliza una parte del RE. El autofagosoma resultante
1. Describir la estructura del ribosoma 80S eucariótico y contrastarlo con el
se fusiona con un endosoma tardío de manera similar a la que se observa en los fagosomas.
ribosoma procariótico.
2. ¿En qué difieren en función los ribosomas libres y los unidos al RE?
No importa la ruta que se tome, la digestión ocurre una vez que se forma el lisosoma.
Sorprendentemente, el lisosoma logra esto sin liberar sus enzimas digestivas en la matriz
citoplasmática. A medida que se digieren los contenidos del lisosoma, pequeños productos
de la digestión salen del lisosoma, donde se utilizan como nutrientes o para otros fines. El
lisosoma resultante que contiene material no digerido a menudo se denomina cuerpo
4.6 MITOCONDRIAS
residual. En algunos casos, el cuerpo residual puede liberar su contenido al exterior de la Las mitocondrias (por ejemplo, mitochon drion) , que se encuentran en la mayoría de
célula mediante un proceso llamado secreción de lisosomas. las células eucariotas, se denominan con frecuencia las “centrales eléctricas” de la célula
(figura 4.11). Aquí tiene lugar la actividad del ciclo de los ácidos tricarboxílicos y la
generación de ATP por transporte de electrones y fosforilación oxidativa. En el microscopio
electrónico de transmisión, las mitocondrias suelen ser estructuras cilíndricas y miden
1. ¿En qué se diferencian el retículo endoplásmico rugoso y el liso en términos de aproximadamente de 0,3 a 1,0 m por 5 a 10 m. (En otras palabras, tienen aproximadamente
estructura y función? Enumere los procesos en los que interviene el ER. el mismo tamaño que las células procariotas). Aunque algunas células poseen 1000 o más
mitocondrias, otras, incluidas algunas levaduras, algas unicelulares y protozoos tripanosomas,
2. Describir la estructura de un aparato de Golgi en palabras y con un diagrama. tienen una sola mitocondria tubular gigante retorcida en un red continua
¿En qué se diferencian las caras cis y trans del aparato de Golgi? Enumere las
principales funciones del aparato de Golgi discutidas en el texto.

mitocondrias 89
Exterior
membrana
Interno
membrana
ADN
Inclusión
crestas
Matriz
(a)
mitocondrial interno
membrana (C)
Mitocondrial externo
membrana
Figura 4.11 Estructura mitocondrial. (a) Un

diagrama de la estructura mitocondrial. El inserto muestra el
Enzima sintetizadora de ATP ATP sintasa que recubre el interior
superficie de las crestas. (b) Micrografía electrónica de barrido
(70.000) de una mitocondria fracturada por congelación que muestra la
crestas (flechas). Las estructuras mitocondriales externas e internas
membranas también son evidentes. (c) Transmisión de electrones
micrografía de una mitocondria del páncreas de un murciélago

(85.000). Tenga en cuenta las membranas mitocondriales externas e internas,
crestas e inclusiones en la matriz. La mitocondria es
(B) rodeado de retículo endoplásmico rugoso.
trabajo que impregna el citoplasma (figura 4.12). El ácido tricarboxílico ribosomas y se asemejan a los de las bacterias en varios aspectos, incluido su
ciclo (sección 9.4); Transporte de electrones y fosforilación oxidativa (sección 9.5) tamaño y composición de subunidades. En muchos organismos,
La mitocondria está limitada por dos membranas, una externa El ADN mitocondrial es un círculo cerrado, como el ADN bacteriano.
membrana mitocondrial separada de una mitocondrial interna Sin embargo, en algunos protistas, el ADN mitocondrial es lineal.
membrana por un espacio intermembrana de 6 a 8 nm (figura 4.11). los Cada compartimiento mitocondrial es diferente de los demás.
La membrana mitocondrial externa contiene porinas y, por lo tanto, es similar a la en composición química y enzimática. Las membranas mitocondriales externas e
membrana externa de las bacterias gramnegativas. El interior internas, por ejemplo, poseen lípidos diferentes.
membrana tiene pliegues especiales llamados crestas (s., crista), que Enzimas y transportadores de electrones involucrados en el transporte de electrones y
aumentar considerablemente su superficie. La forma de las crestas difiere en la fosforilación oxidativa (la formación de ATP como consecuencia del transporte de
mitocondrias de varias especies. Los hongos tienen crestas en forma de placa electrones) se localizan únicamente en la membrana interna. Las enzimas del ciclo
(laminares), mientras que los flagelados euglenoides pueden tener crestas. de los ácidos tricarboxílicos y el catabolismo de los ácidos grasos se encuentran en
en forma de discos. Las crestas tubulares se encuentran en una variedad de la matriz. Catabolismo de lípidos
eucariotas; sin embargo, las amebas pueden poseer mitocondrias con (sección 9.9)
crestas en forma de vesículas (figura 4.13). La membrana interna encierra la matriz La mitocondria utiliza su ADN y ribosomas para sintetizar
mitocondrial, una matriz densa que contiene ribosomas, ADN y, a menudo, grandes algunas de sus propias proteínas. De hecho, las mutaciones en las mitocondrias
gránulos de fosfato de calcio. Los ribosomas mitocondriales son más pequeños que El ADN a menudo conduce a enfermedades graves en los humanos. Sin embargo,
los citoplasmáticos. la mayoría de las proteínas mitocondriales se fabrican bajo la dirección de

(a)
(a) (B)
Figura 4.12 Tripanosoma mitocondrial. Las mitocondrias gigantes

de los tripanosomas. (a) Mitocondria de Crithidia fasciculata con
cinetoplasto, K. El cinetoplasto contiene ADN que codifica para ARN
mitocondrial y proteína. (b) Mitocondria de Trypanosoma cruzi con una
flecha que indica la posición del cinetoplasto.
el núcleo. Las mitocondrias se reproducen por fisión binaria. Debido a que las mitocondrias se
parecen a las bacterias hasta cierto punto, se cree que surgieron de asociaciones simbióticas
(B)
entre bacterias y células más grandes (Diversidad microbiana y ecología 4.2). Evolución
microbiana: origen endosimbiótico de mitocondrias y cloroplastos (sección 19.1)
Figura 4.13 Crestas mitocondriales. Mitocondrias con una variedad de
formas de crestas. (a) Mitocondrias del moho mucilaginoso
Schizoplasmodiopsis micropunctata. Obsérvense las crestas tubulares
(49.500). (b) El protista Actinosphaerium con crestas vesiculares (75.000).
4.7 CLOROPLASTOS
Los plástidos son orgánulos citoplasmáticos de protistas y plantas fotosintéticos que a
menudo poseen pigmentos como clorofilas y carotenoides, y son los sitios de síntesis y
almacenamiento de reservas de alimentos. El tipo más importante de plástido es el cloroplasto. Las reacciones fotosintéticas están separadas estructuralmente en el cloroplasto al igual
que el transporte de electrones y el ciclo del ácido tricarboxílico lo están en la mitocondria. El
Los cloroplastos contienen clorofila y usan la energía de la luz para convertir el CO2 y el atrapamiento de la energía luminosa para generar ATP, NADPH y O2 se conoce como
agua en carbohidratos y O2. Es decir, son el sitio de la fotosíntesis. reacciones luminosas. Estas reacciones se localizan en las membranas de los tilacoides,
donde también se encuentran la clorofila y los componentes de transporte de electrones. El
Aunque los cloroplastos son bastante variables en tamaño y forma, comparten muchas ATP y el NADPH formados por las reacciones luminosas se utilizan para formar carbohidratos
características estructurales. La mayoría de las veces son ovales con dimensiones de 2 a 4 m a partir de CO2 y agua en las reacciones oscuras. Las reacciones oscuras tienen lugar en el
por 5 a 10 m, pero algunas algas poseen un enorme cloroplasto que llena gran parte de la estroma. Fototrofia (sección 9.12)
célula. Al igual que las mitocondrias, los cloroplastos están rodeados por dos membranas
(figura 4.14). Una matriz, el estroma, se encuentra dentro de la membrana interna. Contiene
ADN, ribosomas, gotitas de lípidos, gránulos de almidón y un complejo sistema de membranas Los cloroplastos de muchas algas contienen un pirenoide (figura 4.24b), una región
internas cuyos componentes más prominentes son sacos aplanados delimitados por densa de proteína rodeada de almidón u otro polisacárido. Los pirenoides participan en la
membranas, los tilacoides. Grupos de dos o más tilacoides están dispersos dentro del estroma síntesis de polisacáridos.
de la mayoría de los cloroplastos de las algas (figuras 4.14 y 4.24b). En algunos protistas
1. Describa en detalle la estructura de las mitocondrias y los cloroplastos. ¿Dónde se
fotosintéticos, varios tilacoides en forma de disco se apilan unos sobre otros como monedas
para formar grana (s., granum). encuentran los diferentes componentes de los sistemas de captura de energía de
estos orgánulos?
2. Definir plástido, reacciones oscuras, reacciones luminosas y pirenoide.
El Núcleo y la División Celular 91
4.2 El origen de la célula eucariótica

Las profundas diferencias entre las células eucariotas y procariotas conducen a la formación de cloroplastos y eucariotas fotosintéticos.
han estimulado mucha discusión sobre cómo surgió la célula eucariótica más Algunos han especulado que los cilios y los flagelos podrían haber surgido de
compleja. Algunos biólogos creen que el "protoeu cariote" original era una gran la unión de bacterias espiroquetas (ver capítulo 21) a la superficie
arquea aeróbica o bacteria que se formó de las células eucarióticas, al igual que las espiroquetas se adhieren a la
mitocondrias, cloroplastos y núcleos cuando su membrana plasmática superficie del protozoo móvil Myxotricha paradoxa que crece en
material genético invaginado y encerrado en una doble membrana. el tracto digestivo de las termitas.
Los orgánulos podrían entonces evolucionar de forma independiente. también es posible Hay evidencia para apoyar la teoría endosimbiótica. Ambas cosas
que una gran cianobacteria perdió su pared celular y se volvió fagocítica. las mitocondrias y los cloroplastos se asemejan a las bacterias en tamaño y
Posteriormente, cloroplastos, mitocondrias y núcleos primitivos se formarían apariencia, contienen ADN en forma de un círculo cerrado como el de
por la fusión de tilacoides y células endoplasmáticas. bacterias y se reproducen de forma semiautónoma. mitocondrial y
reticulum cisternae para encerrar áreas específicas del citoplasma. Los ribosomas del cloroplasto se parecen más a los ribosomas procarióticos.
Con mucho, la teoría más popular sobre el origen de las células eucariotas. estrechamente que los de la matriz citoplásmica eucariótica. Las secuencias
es la teoría endosimbiótica. En resumen, se supone que la célula procariota de los genes del cloroplasto y mitocondrial para el ribosoma
ancestral, que pudo haber sido un archaeon, perdió su célula El ARN y el ARN de transferencia son más similares a las secuencias de genes bacterianos.
pared y ganó la capacidad de obtener nutrientes mediante la fagocitosis que a los de los genes nucleares eucariotas rRNA y tRNA. Finalmente,
otros procariotas. Cuando surgieron las cianobacterias fotosintéticas, la hay asociaciones simbióticas que parecen ser endosimbiosis bacterianas en
El ambiente lentamente se volvió óxico. Si es un anaerobio, ameboides, las que se pierden las características distintivas de las procariotas. Por ejemplo,
procariota fagocítica, posiblemente ya poseyendo un desarrollado el flagelado protozoario Cyanophora
núcleo: engulló una célula bacteriana aeróbica y estableció una relación paradoxa tiene orgánulos fotosintéticos llamados cianellas con un
simbiótica permanente con ella, el huésped sería mejor estructura similar a la de las cianobacterias y restos de pepti doglycan en sus
adaptado a su entorno cada vez más óxico. el endosimbiótico paredes. Su ADN es mucho más pequeño que el de
la bacteria aeróbica eventualmente se convertiría en la mitocondria. De manera cianobacterias y se asemeja al ADN del cloroplasto. el endosimbiótico
similar, las asociaciones simbióticas con cianobacterias podrían La teoría se analiza con más detalle en el capítulo 19.
3. ¿Cuál es el papel del ADN mitocondrial? El núcleo está delimitado por la envoltura nuclear (figuras 4.2
4. ¿Qué características de los cloroplastos y las mitocondrias respaldan la teoría y 4.24b), una estructura compleja que consta de interior y exterior
endosimbiótica de su evolución? membranas separadas por un espacio perinuclear de 15 a 75 nm. La envolvente
es continua con el ER en varios puntos y su exterior
La membrana está cubierta de ribosomas. Una red de intermediarios
4.8 EL NÚCLEO Y LA DIVISIÓN CELULAR filamentos, llamado lámina nuclear, se observa en las células animales.
El núcleo es, con mucho, el orgánulo visualmente más prominente en las células Se apoya contra la superficie interior del sobre y lo sostiene.
eucarióticas. Fue descubierto temprano en el estudio de la estructura celular y La cromatina generalmente se asocia con la membrana interna.
Robert Brown demostró en 1831 que era una constante. Muchos poros nucleares penetran en la envoltura (figura 4.15),
característica de las células eucariotas. El núcleo es el depósito de la y cada poro está formado por una fusión de las membranas exterior e interior.
información genética de la célula y es su centro de control. Los poros tienen alrededor de 70 nm de diámetro y en conjunto ocupan alrededor
del 10 al 25% de la superficie nuclear. Un anillo complejo
arreglo de material granular y fibroso llamado anillo
Estructura nuclear se encuentra en el borde de cada poro.
Los núcleos son cuerpos esféricos delimitados por membranas de aproximadamente 5 a 7 Los poros nucleares sirven como ruta de transporte entre el núcleo y el
m de diámetro (figuras 4.2 y 4.24b). Material fibroso denso citoplasma circundante. Se han observado partículas
llamada cromatina se puede ver dentro del nucleoplasma de la moviéndose hacia el núcleo a través de los poros. Aunque no se comprende la
núcleo de una célula teñida. Esta es la parte que contiene ADN de función del anillo, puede regular o
el núcleo. En las células que no se dividen, la cromatina está dispersa, pero ayudar al movimiento del material a través de los poros. Sustancias
se condensa durante la división celular para hacerse visible como cromosomas. también se mueven directamente a través de la envoltura nuclear por desconocido
Parte de la cromatina, la eucromatina, está poco organizada mecanismos.
y contiene aquellos genes que se expresan activamente. Por el contrario, la A menudo, la estructura más notable dentro del núcleo es el
heterocromatina está más enrollada, aparece más oscura en nucléolo (figura 4.16). Un núcleo puede contener de uno a muchos
el microscopio electrónico, y no es genéticamente activo la mayor parte de nucleolos. Aunque el nucléolo no está encerrado en una membrana, es
el tiempo. un orgánulo complejo con regiones granulares y fibrilares separadas.
Educación física
1ÿ
Figura 4.15 El Núcleo. Una preparación de grabado por congelación del

conidio del hongo Geotrichum candidum (44,600). Obsérvese la gran
PAGS
superficie nuclear convexa con poros nucleares dispersos sobre ella.
Chl
ARN (ARNr). Este ARN se sintetiza en una sola pieza larga que se corta para
formar las moléculas finales de ARNr. Los rRNA procesados luego se
(a) combinan con proteínas ribosómicas (que han sido sintetizadas en la matriz
citoplasmática) para formar subunidades ribosómicas parcialmente completas.
Los gránulos que se ven en el nucléolo son probablemente estas subunidades.
Envoltura de cloroplasto estroma Matriz de
(doble membrana) lamela estroma Las subunidades ribosómicas inmaduras luego abandonan el núcleo,
presumiblemente a través de los poros de la cubierta nuclear, y maduran en
el citoplasma.
Mitosis y Meiosis
Cuando un microorganismo eucariótico se reproduce asexualmente, su
Granum material genético debe duplicarse y luego separarse para que cada nuevo
núcleo posea un conjunto completo de cromosomas. Este proceso de división
nuclear y distribución cromosómica en las células eucarióticas se denomina
mitosis. La mitosis en realidad ocupa solo una pequeña porción de la vida de
un microorganismo, como puede verse al examinar el ciclo celular (figura
ticaloides 4.17). El ciclo celular es la secuencia total de eventos en el ciclo de crecimiento-
(B)
división entre el final de una división y el final de la siguiente. El crecimiento
celular tiene lugar en la interfase, esa parte del ciclo entre períodos de mitosis.
Figura 4.14 Estructura del cloroplasto. (a) El cloroplasto (Chl), del
flagelado euglenoideo Colacium cyclopicolum. El cloroplasto está delimitado
La interfase se compone de tres partes. El período G1 ( período de intervalo
por una doble membrana y tiene sus tilacoides en grupos de tres o más. Se
1) es un período de síntesis activa de ARN, ribosomas y otros constituyentes
pueden ver un gránulo de paramilón (P), gotitas de lípidos (L) y las tiras
citoplasmáticos acompañado de un crecimiento celular considerable. A esto
peliculares (Pe) (40 000). (b) Diagrama de la estructura del cloroplasto.
le sigue el período S (período de síntesis) en el que el ADN se replica y se
duplica en cantidad. Finalmente, hay una segunda brecha, el período G2 ,
cuando la célula se prepara para la mitosis, el período M, mediante actividades
Está presente en células que no se dividen, pero frecuentemente desaparece como la síntesis de proteínas especiales de división. La duración total del
durante la mitosis. Después de la mitosis, el nucléolo se reforma alrededor ciclo difiere considerablemente entre microorganismos, generalmente debido
del organizador nuclear, una parte particular de un cromosoma específico. a variaciones en la duración de G1.
El nucléolo juega un papel importante en la síntesis de ribosomas. El Los eventos mitóticos se resumen en la figura 4.17. Durante la mitosis, el
ADN organizador nucleolar dirige la producción de ribosomas material genético duplicado durante el período S se distribuye
El Núcleo y la División Celular 93
Retículo endoplásmico cromatina igualmente a los dos nuevos núcleos por elementos del citoesqueleto para que cada uno
tiene un conjunto completo de genes. Hay cuatro fases en la mitosis. En profase,
los cromosomas, cada uno con dos cromátidas, se vuelven visibles
y se mueven hacia el ecuador de la celda. Se forma el huso mitótico,
el nucléolo desaparece y la envoltura nuclear comienza a disolverse. Los
cromosomas están dispuestos en el centro del huso.
durante la metafase y la envoltura nuclear desaparece. Durante
anafase las cromátidas en cada cromosoma se separan y se mueven
hacia los polos opuestos del husillo (figura 4.18). Finalmente, durante la telofase,
las cromátidas se vuelven menos visibles, el nucléolo
reaparece, y una envoltura nuclear se vuelve a ensamblar alrededor de cada conjunto de
cromátidas para formar dos nuevos núcleos. Las células de la progenie resultantes
tienen el mismo número de cromosomas que el progenitor. Así después
mitosis, un organismo diploide seguirá siendo diploide.
La mitosis en algunos microorganismos eucarióticos puede diferir de
que se muestra en la figura 4.17. Por ejemplo, la envoltura nuclear
no desaparece en muchos hongos y algunos protistas. Frecuentemente
Nuclear Nuclear nucléolo
citocinesis, la división del citoplasma de la célula parental para formar
poro sobre
nuevas células, comienza durante la anafase y termina al final de
telofase. Sin embargo, la mitosis puede tener lugar sin citocinesis para
Figura 4.16 Nucléolo. El nucléolo es un prominente
generar células multinucleadas o cenocíticas.
característica del núcleo. Actúa en la síntesis de ARNr y en la
Muchos microorganismos tienen una fase sexual en sus ciclos de vida.
ensamblaje de subunidades ribosómicas. La cromatina, los poros nucleares y la
(figura 4.19). En esta fase, deben reducir su cromosoma.
envoltura nuclear también son visibles en esta micrografía electrónica de un
número a la mitad, del estado diploide al haploide o 1N (una sola copia de cada
núcleo en interfase.
cromosoma). Las células haploides pueden inmediatamente
actúan como gametos y se fusionan para reformar organismos diploides o pueden formar
gametos sólo después de un retraso considerable (figura 4.19). El proceso
interfase Mitosis
PAGS
ro hasmi
pags
METRO
mit
ahpags
asmi
A
a
norte
h
pags
Cromosoma G2 mi
replicación citocinesis
S METRO
T
mi
G1
h
Inicial mi
crecimiento
Figura 4.17 El ciclo celular eucariótico. La duración del período M se ha aumentado desproporcionadamente para mostrar la
fases de la mitosis. Período G1 : síntesis de ARNm, ARNt, ribosomas y constituyentes citoplasmáticos. Nucleolus crece rápidamente. Período S: rápido
Síntesis y duplicación de ADN nuclear e histonas. Período G2 : preparación para la mitosis y división celular. Período M: mitosis (profase,
metafase, anafase, telofase) y citocinesis.
Polo
Polo Polo de microtúbulos superpuestos Polo Microtúbulos superpuestos 2 micras
metafase Anafase tardía
Figura 4.18 Mitosis. En estas micrografías electrónicas de diatomeas en división, la superposición de los microtúbulos disminuye notablemente durante
Elongación del huso a medida que la célula pasa de la metafase a la anafase.
diploide 3. Describir el ciclo celular eucariótico, sus períodos y el proceso de mitosis.

organismo 4. ¿Qué es la meiosis, cómo se lleva a cabo y cuál es su papel en el ciclo de
vida microbiano?
Mitosis
2N 4.9 CUBIERTAS DE CELDAS EXTERNAS

Fusión
1N Los microorganismos eucarióticos difieren mucho de los procariotas en el

estructuras de soporte o protección que tienen fuera del plasma
membrana. A diferencia de la mayoría de las bacterias, muchos eucariotas carecen de
haploide
célula
pared celular externa. La ameba es un excelente ejemplo. eucariótico
Las membranas celulares, a diferencia de la mayoría de las membranas procarióticas, contienen
gametos esteroles como el colesterol en sus bicapas lipídicas, y esto puede hacer
ellos mecánicamente más fuerte, reduciendo así la necesidad de externo
apoyo. Por supuesto, muchos eucariotas tienen una célula externa rígida.
Figura 4.19 Ciclo de Vida Eucariótico Generalizado.
muro. Las paredes celulares de los protistas fotosintéticos suelen tener una
apariencia en capas y contienen grandes cantidades de polisacáridos.
por el cual el número de cromosomas se reduce a la mitad con cada como celulosa y pectina. Además, sustancias inorgánicas como
La célula hija que recibe un juego completo de cromosomas se llama puede estar presente sílice (en diatomeas) o carbonato de calcio. hongos
mitosis. Los ciclos de vida pueden ser bastante complejos en los microorganismos las paredes celulares normalmente son rígidas. Su composición exacta varía con
eucarióticos y se analizan con más detalle en los capítulos 25 y 26. el organismo; normalmente están presentes celulosa, quitina o glucano (un polímero
La meiosis es bastante compleja e implica dos etapas. El primero de glucosa diferente de la celulosa). A pesar de su naturaleza la
La etapa difiere notablemente de la mitosis. Durante la profase, los cromosomas Los materiales rígidos en las paredes de las células eucarióticas son químicamente más simples que
homólogos se juntan y yacen uno al lado del otro, un proceso peptidoglicano procariótico. La pared celular bacteriana (sección 3.6)
conocida como sinapsis. Los homólogos se mueven a polos opuestos en Muchos protistas tienen un mecanismo de soporte diferente, la película (figura
anafase, reduciendo así el número de cromosomas a la mitad. los 4.14a) . Esta es una capa relativamente rígida de componentes.
La segunda etapa de la meiosis es similar a la mitosis en términos de mecánica y las justo debajo de la membrana plasmática (a veces, la membrana plasmática también
cromátidas de cada cromosoma están separadas. Después se considera parte de la película). La película puede ser
finalización de la meiosis I y la meiosis II, la célula diploide original bastante simple en estructura. Por ejemplo, Euglena tiene una serie de
se ha transformado en cuatro células haploides. tiras superpuestas con una cresta en el borde de cada tira encajando en
una ranura en la contigua. Por el contrario, las películas de ciliado
1. Describe la estructura del núcleo. ¿Qué son la eucromatina y la
Los protozoos son excepcionalmente complejos con dos membranas y un
heterocromatina? ¿Cuál es el papel de los poros en la envoltura nuclear? variedad de estructuras asociadas. Aunque las películas no son tan
2. Discuta brevemente la estructura y función del nucléolo. ¿Qué es el fuertes y rígidos como paredes celulares, dan a sus poseedores una forma
organizador nuclear? característica.
Cilios y flagelos 95
4.10 CILIOS Y FLAGELOS fase de recuperación mientras otros realizan su brazada efectiva (figura
4.22). Esta coordinación permite que el organismo se desplace suavemente
Los cilios (s., cilio) y los flagelos (s., flagelo) son los orgánulos más por el agua.
prominentes asociados con la motilidad. Aunque ambos son como látigos A pesar de sus diferencias, los cilios y flagelos son muy similares en
y golpean para mover el microorganismo, se diferencian entre sí de dos ultraestructura. Son cilindros unidos a membrana de unos 0,2 m
maneras. En primer lugar, los cilios suelen tener solo de 5 a 20 m de
largo, mientras que los flagelos tienen de 100 a 200 m de largo. En
WF TF
segundo lugar, sus patrones de movimiento suelen ser distintivos (figura
4.20). Los flagelos se mueven de forma ondulante y generan ondas planas
o helicoidales que se originan en la base o en la punta. Si la onda se
mueve desde la base hasta la punta, la celda es empujada; un latido que
viaja desde la punta hacia la base tira de la celda a través del agua. A
veces, el flagelo tendrá pelos laterales llamados filamentos flimmer (los
pelos más gruesos y rígidos se llaman mastigonemas). Estos filamentos
cambian la acción flagelar de modo que una onda que desciende por el
filamento hacia la punta tira de la célula en lugar de empujarla. Tal flagelo
a menudo se denomina flagelo de oropel, mientras que el flagelo desnudo
se conoce como flagelo de latigazo cervical (figura 4.21). Los cilios, por
otro lado, normalmente tienen un latido con dos fases distintivas. En el
golpe efectivo, el cilio atraviesa el fluido circundante como un remo,
impulsando así al organismo en el agua. Luego, el cilio se dobla a lo largo
de su longitud mientras se tira hacia adelante durante el movimiento de
recuperación en preparación para otro movimiento efectivo. Un
microorganismo ciliado en realidad coordina los latidos para que algunos de sus cilios estén en el
Figura 4.21 Latigazo cervical y flagelos de oropel. Micrografía

electrónica de transmisión de un flagelo de latigazo cervical sombreado,
WF, y un flagelo de oropel, TF, con mastigonemas.
Figura 4.20 Patrones de movimiento flagelar y ciliar.

El movimiento flagelar y ciliar a menudo toma la forma de ondas.
Los flagelos (ilustración de la izquierda) se mueven desde la base del
flagelo hasta su punta o en la dirección opuesta. El movimiento de estas
ondas impulsa al organismo. El latido de un cilio (ilustración de la
derecha) se puede dividir en dos fases. En la brazada efectiva, el cilio
permanece bastante rígido mientras se balancea por el agua. A esto le Figura 4.22 Coordinación de la actividad ciliar. Una micrografía
sigue una brazada de recuperación en la que el cilio se dobla y vuelve a su electrónica de barrido de Paramecium que muestra cilios (1500). El
posición inicial. Las flechas negras indican la dirección del movimiento del latido ciliar está coordinado y se mueve en ondas por la superficie del
agua en estos ejemplos. protozoo, como se puede ver en la fotografía.
en diámetro. Situado en la matriz del orgánulo hay un complejo, el axonema, que consta de el titular es el flagelado Monas stigmatica, que nada a una velocidad de 260 m/segundo
nueve pares de dobletes de microtúbulos dispuestos en un círculo alrededor de dos túbulos (aproximadamente 40 celdas de longitud por segundo); el flagelado euglenoides común,
centrales (figura 4.23). Esto se llama el patrón 9 2 de microtúbulos. Cada doblete también Euglena gracilis, viaja a unos 170 mo 3 longitudes de celda por segundo. El protozoario
tiene pares de brazos que se proyectan desde el subtúbulo A (el microtúbulo completo) hacia ciliado Paramecium caudatum nada a unos 2.700 m/segundo (12 longitudes por segundo).
un doblete vecino. Un rayo radial se extiende desde el subtúbulo A hacia el par interno de Tales velocidades son equivalentes o mucho más rápidas que las observadas en animales
microtúbulos con su vaina central. superiores, pero no tan rápidas como las de los procariotas.
Estos microtúbulos son similares a los que se encuentran en el citoplasma.

Cada uno está formado por dos tipos de subunidades de tubulina, - y -tubulinas, que se
asemejan a la proteína contráctil actina en su composición. 1. ¿En qué se diferencian los microorganismos eucarióticos de los procariotas con
Componentes externos a la pared celular: flagelos y motilidad (sección 3.9) respecto a las estructuras protectoras o de soporte externas a la membrana plasmática?
El cuerpo abasal se encuentra en el citoplasma en la base de cada cilio o flagelo. Es Describe la película e indica qué microorganismos la tienen.
un cilindro corto con nueve tripletes de microtúbulos alrededor de su periferia (un patrón de 9 2. Prepara y rotula un diagrama que muestre la estructura detallada de un cilio o flagelo.
0) y está separado del resto del orgánulo por una placa basal. El cuerpo basal dirige la ¿Cómo se mueven los cilios y los flagelos y cuál es el papel de la dineína en el
construcción de estos orgánulos. Los cilios y los flagelos parecen crecer mediante la adición proceso? Contrasta las formas en que los flagelos y los cilios impulsan a los
de subunidades de microtúbulos preformados en sus puntas. microorganismos a través del agua.
3. Comparar la estructura y el mecanismo de acción de los flagelos procarióticos y

Los cilios y los flagelos se doblan porque los dobletes de microtúbulos adyacentes se eucarióticos.
deslizan uno junto al otro mientras mantienen sus longitudes individuales.
Los brazos dobletes (figura 4.23), de unos 15 nm de largo, están hechos de la proteína
dineína. El ATP impulsa el movimiento de cilios y flagelos, y la dineína aislada hidroliza el
4.11 COMPARACIÓN DE CÉLULAS
ATP. Parece que los brazos de dineína interactúan con los subtúbulos B de los dobletes
PROCARIÓTICAS Y EUCARIÓTICAS
adyacentes para provocar el deslizamiento. Los radios radiales también participan en este
movimiento deslizante. Una comparación de las células de la figura 4.24 demuestra que existen muchas diferencias
Los cilios y los flagelos laten a una velocidad de alrededor de 10 a 40 golpes u ondas fundamentales entre las células eucarióticas y las procarióticas. Las células eucarióticas
por segundo y propulsan a los microorganismos rápidamente. El record tienen un núcleo encerrado en una membrana. En
Brazo
exterior de dineína
Brazo
interno de dineína
microtúbulo central
habló la cabeza
radios radiales
Microtúbulo
doblete
enlace nexin
vaina central
Subtúbulo A
Subtúbulo B
(a) (B)
Figura 4.23 Estructura de cilios y flagelos. (a) Una micrografía electrónica de una sección transversal de un cilio. Obsérvense los dos microtúbulos
centrales rodeados por nueve dobletes de microtúbulos (160 000). (b) Diagrama de la estructura de los cilios y los flagelos.
Comparación de células procarióticas y eucarióticas 97
Basal flagelar
cuerpo
Membrana de plasma
Pared celular
Cuerpo de inclusión de PHB

Núcleo
Ribosomas
nucléolo
vacuola
cloroplasto
nucleoide
tilacoides
“mesosoma”
Pared celular gránulos de almidón pirenoide

(a) (B)
Figura 4.24 Comparación de la estructura de las células procarióticas y eucarióticas. (a) El procariota Bacillus megaterium (30.500). (b) El
alga eucariótica Chlamydomonas reinhardtii, una célula deflagelada. Obsérvese el gran cloroplasto con su cuerpo pirenoide (30.000).
Por el contrario, las células procarióticas carecen de un verdadero núcleo delimitado A pesar de las muchas diferencias significativas entre estos dos
por membranas. Bacteria y Archaea son procariotas; todos los demás organismos— formas celulares básicas, son notablemente similares en el bioquímico
hongos, protistas, plantas y animales—son eucarióticos. La mayoría de las procariotas nivel como discutimos en los capítulos siguientes. Los procariotas y los eucariotas se
son más pequeñas que las células eucariotas, a menudo del tamaño de componen de componentes químicos similares. Con un
mitocondrias eucarióticas y cloroplastos. Con pocas excepciones, el código genético es el mismo en ambos, al igual que la forma
La presencia del núcleo eucariótico es la más evidente. en el que se expresa la información genética en el ADN. Los principios subyacentes a
diferencia entre estos dos tipos de células, pero muchos otros importantes los procesos metabólicos y muchas vías metabólicas importantes son idénticos. Así,
existen distinciones. Está claro en la tabla 4.2 que las procariotas bajo las profundas diferencias estructurales y funcionales entre procariotas y
Las células son mucho más simples estructuralmente. En particular, una extensa
y diversa colección de orgánulos delimitados por membranas es eucariotas, hay una unidad aún más fundamental: una unidad molecular que es básica
desaparecido. Además, los procariotas son más simples funcionalmente en para todos los procesos de vida conocidos.
varias maneras. Carecen de mitosis y meiosis, y tienen una organización genética más
simple. Muchos procesos eucarióticos complejos 1. Resuma las principales diferencias entre procariotas y eucariotas. Cómo
están ausentes en los procariotas: endocitosis, digestión intracelular, son similares?
flujo citoplasmático dirigido, y el movimiento ameboides, son 2. ¿Qué características hacen que Archaea se parezca más a los eucariotas? que caracteristicas
sólo algunos. hacerlos más como bacterias?

Tabla 4.2 Comparación de células procarióticas y eucarióticas

procariotas eucariotas
Propiedad bacterias arqueas eukaria
Organización de
Material genético
verdadera membrana- No No sí
núcleo unido
ADN complejado No Algunos sí
con histonas
cromosomas Por lo general, un cromosoma circular Por lo general, un cromosoma circular Más de uno; los cromosomas son
lineales
plásmidos Muy común Muy común Raro
Intrones en genes No No sí
nucléolo No No sí
mitocondrias No No sí
cloroplastos No No sí
Membrana de plasma fosfolípidos y hopanoides unidos diéteres de glicerol y tetraéteres de Fosfolípidos y esteroles unidos
lípidos a éster; algunos tienen esteroles diglicerol; algunos tienen esteroles a éster
flagelos De tamaño submicroscópico; compuesto De tamaño submicroscópico; compuesto De tamaño microscópico; membrana
por una fibra proteica por una fibra proteica ligado; por lo general 20 microtúbulos
en 9 2 patrón
endoplásmico No No sí
retículo
Aparato de Golgi No No sí
Peptidoglicano en sí No No
Paredes celulares
Tamaño del ribosoma 70S 70S años 80
lisosomas No No sí
citoesqueleto Rudimentario Rudimentario sí
Vesículas de gas sí sí No
Resumen
4.1 Descripción general de la estructura de las células eucarióticas 4.3 Matriz citoplasmática, microfilamentos, filamentos intermedios y
microtúbulos
un. La célula eucariótica tiene un verdadero núcleo delimitado por membranas y muchos miembros.
orgánulos branosos (tabla 4.1; figura 4.2). un. La matriz citoplasmática contiene microfilamentos, filamentos intermedios y microtúbulos,
B. Los orgánulos membranosos compartimentan el citoplasma de la célula. Esta pequeños orgánulos responsables en parte de la estructura y el movimiento celular.
permite que la célula lleve a cabo una variedad de reacciones bioquímicas simultáneamente. Estos y otros tipos de filamentos se organizan en un citoesqueleto (figura 4.5).
También proporciona más área de superficie para actividades asociadas a la membrana, como B. Se han observado microfilamentos y microtúbulos en microbios eucarióticos.
respiración. Los microfilamentos están compuestos por proteínas de actina; Los microtúbulos están compuestos por
-tubulina y -tubulina.
4.2 La membrana de plasma y la estructura de la membrana C. Los filamentos intermedios se ensamblan a partir de una familia heterogénea de proteínas. No
han sido identificados ni estudiados en microbios eucarióticos.
un. Las membranas eucarióticas son similares en estructura y función a las de bacte
ría Los dos difieren en términos de su composición lipídica.
4.4 Orgánulos de las vías biosintética-secretora y endocítica
B. Las membranas eucarióticas contienen microdominios llamados balsas lipídicas. Están
enriquecidos con ciertos lípidos y proteínas y participan en una variedad de funciones celulares. un. La matriz citoplasmática está impregnada de un complejo de organelos membranosos y
procesos. vesículas. Algunos están involucrados en la síntesis y secreción de ma
Resumen 99
terials (vía biosintética-secretora). Algunos están involucrados en la captación de materiales de 4.8 El núcleo y la división celular
los medios extracelulares (vía endocítica). B. El retículo endoplásmico (RE) es una red irregular
un. El núcleo es un orgánulo grande que contiene los cromosomas de la célula. Está delimitado por
de túbulos y sacos aplanados (cisternas). El RE puede tener ribosomas adheridos y puede estar una envoltura compleja de doble membrana perforada por poros a través de los cuales pueden
activo en la síntesis de proteínas (retículo endoplásmico rugoso), o puede carecer de ribosomas moverse los materiales (figura 4.15). B. El nucléolo se encuentra dentro del núcleo y participa
(RE liso) (figura 4.7). C. El ER puede donar materiales al aparato de Golgi, un orgánulo
en la síntesis de ri
compuesto por una o más pilas de cisternas (figura 4.8). Este orgánulo prepara y empaqueta
ARN bosómico y subunidades ribosómicas (figura 4.16).
los productos celulares para su secreción. D. El aparato de Golgi también genera vesículas que
C. Los cromosomas eucarióticos se distribuyen a las células hijas durante la división celular por
transportan enzimas hidrolíticas y otras proteínas a los lisosomas. Los lisosomas son orgánulos
mitosis (figura 4.18). La meiosis se utiliza para reducir a la mitad el número de cromosomas
que contienen enzimas digestivas y ayudan en la digestión intracelular de los materiales
durante la reproducción sexual.
extracelulares que les llegan por endocitosis (figura 4.10).
4.9 Cubiertas de celdas externas
un. Cuando hay una pared celular, se construye a partir de polisacáridos, como la celulosa, que
son químicamente más simples que el peptidoglicano, la molécula que se encuentra en las
mi. Los eucariotas ingieren materiales utilizando varios tipos de endocitosis. Estos incluyen paredes celulares bacterianas.
fagocitosis, endocitosis dependiente de clatrina y endocitosis dependiente de caveolas. Algunas
B. Muchos protozoos tienen una película en lugar de una pared celular.
macromoléculas se unen a los receptores antes de la endocitosis en un proceso llamado
endocitosis mediada por receptores.
4.10 Cilios y flagelos
4.5 Ribosomas eucarióticos a. un. Muchas células eucarióticas son móviles debido a los cilios y flagelos, orgánulos delimitados
por membranas con nueve dobletes de microtúbulos que rodean dos microtúbulos centrales
Los ribosomas eucarióticos se encuentran libres en la matriz citoplasmática o unidos
a la sala de emergencias.
(figura 4.23).
B. La célula se mueve cuando los dobletes de microtúbulos se deslizan entre sí, lo que hace que el
B. Los ribosomas eucarióticos tienen un tamaño de 80S.
cilio o el flagelo se doblen.
4.6 Mitocondrias
4.11 Comparación de células procarióticas y eucarióticas
un. Las mitocondrias son orgánulos delimitados por dos membranas, con la interna
un. A pesar del hecho de que eucariotas y procariotas difieren estructuralmente en muchos
membrana plegada en crestas (figura 4.11).
formas (tabla 4.2), son bastante similares bioquímicamente.
B. Las mitocondrias son responsables de la generación de energía por el ciclo del ácido tricarboxílico,
el transporte de electrones y la fosforilación oxidativa.
4.7 Cloroplastos
un. Los cloroplastos son orgánulos que contienen pigmentos que sirven como sitio de pho
asíntesis (figura 4.14).
B. El atrapamiento de la energía luminosa tiene lugar en las membranas tilacoides del cloroplasto,
mientras que la fijación de CO2 se produce en el estroma.
Términos clave
autofagosoma 88 endocitosis dependiente de clatrina 86 filamento intermedio 83 película 94

autofagia 87 axonema vesículas recubiertas 87 interfase 92 fagocitosis 86
96 crestas 89 endosomas tardíos 87 fagosomas 86
cuerpo basal 96 matriz citoplasmática 83 balsa lipídica plástido 90 células
vía biosintética-secretora 86 caveolas 86 citoesqueleto 83 dictiosoma 81 lisosoma 86 procarióticas 97
85 dineína 96 endosoma meiosis 94 pirenoide 90 endocitosis
endocitosis dependiente de caveolas 86 temprano 87 vía endocítica microfilamento 83 mediada por receptor 86 cuerpo residual
ciclo celular 92 pared celular 94 86 endocitosis 86 retículo microtúbulo 83 88 retículo endoplásmico rugoso
endoplásmico (ER) 84 mitocondria 88
cloroplasto 90 células eucariotas 96 mitosis 92 (RER) 85

cromatina 91 flagelos 95 envoltura nuclear 91 retículo endoplásmico liso
cromosoma 91 poros nucleares 91 (SER) 85
cilios 95 nucléolo 91 estroma 90
cisternas 84 aparato de golgi 85 núcleo 91 tilacoides 90

clatrina 86 grana 90 orgánulo 79 proteasoma 26S 86
Pregunta de pensamiento crítico
1. Discuta la afirmación: “La diferencia más obvia entre eucariotas y

las células procariotas está en su uso de membranas”. ¿Qué funciones generales desempeñan
las membranas en las células eucariotas?
Aprende más:
Alberts, B.; Johnson, A.; Lewis, J.; Raff, M.; Roberts, K.; y Walter, P. 2002. Biología McCollum, D. 2002. Coordinación de citocinesis y división nuclear en S. pombe.
molecular de la célula, 4ª ed. Nueva York: Garland Science. Noticias de ASM 68 (7): 325–29.
Lee, MCS; Miller, EA; Goldberg, J.; Orci, L.; y Schekman, R. 2004. Transporte de McConville, MJ; Mullin, KA; Ilgoutz, SC; y Teasdale, RD 2002. Secretaria
proteína bidireccional entre el ER y Golgi. año Rev. Célula Desv. vía de los parásitos tripanosomátidos. Microbiol. mol. Biol. 66(1):122–54 .
Biol. 20:87–123.
Shin, J.-S., and Abraham, SN 2001. Caveolae: no solo cráteres en el celular
Lodish, H.; Berk, A.; Matsudaira, P.; Kaiser, California; Krieger, M.; Scott, parlamentario; paisaje. Ciencia 293: 1447–48.
Zipursky, SL; y Darnell, J. 2004. Biología celular molecular, 5ª ed. Nueva York: Steigmeier, F. y Amón. A. 2004. Mitosis de cierre: Las funciones del CDC14
WH Freeman.
fosfatasa y su regulación. año Rev. Genet. 38:203–32.

5Nutrición microbiana
Staphylococcus aureus forma grandes colonias doradas cuando crece en la sangre

agar Este patógeno humano causa enfermedades como furúnculos, abscesos, bacteriemia,
endocarditis, intoxicación alimentaria, faringitis y neumonía.
AVANCE
• Los microorganismos requieren alrededor de 10 elementos en grandes cantidades para 5.1 LOS REQUERIMIENTOS COMUNES DE NUTRIENTES
la síntesis de macromoléculas. Se necesitan varios otros elementos
en cantidades muy pequeñas y forman parte de enzimas y cofactores. El análisis de la composición celular microbiana muestra que más del 95% de
El peso seco de la celda se compone de unos pocos elementos principales: carbono,
• Todos los microorganismos pueden ubicarse en una de unas pocas categorías
nutricionales en función de sus requisitos de carbono, energía y oxígeno, hidrógeno, nitrógeno, azufre, fósforo, potasio, calcio,
electrones magnesio y hierro. Estos se llaman macroelementos o
macronutrientes porque son requeridos por los microorganismos en
• La mayoría de las moléculas de nutrientes deben transportarse a través del plasma
membrana por uno de los tres mecanismos principales que involucran el uso de cantidades relativamente grandes. Los primeros seis (C, O, H, N, S y P) son
proteínas transportadoras de membrana. Los microorganismos eucarióticos también componentes de carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos.
emplean la endocitosis para la absorción de nutrientes. Los cuatro macroelementos restantes existen en la célula como cationes y
• Los medios de cultivo son necesarios para cultivar microorganismos en el laboratorio y jugar una variedad de papeles. Por ejemplo, se requiere potasio (K )
llevar a cabo procedimientos especializados como identificación microbiana, análisis para la actividad de una serie de enzimas, incluidas algunas de las implicadas en la
de agua y alimentos, y aislamiento de microorganismos específicos. síntesis de proteínas. El calcio (Ca2 ), entre otras funciones, contribuye a la
microorganismos Muchos medios diferentes están disponibles para estos y resistencia al calor de las endosporas bacterianas.
otros fines. El magnesio (Mg2 ) sirve como cofactor para muchas enzimas, forma complejos con
• Se pueden obtener cultivos puros mediante el uso de placas esparcidas, ATP y estabiliza los ribosomas y las membranas celulares.
placas de rayas o placas de vertido y se requieren para el estudio cuidadoso El hierro (Fe2 y Fe3 ) es parte de los citocromos y un cofactor para
de una especie microbiana individual. enzimas y proteínas transportadoras de electrones.
Además de los macroelementos, todos los microorganismos requieren varios
nutrientes en pequeñas cantidades. Estos se llaman micronutrientes.
o elementos traza. Los micronutrientes: manganeso, zinc, cobalto,

turalmente complejos y llevan a cabo numerosas funciones. Con el fin de molibdeno, níquel y cobre—son necesarios para la mayoría de las células.
Como se discutió ennuevos
construir los capítulos 3 y 4, lascelulares
componentes células microbianas son struc
y hacer celular Sin embargo, las células requieren cantidades tan pequeñas que los contaminantes
trabajo, los organismos deben tener un suministro de materias primas o nutrientes del agua, la cristalería y los componentes regulares de los medios a menudo son
y una fuente de energía. Los nutrientes son sustancias que se utilizan en la adecuado para el crecimiento. En la naturaleza, los micronutrientes son ubicuos y
biosíntesis y la liberación de energía y, por lo tanto, se requieren para el desarrollo microbiano.probablemente no suelen limitar el crecimiento. Los micronutrientes son normalmente
crecimiento. En este capítulo se describen los requerimientos nutricionales de forman parte de enzimas y cofactores, y ayudan en la catálisis de las reacciones y
microorganismos, cómo se adquieren los nutrientes y el cultivo de el mantenimiento de la estructura de la proteína. Por ejemplo, zinc
microorganismos (Zn2 ) está presente en el sitio activo de algunas enzimas pero también puede
participar en la asociación de subunidades reguladoras y catalíticas
Toda la naturaleza, como se ha dicho, es una conjugación del verbo comer, en activa y pasiva.
—William Ralph Inge
102 Capítulo 5 Nutrición microbiana
(p. ej., aspartato carbamoiltransferasa de E. coli ). Manganeso (Mn2 ) fuentes de carbono Los experimentos de laboratorio indican que no hay
ayuda a muchas enzimas que catalizan la transferencia de grupos fosfato. molécula orgánica natural que no puede ser utilizada por algunos
El molibdeno (Mo2 ) es necesario para la fijación de nitrógeno y el cobalto microorganismo. Los actinomicetos, bacterias comunes del suelo, degradarán el
(Co2 ) es un componente de la vitamina B12. Enzimas (sección 8.7); Control alcohol amílico, la parafina e incluso el caucho. Algunas bacterias
de actividad proteica (sección 8.10) parecen capaces de emplear casi cualquier cosa como fuente de carbono; por ejemplo,
Además de los macroelementos y oligoelementos comunes, los microorganismos Burkholderia cepacia puede utilizar más de 100 carbono diferentes
pueden tener requisitos particulares que reflejan su compuestos. Los microbios pueden degradar incluso alimentos relativamente indigestos
morfología o ambiente específico. Las diatomeas necesitan ácido silícico Sustancias artificiales como los pesticidas. Esto generalmente se logra en comunidades
(H4SiO4) para construir sus hermosas paredes celulares de sílice [(SiO2)n]. microbianas complejas. Estas moléculas
Aunque la mayoría de los procariotas no requieren grandes cantidades de a veces se degradan en presencia de un promotor del crecimiento
sodio, muchas arqueas que crecen en lagos y océanos salinos dependen nutriente que se metaboliza al mismo tiempo, un proceso llamado
de la presencia de altas concentraciones de ion sodio (Na ). cometabolismo. Otros microorganismos pueden utilizar los productos de este
Clasificación protista: Stramenopiles (sección 25.6); Phylum Euryarchaeota: El proceso de descomposición como nutrientes. En contraste con estos omnívoros
Halobacterias (sección 20.3) bacterianos, algunos microbios son extremadamente fastidiosos y catabolizan
Finalmente, se debe enfatizar que los microorganismos requieren un sólo unos pocos compuestos de carbono. Los cultivos de bacterias metilotróficas
mezcla equilibrada de nutrientes. Si un nutriente esencial es corto metabolizan metano, metanol, monóxido de carbono, fórmico
suministro, el crecimiento microbiano será limitado independientemente de las ácido y moléculas de un carbono relacionadas. Miembros parásitos de la
concentraciones de otros nutrientes. género Leptospira utiliza sólo ácidos grasos de cadena larga como su principal
fuente de carbono y energía. Biodegradación y biorremediación por comunidades
naturales (sección 41.6)
5.2 REQUISITOS PARA CARBONO, HIDRÓGENO,

1. ¿Qué son los nutrientes? ¿Sobre qué base se dividen en macroelementos?
OXÍGENO Y ELECTRONES y oligoelementos?
Todos los organismos necesitan carbono, hidrógeno, oxígeno y una fuente de 2. ¿Cuáles son los seis macroelementos más importantes? ¿Cómo las utilizan las células?
electrones El carbono es necesario para los esqueletos o la columna vertebral de todos 3. Haz una lista de dos oligoelementos. ¿Cómo las utilizan las células?
las moléculas orgánicas a partir de las cuales se construyen los organismos. Hidrógeno 4. Defina heterótrofo y autótrofo.
y el oxígeno también son elementos importantes que se encuentran en las moléculas
orgánicas. Los electrones son necesarios por dos razones. Como se describirá
más completamente en el capítulo 9, el movimiento de electrones a través de

las cadenas de transporte de electrones y durante otras reacciones de oxidación- 5.3 TIPOS NUTRICIONALES DE MICROORGANISMOS
reducción pueden proporcionar energía para su uso en el trabajo celular. electrones también
son necesarios para reducir moléculas durante la biosíntesis (p. ej., la reducción de Debido a que la necesidad de carbono, energía y electrones es tan importante, los
CO2 para formar moléculas orgánicas). biólogos usan términos específicos para definir cómo se cumplen estos requisitos. Ya
Los requisitos de carbono, hidrógeno y oxígeno a menudo son hemos visto que los microorganismos pueden
satisfechos juntos porque las moléculas que sirven como fuentes de carbono de diez clasificarse como heterótrofos o autótrofos con respecto a
también contribuyen con hidrógeno y oxígeno. por ejemplo, muchos su fuente preferida de carbono (tabla 5.1). solo hay dos
heterótrofos: organismos que utilizan compuestos orgánicos reducidos y preformados fuentes de energía disponibles para los organismos: (1) energía luminosa, y (2)
moléculas como su fuente de carbono—también pueden obtener hidrógeno, oxígeno y la energía derivada de la oxidación de moléculas orgánicas o inorgánicas.
electrones de las mismas moléculas. porque los electrones

proporcionada por estas fuentes de carbono orgánico se puede utilizar en electrones
transporte, así como en otras reacciones de oxidación-reducción, muchas Cuadro 5.1 Fuentes de carbono, energía y electrones
los heterótrofos también utilizan su fuente de carbono como fuente de energía. De
Fuentes de carbono
hecho, cuanto más reducida es la fuente de carbono orgánico (es decir, cuanto más
autótrofos CO2 único o principal carbono biosintético
electrones que transporta), mayor es su contenido energético. Así los lípidos tienen
fuente (sección 10.3)
un mayor contenido energético que los hidratos de carbono. Sin embargo, un carbono
heterótrofos Moléculas orgánicas preformadas y reducidas a partir de
fuente, dióxido de carbono (CO2), suministra sólo carbono y oxígeno,
otros organismos (capítulos 9 y 10)
por lo que no se puede utilizar como fuente de hidrógeno, electrones o energía.
Fuentes de energia
Esto se debe a que el CO2 es la forma de carbono más oxidada, carece de hidrógeno
Fotótrofos Luz (sección 9.12)
y no puede donar electrones durante las reacciones de oxidación-reducción.
Organismos que utilizan CO2 como único o principal quimiotrofos Oxidación de compuestos orgánicos o inorgánicos.
(capítulo 9)
fuente de carbono se llaman autótrofos. Como el CO2 no puede suplir sus necesidades
Fuentes de electrones
energéticas, deben obtener energía de otros
fuentes, como la luz o moléculas inorgánicas reducidas. litótrofos Moléculas inorgánicas reducidas (sección 9.11)
Una característica nutricional más notable de heterótrofos organotrofos Moléculas orgánicas (capítulo 9)
microorganismos es su extraordinaria flexibilidad con respecto a
Tipos nutricionales de microorganismos 103
Los fotótrofos utilizan la luz como fuente de energía; los quimiotrofos obtienen también pueden crecer como fotoautótrofos con hidrógeno molecular como
energía de la oxidación de compuestos químicos (orgánicos o inorgánicos). Los donante de electrones Los autótrofos quimiolitotróficos (tótrofos quimiolitotróficos)
microorganismos también tienen solo dos fuentes. oxidan compuestos inorgánicos reducidos como moléculas de hierro, nitrógeno o
por electrones Los litótrofos (es decir, “comedores de rocas”) utilizan sustancias azufre para obtener energía y electrones.
inorgánicas reducidas como fuente de electrones, mientras que los organótrofos para la biosíntesis (figura 5.2a). El dióxido de carbono es el carbono
extraer electrones de compuestos orgánicos reducidos. fuente. Quimiolitoheterótrofos, también conocidos como mixótrofos
A pesar de la gran diversidad metabólica observada en los microorganismos, (figura 5.2b), usan moléculas inorgánicas reducidas como su energía
la mayoría puede ubicarse en una de las cinco clases nutricionales según y fuente de electrones, pero obtienen su carbono de fuentes orgánicas.
sus fuentes primarias de carbono, energía y electrones (tabla 5.2). Los quimiolitotrofos contribuyen en gran medida a las transformaciones químicas de
La mayoría de los microorganismos estudiados hasta ahora son autótrofos los elementos (p. ej., la conversión de amoníaco en nitrato o
fotolitotróficos o heterótrofos quimioorganotróficos. azufre a sulfato) que ocurren continuamente en los ecosistemas. bacterias
Los autótrofos fotolitotróficos (a menudo llamados fotoautótrofos o fotosintéticas (sección 21.3); Clase Alphaproteobacteria: bacterias nitrificantes
fotolitoautótrofos) usan energía luminosa y tienen CO2 (sección 22.1)
como su fuente de carbono. Protistas fotosintéticos y cianobacterias Aunque una especie en particular por lo general pertenece a sólo uno de
emplean agua como donante de electrones y liberan oxígeno (figura las clases nutricionales, algunos muestran una gran flexibilidad metabólica y
5.1a). Otros fotolitoautótrofos, como el púrpura y el verde alterar sus patrones metabólicos en respuesta a las condiciones ambientales
bacterias del azufre (figura 5.1b,c), no pueden oxidar el agua pero extraer cambios. Por ejemplo, muchas bacterias púrpuras que no contienen azufre actúan
electrones de donantes inorgánicos como hidrógeno, sulfuro de hidrógeno, como heterótrofas fotoorganotróficas en ausencia de oxígeno, pero oxidan moléculas
y azufre elemental. Heterótrofos quimioorganotróficos (a menudo orgánicas y funcionan quimioorganotróficamente en
llamados quimioheterótrofos, quimioorganoheterótrofos o simplemente niveles normales de oxígeno. Cuando el oxígeno es bajo, la fotosíntesis y
heterótrofos) utilizan compuestos orgánicos como fuentes de energía, hidrógeno, el metabolismo quimioorganotrófico puede funcionar simultáneamente.
electrones y carbono. Con frecuencia, el mismo nutriente orgánico satisfará todos Este tipo de flexibilidad parece complejo y confuso, pero da
estos requisitos. Esencialmente todos patógenos estos microbios una ventaja definitiva si las condiciones ambientales
Los microorganismos son quimioheterótrofos. cambiar con frecuencia.
Las otras clases nutricionales tienen menos microorganismos conocidos, pero a
menudo son muy importantes desde el punto de vista ecológico. Algunas bacterias
1. Analice las formas en que se clasifican los microorganismos en función de su
fotosintéticas (bacterias moradas y verdes) utilizan materia orgánica como
requerimientos de energía, carbono y electrones.
su donante de electrones y fuente de carbono. Estos fotoorganoheterótrofos
2. Describir los requerimientos nutricionales de los principales grupos nutricionales
heterótrofos (fotoorganoheterótrofos) son comunes
y dar algunos ejemplos microbianos de cada uno.
habitantes de lagos y arroyos contaminados. Algunas de estas bacterias
Cuadro 5.2 Principales tipos nutricionales de microorganismos
Representante
Tipo nutricional Fuente de carbono Fuente de energía Fuente de electrones microorganismos
Fotolitoautotrofia (autotrofia CO2 Luz Donante e inorgánico Bacterias de azufre púrpura y verde,
fotolitotrófica) cianobacterias
Fotoorganoheterotrofia (heterotrofia Carbono orgánico, Luz Donante orgánico e Bacterias moradas sin azufre, verdes
fotoorganotrófica) pero también se puede bacterias no sulfurosas
utilizar CO2
Quimiolitoautotrofia (autotrofia CO2 Productos químicos inorgánicos Donante e inorgánico Bacterias oxidantes de azufre,
quimiolitotrófica) bacterias oxidantes de hidrógeno,
metanógenos, nitrificantes
bacterias oxidantes de hierro
bacterias
Quimiolitoheterotrofia o mixotrofia Carbono orgánico, Productos químicos inorgánicos Donante e inorgánico Algunas bacterias oxidantes de azufre
(heterotrofia quimiolitotrófica) pero también se puede (por ejemplo, Beggiatoa)
utilizar CO2
Quimioorganoheterotrofia Carbón orgánico Los productos químicos orgánicos a Donante orgánico e, a La mayoría no fotosintéticos
(heterotrofia quimioorganotrófica) menudo son los mismos que C menudo igual que C microbios, incluyendo la mayoría
fuente fuente de los patógenos, hongos, muchos
protistas y muchas arqueas
Sistema de membrana interna

utilizado para la oxidación de nitrito.
0.25U
(a) Floración de cianobacterias (bacterias fotolitoautotróficas)

(a) Nitrobacter winogradskyi, un quimiolitoautótrofo
Gránulo de azufre dentro de los filamentos
(b) Bacterias de azufre púrpura (fotoheterótrofas)
(b) Beggiatoa alba, un quimiolitoheterótrofo (mixótrofo)
Figura 5.2 Bacterias quimiolitotróficas. (a) Micrografía electrónica de

transmisión de Nitrobacter winogradskyi, un organismo que utiliza nitrito como
fuente de energía (213 000). (b) Micrografía de luz de Beggiatoa alba, un
organismo que utiliza sulfuro de hidrógeno como fuente de energía y moléculas
orgánicas como fuentes de carbono. Las manchas oscuras dentro de los filamentos
son gránulos de azufre elemental producidos cuando se oxida el sulfuro de
hidrógeno.
5.4 REQUISITOS DE NITRÓGENO,

FÓSFORO Y AZUFRE
(c) Bacterias de azufre púrpura Para crecer, un microorganismo debe ser capaz de incorporar grandes
cantidades de nitrógeno, fósforo y azufre. Aunque estos elementos
Figura 5.1 Bacterias fototróficas. Las bacterias fototróficas juegan un papel pueden obtenerse de los mismos nutrientes que suministran carbono,
importante en los ecosistemas acuáticos, donde pueden causar floraciones. (a) los microorganismos suelen emplear también fuentes inorgánicas.
Una cianobacteria y una proliferación de algas en un estanque eutrófico. (b) El nitrógeno es necesario para la síntesis de aminoácidos, purinas,
Bacterias de azufre púrpura que crecen en un pantano. (c) Una floración de pirimidinas, algunos carbohidratos y lípidos, cofactores enzimáticos y
bacterias de azufre púrpura en una laguna de aguas residuales. otras sustancias. Muchos microorganismos pueden utilizar el nitrógeno.
Absorción de nutrientes por la célula 105
en aminoácidos. Otros pueden incorporar amoníaco directamente a través de Por ejemplo, Enterococcus faecalis necesita ocho vitaminas diferentes para
la acción de enzimas como la glutamato deshidrogenasa o la glutamina sintetasa y la crecimiento. También se observan otros factores de crecimiento; hemo (de hemoglobina
glutamato sintasa (ver figuras 10.11 y o citocromos) es requerido por Haemophilus influenzae,
10.12). La mayoría de los fotótrofos y muchos microorganismos quimiotróficos reducen el y algunos micoplasmas necesitan colesterol. Enzimas (sección 8.7)
nitrato a amoníaco e incorporan el amoníaco en Comprender los requisitos de factor de crecimiento de los microbios ha
un proceso conocido como reducción de nitrato asimilatoria (ver pág. 235). A importantes aplicaciones prácticas. Son útiles tanto los microbios con necesidades
variedad de bacterias (por ejemplo, muchas cianobacterias y el simbiótico específicas conocidas como los que producen grandes cantidades de una sustancia (p.
bacteria Rhizobium) puede asimilar el nitrógeno atmosférico (N2) ej., vitaminas). Microbios con un crecimiento específico.
reduciéndolo a amonio (NH4 ). Esto se llama fijación de nitrógeno. Síntesis de aminoácidos requisito de factor se puede utilizar en bioensayos para el factor que
(sección 10.5) necesitar. Un ensayo típico es un ensayo de crecimiento-respuesta, que permite la
El fósforo está presente en ácidos nucleicos, fosfolípidos, nucleótidos como ATP, cantidad de factor de crecimiento en una solución a determinar. Estos as dice se basan
varios cofactores, algunas proteínas y otros. en la observación de que la cantidad de crecimiento en un
componentes celulares. Casi todos los microorganismos utilizan inorgánicos el cultivo está relacionado con la cantidad de factor de crecimiento presente. Idealmente,
fosfato como su fuente de fósforo e incorporarlo directamente. Los bajos niveles de fosfato la cantidad de crecimiento es directamente proporcional a la cantidad de
en realidad limitan el crecimiento microbiano en factor de crecimiento; si la concentración del factor de crecimiento duplica la
muchos ambientes acuáticos. Algunos microbios, como Es cherichia coli, pueden usar la cantidad de crecimiento microbiano se duplica. Por ejemplo, especies de
fosfato tanto orgánico como inorgánico. se pueden utilizar los géneros bacterianos Lactobacillus y Streptococcus
Algunos organofosforados como la hexosa 6-fosfatos pueden ser en ensayos microbiológicos de la mayoría de las vitaminas y aminoácidos. los
captado directamente por la célula. Otros organofosforados son hidrolizados en el La bacteria apropiada se cultiva en una serie de recipientes de cultivo, cada uno
periplasma por la enzima fosfatasa alcalina. que contiene un medio con una cantidad en exceso de todos los componentes necesarios
para producir fosfato inorgánico, que luego se transporta excepto el factor de crecimiento que se va a ensayar. una cantidad diferente
a través de la membrana plasmática. Síntesis de purinas, pirimidinas y de factor de crecimiento se añade a cada vaso. La curva estándar se prepara trazando la
nucleótidos (sección 10.6) cantidad o concentración del factor de crecimiento
El azufre es necesario para la síntesis de sustancias como el amino frente a la extensión total del crecimiento bacteriano. la cantidad de la
ácidos cisteína y metionina, algunos carbohidratos, biotina y factor de crecimiento en una muestra de prueba se determina comparando el grado de
tiamina. La mayoría de los microorganismos utilizan sulfato como fuente de azufre. crecimiento causado por la muestra desconocida con el resultante
y reducirlo por reducción de sulfato asimilatoria; unos pocos microorganismos requieren de los estándares. Los ensayos microbiológicos son específicos, sensibles,
una forma reducida de azufre como la cisteína. y sencillo Todavía se utilizan en el análisis de sustancias como la vitamina B12 y la
biotina, a pesar de los avances en las técnicas de análisis químico.
1. Describa brevemente cómo los microorganismos usan las diversas formas de nitrógeno, Por otro lado, aquellos microorganismos capaces de sintetizar
fósforo y azufre. grandes cantidades de vitaminas se pueden utilizar para fabricar estos
2. ¿Por qué crees que el amoníaco (NH3) se puede incorporar directamente en compuestos para uso humano. Varios hidrosolubles y liposolubles
aminoácidos mientras que otras formas de nitrógeno combinado (p. ej., NO2 y las vitaminas se producen parcial o totalmente mediante fermentaciones industriales.
NO3 ) no lo son? Buenos ejemplos de tales vitaminas y los microorganismos que las sintetizan son la
riboflavina (Clostridium,
Candida, Ashbya, Eremothecium), coenzima A (Brevibacterium),
vitamina B12 (Streptomyces, Propionibacterium, Pseudomonas),
5.5 FACTORES DE CRECIMIENTO
vitamina C (Gluconobacter, Erwinia, Corynebacterium), -
Algunos microorganismos tienen las enzimas y las rutas bioquímicas necesarias para caroteno (Dunaliella) y vitamina D (Saccharomyces). Actual
sintetizar todos los componentes celulares utilizando minerales. la investigación se centra en mejorar los rendimientos y encontrar microorganismos
y fuentes de energía, carbono, nitrógeno, fósforo y azufre. que pueden producir grandes cantidades de otras vitaminas.
Otros microorganismos carecen de una o más de las enzimas necesarias
fabricar componentes indispensables. Por lo tanto deben 1. ¿Qué son los factores de crecimiento? ¿Qué son las vitaminas?
obtener estos constituyentes o sus precursores del medio ambiente. Compuestos 2. ¿Cómo pueden los humanos utilizar un microbio con un requisito específico de factor
orgánicos que son componentes celulares esenciales o de crecimiento?
precursores de dichos componentes, pero no pueden ser sintetizados por el 3. Enumerar los factores de crecimiento que los microorganismos producen industrialmente.
organismo se denominan factores de crecimiento. Hay tres grandes 4. ¿Por qué crees que los aminoácidos, las purinas y las pirimidinas a menudo son
clases de factores de crecimiento: (1) aminoácidos, (2) purinas y pirimidinas, y (3) factores, mientras que la glucosa no lo es?
vitaminas. Los aminoácidos son necesarios para la síntesis de proteínas; purinas y

pirimidinas para la síntesis de ácidos nucleicos.
Las vitaminas son pequeñas moléculas orgánicas que normalmente forman la totalidad o
5.6 ABSORCIÓN DE NUTRIENTES POR LA CÉLULA
parte de los cofactores enzimáticos y se necesitan sólo en cantidades muy pequeñas
cantidades para sostener el crecimiento. Las funciones de las vitaminas seleccionadas, El primer paso en el uso de nutrientes es la absorción de los nutrientes requeridos por
y ejemplos de microorganismos que los requieren, se dan en la célula microbiana. Los mecanismos de captación deben ser específicos, es decir,
tabla 5.3. Algunos microorganismos requieren muchas vitaminas; para ex se deben adquirir las sustancias necesarias, y no otras. Eso
Cuadro 5.3 Funciones de algunas vitaminas comunes en los microorganismos
Vitamina Funciones Ejemplos de microorganismos que requieren vitamina
biotina Carboxilación ( fijación de CO2) Leuconostoc mesenteroides (B)

Metabolismo de un carbono Saccharomyces cerevisiae (F)
Ochromonas malhamensis (P)
Acanthamoeba castellanii (P)
Cianocobalamina (B12) Reordenamientos moleculares Lactobacillus spp. (B)

Metabolismo de un carbono: transporta grupos metilo Euglena gracilis (P)
Diatomeas (P)
Acanthamoeba castellanii (P)

Ácido fólico Metabolismo de un carbono Enterococcus faecalis (B)
Tetrahymena pyriformis (P)
Ácido lipoico Transferencia de grupos acilo Lactobacillus casei (B)
Tetrahymena spp. (PAGS)

Ácido pantoténico Precursor de la coenzima A: transporta grupos acilo Proteus morganii (B)
(oxidación de piruvato, metabolismo de ácidos grasos) Hanseniaspora sp. (F)
Paramecio spp. (PAGS)
Piridoxina (B6) Metabolismo de aminoácidos (p. ej., transaminación) Lactobacillus spp. (B)
Niacina (ácido nicotínico) Precursor de NAD y NADP: transporta electrones y átomos Brucella abortus, Haemophilus influenzae (B)
de hidrógeno. Blastocladia pringsheimii (F)
Crithidia fasciculada (P)
Riboflavina (B2) Precursor de FAD y FMN: lleva electrones o átomos de Caulobacter vibrioides (B)
hidrógeno Dictyostelium spp. (PAGS)
Tiamina (B1) Transferencia de grupo aldehído Bacilo anthracis (B)

(descarboxilación de piruvato, oxidación de -cetoácidos) Phycomyces blakesleeanus (F)
Ochromonas malhamensis (P)
Colpidium campylum (P)
a
Los microorganismos representativos son miembros de los siguientes grupos: bacterias (B), hongos (F) y protistas (P).
De nada sirve que una célula absorba una sustancia que no puede utilizar. Debido de una región de mayor concentración a otra de menor concentración. La tasa de
a que los microorganismos a menudo viven en hábitats pobres en nutrientes, difusión pasiva depende del tamaño de la
debe ser capaz de transportar los nutrientes de las soluciones diluidas al gradiente de concentración entre el exterior de una célula y su interior
célula contra un gradiente de concentración. Finalmente, las moléculas de nutrientes (figura 5.3). Se requiere un gradiente de concentración bastante grande para
debe pasar a través de una membrana plasmática selectivamente permeable que absorción adecuada de nutrientes por difusión pasiva (es decir, la
impide el paso libre de la mayoría de las sustancias. En vista de la enorme variedad la concentración de nutrientes debe ser alta mientras que la concentración interna
de nutrientes y la complejidad de la tarea, no es es baja), y la tasa de absorción disminuye a medida que se consume más nutriente.
sorprendente que los microorganismos hagan uso de varios adquirido a menos que se utilice inmediatamente. Moléculas muy pequeñas como
mecanismos de transporte. Los más importantes de estos son facilitados como H2O, O2 y CO2 a menudo se mueven a través de las membranas por pasivo
difusión, transporte activo y translocación de grupos. eucariótico difusión. Las moléculas más grandes, los iones y las sustancias polares deben
Los microorganismos no parecen emplear la translocación de grupo, pero entrar en la célula por otros mecanismos.
captan los nutrientes por el proceso de endocitosis. orgánulos de la
vías biosintéticas-secretoras y endocíticas (sección 4.4)
Difusión facilitada
La velocidad de difusión a través de membranas selectivamente permeables es
Difusión pasiva aumenta considerablemente mediante el uso de proteínas transportadoras, a veces
Algunas sustancias, como el glicerol, pueden atravesar la membrana plasmática llamadas per meases, que están incrustadas en la membrana plasmática. Difusión
por difusión pasiva. La difusión pasiva, a menudo llamada difusión o difusión la participación de proteínas transportadoras se denomina difusión facilitada. la tarifa
simple, es el proceso en el que las moléculas se mueven de difusión facilitada aumenta con el gradiente de concentración
celda dentro de celda dentro de
exterior la celda exterior la celda
Difusión
facilitada
Difusión
pasiva
(a) (B)
Figura 5.4 Un modelo de difusión facilitada. El transportador de

Gradiente de concentración
membrana (a) puede cambiar de conformación después de unirse a una
molécula externa y posteriormente liberar la molécula en el interior de la célula.
Figura 5.3 Difusión pasiva y facilitada. La dependencia de la (b) Luego regresa a la posición orientada hacia afuera y está listo para unirse a
tasa de difusión del tamaño del gradiente de concentración del
otra molécula de soluto. Debido a que no hay entrada de energía, las moléculas
soluto (la relación entre la concentración extracelular y la concentración
seguirán entrando solo mientras su concentración sea mayor en el exterior.
intracelular). Tenga en cuenta el efecto de saturación o meseta por encima de
un valor de gradiente específico cuando está funcionando un portador de
difusión facilitada. Este efecto de saturación se observa siempre que una
proteína transportadora está involucrada en el transporte.
ura 5.4). Después de que la molécula de soluto se une al exterior, el
transportador puede cambiar de conformación y liberar la molécula en el interior
de la célula. Posteriormente, el transportador vuelve a su forma original y está
mucho más rápidamente y en concentraciones más bajas de la molécula que
listo para recoger otra molécula. El efecto neto es que una molécula hidrófila
se difunde que la de la difusión pasiva (figura 5.3). Tenga en cuenta que la
puede entrar en la célula en respuesta a su gradiente de concentración.
tasa de difusión se nivela o alcanza una meseta por encima de un valor de
Recuerde que el mecanismo es impulsado por gradientes de concentración y
gradiente específico porque el transportador está saturado, es decir, la proteína
por lo tanto es reversible. Si la concentración del soluto es mayor dentro de la
transportadora se une y transporta tantas moléculas de soluto como sea
célula, se desplazará hacia el exterior. Debido a que la célula metaboliza los
posible. La curva resultante se asemeja a una curva enzima-sustrato (consulte
nutrientes al entrar, se favorece la entrada.
la figura 8.18) y es diferente de la respuesta lineal que se observa con la
Aunque el glicerol se transporta por difusión facilitada en muchas bacterias,
difusión pasiva. Las proteínas transportadoras también se parecen a las
la difusión facilitada no parece ser el principal mecanismo de captación. Esto
enzimas en su especificidad por la sustancia a transportar; cada transportador
se debe a que las concentraciones de nutrientes a menudo son más bajas
es selectivo y transportará solo solutos estrechamente relacionados.
fuera de la célula. La difusión facilitada es mucho más prominente en las
Aunque interviene una proteína transportadora, la difusión facilitada es
células eucariotas donde se utiliza para transportar una variedad de azúcares
verdaderamente difusión. Un gradiente de concentración que atraviesa la
y aminoácidos.
membrana impulsa el movimiento de las moléculas y no se requiere ningún
aporte de energía metabólica. Si desaparece el gradiente de concentración,
cesa el movimiento neto de entrada. El gradiente se puede mantener Transporte activo
transformando el nutriente transportado en otro compuesto. Una vez que el Debido a que la difusión facilitada puede mover moléculas de manera
nutriente está dentro de una célula eucariótica, el gradiente puede mantenerse eficiente hacia el interior solo cuando la concentración de soluto es más alta
moviendo el nutriente a otro compartimento membranoso. Algunas permeasas en el exterior de la célula, los microbios deben tener mecanismos de
están relacionadas con la familia de proteínas de proteínas intrínsecas transporte que puedan mover solutos contra un gradiente de concentración.
principales (MIP). Los MIP facilitan la difusión de pequeñas moléculas polares. Esto es importante porque los microorganismos a menudo viven en hábitats
Se observan en prácticamente todos los organismos. Los dos canales MIP más caracterizados por fuentes de nutrientes muy diluidas. Los microbios utilizan
extendidos en bacterias son las acuaporinas (ver figura 2.29), que transportan dos procesos de transporte importantes en tales situaciones: transporte
agua. Otros MIP importantes son los facilitadores de glicerol, que ayudan a la activo y translocación grupal. Ambos son procesos dependientes de la energía.
difusión de glicerol. El transporte activo es el transporte de moléculas de soluto a
Aunque se ha trabajado mucho sobre el mecanismo de difusión facilitada, concentraciones más altas, o contra un gradiente de concentración, con el
el proceso aún no se comprende por completo. Parece que el complejo de aporte de energía metabólica. Debido a que el transporte activo involucra
proteína transportadora se extiende por la membrana (fig. permeasas, se asemeja a la difusión facilitada en algunos aspectos. los
Las permeasas se unen a solutos particulares con gran especificidad para el E. coli. El fosfato inorgánico atraviesa la membrana externa por el
moléculas transportadas. Moléculas de soluto similares pueden competir por uso de un canal de proteína porina. Entonces, uno de los dos sistemas de transporte
la misma proteína transportadora tanto en difusión facilitada como activa mueve el fosfato a través de la membrana plasmática. que sistema
transporte. El transporte activo también se caracteriza por el efecto de saturación del se utiliza depende de la concentración de fosfato. El sistema PIT funciona a altas
portador a altas concentraciones de soluto (figura 5.3). Sin embargo, el transporte activo concentraciones de fosfato. Cuando el fosfato
difiere de la difusión facilitada en su uso. las concentraciones son bajas, un sistema transportador ABC llamado PST
de energía metabólica y en su capacidad de concentrar sustancias. (transporte específico de fosfato ) lleva el fosfato a la célula mediante una proteína de
Los inhibidores metabólicos que bloquean la producción de energía inhibirán el transporte unión periplásmica. A diferencia de las moléculas pequeñas
activo pero no afectarán inmediatamente la difusión facilitada. como el fosfato, el transporte de moléculas más grandes, como la vitamina
Los transportadores de casetes de unión a ATP (transportadores ABC) son B12, requiere el uso de membrana externa especializada de alta afinidad
ejemplos importantes de sistemas de transporte activo. son observados receptores que funcionan en asociación con transportadores específicos en
en bacterias, arqueas y eucariotas. Por lo general, estos transportadores la membrana plasmática.
consisten en dos dominios hidrofóbicos que atraviesan la membrana asociados en sus Como se discutirá en el capítulo 9, el transporte de electrones durante
superficies citoplásmicas con dos dominios de unión a ATP Los procesos de conservación de energía generan un gradiente de protones (en los
(figura 5.5). Los dominios que atraviesan la membrana forman un poro en el procariotas, los protones están en una concentración más alta fuera de la célula
La membrana y los dominios de unión a ATP se unen e hidrolizan ATP. que dentro). El gradiente de protones se puede utilizar para realizar trabajo celular,
para impulsar la captación. Los transportadores ABC emplean proteínas de unión a incluido el transporte activo. La captación de lactosa por la lactosa per mease de E. coli
sustrato especiales, que se encuentran en el espacio periplásmico de las bacterias gram es un ejemplo bien estudiado. La permeasa es una sola
negativas (ver figura 3.25) o se unen a la membrana. Proteína que transporta una molécula de lactosa hacia el interior cuando un protón entra
lípidos en la cara externa de la membrana plasmática de grampositivos. simultáneamente en la célula. Este transporte vinculado de dos sustancias en
Estas proteínas de unión se unen a la molécula que se va a transportar y la misma dirección se llama simporte. Aquí, la energía en forma de
luego interactúan con las proteínas de transporte de membrana para mover el el gradiente de protones impulsa el transporte de solutos. Aunque el mecanismo de
molécula de soluto dentro de la célula. E. coli transporta una variedad de azúcares el transporte no se entiende completamente, los estudios de difracción de rayos X
(arabinosa, maltosa, galactosa, ribosa) y aminoácidos (glutamato, histidina, leucina) muestran que la proteína de transporte existe en conformaciones orientadas hacia afuera
mediante este mecanismo. También pueden bombear y hacia adentro. Cuando la lactosa y un protón se unen para separar
antibióticos utilizando un transportador ABC de resistencia a múltiples fármacos. sitios en la conformación orientada hacia el exterior, la proteína cambia a su
Las sustancias que ingresan a las bacterias gramnegativas deben atravesar conformación orientada hacia adentro. Luego, el azúcar y el protón se liberan en el
la membrana externa antes de los transportadores ABC y otros activos citoplasma. E. coli también usa simporte de protones para tomar
los sistemas de transporte pueden tomar medidas. Hay varias formas en las que hasta aminoácidos y ácidos orgánicos como succinato y malato. Transporte de electrones
esto se logra. Cuando la sustancia es pequeña, un generalizado y fosforilación oxidativa (sección 9.5)
puede usarse proteína de porina tal como OmpF ( proteína de membrana externa ). Un gradiente de protones también puede impulsar el transporte activo indirectamente,
Un ejemplo del movimiento de pequeñas moléculas a través del a menudo a través de la formación de un gradiente de iones de sodio. Por ejemplo, un
La membrana externa es proporcionada por los sistemas de absorción de fosfato de sistema de transporte de sodio de E. coli bombea sodio hacia afuera en
respuesta al movimiento hacia el interior de los protones (figura 5.6). Tal
El transporte vinculado en el que las sustancias transportadas se mueven en direcciones
Unión
opuestas se denomina antipuerto. El gradiente de sodio generado por este sistema
de solutos
proteína antipuerto de protones impulsa la captación de
transportador periplasma
azúcares y aminoácidos. Aunque no se entiende bien, es
1 2 pensó que un ion de sodio se une a una proteína transportadora, causando que
para cambiar de forma. Luego, el transportador se une al azúcar o al aminoácido
firmemente y orienta sus sitios de unión hacia el interior de la célula. Debido a la baja
concentración de sodio intracelular, el sodio
el ion se disocia del transportador y la otra molécula le sigue.
citoplasmático Las proteínas de transporte de E. coli transportan el azúcar melibiosa y el amino

matriz glutamato ácido cuando el sodio se mueve simultáneamente hacia adentro.
ATP ADP El simporte o cotransporte de sodio también es un proceso importante en

Unión de atp ADP
+ + células eucarióticas donde se utiliza en la absorción de azúcar y aminoácidos.
nucleótidos
dominio Pi Pi Sin embargo, el ATP, en lugar de la fuerza motriz de protones, por lo general impulsa
transporte de sodio en las células eucariotas.
Figura 5.5 Función transportadora ABC. (1) El soluto A menudo, un microorganismo tiene más de un sistema de transporte para
La proteína de unión se une al sustrato para ser transportado y cada nutriente, como se puede ver con E. coli. Esta bacteria tiene en
se acerca al complejo transportador ABC. (2) La unión del soluto menos cinco sistemas de transporte para el azúcar galactosa, tres sistemas
la proteína se une al transportador y libera el sustrato, cada uno para los aminoácidos glutamato y leucina, y dos complejos de transporte de
que se mueve a través de la membrana con la ayuda de ATP potasio. Cuando hay varios sistemas de transporte para la misma sustancia, los sistemas
hidrólisis. Ver texto para más detalles. difieren en tales propiedades

Membrana de plasma utilizado para sintetizar ATP, la moneda de energía de la célula. Sin embargo,
cuando se usa en reacciones PTS, se usa la energía presente en PEP
En el interior exterior de la celda
la célula (o bacteriano para energizar la captación en lugar de la síntesis de ATP. El papel del ATP en el
Electrón
periplásmico 1 Los protones son bombeados a metabolismo (sección 8.5); La descomposición de la glucosa en piruvato (sección 9.3)
transporte espacio) el exterior del plasma La transferencia de fosfato de PEP a la molécula entrante
H+ H+
membrana durante el
involucra varias proteínas y es un ejemplo de un sistema de fosforescencia. En E.
transporte de electrones.
coli y Salmonella, el PTS consta de dos enzimas
H+
2 El gradiente de protones y una proteína termoestable de bajo peso molecular (HPr). HPr y la enzima I (EI) son
Na+ Na+ impulsa la expulsión de citoplasmáticas. La enzima II (EII) es más variable en
iones de sodio mediante un
estructura y a menudo compuesta de tres subunidades o dominios. EIIA es
mecanismo antipuerto.
citoplasmático y soluble. EIIB también es hidrófilo y con frecuencia es
unida a EIIC, una proteína hidrofóbica que está incrustada en el
3 El sodio se une a la membrana. Un fosfato se transfiere de PEP a la enzima II con
Na+
complejo de proteína transportadora.
la ayuda de la enzima I y HPr (figura 5.7). Entonces, una molécula de azúcar es
fosforilada a medida que es transportada a través de la membrana por la enzima II.
La enzima II transporta solo azúcares específicos y varía con el PTS,
Azúcar 4 La forma del soluto.

mientras que la enzima I y HPr son comunes a todas las PTS. Control de la actividad
Na+
cambios en el sitio de enlace, enzimática (sección 8.10)
y une el soluto
Las PTS están ampliamente distribuidas en las bacterias. La mayoría de los miembros de la
(p. ej., un azúcar o
un aminoácido).
géneros Escherichia, Salmonella, Staphylococcus, así como muchos
otras bacterias anaerobias facultativas (bacterias que crecen en
Na+
la presencia o ausencia de O2) tienen sistemas de fosfotransferasa;
algunas bacterias anaeróbicas obligadas (p. ej., Clostridium) también tienen
5 Luego, la conformación del
transportador se altera para que el PTS. Sin embargo, la mayoría de las bacterias aeróbicas, con la excepción de algunas
sodio se libere en el interior de la
especies de Bacillus, parecen carecer de PTS. Muchos carbohidratos son
membrana. A esto le sigue la
transportado por PTS. E. coli absorbe glucosa, fructosa, manitol,
disociación del soluto del
transportador (un mecanismo de sacarosa, N-acetilglucosamina, celobiosa y otros carbohidratos
simportación). por translocación de grupo. Además de su papel en el transporte, las proteínas PTS
puede unirse a atrayentes químicos, hacia los cuales las bacterias se mueven por la
Figura 5.6 Transporte activo utilizando protones y sodio proceso de quimiotaxis. La influencia de los factores ambientales en el crecimiento:
Gradientes. Concentración de oxígeno (sección 6.5); Quimiotaxis (sección 3.10)
Absorción de hierro
como su fuente de energía, su afinidad por el soluto transportado, y
la naturaleza de su regulación. Esta diversidad le da al microbio una Casi todos los microorganismos requieren hierro para su uso en citocromos.
ventaja competitiva añadida en un entorno variable. y muchas enzimas. La absorción de hierro se dificulta por la extrema
insolubilidad del hierro férrico (Fe3 ) y sus derivados, lo que deja
poca plancha gratis disponible para el transporte. Muchas bacterias y hongos.
Translocación de grupo han superado esta dificultad secretando sideróforos [del griego
En el transporte activo, las moléculas de soluto se mueven a través de una membrana. portadores de hierro]. Los sideróforos son compuestos orgánicos de bajo peso molecular.
sin modificación. Otro tipo de transporte, llamado colectivo moléculas que son capaces de formar complejos con el hierro férrico y suministrarlo a
translocación, modifica químicamente la molécula a medida que es llevada la célula. Estas moléculas transportadoras de hierro normalmente son hidroxamatos o
en la celda. La translocación de grupo es un tipo de transporte activo porque se usa fenolatos-catecolatos. El ferricromo es un hidroxiamato producido por muchos hongos;
energía metabólica durante la absorción de la molécula. la enterobactina es el catecolato
Esto está claramente demostrado por el sistema de translocación de grupo más formado por E. coli (figura 5.8a,b). Parece que tres sideróforos
conocido, el sistema fosfoenolpiruvato:azúcar fosfotransferasa ( PTS ), que se agrupa complejos con el hierro para formar un octaedro de seis coordenadas
observa en muchas bacterias. los complejo (figura 5.8c).
PTS transporta una variedad de azúcares mientras los fosforila, Los microorganismos secretan sideróforos cuando el hierro escasea en el
utilizando fosfoenolpiruvato (PEP) como donante de fosfato. medio. Una vez que el complejo hierro-sideróforo ha llegado a la célula
superficie, se une a una proteína receptora de sideróforo. Entonces el hierro es
Azúcar PEP (exterior) ÿ azúcar piruvato-fosfato (interior) ya sea liberado para entrar en la célula directamente o todo el complejo sideróforo de
hierro es transportado al interior por un transportador ABC. En
La PEP es un intermediario importante de una vía bioquímica utilizada E. coli el receptor sideróforo está en la membrana externa de la célula
por muchos quimioorganoheterótrofos para extraer energía de fuentes de energía sobre; cuando el hierro llega al espacio periplásmico, se mueve
orgánica. La PEP es una molécula de alta energía que puede ser a través de la membrana plasmática con la ayuda del transportador. Después
Figura 5.7 Translocación de grupo: transporte de PTS bacteriano. Se Manitol-1-P

ilustran dos ejemplos del sistema fosfoenolpiruvato:azúcar fosfotransferasa
(PTS). Los siguientes componentes están involucrados en el sistema:
fosfoenolpiruvato (PEP), enzima I (EI), proteína termoestable de bajo peso
PAGS PAGS
molecular (HPr) y enzima II ( EII). El fosfato de alta energía se transfiere manitol

de HPr al EIIA soluble. EIIA está unido a EIIB en el sistema de transporte IIA IIB CII
de manitol y está separado de EIIB en el sistema de glucosa. En cualquier

caso, el fosfato se mueve de EIIA a EIIB y luego se transfiere al azúcar
durante el transporte a través de la membrana. Son posibles otras ENERGÍA IE HPr ~ PAGS
Glucosa-6-P
relaciones entre los componentes de EII. Por ejemplo, IIA y IIB pueden
formar una proteína soluble separada del complejo de membrana; el fosfato
PAGS PAGS
piruvato EI ~ P HPr
todavía se mueve de IIA a IIB y luego a los dominios de membrana.
Glucosa
IIA IIB CII
citoplasmático periplasma
matriz
ferricromo enterobactina el hierro ha entrado en la celda, se reduce a la forma ferrosa (Fe2 ).
O El hierro es tan crucial para los microorganismos que pueden utilizar más de una vía de
CH3 Fe3+
absorción de hierro para garantizar un suministro adecuado.
O
C O
Fe3+ CO
1. Describir la difusión facilitada, el transporte activo y la translocación de grupos en
norte O
NUEVA HAMPSHIRE
términos de sus características y mecanismos distintivos. ¿Qué ventaja obtiene un
(CH2)3 microbio al utilizar el transporte activo en lugar de la difusión facilitada?
(CO CH CH2 O)3
(NHCH2CO )3 (NHCHCO)3
2. ¿Qué son los procesos de simportación y antiportación?
(a) (B)
3. ¿Qué dos mecanismos permiten el paso de nutrientes a través de la membrana externa
Enterobactina-complejo de hierro de las bacterias gramnegativas antes de que se transporten activamente a través de
O
la membrana plasmática?
C
4. ¿Cuál es la diferencia entre un transportador ABC y una porina en términos de función
NUEVA HAMPSHIRE
y ubicación celular?
O 5. ¿Qué son los sideróforos? ¿Por qué son importantes?
O
O
O
C O 5.7 MEDIOS DE CULTIVO
Planchar
O norte
Gran parte del estudio de la microbiología depende de la capacidad de cultivar y mantener
H
hn microorganismos en el laboratorio, y esto solo es posible si se dispone de medios de cultivo
O adecuados. Un medio de cultivo es una preparación sólida o líquida utilizada para cultivar,
transportar y almacenar microorganismos. Para ser efectivo, el medio debe contener todos los
C
O nutrientes que el microorganismo requiere para su crecimiento. Los medios especializados son
esenciales en el aislamiento e identificación de microorganismos, pruebas de sensibilidad a
(C) antibióticos, análisis de agua y alimentos, microbiología industrial y otras actividades. Si bien
todos los microorganismos necesitan fuentes de energía, carbono, nitrógeno, fósforo, azufre y
Figura 5.8 Complejos sideróforos de hierro férrico. (a) El varios minerales, la composición precisa de un medio satisfactorio dependerá de la especie que
ferricromo es una molécula de hidroxamato cíclico [—CO—N(O)—] formada se intente cultivar debido a que los requerimientos nutricionales varían mucho. El conocimiento
por muchos hongos. (b) E. coli produce el derivado del catecolato cíclico, la del hábitat normal de un microorganismo a menudo es
enterobactina. (c) El hierro férrico probablemente forma complejos con tres

grupos sideróforos para forman un complejo octaédrico de seis coordenadas
como se muestra en esta ilustración del complejo enterobactina-hierro.
Medios culturales 111
Cuadro 5.4 Tipos de medios Cuadro 5.5 Ejemplos de medios definidos
Físico Químico Medio BG-11 para cianobacterias Cantidad (g/litro)

Naturaleza Composición Tipo funcional
NaNO3 1.5
Líquido Definido (sintético) De apoyo (propósito general) K2HPO4 · 3H2O 0.04
Complejo semisólido Enriquecido 0.075
MgSO4 · 7H2O
Sólido Selectivo 0.036
CaCl2 · 2H2O
Diferencial Ácido cítrico 0.006
Citrato de amonio férrico 0.006
EDTA (sal de Na2Mg ) 0.001
Na2CO3 0.02
útil en la selección de un medio de cultivo apropiado porque sus requerimientos de
Solución de metales trazaa 1,0 ml/litro
nutrientes reflejan su entorno natural. Con frecuencia un
medio se utiliza para seleccionar y cultivar microorganismos específicos o para pH final 7,4
ayudar a identificar una especie en particular. En tales casos, la función del

Medio para Escherichia coli Cantidad (g/litro)
El medio también determinará su composición.
Los medios de cultivo se pueden clasificar en función de varios parámetros: los Glucosa 1.0
componentes químicos de los que están hechos, Na2HPO4 16.4

su naturaleza física y su función (tabla 5.4). los tipos de KH2PO4 1.5
los medios definidos por estos parámetros se describen aquí. 2.0
(NH4)2SO4
MgSO4 · 7H2O 200,0 miligramos
Tipos químicos y físicos de medios de cultivo CaCl2 FeSO4 · 10,0 miligramos
Un medio en el que se conocen todos los componentes químicos es un medio definido 7H2O pH final 6,8– 0,5 miligramos
o sintético. Puede ser en forma líquida (caldo) o 7,0
solidificado por un agente como el agar, como se describe a continuación

Fuentes: Datos de Rippka, et al. Revista de Microbiología General, 111:1–61, 1979; y SS
secciones. Los medios definidos se utilizan a menudo para cultivar fotolitotróficos.
Cohen y R. Arbogast, Journal of Experimental Medicine, 91:619, 1950.
autótrofos como cianobacterias y protistas fotosintéticos. a
La solución de metales traza contiene H3BO3, MnCl2 · 4H2O, ZnSO4 · 7H2O, Na2Mo4 ·
Se pueden cultivar en medios relativamente simples que contienen CO2 como 2H2O, CuSO4 · 5H2O y Co(NO3)2 · 6H2O.
una fuente de carbono (a menudo añadida como carbonato o bicarbonato de sodio),

nitrato o amoníaco como fuente de nitrógeno, sulfato, fosfato y
variedad de minerales (tabla 5.5). Muchos heterótrofos quimioorganotróficos también ácidos, vitaminas y minerales. El extracto de levadura es una excelente fuente
se pueden cultivar en medios definidos con glucosa como medio. de vitaminas B, así como compuestos de nitrógeno y carbono. Tres
fuente de carbono y una sal de amonio como fuente de nitrógeno. No todo Los medios complejos de uso común son (1) caldo nutritivo, (2) tríptico
los medios definidos son tan simples como los ejemplos en la tabla 5.5 pero pueden caldo de soya y (3) agar MacConkey (tabla 5.6).
construirse a partir de docenas de componentes. Los medios definidos son Aunque tanto los medios líquidos como los solidificados se usan rutinariamente
ampliamente utilizado en la investigación, ya que a menudo es deseable saber cuál es el en los laboratorios de microbiología, los medios solidificados son especialmente importantes.
el microorganismo experimental está metabolizando. Los medios solidificados se pueden utilizar para aislar diferentes microbios de
Medios que contienen algunos ingredientes de sustancias químicas desconocidas entre sí para establecer culturas puras. Como se discutió en
composición son medios complejos. Estos medios son muy útiles, ya que capítulo 1, este es un paso crítico para demostrar la relación
un solo medio complejo puede ser lo suficientemente rico para entre un microbio y una enfermedad usando los postulados de Koch. Ambas cosas
satisfacer los requerimientos nutricionales de muchos microorganismos diferentes. los medios definidos y complejos se pueden solidificar con la adición de 1.0
Además, a menudo se necesitan medios complejos porque la a agar al 2,0%; más comúnmente se usa 1.5%. El agar es un polímero sulfatado
Se desconocen los requisitos nutricionales de un microorganismo particular y, por lo compuesto principalmente por D-galactosa, 3,6-anhidro-L-galactosa,
tanto, no se puede construir un medio definido. Esto es y ácido D-glucurónico (Aspectos destacados históricos 5.1). por lo general es
la situación con muchas bacterias fastidiosas que tienen requisitos nutricionales o extraído de algas rojas. El agar es muy adecuado como agente solidificante.
culturales complejos; incluso pueden requerir un por varias razones. Una es que se derrite a unos 90°C pero una vez
medio que contiene sangre o suero. fundido no se endurece hasta que alcanza unos 45°C. Así, después de derretirse en
Los medios complejos contienen componentes indefinidos como peptonas, agua hirviendo, puede enfriarse a una temperatura que
extracto de carne y extracto de levadura. Las peptonas son hidrolizados de proteínas. es tolerado tanto por las manos humanas como por los microbios. Es más,
preparado por digestión proteolítica parcial de carne, caseína, soja Los microbios que crecen en medio de agar se pueden incubar en una amplia
harina, gelatina y otras fuentes de proteína. Sirven como fuentes de rango de temperaturas Finalmente, el agar es un excelente endurecedor.
carbono, energía y nitrógeno. El extracto de carne y el extracto de levadura son porque la mayoría de los microorganismos no pueden degradarlo.
extractos acuosos de carne magra y levadura de cerveza, respectivamente. A veces se emplean otros agentes solidificantes. Por ejemplo, el gel de sílice se
El extracto de carne contiene aminoácidos, péptidos, nucleótidos, orgánicos utiliza para cultivar bacterias autótrofas en medios sólidos.
en ausencia de sustancias orgánicas y para determinar el carbono

Tabla 5.6 Algunos medios complejos comunes
fuentes de bacterias heterótrofas al complementar el medio
caldo nutritivo Cantidad (g/litro) con diversos compuestos orgánicos.
Peptona (hidrolizado de gelatina) 5

extracto de carne 3 Tipos funcionales de medios
Los medios como el caldo de soja tríptico y el agar de soja tríptico se denominan
Caldo de soja tríptico
medios de propósito general o medios de apoyo porque sostienen
Triptona (digerido pancreático de caseína) 17 el crecimiento de muchos microorganismos. Se puede agregar sangre y otros
Peptona (digerido de soja) 3 nutrientes especiales a los medios de uso general para estimular la
Glucosa 2.5 crecimiento de microbios fastidiosos. Estos medios especialmente fortificados
Cloruro de sodio 5 (p. ej., agar sangre) se denominan medios enriquecidos (figura 5.9).
2.5 Los medios selectivos favorecen el crecimiento de microorganismos

Fosfato dipotásico
particulares (tabla 5.7). Sales biliares o colorantes como fucsina básica y cristal.
Agar MacConkey violeta favorecen el crecimiento de bacterias gramnegativas al inhibir la
17.0 crecimiento de bacterias grampositivas; los colorantes no tienen efecto sobre los
Digerido pancreático de gelatina
organismos gram negativos. Agar endo, agar eosina azul de metileno y
Digerido pancreático de caseína 1.5
El agar MacConkey (tablas 5.6 y 5.7) son tres medios ampliamente utilizados
Digerido péptico de tejido animal 1.5
para la detección de E. coli y bacterias relacionadas en suministros de agua
Lactosa 10.0
y en otros lugares Estos medios contienen colorantes que suprimen el crecimiento
sales biliares 1.5
bacteriano grampositivo. El agar MacConkey también contiene bilis.
Cloruro de sodio 5.0
sales. Las bacterias también pueden ser seleccionadas por incubación con nutrientes.
rojo neutro 0.03
que ellos específicamente pueden usar. Un medio que contiene solo celulosa.
Cristal violeta 0.001 como fuente de carbono y energía es bastante eficaz en el aislamiento de
agar 13.5 bacterias digestivas de celulosa. Las posibilidades de selección son
interminable, y hay docenas de medios selectivos especiales en uso.
5.1 El descubrimiento del agar como agente solidificante y el aislamiento de cultivos puros
Los primeros medios de cultivo eran líquidos, lo que dificultaba el aislamiento de bacteria patogénica. Koch decidió intentar solidificar este medio.
bacterias para preparar cultivos puros extremadamente difícil. En la práctica, un Koch era un fotógrafo aficionado —fue el primero en tomar microfotografías de
la mezcla de bacterias se diluyó sucesivamente hasta que sólo un organismo, bacterias— y tenía experiencia en la preparación de sus fotografías.
como promedio, estaba presente en un recipiente de cultivo. si todo propias placas fotográficas a partir de sales de plata y gelatina. Precisamente el
salió bien, la bacteria individual así aislada se reproduciría Se empleó el mismo enfoque para preparar medios sólidos. él esparció
para dar una cultura pura. Este enfoque era tedioso, daba resultados variables y una mezcla de medio de Loeffler y gelatina sobre una placa de vidrio, dejó que se
estaba plagado de problemas de contaminación. Comprensiblemente, el progreso endureciera e inoculó la superficie de la misma manera que
en el aislamiento de bacterias patógenas fue lento. había inoculado sus patatas en rodajas. El nuevo medio sólido funcionó
El desarrollo de técnicas para el cultivo de microorganismos en bien, pero no se pudo incubar a 37°C (la mejor temperatura para
medios sólidos y la obtención eficiente de cultivos puros se debió a la la mayoría de los patógenos bacterianos humanos) porque la gelatina se derretiría.
esfuerzos del bacteriólogo alemán Robert Koch y sus asociados. En 1881, Koch Además, algunas bacterias digirieron la gelatina.
publicó un artículo que describía el uso de hervido Aproximadamente un año después, en 1882, el agar se utilizó por primera vez como solidificador
papas, cortadas con un cuchillo esterilizado a la llama, en cultivo de bacterias. agente. Había sido descubierto por una posadera japonesa, Minora
La superficie de una rebanada estéril de patata se inoculó con bacterias Tarazaemón. La historia cuenta que tiró sopa de algas extra
de la punta de una aguja, y luego las bacterias se dispersaron sobre el y descubrió al día siguiente que se había cuajado durante el frío invierno
superficie para que unas pocas células individuales se separen de la noche. El agar había sido utilizado por los holandeses de las Indias Orientales para hacer jaleas
recordatorio. Las rebanadas se incubaron debajo de campanas de cristal para evitar y mermeladas. Fannie Eilshemius Hesse (ver figura 1.7), la esposa nacida en
contaminación del aire, y las células aisladas se convirtieron en puro Nueva Jersey de Walther Hesse, uno de los asistentes de Koch, había aprendido
colonias Desafortunadamente, muchas bacterias no crecerían bien en rodajas de de agar de un conocido holandés y sugirió su uso cuando ella
patata. oído hablar de las dificultades con la gelatina. El medio solidificado con agar fue
Casi al mismo tiempo, Frederick Loeffler, asociado de un éxito instantáneo y continúa siendo esencial en todas las áreas de
Koch, desarrolló un medio de peptona de extracto de carne para cultivar microbiología.
Aislamiento de cultivos puros 113
el agar es a la vez diferencial y selectivo. Dado que contiene lactosa y colorante rojo
neutro, las colonias fermentadoras de lactosa aparecen de color rosa a rojo y se
distinguen fácilmente de las colonias no fermentadoras.
1. Describa los siguientes tipos de medios y sus usos: medios definidos,

medios complejos, medios de apoyo, medios enriquecidos, medios selectivos
y medios diferenciales. Da un ejemplo de cada tipo.
2. ¿Qué son las peptonas, el extracto de levadura, el extracto de carne y el agar? ¿Por qué se
usan en los medios?
5.8 AISLAMIENTO DE CULTIVOS PUROS

(a) En los hábitats naturales, los microorganismos suelen crecer en poblaciones complejas
y mixtas con muchas especies. Esto presenta un problema para los microbiólogos
porque un solo tipo de microorganismo no puede estudiarse adecuadamente en un
cultivo mixto. Se necesita un cultivo puro, una población de células que surja de una
sola célula, para caracterizar una especie individual. Los cultivos puros son tan
importantes que el desarrollo de técnicas de cultivo puro por parte del bacteriólogo
alemán Robert Koch transformó la microbiología. Aproximadamente 20 años después
del desarrollo de las técnicas de cultivo puro, se habían aislado la mayoría de los
patógenos responsables de las principales enfermedades bacterianas humanas (ver
figura 1.2). Hay varias formas de preparar cultivos puros; algunos de los enfoques más
comunes se revisan aquí.
La placa extendida y la placa rayada Si una mezcla
de células se extiende sobre una superficie de agar a una densidad relativamente baja,
cada célula se convierte en una colonia completamente separada, un crecimiento
visible macroscópicamente o un grupo de microorganismos en un medio sólido. Debido
a que cada colonia surge de una sola célula, cada colonia representa un cultivo puro.
La placa de extensión es una forma fácil y directa de lograr este resultado. Un
pequeño volumen de mezcla microbiana diluida que contiene alrededor de 30 a 300
células se transfiere al centro de una placa de agar y se esparce uniformemente sobre
(B) la superficie con una varilla de vidrio doblada estéril (figura 5.10). Las células dispersas
se desarrollan en colonias aisladas. Debido a que la cantidad de colonias debe ser
Figura 5.9 Medios enriquecidos. (a) Cultivo en agar sangre de igual a la cantidad de organismos viables en la muestra, se pueden usar placas de
bacterias de la garganta humana. (b) Agar chocolate, un medio enriquecido extensión para contar la población microbiana.
utilizado para cultivar organismos exigentes como Neisseria gonorrhoeae. El
color marrón es el resultado de calentar los glóbulos rojos y lisarlos antes de También se pueden obtener colonias puras a partir de placas de rayas. La mezcla
agregarlos al medio. Se llama agar chocolate por su color marrón chocolate. microbiana se transfiere al borde de una placa de agar con un asa o hisopo de
inoculación y luego se extiende sobre la superficie en uno de varios patrones (figura
5.11). Después de sembrar el primer sector, se esteriliza el asa de inoculación y se
obtiene del primer sector un inóculo para el segundo sector. Se sigue un proceso
Los medios diferenciales son medios que distinguen entre diferentes grupos similar para sembrar el tercer sector, excepto que el inóculo es del segundo sector. Por
de microbios e incluso permiten la identificación tentativa de microorganismos en lo tanto, esto es esencialmente un proceso de dilución. Eventualmente, muy pocas
función de sus características biológicas. El agar sangre es tanto un medio diferencial células estarán en el asa, y las células sueltas caerán mientras se frota a lo largo de la
como enriquecido. Distingue entre bacterias hemolíticas y no hemolíticas. Las bacterias superficie del agar. Estos se desarrollan en colonias separadas. Tanto en la técnica de
molíticas (p. ej., muchos estreptococos y estafilococos aislados de la garganta) placa extendida como en la de placa rayada, el aislamiento exitoso depende de la
producen zonas claras alrededor de sus colonias debido a la destrucción de los glóbulos separación espacial de las células individuales.
rojos (figura 5.9a). macconkey
Cuadro 5.7 Mecanismos de acción de los medios selectivos y diferenciales
Medio Tipo funcional Mecanismo de acción
agar sangre Enriquecido y diferencial El agar sangre favorece el crecimiento de muchas bacterias exigentes. Estos pueden ser
se diferencian en función de su capacidad para producir hemolisinas, proteínas que lisan
los glóbulos rojos. La hemólisis aparece como una zona clara alrededor de la colonia (-
hemólisis) o como un halo verdoso alrededor de la colonia (-hemólisis) (p. ej.,
Streptococcus pyogenes, un estreptococo hemolítico).
Eosina azul de metileno Selectivo y diferencial Dos colorantes, eosina Y y azul de metileno, inhiben el crecimiento de bacterias grampositivas.
agar (EMB) bacterias También reaccionan con productos ácidos liberados por ciertos gramnegativos.
bacterias cuando utilizan lactosa o sacarosa como fuentes de carbono y energía.
Colonias de bacterias gramnegativas que producen grandes cantidades de ácido
los productos tienen un brillo metálico verde (p. ej., bacterias fecales como E. coli).
Agar MacConkey (MAC) Selectivo y diferencial Los componentes selectivos de MAC son las sales biliares y el cristal violeta, que inhiben
el crecimiento de bacterias grampositivas. La presencia de lactosa y rojo neutro, un
Indicador de pH, permite la diferenciación de bacterias gramnegativas en base a la
productos liberados cuando utilizan la lactosa como fuente de carbono y energía. los
las colonias de las que liberan productos ácidos son rojas (p. ej., E. coli).
Agar sal manitol Selectivo y diferencial Una concentración de NaCl al 7,5% selecciona para el crecimiento de estafilococos. Patógeno
los estafilococos se pueden diferenciar en función de la liberación de productos ácidos
cuando utilizan manitol como fuente de carbono y energía. Los productos ácidos
hacer que un indicador de pH (rojo fenol) se vuelva amarillo (p. ej., Staphylococcus aureus).
(a)
Figura 5.10 Técnica de placa extendida. (a) La preparación de

un plato extendido. (1) Pipetee una pequeña muestra en el centro de un
placa mediana de agar. (2) Sumergir un esparcidor de vidrio en un vaso de precipitados de
etanol. (3) Flamee brevemente el esparcidor empapado en etanol y déjelo

enfriar (4) Distribuya la muestra uniformemente sobre la superficie de agar con
el esparcidor esterilizado. Incubar. (b) Resultado típico de la placa extendida
técnica. (B)
Aislamiento de cultivos puros 115
Nota: Este método solo funciona si la herramienta de esparcimiento

(generalmente un asa de inoculación) se vuelve a esterilizar después
de cada uno de los pasos 1 a 4.
12345
(a) Pasos en una placa de rayas (B)
Figura 5.11 Técnica de placa de rayas. Se muestra un patrón de rayas típico (a) , así como un ejemplo de una placa de rayas (b).
1,0 ml 1,0ml 1,0 ml 1,0 ml
Original 9ml de H2O 9ml de H2O 9ml de H2O 9ml de H2O

muestra ( dilución 10–1 ) ( dilución 10–2 ) ( dilución 10–3 ) ( dilución 10–4 )
mezclar con tibio

1,0 ml 1,0ml
agar y verter.
Figura 5.12 Técnica de vertido en placa. La muestra original se diluye varias veces para diluir suficientemente la población. lo mas
Luego, las muestras diluidas se mezclan con agar tibio y se vierten en placas de Petri. Las células aisladas crecen en colonias y pueden usarse para establecer
cultivos puros. Las colonias superficiales son circulares; Las colonias del subsuelo son lenticulares (en forma de lente).
El plato de vertido al agar tibio. Una vez endurecido el agar, cada célula se fija en
Ampliamente utilizado con procariotas y hongos, una placa de vertido también puede lugar y forma una colonia individual. Al igual que el plato extendido, el vertido
producen colonias aisladas. La muestra original se diluye varias veces para placa se puede utilizar para determinar el número de células en una población.
reducir la población microbiana lo suficiente como para obtener Se cuentan las placas que contienen entre 30 y 300 colonias. El número total de
colonias al sembrar (figura 5.12). Luego pequeños volúmenes de varios colonias es igual al número de microorganismos viables
las muestras diluidas se mezclan con agar líquido que se ha enfriado hasta en la muestra que son capaces de crecer en el medio utilizado.
aproximadamente 45°C, y las mezclas se vierten inmediatamente en placas de cultivo Las colonias que crecen en la superficie también se pueden usar para inocular
estériles. La mayoría de las bacterias y los hongos no mueren con una exposición breve medio y preparar cultivos puros (Técnicas y Aplicaciones 5.2).
5.2 El enriquecimiento y aislamiento de las culturas puras
Un problema práctico importante es la preparación de cultivos puros cuando solo crecerán bacterias capaces de usar 2,4-D. Después de la incubación, una muestra
Los microorganismos están presentes en cantidades muy bajas en una muestra. Los del cultivo original se transfiere a un matraz nuevo de selectivo
métodos de cultivo en placas se pueden combinar con el uso de medios selectivos o medio para un mayor enriquecimiento de bacterias metabolizadoras de 2,4-D. A
diferenciales para enriquecer y aislar microorganismos raros. Un bien surgirá una población mixta de bacterias que degradan 2,4-D después de varias
ejemplo es el aislamiento de bacterias que degradan el herbicida 2,4- tales transferencias. Se pueden obtener cultivos puros sembrando esta mezcla
ácido diclorofenoxiacético (2,4-D). Bacterias capaces de metabolizar en agar que contiene 2,4-D como única fuente de carbono. Solo bacterias
El 2,4-D se puede obtener con un medio líquido que contiene 2,4-D como su capaz de crecer en 2,4-D, formar colonias visibles y se puede subcultivar.
única fuente de carbono y el nitrógeno, fósforo, azufre, Este mismo enfoque general se utiliza para aislar y purificar una variedad de
y componentes minerales. Cuando este medio se inocula con suelo, bacterias mediante la selección de características fisiológicas específicas.
Formulario
puntiforme Circular Filamentoso Irregular rizoide Huso
Elevación
Departamento Elevado Convexo pulvinate Umbonado
Margen
Completo Ondular lóbulo rosa Filamentoso rizado
(a)
(B) (C)
Figura 5.13 Morfología de colonias bacterianas. (a) Variaciones en la morfología de las colonias bacterianas observadas a simple vista. la forma general
de la colonia y la forma del borde o margen se puede determinar mirando hacia abajo en la parte superior de la colonia. La naturaleza de la colonia.
la elevación es evidente cuando se ve desde un lado mientras la placa se sostiene a la altura de los ojos. (b) Ejemplos de morfologías de colonias comúnmente observadas.
(c) La morfología de la colonia puede variar dramáticamente con el medio en el que crecen las bacterias. Estas hermosas colonias como copos de nieve
fueron formados por Bacillus subtilis creciendo en agar pobre en nutrientes. Aparentemente, las bacterias se comportan cooperativamente cuando se enfrentan a malas
condiciones de crecimiento y, a menudo, el resultado es una estructura intrincada que se asemeja a los patrones fractales que se ven en los sistemas no vivos.
Resumen 117
Las técnicas anteriores requieren el uso de placas de cultivo especiales denominadas entes de oxígeno, nutrientes y productos tóxicos dentro de la colonia. En el borde de la
placas de petri o placas en honor a su inventor Julius Richard Petri, miembro del laboratorio colonia, el oxígeno y los nutrientes son abundantes. El centro de la colonia es mucho más
de Robert Koch; Petri desarrolló estas placas alrededor de 1887 e inmediatamente grueso que el borde. En consecuencia, el oxígeno y los nutrientes no se difunden fácilmente
reemplazaron las placas de vidrio recubiertas de agar. Consisten en dos mitades redondas, hacia el centro, los productos metabólicos tóxicos no se pueden eliminar rápidamente y el
la mitad superior superpuesta a la inferior. Las placas de Petri son muy fáciles de usar, se crecimiento en el centro de la colonia se ralentiza o se detiene. Debido a estas variaciones
pueden apilar unas sobre otras para ahorrar espacio y son uno de los elementos más ambientales dentro de una colonia, las células de la periferia pueden crecer a tasas máximas
habituales en los laboratorios de microbiología. mientras que las células del centro están muriendo. Crecimiento microbiano en entornos
naturales: biopelículas (sección 6.6)
Es obvio a partir de las colonias representadas en la figura 5.13 que las bacterias que
Crecimiento microbiano en superficies de agar El
crecen en superficies sólidas como el agar pueden formar colonias bastante complejas e
desarrollo de colonias en superficies de agar ayuda a los microbiólogos a identificar intrincadas. Estos patrones varían con la disponibilidad de nutrientes y la dureza de la
microorganismos porque las especies individuales a menudo forman colonias de tamaño y superficie del agar. Todavía no está claro cómo se desarrollan los patrones característicos de
apariencia característicos (figura 5.13). las colonias. La difusión y disponibilidad de nutrientes, la quimiotaxis bacteriana y la presencia
Cuando una población mixta se ha sembrado correctamente en placas, a veces es posible de líquido en la superficie parecen desempeñar un papel en la formación de patrones.
identificar la colonia deseada en función de su apariencia general y utilizarla para obtener un
cultivo puro. La estructura de las colonias bacterianas también se ha examinado con el La comunicación célula-célula también es importante. Se requerirá mucho trabajo para
microscopio electrónico de barrido. La estructura microscópica de las colonias suele ser tan comprender la formación de colonias bacterianas y biopelículas.
variable como su apariencia visible.
En la naturaleza, los microorganismos a menudo crecen en superficies en biopelículas, 1. ¿Qué son las culturas puras y por qué son importantes? como se propagan
agregaciones de microbios recubiertas de limo. Sin embargo, a veces forman colonias ¿Están preparadas las placas, las placas de rayas y las placas de vertido?
discretas. Por lo tanto, es importante comprender el crecimiento de colonias, y el crecimiento 2. ¿De qué manera varía el crecimiento microbiano dentro de una colonia? ¿Qué factores podrían
de colonias en agar se ha estudiado con frecuencia. Generalmente, el crecimiento celular causar estas variaciones en el crecimiento?
más rápido ocurre en el borde de la colonia. El crecimiento es mucho más lento en el centro 3. ¿Cómo podría usarse un cultivo de enriquecimiento para aislar bacterias capaces de
y la autólisis celular tiene lugar en las porciones centrales más viejas de algunas colonias. pesticidas degradantes y otros desechos peligrosos?
Estas diferencias en el crecimiento se deben a gradi
Resumen
Los microorganismos requieren nutrientes, materiales que se utilizan en la biosíntesis y para hacer que 5.5 Factores de crecimiento
la energía esté disponible.

un. Muchos microorganismos necesitan factores de
5.1 Los requerimientos nutricionales comunes crecimiento. B. Las tres clases principales de factores de crecimiento son los aminoácidos, las purinas
y las pirimidinas y las vitaminas. Las vitaminas son pequeñas moléculas orgánicas que suelen
un. Los macronutrientes o macroelementos (C, O, H, N, S, P, K, Ca, Mg y Fe) se necesitan en
ser componentes de cofactores enzimáticos.
cantidades relativamente grandes. B. Los micronutrientes o elementos traza (p. ej., Mn, Zn, Co,
C. Saber si un microbio requiere un factor de crecimiento particular tiene aplicaciones prácticas:
Mo, Ni y Cu) se utilizan en cantidades muy pequeñas.
aquellos que necesitan un factor de crecimiento pueden usarse en bioensayos que detectan y
cuantifican el factor de crecimiento; aquellos que no necesitan un factor de crecimiento en
5.2 Requisitos de carbono, hidrógeno, oxígeno y electrones particular a veces se pueden usar para producir el factor de crecimiento en entornos industriales.
un. Todos los organismos requieren una fuente de carbono, hidrógeno, oxígeno y electrones. B. Los
5.6 Absorción de nutrientes por la célula
heterótrofos utilizan moléculas orgánicas como fuente de carbono. Estas moléculas a menudo
un. Aunque algunos nutrientes pueden entrar en las células por difusión pasiva, normalmente se
suministran hidrógeno, oxígeno y también electrones. Algunos heterótrofos también obtienen
requiere una proteína transportadora de membrana. B. En la difusión facilitada, la proteína de
energía de su fuente de carbono orgánico. C. Los autótrofos utilizan el CO2 como su principal o
transporte simplemente transporta una molécula a través de la membrana en la dirección de
única fuente de carbono; deben obtener
concentración decreciente y no se requiere energía metabólica (figura 5.4). C. Los sistemas de
hidrógeno y electrones de otras fuentes.
transporte activo utilizan energía metabólica y proteínas transportadoras de membrana para
5.3 Tipos nutricionales de microorganismos concentrar sustancias de forma activa transportándolas contra un gradiente. Los transportadores ABC
un. Los microorganismos se pueden clasificar en función de sus fuentes de energía y de electrones utilizan ATP como fuente de energía (figura 5.5). Gradientes de protones e iones de sodio
(tabla 5.1). Los fotótrofos usan energía luminosa y los quimiotrofos obtienen energía de la también impulsan la absorción de solutos a través de las membranas (figura 5.6). D. Las
oxidación de compuestos químicos. bacterias también transportan moléculas orgánicas mientras las modifican, un proceso conocido
B. Los electrones son extraídos de sustancias inorgánicas reducidas por litótrofos y como translocación de grupos. Por ejemplo, muchos azúcares se transportan y fosforilan
de compuestos orgánicos por organótrofos (tabla 5.2). simultáneamente (figura 5.7).
5.4 Requerimientos de Nitrógeno, Fósforo y Azufre

mi. El hierro se acumula por la secreción de sideróforos, pequeñas moléculas capaces de formar
un. El nitrógeno, el fósforo y el azufre pueden obtenerse a partir de las mismas moléculas orgánicas complejos con el hierro férrico (figura 5.8). Cuando el complejo hierro-sideróforo llega a la
que suministran carbono, a partir de la incorporación directa de amoníaco y fosfato, y por superficie de la célula, se introduce y el hierro se reduce a la forma ferrosa.
reducción y asimilación de moléculas inorgánicas oxidadas.
5.7 Medios de cultivo 5.8 Aislamiento de cultivos puros
un. Los medios de cultivo se pueden construir completamente a partir de componentes químicamente un. Los cultivos puros generalmente se obtienen aislando células individuales con cualquiera de las tres
definidos (medios definidos o medios sintéticos) o constituyentes como peptonas y extracto de técnicas de placas: los métodos de placa extendida, placa de rayas y placa de vertido. Los
levadura cuya composición precisa se desconoce (medios complejos). B. Los medios de cultivo métodos de placa extendida (figura 5.10) y placa de vertido (figura 5.12) por lo general implican
se pueden solidificar mediante la adición de agar, un polisaco complejo diluir un cultivo o una muestra y luego sembrar en placas las diluciones. En la técnica de placa
charide de algas rojas. extendida, se usa una varilla de forma especial para esparcir las células en la superficie del agar;
En la técnica de vertido en placa, las células se mezclan primero con medio enfriado que contiene
C. Los medios de cultivo se clasifican según su función y composición en medios de apoyo, medios
agar antes de verterlas en una placa de Petri. La técnica de la placa de rayas (figura 5.11) utiliza
enriquecidos, medios selectivos y medios diferenciales. Los medios de apoyo se utilizan para
un asa de inoculación para esparcir las células por una superficie de agar.
cultivar una amplia variedad de microbios. Los medios enriquecidos son medios de apoyo que
contienen nutrientes adicionales que necesitan los microbios fastidiosos.
Los medios selectivos contienen componentes que seleccionan para el crecimiento de algunos B. Los microorganismos que crecen en superficies sólidas tienden a formar colonias con morfología
microbios. Los medios diferenciales contienen componentes que permiten que los microbios se distintiva (figura 5.13). Las colonias suelen crecer más rápidamente en el borde, donde se dispone
diferencien unos de otros, generalmente en función de alguna capacidad metabólica. de una mayor cantidad de los recursos necesarios.
Términos clave
transporte activo 107 medio definido 111 organotrofos 103 fotótrofos 103 verter
agar 111 antiport 108 medios diferenciales 113 difusión pasiva 106 placa 115 cultivo
medios enriquecidos 112 peptonas 111 permeasa puro 113 medios
Transportadores de casetes de unión a ATP difusión facilitada 106 106 placa de Petri 117 selectivos 112
(transportadores ABC) 108 translocación de grupo 109 fosfoenolpiruvato: sistema sideróforos 109 placa
autótrofos 102 quimioheterótrofos factores de crecimiento 105 de azúcar fosfotransferasa de extensión 113
103 quimiolitoheterótrofos 103 heterótrofos 102 litótrofos 103 placa de rayas 113
quimiolitotrofos autótrofos 103 macroelementos 101 (PTS) 109 medios de soporte 112
quimioorganotrofos heterótrofos 103 sistema de fosforescencia 109 simport 108 medio sintético
quimiotrofos 103 colonia 113 medio complejo micronutrientes 101 fotoautótrofos 103 autótrofos 111 oligoelementos 101
111 mixótrofos 103 fotolitotróficos 103 heterótrofos
nutriente 101 fotoorganotróficos 103 vitaminas 105
1. Discutir las ventajas y desventajas de la translocación de grupo versus endo 2. Si quisiera obtener un cultivo puro de bacterias que pudieran degradar el benceno y utilizarlo como
citosis fuente de carbono y energía, ¿cómo procedería?
Aprende más
Abramson, J.; Smirnova, I.; Kasho, V.; Verner, G.; Kaback, HR; y Iwata, S. Hohman, S.; Proyecto de ley, RM; Kayingo, G.; y Prior, BA 2000. Canales MIP microbianos. Tendencias
2003. Estructura y mecanismo de la lactosa permeasa de Escherichia coli. en Microbiol. 8(1):33–38.
Ciencia 301: 610–15.
Holt, JG y Krieg, NR 1994. Enriquecimiento y aislamiento. En Methods for general and molecular
Becton, Dickinson and Co. 2005. Manual de Difco y BBL: Manual de microbiología bacteriology, 2d ed. P. Gerhardt, editor, 179–215. Washington, DC: Sociedad Estadounidense de
medios de cultivo ical, 1ª ed., Franklin Lakes, NJ: BD. Microbiología.
Davidson, AL y Chen, J. 2004. Transportadores de cassettes de unión a ATP en bacterias. Kelly, DP 1992. Los procariontes quimiolitotróficos. En The Prokaryotes, 2.ª ed., A. Balows et al., editores,
año Rev. Bioquímica. 73:241–68. 331–43. Nueva York: Springer-Verlag.
Gottschall, JC; Más duro, W.; y Prins, RA 1992. Principios de enriquecimiento, aislamiento, cultivo y Postma, PW; Lengeler, JW; y Jacobson, GR 1996. Fosfoenolpiruvato: Sistemas de fosfotransferasa de
conservación de bacterias. En The Prokaryotes, 2ª ed., A. carbohidratos. En Escherichia coli and Salmo nella: Cellular and molecular biology, 2d ed., FC
Balows et al., editores, 149–96. Nueva York: Springer-Verlag. Neidhardt, et al., editores, 1149–74. Washington, DC: ASM Press.
Gutnick, DL y Ben-Jacob, E. 1999. Formación de patrones complejos y organización cooperativa de

colonias bacterianas. En Ecología microbiana y enfermedades infecciosas, E. Rosenberg, editor, Wandersman, C. y Delepelaire, P. 2004. Fuentes bacterianas de hierro: de los sideróforos a los
284–99. Washington, DC: ASM Press. hemoforos. año Rev. Microbiol. 58:611–47.
Hancock, REW y Brinkman, FSL 2002. Función de las porinas de Pseudomonas

en la captación y el eflujo. año Rev. Microbio. 56:17–38.

6Crecimiento microbiano
Los filtros de membrana se utilizan para contar microorganismos. Esta membrana tiene
se ha utilizado para obtener un recuento bacteriano total utilizando un indicador para colorear colonias
para contar fácilmente.
AVANCE
• La mayoría de los procariotas se reproducen por fisión binaria. aunque mas simple variedad de minerales; muchos también requieren uno o más crecimiento especial
que la mitosis y la meiosis, la fisión binaria y el ciclo celular procariótico aún son poco conocidos. factores La célula toma estas sustancias por transporte de membrana.
procesos, los más importantes de los cuales son la difusión facilitada,
• El crecimiento se define como un aumento en los constituyentes celulares y puede transporte activo y translocación de grupo. Las células eucariotas también
resultar en un aumento en el tamaño de un microorganismo, número de población, emplear endocitosis.
o ambos.
El capítulo 6 se concentra más directamente en la reproducción y el crecimiento
• Cuando los microorganismos se cultivan en un sistema cerrado, la población de las procariotas. Primero describimos la fisión binaria, el tipo de
el crecimiento sigue siendo exponencial durante sólo unas pocas generaciones y luego división celular observada con mayor frecuencia entre los procariotas, y
entra en una fase estacionaria debido a factores como la limitación de nutrientes el ciclo celular procariótico. La reproducción celular conduce a un aumento
y acumulación de desechos. En un sistema abierto con adición continua de nutrientes y en el tamaño de la población, por lo que consideramos el crecimiento y las formas en que
eliminación de desechos, la fase exponencial puede ser se puede medir a continuación. Luego discutimos las técnicas de cultivo continuo. Una
mantenida por largos periodos.
descripción de la influencia de los factores ambientales en
• Se puede utilizar una amplia variedad de técnicas para estudiar microbios crecimiento microbiano y crecimiento microbiano en ambientes naturales
crecimiento siguiendo los cambios en el número total de células, la población de
completa el capítulo.
microorganismos viables o la masa celular.
El crecimiento puede definirse como un aumento de los constituyentes celulares.
• La disponibilidad de agua, el pH, la temperatura, la concentración de oxígeno, la presión, la Conduce a un aumento en el número de células cuando los microorganismos
radiación y una serie de otros factores ambientales influyen en el crecimiento microbiano. Sin
se reproducen por procesos como la gemación o la fisión binaria. Crecimiento
embargo, muchos microorganismos, y en particular
también resulta cuando las células simplemente se vuelven más largas o más grandes.
los procariotas, han logrado adaptarse y prosperar bajo condiciones ambientales extremas
Si el microorganismo es cenocítico, es decir, un organismo multinucleado en
que destruirían la mayoría de los organismos superiores.
cuyas divisiones nucleares no van acompañadas de divisiones celulares—
• En el entorno natural, el crecimiento a menudo se ve severamente limitado por
el crecimiento da como resultado un aumento en el tamaño de las células, pero no en el número de células. Está
suministros de nutrientes disponibles y muchos otros factores ambientales.
por lo general no es conveniente para investigar el crecimiento y la reproducción
• Muchos microorganismos forman biopelículas en ambientes naturales. Esta
de microorganismos individuales debido a su pequeño tamaño. Por lo tanto, al estudiar
es una importante estrategia de supervivencia.
el crecimiento, los microbiólogos normalmente siguen
• Los microbios pueden comunicarse entre sí y comportarse de manera cooperativa utilizando
cambios en el número total de la población.
señales dependientes de la densidad de población.
6.1 EL CICLO DE LA CELULA PROCARIOTICA
una fuente de energía y las materias primas esenciales para la con El ciclo celular es la secuencia completa de eventos que se extienden desde
En elconstrucción
capítulo 5 enfatizamos que los microorganismos
de los componentes celulares. Todosnecesitan acceso deben
los organismos a tener la formación de una nueva célula a través de la siguiente división. La mayoría de los
carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno, azufre, fósforo y un procariotas se reproducen por fisión binaria, aunque algunos procariotas
El logro evolutivo primordial de las bacterias como grupo es rápido,

crecimiento celular eficiente en muchos ambientes.
—JL Ingraham, O. Maaløe y FC Neidhardt
120 Capítulo 6 Crecimiento microbiano
Pared celular
Membrana celular
(a) Una célula joven en la fase temprana del ciclo
cromosoma 1
cromosoma 2
Ribosomas
(b) Una célula madre se prepara para la división

agrandando su pared celular, la célula
membrana y volumen total.
(c) El tabique comienza a crecer

hacia adentro a medida que los cromosomas se
mueven hacia los extremos opuestos de la célula.
Otros componentes citoplasmáticos se
distribuyen a las dos células en desarrollo.
(d) El tabique se sintetiza completamente

a través del centro celular,
y los parches de la membrana celular
sí mismo de modo que hay dos separados
cámaras celulares.
(e) En este punto, las células hijas se dividen.

Algunas especies se separan
completamente como se muestra aquí, mientras
que otras permanecen unidas,
formando cadenas, dobletes u otros arreglos
celulares.
Figura 6.1 Fisión binaria.
se reproducen por brotación, fragmentación y otros medios (figura 6.1). La replicación se completa en la terminal, que se encuentra directamente
La fisión binaria es un tipo relativamente simple de división celular: la célula opuesto al origen. En una célula de E. coli recién formada , el cromosoma
se alarga, replica su cromosoma y separa el recién se compacta y organiza de modo que el origen y el término estén en
moléculas de ADN formado por lo que hay un cromosoma en cada mitad de mitades opuestas de la celda. Temprano en el ciclo celular, el origen y
la célula. Finalmente, se forma un tabique (o pared transversal) en la mitad de la célula, el extremo se mueve hacia la mitad de la célula y un grupo de proteínas necesarias para el ADN
dividiendo la célula madre en dos células descendientes, cada una con su propia célula. la síntesis se ensambla para formar el replisoma en el origen. La replicación del
cromosoma y un complemento de otros constituyentes celulares. ADN procede en ambas direcciones desde el origen y el padre.
A pesar de la aparente simplicidad del ciclo celular procariótico, Se cree que el ADN se enrolla a través del replisoma, que permanece relativamente
se entiende mal. Los ciclos celulares de Escherichia coli, Bacil lus subtilis y el microbio estacionario. A medida que se sintetizan los cromosomas de la progenie, la
acuático Caulobacter crescentus han dos orígenes recién formados se mueven hacia extremos opuestos de la célula,
sido examinado extensamente, y nuestra comprensión del ciclo celular se basa en y el resto del cromosoma sigue de manera ordenada.
gran medida en estos estudios. Dos vías funcionan durante el ciclo celular (figura Aunque el proceso de síntesis y movimiento del ADN parece
6.2): una vía se replica y bastante sencillo, el mecanismo por el cual los cromosomas son
divide el ADN en las células de la progenie, el otro lleva a cabo la citocinesis repartido a cada célula hija no se entiende bien. Sorprendentemente, está emergiendo
(formación del tabique y formación de las células de la progenie). Aunque estas vías una imagen en la que están involucrados componentes del citoesqueleto. Durante
se superponen, es más fácil considerarlas muchos años se supuso que los procariotas
por separado. eran demasiado pequeños para estructuras citoesqueléticas de tipo eucariótico. Sin
embargo, una proteína llamada MreB, que es similar a la actina eucariótica,
parece estar involucrado en varios procesos, incluyendo la determinación
Replicación y partición de cromosomas Forma celular y movimiento cromosómico. MreB polimeriza (es decir
Recuerde que la mayoría de los cromosomas procarióticos son circulares. Cada decir, las unidades MreB están unidas entre sí) para formar una espiral alrededor de la
cromosoma circular tiene un solo sitio en el que comienza la replicación. dentro de la periferia de la célula (figura 6.4a). Un modelo sugiere que
llamado el origen de la replicación, o simplemente el origen (figura 6.3). el origen de cada cromosoma recién replicado se asocia con
El ciclo celular procariótico 121
Límite Inicio de Proteínas
longitud la división de división y

alcanzada proceso precursores del tabique
tabicación División
Iniciación Inicio de replicación y partición del ADN particionado

masa la copias
alcanzado replicación del ADN de ADN
0 20 40 60
Tiempo (minutos)
Figura 6.2 El ciclo celular en E. coli. Se ha asumido un intervalo de 60 minutos entre divisiones por razones de simplicidad (el tiempo real entre divisiones
celulares puede ser más corto). E. coli requiere alrededor de 40 minutos para replicar su ADN y 20 minutos después de la terminación de la replicación para
prepararse para la división. La posición de los eventos en la línea de tiempo es aproximada y pretende mostrar el patrón general de ocurrencias.
Origen de la replicación
Bacteria
Las
Comienza la
células se dividen
Cromosoma terminador replicación
replisoma
Los cromosomas
Orígenes
se separan
separados
La célula se alarga a
medida que continúa la replicación.
Figura 6.3 Ciclo celular de E. coli de crecimiento lento. A medida que la célula se prepara para la replicación, el origen migra al centro de la célula y
las proteínas que forman el replisoma se ensamblan. A medida que avanza la replicación, los cromosomas recién sintetizados se mueven hacia los polos,
de modo que tras la citocinesis, cada célula hija hereda solo un cromosoma.
MreB, que luego los mueve a los polos opuestos de la celda. La noción de La citocinesis
que los cromosomas procarióticos pueden moverse activamente hacia los septación es el proceso de formación de una pared transversal entre dos
polos se sugiere además por el hecho de que si MreB muta de manera que células hijas. La citocinesis, un término que tradicionalmente se ha utilizado
ya no puede hidrolizar ATP, su fuente de energía, los cromosomas no para describir la formación de dos células hijas eucariotas, ahora también
logran segregarse adecuadamente. se utiliza para describir este proceso en procariotas. la tabicación es
dividido en varios pasos: (1) selección del sitio donde se formará el forman filamentos, que se cree que crean la malla que constituye el anillo
tabique; (2) ensamblaje de una estructura especializada llamada anillo Z, Z. Numerosos estudios muestran que el anillo Z es muy dinámico, con
que divide la célula en dos por constricción; (3) ligar la edad del anillo Z a partes de la malla que se intercambian constantemente con polímeros
la membrana plasmática y quizás a los componentes de la pared celular; FtsZ cortos recién formados del citosol. Otra proteína, llamada MinCD, es
(4) ensamblaje de la maquinaria de síntesis de la pared celular; y (5) un inhibidor del ensamblaje del anillo Z. Al igual que FtsZ, es muy
constricción del anillo Z y formación del tabique. dinámico, oscilando su posición de un extremo a otro de la celda, forzando
El ensamblaje del anillo Z es un paso crítico en la septación, ya que la formación de anillos en Z solo en el centro de la celda (figura 6.4b). Una
debe formarse si se van a realizar los pasos posteriores. La proteína vez que se forma el anillo en Z, se construye el resto de la maquinaria de
FtsZ, un homólogo de tubulina que se encuentra en la mayoría de las división, como se ilustra en la figura 6.5. Primero, una o más proteínas de
bacterias y muchas arqueas, forma el anillo Z. FtsZ, como la tubulina, se polimeriza
anclaje
a unen el anillo Z a la membrana celular. Luego se ensambla la
maquinaria de síntesis de la pared celular. La matriz citoplasmática: El
citoesqueleto procariótico (sección 3.3)
MreB
Los pasos finales de la división implican la constricción del anillo Z,

acompañada de la invaginación de la membrana celular y la síntesis de la
pared septal. Se han propuesto varios modelos para la constricción del
anillo Z. Un modelo sostiene que los filamentos FtsZ se acortan al perder
subunidades FtsZ (es decir, despolimerización) en sitios donde el anillo Z
(un)
(un)
está anclado a la membrana plasmática. Este modelo está respaldado por
la observación de que los anillos Z de células que producen una cantidad
FtsZ
excesiva de subunidades FtsZ no se contraen.
MinCD
Replicación del ADN en células de crecimiento rápido

La discusión anterior sobre el ciclo celular describe lo que ocurre en las
(B) células de E. coli de crecimiento lento . En estas células, el ciclo celular
tarda aproximadamente 60 minutos en completarse: 40 minutos para la
Figura 6.4 Proteínas del citoesqueleto involucradas en la citocinesis en replicación y partición del ADN y unos 20 minutos para la formación del
bacterias con forma de bastón. (a) El homólogo de actina MreB forma tabique y la citocinesis. Sin embargo, E. coli puede reproducirse a un ritmo
filamentos en espiral alrededor del interior de la célula que ayudan a determinar mucho más rápido, completando todo el ciclo celular en unos 20 minutos,
la forma de la célula y pueden servir para mover los cromosomas a polos a pesar de que la replicación del ADN siempre requiere al menos 40
celulares opuestos. (b) La proteína similar a la tubulina FtsZ se ensambla en el minutos. ¿Cómo puede E. coli completar un ciclo celular completo en 20
centro de la célula para formar un anillo Z, que es esencial para la tabicación. minutos cuando tarda 40 minutos en replicar su cromosoma?
MinCD, junto con otras proteínas Min, oscila de polo a polo, evitando así la E. coli logra esto al comenzar una segunda ronda de replicación del ADN
formación de un anillo Z descentrado. (y, a veces, incluso una tercera o cuarta ronda) antes de
Función
FtsA, ZipA(ZapA) Ancla el anillo Z a la membrana plasmática

FtsEX Desconocido
Envoltura celular FtsK Coordina la septación con la

segregación cromosómica.
piesq
Desconocido
FtsL/FtsB
anillo ftsz FtsW
Síntesis de peptidoglicano
FtsI
FtsN Desconocido
AmiC Hidrólisis de peptidoglicano para

separar células hijas
Figura 6.5 Formación del aparato de división celular en E. coli. El aparato de división celular está compuesto por numerosas proteínas que se cree que se
ensamblan en el orden que se muestra. El proceso comienza con la polimerización de FtsZ para formar el anillo Z. Luego, las proteínas FtsA y ZipA (posiblemente
ZapA en Bacillus subtilis) anclan el anillo Z a la membrana plasmática. Aunque se sabe que numerosas proteínas forman parte del aparato de división celular, se
conocen las funciones de relativamente pocas.
La curva de crecimiento 123
se completa la primera ronda de replicación. Por lo tanto, las células de la progenie utilizar diferentes nutrientes. Posiblemente los microorganismos han sido
reciben dos o más horquillas de replicación, y la replicación es continua porque las heridos y requieren tiempo para recuperarse. Cualesquiera que sean las causas,
células siempre están copiando su ADN. eventualmente las células se reorganizan, replican su ADN, comienzan a aumentar en
masa y finalmente dividir.
1. ¿Qué dos vías funcionan durante el ciclo celular procariótico? La fase de retraso varía considerablemente en duración con la condición
2. ¿Cómo se compara el ciclo celular procariota con el ciclo celular eucariota? Haz una lista de los microorganismos y la naturaleza del medio. esta fase
de dos maneras en que son similares; enumere dos formas en que difieren. puede ser bastante largo si el inóculo es de un cultivo antiguo o uno
que ha sido refrigerado. La inoculación de un cultivo en un medio químicamente
diferente también da como resultado una fase de retraso más larga. Sobre el
Por otro lado, cuando una fase exponencial joven, vigorosamente creciente
6.2 LA CURVA DE CRECIMIENTO
el cultivo se transfiere a medio fresco de la misma composición,
La fisión binaria y otros procesos de división celular provocan un aumento en el número la fase de latencia será corta o estará ausente.
de células en una población. Crecimiento de la población
se estudia analizando la curva de crecimiento de un cultivo microbiano.
Cuando los microorganismos se cultivan en medio líquido, por lo general se cultivan en Fase exponencial
un cultivo por lotes o en un sistema cerrado, es decir, Durante la fase exponencial o logarítmica, los microorganismos se
se incuban en un recipiente de cultivo cerrado con un solo lote de creciendo y dividiéndose a la tasa máxima posible dada su
medio. Debido a que no se proporciona un medio fresco durante la incubación, las potencial genético, la naturaleza del medio y las condiciones
concentraciones de nutrientes disminuyen y las concentraciones de desechos bajo el cual están creciendo. Su tasa de crecimiento es constante.
aumento. El crecimiento de microorganismos que se reproducen por binario. durante la fase exponencial; es decir, los microorganismos se dividen y duplican en
la fisión se puede trazar como el logaritmo del número de viables número a intervalos regulares. Porque
células frente al tiempo de incubación. La curva resultante tiene cuatro fases distintas cada individuo se divide en un momento ligeramente diferente, el
(figura 6.6). la curva de crecimiento sube suavemente en lugar de saltos discretos (figura 6.6). La
población es más uniforme en términos de química.
y propiedades fisiológicas durante esta fase; por lo tanto, los cultivos en fase
Fase de latencia
exponencial se utilizan generalmente en estudios bioquímicos y fisiológicos.
Cuando los microorganismos se introducen en un medio de cultivo fresco,
por lo general, no se produce un aumento inmediato en el número de células, por lo
El crecimiento exponencial es un crecimiento equilibrado. Es decir, todo celular
que este período se denomina fase de latencia. Aunque la división celular no toma componentes se fabrican a tasas constantes en relación con cada
inmediatamente y no hay aumento neto de masa, la celda es otro. Si los niveles de nutrientes u otras condiciones ambientales
sintetizar nuevos componentes. Una fase de retraso antes del inicio de
cambio, resultados de crecimiento desequilibrado . Este es el crecimiento durante
la división celular puede ser necesaria por una variedad de razones. Las celdas
que las tasas de síntesis de los componentes celulares varían en relación con
puede ser viejo y sin ATP, cofactores esenciales y ribosomas; estos deben sintetizarse entre sí hasta que se alcance un nuevo estado de equilibrio. Desequilibrado
antes de que pueda comenzar el crecimiento. los
el crecimiento se observa fácilmente en dos tipos de experimentos: desplazamiento hacia arriba,
medio puede ser diferente del que estaba el microorganismo
donde se transfiere un cultivo de un medio nutricionalmente pobre
creciendo previamente. Aquí se necesitarían nuevas enzimas para
a uno más rico; y shift-down, donde se transfiere una cultura
de un medio rico a uno pobre. En un experimento de cambio hacia arriba, hay
es un retraso mientras las células primero construyen nuevos ribosomas para mejorar
su capacidad para la síntesis de proteínas. Esto es seguido por aumentos
Fase estacionaria
en la síntesis de proteínas y ADN. Finalmente, se produce el esperado aumento de la
Exponencial (registro) tasa reproductiva. En un experimento de cambio hacia abajo, hay

fase Muerte un retraso en el crecimiento porque las células necesitan tiempo para producir las
fase enzimas necesarias para la biosíntesis de nutrientes no disponibles. En consecuencia,
la división celular y la replicación del ADN continúan después de la
cambio hacia abajo, pero la síntesis neta de proteínas y ARN es lenta. Las células se
Retraso
hacen más pequeñas y se reorganizan metabólicamente hasta
fase son capaces de crecer de nuevo. Entonces se reanuda el crecimiento equilibrado y el
la cultura entra en la fase exponencial. Estos experimentos de desplazamiento hacia
arriba y hacia abajo demuestran que el crecimiento microbiano está bajo control.
control preciso y coordinado y responde rápidamente a los cambios en
Hora condiciones ambientales.
Cuando el crecimiento microbiano está limitado por la baja concentración de un

Figura 6.6 Curva de crecimiento microbiano en un sistema cerrado. nutriente requerido, el crecimiento neto final o el rendimiento de las células aumenta con
Las cuatro fases de la curva de crecimiento se identifican en la curva la cantidad inicial del nutriente limitante presente (figura 6.7a). Esta
y discutido en el texto. es la base de los ensayos microbiológicos para vitaminas y otros crecimiento
Figura 6.7 Concentración de nutrientes y
Crecimiento. (a) El efecto de los cambios en la limitación

concentración de nutrientes en el rendimiento microbiano total. En
concentraciones suficientemente altas, el crecimiento total crecimiento
(hr-1)
Tasa
de
meseta. (b) El efecto sobre la tasa de crecimiento.

Crecimiento
(células
total
mg/
ml)
o
Concentración de nutrientes Concentración de nutrientes

(a) (B)
factores La tasa de crecimiento también aumenta con la concentración de nutrientes Como hemos visto, las bacterias en un cultivo por lotes pueden entrar en la fase
(figura 6.7b), pero de una manera hiperbólica muy parecida a la que se ve estacionaria en respuesta a la inanición. Esto probablemente ocurre a menudo en la
con muchas enzimas (ver figura 8.18). La forma de la curva parece naturaleza porque muchos ambientes tienen bajos niveles de nutrientes.
para reflejar la tasa de absorción de nutrientes por las proteínas de transporte microbianas. niveles Los procariotas han desarrollado una serie de estrategias para sobrevivir
A niveles de nutrientes suficientemente altos, los sistemas de transporte se saturan y la inanición. Muchos no responden con cambios morfológicos obvios.
tasa de crecimiento no aumenta más al aumentar la concentración de nutrientes. Absorción cambios tales como la formación de endosporas, pero solo disminuyen un poco el tamaño
de nutrientes por la célula (sección 5.6) total, a menudo acompañado por la contracción del protoplasto
y condensación de nucleoide. Los cambios más importantes están en
expresión génica y fisiología. Las bacterias hambrientas producen con frecuencia una
Fase estacionaria variedad de proteínas de hambre, que hacen que la célula sea mucho más
Debido a que este es un sistema cerrado, eventualmente el crecimiento de la población más resistente al daño en una variedad de formas. Aumentan el entrecruzamiento de
cesa y la curva de crecimiento se vuelve horizontal (figura 6.6). Esta péptidoglicanos y la fuerza de la pared celular. La proteína Dps ( proteína de unión al
la fase estacionaria generalmente la alcanzan las bacterias en una población ADN de células hambrientas) protege el ADN.
nivel de alrededor de 109 células por ml. Otros microorganismos normalmente Las proteínas chaperonas evitan la desnaturalización y la renaturalización de las proteínas
no alcancen densidades de población tan altas; culturas protistas a menudo proteínas dañadas. Como resultado de estos y muchos otros mecanismos, las células
tienen concentraciones máximas de alrededor de 106 células por ml. por supuesto hambrientas se vuelven más difíciles de matar y más resistentes.
el tamaño final de la población depende de la disponibilidad de nutrientes y otros a la inanición misma, dañosos cambios de temperatura, oxidación y
factores, así como el tipo de microorganismo que se está cultivando. En el daño osmótico y productos químicos tóxicos como el cloro. Estas
fase estacionaria el número total de microorganismos viables permanece constante. Esto Los cambios son tan efectivos que algunas bacterias pueden sobrevivir al hambre.
puede resultar de un equilibrio entre la división celular y la muerte celular, o la población durante años. Incluso hay evidencia de que Salmonella enterica serovar
puede simplemente dejar de dividirse. Typhimurium (S. typhimurium), y algunas otras bacterias
pero permanecen metabólicamente activos. los patógenos se vuelven más virulentos cuando se mueren de hambre. Claramente, estos
Las poblaciones microbianas entran en la fase estacionaria durante varios consideraciones son de gran importancia práctica en medicina y
razones. Un factor obvio es la limitación de nutrientes; si es esencial
microbiología industrial.
el nutriente se agota gravemente, el crecimiento de la población se ralentizará. Los
organismos aeróbicos a menudo están limitados por la disponibilidad de O2 . El oxígeno no es
muy soluble y puede agotarse tan rápidamente que sólo la superficie
Senescencia y muerte
de un cultivo tendrá una concentración de O2 adecuada para el crecimiento. Durante muchos años, la disminución de las células viables después de la estacionaria
Las células debajo de la superficie no podrán crecer a menos que el células se describió simplemente como la "fase de muerte". Se asumió
el cultivo se agita o airea de otra manera. Crecimiento de la población que los cambios ambientales perjudiciales como la privación de nutrientes
también puede cesar debido a la acumulación de productos de desecho tóxicos. y la acumulación de desechos tóxicos causó daños irreparables resultantes
Este factor parece limitar el crecimiento de muchos cultivos anaerobios. en pérdida de viabilidad. Es decir, incluso cuando las células bacterianas se transfirieron
(cultivos que crecen en ausencia de O2). Por ejemplo, los estreptococos pueden producir a medio nuevo, no se observó crecimiento celular. Dado que la pérdida de viabilidad a
tanto ácido láctico y otros ácidos orgánicos menudo no iba acompañada de una pérdida de
de la fermentación del azúcar que su medio se vuelve ácido y número total de células, se supuso que las células morían pero no se lisaban.
se inhibe el crecimiento. Los cultivos de estreptococos también pueden entrar en la fase Este punto de vista se encuentra actualmente en debate. Hay dos alternativas
estacionaria debido al agotamiento de su suministro de azúcar. Finalmente, hay hipótesis (figura 6.8). Algunos microbiólogos creen que morir de hambre
Hay alguna evidencia de que el crecimiento puede cesar cuando se alcanza un nivel las células que muestran una disminución exponencial de la densidad no han perdido
crítico de población. Así, la entrada en la fase estacionaria puede irreversiblemente su capacidad de reproducirse. Más bien, sugieren que
resultado de varios factores que operan en concierto. los microbios son temporalmente incapaces de crecer, al menos bajo el laboratorio
Inanición/detención del crecimiento
(a) (B) (C)
Muerte celular
genéticamente Esterilidad programada
Fase de muerte programada genéticamente (formación de VBNC)
Sistemas
suicidas
activados
sobrevivientes Los sobrevivientes consumen Los sobrevivientes resucitan ante

los nutrientes que se escapan de cambios en el entorno (p. ej., paso de
los hermanos muertos animales)
Figura 6.8 Pérdida de viabilidad. (a) Durante mucho tiempo se ha asumido que cuando las células abandonan la fase estacionaria debido a la inanición o la acumulación de
desechos tóxicos, la disminución exponencial de la capacidad de cultivo se debe a la muerte celular. (b) Algunos creen que una fracción de una población microbiana muere debido a la
activación de genes de muerte celular programada. Los nutrientes que liberan las células moribundas apoyan el crecimiento de otras células. (c) La hipótesis viable pero no cultivable
(VBNC) postula que cuando las células pasan hambre, se vuelven temporalmente no cultivables en condiciones de laboratorio. Cuando se exponen a las condiciones apropiadas, algunas
células recuperarán la capacidad de reproducirse.
condiciones torias utilizadas. Se cree que este fenómeno, en el que las células
Tamaño total de la población
se denominan viables pero no cultivables (VBNC), es el resultado de una
respuesta genética desencadenada en células hambrientas en fase estacionaria.
Así como algunas bacterias forman esporas como mecanismo de supervivencia,
se argumenta que otras pueden volverse inactivas sin cambios en la morfología
(figura 6.8c). Una vez que están disponibles las condiciones adecuadas (por
ejemplo, un cambio de temperatura o el paso por un animal), los microbios VBNC
reanudan el crecimiento. Los microorganismos VBNC podrían representar una
amenaza para la salud pública, ya que muchos ensayos que evalúan la seguridad
de los alimentos y el agua potable se basan en cultivos.
La segunda alternativa a una fase de muerte simple es la muerte celular
programada (figura 6.8b). En contraste con la hipótesis VBNC según la cual Hora
las células están programadas genéticamente para sobrevivir, la muerte celular

programada predice que una fracción de la población microbiana está programada Figura 6.9 Disminución prolongada del crecimiento. En lugar de una
genéticamente para suicidarse. En este caso, las células no cultivables están fase de muerte distinta, sobreviven oleadas sucesivas de subpoblaciones
muertas (a diferencia de las no cultivables) y los nutrientes que filtran permiten genéticamente distintas de microbios más capaces de utilizar los
el eventual crecimiento de esas células en la población que no inició el suicidio. nutrientes liberados y las toxinas acumuladas. Cada sólido o
Las células agonizantes son, por lo tanto, altruistas, es decir, se sacrifican en la curva discontinua representa el crecimiento de una nueva subpoblación.
beneficio de la población en general.
(figura 6.9). Durante este tiempo, la población bacteriana evoluciona

continuamente de modo que las células que se reproducen activamente son las
Fase de disminución prolongada Los que mejor pueden utilizar los nutrientes liberados por sus hermanos moribundos
experimentos de crecimiento a largo plazo revelan que una disminución y las que mejor pueden tolerar las toxinas acumuladas. Este proceso dinámico
exponencial de la viabilidad a veces se reemplaza por una disminución está marcado por oleadas sucesivas de variantes genéticamente distintas. Por lo
gradual en el número de células cultivables. Esta disminución puede durar de meses a años.
tanto, la selección natural se puede presenciar dentro de un solo recipiente de cultivo.
Las Matemáticas del Crecimiento

90
Conocimiento de las tasas de crecimiento microbiano durante el exponencial
fase es indispensable para los microbiólogos. Estudios de tasa de crecimiento
80
contribuyen a la investigación fisiológica y ecológica básica y son
aplicada en la industria. Los aspectos cuantitativos de la fase exponencial 1.500 )
crecimiento discutido aquí se aplican a los microorganismos que se dividen por fisión
) 70
binaria.
Durante la fase exponencial cada microorganismo se divide
a intervalos constantes. Así la población se duplicará en número.
60 (
durante un período de tiempo específico llamado tiempo de generación o
(
Doblando tiempo. Esta situación puede ilustrarse con un ejemplo sencillo. Suponga
50 1.000
que se inocula un tubo de cultivo con una célula que
divide cada 20 minutos (tabla 6.1). La población será de 2 celdas.
después de 20 minutos, 4 celdas después de 40 minutos y así sucesivamente. Porque el Número
celdas
de
40
la población se duplica cada generación, el aumento de la población
número
celdas
Log10
de
es siempre 2n donde n es el número de generaciones. La resultante

30
el aumento de la población es exponencial o logarítmico (figura 6.10).
Estas observaciones se pueden expresar como ecuaciones para el tiempo de 0.500
generación.
20
Sea N0 el número de población inicial

10
Nt la población en el tiempo t
n el número de generaciones en el tiempo t 0.000

0
0 20 40 60 80 100 120
Luego, la inspección de los resultados en la tabla 6.1 mostrará que
Minutos de incubación
Nt N0 2n .
Figura 6.10 Crecimiento microbiano exponencial. Los datos de
la tabla 6.1 para seis generaciones de crecimiento se trazan )
Resolviendo para n, el número de generaciones, donde todos los loga son en
directamente ( y en forma logarítmica (exponencial
). La curva de crecimiento es
base 10,
como se muestra por la linealidad de la gráfica logarítmica.
log Nt log N0 n log 2, y
registro Nt - registro N0 registro Nt - registro N0 Este es el número de generaciones por unidad de tiempo, a menudo expresado
norte = =
como las generaciones por hora.
registro 2 0.301
norte
registro Nt - registro N0
k= =
La tasa de crecimiento durante la fase exponencial en un cultivo por lotes. t 0.301t
puede expresarse en términos de la constante de la tasa de crecimiento media (k).
El tiempo que tarda una población en duplicar su tamaño, es decir, la media
ahora se puede calcular el tiempo de generación o el tiempo medio de duplicación
(g). Si la población se duplica (t g), entonces
Tabla 6.1 Un ejemplo de crecimiento exponencial
División Población Nt 2N0.

tiempoa Número 2n (Nº 2n ) log10Nt
0 020 1 1 0.000 Sustituye 2N0 en la ecuación de la tasa de crecimiento medio y resuelve
para k.
20 1 21 2 2 0.301
40 2 22 4 4 0.602
registro (2N0) - registro N0 registro 2 + registro N0 - registro N0
k= =
60 3 23 8 8 0.903
0,301g _ 0,301 gramos
80 4 24 16 dieciséis 1.204
1
100 5 25 32 32 1.505 k=
120 6 26 64 64 1.806 gramo
a El cultivo hipotético comienza con una célula que tiene un tiempo de generación de 20 minutos.
El tiempo medio de generación es el recíproco del crecimiento medio.
tarifa constante.
1
gramo = Tabla 6.2 Ejemplos de tiempos de generacióna
k
Incubación
El tiempo medio de generación (g) se puede determinar directamente a partir de una Temperatura Generacion
gráfico semilogarítmico de los datos de crecimiento (figura 6.11) y el Microorganismo (°C) Tiempo (Horas)
constante de la tasa de crecimiento calculada a partir del valor de g . La generación bacterias

el tiempo también se puede calcular directamente a partir de las ecuaciones anteriores. Beneckea natriegens 37 0.16
Por ejemplo, suponga que una población bacteriana aumenta de Escherichia coli 40 0.35
103 celdas a 109 celdas en 10 horas.
Bacillus subtilis 40 0.43
estafilococo aureus 37 0.47

registro 109 - registro 103 9-3
k= = Pseudomonas aeruginosa 37 0.58
= 2.0 generaciones hora
(0,301)(10 h) 3.01 h
Clostridium botulinum 37 0.58
1 Rhodospirillum rubrum 25 4.6–5.3
gramo = = 0,5 horas de generación. o 30 min gen.
2.0 generación. hora Anabaena cylindrica 25 10.6
Tuberculosis micobacteriana 37 12
Treponema pallidum 37 33
protistas
3.00
Tetrahymena geleii 24 2.2–4.2
Scenedesmus quadricauda 25 5.9

Exponencial (registro)
Chlorella pirenoidosa 25 7.75
fase
2.00 20 9.6
Asterionella formosa
Leishmania donovani 26 10–12
Paramecio caudatum 26 10.4
Euglena gracilis 25 10.9

Acanthamoeba castellanii 30 11–12
1.00
giardia lamblia 37 18
tripos de ceracio 20 82.8
hongos
Saccharomyces cerevisiae 30 2
Monilinia fructicola 25 30
0.50
a
Los tiempos de generación difieren según el medio de crecimiento y las condiciones ambientales utilizadas.
Los tiempos de generación varían notablemente con la especie de microorganismo y

las condiciones ambientales. Van desde menos de
10 minutos (0,17 horas) para unas pocas bacterias a varios días con
algunos microorganismos eucarióticos (tabla 6.2). Tiempos de generación en
Fase de latencia la naturaleza suelen ser mucho más largas que en la cultura.
1. Defina crecimiento. Describir las cuatro fases de la curva de crecimiento en un entorno cerrado.
0.10 sistema y discuta las causas de cada uno.

0 1 2 3 4 5
2. ¿Por qué un cultivo puede tener una fase de latencia prolongada después de la inoculación? ¿Por qué
gramo
células que crecen vigorosamente cuando se inoculan en medio de cultivo fresco
Tiempo (horas) ¿tienen una fase de latencia más corta que las que se han guardado en nevera?
3. Enumera dos cambios fisiológicos que se observan en células estacionarias. Como hacer
Figura 6.11 Determinación del tiempo de generación. los estos cambios afectan la capacidad del organismo para sobrevivir?
4. Defina el crecimiento equilibrado y el crecimiento desequilibrado. ¿Por qué los experimentos de desplazamiento
el tiempo de generación se puede determinar a partir de una curva de crecimiento microbiano.
hacia arriba y hacia abajo hacen que las células entren en un crecimiento desequilibrado?
Los datos de población se trazan con el eje logarítmico utilizado para
5. Definir el tiempo de generación o duplicación y la constante de tasa de crecimiento medio.
el número de células. El tiempo para duplicar el número de población es
Calcule la tasa media de crecimiento y el tiempo de generación de un cultivo que
luego lea directamente de la trama. El registro del número de población
pliegues en la fase exponencial de 5 102 a 1 en 108 en 12 horas.
también se puede trazar contra el tiempo en ejes regulares.
6. Suponga que el tiempo de generación de una bacteria es de 90 minutos y el número Vidrio de protección
inicial de células en un cultivo es de 103 células al comienzo de la fase logarítmica.
¿Cuántas bacterias habrá después de 8 horas de crecimiento exponencial?
7. ¿Qué efecto tiene el aumento de un nutriente limitante en el rendimiento de las células y la
tasa de crecimiento?
(a) Cámara que contiene
8. Contrastar y comparar el estado viable pero no cultivable de los microbios con el de la
bacterias
muerte celular programada como medio de respuesta al hambre.
6.3 MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Hay muchas formas de medir el crecimiento microbiano para determinar las tasas de crecimiento
y los tiempos de generación. Se puede seguir el número o la masa de la población porque el
crecimiento conduce a aumentos en ambos.
Aquí se examinan brevemente las técnicas más comúnmente empleadas para medir el crecimiento (B)
y se señalan las ventajas y desventajas de cada una. Ninguna técnica individual es siempre la
mejor; el enfoque más apropiado dependerá de la situación experimental.
Medición de números de células

La forma más obvia de determinar el número de microbios es a través del conteo directo. Usar una
cámara de conteo es fácil, económico y relativamente rápido; también da información sobre el
tamaño y la morfología de los microorganismos. Las cámaras de recuento de Petroff-Hausser se
pueden utilizar para contar procariotas; Los hemocitómetros se pueden utilizar tanto para
procariotas como para eucariotas. Estos portaobjetos especialmente diseñados tienen cámaras de
profundidad conocida con una rejilla grabada en el fondo de la cámara (figura 6.12). Los procariotas
se cuentan más fácilmente en estas cámaras si se tiñen o cuando se emplea un contraste de fase
o un microscopio de fluorescencia. El número de microorganismos en una muestra se puede
calcular teniendo en cuenta el volumen de la cámara y las diluciones de muestra requeridas. Una
desventaja de la técnica es que la población microbiana debe ser bastante grande para la precisión
porque se muestrea un volumen tan pequeño. (C)
Figura 6.12 La cámara de conteo de Petroff-Hausser. (a) Vista lateral

de la cámara que muestra el cubreobjetos y el espacio debajo que
Los microorganismos más grandes, como los protistas y las levaduras, se pueden contar contiene una suspensión bacteriana. (b) Una vista superior de la cámara. La
directamente con contadores electrónicos como el contador Coulter, aunque más recientemente cuadrícula se encuentra en el centro de la diapositiva. (c) Una vista ampliada
se utiliza cada vez más el citómetro de flujo . La suspensión microbiana se fuerza a través de un de la cuadrícula. Se cuentan las bacterias en varios de los cuadrados centrales,
pequeño orificio u orificio en el contador Coulter. Una corriente eléctrica fluye a través del orificio y generalmente con un aumento de 400 a 500. El número promedio de bacterias
los electrodos colocados a ambos lados del orificio miden su resistencia eléctrica. Cada vez que en estos cuadrados se usa para calcular la concentración de células en la
una célula microbiana pasa por el orificio, aumenta la resistencia eléctrica (o baja la conductividad) muestra original. Dado que hay 25 cuadrados que cubren un área de 1 mm2 en
y se cuenta la célula. El contador Coulter brinda resultados precisos con células más grandes y se 1 mm2 de la cámara es (número/cuadrado)(25 , elcuadrados).
numero total
Lade bacterias
cámara tiene
usa ampliamente en laboratorios hospitalarios para contar glóbulos rojos y blancos. No es tan útil una profundidad de 0,02 mm y, por lo tanto,
para contar bacterias debido a la interferencia de pequeñas partículas de desechos, la formación
de filamentos y otros problemas. Identificación de microorganismos a partir de muestras (sección

bacterias/mm3 (bacterias/cuadrado)(25 cuadrados)(50).
35.2)
El número de bacterias por cm3 es 103 veces este valor. Por ejemplo,
suponga que el conteo promedio por cuadrado es de 28 bacterias:
bacterias/cm3 (28 bacterias) (25 cuadrados)(50)(103 ) 3,5 107 .

El número de bacterias en muestras acuáticas se determina con frecuencia a partir de
recuentos directos después de que las bacterias hayan quedado atrapadas en filtros de membrana
especiales. En la técnica del filtro de membrana, la muestra se filtra primero a través de un filtro de fondo del filtro de membrana y se puede contar cuando se observa con un microscopio de
membrana de policarbonato negro. Luego, las bacterias se tiñen con un tinte fluorescente como el epifluorescencia. El microscopio óptico: El microscopio de fluorescencia (sección 2.2)
naranja de acridina o la tinción de ADN DAPI, y se observan al microscopio. Las células teñidas
se observan fácilmente contra el negro Los métodos tradicionales para contar directamente los microbios en una muestra
generalmente producen densidades de células que son mucho más altas que las de la plataforma.
Medición del crecimiento microbiano 129
métodos de conteo descritos a continuación porque los procedimientos de conteo directo no células por ml. Por lo general, el conteo se hace más preciso mediante el uso de un
no distinguir las células muertas de las células vivas. Nuevos métodos para directo Contador de colonias especial. De esta forma, las técnicas de placa extendida y placa
cuentas evitan este problema. Kits comerciales que usan fluorescentes de vertido pueden usarse para encontrar el número de microorganismos en una
ya están disponibles reactivos para teñir células vivas y muertas de manera diferente, muestra. Aislamiento de cultivos puros: La placa de extensión y la racha
haciendo posible contar directamente el número de vivos y muertos plato; La placa de vertido (sección 5.8)
microorganismos en una muestra (ver figuras 2.13a y 27.16). Otro método de enchapado comúnmente utilizado primero atrapa bacterias
Se pueden usar varios métodos de recubrimiento para determinar el número en muestras acuáticas en un filtro de membrana. El filtro es entonces
de microbios viables en una muestra. Estos se conocen como viables. colocado en un medio de agar o en una almohadilla empapada con medio líquido
métodos de conteo porque solo cuentan aquellas celdas que son (figura 6.13) e incubadas hasta que cada célula forme una
vivo y capaz de reproducirse. Dos procedimientos comúnmente utilizados son colonia. Un recuento de colonias da el número de microorganismos en
la técnica de placa extendida y la técnica de placa vertida. En ambos la muestra filtrada, y los medios especiales se pueden utilizar para seleccionar para
de estos métodos, una muestra diluida de bacterias u otros microorganismos se microorganismos específicos (figura 6.14). Esta técnica es especialmente útil para
dispersa sobre una superficie sólida de agar. Cada microorganismo o grupo de analizar la pureza del agua. Depuración de aguas y análisis sanitario (sección 41.1)
microorganismos se desarrolla en una colonia distinta.
El número original de microorganismos viables en la muestra puede Las técnicas de recubrimiento son simples, sensibles y ampliamente utilizadas para
calcularse a partir del número de colonias formadas y el sam recuentos viables de bacterias y otros microorganismos en muestras de
6
dilución completa. Por ejemplo, si 1,0 ml de una dilución 1 10 rindió alimento, agua y suelo. Varios problemas, sin embargo, pueden conducir a conteos
150 colonias, la muestra original contenía alrededor de 1,5 108 precisos. Se obtendrán recuentos bajos si no se obtienen grupos de células.
Filtro de membrana
retirado y colocado
muestra de agua en placa
Membrana filtrado a través que contiene el
filtrar en un filtro de membrana apropiado Incubación
soporte de filtro (0,45 micras) medio por 24 horas Típico
colonias
Figura 6.13 Procedimiento de filtración por membrana. Se utilizan membranas con diferentes tamaños de poros para atrapar diferentes microorganismos.
Los tiempos de incubación de las membranas también varían con el medio y el microorganismo.
(a) (B) (C)
Figura 6.14 Colonias en filtros de membrana. Muestras filtradas por membrana cultivadas en una variedad de medios. (a) Medios nutrientes estándar para
un conteo bacteriano total. Un indicador colorea las colonias de rojo para facilitar el conteo. (b) Medio de coliformes fecales para detectar coliformes fecales que forman
colonias azules. (c) Agar mosto para el cultivo de levaduras y mohos.
fragmentado y los microorganismos bien dispersos. Porque es La espectrofotometría también se puede utilizar para medir la masa celular.
No es posible estar absolutamente seguro de que cada colonia surgió de Estos métodos son más rápidos y sensibles. Dependen de la
una celda individual, los resultados a menudo se expresan en términos de hecho de que las células microbianas dispersan la luz que les llega. Debido a que las
unidades formadoras de colonias (UFC) en lugar del número de microorganismos. células microbianas en una población tienen un tamaño aproximadamente constante, la
Las muestras deben producir entre 30 y 300 colonias. cantidad de dispersión es directamente proporcional a la biomasa de
para un conteo más preciso. Por supuesto, los recuentos también serán bajos. células presentes e indirectamente relacionadas con el número de células. Cuando la
si el medio de agar empleado no puede soportar el crecimiento de todos los concentración de bacterias alcanza unos 10 millones de células (107 ) por ml,
microorganismos viables presentes. El agar caliente utilizado en la placa de vertido el medio aparece ligeramente turbio o turbio. Aumentos adicionales en
la técnica puede lesionar o matar células sensibles; así esparcir platos la concentración da como resultado una mayor turbidez y se transmite menos luz a
a veces dan recuentos más altos que las placas de vertido. través del medio. El grado de dispersión de la luz puede ser
medido por un espectrofotómetro y está casi linealmente relacionado con
concentración celular a bajos niveles de absorbancia (figura 6.15). Por lo tanto
Medición de la masa celular el crecimiento de la población se puede medir fácilmente siempre que la población
Aumentos en la masa celular total, así como en el número de células, ac crecimiento sea lo suficientemente alta como para dar una turbidez detectable.
de la población de la empresa. Por lo tanto, las técnicas para medir Si la cantidad de una sustancia en cada celda es constante, el total
los cambios en la masa celular se pueden usar para seguir el crecimiento. lo mas la cantidad de ese componente celular está directamente relacionada con la masa
enfoque directo es la determinación del peso seco microbiano. total de células microbianas. Por ejemplo, una muestra de células lavadas recolectadas
Las células que crecen en medio líquido se recolectan por centrifugación, de un volumen conocido de medio puede analizarse para
lavado, secado en estufa y pesado. Esta es una técnica especialmente útil para medir proteína o nitrógeno. Un aumento en la población microbiana
el crecimiento de hongos filamentosos. Está reflejarse en niveles más altos de proteína total. Del mismo modo, la clorofila
requiere mucho tiempo, sin embargo, y no es muy sensible. Debido a que las bacterias determinaciones se pueden utilizar para medir algas y cianobacterias
pesan tan poco, puede ser necesario centrifugar varias poblaciones, y la cantidad de ATP se puede utilizar para estimar la
cien mililitros de cultivo para recoger una cantidad suficiente. cantidad de masa microbiana viva.
Medidor de espectrofotómetro
40 50 60 70
20 30
10 80
90
0 100
.9.8.7 .6 .5 .4 .3 .2 .1
.05
0
40 50 60 70
20 30
10 80
90
0 100
.6 .5 .4 .3 .2
.9.8.7 .1
.05
0
Célula fotoeléctrica
Lámpara tubo de o detector

bacterias
suspensión
Figura 6.15 Medición de turbidez y masa microbiana. Determinación de la masa microbiana por medición de la absorción de luz. Como
la población y la turbidez aumentan, se dispersa más luz y aumenta la lectura de absorbancia proporcionada por el espectrofotómetro. los
El espectrofotómetro tiene dos escalas. La escala inferior muestra la absorbancia y la escala superior, el porcentaje de transmitancia. Absorbancia
aumenta a medida que disminuye el porcentaje de transmitancia.
El cultivo continuo de microorganismos 131
1. Describa brevemente cada técnica mediante la cual los números de población microbiana
se puede determinar y dar sus ventajas y desventajas.

2. Cuando se utilizan recuentos celulares directos para seguir el crecimiento de un cultivo,
puede ser difícil saber cuándo el cultivo entra en la fase de senescencia y muerte.
medio fresco
¿Por qué?
3. ¿Por qué los resultados del recuento en placa se expresan como unidades formadoras de colonias?
Válvula de control
6.4 LA CULTURA CONTINUA

DE MICROORGANISMOS
Hasta este momento, la atención se ha centrado en los sistemas cerrados denominados lotes.
Suministro de aire
cultivos en los que no se renuevan los suministros de nutrientes ni se eliminan
Filtro
los desechos. El crecimiento exponencial dura solo unas pocas generaciones y
de aire
pronto se alcanza la fase estacionaria. Sin embargo, es posible
cultivar microorganismos en un sistema abierto, un sistema con constante
Condiciones ambientales mantenidas a través del suministro continuo de
Cultura
nutrientes y eliminación de desechos. Estas condiciones se cumplen
embarcación
en el laboratorio mediante un sistema de cultivo continuo. un microbiano

la población puede mantenerse en la fase de crecimiento exponencial
y a una concentración de biomasa constante durante períodos prolongados en un
sistema de cultivo continuo.
Receptáculo de desbordamiento
el quimiostato
Figura 6.16 Un sistema de cultivo continuo: el quimiostato.
Dos tipos principales de sistemas de cultivo continuo comúnmente son
Diagrama esquemático del sistema. El medio fresco contiene un
utilizado: (1) quimiostatos y (2) turbidostatos. Se construye un quimiostato de
cantidad limitante de un nutriente esencial. La tasa de crecimiento se determina
modo que el medio estéril se introduce en el recipiente de cultivo en el
por la velocidad de flujo del medio a través del recipiente de cultivo.
se elimina la misma velocidad que los medios que contienen microorganismos
(figura 6.16). El medio de cultivo para un quimiostato posee una
nutriente esencial (por ejemplo, un aminoácido) en cantidades limitantes. Debido
a que un nutriente es limitante, la tasa de crecimiento está determinada por
la velocidad a la que se introduce medio nuevo en la cámara de crecimiento,
y la densidad celular final depende de la concentración del nutriente limitante. La
tasa de intercambio de nutrientes se expresa como la Densidad celular o biomasa
tasa de dilución (D), la tasa a la que el medio fluye a través del recipiente de
cultivo en relación con el volumen del recipiente, donde f es la tasa de flujo
(ml/h) y V es el volumen del recipiente (ml).
re f/ v
Tiempo generacional
Por ejemplo, si f es 30 ml/h y V es 100 ml, la tasa de dilución es

0,30 h 1.
Tanto el nivel de población microbiana como el tiempo de generación

están relacionados con la tasa de dilución (figura 6.17). La densidad de población
microbiana permanece sin cambios en un amplio rango de diluciones.
tarifas El tiempo de generación disminuye (es decir, la tasa de crecimiento
aumenta) a medida que aumenta la tasa de dilución. El nutriente limitante será
Concentración de nutrientes
agotarse casi por completo en estas condiciones equilibradas.
Si la tasa de dilución aumenta demasiado, los microorganismos pueden realmente
eliminarse del recipiente de cultivo antes de reproducirse porque Tasa de dilución
la tasa de dilución es mayor que la tasa máxima de crecimiento. Esto ocurre

porque hay menos microorganismos presentes para consumir el Figura 6.17 Tasa de dilución del quimiostato y microbios
nutriente limitante. Crecimiento. Los efectos de cambiar la tasa de dilución en un quimiostato.
A tasas de dilución muy bajas, un aumento en D provoca un aumento en otas prosperar mataría a la mayoría de los otros organismos. procariotas como
tanto la densidad celular como la tasa de crecimiento. Esto se debe al efecto de la Bacillus infernus son incluso capaces de vivir más de 1,5 millas por debajo de la
concentración de nutrientes en la tasa de crecimiento, a veces superficie terrestre, sin oxígeno y a temperaturas superiores a 60°C.
llamada relación de Monod (figura 6.7b). Solo se dispone de un suministro limitado de Los microorganismos que crecen en condiciones tan duras a menudo son
nutrientes a bajas tasas de dilución. Mucho de llamados extremófilos.
la energía disponible debe utilizarse para el mantenimiento de la celda, no para En esta sección revisaremos brevemente cómo algunos de los más
crecimiento y reproducción. A medida que aumenta la tasa de dilución, la factores ambientales importantes afectan el crecimiento microbiano. Importante
La cantidad de nutrientes y la densidad celular resultante aumentan porque la energía se dará énfasis a los solutos y la actividad del agua, pH, temperatura, nivel de oxígeno,
está disponible tanto para el mantenimiento como para la reproducción. los presión y radiación. La Tabla 6.3 resume
La tasa de crecimiento aumenta cuando la energía total disponible excede la la forma en que los microorganismos se clasifican en términos de su
energía de mantenimiento. respuesta a estos factores. Es importante notar que para la mayoría de los factores
ambientales, un rango de niveles apoya el crecimiento de un microbio. Por ejemplo, un
microbio podría exhibir un crecimiento óptimo en
El Turbidostato
pH 7, pero crecerá, aunque no de manera óptima, a valores de pH de hasta
El segundo tipo de sistema de cultivo continuo, el turbidostato,
pH 6 (su pH mínimo) y hasta pH 8 (su pH máximo). Además, fuera de este rango, el
tiene una fotocélula que mide la absorbancia o turbidez del
microbio podría dejar de reproducirse.
cultivo en el vaso de crecimiento. La velocidad de flujo de los medios a través de la
pero seguirá siendo viable durante algún tiempo. Claramente, cada microbio debe
el recipiente se regula automáticamente para mantener una turbidez o densidad celular
posee adaptaciones que le permiten ajustar su fisiología dentro de su
predeterminada. El turbidostato difiere del quimiostato
rango preferido, y también puede tener adaptaciones que lo protegen en
de varias maneras. La tasa de dilución en un turbidostato varía bastante
ambientes fuera de este rango. Estas adaptaciones también serán
que permanecer constante, y su medio de cultivo contiene todos los nutrientes en
discutido en esta sección.
exceso. Es decir, ninguno de los nutrientes es limitante. El tur bidostato funciona mejor
a altas tasas de dilución; el quimiostato es más
estable y efectivo a tasas de dilución más bajas.
Actividad de solutos y agua
Los sistemas de cultivo continuo son muy útiles porque proporcionan un suministro
Debido a que una membrana plasmática selectivamente permeable separa a los
constante de células en fase exponencial y creciendo a
microorganismos de su entorno, pueden verse afectados por
una tasa conocida. Hacen posible el estudio del crecimiento microbiano a
cambios en la concentración osmótica de su entorno. si un
niveles de nutrientes muy bajos, concentraciones cercanas a las presentes en ambientes
El microorganismo se coloca en una solución hipotónica (una con una
naturales. Estos sistemas son esenciales para la investigación en muchos
menor concentración osmótica), el agua entrará en la célula y causará
áreas, por ejemplo, en estudios sobre interacciones entre microbios
que estalle a menos que se haga algo para evitar la afluencia. Por el contrario, si se
especies en condiciones ambientales similares a las de un lago o estanque de agua
coloca en una solución hipertónica (una con una mayor
dulce. Los sistemas continuos también se utilizan en alimentos y
concentración osmótica), el agua saldrá de la célula. En los microbios que tienen paredes
microbiología industrial (capítulos 40 y 41, respectivamente).
celulares (es decir, la mayoría de los procariotas, hongos y algas), la membrana se
separa de la pared celular, un proceso
1. ¿En qué se diferencia un sistema abierto de un sistema de cultivo cerrado o cultivo por lotes? llamado plasmólisis. La deshidratación de la célula en ambientes hipertónicos puede
2. Describa cómo los dos tipos diferentes de sistemas de cultivo continuo, el dañar la membrana celular y hacer que la célula se
quimiostato y turbidostato, operar. volverse metabólicamente inactivos.
3. ¿Cuál es la tasa de dilución? ¿Qué es la energía de mantenimiento? Es importante, entonces, que los microbios sean capaces de responder a
4. ¿Cómo se controla la tasa de crecimiento de una población microbiana en un cambios en las concentraciones osmóticas de su entorno. Por ejemplo, los microbios en
quimiostato? ¿En un turbidostato? ambientes hipotónicos pueden reducir la concentración osmótica de su citoplasma. Esto
se puede lograr mediante la
Uso de cuerpos de inclusión. Algunas bacterias y arqueas también tienen
6.5 LA INFLUENCIA DEL MEDIO AMBIENTE canales mecanosensibles (MS) en su membrana plasmática. en un
ambiente hipotónico, la membrana se estira debido a un aumento
FACTORES DE CRECIMIENTO
en la presión hidrostática y la hinchazón celular. Canales MS entonces
Como hemos visto, los microorganismos deben ser capaces de responder a las abrir y permitir que los solutos salgan. Por lo tanto, pueden actuar como válvulas de escape.
variaciones en los niveles de nutrientes y, en particular, a la limitación de nutrientes. para proteger las células de la explosión. Dado que muchos protistas no tienen una célula
El crecimiento de los microorganismos también se ve muy afectado por la pared, deben utilizar vacuolas contráctiles (ver figuras 25.5 y
naturaleza química y física de su entorno. Una comprensión de las influencias 25.17b) para expulsar el exceso de agua. Muchos microorganismos, ya sea en
ambientales ayuda en el control del crecimiento microbiano y el estudio de la distribución ambientes hipotónicos o hipertónicos, mantienen la concentración osmótica de su
ecológica de protoplasma algo por encima de la del hábitat por
microorganismos el uso de solutos compatibles, de modo que la membrana plasmática esté siempre
La capacidad de algunos microorganismos para adaptarse a condiciones extremas y firmemente presionada contra su pared celular. Los solutos compatibles son
entornos inhóspitos es verdaderamente notable. Los procariotas son solutos que no interfieren con el metabolismo y el crecimiento cuando en
presente en cualquier lugar donde pueda existir vida. Muchos hábitats en los que procar altas concentraciones intracelulares. La mayoría de los procariotas aumentan su
La influencia de los factores ambientales en el crecimiento 133
Cuadro 6.3 Respuestas microbianas a factores ambientales
Término descriptivo Definición Microorganismos representativos
Actividad de soluto y agua

Osmotolerante Capaz de crecer en amplios rangos de actividad de agua o Staphylococcus aureus, Saccharomyces rouxii
concentración osmótica
halófilo Requiere altos niveles de cloruro de sodio, por lo general por Halobacterium, Dunaliella, Ectothiorhodospira
encima de 0,2 M, para crecer
pH
acidófilo Óptimo de crecimiento entre pH 0 y 5.5 Sulfolobus, Picrophilus, Ferroplasma, Acontium,
Caldarium de cianidio
neutrófilo Óptimo de crecimiento entre pH 5,5 y 8,0 Óptimo Escherichia, Euglena, Paramecio
alcalófilo de crecimiento entre pH 8,0 y 11,5 Bacillus alcalophilus, Natronobacterium
Temperatura
Psicrófilo Crece bien a 0 °C y tiene una temperatura de Bacillus psychrophilus, Chlamydomonas nivalis
crecimiento óptima de 15 °C o inferior
Psicrótrofo Puede crecer a 0–7°C; tiene un óptimo entre 20 y Listeria monocytogenes, Pseudomonas fluorescens
30°C y un máximo alrededor de 35°C
mesófilo Tiene un crecimiento óptimo alrededor de 20–45°C Escherichia coli, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas
vaginalis
Termófilo Puede crecer a 55°C o más; óptimo a menudo entre Geobacillus stearothermophilus, Thermus aquaticus,
55 y 65°C Cyanidium caldarium, Chaetomium thermophile
hipertermófilo Tiene un óptimo entre 80 y alrededor de 113°C Sulfolobus, Pyrococcus, Pyrodictium
Concentración de oxígeno
aerobio obligado Completamente dependiente del O2 atmosférico para su crecimiento . Micrococcus luteus, Pseudomonas, Mycobacterium; la
mayoría de los protistas y hongos
Anaerobio facultativo No requiere O2 para crecer, pero crece mejor en su presencia Escherichia, Enterococcus, Saccharomyces cerevisiae
Anaerobia aerotolerante Crece igualmente bien en presencia o ausencia de O2 Streptococcus pyogenes

anaerobio obligado No tolera el O2 y muere en su presencia Clostridium, Bacteroides, Methanobacterium,
Trepomonas agilis
microaerófilo Requiere niveles de O2 por debajo del 2-10 % para crecer y se Campylobacter, Spirillum volutans, Treponema pallidum
ve afectado por los niveles de O2 atmosférico (20 %)
Presión
barofílico Crecimiento más rápido a altas presiones hidrostáticas Photobacterium profundum, Shewanella benthica,
Methanocaldococcus jannaschii
concentración osmótica interna en un ambiente hipertónico Mar Muerto (un lago salado entre Israel y Jordania y el lago más bajo
a través de la síntesis o absorción de colina, betaína, prolina, ácido glutámico y en el mundo), el Gran Lago Salado en Utah y otros hábitats acuáticos con
otros aminoácidos; niveles elevados de iones de potasio concentraciones de sal cercanas a la saturación. Halobac terium y otros
también están involucrados en cierta medida. Protistas y hongos fotosintéticos procariotas extremadamente halófilas se acumulan
emplean sacarosa y polioles, por ejemplo, arabitol, glicerol y enormes cantidades de potasio para permanecer hipertónico a
manitol—para el mismo propósito. Los polioles y los aminoácidos son ideales su entorno; la concentración interna de potasio puede alcanzar
solutos para esta función porque normalmente no alteran la estructura y función 4 a 7 M. Además, sus enzimas, ribosomas y transporte
de la enzima. La matriz citoplasmática: cuerpos de inclusión las proteínas requieren altos niveles de potasio para su estabilidad y actividad. En
(sección 3.3) Además, la membrana plasmática y la pared celular de Halobacterium son
Algunos microbios están adaptados a entornos hipertónicos extremos. Los estabilizado por altas concentraciones de iones de sodio. Si la concentración de
halófilos crecen de manera óptima en presencia de NaCl o sodio disminuye demasiado, la pared y la membrana plasmática se desintegran.
otras sales en una concentración superior a aproximadamente 0,2 M (figura 6.18). Los halófilos extremos se han adaptado con éxito a
Los halófilos extremos se han adaptado tan completamente a la solución salina hipertónica. condiciones ambientales que destruirían la mayoría de los organismos. En
condiciones que requieren altos niveles de cloruro de sodio para el proceso se han vuelto tan especializados que han perdido
crecer—concentraciones entre alrededor de 2 M y saturación (alrededor de flexibilidad ecológica y sólo puede prosperar en unos pocos hábitos extremos.
6,2 M). El archaeon Halobacterium se puede aislar de la Phylum Euryarchaeota: Las halobacterias (sección 20.3)
porque debe mantener una alta concentración interna de soluto para retener el agua.
Algunos microorganismos pueden hacer esto y son hormigas osmotoleres; crecerán en
amplios rangos de actividad de agua o osmótica
concentración. Por ejemplo, Staphylococcus aureus es una hormiga halotoler (figura 6.18)
y se puede cultivar en medios que contienen sodio
concentración de cloruro de hasta aproximadamente 3 M. Está bien adaptado para
crecimiento en la piel. La levadura Saccharomyces rouxii crecerá en
soluciones de azúcar con valores de aw tan bajos como 0,6. el fotosintético
la protista Dunaliella viridis tolera concentraciones de cloruro de sodio desde 1,7 M hasta
una solución saturada.
Aunque algunos microorganismos son verdaderamente osmotolerantes, la mayoría

solo crecen bien en actividades acuáticas alrededor de 0.98 (el aproximado
aw para agua de mar) o superior. Esta es la razón por la cual secar alimentos o agregar
grandes cantidades de sal y azúcar es tan eficaz en la prevención de alimentos
deterioro. Como muestra la tabla 6.4, muchos hongos son osmotolerantes y
por lo tanto particularmente importante en el deterioro de salados o secos
alimentos Control del deterioro de los alimentos (sección 40.3)
0 1 2 3 4
Concentración de NaCl (M) 1. ¿Cómo se adaptan los microorganismos a los ambientes hipotónicos e
hipertónicos? ¿Qué es la plasmólisis?
no halófilo Halófilo moderado 2. Defina la actividad del agua y describa brevemente cómo se puede determinar.
halotolerante halófilo extremo 3. ¿Por qué es difícil que los microorganismos crezcan con valores bajos de aw ?
4. ¿Qué son los halófilos y por qué Halobacterium requiere sodio y

iones de potasio?
Figura 6.18 Los efectos del cloruro de sodio en microbios
Crecimiento. Cuatro patrones diferentes de dependencia microbiana de
Se representan las concentraciones de NaCl. Las curvas son solo ilustrativas. pH

y no están destinados a proporcionar formas precisas o concentraciones de sal.
El pH es una medida de la actividad de iones de hidrógeno de una solución y es
requerido para el crecimiento.
definido como el logaritmo negativo de la concentración de iones de hidrógeno (expresado
en términos de molaridad).
Debido a que la concentración osmótica de un hábitat tiene efectos tan profundos

pH registro [H ] registro (1/[H ])
sobre los microorganismos, es útil poder expresar
cuantitativamente el grado de disponibilidad de agua. Microbiólogos
La escala de pH se extiende desde pH 0,0 (1,0 MH ) hasta pH 14,0 (1,0 10 MH ), y
generalmente usa la actividad de agua (aw) para este propósito (la disponibilidad de
cada 14
unidad de pH representa
de hidrógeno. un6.19
La Figura cambio de diez
muestra queveces en la concentración
los hábitats en de iones
agua también se puede expresar como potencial de agua, que está relacionado
a aw). La actividad del agua de una solución es 1/100 de la humedad relativa de la
qué microorganismos crecen varían ampliamente, de pH 0 a 2 en el
solución (expresada como porcentaje). Tambien es
extremo ácido a lagos y suelos alcalinos que pueden tener valores de pH entre 9 y 10.
equivalente a la relación de la presión de vapor de la solución (Psoln) a
la del agua pura (Pagua).
No es de extrañar que el pH afecte dramáticamente la actividad microbiana.
Psoln crecimiento. Cada especie tiene un rango de crecimiento de pH definido y un pH

=_ óptimo de crecimiento. Los acidófilos tienen su óptimo de crecimiento entre pH 0 y 5,5;
Agua
neutrófilos, entre pH 5,5 y 8,0; y
La actividad de agua de una solución o sólido se puede determinar por los alcalófilos prefieren el rango de pH de 8,0 a 11,5. Los alcalófilos extremos tienen un
sellándolo en una cámara y midiendo la humedad relativa después crecimiento óptimo a pH 10 o superior. En general, diferentes grupos microbianos tienen
el sistema ha llegado al equilibrio. Supongamos que después de que una muestra es preferencias de pH características. Más
tratado de esta manera, el aire sobre él está 95% saturado, es decir, el las bacterias y los protistas son neutrófilos. La mayoría de los hongos prefieren más
el aire contiene el 95% de la humedad que tendría cuando estuviera equilibrado entorno ácido, alrededor de pH 4 a 6; protistas fotosintéticos también
a la misma temperatura con una muestra de agua pura. El relativo parecen preferir una ligera acidez. Muchas arqueas son acidófilas. Por ejemplo, el
la humedad sería del 95% y la actividad del agua de la muestra, del 0,95. archaeon Sulfolobus acidocaldarius es un habitante común de las aguas termales ácidas;
La actividad del agua está inversamente relacionada con la presión osmótica; si una crece bien alrededor de pH 1 a 3 y
solución tiene una presión osmótica alta, su aw es baja. a altas temperaturas Las arqueas Ferroplasma acidarmanus y
Los microorganismos difieren mucho en su capacidad para adaptarse a hábitats con Picrophilus oshimae en realidad puede crecer a pH 0, o muy cerca de él.
baja actividad de agua (tabla 6.4). Un microorganismo debe Aunque los microorganismos a menudo crecerán en amplios rangos
hacer un esfuerzo adicional para crecer en un hábitat con un valor de aw bajo de pH y lejos de sus óptimos, existen límites a su tolerancia.
Tabla 6.4 Límites aw inferiores aproximados para el crecimiento microbiano
Actividad de agua Ambiente procariotas hongos protistas fotosintéticos
1.00—Agua pura Sangre Vegetales, La mayoría de las bacterias gramnegativas

B
carne marchita planta, fruta y otros no halófilos
Agua de mar
0,95 Pan La mayoría de los bacilos grampositivos basidiomicetos La mayoría de los géneros
0.90 jamón La mayoría de los cocos, Bacillus fusarium
Mucor, Rhizopus
Levaduras ascomicetas
0.85 Salami Estafilococo Saccharomyces rouxii
(en sal)
0.80 Conservas Penicillium
0.75 lagos de sal Halobacteria Aspergilo Dunaliella
Pescado salado Actinospora
0.70 Aspergilo
Cereales, dulces, frutos secos
0,60 Saccharomyces rouxii
Chocolate (en azúcares)
Cariño Xeromyces bisporus

Leche en polvo
0,55—ADN desordenado
Adaptado de AD Brown, “Microbial Water Stress,” en Bacteriological Reviews, 40(4):803–846 1976. Copyright © 1976 de la Sociedad Estadounidense de Microbiología. Reimpreso con permiso.
Las variaciones drásticas en el pH citoplasmático pueden dañar a los microorganismos Los microorganismos cambian con frecuencia el pH de su propio hábitat.
rompiendo la membrana plasmática o inhibiendo la actividad de mediante la producción de productos de desecho metabólicos ácidos o básicos. fermentativo
enzimas y proteínas de transporte de membrana. La mayoría de los procariotas mueren Los microorganismos forman ácidos orgánicos a partir de carbohidratos, mientras que
si el pH interno cae mucho por debajo de 5,0 a 5,5. Los cambios en el pH externo los quimiolitotrofos como Thiobacillus oxidan los componentes reducidos de azufre
también pueden alterar la ionización de las moléculas de nutrientes y a ácido sulfúrico. Otros microorganismos hacen que su entorno sea más alcalino al
reducen así su disponibilidad para el organismo. generar amoníaco a través de aminoácidos.
Los microorganismos responden a los cambios de pH externos mediante degradación. Fermentación (sección 9.7); Quimiolitotrofia (sección 9.11)
mecanismos que mantienen un pH citoplasmático neutro. Se han propuesto varios Debido a que los microorganismos cambian el pH de su entorno, a menudo se
mecanismos para ajustarse a pequeños cambios en el pH externo. incluyen tampones en los medios para evitar la inhibición del crecimiento por grandes
propuesto. La membrana plasmática es impermeable a los protones. Los neutrófilos cambios de pH. El fosfato es un tampón de uso común
parecen intercambiar potasio por protones utilizando un sistema de transporte de y un buen ejemplo de amortiguación por un ácido débil (H2PO4 ) y su
2
antiporte. Alcalófilos extremos como Bacillus base conjugada (HPO4 ).
alcalophilus mantienen su pH interno más cerca de la neutralidad mediante el
2
HPO4 ÿÿÿ H2PO4
intercambio de iones de sodio internos por protones externos. Interno
la amortiguación también puede contribuir a la homeostasis del pH. Sin embargo, si el 2 HOH
OH H2PO4 ÿÿÿ HPO4
el pH externo se vuelve demasiado ácido, entran en juego otros mecanismos
jugar. Cuando el pH cae por debajo de 5,5 a 6,0, Salmonella entérica serovar Si se agregan protones a la mezcla, se combinan con la sal.
Typhimurium y E. coli sintetizan una variedad de formar para producir un ácido débil. Se resiste un aumento en la alcalinidad porque
nuevas proteínas como parte de lo que se ha llamado su tolerancia ácida el ácido débil neutralizará los iones de hidroxilo a través del protón.
respuesta. Una ATPasa translocadora de protones contribuye a esta respuesta donación para dar agua. Los péptidos y aminoácidos en medios complejos también
protectora, ya sea produciendo más ATP o bombeando protones fuera de la célula. tienen un fuerte efecto amortiguador.
Si el pH externo disminuye a 4.5 o menos,

Proteínas chaperonas tales como proteínas de choque ácido y choque térmico. 1. Defina pH, acidófilo, neutrófilo y alcalófilo.
se sintetizan proteínas. Estos previenen la desnaturalización ácida de 2. Clasifica cada uno de los siguientes organismos como un alcalófilo, un neutrófilo o un
proteínas y ayuda en el replegamiento de proteínas desnaturalizadas. Absorción de acidófilos: Staphylococcus aureus, Microcycstis aeruginosa, Sulfolobus acidocal
nutrientes por la célula (sección 5.6); Traducción: plegamiento de proteínas y molecular darius y Pseudomonas aeruginosa. ¿Cuáles pueden ser patógenos? Explicar
acompañantes (sección 11.8)
tus opciones.
pH [H+ ] Ejemplos ambientales Ejemplos microbianos

(Molaridad)
0 10–0(1.0)
Acidez ácido nítrico concentrado Ferroplasma
creciente Picrophilus oshimae
1 10-1 Contenido gástrico, fuentes termales ácidas Dunaliella acidófila
2 10–2 Jugo de limon Caldarium de cianidio

Drenaje de ácido minero Thiobacillus thiooxidans
Sulfolobus acidocaldarius
3 10–3 vinagre, cerveza de jengibre
Piña
4 10–4 Tomates, jugo de naranja

Suelo muy ácido
5 10–5 queso, repollo Physarum policéfalo

Pan Acanthamoeba castellanii
6 10–6 carne de res, pollo Lactobacillus acidophilus E.

agua de lluvia coli, Pseudomonas aeruginosa, Euglena
Leche gracilis, Paramecium bursaria
Saliva
7 10–7 Neutralidad Agua pura
Sangre estafilococo aureus
8 10–8 Agua de mar Nitrosomonas spp.
9 10–9 suelo fuertemente alcalino

lagos alcalinos
10 10–10 Jabón Microcistis aeruginosa

Bacilo alcalófilo
11 10–11 Amoniaco
12 10–12 Solución saturada de hidróxido de calcio
13 10–13 Lejía
Abridor de drenaje
14 10–14
Aumento de
la alcalinidad
Figura 6.19 La escala de pH. La escala de pH y ejemplos de sustancias con diferentes valores de pH. Los microorganismos se colocan en su punto óptimo de crecimiento.
3. Describir los mecanismos que utilizan los microbios para mantener un pH neutro. Explique
Locity de la reacción se duplicará aproximadamente por cada aumento de
cómo los valores extremos de pH pueden dañar a los microbios.

temperatura de 10°C. Cuando todas las enzimas de un microbio se consideran
4. ¿Cómo cambian los microorganismos el pH de su entorno? Cómo juntas, a medida que aumenta la velocidad de cada reacción, el metabolismo en su
¿El microbiólogo minimiza este efecto al cultivar microbios en el laboratorio? conjunto se vuelve más activo y el microorganismo crece más rápido.
Sin embargo, más allá de cierto punto, los aumentos adicionales en realidad
ralentizan el crecimiento y las temperaturas suficientemente altas son letales. Las
Temperatura La altas temperaturas dañan los microorganismos al desnaturalizar las enzimas, los
temperatura ambiental afecta profundamente a los microorganismos, como a todos transportadores y otras proteínas. La temperatura también tiene un efecto significativo
los demás organismos. De hecho, los microorganismos son particularmente sobre las membranas microbianas. A temperaturas muy bajas, las membranas se
susceptibles porque su temperatura varía con la del ambiente externo. Un factor solidifican. A altas temperaturas, la bicapa lipídica simplemente se derrite y se
muy importante que influye en el efecto de la temperatura sobre el crecimiento es la desintegra. En resumen, cuando los organismos están por encima de su temperatura
sensibilidad a la temperatura de las reacciones catalizadas por enzimas. Cada óptima, tanto la función como la estructura celular se ven afectadas. Si las
enzima tiene una temperatura a la que funciona de manera óptima (consulte la figura temperaturas son muy bajas, la función se ve afectada, pero no necesariamente la
8.19b). A alguna temperatura por debajo de la óptima, deja de ser catalítica. A estructura y composición química celular.
medida que la temperatura sube desde esta baja temperatura, la tasa de catálisis Debido a estas influencias de temperatura opuestas, el crecimiento microbiano
aumenta hasta la observada para la temperatura óptima. el ve tiene una dependencia de temperatura bastante característica con temperaturas
cardinales distintas: mínima, óptima y máxima.
Óptimo
Cuadro 6.5 Rangos de temperatura para el crecimiento microbiano
Temperaturas Cardinales (°C)

Microorganismo Mínimo Óptimo Máximo
Procariotas no fotosintéticos
Bacilo psychrophilus 10 23–24 28–30
Micrococcus cryophilus 4 10 24
Pseudomonas fluorescens 4 25–30 40
estafilococo aureus 6.5 30–37 46

Mínimo Máximo
Enterococcus caecalis 0 37 44
Escherichia coli 10 37 45
Neisseria gonorrhoeae 30 35–36 38

Temperatura Termoplasma acidófilo 45 59 62
Bacilo estearotermófilo 30 60–65 75

Figura 6.20 Temperatura y crecimiento. El efecto de
Termo acuático 40 70–72 79
temperatura sobre la tasa de crecimiento. 60 80 85
Sulfolobus acidocaldarius
Pyrococcus abyssi 67 96 102
temperaturas mínimas de crecimiento (figura 6.20). Aunque la forma de Pyrodictium oculto 82 105 110
la curva de dependencia de la temperatura puede variar, la temperatura óptima Pyrolobus fumarii 0 106 113
siempre está más cerca del máximo que del mínimo.
bacterias fotosintéticas
Las temperaturas cardinales para una especie en particular no son rígidamente Rhodospirillum rubrum ND 30–35 DAKOTA DEL NORTE
fijos, pero a menudo dependen en cierta medida de otros factores ambientales. Anabaena variable DAKOTA DEL NORTE 35 DAKOTA DEL NORTE
factores como el pH y los nutrientes disponibles. Por ejemplo,

oscilatoria tenuis DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 45–47
Crithidia fasciculate, un protista flagelado que vive en el intestino de los mosquitos,
Sinecococo eximius 70 79 84
crecerá en un medio simple a una temperatura de 22 a 27°C. De todos modos, eso
protistas
no puede ser cultivado a 33 a 34°C sin la adición de extra
Chlamydomonas nivalis 36 0 4
metales, aminoácidos, vitaminas y lípidos.
Fragilaria sublinearis 2 5–6 8–9
Las temperaturas cardinales varían mucho entre microorganismos (tabla 6.5).
ameba proteus 4–6 22 35
Los valores óptimos suelen oscilar entre 0 °C y 75 °C, mientras que
Euglena gracilis DAKOTA DEL NORTE 23 DAKOTA DEL NORTE
El crecimiento microbiano se produce a temperaturas que van desde menos de

Skeletonema costatum 6 16–26 28
20°C a más de 120°C. Algunas arqueas pueden incluso crecer a 121°C
(250°F), la temperatura normalmente utilizada en autoclaves (Microbial Naegleria fowleri 20–25 35 40
Diversidad y Ecología 6.1). El principal factor que determina este tricomonas vaginalis 25 32–39 42
el rango de crecimiento parece ser agua. Incluso a las temperaturas más extremas, Paramecio caudatum 25 28–30
los microorganismos necesitan agua líquida para crecer. El rango de temperatura de Tetrahymena pyriformis 6–7 20–25 33
crecimiento para un microorganismo en particular por lo general abarca alrededor de Cyclidium citrullus 18 43 47
30 grados. Algunas especies (p. ej., Neisseria gonorrhoeae) tienen un 30–34 45–50 56
Caldarium de cianidio
rango pequeño; otros, como Enterococcus faecalis, crecerán durante un
hongos
amplio rango de temperaturas. Los principales grupos microbianos difieren candida escocia 0 4–15 15
entre sí en cuanto a sus temperaturas máximas de crecimiento.
Saccharomyces cerevisiae 1–3 28 40
El límite superior para los protistas es de alrededor de 50°C. Algunos hongos pueden crecer
Mucor pusilo 21–23 45–50 50–58
a temperaturas tan altas como 55 a 60°C. Los procariotas pueden crecer en
temperaturas mucho más altas que los eucariotas. Se ha sugerido a
ND, sin datos.
que los eucariotas no son capaces de fabricar membranas organellares
que son estables y funcionales a temperaturas superiores a 60°C. El aparato
fotosintético también parece ser relativamente inestable porque
los organismos fotosintéticos no se encuentran creciendo a temperaturas muy altas.
10°C. Se aíslan fácilmente del Ártico y la Antártida.
hábitats; Debido a que el 90% del océano tiene una temperatura de 5 °C o
Los microorganismos como los enumerados en la tabla 6.5 se pueden colocar
menos, constituye un enorme hábitat para los psicrófilos. el psicrofilico
en una de cinco clases según sus rangos de temperatura para el crecimiento
El protista Chlamydomonas nivalis en realidad puede convertir un campo de nieve
(figura 6.21).
o rosa glaciar con sus esporas de color rojo brillante. Los psicrófilos son
1. Los psicrófilos crecen bien a 0°C y tienen un óptimo generalizada entre los taxones bacterianos y se encuentran en tales géneros
temperatura de crecimiento de 15°C o inferior; el máximo está alrededor como Pseudomonas, Vibrio, Alcaligenes, Bacillus, Arthrobacter,
6.1 Vida por encima de 100°C
Hasta hace poco, la temperatura más alta reportada para el crecimiento procariótico
fue de 105°C. Parecía que el límite superior de temperatura para la vida era
unos 100°C, el punto de ebullición del agua. Ahora se ha informado que las procariotas
termófilas crecen en chimeneas de sulfuro o "fumadores negros", ubicadas a lo largo
de grietas y crestas en el fondo del océano, que arrojan
agua de ventilación sobrecalentada rica en sulfuro con temperaturas superiores a 350°C
(ver figura del recuadro). Se ha presentado evidencia de que estos microbios pueden
crecen y se reproducen a 121 °C y pueden sobrevivir a temperaturas de hasta 130 °C
hasta por 2 horas. La presión presente en su hábitat es suficiente para
mantener el agua líquida (a 265 atm; el agua de mar no hierve hasta los 460°C).
Las implicaciones de este descubrimiento son muchas. las proteinas,
membranas y ácidos nucleicos de estos procariotas son notablemente
temperatura estable y proporcionan sujetos ideales para estudiar las formas
en el que se estabilizan macromoléculas y membranas. En el futuro puede ser posible
diseñar enzimas que puedan operar a muy

altas temperaturas. Algunas enzimas termoestables de estos organismos tienen
importantes usos industriales y científicos. por ejemplo, el
Se utiliza polimerasa Taq del termófilo Thermus aquaticus
ampliamente en la reacción en cadena de la polimerasa. La cadena de la polimerasa
reacción (sección 14.3)
temperaturas bajas. Las membranas celulares de los microorganismos

psicrofílicos tienen altos niveles de ácidos grasos insaturados y
permanecen semilíquidos cuando están fríos. De hecho, muchos psicrófilos
hipertermófilos
comienzan a perder componentes celulares a temperaturas superiores a
Termófilos 20°C debido a la ruptura de la membrana celular.
mesófilos 2. Muchas especies pueden crecer de 0 a 7°C aunque tienen un óptimo entre
20 y 30°C, y un máximo de alrededor de 35°C. Estas
Psicrótrofos se llaman psicrotrofos o psicrofilos facultativos. Las bacterias y los
Psicrófilos hongos psicrótrofos son factores importantes en la

deterioro de alimentos refrigerados como se describe en el capítulo 40.
3. Los mesófilos son microorganismos con un crecimiento óptimo alrededor
20 a 45°C; a menudo tienen una temperatura mínima de 15 a
20°C. Su máxima es de unos 45°C o inferior. La mayoría de los
microorganismos probablemente caen dentro de esta categoría. casi todos humanos
- 010 10 20 30 5040 60 70 80 90 100 110 120 Los patógenos son mesófilos, como cabría esperar porque su
ambiente es una temperatura bastante constante de 37°C.
Temperatura ( oC)
4. Algunos microorganismos son termófilos; pueden crecer en
temperaturas de 55°C o más. Su mínimo de crecimiento suele rondar los
Figura 6.21 Rangos de temperatura para el crecimiento microbiano.
45°C y suelen tener un óptimo entre 55 y
Los microorganismos pueden clasificarse en diferentes clases según su
65°C. La gran mayoría son procariotas, aunque algunos protistas y hongos
rangos de temperatura para el crecimiento. Se clasifican en orden creciente
fotosintéticos son termofílicos (tabla 6.5). Estas
rango de temperatura de crecimiento como psicrófilos, psicrotrofos,
Los organismos prosperan en muchos hábitats, incluidos compost, montones de
mesófilos, termófilos e hipertermófilos. Representante
heno que se autocalientan, líneas de agua caliente y fuentes termales.
Aquí se ilustran los rangos y los valores óptimos para estos cinco tipos.
Los termófilos se diferencian de los mesófilos en muchos aspectos.
Tienen enzimas más estables al calor y síntesis de proteínas.
Moritella, Photobacterium y Shewanella. Un psicrofilico sistemas que funcionan correctamente a altas temperaturas. Estas
archaeon, Methanogenium, ha sido aislado de Ace Lake Las proteínas son estables por una variedad de razones. Las proteínas
en la Antártida. Los microorganismos psicrófilos se han adaptado a estables al calor tienen interiores hidrofóbicos altamente organizados; más
su entorno de varias maneras. Sus enzimas, transporte enlaces de hidrógeno y otros enlaces no covalentes fortalecen el
sistemas, y los mecanismos de síntesis de proteínas funcionan bien en estructura. Mayores cantidades de aminoácidos como la prolina.
también hacen que la cadena polipeptídica sea menos flexible. Además, las proteínas Un organismo capaz de crecer en presencia de O2 atmosférico es un aerobio, mientras
se estabilizan y ayudan a plegarse mediante proteínas especiales del capítulo uno. que uno que puede crecer en su ausencia es un anaerobio. Casi todos los organismos
Existe evidencia de que en las bacterias termófilas, el ADN es estabilizado por proteínas multicelulares dependen por completo del O2 atmosférico para crecer, es decir, son aerobios
especiales similares a las histonas. Sus lípidos de membrana también son bastante obligados (tabla 6.3). El oxígeno sirve como aceptor terminal de electrones para la cadena
estables a la temperatura. Tienden a ser más saturados, más ramificados y de mayor de transporte de electrones en la respiración aeróbica. Además, los eucariotas aeróbicos
peso molecular. Esto aumenta los puntos de fusión de los lípidos de la membrana. emplean O2 en la síntesis de esteroles y ácidos grasos insaturados. Los anaerobios
facultativos no requieren O2 para crecer pero crecen mejor en su presencia. En presencia
Las arqueas termófilas tienen lípidos de membrana con enlaces éter, que protegen los de oxígeno utilizan la respiración aeróbica. Los anaerobios aerotolerantes como
lípidos de la hidrólisis a altas temperaturas. A veces, los lípidos de las arqueas Enterococcus faecalis simplemente ignoran el O2 y crecen igual de bien, ya sea que esté
atraviesan la membrana para formar una monocapa rígida y estable. Proteínas (apén presente o no. Por el contrario, los anaerobios estrictos u obligados (p. ej., Bacteroides,
dice I); Membranas de células procarióticas (sección 3.2) Fusobacterium, Clostridium pasteurianum, Methanococcus, Neocallimastix) no toleran el O2
en absoluto y mueren en su presencia. Los aerotolerantes y los anaerobios estrictos no
5. Como se mencionó anteriormente, algunos termófilos pueden crecer a 90 °C o más y pueden generar energía a través de la respiración aeróbica y deben emplear la fermentación
algunos tienen máximos por encima de los 100 °C. Los procariotas que tienen un o la respiración anaeróbica para este fin. Finalmente, hay aerobios como Campylobacter,
crecimiento óptimo entre 80 °C y aproximadamente 113 °C se denominan llamados microaerófilos, que son dañados por el nivel atmosférico normal de O2 (20%) y
hipertermófilos. Por lo general, no crecen bien por debajo de los 55°C. Pyrococcus requieren niveles de O2 por debajo del rango de 2 a 10% para crecer. La naturaleza de las
abyssi y Pyrodictium occultum son ejemplos de hipertermófilos marinos que se respuestas bacterianas de O2 se puede determinar fácilmente cultivando las bacterias en
encuentran en áreas cálidas del lecho marino. tubos de cultivo llenos de un medio de cultivo sólido o un medio especial como el caldo de
tioglicolato, que contiene un agente reductor para reducir los niveles de O2 (figura 6.22).
Reacciones de oxidación-reducción, transportadores de electrones y sistemas de transporte
de electrones (sección 8.6); respiración aeróbica (sección 9.2); respiración anaeróbica
1. ¿Qué son las temperaturas cardinales?
(sección 9.6); Fermentación (sección 9.7)
2. ¿Por qué la tasa de crecimiento aumenta con el aumento de la temperatura y luego vuelve
a caer con temperaturas más altas?
3. Defina psicrófilo, psicrótrofo, mesófilo, termófilo e hipertérmico

mofilo
4. ¿Qué adaptaciones metabólicas y estructurales para las temperaturas extremas?
El grupo amicrobiano puede mostrar más de un tipo de relación con el O2. Los cinco
tienen los psicrófilos y los termófilos?
tipos se encuentran entre los procariotas y los protozoos.
Los hongos normalmente son aeróbicos, pero varias especies, particularmente entre las
levaduras, son anaerobios facultativos. Los protistas fotosintéticos son casi siempre aerobios
Concentración de oxígeno La obligados. Cabe señalar que la capacidad de crecer tanto en ambientes óxicos como anóxicos
importancia del oxígeno para el crecimiento de un organismo se correlaciona con su proporciona una flexibilidad considerable y es una ventaja ecológica.
metabolismo, en particular, con los procesos que utiliza para conservar la energía suministrada
por su fuente de energía. Casi todos los procesos metabólicos de conservación de energía Aunque los anaerobios obligados mueren con el O2, pueden recuperarse de hábitats
implican el movimiento de electrones a través de un sistema de transporte de electrones. que parecen ser óxicos. En tales casos, se asocian con anaerobios facultativos que consumen
Para los quimiotrofos, un aceptor de electrones terminal suministrado externamente es el O2 disponible y, por lo tanto, hacen posible el crecimiento de anaerobios estrictos. Por
fundamental para el funcionamiento del sistema de transporte de electrones. La naturaleza ejemplo, el anaerobio estricto Bacteroides gingivalis vive en la boca donde crece en las
del aceptor de electrones terminal está relacionada con el requerimiento de oxígeno de un grietas anóxicas alrededor de los dientes.
organismo.
Figura 6.22 Oxígeno y crecimiento bacteriano. Cada punto representa una

colonia bacteriana individual dentro del agar o en su superficie. La superficie,
que está directamente expuesta al oxígeno atmosférico, será óxica. El aerobio Anaerobio Anaerobia microaerófilo
obligado facultativo aerotolerante Anaerobio estricto
contenido de oxígeno del medio disminuye con la profundidad hasta que el
medio se vuelve anóxico hacia el fondo del tubo. Se muestra la presencia y
ausencia de las enzimas superóxido dismutasa (SOD) y catalasa para cada
contenido enzimático
tipo.
+ CÉSPED + CÉSPED + CÉSPED – CÉSPED + CÉSPED
+ Catalasa + catalasa – catalasa – catalasa +/– Catalasa

(niveles bajos)
Estas diferentes relaciones con el O2 se deben a varios factores, entre

ellos la inactivación de las proteínas y el efecto de los derivados tóxicos del
O2 . Las enzimas se pueden inactivar cuando se oxidan grupos sensibles
como los sulfhidrilos. Un ejemplo notable es la enzima nitrogenasa de fijación
de nitrógeno, que es muy sensible al oxígeno. Síntesis de aminoácidos:
asimilación de nitrógeno (sección 10.5)
El oxígeno acepta electrones y se reduce fácilmente porque sus dos
electrones orbitales externos no están apareados. Las flavoproteínas, que
funcionan en el transporte de electrones, varios otros componentes celulares
y la radiación promueven la reducción de oxígeno. El resultado suele ser
alguna combinación de los productos de reducción radical superóxido,
peróxido de hidrógeno y radical hidroxilo.
O2 e ÿ O2 • (radical superóxido)
O2 • e 2H ÿ H2O2 (peróxido de hidrógeno)
H2O2 e H ÿ H2O OH• (radical hidroxilo)
Figura 6.23 Cámara de trabajo anaeróbico e incubadora.

Estos productos de reducción de oxígeno son extremadamente tóxicos
Este sistema anaeróbico contiene un área de trabajo libre de oxígeno y una
porque se oxidan y destruyen rápidamente los constituyentes celulares. Un
incubadora. El compartimiento de intercambio a la derecha del área de
microorganismo debe ser capaz de protegerse contra tales productos de
trabajo permite que los materiales se transfieran al interior sin exponer el
oxígeno o morirá. De hecho, los neutrófilos y los macrófagos, dos células
interior al oxígeno. La atmósfera anaeróbica se mantiene en gran medida con
importantes del sistema inmunitario, utilizan estos productos tóxicos del
una bomba de vacío y purgas de nitrógeno. .El oxígeno restante se elimina
oxígeno para destruir los patógenos invasores. Fagocitosis (sección 31.3)
mediante un catalizador de paladio e hidrógeno. El oxígeno reacciona con el
Muchos microorganismos poseen enzimas que brindan protección contra
hidrógeno para formar agua, que es absorbida por el desecante.
productos tóxicos de O2 (figura 6.22). Los aerobios obligados y los anaerobios
facultativos suelen contener las enzimas superóxido dismutasa (SOD) y
catalasa, que catalizan la destrucción del radical superóxido y el peróxido de purgando el O2 residual con gas nitrógeno (figura 6.23). A menudo , se
hidrógeno, respectivamente. La peróxido también se puede usar para destruir agrega CO2 y nitrógeno a la cámara, ya que muchos anaerobios requieren
el peróxido de hidrógeno. una pequeña cantidad de CO2 para un mejor crecimiento. (3) Una de las
formas más populares de cultivar pequeñas cantidades de anaerobios es
2O2 • 2H ÿÿ ÿÿÿ superóxido
O2 H2O2 ÿÿdismutasa mediante el uso de un frasco GasPak (figura 6.24). En este procedimiento, el
catalasa medio ambiente se vuelve anóxico mediante el uso de hidrógeno y un
2H2O2 ÿÿ ÿ 2H2O O2 catalizador de paladio para eliminar el O2 mediante la formación de agua. Los
peroxidasa
H2O2 NADH H ÿ ÿÿÿ 2H2O NAD+ agentes reductores del agar anaeróbico también eliminan el oxígeno, como se mencionó anteriormente
(4) Las bolsas o bolsas de plástico son recipientes convenientes cuando solo
Los microorganismos aerotolerantes pueden carecer de catalasa pero casi se van a incubar anaeróbicamente unas pocas muestras. Estos tienen un
siempre tienen superóxido dismutasa. El Lactobacillus plantarum aerotolerante catalizador y carbonato de calcio para producir una atmósfera anóxica rica en
utiliza iones manganosos en lugar de superóxido dismutasa para destruir el dióxido de carbono. Se agrega una solución especial al compartimiento de
radical superóxido. Todos los anaerobios estrictos carecen de ambas enzimas reactivos de la bolsa; se colocan placas de petri u otros recipientes en la bolsa;
o las tienen en concentraciones muy bajas y, por lo tanto, no pueden tolerar el luego se cierra con abrazaderas y se coloca en una incubadora. Un oratorio
O2. de laboratorio puede hacer uso de todas estas técnicas, ya que cada una es
Debido a que los aerobios necesitan O2 y los anaerobios son eliminados más adecuada para diferentes propósitos.
por él, se deben usar enfoques radicalmente diferentes cuando se cultivan los
dos tipos de microorganismos. Cuando se cultivan grandes volúmenes de 1. Describa los cinco tipos de relaciones de O2 que se observan en los microorganismos.
microorganismos aeróbicos, se agita el recipiente de cultivo para airear el 2. ¿Cómo utilizan el O2 los aerobios quimiotróficos?
medio o se debe bombear aire estéril a través del recipiente de cultivo. 3. ¿Cuáles son los efectos tóxicos del O2? ¿Cómo se protegen de estos efectos
Precisamente el problema contrario surge con los anaerobios; debe excluirse los aerobios y otros microbios tolerantes al oxígeno?
todo el O2. Esto puede ser realizado de varias maneras. 4. Describa cuatro formas en que se pueden cultivar anaerobios.
(1) Pueden utilizarse medios anaerobios especiales que contengan agentes
reductores como tioglicolato o cisteína. El medio se hierve durante la
preparación para disolver sus componentes; la ebullición también elimina el Presión
oxígeno de manera muy efectiva. Los agentes reductores eliminarán cualquier Los organismos que pasan su vida en la tierra o en la superficie del agua
O2 disuelto que quede dentro del medio para que los anaerobios puedan siempre están sujetos a una presión de 1 atmósfera (atm) y nunca se ven
crecer debajo de su superficie. (2) El oxígeno también se puede eliminar de un afectados significativamente por la presión. Sin embargo, muchos otes
sistema anaeróbico eliminando el aire con una bomba de vacío y procarios viven en las profundidades del mar (océano de 1.000 mo más de profundidad)
Tapa Tornillo de bloqueo Abrazadera
Sello de junta de goma

2H2 + O2 2H2O
cámara de catalizador
H2
Contiene gránulos de paladio CO2
Oxígeno extraído de la cámara por
combinándose con hidrógeno para formar agua.
Esta reacción es catalizada por los
gránulos de paladio.
Envolvente del generador de gas

Tira indicadora anaeróbica
Se añade agua a los productos químicos.
El azul de metileno se vuelve incoloro en
en sobre para generar H2 y CO2.
ausencia de O2.
El dióxido de carbono promueve más rápido
crecimiento de microorganismos.
Figura 6.24 El sistema anaeróbico GasPak. El hidrógeno y el dióxido de carbono son generados por una envoltura GasPak. El catalizador de paladio
en la tapa de la cámara cataliza la formación de agua a partir de hidrógeno y oxígeno, eliminando así el oxígeno de la cámara sellada.
donde la presión hidrostática puede alcanzar de 600 a 1.100 atm y la

Rayos gamma
la temperatura es de 2 a 3°C. Muchos de estos procariotas son tolerantes a baro: el
rayos X Ondas de radio
aumento de la presión les afecta negativamente, pero no tanto.
Ultravioleta Infrarrojo
tanto como lo hace con los microbios no tolerantes. Algunos procariotas en el intestino
Visible
de invertebrados de aguas profundas como los anfípodos (crustáceos parecidos a
camarones) y holoturias (pepinos de mar) son verdaderamente barófilos—
10– 0,01
4 Longitud 1.0 100 103 104 106 108
crecen más rápidamente a altas presiones. Estos microbios pueden
de onda (nm)
juegan un papel importante en el reciclaje de nutrientes en las profundidades marinas. A
barófilo recuperado de la fosa de las Marianas cerca de Filipinas
(profundidad de unos 10.500 m) en realidad no puede crecer a presiones bajas de 400
a 500 atm cuando se incuba a 2°C. Hasta ahora,
Se han encontrado barófilos entre varios géneros bacterianos (por ejemplo,
Photobacterium, Shewanella, Colwellia). Algunas arqueas son termobarófilas (p. ej.,
Pyrococcus spp., Methanocaldococcus jan naschii). Microorganismos en ambientes
Infrarrojo
marinos (sección 28.3)
rojo
naranja
Amarillo
Radiación Verde
Azul
Nuestro mundo es bombardeado con radiación electromagnética de varios Ultravioleta
Violeta
tipos (figura 6.25). Esta radiación a menudo se comporta como si estuviera compuesta
200 300 400 500 600 700 800 900
de ondas que se mueven a través del espacio como ondas que viajan en el
Longitud de onda (nm)
superficie del agua La distancia entre dos crestas o valles de olas
es la longitud de onda. Como la longitud de onda de la radiación electromagnética
disminuye, la energía de la radiación aumenta: rayos gamma y Figura 6.25 El espectro electromagnético. Una porción de
Los rayos X son mucho más energéticos que la luz visible o el infrarrojo. el espectro se expande en la parte inferior de la figura.
ondas. La radiación electromagnética también actúa como una corriente de energía.
paquetes llamados fotones, cada fotón tiene un cuanto de energía
cuyo valor dependerá de la longitud de onda de la radiación. longitudes de onda más cortas que 287 nm es absorbida por el O2 en la Tierra
La luz del sol es la principal fuente de radiación en la Tierra. Incluye luz visible, atmósfera; este proceso forma una capa de ozono entre 25 y
radiación ultravioleta (UV), rayos infrarrojos y 30 millas sobre la superficie de la Tierra. La capa de ozono luego absorbe
ondas de radio. La luz visible es el aspecto más conspicuo e importante de nuestro rayos UV algo más largos y reforma el O2. La distribución bastante uniforme de la luz
entorno: la mayor parte de la vida depende de la capacidad de solar en todo el espectro visible explica
organismos fotosintéticos para atrapar la energía luminosa del sol. Casi el 60% de la el hecho de que la luz del sol es generalmente "blanca". Fototrofia (sección 9.12)
radiación solar se encuentra en la región infrarroja y no Muchas formas de radiación electromagnética son muy dañinas para
que la parte visible del espectro. El infrarrojo es el principal microorganismos Esto es especialmente cierto en el caso de las radiaciones
fuente del calor de la Tierra. A nivel del mar, se encuentra muy poca radiación ionizantes, radiaciones de longitud de onda muy corta y alta energía, que pueden causar
ultravioleta por debajo de 290 a 300 nm. radiación ultravioleta de átomos a perder electrones (ionizarse). Dos formas principales de ionización
son (1) los rayos X, que se producen artificialmente, y (2) los rayos gamma, que se emiten absorben energía del oxígeno singlete y la convierten de nuevo en
durante la desintegración de los radioisótopos. Bajo el estado fundamental no excitado. Tanto los microorganismos fotosintéticos como los no
los niveles de radiación ionizante producirán mutaciones y pueden provocar indirectamente fotosintéticos emplean pigmentos de esta manera.
la muerte, mientras que los niveles más altos son directamente letales. Aunque los
microorganismos son más resistentes a las radiaciones ionizantes que 1. ¿Qué son las bacterias barotolerantes y barófilas? donde esperarías
organismos más grandes, todavía serán destruidos por un suficientemente grande para encontrarlos?
dosis. La radiación ionizante se puede utilizar para esterilizar artículos. Algunos procariotas 2. Enumere los tipos de radiación electromagnética en orden decreciente de energía
(p. ej., Deinococcus radiodurans) y endosporas bacterianas o aumentando la longitud de onda.
puede sobrevivir a grandes dosis de radiación ionizante. El uso de métodos físicos 3. ¿Por qué es tan importante que la Tierra reciba un suministro adecuado de sol?
en el control: Radiación (sección 7.4); Deinococcus-Thermus (sección 21.2) ¿luz? ¿Cuál es la importancia de la formación de ozono?
Una variedad de cambios en las células se deben a la radiación ionizante; eso 4. ¿Cómo dañan la radiación ionizante, la radiación ultravioleta y la luz visible?
rompe los enlaces de hidrógeno, oxida los dobles enlaces, destruye el anillo microorganismos? ¿Cómo se protegen los microorganismos contra
estructura y polimeriza algunas moléculas. El oxígeno mejora daños por UV y luz visible?
estos efectos destructivos, probablemente a través de la generación de radicales hidroxilo
(OH). Aunque muchos tipos de constituyentes pueden
ser afectado, es razonable suponer que la destrucción del ADN es 6.6 CRECIMIENTO MICROBIANO EN NATURALEZA
la causa más importante de muerte. AMBIENTES
La radiación ultravioleta (UV) puede matar todo tipo de microorganismos debido a
La sección 6.5 examina los efectos sobre el crecimiento microbiano de individuos
su corta longitud de onda (aproximadamente de 10 a 400 nm)
factores ambientales como la disponibilidad de agua, el pH y la temperatura. Aunque la
y alta energía. La radiación ultravioleta más letal tiene una longitud de onda de
ecología microbiana se introduce con más detalle en
260 nm, la longitud de onda absorbida con mayor eficacia por el ADN. los
En los capítulos 27 a 30, ahora consideramos brevemente el efecto del medio ambiente en
El mecanismo principal del daño UV es la formación de timina.
su conjunto sobre el crecimiento microbiano.
dímeros en el ADN. Dos timinas adyacentes en una hebra de ADN se unen covalentemente
para inhibir la replicación y función del ADN. Los microbios son
protegidos de longitudes de onda más cortas de luz ultravioleta porque son Limitación del crecimiento por factores ambientales
absorbido por el oxígeno, como se describió anteriormente. El daño causado El entorno microbiano es complejo y cambia constantemente.
por la luz ultravioleta que llega a la superficie de la Tierra puede ser reparado por varios A menudo contiene bajas concentraciones de nutrientes (ambiente oligotrófico) y expone
Los mecanismos de reparación del ADN, que se analizan en el capítulo 13. La exposición a los microbios a muchos gradientes superpuestos de
excesiva a la luz ultravioleta supera la capacidad del organismo para reparar el daño y nutrientes y otros factores ambientales. El crecimiento de los microorganismos depende
provoca la muerte. Longitudes de onda más largas de luz ultravioleta tanto del suministro de nutrientes como de su tolerancia a las condiciones ambientales
(radiación ultravioleta cercana; 325 a 400 nm) no son absorbidos por el oxígeno y presentes en su hábitat en cualquier momento.
así llegar a la superficie de la Tierra. También pueden dañar los microorganismos. una hora en particular. Dos leyes aclaran esta dependencia. Ley de Liebig de
porque inducen la descomposición del triptófano en fotoproductos tóxicos. Parece que el mínimo establece que la biomasa total de un organismo será
estos fotoproductos de triptófano tóxicos más determinado por el nutriente presente en la concentración más baja relativa a los
la propia radiación ultravioleta cercana produce roturas en las hebras de ADN. los requerimientos del organismo. Esta ley se aplica tanto en el
Se desconoce el mecanismo preciso, aunque es diferente al laboratorio (figura 6.7) y en ambientes terrestres y acuáticos.
visto con UV de 260 nm. Mutaciones y su base química (sección 13.1) Un aumento en un nutriente esencial limitante como el fosfato
La luz visible es inmensamente beneficiosa porque es la fuente resultar en un aumento en la población microbiana hasta que algún otro
de energía para la fotosíntesis. Sin embargo, incluso la luz visible, cuando está presente el nutriente se vuelve limitante. Si un nutriente específico es limitante,
con suficiente intensidad, puede dañar o matar las células microbianas. Generalmente los cambios en otros nutrientes no tendrán ningún efecto. Ley de Shelford de
Se requieren pigmentos llamados fotosensibilizadores y O2 . Todos los microorganismos la tolerancia establece que existen límites a los factores ambientales por debajo y por
poseen pigmentos como clorofila, bacterioclorofila, citocromos y flavinas, que pueden encima de los cuales un microorganismo no puede sobrevivir y crecer,
absorber energía luminosa, independientemente del suministro de nutrientes. Esto se puede ver fácilmente para la
excitarse o activarse y actuar como fotosensibilizadores. El fotosensibilizador excitado (P) temperatura como se muestra en la figura 6.21. Cada microorganismo tiene un rango de
transfiere su energía al O2 generando oxígeno simple ( temperatura específico en el que puede crecer. la misma regla
1
O2). se aplica a otros factores como el pH, el nivel de oxígeno y la hidrostática
presión en el medio marino. Sustancias inhibidoras en el
luzÿ
PAG ÿ P (activado) el medio ambiente también puede limitar el crecimiento microbiano. Por ejemplo, rápido,
1 se produce un crecimiento ilimitado si un microorganismo se expone a un exceso
P (activado) O2 ÿÿÿ P O2
nutrientes Tal crecimiento agota rápidamente los nutrientes y a menudo resulta
El oxígeno singlete es un agente oxidante muy reactivo y poderoso que en la liberación de productos tóxicos. Tanto el agotamiento de nutrientes como la
destruir rápidamente una célula. Es probablemente el principal agente empleado por los productos tóxicos limitan un mayor crecimiento. Otro ejemplo se ve con
fagocitos para destruir las bacterias engullidas. Fagocitosis (sección 31.3) microbios que crecen en ambientes pobres en nutrientes u oligotróficos,
Muchos microorganismos que están en el aire o viven en superficies expuestas donde el crecimiento de microbios puede ser inhibido directamente por una variedad de
Las superficies utilizan pigmentos carotenoides para la protección contra la fotooxidación. sustancias naturales que incluyen fenólicos, taninos, amoníaco,
Los carotenoides apagan efectivamente el oxígeno singulete, es decir, etileno y compuestos volátiles de azufre.
Crecimiento Microbiano en Ambientes Naturales 143
Figura 6.26 Morfología y nutrientes

Absorción. Los microorganismos pueden cambiar su
morfología en respuesta al hambre y diferentes
factores limitantes para mejorar su capacidad de supervivencia.
(a) Caulobacter tiene tallos relativamente cortos cuando
el fósforo es abundante. (b) Los tallos son extremadamente
de largo en condiciones de fósforo limitado.
(a) (B)
En respuesta a los ambientes oligotróficos y la competencia intensa, muchos experiencia de los microbios en ambientes naturales. John Postgate de la
microorganismos se vuelven más competitivos en la captura de nutrientes y la explotación La Universidad de Sussex en Inglaterra fue una de las primeras en notar que
de los recursos disponibles. A menudo el microorganismos estresados por la supervivencia en hábitats naturales, o en
la morfología del organismo cambiará para aumentar su superficie y su capacidad para muchos medios de laboratorio selectivos—fueron particularmente sensibles a
absorber nutrientes. Esto puede implicar la conversión de procariotas en forma de bastón tensiones secundarias. Tales tensiones pueden producir microorganismos viables que
a "mini" y "ultramicro". han perdido la capacidad de crecer en los medios que normalmente se usan para
células o cambios en la morfología de bacterias prostéticas o acechadas, en respuesta su cultivo. Para determinar el potencial de crecimiento de tales microorganismos,
a la inanición. La privación de nutrientes induce Postgate desarrolló lo que ahora se llama Postgate.
muchos otros cambios como se discutió previamente (figura 6.26). Para ensayo de microviabilidad, en el que los microorganismos se cultivan en un
ejemplo, los microorganismos pueden someterse a un cierre paso a paso fina película de agar bajo un cubreobjetos. La capacidad de una célula para cambiar su
del metabolismo a excepción de los genes de mantenimiento de la limpieza. morfología, incluso si no crece más allá de la etapa de una sola célula,
Muchos factores pueden alterar los niveles de nutrientes en ambientes oligotróficos. indica que el microorganismo sí muestra “señales de vida”.
Los microorganismos pueden secuestrar nutrientes limitantes críticos, Desde entonces, muchos investigadores han desarrollado procedimientos sensibles
como el hierro, haciéndolos menos disponibles para los competidores. La atmósfera microscópicos, isotópicos y genéticos moleculares adicionales para
puede aportar nutrientes esenciales y apoyar la proliferación microbiana. evaluar la presencia y la importancia de estos procariotas viables pero no cultivables
crecimiento. Esto se ve tanto en el laboratorio como en los entornos naturales. Se ha (VBNC) tanto en el laboratorio como en el campo. El nuevo campo de
descubierto que las sustancias orgánicas transportadas por el aire estimulan La genómica ambiental, o metagenómica, se analiza en el capítulo
el crecimiento microbiano en medios diluidos, y el enriquecimiento de los medios de 15. En un enfoque más rutinario, los niveles de anticuerpos fluorescentes y
crecimiento por materia orgánica en el aire puede permitir poblaciones significativas de Las células teñidas con naranja de acridina a menudo se comparan con la población.
microorganismos a desarrollarse. Incluso el agua destilada, que contiene conteos obtenidos por el método del número más probable (MPN) y
rastros de materia orgánica, puede absorber compuestos de un carbono de recuentos en placa utilizando medios selectivos y no selectivos. El lanzamiento de
la atmósfera y cultivar microorganismos. La presencia de tal Los materiales celulares marcados radiactivamente también se utilizan para controlar los
nutrientes transportados por el aire y el crecimiento microbiano, si no se detectan, pueden afectar efectos del estrés en los microorganismos. A pesar de estos avances, la estimación de
experimentos en bioquímica y biología molecular, así como las células viables sensibles al sustrato por el método de Postgate siguen siendo
estudios de microorganismos que crecen en ambientes oligotróficos. importantes. Estos estudios muestran que incluso cuando las bacterias patógenas
como Escherichia coli, Vibrio cholerae, Klebsiella pneumoniae,
Enterobacter aerogenes y Enterococcus faecalis han perdido su
Recuento e identificación de microorganismos en la naturaleza
Entornos capacidad de crecer en medios de laboratorio convencionales usando estándar
técnicas culturales, todavía podrían desempeñar un papel en las enfermedades
Los ecologistas microbianos hacen dos preguntas importantes: ¿Qué microbios
infecciosas. Ecología microbiana y sus métodos: una descripción general (sección 27.4);
están en un hábitat microbiano, y cuántos hay? Aunque los microbiólogos han
Depuración de aguas y análisis sanitario (sección 41.1)
desarrollado numerosas técnicas para identificar
y contando los microbios, estas preguntas no se responden fácilmente.
Biopelículas
Hay dos razones para esto. En primer lugar, muchos métodos de identificación y recuento
se basan en la capacidad de un microbio para formar colonias. Esta Aunque los científicos observaron ya en la década de 1940 que se encontraron más
presupone que el microbiólogo sabe cómo construir un microbios en ambientes acuáticos adheridos a las superficies
medio de crecimiento y crear condiciones ambientales que sustentarán a todos los (sésiles) en lugar de flotantes (planctónicos), sólo recientemente este hecho llamó la
microbios en un hábitat. Desafortunadamente, este conocimiento atención de los microbiólogos.
elude a los microbiólogos, y se estima que sólo alrededor del 1% de Estos microbios adheridos son miembros de complejos, envueltos en limo
los microbios en ambientes naturales han sido cultivados. Cada vez más, los métodos comunidades llamadas biopelículas. Las biopelículas son omnipresentes en la naturaleza.
moleculares se utilizan para analizar la diversidad de Allí se ven más a menudo como capas de limo sobre rocas u otros
poblaciones microbianas. La segunda razón está relacionada con el “estrés” objetos en el agua (figura 6.27a). Cuando se forman en los cascos de
(a) (B)
Figura 6.27 Ejemplos de biopelículas. Las biopelículas se forman en casi cualquier superficie expuesta a microorganismos. (a) Biopelícula en la superficie de un
estromatolito en Walker Lake (Nevada, EE. UU.), un lago alcalino. La biopelícula consiste principalmente en la cianobacteria Calothrix. (b) Fotografía
tomada durante la cirugía para extirpar una articulación artificial recubierta de biopelícula. El material blanco está compuesto de pus, células bacterianas y fúngicas, y el
glóbulos blancos del paciente.
botes y barcos, causan corrosión, lo que limita la vida útil del situación es mediante la extracción del implante. Otro problema con
buques y genera pérdidas económicas. De gran preocupación es la formación de biopelículas es que las células se desprenden regularmente (figura 6.28). Esta
biopelículas en dispositivos médicos tales como implantes de cadera y rodilla (figura puede tener muchas consecuencias. Por ejemplo, las biopelículas en una ciudad
6.27b). Estas biopelículas a menudo causan enfermedades graves. las tuberías de distribución de agua pueden servir como fuente de contaminación
y falla del dispositivo médico. Aparentemente, la formación de biopelículas después de que el agua sale de una planta de tratamiento de agua.
una habilidad antigua entre los procariotas, como evidencia de biopelículas
se puede encontrar en el registro fósil de hace unos 3.400 millones de años.
Las biopelículas se pueden formar en prácticamente cualquier superficie, una vez que ha sido Comunicación célula-célula dentro de microbios
condicionado por proteínas y otras moléculas presentes en el medio ambiente (figura Poblaciones
6.28). Los microbios se adhieren reversiblemente a la superficie acondicionada y Durante décadas, los microbiólogos tendieron a pensar en las poblaciones bacterianas
eventualmente comienzan a liberar polisacáridos, como conjuntos de células individuales que crecían y se comportaban de manera
proteínas y ADN. Estos polímeros permiten que los microbios se adhieran independiente. Pero hace unos 30 años, se descubrió que el
más estable a la superficie. A medida que la biopelícula se espesa y madura, La bacteria luminiscente marina Vibrio fischeri controla su capacidad para
los microbios se reproducen y secretan polímeros adicionales. El fin brillan al producir una pequeña sustancia difusible llamada autoinductor.
El resultado es una comunidad compleja y dinámica de microorganismos. los La molécula autoinductora se identificó más tarde como una acilhomoserina lactona
Los microbios interactúan en una variedad de formas. Por ejemplo, los residuos (AHL). Ahora se sabe que muchas bacterias gramnegativas producen señales moleculares
los productos de un microbio pueden ser la fuente de energía para otro microbio. Las AHL que varían en longitud y
células también se comunican entre sí como se describe sustitución en la tercera posición de la cadena lateral de acilo (figura 6.29).
próximo. Finalmente, la presencia de ADN en la baba extracelular puede En muchas de estas especies, la AHL se difunde libremente a través del
ser asumido por miembros de la comunidad de biopelículas. Así genes membrana de plasma. Por lo tanto, a una densidad celular baja, se difunde fuera del
puede transferirse de una célula (o especie) a otra. célula. Sin embargo, cuando la población celular aumenta y la AHL se acumula fuera de la
Mientras están en la biopelícula, los microbios están protegidos de numerosas célula, el gradiente de difusión se invierte de modo que
agentes nocivos como la luz ultravioleta, los antibióticos y otros agentes antimicrobianos. el AHL entra en la celda. Debido a que la afluencia de AHL depende de la densidad celular,
Esto se debe en parte a la matriz extracelular en permite que las células individuales evalúen la densidad de población.
que están incrustados, pero también se debe a factores fisiológicos Esto se conoce como detección de quórum; un quórum generalmente se refiere a
cambios. De hecho, numerosas proteínas sintetizadas o activadas en el número mínimo de miembros en una organización, como un órgano legislativo,
Las células de biopelícula no se observan en las células planctónicas y viceversa. necesarios para realizar negocios. Cuando AHL alcanza un
La resistencia de las células del biofilm a los agentes antimicrobianos tiene serias nivel de umbral dentro de la célula, sirve para inducir la expresión de
Consecuencias. Cuando se forman biopelículas en un dispositivo médico como genes diana que regulan una serie de funciones, dependiendo de la
un implante de cadera (figura 6.27b), son difíciles de matar y pueden microbio. Estas funciones son más eficaces sólo si un gran número
causar una enfermedad grave. A menudo, la única manera de tratar a los pacientes en este de microbios están presentes. Por ejemplo, la luz producida por una célula
Crecimiento Microbiano en Ambientes Naturales 145
1 Preacondicionamiento del sustrato por

moléculas ambientales
4 Desorción
6 Transporte
9 Desprendimiento,
convectivo y erosión y
2
Deposición celular difusivo de O2 y desprendimiento
nutrientes
8 Secreción de
5 Señalización matriz de
de célula a polisacáridos
célula e inicio de
7 Replicación y
la producción de crecimiento
3
exopolímeros
adsorción celular
Sustrato
Figura 6.28 Formación de biopelículas.
Señal y Estructura Organismo representativo Función Regulado
N-acil homoserina Vibrio fischeri bioluminiscencia

lactona (AHL) Agrobacterium tumefaciens transferencia de plásmido
O
O Erwinia carotovora Virulencia y producción de
RO
antibióticos.
( )
norte
norte Pseudomonas aeruginosa Virulencia y formación de
H
biopelículas
Burkholderia cepacia Virulencia
furanosilborato Vibrio harveyi Virulencia

(Al-2) HO OH
B
O O
HO OH
O
HO
tiolactona cíclica estafilococo aureus Virulencia

(AIP-II) O
S C
Gly Val Asn Ala Cys Ser ser leu phe
Éster metílico del ácido Ralstonia solanacearum Virulencia

hidroxipalmítico (PAME)
OH
Ácido metildodecenoico Xanthomonas campestris Virulencia

(DSF)
O
OHC
ácido farnesoico Candida albicans Transición dimórfica y

O
virulencia
OHC
Figura 6.29 Moléculas de comunicación célula-célula representativas.

(a) E. scolopes, el calamar bobtail (b) Órgano de luz
Figura 6.30 Escolopes de Euprymna. (a) E. scolopes es un calamar de aguas cálidas que permanece enterrado en la arena durante el día y se alimenta por la noche.
(b) Cuando se alimenta, utiliza su órgano de luz (encajonado, ubicado en su superficie ventral) para camuflarse al proyectar luz hacia abajo. Así, el
el contorno del calamar aparece tan brillante como la superficie del agua para los depredadores potenciales que miran hacia arriba a través de la columna de agua. El órgano de luz es
colonizado por una gran cantidad de Vibrio fischeri, por lo que el autoinductor se acumula hasta una concentración umbral, lo que desencadena la producción de luz.
no es visible, pero las densidades celulares dentro del órgano de luz de los peces marinos determinar el mejor momento para conjugar (transferir genes). oligopéptido
y el calamar alcanza las 1010 células por mililitro. Esto proporciona al animal comunicación por Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis es
con un efecto de linterna mientras los microbios tienen un hábitat seguro y enriquecido con Se utiliza para desencadenar la absorción de ADN del medio ambiente. La tierra
nutrientes (figura 6.30). De hecho, muchos de los procesos regulados por la detección de microbio Streptomyces griseus produce una gamma-butirolactona
quórum implican interacciones huésped-microbio, como conocido como factor A. Esta pequeña molécula regula tanto la diferenciación morfológica
simbiosis y patogenicidad. Sistemas regulatorios globales: Quorum sensing (sección 12.5) como la producción del antibiótico estreptomicina. Los microbios eucarióticos también
dependen de la comunicación célula-célula
Muchas bacterias diferentes usan señales AHL. Además de la bioluminiscencia de V. para coordinar actividades clave dentro de una población. por ejemplo, el
fis cheri , los patógenos oportunistas Burkholde ria cepacia y Pseudomonas aeruginosa usan El hongo patógeno Candida albicans secreta ácido farnesoico para
AHL para regular gobiernan la morfología y la virulencia.
la expresión de factores de virulencia (figura 6.29). Estas bacterias gram negativas causan Estos ejemplos de comunicación célula-célula demuestran
neumonía debilitante en personas que son lo que podría llamarse comportamiento multicelular en el que muchas células individuales se
inmunocomprometidos, y son patógenos importantes en pacientes con fibrosis quística. Los comunican y coordinan sus actividades para actuar como un
fitopatógenos Agrobacterium tumefaciens unidad. Otros ejemplos de comportamiento tan complejo son la formación de patrones en
no infectará una planta huésped y Erwinia carotorvora no producirá antibióticos sin colonias y la formación de cuerpos fructíferos en las mixobacterias.
señalización AHL. Finalmente, B. cepacia, Aislamiento de cultivos puros: Crecimiento microbiano en superficies de agar (sección 5.8); Clase
P. aeruginosa, así como Vibrio cholerae utilizan AHL intercelular Deltaproteobacteria: Orden Myxococcales (sección 22.4)
comunicación para controlar la formación de biopelículas, una estrategia importante para
evadir el sistema inmunológico del huésped.
1. ¿Cómo se relacionan la ley del mínimo de Liebig y la ley de la tolerancia de Shelford?
El descubrimiento de señales moleculares adicionales producidas por una variedad de
¿Por qué los tiempos de generación en la naturaleza suelen ser mucho más largos que en la cultura?
microbios subraya la importancia de la comunicación célula-célula en la regulación de los
2. Describir cómo los microorganismos responden a ambientes oligotróficos.
procesos procarióticos. Por ejemplo, mientras
3. Discuta brevemente el ensayo de microviabilidad Postgate y otras formas en las que
solo se sabe que las bacterias gramnegativas producen AHL, tanto las bacterias
se pueden contar o estudiar microorganismos viables pero no cultivables.
gramnegativas como las grampositivas producen el autoinductor-2 (AI-2).
4. ¿Qué es una biopelícula? ¿Por qué la vida en una biopelícula podría ser ventajosa para los microbios?
Las bacterias grampositivas suelen intercambiar péptidos cortos llamados
5. ¿Qué es la detección de quórum? Describa cómo ocurre y analice brevemente su
oligopéptidos en lugar de moléculas similares a autoinductores. Los ejemplos incluyen
importancia para los microorganismos.
Enterococcus faecalis, cuya señal oligopeptídica se utiliza para
Resumen 147
Resumen
El crecimiento es un aumento en los constituyentes celulares y da como resultado un aumento en el tamaño celular, B. Aunque la mayoría de los microorganismos no crecerán bien con actividades de agua por debajo de 0,98
el número de células o ambos. debido a la plasmólisis y los efectos asociados, los organismos osmotolerantes sobreviven e incluso
prosperan con valores bajos de aw . Los halófilos en realidad requieren altas concentraciones de
6.1 El ciclo celular procariótico cloruro de sodio para crecer (figura 6.18 y tabla 6.3).
C. Cada especie de microorganismo tiene un pH óptimo para el crecimiento y puede clasificarse como
un. La mayoría de los procariotas se reproducen por fisión binaria, un proceso en el que la célula se alarga
acidófilo, neutrófilo o alcalófilo (figura 6.19).
y el cromosoma se replica y se segrega en los polos opuestos de la célula antes de la formación de
un tabique, que divide la célula en dos células descendientes (figuras 6.1 y 6.3). D. Los microorganismos pueden alterar el pH de su entorno, y la mayoría de los cultivos me
dia debe amortiguarse para estabilizar el pH.
B. Dos vías superpuestas funcionan durante el ciclo celular procariótico: la vía para la replicación y mi. Los microorganismos tienen distintos rangos de temperatura para el crecimiento con mínimos, máximos
segregación cromosómica y la vía para la formación del tabique (figura 6.2). Ambos son complejos y y óptimos, las temperaturas cardinales. Estos rangos están determinados por los efectos de la
poco conocidos. La partición de los cromosomas de la progenie puede implicar homólogos de temperatura en las tasas de catálisis, desnaturalización de proteínas y ruptura de la membrana (figura
proteínas citoesqueléticas eucarióticas. C. En células que se dividen rápidamente, el inicio de la 6.20).
síntesis de ADN puede ocurrir antes de que se complete la ronda previa de síntesis. Esto permite que F. Hay cinco clases principales de microorganismos con respecto a las preferencias de temperatura: (1)
las células acorten el tiempo necesario para completar el ciclo celular. psicrófilos, (2) psicrófilos facultativos o psicrotrofos, (3) mesófilos, (4) termófilos y (5) hipertermófilos
(figura 6.21 y tabla 6.3).
gramo. Los microorganismos pueden clasificarse en al menos cinco categorías diferentes según su
6.2 La curva de crecimiento respuesta a la presencia de O2: aerobios obligados, anaerobios facultativos, anaerobios aerotolerantes,
anaerobios estrictos u obligados y microaerófilos (figura 6.22 y tabla 6.3).
un. Cuando los microorganismos se cultivan en un sistema cerrado o cultivo por lotes, la curva de
crecimiento resultante generalmente tiene cuatro fases: la fase de retraso, exponencial o logarítmica,
estacionaria y de muerte (figura 6.6). H. El oxígeno puede volverse tóxico debido a la producción de peróxido de hidrógeno, radical superóxido y
radical hidroxilo. Estos son destruidos por las enzimas superóxido dismutasa, catalasa y peroxidasa.
B. En la fase exponencial, el número de población de células que experimentan fisión binaria se duplica en
un intervalo constante llamado tiempo de duplicación o generación (figura 6.10). La constante de la
tasa de crecimiento media (k) es el recíproco del tiempo de generación. I. La mayoría de los microorganismos de aguas profundas son barotolerantes, pero algunos son barófilos y
requieren alta presión para un crecimiento óptimo.
C. El crecimiento exponencial es un crecimiento equilibrado, los componentes celulares se sintetizan a j. La radiación de alta energía o de longitud de onda corta daña a los organismos de varias formas.
tasas constantes entre sí. Los cambios en las condiciones de cultivo (p. ej., en los experimentos de La radiación ionizante (rayos X y rayos gamma) ioniza moléculas y destruye el ADN y otros
cambio hacia arriba y hacia abajo) conducen a un crecimiento desequilibrado. Una parte de los componentes celulares. La radiación ultravioleta (UV) induce la formación de dímeros de timina y
nutrientes disponibles se utiliza para suministrar energía de mantenimiento. roturas de cadenas en el ADN.
k. La luz visible puede proporcionar energía para la formación de oxígeno singlete reactivo,
6.3 Medición del crecimiento microbiano que destruirá las células.
un. Las poblaciones microbianas se pueden contar directamente con cámaras de recuento, contadores
6.6 Crecimiento microbiano en ambientes naturales
electrónicos o microscopía de fluorescencia. Se pueden emplear técnicas de conteo viables como la
placa esparcida, la placa vertida o el filtro de membrana (figuras 6.12 y 6.14). un. El crecimiento microbiano en entornos naturales se ve profundamente afectado por las limitaciones de
nutrientes y otros factores adversos. Algunos microorganismos pueden ser viables pero no cultivables
B. Los cambios de población también pueden seguirse determinando las variaciones en la masa microbiana y deben estudiarse con técnicas especiales.
mediante la medición del peso seco, la turbidez o la cantidad de un componente celular (figura 6.15). B. Muchos microbios forman biopelículas, agregaciones de microbios que crecen en superficies y se
mantienen unidos por polisacáridos extracelulares (figura 6.28). La vida en una biopelícula tiene
varias ventajas, incluida la protección contra agentes nocivos.
6.4 El cultivo continuo de microorganismos

C. A menudo, las bacterias se comunicarán entre sí de forma dependiente de la densidad y llevarán a cabo
un. Los microorganismos se pueden cultivar en un sistema abierto en el que los nutrientes se
una actividad particular solo cuando se alcance una cierta densidad de población. Este fenómeno se
constantemente proporcionados y desechos eliminados.
denomina detección de quórum (figuras 6.29 y 6.30).
B. Un sistema de cultivo continuo es un sistema abierto que puede mantener una población microbiana en
la fase de registro. Hay dos tipos de estos sistemas: quimiostatos y turbidostatos (figura 6.16).
6.5 La influencia de los factores ambientales en el crecimiento
un. La mayoría de las bacterias, protistas fotosintéticos y hongos tienen paredes celulares rígidas y son
hipertónicos al hábitat debido a solutos como aminoácidos, polioles e iones de potasio. La cantidad
de agua realmente disponible para los microorganismos se expresa en términos de actividad de agua
(aw).
Términos clave
acidófilo 134 unidades formadoras de colonias (UFC) fase de retraso replisoma 120
acilhomoserina lactona (AHL) 144 aerobio 130 solutos compatibles 132 sistema de 123 fase septación 121
139 cultivo continuo 131 citocinesis 121 logarítmica 123 tiempo medio de oxígeno singlete 142
anaerobio aerotolerante 139 tiempo de duplicación 126 fase generación 126 constante de tasa de proteínas de inanición 124
alcalófilo 134 exponencial 123 extremófilos 132 crecimiento media (k) 126 mesófilo 138 fase estacionaria 124
anaerobio 139 anaerobio facultativo 139 microaerófilo 139 anaerobio estricto 139
crecimiento equilibrado Proteína MreB 120 superóxido dismutasa (SOD) 140 radical
123 barofílico 141 neutrófilo 134 aerobio superóxido 140 terminal 120
barotolerante 141 psicrófilos facultativos 138 obligado 139 anaerobio
cultivo por lotes 123 FtsZ proteína 122 obligado 139 ambiente termófilo 138
fisión binaria 119 tiempo de generación oligotrófico 142 origen de replicación turbidostato 132
biopelícula 143 126 crecimiento 119 120 osmotolerante 134 radiación ultravioleta (UV) 142
temperaturas cardinales 136 halófilo 133 peróxido de crecimiento desequilibrado 123 viable
catalasa 140 hidrógeno 140 radical muerte celular programada 125 pero no cultivable (VBNC) 125 actividad del
ciclo celular 119 hidroxilo 140 hipertermófilo psicrófila 137 psicrótrofa 138 agua (aw) 134
quimiostato 131 139 radiación ionizante 141 detección de quórum 144 Anillo Z 122
cenocítico 119
1. Como alternativa a las señales difusibles, sugiera otro mecanismo por el cual 3. Diseñe un experimento para determinar si un cultivo microbiano de crecimiento lento es solo
las bacterias pueden sentir el quórum. saliendo de la fase de latencia o está en fase exponencial.
2. Diseñe un medio de cultivo de “enriquecimiento” y un protocolo para el aislamiento y purificación de 4. ¿Por qué crees que las temperaturas cardinales de algunos microbios cambian dependiendo de
una bacteria del suelo (p. ej., Bacillus subtilis) a partir de una muestra de suelo. otras condiciones ambientales (p. ej., pH)? Sugiera un mecanismo específico subyacente a tal
Tenga en cuenta los posibles contaminantes y competidores. ¿Cómo ajustará las condiciones de cambio.
crecimiento y qué condiciones se ajustarán para mejorar diferencialmente el crecimiento del bacilo?
Aprende más
Atlas, RM y Bartha, R. 1997. Ecología microbiana: fundamentos y aplicaciones Kashefi, K. y Lovley, DR 2003. Ampliación del límite superior de temperatura para la vida.
ciones, 4ª ed. Menlo Park, CA: Benjamín/Cummings. Ciencia 301:934.
Bartlett, DH y Roberts, MF 2000. Estrés osmótico. En Enciclopedia de microbiología, 2ª ed., vol. 3, J. Krieg, NR y Hoffman, PS 1986. Microaerofilia y toxicidad del oxígeno. año
Lederberg, editor en jefe, 502–15. San Diego: Aca demic Press. Rev. Microbiol. 40:107–30.
Krulwich, TA y Guffanti, AA 1989. Bacterias alcalófilas. año Rev. Micro biol. 43:435–63.
Cavicchioli, R. y Thomas, T. 2000. Extremófilos. En Encyclopedia of microbi ology, 2.ª ed., vol. 2, J.
Lederburg, editor en jefe, 317–37. San Diego: Aca demic Press.
Marr, AG 2000. Cinética de crecimiento bacteriano. En Enciclopedia de microbiología, 2ª ed., vol. 2, J.
Lederberg, editor en jefe, 584–89. San Diego: Prensa Académica.
Cotter, PD y Hill, C. 2003. Sobrevivir a la prueba ácida: respuestas de las bacterias grampositivas al pH
Morita, RY 2000. Ambientes de baja temperatura. En Enciclopedia de microbiología, 2ª ed., vol. 3, J.
bajo. Microbiol. mol. Biol. Rev. 67(3):429–53.
Gitai, Z.; Thanbichler, M.; y Shapiro, L. 2005. La dinámica coreografiada de los cromosomas bacterianos.
Nyström, T. 2004. Fisiología de la fase estacionaria. año Rev. Microbiol. 58:161–81.
Tendencias Microbiol. 13(5):221–28.
Visick, KL y Fuqua, C. 2005. Decodificación de la charla microbiana: Comunicación celular-celular
Hall-Stoodley, L.; Costerton, JW; y Stoodley, P. 2004. Biopelículas bacterianas: del entorno natural a las
catión en bacterias. J. Bact. 187(16):5507–19.
enfermedades infecciosas . Nature Rev. Microbiol. 2:95–108.
Weiss, DS 2004. División celular bacteriana y el anillo septal. Molec. Microbiol.
Hoskisson, PA y Hobbs, G. 2005. Cultura continua: ¿regresando?
54(3):588–97.
Microbiología 151:3153–59.

7Control de Microorganismos
por física y
Agentes químicos
Las bacterias quedan atrapadas en la superficie de un filtro de membrana utilizado para eliminar
microorganismos de los fluidos.
AVANCE
• La muerte de la población microbiana es exponencial y la efectividad de organismos no es menos importante: hace posibles las técnicas asépticas
un agente no es fijo sino influenciado por muchos factores ambientales. utilizadas en la investigación microbiológica, la conservación de alimentos,
• Los objetos sólidos se pueden esterilizar mediante agentes físicos como el calor y y el tratamiento y prevención de enfermedades. Las técnicas descritas en este
radiación; Los líquidos y gases se esterilizan por calor, radiación y capítulo también son esenciales para la seguridad personal tanto en
filtración. el laboratorio y el hospital (Técnicas y Aplicaciones 7.1).
• La mayoría de los agentes químicos no destruyen fácilmente las endosporas bacterianas Este capítulo se centra en el control de microorganismos mediante
y por lo tanto no puede esterilizar objetos; se utilizan como desinfectantes, sanitizantes y agentes físicos y químicos, incluidos los agentes quimioterapéuticos,
antisépticos. Los objetos pueden ser esterilizados por gases. que se analizan con más detalle en el capítulo 35. Sin embargo, los microbios
como el óxido de etileno y el peróxido de hidrógeno vaporizado que destruyen pueden ser controlados por muchos mecanismos que no serán
endosporas considerado en este capítulo. Por ejemplo, la manipulación de parámetros
• Los agentes quimioterapéuticos son sustancias químicas que se utilizan para matar o inhibir el ambientales se usa ampliamente en la industria alimentaria para
crecimiento de microorganismos dentro de los tejidos del huésped. conservar los alimentos. El aumento de solutos, como la sal y el azúcar, conserva
carnes, mermeladas y jaleas. Las fermentaciones microbianas de la leche y las
verduras disminuyen el pH de estos alimentos, creando nuevos alimentos como
yogur, queso y encurtidos, todos los cuales tienen una vida útil más larga
crecimiento. En este capítulo abordamos el tema del control que la leche y las verduras de las que están hechos. Calor y
Los capítulos 5 y 6 se ocupan
y destrucción de la nutrición un
de microorganismos, microbiana
tema de yinmensa la generación de condiciones anóxicas son importantes en la conservación de
importancia práctica. Aunque la mayoría de los microorganismos son beneficiosos alimentos enlatados, y la radiación ionizante se utiliza para extender la
y necesario para el bienestar humano, las actividades microbianas pueden tener vida útil de mariscos, frutas y verduras. El uso de estas medidas de control se
consecuencias indeseables, como el deterioro de los alimentos y enfermedades. describe con más detalle en el capítulo 40.
Por lo tanto, es esencial poder matar una amplia variedad de microorganismos o

inhibir su crecimiento para minimizar sus efectos destructivos. El objetivo es
doble: (1) destruir los patógenos y evitar su
transmisión, y (2) para reducir o eliminar los microorganismos responsables de
la contaminación del agua, los alimentos y otras sustancias.
Desde el comienzo de la historia registrada, la gente ha practicado la 7.1 DEFINICIONES DE TÉRMINOS USADOS CON FRECUENCIA
desinfección y la esterilización, a pesar de que la existencia de La terminología es especialmente importante cuando se discute el control de
los microorganismos eran desconocidos. Los egipcios usaban fuego para microorganismos porque palabras como desinfectante y
esterilizar material infeccioso y desinfectantes para embalsamar cuerpos, y Los antisépticos a menudo se usan sin apretar. La situación es aún más confusa
los griegos quemaban azufre para fumigar edificios. La ley mosaica ordenaba a porque un tratamiento en particular puede inhibir el crecimiento o
los hebreos que quemaran cualquier ropa sospechosa de ser matar dependiendo de las condiciones. Los tipos de agentes de control y
contaminado con lepra. Hoy la capacidad de destruir micro sus usos se describen en la figura 7.1.
Todos trabajamos en contra de nuestra propia cura, porque la muerte es la cura de todas las enfermedades.
—Sir Thomas Browne

150 Capítulo 7 Control de Microorganismos por Agentes Físicos y Químicos
7.1 Seguridad en el Laboratorio de Microbiología
La seguridad del personal debe ser una preocupación importante en todos los causas frecuentes de enfermedad es la inhalación de un aerosol infeccioso.
laboratorios de microbiología. Se ha estimado que se han adquirido miles de Un aerosol es una suspensión gaseosa de partículas líquidas o sólidas que
infecciones en el laboratorio, y muchas personas han muerto a causa de tales pueden generarse por accidentes y operaciones de laboratorio, como
infecciones. Las dos enfermedades bacterianas adquiridas en laboratorio más derrames, accidentes de centrífugas, remoción de cierres de tubos de cultivo
comunes son la fiebre tifoidea y la brucelosis. La mayoría de las muertes agitados y inmersión de asas contaminadas en una llama. Los accidentes con
provienen de la fiebre tifoidea (20 muertes) y la fiebre maculosa de las jeringas y agujas hipodérmicas, como la autoinoculación y la pulverización de
Montañas Rocosas (13 muertes). Las infecciones por hongos (histoplasmosis) soluciones desde la aguja, también son comunes. Las hipodérmicas deben
y virus (encefalitis equina venezolana y virus de la hepatitis B de los monos) emplearse sólo cuando sea necesario y luego con cuidado. Los accidentes
tampoco son infrecuentes. La hepatitis es la infección viral adquirida en con pipetas que involucran la boca son otra fuente importante de infección; las
laboratorio notificada con mayor frecuencia, especialmente en personas que pipetas deben llenarse con el uso de ayudas para pipetas y operarse de tal
trabajan en laboratorios clínicos y con sangre. En una encuesta de 426 manera que se evite la formación de aerosoles.
trabajadores de hospitales de EE. UU., el 40 % de los que trabajaban en Las personas deben tener cuidado y sentido común al trabajar con
química clínica y el 21 % en microbiología tenían anticuerpos contra el virus microorganismos. Las operaciones que puedan generar aerosoles infecciosos
de la hepatitis B, lo que indica su exposición previa (aunque solo alrededor del deben realizarse en una cabina de seguridad biológica. Las mesas de trabajo
19 % de estos tenían síntomas de la enfermedad). y las incubadoras deben desinfectarse periódicamente. Los autoclaves deben
Se han realizado esfuerzos para determinar las causas de estas infecciones mantenerse y operarse adecuadamente para asegurar una esterilización
ciones con el fin de mejorar el desarrollo de mejores medidas preventivas. adecuada. El personal del laboratorio debe lavarse bien las manos antes y
Aunque a menudo no es posible determinar la causa directa de la infección, después de terminar el trabajo.
algunos peligros potenciales importantes son claros. uno de los mas
Métodos de control microbiano
Agentes físicos Agentes químicos Métodos de

eliminación mecánica
Calor Radiación gases Líquidos Filtración
Seco Húmedo Esterilización Desinfección Aire Líquidos
Incineración Horno seco (Animar) (Inanimado) Desinfección Esterilización
Esterilización Esterilización Vapor a Agua hirviendo,

presión agua caliente, Quimioterapia Antisepsia Desinfección Esterilización
pasteurización
Esterilización Desinfección
Desinfección: La destrucción o remoción de patógenos vegetativos
pero no de endosporas bacterianas. Por lo general, se usa solo en
objetos inanimados.
ionizante no ionizante
Esterilización: La eliminación o destrucción completa de todos los
Rayos ultravioleta
microorganismos viables. Se utiliza en objetos inanimados.
X, cátodo,
Antisepsia: Sustancias químicas aplicadas a las superficies del
gamma
cuerpo para destruir o inhibir los patógenos vegetativos.
Quimioterapia: Sustancias químicas utilizadas internamente para matar

Esterilización Desinfección
o inhibir el crecimiento de microorganismos dentro de los tejidos del huésped.
Figura 7.1 Métodos de control microbiano.

El patrón de muerte microbiana 151
La capacidad de controlar poblaciones microbianas en objetos inanimados, como en cuyo caso puede denominarse bactericida, fungicida, algicida o
utensilios para comer e instrumentos quirúrgicos, tiene una importancia práctica viricida. Otros químicos no matan, pero previenen el crecimiento.
considerable. A veces es necesario Si se eliminan estos agentes, se reanudará el crecimiento. Sus nombres
eliminar todos los microorganismos de un objeto, mientras que solo se puede requerir terminan en -static [del griego statikos, haciendo que se pare o se detenga]—por
la destrucción parcial de la población microbiana en ejemplo, bacteriostático y fungistático.
otras situaciones. Esterilización [Latín sterilis, incapaz de producir Aunque estos agentes han sido descritos en términos de su
descendencia o estéril] es el proceso por el cual todas las células vivas, efectos sobre los patógenos, se debe tener en cuenta que también matan o inhiben el
esporas y entidades acelulares (p. ej., virus, viroides y priones) crecimiento de los no patógenos. Su capacidad para reducir
son destruidos o removidos de un objeto o hábitat. Un objeto estéril está totalmente la población microbiana total, no solo para afectar los niveles de patógenos,
libre de microorganismos viables, esporas y es muy importante en muchas situaciones.
otros agentes infecciosos. Cuando la esterilización se logra mediante un
agente químico, el químico se llama esterilizante. Por el contrario, la desinfección es
1. Defina los siguientes términos: esterilización, esterilizante, desinfección,
la muerte, inhibición o eliminación de microorganismos.
desinfectante, higienización, antisepsia, antiséptico, quimioterapia, germicida,
que puede causar enfermedad. El objetivo principal es destruir el potencial.
bactericida, bacteriostático.
patógenos, pero la desinfección también reduce sustancialmente el total
población microbiana. Los desinfectantes son agentes, generalmente químicos, que
se utilizan para realizar la desinfección y normalmente se usan solo en
7.2 EL PATRÓN DE MUERTE MICROBIANA
objetos inanimados. Un desinfectante no esteriliza necesariamente un
porque pueden quedar esporas viables y algunos microorganismos. La higienización Una población microbiana no muere instantáneamente cuando se expone a un
está íntimamente relacionada con la desinfección. En la higienización, la población agente letal La muerte de la población, como el crecimiento de la población, es
microbiana se reduce a niveles que son generalmente exponencial o logarítmica, es decir, la población será
considerado seguro por los estándares de salud pública. El objeto inanimado reducido en la misma fracción a intervalos constantes (tabla 7.1). Si
generalmente se limpia y se desinfecta parcialmente. Por ejemplo, se traza el logaritmo del número de población restante
Los desinfectantes se utilizan para limpiar los utensilios para comer en los restaurantes. priones frente al tiempo de exposición del microorganismo al agente, una
(sección 18.10); Viroides y virusoides (sección 18.9) resultará un diagrama de línea recta (figura 7.2). Cuando la población tiene
Con frecuencia también es necesario controlar los microorganismos en o reducido en gran medida, la tasa de muerte puede disminuir debido a la supervivencia
en tejido vivo con agentes químicos. Antisepsia [del griego anti, de una cepa más resistente del microorganismo.
contra, y sepsis, putrefacción] es la prevención de la infección o Para estudiar la efectividad de un agente letal, uno debe ser capaz
sepsis y se logra con antisépticos. estos son quimicos decidir cuándo los microorganismos están muertos, una tarea de ninguna manera tan
agentes aplicados al tejido para prevenir la infección al matar o inhibir fácil como con los macroorganismos. Es casi imposible tomar el pulso de una bacteria.
crecimiento de patógenos; también reducen la población microbiana total. Una bacteria a menudo se define como muerta si no
Debido a que no deben destruir demasiado tejido del huésped, los antisépticos son crecen y se reproducen cuando se inoculan en un medio de cultivo que
generalmente no es tan tóxico como los desinfectantes. La quimioterapia es el uso de normalmente apoyaría su crecimiento. De la misma manera, un inactivo
agentes químicos para matar o inhibir el crecimiento de microorganismos El virus no puede infectar a un huésped adecuado. Sin embargo, esta definición tiene
dentro del tejido huésped. fallas. Se ha demostrado que cuando las bacterias se exponen a
Se puede emplear un sufijo para indicar el tipo de antimicrobiano ciertas condiciones, pueden permanecer vivos, pero son temporalmente incapaces de
agente. Las sustancias que matan organismos a menudo tienen el sufijo -cide reproducirse. Cuando se encuentran en este estado, se denominan viables.
[Latín cida, matar]; un germicida mata los patógenos (y muchos no patógenos) pero pero no cultivable (VBNC) (ver figura 6.8). En pruebas convencionales
no necesariamente las endosporas. Un desinfectante o un tiséptico pueden ser para demostrar la muerte por un agente antimicrobiano, bacterias VBNC
particularmente efectivos contra un grupo específico, en se pensaría que estaba muerto. Este es un problema grave porque
Tabla 7.1 Un experimento teórico de eliminación de calor microbiano
Número microbiano Microorganismos microorganismos

Minuto al comienzo de Minutea eliminados en 1 minuto (90 % del total)a al final de 1 minuto Log10 de Supervivientes
1 106 9 105 105 5

2 105 9 104 104 4
3 104 9 103 103 3
4 103 9 102 102 2
5 102 9 101 10 1
6 101 9 10
7 1 0.9 0.1 1
a
Suponga que la muestra inicial contiene 106 microorganismos vegetativos por ml y que el 90% de los organismos mueren durante cada minuto de exposición. La temperatura es de 121°C.
6 otros. Por ejemplo, Mycobacterium tuberculosis, que causa la tuberculosis, es mucho más
resistente a los agentes antimicrobianos que la mayoría de las demás bacterias.
5 3. Concentración o intensidad de un agente antimicrobiano. A menudo, pero no siempre, cuanto
más concentrado es un agente químico o más intenso un agente físico, más rápidamente se
4 destruyen los microorganismos. Sin embargo, la efectividad del agente por lo general no está
directamente relacionada con la concentración o la intensidad. En un rango corto, un pequeño
aumento en la concentración conduce a un aumento exponencial en la efectividad; más allá

3 de cierto punto, es posible que los aumentos no aumenten mucho la tasa de mortalidad. A
veces, un agente es más efectivo en concentraciones más bajas. Por ejemplo, el etanol al 70
2 % es más eficaz que el etanol al 95 % porque su actividad se ve reforzada por la presencia de
agua.
1
4. Duración de la exposición. Cuanto más tiempo está expuesta una población a un agente
0 microbicida, más organismos mueren (figura 7.2).
D121 Para lograr la esterilización, se debe utilizar una duración de exposición suficiente para
reducir la probabilidad de supervivencia a 106 o menos.

–1
5. Temperatura. Un aumento en la temperatura a la que actúa un químico a menudo mejora su
01234567
actividad. Con frecuencia, se puede usar una concentración más baja de desinfectante o
Minutos de exposición agente esterilizante a una temperatura más alta.
Figura 7.2 El patrón de muerte microbiana. Un gráfico exponencial 6. Entorno local. La población a controlar no está aislada sino rodeada de factores ambientales
de los supervivientes frente a los minutos de exposición al calor a que pueden ofrecer protección o ayudar a su destrucción. Por ejemplo, debido a que el calor
121 °C. En este ejemplo, el valor D121 es 1 minuto. Los datos son mata más fácilmente a un pH ácido, los alimentos y bebidas ácidos, como las frutas y los
de la tabla 7.1. tomates, son más fáciles de pasteurizar que los alimentos con un pH más alto, como la leche.
Un segundo factor ambiental importante es la materia orgánica, que puede proteger a los
microorganismos contra el calor y los desinfectantes químicos. Las biopelículas son un buen
después de un período de recuperación, la bacteria puede recuperar su
ejemplo. La materia orgánica en una biopelícula protege a los microorganismos de la
capacidad de reproducirse y causar infección. La curva de crecimiento:
biopelícula, y la biopelícula y sus microbios a menudo son difíciles de eliminar. Además, se ha
senectud y muerte (sección 6.2)
documentado claramente que las bacterias en las biopelículas se alteran fisiológicamente y
esto las hace menos susceptibles a muchos agentes antimicrobianos. Debido al impacto de la
1. Describa el patrón de muerte microbiana y cómo se decide si los microorganismos están
materia orgánica, puede ser necesario limpiar los objetos, especialmente jeringas y equipos
realmente muertos.
médicos o dentales, antes de desinfectarlos o esterilizarlos. Se debe tener el mismo cuidado
cuando se destruyen patógenos durante la preparación del agua potable. Cuando el suministro
de agua de una ciudad tiene un alto contenido de materia orgánica, se toman medidas para
7.3 CONDICIONES QUE INFLUYEN EN LA disminuir la materia orgánica o agregar más cloro. Crecimiento microbiano en entornos
EFICACIA DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS naturales: biopelículas (sección 6.6)
La destrucción de microorganismos y la inhibición del crecimiento microbiano no son cuestiones
sencillas porque la eficacia de un agente antimicrobiano (un agente que mata a los microorganismos
o inhibe su crecimiento) se ve afectada por al menos seis factores.
1. Tamaño de la población. Debido a que una fracción igual de una población microbiana muere
durante cada intervalo, una población más grande requiere más tiempo para morir que una
más pequeña. Esto se puede ver en el experimento teórico de destrucción por calor que se
1. Explique brevemente cómo varía la eficacia de los agentes antimicrobianos según el
muestra en la tabla 7.1 y la figura 7.2. El mismo principio se aplica a los agentes químicos
tamaño de la población, la composición de la población, la concentración o intensidad
antimicrobianos.
del agente, la duración del tratamiento, la temperatura y las condiciones ambientales locales.
2. ¿Cómo afecta el hecho de estar en una biopelícula a la susceptibilidad de un organismo a los antimicrobianos?
2. Composición de la población. La eficacia de un agente varía mucho con la naturaleza de los
agentes biológicos?
organismos que se tratan porque los microorganismos difieren notablemente en susceptibilidad.
3. Suponga que se ha asignado a los conserjes del hospital la tarea de limpiar todas las
Las endosporas bacterianas son mucho más resistentes a la mayoría de los agentes
duchas de las habitaciones de los pacientes para evitar la propagación de enfermedades
antimicrobianos que las formas vegetativas, y las células más jóvenes suelen destruirse más
infecciosas. ¿Qué dos factores tendrían el mayor impacto en la efectividad del
fácilmente que los organismos maduros. Algunas especies son capaces de soportar
desinfectante que usan los custodios? Explique cuál sería ese impacto.
condiciones adversas mejor que
El uso de métodos físicos en el control 153
La esterilización en autoclave debe llevarse a cabo correctamente o el procesado

7.4 EL USO DE MÉTODOS FÍSICOS
los materiales no serán estériles. Si no se ha purgado todo el aire de
EN CONTROL
la cámara, no alcanzará los 121°C aunque puede llegar a un
El calor y otros agentes físicos se utilizan normalmente para controlar el crecimiento presión de 15 libras. La cámara no debe estar demasiado llena.
microbiano y esterilizar objetos, como se puede ver en el funcionamiento continuo del herméticamente porque el vapor necesita circular libremente y hacer contacto
autoclave en todos los estudios de microbiología. todo en el autoclave. Las endosporas bacterianas serán eliminadas.
laboratorio. Los cuatro agentes físicos más empleados sólo si se mantienen a 121°C durante 10 a 12 minutos. Cuando un gran
son el calor, las bajas temperaturas, la filtración y la radiación. volumen de líquido debe ser esterilizado, una esterilización prolongada
se necesita tiempo porque toma más tiempo para el centro del líquido
alcanzar los 121°C; 5 litros de líquido pueden requerir unos 70 minutos.
Calor
En vista de estas posibles dificultades, un indicador biológico a menudo se esteriliza
El fuego y el agua hirviendo se han utilizado para esterilizar y desinfectar desde la
en autoclave junto con otro material. Este indicador comúnmente consiste en un tubo
época de los griegos, y la calefacción sigue siendo una de las
de cultivo que contiene una ampolla estéril de
formas más populares de destruir microorganismos. Ya sea húmedo o
medio y una tira de papel cubierta con esporas de Geobacillus
se puede aplicar calor seco.
estearotermófilo. Después del autoclave, la ampolla se esteriliza asépticamente.
El calor húmedo mata fácilmente virus, bacterias y hongos (tabla 7.2).
roto y el cultivo incubado durante varios días. Si la bacteria de prueba no crece en el
Se cree que el calor húmedo mata al degradar los ácidos nucleicos y al desnaturalizar
medio, la esterilización ha terminado.
las enzimas y otras proteínas esenciales. También puede interrumpir
sido exitoso. A veces, ya sea una cinta especial que detalla el
membranas celulares. La exposición a agua hirviendo durante 10 minutos es suficiente
palabra estéril o una tira indicadora de papel que cambia de color
para destruir las células vegetativas y las esporas eucarióticas. Desafortunadamente,
suficiente calentamiento se esteriliza en autoclave con una carga de material. Si el
la temperatura del agua hirviendo (100°C o 212°F en el mar
aparece la palabra en la cinta o si el color cambia después de la esterilización en
nivel) no es lo suficientemente alto como para destruir las endosporas bacterianas, que
autoclave, se supone que el material está estéril. Estos enfoques son
puede sobrevivir horas de ebullición. Por lo tanto, la ebullición se puede utilizar para convenientes y ahorran tiempo, pero no son tan confiables como el uso de endosporas
desinfección de agua potable y objetos no dañados por el agua,
bacterianas.
pero hervir no esteriliza.
Muchas sustancias, como la leche, se tratan con calentamiento controlado a
Para destruir las endosporas bacterianas, la esterilización por calor húmedo
temperaturas muy por debajo del punto de ebullición, un proceso conocido como
debe realizarse a temperaturas superiores a 100°C, y esto requiere el uso de vapor
pasteurización en honor a su creador, Louis Pasteur. En la década de 1860 el
saturado a presión. Esterilización por vapor
La industria vitivinícola francesa se vio afectada por el problema del deterioro del vino,
se lleva a cabo con un autoclave (figura 7.3), un dispositivo algo
lo que dificultaba el almacenamiento y el envío del vino. Pasteur examinado
como una olla a presión elegante. El desarrollo del autoclave por
vino estropeado bajo el microscopio y microorganismos detectados
Chamberland en 1884 estimuló tremendamente el crecimiento de la microbiología. El
que se parecía a la bacteria responsable del ácido láctico y acético
agua se hierve para producir vapor, que se libera
fermentaciones ácidas. Luego descubrió que un breve calentamiento a 55 a
a través de la camisa y dentro de la cámara del autoclave (figura 7.3b).
60°C destruiría estos microorganismos y preservaría el vino para
El aire inicialmente presente en la cámara se expulsa hasta que la cámara se llena
periodos largos. En 1886 los químicos alemanes VH y F. Soxhlet
de vapor saturado y las salidas se cierran. El vapor caliente y saturado sigue entrando
adaptó la técnica para conservar la leche y reducir las enfermedades transmisibles de
hasta que la cámara alcanza el
la leche. La pasteurización de la leche se introdujo en el
temperatura y presión deseadas, generalmente 121°C y 15 libras de
Estados Unidos en 1889. La leche, la cerveza y muchas otras bebidas son
presión. A esta temperatura, el vapor saturado destruye todas las células vegetativas
ahora pasteurizado. La pasteurización no esteriliza una bebida, pero
y endosporas en un pequeño volumen de líquido dentro de 10 a
mata cualquier patógeno presente y reduce drásticamente el deterioro al
12 minutos El tratamiento se continúa durante al menos 15 minutos para proporcionar
reduciendo el nivel de microorganismos de deterioro no patógenos.
un margen de seguridad. Por supuesto, los recipientes más grandes de líquido como
Muchos objetos se esterilizan mejor en ausencia de agua por
ya que los matraces y las bombonas requieren tiempos de tratamiento mucho más prolongados.
esterilización por calor seco. Algunos artículos se esterilizan por incineración.
Por ejemplo, los asas de inoculación, que se utilizan habitualmente en la
laboratorio, se puede esterilizar en un pequeño incinerador de sobremesa
Tabla 7.2 Condiciones aproximadas para matar por calor (figura 7.4). Otros artículos se esterilizan en un horno a 160 a 170°C
húmedo durante 2 a 3 horas. Aparentemente, la muerte microbiana resulta de la oxidación de
los constituyentes celulares y la desnaturalización de las proteínas. Aire seco
Células vegetativas del organismo esporas
el calor es menos eficaz que el calor húmedo. Las esporas de Clostridium
levaduras 5 minutos a 50–60 °C 5 minutos a 70–80 °C botulinum, la causa del botulismo, se eliminan en 5 minutos a 121°C
Moldes 30 minutos a 62°C 30 minutos a 80°C
por calor húmedo pero sólo después de 2 horas a 160°C con calor seco. Sin embargo,
Bacteriaa 10 minutos a 60–70 °C 2 a más de 800 minutos a 100
°C el calor seco tiene algunas ventajas definitivas. no se corroe
0,5–12 minutos a 121 °C cristalería e instrumentos de metal como lo hace el calor húmedo, y puede ser
virus 30 minutos a 60°C Se utiliza para esterilizar polvos, aceites y artículos similares. La mayoría de los
laboratorios esterilizan el material de vidrio y las pipetas con calor seco. A pesar de estos
a
Condiciones para las bacterias mesófilas. ventajas, la esterilización por calor seco es lenta y no es adecuada para materiales
sensibles al calor como muchos artículos de plástico y caucho.
Regulador de presión
Grabadora
Válvula de seguridad
Escape a la atmosfera
Vapor de la
camisa a la cámara o
escape de la cámara
Mango de
control
Vapor a Vapor de la
chaqueta camisa a la
cámara
Colador
Retorno
de condensado
de la camisa
Junta
de la puerta Trampa
Descarga chaqueta de vapor

Suministro de vapor
Válvula de
suministro
de vapor
Trampa
de vapor
Bombilla sensora Condensado a

desecho
de temperatura
(a) (B)
Figura 7.3 Autoclave o esterilizador a vapor. (a) Un autoclave o esterilizador moderno, controlado automáticamente. (b) Sección transversal
longitudinal de un autoclave típico que muestra algunas de sus partes y la ruta del vapor. De John J. Perkins, Principios y métodos de
esterilización en ciencias de la salud, 2ª edición, 1969. Cortesía de Charles C. Thomas, editor, Springfield, Illinois.
Debido a que el calor es tan útil en el control de microorganismos, es aceptación. El tiempo de reducción decimal es el tiempo requerido para
esencial tener una medida precisa de la eficiencia de destrucción por calor. matar el 90% de los microorganismos o esporas en una muestra a una
Inicialmente, la eficacia se expresó en términos de punto de muerte temperatura específica. En un gráfico semilogarítmico de la población
térmica (TDP), la temperatura más baja a la que se elimina una suspensión restante frente al tiempo de calentamiento, el valor D es el tiempo requerido
microbiana en 10 minutos. Debido a que TDP implica que cierta temperatura para que la línea baje un ciclo logarítmico o diez veces (figura 7.2). El valor
es inmediatamente letal a pesar de las condiciones, ahora se usa más D suele escribirse con un subíndice que indica la temperatura a la que se
comúnmente el tiempo de muerte térmica (TDT) . Este es el tiempo más aplica. Los valores D se utilizan para estimar la resistencia relativa de un
corto necesario para matar todos los organismos en una suspensión microorganismo a diferentes temperaturas mediante el cálculo del valor z .
microbiana a una temperatura específica y en condiciones definidas. El valor z es el aumento de temperatura necesario para reducir D a 1/10
Sin embargo, dicha destrucción es logarítmica y, en teoría, no es posible de su valor o para reducirlo en un ciclo logarítmico cuando se grafica el
destruir completamente los microorganismos en una muestra, incluso con registro D frente a la temperatura (figura 7.5). Otra forma de describir la
un calentamiento prolongado. Por lo tanto, una figura aún más precisa, el eficacia del calentamiento es con el valor F. El valor F es el tiempo en
tiempo de reducción decimal (D) o el valor D ha ganado mucho minutos a una temperatura específica.
temperatura (normalmente 250 °F o 121,1 °C) necesaria para matar a una población
de células o esporas.
La industria de procesamiento de alimentos hace un uso extensivo de D y z

valores. Después de enlatar un alimento, debe calentarse para eliminar el riesgo de botulismo
derivado de Clostridium botulinum.
esporas El tratamiento térmico se lleva a cabo el tiempo suficiente para reducir una población
de 1012 esporas de C. botulinum a 100 (una espora); por lo tanto allí
hay una probabilidad muy pequeña de que cualquier lata tenga una espora viable. la D
el valor de estas esporas a 121°C es de 0,204 minutos. Por lo tanto
tomaría 12D o 2.5 minutos para reducir 1012 esporas a una espora
por calentamiento a 121°C. El valor z para las esporas de C. botulinum es
10 °C, es decir, se necesita un cambio de temperatura de 10 °C para alterar la

valor D diez veces. Si las latas fueran a ser procesadas a 111°C en lugar
que a 121°C, el valor D aumentaría diez veces a 2,04 minutos y el valor 12D a 24,5 minutos.
valores D y valores z para
algunos patógenos comunes transmitidos por los alimentos se dan en la tabla 7.3. Tres
Los valores D se incluyen para Staphylococcus aureus para ilustrar la
variación de la tasa de mortalidad con el medio ambiente y el efecto protector
de materia orgánica. Control del deterioro de los alimentos (sección 40.3)
Figura 7.4 Incineración por Calor Seco. Incineradores de mesa
se utilizan habitualmente para esterilizar asas de inoculación utilizadas en Temperaturas bajas

laboratorios de microbiología. Aunque nuestro énfasis está en la destrucción de microorganismos,
a menudo la técnica de control más conveniente es inhibir su
crecimiento y reproducción mediante el uso de congelación o refrigeración. Este enfoque es
particularmente importante en la microbiología de los alimentos. Congelar artículos a 20°C o
menos detiene el crecimiento microbiano

por la baja temperatura y la ausencia de agua líquida.
Algunos microorganismos serán asesinados por la ruptura de cristales de hielo de
113 membranas celulares, pero la congelación no destruye todos los contaminantes

100
microbios De hecho, la congelación es un método muy bueno para la conservación a largo plazo.
almacenamiento de muestras microbianas cuando se lleva a cabo correctamente, y
muchos laboratorios tienen un congelador de baja temperatura para cultivo

31 almacenamiento a 30 o 70°C. Debido a que los alimentos congelados pueden contener
muchos microorganismos, debe descongelarse en un refrigerador y

10 Consumido rápidamente para evitar el deterioro y los patógenos.
8 crecimiento. La influencia de los factores ambientales en el crecimiento: Temperatura
(sección 6.5)
La refrigeración retarda en gran medida el crecimiento y la reproducción microbianos,
2.3 pero no los detiene por completo. Afortunadamente, la mayoría de los patógenos
son mesófilos y no crecen bien a temperaturas alrededor de 4°C.

1 z = 10,5 1.0 Los artículos refrigerados pueden estropearse por el crecimiento de psicrófilas y
0,65 microorganismos psicrotróficos, particularmente si hay agua presente.
Por lo tanto, la refrigeración es una buena técnica solo para el almacenamiento a corto plazo
de alimentos y otros artículos.

95 100 105 110 115 120 125 130
1. Describe cómo funciona un autoclave. ¿Qué condiciones se requieren para la esterilización
Temperatura (ºC)
por calor húmedo? ¿Cuáles son las tres cosas que se deben hacer cuando se opera un
autoclave para ayudar a asegurar el éxito?

Figura 7.5 Cálculo del valor z. El valor z utilizado en el cálculo de las relaciones
2. En el pasado, la leche en mal estado era responsable de una proporción significativa de
tiempo-temperatura para la supervivencia de un microorganismo de prueba,
muertes. ¿Por qué la leche no tratada se echa a perder fácilmente? ¿Por qué hervir la leche
basado en las respuestas del valor D a varias temperaturas.
durante períodos prolongados no es un método deseable para controlar el deterioro y la propagación de
El valor z es el aumento de temperatura necesario para reducir la
patógenos transmitidos por la leche?
tiempo de reducción decimal (D) al 10% del valor original. Para esto
3. Defina el punto de muerte térmica (TDP), el tiempo de muerte térmica (TDT), el tiempo de
muestra homogénea de un microorganismo de prueba el valor z es 10,5°.
reducción decimal (D) o el valor D, el valor z y el valor F.
Los valores D se trazan en una escala logarítmica.
Cuadro 7.3 Valores D y valores z para algunos patógenos transmitidos por los alimentos
Organismo Sustrato Valor D (°C) en minutos Valor z (°C)
Clostridium botulinum Tampón de fosfato D121 0,204 10
Clostridium perfringens Medios culturales D90 3–5 6–8

(cepa resistente al calor)
Salmonella spp. Pollo al rey Pollo D60 0,39–0,40 4.9–5.1
estafilococo aureus al rey Relleno de D60 5,17–5,37 5.2–5.8
pavo 0,5% NaCl D60 15,4 D60 2,0– 6.8
2,5 5.6
Valores tomados de FL Bryan, 1979, “Processes That Affect Survival and Growth of Microorganisms,” Time-Temperature Control of Foodborne Pathogens, Atlanta: Centers for Disease Control and Prevention,
Atlanta, Georgia.
4. ¿Cómo se puede usar el valor D para estimar el tiempo requerido para la esterilización? separa las partículas de arena grandes de las pequeñas (figura 7.7). Estas
Suponga que desea eliminar el riesgo de salmonelosis calentando Los filtros se utilizan para esterilizar productos farmacéuticos, soluciones oftálmicas,
medios de cultivo, aceites, antibióticos y otras soluciones sensibles al calor.
su comida (D60 0,4 minutos, valor z 5,0). Calcule el valor 12D en
60°C. ¿Cuánto tiempo tomaría lograr los mismos resultados calentando a 50, El aire también se puede esterilizar por filtración. Dos ejemplos comunes
55 y 65°C? son mascarillas quirúrgicas y tapones de algodón en recipientes de cultivo que dejan entrar el aire
5. En la tabla 7.3, ¿por qué el valor D es tan diferente para las tres condiciones en las que pero mantener los microorganismos fuera. Otros ejemplos importantes son las cabinas de
¿Se puede encontrar S. aureus?

seguridad biológica de flujo laminar, que emplean
6. ¿Cómo se pueden usar las bajas temperaturas para controlar los microorganismos? Comparar filtros de partículas de aire (HEPA) (un tipo de filtro de profundidad) para eliminar
el objetivo de control para usar calor con el de usar bajas temperaturas. 99,97% de partículas de 0,3 m. Las cabinas o campanas de seguridad biológica de flujo
laminar fuerzan el aire a través de los filtros HEPA y luego proyectan un flujo vertical.
cortina de aire estéril a través de la abertura del gabinete. Esto protege un
trabajador de los microorganismos que se manipulan dentro del gabinete y
Filtración
evita la contaminación de la habitación (figura 7.8). una persona usa
La filtración es una excelente manera de reducir la población microbiana
estos gabinetes cuando se trabaja con agentes peligrosos como My cobacterium tuberculosis
en soluciones de material sensible al calor, y a veces puede ser
y virus tumorales. También se emplean en laboratorios de investigación e industrias, como
Se utiliza para esterilizar soluciones. En lugar de destruir directamente los microorganismos
la farmacéutica.
contaminantes, el filtro simplemente los elimina.
industria, cuando se necesita una superficie de trabajo estéril para realizar
Hay dos tipos de filtros. Los filtros de profundidad consisten en fibras o
ensayos, preparación de medios, examen de cultivos de tejidos y similares.
materiales granulares que se han unido en una capa gruesa rellena
con canales torcidos de pequeño diámetro. La solución que contiene
microorganismos es succionado a través de esta capa bajo vacío, y Radiación
las células microbianas se eliminan mediante cribado físico o atrapamiento En el capítulo 6, se discutieron los tipos de radiación y las formas en que la radiación daña
y también por adsorción a la superficie del material filtrante. Profundidad o destruye los microorganismos. Los microbiólogos aprovechan los efectos de los rayos
los filtros están hechos de tierra de diatomeas (filtros Berkefield), ultravioleta y
porcelana sin vidriar (filtros de Chamberlain), asbesto u otros materiales similares. radiación ionizante para esterilizar o desinfectar objetos.
Radiación ultravioleta (UV) alrededor de 260 nm (ver figura 6.25)
Los filtros de membrana han reemplazado a los filtros de profundidad para muchos es bastante letal pero no penetra el vidrio, las películas de suciedad, el agua y
propósitos. Estos filtros circulares son membranas porosas, un poco más de 0,1 otras sustancias con mucha eficacia. Debido a esta desventaja,
mm de espesor, hechos de acetato de celulosa, nitrato de celulosa, policarbonato, fluoruro La radiación ultravioleta se usa como agente esterilizante solo en algunos casos específicos.
de polivinilideno u otros materiales sintéticos. Aunque situaciones A veces se colocan lámparas UV en los techos de
una amplia variedad de tamaños de poros están disponibles, membranas con poros habitaciones o en cabinas de seguridad biológica para esterilizar el aire y cualquier
se utilizan alrededor de 0,2 µm de diámetro para eliminar la mayoría de las células vegetativas, superficies expuestas. Debido a que la radiación ultravioleta quema la piel y daña los ojos,
pero no virus, de soluciones que varían en volumen de 1 ml a las personas que trabajan en dichas áreas deben asegurarse de que la radiación ultravioleta
muchos litros. Las membranas se mantienen en soportes especiales (figura 7.6) las lámparas están apagadas cuando las áreas están en uso. Las unidades UV comerciales son
y suelen estar precedidos por filtros de profundidad hechos de fibra de vidrio para eliminar disponible para el tratamiento del agua (figura 7.9). patógenos y otros
partículas más grandes que podrían obstruir el filtro de membrana. La solución se jala o los microorganismos se destruyen cuando se pasa una fina capa de agua
fuerza a través del filtro con una aspiradora o con bajo las lámparas.
presión de una jeringa, bomba peristáltica o botella de gas nitrógeno, La radiación ionizante es un excelente agente esterilizante y penetra profundamente
y recogidos en recipientes previamente esterilizados. Filtros de membrana en los objetos. Destruirá las endosporas bacterianas y
eliminar los microorganismos al filtrarlos como si fuera un tamiz células vegetativas, tanto procarióticas como eucarióticas; sin embargo, ion
3
1
Líquido
Filtrar
Poro
(a)
Conector de
Respiradero
manguera escalonada de 1/4"
Filtros Durapore
Soporte de filtro
campana de llenado Filtrar
gorra de campana
Fluido
Succión
esterilizado
bomba de vacío
Sección transversal
Unidad de filtrado Millipak-40
(C) (B)
Figura 7.6 Esterilización del filtro de membrana. El líquido a esterilizar se bombea a través de un filtro de membrana hacia un recipiente estéril. (a) Una
configuración de filtrado completa. La solución no estéril está en el matraz Erlenmeyer, 1. Una bomba peristáltica, 2, fuerza la solución a través de la unidad de
filtro de membrana, 3. (b) Representación esquemática de una configuración de filtración de membrana que usa una bomba de vacío para forzar el líquido a través
del filtro. El recuadro muestra una sección transversal del filtro y sus poros, que son demasiado pequeños para que pasen los microbios. (c) Sección transversal
de una unidad de filtración de membrana. Se utilizan varias membranas para aumentar su capacidad.
La radiación ultravioleta no siempre es eficaz contra los virus. La radiación O157:H7, Staphylococcus aureus y Campylobacter jejuni.
gamma de una fuente de cobalto 60 se utiliza en la esterilización en frío de Sobre la base de los resultados de numerosos estudios, tanto la Administración
antibióticos, hormonas, suturas y suministros de plástico desechables, como de Alimentos y Medicamentos como la Organización Mundial de la Salud han
jeringas. La radiación gamma también se ha utilizado para esterilizar y aprobado la irradiación de alimentos y la han declarado segura. Actualmente, la
“pasteurizar” carne y otros alimentos (figura 7.10). La irradiación puede eliminar irradiación se utiliza para tratar aves, carne de res, cerdo, ternera, cordero,
la amenaza de patógenos como Escherichia coli frutas, verduras y especias.
poros poros
B. megaterio E. faecalis
(a) B. megaterio b) E. faecalis
Figura 7.7 Tipos de filtros de membrana. (a) Bacillus megaterium en una membrana de nailon Ultipor con una tasa de eliminación de bacterias de 0,2 m
(2000). (b) Enterococcus faecalis descansando sobre un filtro de membrana de policarbonato con poros de 0,4 m (5900).
Visor de vidrio
de seguridad
Filtro HEPA de
escape
Motor/soplador
Suministro de filtro
HEPA
luz ultravioleta
Soporte de
Barrera de aire de
soporte
alta velocidad
opcional
(a) (B)
Figura 7.8 Cabina de seguridad biológica de flujo laminar. (a) Un técnico pipeteando material potencialmente peligroso en un gabinete de seguridad. (b)
Un diagrama esquemático que muestra el patrón de flujo de aire.
oratoria y seguridad hospitalaria (Técnicas y Aplicaciones 7.2).

1. ¿Qué son los filtros de profundidad y los filtros de membrana y cómo se utilizan para
Los productos químicos también se emplean para prevenir el crecimiento microbiano en los
esterilizar líquidos? Describir el funcionamiento de una cabina de seguridad biológica.
alimentos y ciertos productos químicos se utilizan para tratar enfermedades infecciosas.
2. Dar las ventajas y desventajas de la luz ultravioleta y la radiación ionizante como
Técnicas y Aplicaciones 35.1: Prácticas microbiológicas estándar
agentes esterilizantes. Proporcione algunos ejemplos de cómo se utiliza cada uno
Muchos productos químicos diferentes están disponibles para su uso como desinfectantes,
para este propósito.
y cada uno tiene sus propias ventajas y desventajas. Al seleccionar un agente, es importante
tener en cuenta las características de un desinfectante deseable. Idealmente, el desinfectante
debe ser eficaz contra una amplia variedad de agentes infecciosos (bacterias grampositivas y
7.5 EL USO DE AGENTES QUÍMICOS EN EL CONTROL
gramnegativas, bacterias acidorresistentes, endosporas bacterianas, hongos y virus) en bajas
Los agentes físicos se utilizan generalmente para esterilizar objetos. Los productos químicos, por concentraciones y en presencia de materia orgánica. Aunque el producto químico debe ser tóxico
otro lado, se emplean con mayor frecuencia en la desinfección y la antisepsia. El uso adecuado para las infecciones
de los agentes químicos es fundamental para el laboratorio.
El uso de agentes químicos en el control 159
agentes tóxicos, no debe ser tóxico para las personas ni corrosivo para los materiales bombea lentamente el antiséptico fuera de la celda. Ahora hay evidencia
comunes. En la práctica, este equilibrio entre eficacia y que el uso extensivo de triclosán también aumenta la frecuencia de la resistencia
La baja toxicidad para los animales es difícil de lograr. Algunos productos químicos son bacteriana a los antibióticos. Por lo tanto, el uso excesivo de antisépticos puede tener
utilizados a pesar de su baja efectividad debido a que son relativamente consecuencias nocivas no deseadas. Farmacorresistencia (sección 34.6)
no tóxico. El desinfectante ideal debe ser estable durante el almacenamiento, A continuación se analizan las propiedades y usos de varios grupos de
inodoro o con olor agradable, soluble en agua y lípidos para desinfectantes y antisépticos comunes. Quimioterapéutico
penetración en los microorganismos, tienen una baja tensión superficial por lo que Los agentes se presentan brevemente al final de esta sección. muchos de
que puede entrar en las grietas de las superficies y ser relativamente económico. las características de los desinfectantes y antisépticos se resumen en las tablas 7.4 y
Un problema potencialmente grave es el uso excesivo de antisépticos. 7.5. Las estructuras de algunos agentes comunes son
Por ejemplo, el agente antibacteriano triclosán se encuentra en productos dado en la figura 7.11.
como desodorantes, enjuagues bucales, jabones, tablas de cortar y artículos para bebés
juguetes Lamentablemente, la aparición de bacterias resistentes al triclosán
se ha convertido en un problema. Por ejemplo, Pseudomonas aeruginosa ac
fenólicos
El fenol fue el primer antiséptico y desinfectante ampliamente utilizado. En
1867 Joseph Lister lo empleó para reducir el riesgo de infección durante la cirugía. Hoy
fenol y fenoles (derivados de fenol)
como cresoles, xilenoles y ortofenilfenol se utilizan como desinfectantes en laboratorios
y hospitales. El desinfectante comercial Lysol está hecho de una mezcla de fenoles.
Los fenólicos actúan por
desnaturalizando proteínas y alterando las membranas celulares. Ellos tienen
algunas ventajas reales como desinfectantes: los fenoles son tuberculocidas, efectivos
en presencia de material orgánico y permanecen activos en las superficies mucho
tiempo después de la aplicación. Sin embargo, tienen un
olor desagradable y puede causar irritación de la piel.
El hexaclorofeno (figura 7.11) ha sido uno de los antisépticos más populares
porque una vez aplicado persiste en la piel y
reduce las bacterias de la piel durante largos períodos. Sin embargo, puede causar
daño cerebral y ahora se usa en las salas de recién nacidos de los hospitales sólo en
respuesta a un brote de estafilococos.
Figura 7.9 Sistema de tratamiento ultravioleta (UV) para la desinfección del

alcoholes
agua. El agua fluye a través de bastidores de lámparas UV y se expone a una Los alcoholes se encuentran entre los desinfectantes y antisépticos más utilizados. Son
radiación UV de 254 nm. Este sistema tiene una capacidad de bactericidas y fungicidas pero no esporicidas; algunos
varios millones de galones por día y se puede utilizar como una alternativa a Los virus que contienen lípidos también se destruyen. Los dos más populares
cloración. Los germicidas de alcohol son el etanol y el isopropanol, generalmente utilizados en
sala de radiación Figura 7.10 Esterilización con radiación ionizante. (a) Una
Cámara con escudo de radiación

máquina de irradiación que utiliza radiación
cobalto 60 como fuente de radiación gamma para esterilizar frutas,
Sistema de transporte con paletas
de materiales esterilizados vegetales, carnes, pescados y especias. (b) El símbolo universal
para la irradiación que debe colocarse en todos los
materiales
Radioactivo
fuente
(a) (B)
7.2 Precauciones Universales para Laboratorios de Microbiología
Se debe considerar la sangre y otros fluidos corporales de todos los pacientes. que no hay alternativa, y se deben seguir las recomendaciones para la prevención
infeccioso. de lesiones con agujas descritas en las precauciones universales. Técnicas y
Aplicaciones 35.1: Estándar
1. Todas las muestras de sangre y fluidos corporales deben colocarse en un
practicas microbiologicas
recipiente bien construido con una tapa segura para evitar fugas durante el proceso.
6. Las superficies de trabajo del laboratorio deben descontaminarse con un
transporte. Se debe tener cuidado al recolectar cada espécimen.
germicida químico apropiado después de un derrame de sangre u otro cuerpo.
para evitar contaminar el exterior del recipiente y del formulario de laboratorio
fluidos y cuando se completan las actividades laborales.
que acompaña a la muestra.
7. Los materiales contaminados utilizados en las pruebas de laboratorio deben
2. Todas las personas que procesan muestras de sangre y fluidos corporales deben
descontaminarse antes del reprocesamiento o colocarse en bolsas y
usar guantes. Se deben usar máscaras y gafas protectoras si
desecharse de acuerdo con las políticas institucionales para la eliminación de
se prevé el contacto de la membrana mucosa con sangre o fluidos
desechos infecciosos.
corporales. Se deben cambiar los guantes y lavarse las manos después de
8. Equipo científico que haya sido contaminado con sangre o
completar el procesamiento de la muestra.
otros fluidos corporales deben descontaminarse y limpiarse antes de
3. Para procedimientos de rutina, como estudios histológicos y patológicos o
repararlos en el laboratorio o transportarlos al fabricante.
cultivos microbiológicos, no se requiere una cabina de seguridad biológica.
9. Todas las personas deben lavarse las manos después de completar el laboratorio.
necesario. Sin embargo, se deben utilizar cabinas de seguridad biológica.
actividades y debe quitarse la ropa protectora antes de salir
siempre que se lleven a cabo procedimientos que tengan un alto potencial de
el laboratorio.
generando gotas. Estos incluyen actividades tales como mezclar,
10. No se debe comer, beber o fumar en el área de trabajo.
sonicación y mezcla vigorosa.
4. Deben utilizarse dispositivos de pipeteo mecánico para manipular todos
líquidos en el laboratorio. No se debe pipetear con la boca. Fuente: Adaptado de Morbidity and Mortality Weekly Report, 36 (Supl. 2S)
5. El uso de agujas y jeringas debe limitarse a situaciones en 5S–10S, 1987, Pautas de los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades.
Tabla 7.4 Niveles de actividad de germicidas seleccionados
Clase Concentración de uso del ingrediente activo Nivel de actividada
Gas
Óxido de etileno 450–500 mg/litrob Elevado
Líquido
Glutaraldehído, acuoso 2% alto a intermedio
Alcohol de formaldehído 8 70% Elevado
Peróxido de hidrógeno estabilizado 6–30% alto a intermedio

Formaldehído, acuoso 6–8 % alto a intermedio
yodóforos 750–5000 mg/litro 75– alto a intermedio
yodóforos 150 mg/litro 0,5 70 % Intermedio a bajo
alcohol yodado 0,1–0,5 %d Intermedio
compuestos de cloro Intermedio
Compuestos fenólicos, acuosos 0.5–3% Intermedio a bajo

Yodo, acuoso 1% Intermedio
Alcoholes (etílico, isopropílico) 70 % Intermedio
Compuestos de amonio cuaternario 0,1–0,2 % acuoso Bajo

Clorhexidina 0,75–4 % Bajo
Hexaclorofeno 1-3% Bajo
Compuestos mercuriales 0.1–0.2% Bajo
Fuente: De Seymour S. Block, Desinfección, Esterilización y Preservación. Copyright © 1983 Lea & Febiger, Malvern, Pa. Reimpreso con autorización.
a
Los desinfectantes de alto nivel destruyen las células bacterianas vegetativas, incluidas M. tuberculosis, endosporas bacterianas, hongos y virus. Los desinfectantes de nivel intermedio destruyen todo lo anterior excepto las endosporas. Agentes de bajo nivel
Mata las células vegetativas bacterianas excepto M. tuberculosis, hongos y virus que contienen lípidos de tamaño mediano (pero no las endosporas bacterianas ni los virus pequeños que no contienen lípidos).
B
En equipo tipo autoclave a 55 a 60°C.
Yodo disponible.
C
DCloro libre.
Tabla 7.5 Eficacia relativa de desinfectantes y antisépticos de uso común
Clase Desinfectante Comentario antiséptico
Gas
Óxido de etileno 3–4a 0a esporicida; tóxico; buena penetración; requiere una humedad relativa del 30%
o más; la actividad microbicida varía con el aparato utilizado; absorbido
por material poroso; esporas secas altamente resistentes; la humedad debe ser
presente, y el remojo previo es lo más deseable
Líquido
Glutaraldehído, acuoso 3 0 esporicida; solución activa inestable; tóxico
Peróxido de hidrógeno estabilizado 3 0 esporicida; solución estable hasta 6 semanas; tóxico por vía oral y para los ojos;
levemente tóxico para la piel; poca inactivación por materia orgánica
Alcohol de formaldehído 3 0 esporicida; gases nocivos; tóxico; volátil
Formaldehído, acuoso 1–2 0 esporicida; gases nocivos; tóxico
Compuestos fenólicos 3 0 Estable; corrosivo; poca inactivación por materia orgánica; irrita la piel
compuestos de cloro 1–2 0 Acción rápida; inactivación por materia orgánica; corrosivo; irrita la piel
Alcohol 1 3 Rápidamente microbicida excepto para esporas bacterianas y algunos virus;
volátil; inflamable; seca e irrita la piel
alcohol yodado 0 4 Corrosivo; muy rápidamente microbicida; causa tinción; irrita la piel;
inflamable
yodóforos 1–2 3 Algo inestable; relativamente suave; tinción temporal; corrosivo
Yodo, acuoso 0 2 Rápidamente microbicida; corrosivo; mancha las telas; mancha e irrita la piel
Compuestos de amonio cuaternario 1 0 Amable; inactivado por jabón y aniónicos; compuestos absorbidos por
telas; la solución vieja o diluida puede soportar el crecimiento de gramnegativos
bacterias
Hexaclorofeno 0 2 Amable; insoluble en agua, soluble en alcohol; no inactivado por jabón;

débilmente bactericida
Clorhexidina 0 3 Amable; soluble en agua y alcohol; débilmente bactericida
Compuestos mercuriales 0 Amable; inactivado en gran medida por la materia orgánica; débilmente bactericida
Fuente: De Seymour S. Block, Desinfección, Esterilización y Preservación. Copyright © 1983 Lea & Febiger, Malvern, Pa. Reimpreso con permiso.
a
Calificaciones subjetivas de utilidad práctica en un entorno hospitalario: 4 es la utilidad máxima; 0 es poca o ninguna utilidad; significa que la sustancia es a veces útil pero no siempre.
alrededor de 70 a 80% de concentración. Actúan desnaturalizando las proteínas y laboratorios para desinfectar. Algunas marcas populares son Wescodyne
posiblemente disolviendo los lípidos de la membrana. Un remojo de 10 a 15 minutos para la desinfección de piel y laboratorio y Betadine para heridas.
es suficiente para desinfectar termómetros e instrumentos pequeños. El cloro es el desinfectante habitual para los suministros de agua municipales
y piscinas y también se emplea en la industria láctea y alimentaria
halógenos industrias Se puede aplicar como cloro gaseoso, hipoclorito de sodio

(lejía) o hipoclorito de calcio, todos los cuales producen ácido hipocloroso (HClO) y
Un halógeno es cualquiera de los cinco elementos (flúor, cloro, bromo,
luego oxígeno atómico. El resultado es la oxidación.
yodo y astato) en el grupo VIIA de la tabla periódica. Existen como moléculas
de materiales celulares y destrucción de bacterias vegetativas y
diatómicas en estado libre y forman compuestos salinos con el sodio y la mayoría
hongos, aunque no esporas.
de los demás metales. Los halógenos yodo
y el cloro son importantes agentes antimicrobianos. El yodo se usa como
Cl2 H2O ÿÿ HCl HClO
un antiséptico para la piel y mata al oxidar los constituyentes celulares y al yodar
las proteínas celulares. En concentraciones más altas, puede incluso matar Ca(OCl)2 · 2H2O ÿÿ Ca(OH)2 ·2HClO
algunas esporas. El yodo a menudo se ha aplicado como tintura de yodo, HClO ÿÿ HClO
2% o más de yodo en una solución de yoduro de potasio en agua y etanol.
Aunque es un antiséptico eficaz, la piel puede dañarse, un La muerte de casi todos los microorganismos generalmente ocurre dentro de los 30
queda la mancha y pueden producirse alergias al yodo. Más recientemente yodo minutos. Dado que el material orgánico interfiere con la acción del cloro al
se ha complejado con un vehículo orgánico para formar un yodóforo. al reaccionar con el cloro y sus productos, se produce un exceso de cloro.
Los yodóforos son solubles en agua, estables y no manchan, y se liberan añadido para asegurar la destrucción microbiana. Un problema potencial es que
yodo lentamente para minimizar las quemaduras y la irritación de la piel. Son usados el cloro reacciona con compuestos orgánicos para formar trihalometanos
en hospitales para la eliminación de gérmenes preoperatorios de la piel y en hospitales y cancerígenos, que deben controlarse en el agua potable. Ozono
fenólicos
OH OH OH cl cl cl cl
CH3
CH2
cl OH HO cl
Fenol ortocresol ortofenilfenol
Hexaclorofeno
alcoholes
OH
CH3 CH2 OH CHCH

3 CH3
Etanol isopropanol
Compuesto halogenado
O
H2 CC
norte cl
H2C _ C
O
Halazona
aldehídos
O O O
HC H HC CH2 CH2 CH2 C H
Formaldehído glutaraldehído
Compuestos de amonio cuaternario
Cl– CH3
+ norte C16 H33 Cn H2n + 1 n+ CH2 Cl–
CH3
cetilpiridinio
benzalconio
gases
CH2 CH2 CH2 CH2 H H

O
jefe OO
Óxido de etileno O Peróxido de hidrógeno
Betapropiolactona
Figura 7.11 Desinfectantes y antisépticos. Las estructuras de algunos desinfectantes y antisépticos de uso frecuente.
a veces se ha utilizado con éxito como alternativa a la cloración en Europa y Canadá. Una solución tamponada de glutaraldehído al 2% es un desinfectante eficaz. Es
menos irritante que el formaldehído y se utiliza para desinfectar equipos hospitalarios
El cloro también es un excelente desinfectante para uso individual. y de laboratorio. El glutaraldehído generalmente
porque es efectivo, económico y fácil de emplear. Pequeña desinfecta los objetos en unos 10 minutos, pero puede requerir como
cantidades de agua potable se pueden desinfectar con halazona hasta 12 horas para destruir todas las esporas.
tabletas Halazone (ácido parasulfona dicloramidobenzoico) lentamente
libera cloruro cuando se agrega al agua y la desinfecta en aproximadamente un
media hora. Lo utilizan con frecuencia los campistas que no tienen acceso a agua
Gases Esterilizantes
potable no contaminada. Muchos elementos sensibles al calor, como placas de petri de plástico desechables y
Las soluciones de cloro son desinfectantes domésticos y de laboratorio muy jeringas, componentes de máquinas de circulación extracorpórea, suturas y catéteres son
eficaces. Se puede preparar una excelente combinación de desinfectante y esterilizado con gas de óxido de etileno (figura 7.11). Óxido de etileno
detergente si se utiliza una dilución de 1/40 de lejía doméstica. (EtO) es tanto microbicida como esporicida y mata al combinar
combinado con un detergente no iónico, como un detergente para lavavajillas, para con proteínas celulares. Es un agente esterilizante particularmente eficaz porque
dar una concentración de detergente del 0,8%. Esta mezcla se penetra rápidamente en los materiales de embalaje, incluso en las envolturas de plástico.
elimina tanto la suciedad como las bacterias. La esterilización se lleva a cabo en un esterilizador especial de óxido de
etileno, muy parecido a un autoclave en apariencia, que
controla la concentración de EtO, la temperatura y la humedad (figura 7.13). Debido
Metales pesados a que el EtO puro es explosivo, generalmente se suministra
Durante muchos años los iones de metales pesados como mercurio, plata, en una concentración de 10 a 20% mezclado con CO2 o
el arsénico, el zinc y el cobre se utilizaron como germicidas. Éstas tienen diclorodifluorometano. La concentración de óxido de etileno,
ahora ha sido reemplazado por otros germicidas menos tóxicos y más efectivos la humedad y la temperatura influyen en la tasa de esterilización. A
(muchos metales pesados son más bacteriostáticos que bactericidas). Hay algunas el objeto limpio se puede esterilizar si se trata durante 5 a 8 horas a 38°C
excepciones. En algunos hospitales, un 1% o 3 a 4 horas a 54°C cuando se mantiene la humedad relativa
solución de nitrato de plata se agrega a los ojos de los bebés para prevenir
gonorrea oftálmica. La sulfadiazina de plata se usa en quemaduras. Cop per sulfato
es un algicida eficaz en lagos y piscinas.
Los metales pesados se combinan con proteínas, a menudo con su sulfhidrilo.
grupos y desactivarlos. También pueden precipitar proteínas celulares.
glutaraldehído O O
Compuestos de amonio cuaternario

Los compuestos de amonio cuaternario son detergentes que tienen actividad Polimerización
timicrobiana y son desinfectantes efectivos. detergentes
[Latín detergere, limpiar] son agentes de limpieza orgánicos que
son anfipáticos y tienen componentes hidrófilos polares e hidrófobos no polares. La
porción hidrófila de un cuaternario. O O
el compuesto de amonio es un nitrógeno cuaternario con carga positiva; por tanto, poliglutaraldehído O O
los compuestos de amonio cuaternario son detergentes catiónicos. Su actividad
antimicrobiana es el resultado de su capacidad para entrecruzamiento con
proteína microbiana
alterar las membranas microbianas; también pueden desnaturalizar proteínas.
Los detergentes catiónicos como el cloruro de benzalconio y el cloruro de
cetilpiridinio matan a la mayoría de las bacterias, pero no a la M. tuberculosis ni a
las endosporas. Tienen las ventajas de ser estables y no tóxicos. norte
norte
pero se inactivan con agua dura y jabón. Los detergentes catiónicos se utilizan a
menudo como desinfectantes para utensilios de comida y pequeños instrumentos y norte
como antisépticos para la piel. Varias marcas están en el norte
mercado. Zephiran contiene cloruro de benzalconio y Ceepryn,

grupos amino en
cloruro de cetilpiridinio. GRAMO- G+
peptidoglicano
aldehídos Figura 7.12 Efectos del glutaraldehído. glutaraldehído

Ambos aldehídos de uso común, formaldehído y glutaraldehído (figura 7.11), son polimeriza y luego interactúa con los aminoácidos en las proteínas (izquierda)
moléculas altamente reactivas que se combinan con ácidos nucleicos y proteínas y o en peptidoglicano (derecha). Como resultado, las proteínas se alquilan
los inactivan. y se entrecruza con otras proteínas, lo que las inactiva. los
probablemente por entrecruzamiento y alquilación de moléculas (figura 7.12). Los grupos amino en el peptidoglicano también se alquilan y entrecruzan,
Son esporicidas y pueden usarse como esterilizantes químicos. lo que les impide participar en otras reacciones químicas como las
El formaldehído generalmente se disuelve en agua o alcohol antes de su uso. implicadas en la síntesis de peptidoglicanos.
Toma de aire
Bomba aspiradora
Filtro de aire
Cámara
Puerta
Mezclador de gases
Cilindro ETO
Cilindro de CO2
(a) (B)
Figura 7.13 Un esterilizador de óxido de etileno. (a) Un esterilizador automático de óxido de etileno (EtO). (b) Esquema de un esterilizador EtO. Artículos a
esterilizar se colocan en la cámara y se introducen EtO y dióxido de carbono. Una vez finalizado el procedimiento de esterilización, el EtO
y dióxido de carbono son bombeados fuera de la cámara y entra aire.
al 40 al 50% y la concentración de EtO a 700 mg/litro. Es necesaria una amplia aireación de Cobertura de los primeros antibióticos, las compañías farmacéuticas han desarrollado
los materiales esterilizados para eliminar numerosos derivados y muchos antibióticos sintéticos.
EtO residual porque es muy tóxico. También se han desarrollado agentes quimioterapéuticos para tratar enfermedades causadas
La betapropiolactona (BPL) se emplea ocasionalmente como gas esterilizante. En por hongos, protistas y virus. Quimioterapéutico
forma líquida se ha utilizado para esterilizar vacunas. Los agentes se describen con más detalle en el capítulo 34.
y sueros. BPL se descompone a una forma inactiva después de varias horas
y por lo tanto no es tan difícil de eliminar como EtO. También destruye microorganismos más 1. ¿Por qué la mayoría de los agentes químicos antimicrobianos son desinfectantes en lugar
fácilmente que el óxido de etileno, pero no de esterilizantes? ¿Qué características generales se deben buscar en un desinfectante?
no penetran bien los materiales y pueden ser cancerígenos. Para éstos 2. Describa cada uno de los siguientes agentes en términos de su naturaleza química,
razones, BPL no se ha utilizado tan extensamente como EtO. mecanismo de acción, modo de aplicación, usos comunes y efectividad, y ventajas
El peróxido de hidrógeno vaporizado se puede utilizar para descontaminar y desventajas: fenoles, alcoholes, halógenos, metales pesados,
cabinas de seguridad biológica, quirófanos y otras instalaciones de gran tamaño. Estos compuestos de amonio cuaternario, aldehídos y óxido de etileno.
sistemas introducen peróxido de hidrógeno vaporizado en 3. ¿Qué desinfectantes o antisépticos se usarían para tratar lo siguiente:
el recinto durante algún tiempo, dependiendo del tamaño del recinto y los materiales dentro. termómetro, mesa de laboratorio, agua potable, parche de piel antes
El peróxido de hidrógeno es tóxico y cirugía, pequeños instrumentos médicos (sondas, fórceps, etc.)? Explique su
mata una amplia variedad de microorganismos. Sin embargo, durante el opciones
curso del proceso de descontaminación, se descompone en agua 4. ¿En qué se diferencian los agentes quimioterapéuticos de los otros controles químicos?
y oxígeno, ambos inofensivos. Otras ventajas de agentes descritos en este capítulo?

estos sistemas son que pueden usarse en una amplia gama de temperaturas (4 a 80°C) y no 5. ¿Qué agente físico o químico sería la mejor opción para esterilizar
dañan la mayoría de los materiales. los siguientes artículos: pipetas de vidrio, tubos de caldo de soja tríptico, agar nutritivo,
solución antibiótica, interior de una cabina de seguridad biológica, paquete
envuelto de placas petri de plástico? Explique sus opciones.
Agentes quimioterapéuticos
Los productos químicos discutidos hasta ahora son apropiados para su uso en
objetos inanimados o tejidos externos del huésped. Quimioterapéutico
7.6 EVALUACIÓN DEL AGENTE ANTIMICROBIANO
Los agentes son sustancias químicas que se pueden usar internamente para matar o inhibir el
crecimiento de microbios dentro de los tejidos del huésped. Se pueden usar internamente
EFICACIA
porque tienen toxicidad selectiva; es decir, se dirigen al microbio La prueba de agentes antimicrobianos es un proceso complejo regulado por
y hacen relativamente poco o ningún daño al huésped. La mayoría de los agentes dos agencias federales diferentes. La Agencia de Protección Ambiental de EE. UU. regula
quimioterapéuticos son antibióticos, sustancias químicas sintetizadas por microbios . los desinfectantes, mientras que los agentes utilizados en humanos y animales están bajo el
que son efectivos para controlar el crecimiento de bacterias. Desde el des control de la Agencia de Alimentos y Medicamentos.
Evaluación de la eficacia del agente antimicrobiano 165
Administración. Las pruebas de agentes antimicrobianos a menudo comienzan con

Tabla 7.6 Coeficientes de fenol para algunos desinfectantes
una prueba de detección inicial para ver si son efectivos y en qué concentraciones.
Esto puede ir seguido de pruebas en uso más realistas. Coeficiente de fenola
La prueba de detección de desinfectantes más conocida es la prueba del Salmonella Estafilococo
coeficiente de fenol en la que se compara la potencia de un desinfectante con Desinfectante typhi aureus
la del fenol. Una serie de diluciones de fenol y el desinfectante.
Fenol 1 1
están siendo probados están preparados. Una cantidad estándar de Salmonella typhi 228 337
Cloruro de cetilpiridinio
y Staphylococcus aureus se agregan a cada dilución; las diluciones 4.0
O-fenilfenol p- 5,6 (20°C)
luego se colocan en un baño de agua a 20 o 37°C. A intervalos de 5 minutos, cresol 2,0–2,3 2.3
Se extraen muestras de cada dilución y se utilizan para inocular una Hexaclorofeno 5–15 15–40
medio de crecimiento, que se incuba durante dos o más días y luego mertiolato 600 62.5
examinada para el crecimiento. Si no hay crecimiento en el medio de cultivo, Mercurocromo 2.7 5.3
la dilución en ese momento particular de muestreo mató a las bacterias. lisol 1.9 3.5
Alcohol isopropílico 0.6 0.5
La dilución más alta (es decir, la concentración más baja) que mata el
Etanol 0.04 0.04
bacterias después de una exposición de 10 minutos, pero no después de 5 minutos, se utiliza
Solución de I2 al 2% en EtOH 4,1–5,2 (20 °C) 4,1–5,2 (20 °C)
para calcular el coeficiente de fenol. Esto se hace dividiendo el recíproco de la dilución
apropiada para el desinfectante que se está probando. a
Todos los valores se determinaron a 37°C excepto donde se indique.
por el recíproco de la dilución de fenol apropiada. Por ejemplo,
si la dilución de fenol fue 1/90 y la dilución máxima efectiva para
desinfectante X era 1/450, entonces el coeficiente de fenol de X sería determinada y comparada. También se puede realizar una prueba de dilución de uso.
ser 5. Cuanto mayor sea el valor del coeficiente de fenol, más eficaz será el fuera. Los cilindros de acero inoxidable se contaminan con especies bacterianas
desinfectante bajo estas condiciones de prueba. Un valor mayor que 1 específicas bajo condiciones cuidadosamente controladas. los cilindros
significa que el desinfectante es más eficaz que el fenol. Unos pocos se secan brevemente, se sumergen en los desinfectantes de prueba durante 10
los valores representativos del coeficiente de fenol se dan en la tabla 7.6. minutos, se transfieren a medios de cultivo y se incuban durante dos días.
La prueba del coeficiente de fenol es un procedimiento de detección inicial útil, Se determina la concentración de desinfectante que mata los organismos en la muestra
pero el coeficiente de fenol puede ser engañoso si se toma como una indicación directa con un nivel de confianza del 95% bajo estas condiciones. Los desinfectantes también
de la potencia desinfectante durante el uso normal. Esto es se pueden probar en condiciones
porque el coeficiente de fenol se determina bajo condiciones cuidadosamente diseñado para simular situaciones normales de uso. Las técnicas de prueba en uso
controladas con cepas bacterianas puras, mientras que los desinfectantes se usan permiten una determinación más precisa de la concentración adecuada de desinfectante
normalmente en poblaciones complejas en presencia para una situación particular.
de materia orgánica y con variaciones significativas en factores ambientales como pH,
temperatura y presencia de sales.
1. Describa brevemente la prueba del coeficiente de fenol.
Para estimar de manera más realista la efectividad del desinfectante,
2. ¿Por qué podría ser necesario emplear procedimientos como el uso de dilución y
a menudo se utilizan otras pruebas. Las tasas a las que las bacterias seleccionadas son
pruebas en uso?
destruido con varios agentes químicos puede ser experimentalmente
Resumen
7.1 Definiciones de términos de uso frecuente 7.4 El uso de métodos físicos en el control
un. La esterilización es el proceso por el cual todas las células vivas, esporas viables, virus y un. El calor húmedo mata al degradar los ácidos nucleicos, desnaturalizar las enzimas y otros
los viroides se destruyen o se eliminan de un objeto o hábitat. Desinfección protenas y alterando las membranas celulares.
es la muerte, inhibición o eliminación de microorganismos (pero no necesariamente B. Aunque el tratamiento con agua hirviendo durante 10 minutos mata las formas vegetativas,
endosporas) que pueden causar enfermedades. se debe usar un autoclave para destruir las endosporas calentando a 121°C y 15
B. El objetivo principal de la desinfección y la antisepsia es la eliminación, inhibición o libras de presión (figura 7.3).
destrucción de microbios patógenos. Ambos procesos también reducen el número total C. La cristalería y otros artículos estables al calor se pueden esterilizar con calor seco a 160 a
de microbios Los desinfectantes son productos químicos que se utilizan para desinfectar objetos inanimados; 170°C durante 2 a 3 horas.
los antisépticos se utilizan en tejido vivo.
D. La eficiencia de la muerte por calor a menudo se indica por el tiempo de muerte térmica o
C. Los agentes antimicrobianos que matan organismos a menudo tienen el sufijo -cide, mientras que el tiempo de reducción decimal.
los agentes que impiden el crecimiento y la reproducción tienen el sufijo -estático.
mi. La refrigeración y la congelación se pueden utilizar para controlar el crecimiento microbiano y volver a
7.2 El patrón de muerte microbiana producción.
F. Los microorganismos se pueden eliminar de manera eficiente mediante filtración con filtros de profundidad
un. La muerte microbiana suele ser exponencial o logarítmica (figura 7.2).
o filtros de membrana (figura 7.6).
7.3 Condiciones que influyen en la eficacia de los agentes antimicrobianos gramo. Las cabinas de seguridad biológica con filtros de partículas de alta eficiencia esterilizan el aire
un. La eficacia de un agente desinfectante o esterilizante está influenciada por el tamaño de la población, la por filtración (figura 7.8).
composición de la población, la concentración o la intensidad del agente, H. La radiación de longitud de onda corta o ultravioleta de alta energía y la radiación ionizante se pueden
la duración de la exposición, la temperatura y la naturaleza del entorno local. utilizar para esterilizar objetos (figuras 7.9 y 7.10).
7.5 El uso de agentes químicos en el control F. Los aldehídos como el formaldehído y el glutaraldehído pueden esterilizar tan bien como
desinfectar porque matan las esporas.
un. Los agentes químicos suelen actuar como desinfectantes porque no pueden destruir fácilmente las
endosporas bacterianas. La eficacia del desinfectante depende de la concentración, la duración del gramo. El gas de óxido de etileno penetra en el material de envoltura de plástico y destruye toda forma de vida.
tratamiento, la temperatura y la presencia de materia orgánica se forma al reaccionar con proteínas. Se utiliza para esterilizar envases sensibles al calor
materiales
(tablas 7.4 y 7.5).
B. Los fenólicos y los alcoholes son desinfectantes populares que actúan desnaturalizando pro H. Los agentes quimioterapéuticos son sustancias químicas como los antibióticos que pueden ingerirse
teínas y rompiendo las membranas celulares (figura 7.11). o inyectarse en un huésped. Matan o inhiben el crecimiento de microbios.
dentro de los tejidos del huésped.
C. Los halógenos (yodo y cloro) matan al oxidar los constituyentes celulares; las proteínas celulares
también pueden estar yodadas. El yodo se aplica como tintura o yodóforo. Cloro
se puede agregar al agua como gas, hipoclorito o un derivado orgánico del cloro. 7.6 Evaluación de la eficacia del agente antimicrobiano
D. Los metales pesados tienden a ser agentes bacteriostáticos. Se emplean en situaciones especiales, un. Se puede utilizar una variedad de procedimientos para determinar la efectividad de los desinfectantes,
como el uso de nitrato de plata en los ojos de los recién nacidos. entre ellos los siguientes: prueba de coeficiente de fenol, medición de
y sulfato de cobre en lagos y piscinas. índices de destrucción con germicidas, pruebas de dilución de uso y pruebas en uso.
mi. Los detergentes catiónicos se utilizan a menudo como desinfectantes y antisépticos; ellos dis
romper membranas y desnaturalizar proteínas.
Términos clave
algicida 151 tiempo de reducción decimal (D) 154 germicida 151 desinfección 151
antibióticos 164 filtros de profundidad 156 partículas de aire de alta eficiencia (HEPA) toxicidad selectiva 164
agente antimicrobiano 152 detergente 163 filtros 156 esterilización 151
antisepsia 151 desinfectante 151 yodóforo 161 tiempo de muerte térmica (TDT) 154
antisépticos 151 desinfección 151 radiación ionizante 156 radiación ultravioleta (UV) 156
autoclave 153 esterilización por calor seco 153 flujo laminar seguridad biológica usar prueba de dilución 165
bactericida 151 Valor D 154 armarios 156 viricida 151

bacteriostático 151 filtros de membrana 156 valor z 154
fungicida 151
agentes quimioterapéuticos 164 fungistático 151 pasteurización 153
quimioterapia 151 valor F 154 prueba de coeficiente de fenol 165
1. A lo largo de la historia, las especias se han utilizado como conservantes y para encubrir la decir con seguridad es el más eficaz? ¿Puedes determinar su coeficiente de fenol a partir de
olor/sabor de la comida que está ligeramente estropeada. El éxito de algunas especias condujo a una ¿estos resultados?
el uso mágico y ritualizado de muchos de ellos y la posesión de especias a menudo se limitaba a los
sacerdotes u otros miembros poderosos de la comunidad.
Crecimiento bacteriano después del tratamiento
un. Elija una especia y rastree su uso geográfica e históricamente. cual es su
uso común hoy en día? Dilución Desinfectante A Desinfectante B Desinfectante C
B. Las especias crecen y tienden a usarse predominantemente en climas más cálidos. Explicar. 1/20
2. Diseñe un experimento para determinar si un agente antimicrobiano está actuando como 1/40
un agente cidal o estático. ¿Cómo determinaría si un agente es adecuado 1/80
para usar como antiséptico en lugar de desinfectante?
1/160
3. Suponga que está probando la efectividad de los desinfectantes con el fenol 1/320
prueba de coeficiente y obtuvo los siguientes resultados. ¿Qué desinfectante puedes
Aprende más
Barkley, WE y Richardson, JH 1994. Seguridad en el laboratorio. En Methods for general and molecular Sondossi, M. 2000. Biocidas. En Enciclopedia de microbiología, 2ª ed., vol. yo, j
bacteriology, P. Gerhardt, et al., editores, 715–34. Washington, DC: Sociedad Estadounidense de Lederberg, editor en jefe, 445–60. San Diego: Prensa Académica.
Microbiología. Widmer, AF y Frei, R. 1999. Descontaminación, desinfección y esterilización.
Gilbert, P. y McBain, AJ 2003. Impacto potencial del mayor uso de biocidas en En Manual de microbiología clínica, 7ª ed., PR Murray, et al., editores,
productos de consumo sobre la prevalencia de la resistencia a los antibióticos. clin. Microbiol. Rvdo. 138–64. Washington, DC: ASM Press.
16(2):189–208.
Sewell, DL 1995. Infecciones asociadas al laboratorio y bioseguridad. clin. Microbiol.

8(3):389–405 .

8Metabolismo:
Energía, Enzimas
y Regulación
Este modelo muestra la aspartato carbamoiltransferasa de Escherichia coli en el

estado T menos activo. Las cadenas polipeptídicas catalíticas están en azul y las
cadenas reguladoras en rojo.
AVANCE
• El metabolismo es el conjunto de todas las reacciones químicas que ocurren en las células.
Se divide en dos partes principales: reacciones de conservación de energía que liberan

y conservan la energía proporcionada por la fuente de energía de un organismo; y el En los primeros
preguntas decapítulos demicroorganismos:
“qué” sobre este texto, nos centramos en una serie de
qué son; qué
anabolismo, las reacciones que consumen energía para construir moléculas grandes y ¿Se parecen? ¿de qué están hechos? En los capítulos 8 al 13
complejas a partir de moléculas más pequeñas y simples. comenzamos a considerar una serie de preguntas de "cómo": cómo extraen
energía los microbios de su fuente de energía; cómo utilizan los nutrientes
• Las células usan energía para hacer trabajo celular. Los organismos vivos realizan tres que obtienen de su entorno; ¿cómo se construyen? Para comenzar a
tipos principales de trabajo: trabajo químico, trabajo de transporte y trabajo mecánico. responder estas preguntas de "cómo", debemos centrar más nuestra
atención en la química de las células; es decir, su metabolismo. Los capítulos
• Todos los organismos vivos obedecen las leyes de la termodinámica. Estas leyes se 8 a 10 introducen el metabolismo, centrándose en los procesos que
pueden usar para predecir la espontaneidad de las reacciones químicas que ocurren en conservan la energía suministrada por la fuente de energía de un organismo
las células y la cantidad de energía liberada o consumida durante una reacción.
y en cómo se utiliza esa energía para sintetizar los componentes básicos a
partir de los cuales se construye un organismo. Los capítulos 11 a 13
• ATP es una molécula de alta energía que sirve como moneda de energía de la célula. consideran la síntesis de tres importantes macromoléculas: ADN, ARN y
Vincula las reacciones exergónicas que producen energía con las reacciones
proteínas.
endergónicas que consumen energía.
Este capítulo comienza con una breve descripción del metabolismo.
• Las reacciones de oxidación-reducción son importantes en los procesos de conservación Para comprender el metabolismo, se debe considerar la naturaleza de la
de energía que llevan a cabo las células. Cuando los electrones se transfieren de un
energía y las leyes de la termodinámica, por lo que a continuación se
donante de electrones con un potencial de reducción más negativo a un aceptor de
presenta una discusión de estos temas. Como se verá, los microorganismos
electrones con un potencial más positivo, se dispone de energía para el trabajo.
muestran una asombrosa variedad de diversidad metabólica, especialmente
en términos de fuentes de energía y procesos de conservación de energía
• Las enzimas son catalizadores de proteínas que hacen posible la vida al aumentar la
que emplean. Sin embargo, a pesar de esta diversidad, existen varios
velocidad de las reacciones. Lo hacen al disminuir la energía de activación de las
principios y procesos básicos comunes al metabolismo de todos los
reacciones que catalizan.
microbios. Estos serán el enfoque de la mayoría de las secciones restantes
• Las vías metabólicas se regulan para mantener los componentes celulares en un equilibrio
del capítulo. El capítulo termina con una discusión de la regulación metabólica.
adecuado, incluso frente a un entorno cambiante, y para conservar energía y materias
primas. Las vías metabólicas están reguladas por uno de tres métodos: canalización
metabólica, regulación de la actividad de ciertas enzimas y regulación de la cantidad de
enzima que se sintetiza. • La actividad de enzimas y proteínas implicadas en 8.1 UNA VISIÓN GENERAL DEL METABOLISMO
comportamientos complejos como la quimiotaxis puede regularse mediante los mismos
mecanismos que se utilizan para controlar las vías metabólicas. El metabolismo es el total de todas las reacciones químicas que ocurren
en la célula. Estas reacciones químicas se resumen en la figura 8.1. El
metabolismo se puede dividir en dos partes principales: conservación de energía
Flujos de oxígeno fresco

De los estomas abiertos
El mundo entero inhala
—Cristal Cunningham
168 Capítulo 8 Metabolismo: energía, enzimas y regulación
Fuente de energía
Quimioorganotrofos: moléculas orgánicas
Quimiolitotrofo: moléculas inorgánicas
Fotótrofo: luz
atp
Fuente de carbono
Autótrofo—CO2 Metabolitos Monómeros

y otros macromoléculas
precursores
Heterótrofas: moléculas orgánicas
bloques de construcción
Fuente de electrones
Organótrofos: moléculas orgánicas

Potencia reductora (electrones)
Litótrofa: moléculas inorgánicas
Figura 8.1 Descripción general del metabolismo. Las estructuras celulares de los organismos se ensamblan a partir de varias macromoléculas (p.
ej., ácidos nucleicos y proteínas). Las macromoléculas se sintetizan a partir de monómeros y otros bloques de construcción (p. ej., nucleótidos y
aminoácidos), que son los productos de rutas bioquímicas que comienzan con metabolitos precursores (p. ej., piruvato y -cetoglutarato). En los
autótrofos, los metabolitos precursores surgen de las vías de fijación de CO2 y vías relacionadas; en heterótrofos, surgen de reacciones de las vías
metabólicas centrales. El poder reductor y el ATP se consumen en muchas rutas metabólicas. Todos los organismos pueden definirse metabólicamente
en términos de su fuente de energía, fuente de carbono y fuente de electrones. En el caso de los quimioorganotrofos, la fuente de energía es una
molécula orgánica que también es fuente de carbono y electrones. Para los quimiolitotrofos, la fuente de energía es una molécula inorgánica que
también es la fuente de electrones; la fuente de carbono puede ser CO2 (autótrofos) o una molécula orgánica (heterótrofos). Para los fotótrofos, la fuente
de energía es la luz, la fuente de carbono puede ser CO2 o moléculas orgánicas, y la fuente de electrones puede ser agua (fotótrofos oxigénicos) u otra
molécula reducida como el sulfuro de hidrógeno (fotótrofos anoxigénicos).
Reacciones y anabolismo. En las reacciones de conservación de energía heterótrofos. Estos organismos utilizan moléculas orgánicas como fuente
o reacciones de alimentación, la energía proporcionada a la célula por su de energía, carbono y electrones. En otras palabras, la misma molécula
fuente de energía se libera y se conserva como ATP. Estas reacciones a que les proporciona energía también les proporciona carbono y electrones.
veces se denominan catabolismo [del griego cata, abajo, y ballein, arrojar], Los quimioorganoheterótrofos (a menudo denominados simplemente
ya que pueden implicar la descomposición de moléculas orgánicas quimioorganoheterótrofos o quimioheterótrofos) pueden usar uno o más
complejas y relativamente grandes en moléculas más pequeñas y simples. de los siguientes procesos catabólicos: fermentación, respiración aeróbica
El anabolismo [del griego ana, up] es la síntesis de moléculas orgánicas o respiración anaeróbica. Los quimiolitoautótrofos usan CO2 como fuente
complejas a partir de otras más simples. Implica una serie de pasos: (1) de carbono y moléculas inorgánicas reducidas como fuentes de energía y
conversión de la fuente de carbono del organismo en un conjunto de electrones. Sus procesos de conservación de energía a veces se
pequeñas moléculas llamadas metabolitos precursores; (2) síntesis de denominan respiración porque son similares a los procesos respiratorios
monómeros y otros bloques de construcción (es decir, aminoácidos, que llevan a cabo los quimioorganoheterótrofos.
nucleótidos, carbohidratos simples y lípidos simples) a partir de los Los microbios fotolitotróficos utilizan la luz como fuente de energía y las
metabolitos precursores; (3) síntesis de macromoléculas (es decir, moléculas inorgánicas como fuente de electrones. Cuando utilizan el agua
proteínas, ácidos nucleicos, carbohidratos complejos y lípidos complejos); como fuente de electrones, al igual que las plantas, liberan oxígeno a la
y (4) ensamblaje de macromoléculas en estructuras celulares. Un abolismo atmósfera mediante un proceso llamado fotosíntesis oxigénica. Ciertas
requiere energía, que se transfiere desde la fuente de energía a los bacterias fotosintéticas no utilizan el agua como fuente de electrones; no
sistemas sintéticos de la célula por ATP. El anabolismo también requiere liberan oxígeno a la atmósfera y se denominan fotótrofos anoxigénicos.
una fuente de electrones almacenados en forma de poder reductor. Se Los fotolitotrofos suelen ser autótrofos y utilizan CO2 como fuente de
necesita poder reductor porque el anabolismo es un proceso reductor; es carbono. Sin embargo, algunos microbios fototróficos son heterótrofos.
decir, se agregan electrones a las moléculas pequeñas a medida que se respiración aeróbica (sección 9.2); respiración anaeróbica (sección 9.6);
usan para construir macromoléculas (figura 8.1). La conservación de Fermentación (sección 9.7); quimiolitotrofia (sección 9.11); Fototrofia
energía y la provisión de poder reductor son el enfoque del capítulo 9; los (sección 9.12)
pasos iniciales en el anabolismo son el foco del capítulo 10. Las interacciones de los tipos nutricionales de microorganismos son
críticas para el funcionamiento de la biosfera. La fuente última de la mayor
Como se discutió en el capítulo 5, hay cinco tipos nutricionales parte de la energía biológica es la luz solar visible. La energía luminosa
principales de microorganismos basados en sus fuentes de energía, queda atrapada y los fotoautótrofos generan poder reductor que se utiliza
para transformar el CO2 en moléculas orgánicas como la glucosa. el o
carbono y electrones (figura 8.1). Los animales y muchos microbios son quimioorgano
Las leyes de la termodinámica 169
3. ¿Qué tipos de trabajo se realizan en una célula? Supongamos que una bacteria fuera
Energia luminosa Energía química
haciendo lo siguiente: sintetizando peptidoglicano, girando su flagelo
y nadar, y secretar sideróforos. ¿Qué tipo de trabajo está haciendo la bacteria
en cada caso?
Fotolitoautótrofos quimiolitoautótrofos
8.3 LAS LEYES DE LA TERMODINÁMICA

Orgánico Comprender cómo se atrapa la energía como ATP y cómo se utiliza el ATP.
compuestos CO2
para hacer trabajo celular, algún conocimiento de los principios básicos de
Se requiere termodinámica. La ciencia de la termodinámica.
analiza los cambios de energía en una colección de materia (por ejemplo, una célula o un
heterótrofos
planta) llamado sistema. El resto de la materia del universo se llama
los alrededores. La termodinámica se centra en las diferencias de energía entre el
estado inicial y el estado final de un sistema. Está
no se preocupa por la velocidad del proceso. Por ejemplo, si una sartén
Figura 8.2 El flujo de carbono y energía en un ecosistema.
de agua se calienta a ebullición, sólo la condición del agua en el
Este diagrama representa el flujo de energía y carbono en general. inicio y en ebullición es importante en termodinámica, no qué tan rápido
condiciones. Ver texto para discusión. se calienta o en qué tipo de estufa.
Deben entenderse dos leyes importantes de la termodinámica.
Las moléculas orgánicas luego sirven como energía, carbono y electrones. La primera ley de la termodinámica dice que la energía no puede ser ni
Fuentes de quimioorganoheterótrofos. La descomposición de las moléculas orgánicas creado ni destruido. La energía total del universo permanece
por parte de los quimioorganótrofos libera CO2 de nuevo en constante aunque puede ser redistribuido, como lo es durante los muchos
la atmósfera (figura 8.2). En un ciclo similar, los tótrofos quimiolíticos utilizan la energía intercambios de energía que ocurren durante las reacciones químicas. Por ejemplo, el
y el poder reductor derivados de fuentes de energía inorgánicas para sintetizar moléculas calor se desprende por reacciones exotérmicas y se absorbe
orgánicas, que durante las reacciones endotérmicas. Sin embargo, la primera ley por sí sola no puede
“alimentar” a los quimioorganoheterótrofos (figura 8.2). Así los flujos de explicar por qué una reacción química libera calor y otra lo absorbe. Tampoco explica
el carbono y la energía en los ecosistemas están íntimamente relacionados. por qué el gas fluirá de un
cilindro lleno a un cilindro vacío hasta que la presión del gas sea igual
en ambos (figura 8.3). Las explicaciones de estos fenómenos requieren
8.2 ENERGÍA Y TRABAJO la segunda ley de la termodinámica y una condición de la materia
llamado entropía. La entropía puede considerarse una medida de la aleatoriedad o el
La energía puede definirse más simplemente como la capacidad de realizar un trabajo.
desorden de un sistema. Cuanto mayor es el desorden de un sistema, mayor es su
Esto se debe a que todos los procesos físicos y químicos son el resultado
entropía. La segunda ley establece que la física
de la aplicación o movimiento de la energía. Las células vivas realizan
y los procesos químicos proceden de tal manera que la aleatoriedad o el desorden del
tres tipos principales de trabajo, y todos son esenciales para los procesos de la vida.
universo (el sistema y su entorno)
El trabajo químico implica la síntesis de compuestos biológicos complejos.
moléculas de precursores mucho más simples (es decir, anabolismo); se necesita
energía para aumentar la complejidad molecular de una célula.
El trabajo de transporte requiere energía para absorber los nutrientes,
eliminar los desechos y mantener el equilibrio de iones. La entrada de energía es
necesario porque las moléculas y los iones a menudo deben ser transportados Estado inicial
a través de las membranas celulares contra un gradiente electroquímico. Para
Por ejemplo, las moléculas entran en una célula aunque su concentración interna sea
mayor. De manera similar, un soluto puede ser expulsado
de la célula contra un gradiente de concentración. El tercer tipo de
trabajo es el trabajo mecánico, quizás el más familiar de los
Tres. Se requiere energía para la motilidad celular y para mover estructuras.
dentro de las células.
Estado final (equilibrio)

1. Definir metabolismo, energía, reacciones de conservación de energía,
catabolismo, abolismo y poder reductor.
Figura 8.3 Proceso de la segunda ley. La expansión del gas
2. Describe en términos generales cómo se distribuye la energía de la luz solar
en un cilindro vacío simplemente redistribuye las moléculas de gas hasta que
la biosfera. ¿Qué fuentes de energía, aparte de la luz solar, utilizan los
se alcanza el equilibrio. El número total de moléculas permanece
microorganismos?
sin alterar.
aumenta al máximo posible. El gas siempre se expandirá en el sistema. Probablemente solo se paró en la cima de la colina y
un cilindro vacío. observó cómo se desarrollaba la reacción.
Es necesario especificar cuantitativamente la cantidad de energía El cambio en la energía libre también tiene una relación definida y concreta
se utilizan en un proceso particular o evolucionan a partir de él, y se emplean con la dirección de las reacciones químicas. Considere esta simple reacción.
dos tipos de unidades de energía. Una caloría (cal) es la cantidad de energía
calorífica necesaria para elevar un gramo de agua de 14,5 a 15,5 °C. los
La cantidad de energía también se puede expresar en julios (J), A + BÿC + D
las unidades de trabajo que se pueden realizar. Una cal de calor equivale a
4,1840 J de trabajo. Mil calorías o una kilocaloría Si las moléculas A y B se mezclan, se combinarán para formar el
(kcal) es energía suficiente para hervir 1,9 ml de agua. un kilojulio es productos C y D. Eventualmente, C y D se concentrarán
energía suficiente para hervir alrededor de 0,44 ml de agua, o permitir que una persona suficiente para combinar y producir A y B al mismo ritmo que C y
con un peso de 70 kg para subir 35 escalones. El julio es normalmente utilizado por D se forman a partir de A y B. La reacción está ahora en equilibrio:
químicos y físicos. Debido a que los biólogos hablan con mayor frecuencia de las velocidades en ambas direcciones son iguales y no se produce ningún otro
energía en términos de calorías, este texto empleará calorías cuando cambio neto en las concentraciones de reactivos y productos. Esta situación
Hablando de cambios de energía. se describe mediante la constante de equilibrio (Keq), que relaciona las
concentraciones de equilibrio de productos y sustratos entre sí.
8.4 ENERGÍA LIBRE Y REACCIONES Keq =

[DISCOS COMPACTOS]
[A][B]
La primera y la segunda leyes se pueden combinar en una ecuación útil,
relacionar los cambios de energía que pueden ocurrir en las reacciones Si la constante de equilibrio es mayor que uno, los productos están en
químicas y otros procesos. mayor concentración que los reactivos en el equilibrio, es decir,
la reacción tiende a completarse como está escrita.
LUCHAS
La constante de equilibrio de una reacción está directamente relacionada con su
cambio en la energía libre. Cuando la energía libre cambia para un proceso
G es el cambio de energía libre, H es el cambio de entalpía, T se determina en condiciones estándar cuidadosamente definidas de
es la temperatura en Kelvin (°C 273), y S es el cambio en concentración, presión, pH y temperatura, se denomina estándar
entropía que se produce durante la reacción. El cambio de entalpía es cambio de energía libre (G°). Si el pH se establece en 7,0 (que está cerca
el cambio en el contenido de calor. Las reacciones celulares ocurren bajo al pH de las células vivas), el cambio de energía libre estándar se indica con el
condiciones de presión y volumen constantes. Por lo tanto, el cambio de símbolo G°ÿ. El cambio en la energía libre estándar puede
entalpía es aproximadamente el mismo que el cambio de energía total durante el considerarse como la cantidad máxima de energía disponible del
reacción. El cambio de energía libre es la cantidad de energía en un sistema de trabajo útil en condiciones estándar. El uso de valores de G°ÿ
sistema (o celda) disponible para realizar un trabajo útil a temperatura y presión permite comparar reacciones sin preocuparse por las variaciones en G debido
constantes. Por lo tanto, el cambio de entropía (S) es una medida de la a las diferencias en las condiciones ambientales.
proporción del cambio de energía total que el sistema
La relación entre G°ÿ y Keq viene dada por esta ecuación.
no se puede usar para realizar el trabajo. Cambios de entropía y energía libre
no dependa de cómo se pone el sistema de principio a fin. Una reacción G°ÿ 2.303RT logKeq
ocurrirá espontáneamente si la energía libre del sistema
disminuye durante la reacción o, en otras palabras, si G es negativa. R es la constante de los gases (1,9872 cal/mol-grado o 8,3145 J/mol-grado) y
De la ecuación se deduce que una reacción con un gran positivo T es la temperatura absoluta. La inspección de esta ecuación muestra que
el cambio en la entropía normalmente tenderá a tener un valor G negativo cuando G°ÿ es negativo, la constante de equilibrio es
y por lo tanto ocurren espontáneamente. Una disminución de la entropía mayor que uno y la reacción se completa como está escrita. Eso
tienden a hacer que G sea más positivo y la reacción menos favorable. se dice que es una reacción exergónica (figura 8.4). En un endergónico
Puede ser útil pensar en la relación entre la entropía
(S) y el cambio de energía libre (G) en términos más concretos. Considere el
mito griego de Sísifo, rey de Corinto. Para Reacciones exergónicas Reacciones endergónicas
sus variados crímenes contra los dioses, fue condenado a rodar un
A+B C+D A+B C+D
gran roca a la cima de una colina empinada por toda la eternidad. Esto
[DISCOS COMPACTOS] [DISCOS COMPACTOS]
representa un cambio muy negativo en la entropía: una roca colocada en el Keq = > 1.0 Keq = < 1.0
[A] [B] [A] [B]
cima de una colina no es aleatoria ni desordenada, y esta actividad
(reacción) tiene una G muy positiva. Es decir, Sísifo tuvo que ÿ es negativo. G°ÿ ÿ es positivo. G°ÿ
poner mucha energía en el sistema. Desafortunadamente para Sísifo, como

Tan pronto como la roca estuvo en la cima de la colina, espontáneamente Figura 8.4 G°ÿ y Equilibrio. La relación de G°ÿ a
rodó colina abajo. Esto representa un cambio positivo en la entropía y una G el equilibrio de las reacciones. Tenga en cuenta las diferencias entre
negativa. Sísifo no necesitaba poner energía en Reacciones exergónicas y endergónicas.
El papel del ATP en el metabolismo 171
reacción G°ÿ es positiva y la constante de equilibrio es menor que NH2 adenina

una. Es decir, la reacción no es favorable y se obtendrá poco producto. 6 norte
norte
formado en equilibrio bajo condiciones estándar. Tenga en cuenta 1 5 7

8
que el valor de G°ÿ muestra solo dónde se encuentra la reacción en el equilibrio, 2 4 9
3 norte
no qué tan rápido la reacción alcanza el equilibrio. norte
OH OH OH H
HO PO PAGS O punto de contacto H

8.5 EL PAPEL DEL ATP EN EL METABOLISMO 5ÿ
O O O
Como ya se ha señalado, existe una diversidad metabólica considerable en el O
mundo microbiano. Sin embargo, existen varios principios bioquímicos comunes 4ÿ 1ÿ
H ribosa H
a todos los tipos de metabolismo. Estos son (1) el uso H
3ÿ 2ÿ
H
de ATP para almacenar la energía capturada durante las reacciones exergónicas por lo que
se puede utilizar para impulsar reacciones endergónicas; (2) la organización OH OH
de reacciones metabólicas en vías y ciclos; (3) la catálisis de reacciones
metabólicas por enzimas; y (4) la importancia
Monofosfato de adenosina (AMP)
de las reacciones de oxidación-reducción en la conservación de la energía. Esta
La sección considera el papel del ATP en el metabolismo.
Difosfato de adenosina (ADP)
La energía se libera de la fuente de energía de una célula en reacciones
exergónicas (es decir, aquellas reacciones con una G negativa). En vez de
Trifosfato de adenosina (ATP)
desperdiciando esta energía, gran parte de ella queda atrapada en una forma práctica que (a) Enlace que libera energía cuando se rompe
permite su transferencia a los sistemas celulares realizando trabajo. Estos
sistemas llevan a cabo reacciones endergónicas (es decir, anabolismo), y la
energía capturada por la célula se utiliza para impulsar estas reacciones a
terminación. En los organismos vivos, esta forma práctica de energía es
adenosina 5ÿ-trifosfato (ATP; figura 8.5). En cierto sentido, las células
llevar a cabo ciertos procesos para que puedan "ganar" ATP y llevar
a cabo otros procesos en los que "gastan" su ATP. Así el ATP es
a menudo se la conoce como la moneda de energía de la célula. En la economía
de la célula, el ATP sirve como enlace entre las reacciones exergónicas y las
reacciones en dergónicas (figura 8.6).
¿Qué hace que el ATP sea adecuado para este papel como moneda energética? atp
es una molécula de alta energía. Es decir, se descompone o hidroliza.
(B)
casi completamente a los productos adenosín difosfato
(ADP) y ortofosfato (Pi ) con un G°ÿ de 7,3 kcal/mol.
Figura 8.5 Trifosfato de adenosina y adenosina
difosfato. (a) Estructura de ATP, ADP y AMP. los dos rojos
ATP H2O Pi ADP
Los enlaces ( ) se rompen más fácilmente o tienen un alto grupo fosfato
La referencia al ATP como una molécula de alta energía no significa potencial de transferencia (ver texto). Los átomos del anillo de pirimidina han sido
que hay una gran cantidad de energía almacenada en un enlace particular de numerados como tienen los átomos de carbono en la ribosa. (b) Un modelo de ATP.
ATP. Simplemente indica que la eliminación del fosfato terminal se completa con El carbono está en verde; hidrógeno en azul claro; nitrógeno en azul oscuro;
un gran cambio de energía libre estándar negativo; es decir, la reacción es oxígeno en rojo; y fósforo en amarillo.
fuertemente exergónica. Porque
ATP transfiere fácilmente su fosfato al agua, se dice que tiene un
alto potencial de transferencia de grupos fosfato, definido como el negativo forilación. Así ATP, ADP y Pi forman un ciclo de energía (figura 8.7). Las
de G°ÿ para la eliminación hidrolítica de fosfato. una molecula reacciones de combustible conservan la energía liberada de
con un mayor potencial de transferencia de grupo donará fosfato a una fuente de energía usándola para sintetizar ATP a partir de ADP y
uno con un potencial menor. Pi . Cuando se hidroliza el ATP, la energía liberada impulsa
Aunque el cambio de energía libre para la hidrólisis de ATP procesos gónicos tales como el anabolismo, el transporte y la mecánica.
es bastante grande, hay numerosas reacciones que liberan incluso trabajo. Se describirán los mecanismos para sintetizar ATP.
mayores cantidades de energía libre. Esta energía se utiliza para resintetizar con más detalle en el capítulo 9.
ATP a partir de ADP y Pi durante el catabolismo y otros procesos de conservación

de energía. Asimismo, el catabolismo puede generar 1. ¿Qué es la termodinámica? Resumir la primera y segunda leyes de
moléculas con un potencial de transferencia de grupos fosfato que es incluso la termodinámica.
superior a la del ATP. Las células utilizan estas moléculas para regenerarse. 2. Definir entropía y entalpía. ¿Las células vivas aumentan la entropía dentro de
ATP de ADP por un mecanismo llamado fósforo a nivel de sustrato sí mismas? ¿Aumentan la entropía en el medio ambiente?
Reacción endergónica sola Aceptor ne ÿdonante
A+B C+D
El par aceptor y donante se conoce como par redox.
(tabla 8.1). Cuando un aceptor acepta electrones, se convierte en el
Reacción endergónica acoplada a ruptura de ATP donante de la pareja. La constante de equilibrio de la reacción es
llamado potencial de reducción estándar (E0) y es una medida de
atp
ADP+ Pi
la tendencia del donante a perder electrones. El estándar de referencia
A+B C+D para potenciales de reducción es el sistema de hidrógeno con un Eÿ0 (el
potencial de reducción a pH 7,0) de 0,42 voltios o 420 milivoltios.
Figura 8.6 ATP como agente de acoplamiento. El uso de ATP para

2H 2e ÿH2
hacer que las reacciones endergónicas sean más favorables. esta formado por
reacciones exergónicas y luego se utilizan para impulsar reacciones endergónicas.
En esta reacción cada átomo de hidrógeno aporta un protón (H )
y un electrón (e). Como se acaba de señalar, el potencial de reducción
estándar se mide en voltios o milivoltios. El voltio es una unidad de potencial
ADP+ Pi
eléctrico o fuerza electromotriz. Por lo tanto, las parejas redox
Respiración aeróbica como el sistema de hidrógeno son una fuente potencial de energía.
trabajo quimico
Respiración anaerobica El potencial de reducción tiene un significado concreto. Las parejas redox
Fermentación trabajo de transporte
Trabajo mecánico con potenciales de reducción más negativos donarán electrones
Fotosíntesis
a parejas con potencialidades más positivas y mayor afinidad por
quimiolitotrofia
atp electrones Así, los electrones tienden a moverse desde los donantes en la parte superior de
la lista en la tabla 8.1 a los aceptantes en la parte inferior porque este último
tienen potenciales más positivos. Esto puede expresarse visualmente en
Figura 8.7 El ciclo de energía de la célula. El ATP se forma a partir de
la forma de una torre de electrones en la que la reducción más negativa
energía disponible durante la respiración aeróbica, anaeróbica
respiración, fermentación, quimiolitotrofia y fotosíntesis.
Su descomposición en ADP y fosfato (Pi ) hace química, Tabla 8.1 Redox seleccionados biológicamente importantes
transporte, y trabajo mecánico posible.
parejas
a
pareja redox Eÿ0 (Voltios)
3. Defina energía libre. ¿Qué son las reacciones exergónicas y endergónicas?
2H 2e ÿ H2 0.42
4. Suponga que una reacción química tuvo un gran valor negativo de G°ÿ. ¿La
reacción es endergónica o exergónica? ¿Qué indicaría esto acerca de su Ferredoxina (Fe3 ) e ÿ ferredoxina (Fe2 ) 0.42
constante de equilibrio? NAD(P) H 2e ÿ NAD(P)H 0.32
5. Describe el ciclo de la energía y el papel del ATP en él. ¿Qué características del ATP S 2H 2e ÿ H2S 0.274
hacerlo adecuado para este papel? ¿Por qué se dice que el ATP es una molécula de alta energía? Acetaldehído 2H 2e ÿ etanol 0.197
Piruvato 2H 2e ÿ lactato2 0.185
FAD 2H 2e ÿ FADH2 0.18b
8.6 REACCIONES DE OXIDACIÓN-REDUCCIÓN , Oxaloacetato2 2H 2e ÿ malato2 0.166
PORTADORES DE ELECTRONES Y ELECTRONES Fumarato2 2H 2e ÿ succinato2 0.031
SISTEMAS DE TRANSPORTE Citocromo b (Fe3 ) e ÿ citocromo b (Fe2 ) 0.075
Ubiquinona 2H 2e ÿ ubiquinona H2 0.10
Los cambios de energía libre están relacionados con los equilibrios de todas las sustancias químicas.
Citocromo c (Fe3 ) e ÿ citocromo c (Fe2 ) 0.254
reacciones que incluyen los equilibrios de las reacciones de oxidación-
Citocromo a (Fe3 ) e ÿ citocromo a (Fe2 ) 0.29
reducción. La liberación de energía de una fuente de energía normalmente
implica reacciones de oxidación-reducción. Reducción de oxidación Citocromo a3 (Fe3 ) e ÿ citocromo a3 (Fe2 ) 0.35
Las reacciones (redox) son aquellas en las que los electrones se mueven de un NO3 2H 2e ÿ NO2 H2O 0.421
donante de electrones a un aceptor de electrones.1 Por convención, tal NO2 8H 6e ÿ NH4 2H2O 0.44
La reacción se escribe con el donante a la derecha del aceptor y Fe3 e ÿ Fe2 0.771c
el número (n) de electrones (e) transferidos. O2 4H 4e ÿ 2H2O 0.815
a Eÿ0 es el potencial de reducción estándar a pH 7,0.

1 B
El valor de FAD/FADH2 se aplica al cofactor libre porque puede variar considerablemente cuando se une
En una reacción de oxidación-reducción, el donador de electrones a menudo se
a una apoenzima.
denomina agente reductor o reductor porque está donando electrones al aceptor y, C
El valor de Fe libre, no Fe complejado con proteínas (p. ej., citocromos).
por lo tanto, reduciéndolo. El aceptor de electrones se llama agente oxidante u oxidante porque
está quitando electrones del donante y oxidándolo.
Reacciones de oxidación-reducción, transportadores de electrones y sistemas de transporte de electrones 173
ÿ
Mejor E0 (Voltios) se libera energía potencial y libre. El G°ÿ de la reacción es directamente
donantes de electrones
–0.5 relacionado con la magnitud de la diferencia entre la reducción
2H+/H2 [–0,42]
potenciales de los dos pares (Eÿ0). Cuanto mayor sea Eÿ0,
–0.4
mayor es la cantidad de energía libre disponible, como es evidente
NAD+/NADH [–0,32] –0.3 de la ecuacion
–0.2
FAD/FADH2 [–0,18] 2e-
G°ÿ nF Eÿ0
–0.1
0.0
donde n es el número de electrones transferidos y F es la constante de día de
Fumarato/succinato [0.031]
Fara (23 062 cal/mol-voltio o 96 494 J/mol-voltio). Para
CoQ/CoQH2 [0,10] +0.1
NADH + H+ +
1 cada cambio de 0,1 voltios en Eÿ0, hay un correspondiente 4,6 kcal
/ 2O2
+0.2 cambio en G°ÿ cuando ocurre una transferencia de dos electrones. Esto es
Cytc (Fe3+)/Cytc ( Fe2 +) [0,254]
+0.3 H2O + NAD+ similar a la relación de G°ÿ y Keq en otros químicos
(ÿE0
ÿ
= 1,14 V) reacciones: cuanto mayor es la constante de equilibrio, mayor es la
+0.4
NO3 – /NO2 – [0,421] G°ÿ. La diferencia en los potenciales de reducción entre
+0.5 NAD /NADH y 1/2O2/H2O son 1,14 voltios, un valor E'0 grande .
Cuando los electrones pasan del NADH al O2, se pone a disposición una gran
+0.6
cantidad de energía libre para sintetizar ATP.
+0.7 Hemos centrado nuestra atención en la reducción de O2 por NADH
1
Fe3+/Fe2+ [0,771]
+0.8 porque NADH juega un papel central en el metabolismo de muchos organismos,
/ 2O2/ H2O [0,815]
especialmente quimioorganotrofos. Muchos quimioorganotrofos utilizan la
+0.9
Mejor glucosa como fuente de energía. A medida que se cataboliza la glucosa,
aceptores de electrones +1.0 esta oxidado. Muchos de los electrones liberados por la glucosa son aceptados
por el NAD, que luego, se reduce a NADH. NADH siguiente
transfiere los electrones al O2. Sin embargo, no lo hace directamente. En cambio,
Figura 8.8 Movimiento de electrones y potenciales de reducción.
La torre de electrones vertical en esta ilustración tiene la mayor los electrones se transfieren al O2 a través de una serie de transportadores de
electrones. Los transportadores de electrones están organizados en un sistema llamado
potenciales de reducción negativos en la parte superior. Los electrones
sistema de transporte de electrones (ETS) o cadena de transporte de electrones
moverse espontáneamente de los donantes más arriba en la torre (más
(ETC). Los portadores están organizados de tal manera que el primer portador
potenciales negativos) a los aceptores más bajos en la torre (más
de electrones tiene el E'0 más negativo, y cada portador sucesivo es ligeramente
potenciales positivos). Es decir, el donante siempre está más arriba en el
menos negativa (figura 8.9). De esta forma, la energía potencial almacenada en
torre que el aceptor. Por ejemplo, NADH donará electrones
el par redox cuyos electrones inician el flujo de electrones se libera
oxígeno y formar agua en el proceso. Algunos donantes típicos y
y se utiliza para formar ATP.
los aceptores se muestran a la izquierda, y sus potenciales redox son
Los ETS de los quimioorganotrofos se encuentran en el plasma
dado entre paréntesis.
membrana en procariotas y las membranas mitocondriales internas en eucariotas.
Los sistemas de transporte de electrones también juegan un papel fundamental
Los potenciales de ción están en la parte superior (figura 8.8). Los electrones se mueven de
papel en el metabolismo de los quimiolitotrofos y fotótrofos, donde
donantes a aceptantes por el gradiente potencial o caer por el
se utilizan para conservar energía de fuentes de energía inorgánicas y
torre a potenciales más positivos. Considere el caso del portador de electrones
luz, respectivamente. Los ETS se encuentran en la membrana plasmática
nicotinamida adenina dinucleótido (NAD ). los
o sistemas de membrana interna de quimiolitotrofos, que son todos
El par NAD/NADH tiene un Eÿ0 muy negativo y por lo tanto puede
procariotas. Se encuentran en la membrana plasmática y en el interior
dan electrones a muchos aceptores, incluido el O2.
sistemas de membrana de fotótrofos procarióticos y en el tilacoides
NAD 2H 2e ÿNADH H Eÿ0 0,32 voltios membranas de cloroplastos en fotótrofos eucarióticos (figura 8.9).
Los portadores que componen los ETS difieren en cuanto a su naturaleza
1/2O2 2H 2e ÿH2O E'0 0,82 voltios
, químico
química y la forma en que transportan los electrones. NAD y su pariente
nicotinamida adenina dinucleótido fosfato
Debido a que el potencial de reducción de NAD/NADH es más negativo que el
(NADP ), contienen un anillo de nicotinamida (figura 8.10). Este anillo
de 1/2 O2/H2O, los electrones fluirán desde NADH (el
acepta dos electrones y un protón de un donante (p. ej., un intermediario
donante) a O2 (el aceptor) como se muestra en la figura 8.8.
formado durante el catabolismo de la glucosa), y se libera un segundo protón.
NADH H 1/2O2 ÿ H2O NAD Dinucleótido de flavina y adenina (FAD) y

El mononucleótido de flavina (FMN) tiene dos electrones y dos
Como el par NAD/NADH tiene un Eÿ0 relativamente negativo, protones en el sistema de anillo complejo que se muestra en la figura 8.11.
almacena más energía potencial que los pares redox con valores Eÿ0 menos Las proteínas que contienen FAD y FMN a menudo se denominan
negativos (o más positivos) . De ello se deduce que cuando los electrones flavoproteínas. La coenzima Q (CoQ) o ubiquinona es una quinona que transporta dos
pasar de un donante a un aceptor con una po redox más positiva electrones y dos protones en muchas cadenas de transporte de electrones
Membrana mitocondrial
externa
Membrana mitocondrial
interna
Membrana externa
Crista
crestas
Espacio
intermembrana de la matriz
C
un a3
B
FQ
Espacio
intermembrana Pared celular
c1
(compartimento exterior)
Matriz
(compartimento interior)
Matriz
NADH deshidrogenasa Membrana plasmática
( E' más negativo ) 0 Citocromos a y a3 (menos con ETS
negativo Eÿ ) 0
FMN Citocromo c1
ÿ
E0 más negativo
Coenzima Q Citocromo c
ÿ
Citocromo b Menos negativo E0

(a) (B)
Figura 8.9 Sistemas de transporte de electrones. Los sistemas de transporte de electrones (ETS) se encuentran en membranas. Los
electrones fluyen desde el portador de electrones que tiene el potencial de reducción más negativo al portador que tiene el potencial de reducción más
positivo. Durante los procesos respiratorios (respiración aeróbica, respiración anaeróbica y quimiolitotrofia), una molécula exógena como el oxígeno sirve
como aceptor terminal de electrones. (a) El ETS mitocondrial. (b) Un STE bacteriano típico.
(figura 8.12). Los citocromos y varios otros transportadores usan átomos de hierro para
3. Cuando los electrones fluyen del par redox NAD/NADH al par redox O2/H2O , ¿la
transportar electrones, un electrón a la vez, mediante reacciones reversibles de oxidación y
reacción comienza con NAD o con NADH? ¿Qué se produce, O2 o H2O?
reducción.
4. ¿Cuál de los siguientes sería el mejor donador de electrones? ¿Cuál sería el peor?
Fe3 (hierro férrico) y ÿFe2 (hierro ferroso)
ubiquinona/ubiquinonaH2, NAD/NADH, FAD/FADH2, NO3 /NO2 . Explique sus
En los citocromos, estos átomos de hierro forman parte de un grupo hemo (figura 8.13) u respuestas.
otros anillos similares de hierro-porfirina. Varios citocromos diferentes, cada uno de los cuales 5. En términos generales, ¿cómo se relaciona G°ÿ con Eÿ0? ¿Cuál es el Eÿ0 cuando los
consta de una proteína y un anillo de firina de hierro, son una parte importante de las cadenas electrones fluyen desde el par redox NAD/NADH al par redox Fe3 /Fe2 ? ¿Cómo se
de transporte de electrones. compara esto con Eÿ0 cuando los electrones fluyen desde el par redox Fe3 /Fe2 al
Algunas proteínas transportadoras de electrones que contienen hierro carecen de un grupo par O2/H2O ? ¿Cuál producirá la mayor cantidad de energía libre para la célula?
hemo y se denominan proteínas de hierro no hemo. Ferredoxin es una proteína de hierro no

6. Nombre y describa brevemente los principales transportadores de electrones que se encuentran en las células.
hemo activa en el transporte de electrones fotosintéticos y varios otros procesos de transporte
¿Por qué el NAD es un buen transportador de electrones? ¿Por qué la ferredoxina es un mejor transportador
de electrones. Aunque sus átomos de hierro no están unidos a un grupo hemo, aún sufren
de electrones?
reacciones de oxidación y reducción reversibles. Al igual que los citocromos, solo transportan
un electrón a la vez. Esta diferencia en el número de electrones y protones transportados es de
gran importancia en el funcionamiento de las cadenas de transporte de electrones y se analiza
con más detalle en el capítulo 9.
8.7 ENZIMAS
Recuerde que una reacción exergónica es aquella con G°ÿ negativo y una constante de
equilibrio mayor que uno. Una reacción exergónica se completará en la dirección escrita (es
1. Escriba una ecuación generalizada para una reacción redox. Defina el potencial de decir, hacia la derecha de la ecuación). Sin embargo, a menudo se pueden combinar los
reducción estándar. reactivos para una reacción exergónica sin un resultado obvio. Por ejemplo, la hidrólisis de
2. ¿Cómo se relaciona la dirección del flujo de electrones entre los pares redox con el polisacáridos en
potencial de reducción estándar y la liberación de energía libre?
H O H O H H O
C NH2 C NH2
C NH2
H
Nicotinamida S + S + + H+
O H
n+ norte
HO PAGS O CH2 O n+ Sustrato Sustrato

reducido R oxidado R
ribosa
O
NAD+ NADH
HO correos OH OH
(B)
NH2
O norte
norte
adenina
CH2 unidad de
O norte
norte nicotinamida
ribosa
OH OH
NADP tiene un fosfato aquí.
(a)
unidad de
ribosa
unidad de unidad de
adenina ribosa
Figura 8.10 Estructura y función de NAD. (a) La estructura de NAD

y NADP. NADP se diferencia de NAD en que tiene un fosfato extra
en una de sus unidades de azúcar ribosa. (b) NAD puede aceptar unidad de pirofosfato
electrones y un hidrógeno de un sustrato reducido (SH2).
Estos se transportan en el anillo de nicotinamida. ( c ) Modelo de
NAD cuando se une a la enzima lactato deshidrogenasa. (C)
H
O
norte
CH3 NUEVA HAMPSHIRE
CH3 O
norte norte
O H
O
CH3O _ CH3
CH3
norte
CH3 NUEVA HAMPSHIRE
CH3O _ (CH2 CH C CH2)n H

2e– + 2H+ + Anillo de isoaloxazina
CH3 O O H
norte norte
CH2
HC OH
ribosa NH2
HC OH norte
norte
HC OH O O
O
CH2 OP O correos CH2 O norte
norte
adenina
CH3O _ CH3
O– O–
CH3
2H+ + 2e– +
OH OH (CH2 CH C CH2)n H
CH3O _
ribosa
Figura 8.11 Estructura y función de FAD. La vitamina

riboflavina está compuesta por el anillo de isoaloxazina y su Figura 8.12 Estructura y función de la coenzima Q o ubiquinona.
azúcar ribosa adjunto. FMN es fosfato de riboflavina. La porción del La longitud de la cadena lateral varía entre organismos de n 6 a n
anillo directamente involucrada en las reacciones de oxidación-reducción es de color. 10
175
CH3 CH3 CH3 Grupo

químico (Ch)
CH CH CH
CH2 (CH2)3 (CH2)3 CH3

Sustrato 2 (S2) Sustrato 1 (S1)
HC OH H CH3
C C C 1 Una enzima
C C Complejo
con una coenzima
CH3 C C CH CH2 enzimático (E)
posicionada para
C norte
norte C
reaccionar con dos
sustratos.
HC Fe CH _
Coenzima (C)
O C norte norte C
Ch
HC C CH _
C C
S2
C C C
2 La coenzima
H S1
CH2 CH2 recoge un C
mi
grupo químico del
CH2 CH2
sustrato 1.
COOH COOH
Figura 8.13 La estructura del hemo. El hemo está compuesto por un Ch

anillo de porfirina y un átomo de hierro adjunto. Es el componente no S2
proteico de muchos citocromos. El átomo de hierro acepta y libera
S1
alternativamente un electrón. 3 La coenzima
prepara el C mi
grupo químico para

la transferencia al
los monosacáridos que lo componen son exergónicos y se producirán
sustrato 2.
espontáneamente. Sin embargo, un químico orgánico tendría que llevar a
cabo esta reacción en HCl 6 M ya 100 °C durante varias horas para que se S1
Ch
completara. Una celda, por otro lado, puede lograr la misma reacción a pH S2
neutro, a una temperatura mucho más baja y en solo fracciones de segundo.
¿Cómo pueden las células hacer esto? Pueden hacerlo porque fabrican
4 La acción final C
proteínas llamadas enzimas que aceleran las reacciones químicas. Las es que el grupo
mi
enzimas son de vital importancia para las células, ya que la mayoría de las se una al sustrato S2
reacciones biológicas ocurren muy lentamente sin ellas. De hecho, las 2; los sustratos
alterados (es decir,
enzimas hacen posible la vida. los productos) se S1
liberan de la enzima.
Estructura y clasificación de las enzimas Las

Figura 8.14 Coenzimas como transportadores.
enzimas se pueden definir como catalizadores proteicos que tienen una
gran especificidad para la reacción catalizada y las moléculas sobre las
que actúa. Un catalizador es una sustancia que aumenta la velocidad de
una reacción química sin alterarse permanentemente. Así, las enzimas coenzimas o como sus precursores. La niacina se incorpora a NAD y la
aceleran las reacciones celulares. Las moléculas que reaccionan se riboflavina a FAD. Los iones metálicos también pueden unirse a las
apoenzimas
denominan sustratos y las sustancias formadas son los productos. Proteínas (anexo I) y actuar como cofactores.
Muchas enzimas están compuestas únicamente de proteínas. Sin A pesar del gran número y la desconcertante diversidad de enzimas
embargo, algunas enzimas constan de una proteína, la apoenzima, y un presentes en las células, pueden ubicarse en una de seis clases generales
componente no proteico, un cofactor, necesario para la actividad catalítica. (tabla 8.2). Las enzimas generalmente se nombran en términos de los
La enzima completa que consta de la apoenzima y su cofactor se denomina sustratos sobre los que actúan y el tipo de reacción catalizada. Por ejemplo,
holoenzima. Si el cofactor está firmemente unido a la apoenzima, es un la lactato deshidrogenasa (LDH) elimina los hidrógenos del lactato.
grupo prostético. Si el cofactor está débilmente unido a la apoenzima y
puede disociarse de la proteína después de que se hayan formado los Lactato NAD ÿLDH piruvato NADH H
productos, se denomina coenzima. Muchas coenzimas pueden transportar
uno de los productos a otra enzima (figura 8.14). Por ejemplo, NAD es una La lactato deshidrogenasa también puede recibir un nombre más completo
coenzima que transporta electrones dentro de la célula. Muchas vitaminas y detallado, L-lactato:NAD oxidorreductasa. Este nombre describe los
que los humanos requieren sirven como sustratos y el tipo de reacción con aún más precisión.
Enzimas 177
Tabla 8.2 Clasificación de enzimas
Tipo de enzima Reacción catalizada por enzima Ejemplo de reacción
Oxidorreductasa Reacciones de oxidación-reducción Lactato deshidrogenasa:

Piruvato NADH H ÿlactato NAD
transferasa Reacciones que implican la transferencia de Aspartato carbamoiltransferasa: Aspartato carbamoilfosfato ÿ
grupos entre moléculas. fosfato de carbamoilaspartato
hidrolasa Hidrólisis de moléculas Glucosa-6-fosfatasa: Glucosa-6-fosfato H2O ÿ glucosa Pi
liasa Eliminación de grupos para formar dobles enlaces Fumarato hidratasa: L-malato ÿfumarato H2O
o adición de grupos a dobles enlaces
xy
c=c+x–y–c–c–
isomerasa Reacciones que implican isomerizaciones Alanina racemasa: L-alanina ÿD-alanina
ligasa Unión de dos moléculas usando energía ATP (o Glutamina sintetasa: glutamato NH3 ATP ÿ glutamina
la de otros nucleósidos trifosfatos) Pi ADP
El mecanismo de las reacciones enzimáticas

+
Es importante tener en cuenta que las enzimas aumentan la velocidad de las AB+
reacciones pero no alteran sus constantes de equilibrio. Si una reacción es
endergónico, la presencia de una enzima no cambiará su equilibrio Reacción sin enzima
ea
para que se puedan formar más productos. Las enzimas simplemente aceleran la
A+B Reacción con enzima
velocidad a la que avanza una reacción hacia su equilibrio final.
¿Cómo catalizan las reacciones las enzimas? Aunque un completo
respuesta sería larga y compleja, alguna comprensión de la
ÿGoÿ
mecanismo se puede ganar considerando el curso de un simple
reacción química exergónica.
C+D
AB discos compactos
Cuando las moléculas A y B se acercan para reaccionar,

Progreso de la reacción
forman un complejo de estado de transición, que se parece tanto a los sustratos
como a los productos (figura 8.15). Se requiere energía de activación para
Figura 8.15 Las enzimas reducen la energía de activación.
juntar las moléculas que reaccionan en la forma correcta.
Esta figura sigue el curso de una reacción química en la que A y
manera de llegar al estado de transición. El complejo del estado de transición
B se convierten en C y D. El complejo de estado de transición es
puede entonces resolver para producir los productos C y D. La diferencia
representado por AB‡ , y la energía de activación requerida para alcanzarlo,
en el nivel de energía libre entre reactivos y productos es G°ÿ.
Así, el equilibrio en nuestro ejemplo estará hacia los productos
por Ea. La línea roja representa el curso de la reacción en el
presencia de una enzima. Tenga en cuenta que la energía de activación es mucho
porque G°ÿ es negativo (es decir, los productos tienen una energía más baja
nivel que los sustratos).
menor en la reacción catalizada por enzimas.
Como se ve en la figura 8.15, A y B no se convertirán en C y

D si no se les suministra una cantidad de energía equivalente a
la energía de activación. Las enzimas aceleran las reacciones al disminuir lugar en su superficie llamado el sitio activo o sitio catalítico para
la energía de activación; por lo tanto, más moléculas de sustrato formar un complejo enzima-sustrato (figuras 8.16, 8.17; ver también
tienen suficiente energía para unirse y formar productos. Incluso anexo figura AI.19). Una enzima puede interactuar con su sustrato.
aunque la constante de equilibrio (o G°ÿ) no cambia, el equilibrio se alcanzará más de dos formas generales. Puede ser rígido y moldeado para ajustarse con precisión
rápidamente en presencia de una enzima el sustrato para que el sustrato correcto se una específicamente y sea
debido a esta disminución en la energía de activación. colocado correctamente para la reacción. Este mecanismo se conoce como
Los investigadores han trabajado arduamente para descubrir cómo las enzimas el modelo de cerradura y llave (figura 8.16). Una enzima también puede
baje la energía de activación de las reacciones, y el proceso se vuelve más claro. cambia de forma cuando se une al sustrato para que el sitio activo
Las enzimas unen los sustratos en un punto específico rodea y se adapta con precisión al sustrato. Esto ha sido llamado el
Sustratos
Sitio activo Enzima
Complejo enzima - sustrato
Producto
(a)
Figura 8.16 Modelo de bloqueo y llave de la función enzimática.

En este modelo, el sitio activo es una estructura relativamente rígida que
acomoda sólo aquellas moléculas con la correcta
forma correspondiente. La formación de la enzima-sustrato
se muestra el complejo y su conversión a producto.
modelo de ajuste inducido y es utilizado por la hexoquinasa y muchas otras

enzimas (figura 8.17). La formación de un complejo enzima-sustrato puede
reducir la energía de activación de muchas formas. Por ejemplo,
al unir los sustratos en el sitio activo, la enzima
es, en efecto, concentrarlos y acelerar la reacción. Un
Sin embargo, la enzima no concentra simplemente sus sustratos. Eso
también los une para que estén correctamente orientados con respecto a
entre sí para formar un complejo de estado de transición. Tal
(B)
la orientación reduce la cantidad de energía que requieren los sustratos para
alcanzar el estado de transición. Estos y otros sitios catalíticos Figura 8.17 El modelo de ajuste inducido de la función enzimática.
actividades aceleran una reacción cientos de miles de veces. (a) Un modelo de llenado de espacio de hexoquinasa de levadura y su sustrato
glucosa (púrpura). El sitio activo está en la hendidura formada por el
lóbulo pequeño (verde) y lóbulo grande (azul) de la enzima. (b) cuando
El efecto del medio ambiente en la actividad enzimática
la glucosa se une para formar el complejo enzima-sustrato, hexoquinasa
La actividad enzimática varía mucho con los cambios en el medio ambiente.
cambia de forma y rodea el sustrato.
factores, siendo uno de los más importantes la concentración de sustrato.
Como se enfatizará más adelante, las concentraciones de sustrato
son generalmente bajos dentro de las células. A concentraciones de sustrato en la concentración de sustrato no dan como resultado una mayor velocidad
muy bajas, una enzima produce un producto lentamente porque rara vez entra de reacción porque las moléculas de enzima disponibles se unen
en contacto con una molécula de sustrato. Si hay más moléculas de sustrato sustrato y convertirlo en producto lo más rápido posible.
presente, una enzima se une al sustrato con más frecuencia, y la reacción Es decir, la enzima está saturada con sustrato y opera a
la velocidad (generalmente expresada en términos de la tasa de formación del velocidad máxima (Vmax). La concentración de sustrato resultante
producto) es mayor que a una concentración de sustrato más baja. Por lo tanto curva es una hipérbola (figura 8.18). Es útil conocer la concentración de
la velocidad de una reacción catalizada por enzimas aumenta con la sustrato que necesita una enzima para funcionar adecuadamente.
concentración de sustrato (figura 8.18). Eventualmente aumenta aún más Por lo general, la constante de Michaelis (Km), la concentración de sustrato
Enzimas 179
ción requerida para que la enzima alcance la mitad de la velocidad máxima, tures a menudo tienen enzimas con temperatura óptima alta y gran
se utiliza como una medida de la afinidad aparente de una enzima por estabilidad al calor La influencia de los factores ambientales en el crecimiento (sección 6.5)
su sustrato. Cuanto menor sea el valor de Km , menor será el sustrato
concentración a la que una enzima cataliza su reacción. Se dice que las enzimas con un
Inhibición de enzimas
valor de Km bajo tienen una gran afinidad por
sus sustratos. Los microorganismos pueden ser envenenados por una variedad de productos químicos, y
Las enzimas también cambian de actividad con alteraciones en el pH y la temperatura muchos de los venenos más potentes son inhibidores de enzimas. Un inhibidor
(figura 8.19). Cada enzima funciona más rápidamente en un competitivo compite directamente con el sustrato en el sitio catalítico de una enzima y
pH específico óptimo. Cuando el pH se desvía demasiado del valor óptimo de una enzima, evita que se forme la enzima.
la actividad se ralentiza y la enzima puede dañarse. producto (figura 8.20). Los inhibidores competitivos suelen parecerse
Las enzimas también tienen una temperatura óptima para una actividad máxima. sustratos normales, pero no se pueden convertir en productos.
Si la temperatura sube demasiado por encima del óptimo, la enzima Los inhibidores competitivos son importantes en el tratamiento de muchas
la estructura se verá interrumpida y su actividad se perderá. Este fenómeno, enfermedades microbianas. Las sulfamidas como la sulfanilamida (figura 8.20b)
conocido como desnaturalización, puede ser causado por extremos de pH y parecerse al p-aminobenzoato, una molécula utilizada en la formación del
temperatura o por otros factores. El pH y la temperatura óptimos de coenzima ácido fólico. Los fármacos compiten con el p-aminobenzoato por
Las enzimas de un microorganismo a menudo reflejan el pH y la temperatura de el sitio catalítico de una enzima involucrada en la síntesis de ácido fólico. Esta
su hábitat. No es sorprendente que las bacterias crezcan mejor a temperatura alta. bloquea la producción de ácido fólico e inhibe el crecimiento bacteriano.
Los humanos no se ven perjudicados porque no sintetizan ácido fólico
sino más bien obtenerlo en su dieta. Fármacos antimicrobianos: antagonistas metabólicos
Vmax = la velocidad de formación del producto cuando el (sección 34.4)

La enzima está saturada con sustrato y Los inhibidores no competitivos también pueden afectar la actividad enzimática
operando lo más rápido posible
uniéndose a la enzima en algún lugar que no sea el activo
sitio. Esto altera la forma de la enzima, haciéndola inactiva o menos
activo. Estos inhibidores se denominan no competitivos porque no
no compiten directamente con el sustrato. Venenos de metales pesados como
mercurio frecuentemente son inhibidores no competitivos de las enzimas.
1. ¿Qué es una enzima? ¿Cómo acelera las reacciones? como son las enzimas
Vmax
Vmax • S
2 v = ¿llamado? Definir apoenzima, holoenzima, cofactor, coenzima, prótesis
Km + S grupo, sitio activo o catalítico y energía de activación.
2. Dibuja un diagrama que muestre cómo las enzimas catalizan reacciones alterando la energía
de activación. ¿Qué es un complejo de estado de transición? Usa el diagrama para explicar

Km = la concentración de sustrato requerida
por la enzima para operar a la mitad de por qué las enzimas no cambian los equilibrios de las reacciones que catalizan.
su velocidad máxima 3. ¿Cuál es la diferencia entre los modelos con cerradura y llave y los de ajuste inducido?
de la formación del complejo enzima-sustrato?
Concentración de sustrato 4. Defina los términos constante de Michaelis y velocidad máxima. ¿Cómo cambia
la actividad enzimática con la concentración del sustrato, el pH y la temperatura?
Figura 8.18 Cinética de Michaelis-Menten. la dependencia 5. ¿Qué propiedades especiales podría tener una enzima aislada de una bacteria
de la actividad enzimática sobre la concentración de sustrato. este sustrato psicrófila? ¿Necesitarán las enzimas reducir más o menos la energía de activación?
La curva se ajusta a la ecuación de Michaelis-Menten dada en la figura, en termófilos que en psicrófilos?
que relaciona la velocidad de reacción (v) con la concentración de sustrato 6. ¿Qué son los inhibidores competitivos y no competitivos y cómo inhiben las enzimas?
(S) utilizando la velocidad máxima y la constante de Michaelis (Km).
Figura 8.19 pH, temperatura y enzima

Actividad. La variación de la actividad enzimática con
Cambios en el pH y la temperatura. Los rangos de pH
y la temperatura son solo representativas.
Las enzimas difieren entre sí con respecto a
5 7 10 10 30 50 70
la ubicación de sus óptimos y la forma de
ÿ
sus curvas de pH y temperatura. pH Temperatura (ºC)

PAB
Diferencias estructurales
(sustrato)
S.S
norte
OJO
Droga sulfa oso S
Droga sulfa Droga sulfa mas probable que
(inhibidor) (inhibidor) unirse a la enzima
norte norte
H H H H
Enzima Enzima Enzima
Sulfanilamida PAB
(a) (B)
Figura 8.20 Inhibición competitiva de la actividad enzimática. (a) Un inhibidor competitivo suele tener una forma similar a la normal
sustrato de la enzima, y por lo tanto puede unirse al sitio activo de la enzima. Esto evita que el sustrato se una, y la reacción es
obstruido. (b) Estructura de sulfanilamida, un análogo estructural de PABA. El PABA es el sustrato de una enzima implicada en la biosíntesis del ácido fólico.
Cuando la sulfanilamida se une a la enzima, se inhibe la actividad de la enzima y se detiene la síntesis de ácido fólico.
8.8 LA NATURALEZA Y EL SIGNIFICADO DE Las vías metabólicas se pueden regular de tres formas principales:
REGULACIÓN METABÓLICA 1. Canalización metabólica: este fenómeno influye en la actividad de la vía

mediante la localización de metabolitos y enzimas en diferentes partes de una
Los microorganismos deben regular su metabolismo para conservar materia prima
célula.
materiales y energía y para mantener un equilibrio entre varios
2. Regulación de la cantidad de síntesis de una enzima particular; en otras
componentes celulares. Porque viven en ambientes donde el
palabras, la transcripción y la traducción pueden ser
Los nutrientes, las fuentes de energía y las condiciones físicas a menudo cambian
regulado. Estos dos procesos funcionan en la síntesis de enzimas. La
rápidamente, deben monitorear continuamente
regulación a este nivel es relativamente lenta, pero ahorra
condiciones y responder en consecuencia. Esto implica activar o
la célula considerable energía y materia prima.
inactivando vías según sea necesario. Por ejemplo, si una fuente de energía en
3. Estimulación directa o inhibición de la actividad de enzimas críticas: este tipo
particular no está disponible, las enzimas requeridas para su uso no están disponibles.
de regulación altera rápidamente la actividad de la vía. A menudo se le llama
necesarios y su posterior síntesis es un desperdicio de carbono, nitrógeno,
regulación postraduccional porque
y energía De manera similar, sería un gran desperdicio para un microorganismo
ocurre después de que la enzima ha sido sintetizada.
sintetizar las enzimas requeridas para fabricar un
cierto producto final si ese producto final ya estaba presente en cantidades En este capítulo presentamos la canalización metabólica y
adecuadas. control de la actividad enzimática. Discusión de la enzima de regulación
El impulso para mantener el equilibrio y conservar energía y materia es La síntesis sigue las descripciones de la síntesis de ADN, ARN y proteínas y se
evidente en las respuestas reguladoras de una bacteria como puede encontrar en el capítulo 12.
E. coli. Si la bacteria crece en un medio muy simple que contiene solo glucosa
como fuente de carbono y energía, sintetizará todos los componentes celulares
necesarios en cantidades equilibradas.
8.9 CANALIZACIÓN METABÓLICA
Sin embargo, si se agrega el aminoácido triptófano al medio,
la ruta que sintetiza el triptófano se inhibirá inmediatamente y la síntesis de las Uno de los mecanismos de canalización metabólica más comunes es que
enzimas de la ruta también se ralentizará o disminuirá. de compartimentación, la distribución diferencial de enzimas y
cesar. Asimismo, si E. coli se transfiere a un medio que contiene metabolitos entre estructuras celulares separadas u orgánulos. La compartimentación
sólo el azúcar lactosa, sintetizará las enzimas necesarias es particularmente importante en los microorganismos eucarióticos.
para el catabolismo de este nutriente. Por el contrario, cuando E. coli crece en con sus muchos orgánulos unidos a la membrana. Por ejemplo, grasos
un medio que posee tanto glucosa como lactosa, glucosa (la catabolismo ácido se encuentra dentro de la mitocondria, mientras que los ácidos grasos
azúcar que soporta el crecimiento más rápido) se cataboliza primero. los La síntesis de ácido se produce en la matriz citoplasmática. El periplasma en
el cultivo usará lactosa solo después de que el suministro de glucosa haya sido los procariotas también pueden considerarse un ejemplo de compartimentación.
exhausto. La compartimentación hace posible la simultánea, pero separada
Control de la Actividad Enzimática 181
arate, operación y regulación de vías similares. Es más,

Vmax
las actividades de la ruta pueden coordinarse a través de la regulación de la
transporte de metabolitos y coenzimas entre compartimentos celulares. Suponga
que dos vías en diferentes compartimentos celulares requieren NAD para la
actividad. La distribución de NAD entre los dos
Entonces, los compartimentos determinarán la actividad relativa de estas vías
competidoras, y la vía con acceso a la mayor cantidad de NAD determinará Vmax
ser favorecido La pared celular bacteriana (sección 3.6); la pared celular de las arqueas (sección 3.7) 2
La canalización también ocurre dentro de compartimentos como la matriz

citoplasmática. La matriz es un material denso estructurado con
muchos subcompartimentos. En eucariotas también se subdivide por
el retículo endoplásmico y el citoesqueleto. Metabolitos y
las coenzimas no se difunden rápidamente en tal ambiente, y
los gradientes de metabolitos se acumularán cerca de enzimas o sistemas
enzimáticos localizados. Esto ocurre porque las enzimas en un sitio específico un kilómetro b
convertir sus sustratos en productos, lo que resulta en disminuciones en la
[Sustrato]
concentración de uno o más metabolitos y aumentos en otros.
Por ejemplo, las concentraciones del producto serán altas cerca de una enzima.
Figura 8.21 Control de la actividad enzimática por sustrato
y disminuyen al aumentar la distancia a él. La matriz citoplasmática, microfilamentos,
Concentración. Una curva de saturación enzima-sustrato con la
filamentos intermedios y microtúbulos (sección 4.3)
constante de Michaelis (Km) y la velocidad equivalente a la mitad de la
La canalización puede generar marcadas variaciones en las concentraciones
velocidad máxima (Vmax) indicada. La velocidad inicial de la reacción
de metabolitos y, por lo tanto, afectar directamente la actividad enzimática. Sustrato
(v) se representa frente a la concentración de sustrato [Sustrato].
3 6
los niveles son generalmente alrededor de 10 moles/litro (M) a 10 M o incluso
La velocidad máxima es la mayor velocidad alcanzable con una velocidad fija.
más bajo. Por lo tanto, pueden estar en el mismo rango que las concentraciones de
cantidad de enzima bajo condiciones definidas. Cuando el sustrato
enzimas e iguales o menores que las constantes de Michaelis (Km) de muchos
concentración es igual o menor que la Km, la actividad de la enzima
enzimas (figura 8.18). En estas condiciones la concentración de
variará casi linealmente con la concentración de sustrato. Suponer
El sustrato de una enzima puede controlar su actividad porque el sustrato el sustrato aumenta en concentración del nivel A al B. Debido a que
la concentración está en la parte ascendente de la curva de saturación del sustrato
estas concentraciones están en el rango de los Km, un aumento significativo
hiperbólico (figura 8.21). A medida que aumenta el nivel del sustrato, es
en los resultados de la actividad enzimática. Una caída en la concentración de B a A
convertido en producto más rápidamente; una disminución en la concentración de
Disminuir la tasa de formación de productos.
sustrato conduce automáticamente a una menor actividad enzimática. Si dos
enzimas en rutas diferentes usan el mismo metabolito, pueden
competir directamente por él. El camino ganador de esta competencia—el pero es importante recordar que no todas las proteínas o enzimas funcionan en
uno con la enzima que tiene el valor de Km más bajo para el metabolito, operará rutas metabólicas. En cambio, están involucrados
más cerca de su capacidad total. Así canalizando dentro de un en comportamientos celulares. Al final de esta sección, consideraremos el
compartimento celular puede regular y coordinar el metabolismo a través de regulación de uno de estos comportamientos: la quimiotaxis.
variaciones en los niveles de metabolitos y coenzimas.
1. Mencione tres formas en que se puede regular una vía metabólica. Regulación alostérica
2. Definir los términos canalización metabólica y compartimentación. Como son La mayoría de las enzimas reguladoras son enzimas alostéricas. la actividad de un
que participan en la regulación del metabolismo? La enzima alostérica es alterada por una pequeña molécula conocida como efector
o modulador. El efector se une reversiblemente por medio no covalente.
fuerza a un sitio regulador separado del sitio catalítico y provoca
un cambio en la forma o conformación de la enzima (figura 8.22).
8.10 CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Como resultado, la actividad del sitio catalítico se altera. Un efector positivo aumenta
Ajuste de la actividad de enzimas reguladoras y otras proteínas la actividad enzimática, mientras que un efector negativo disminuye la actividad o
controla el funcionamiento de muchas vías metabólicas y celulares inhibe la enzima. Estos cambios en la actividad
procesos. Este tipo de regulación es un ejemplo de postraduccional. a menudo resultan de alteraciones en la afinidad aparente de la enzima
regulación porque ocurre después de que se sintetiza la proteína. Ahí para su sustrato, pero también pueden ocurrir cambios en la velocidad máxima.
Hay una serie de mecanismos reguladores postraduccionales. Algunos son La curva de saturación de sustrato para una enzima alostérica es de diez
irreversible; por ejemplo, la escisión de una proteína puede activar sigmoidales en lugar de hiperbólica como la de una enzima no reguladora.
o inhibir su actividad. Otros tipos de control postraduccional son reversibles. En enzima. Por lo tanto, la concentración de sustrato requerida para que una enzima
esta sección, consideramos ejemplos de dos importantes medidas de control reguladora funcione a la mitad de su velocidad máxima está dada
reversibles: regulación alostérica y covalente. su propio nombre: [S]0.5 o K0.5. El impacto de los efectores positivos y
modificación. Nuestro enfoque estará en la regulación de la ruta metabólica. efectores negativos en el K0.5 de una enzima alostérica pueden ser fácilmente
visto con una de las enzimas reguladoras alostéricas mejor estudiadas: la

aspartato carbamoiltransferasa (ACTasa) de E. coli. La enzima cataliza la
sitio Sitio
catalítico regulatorio condensación de carbamoil fosfato con aspartato para formar carbamoilaspartato
(figura 8.23). Esta es la reacción determinante de la velocidad de la vía
biosintética del nucleótido de pirimidina en E. coli. La curva de saturación del
Efector o modulador
sustrato es sig moidal cuando se varía la concentración de cualquiera de los
sustratos (figura 8.24). Esto se debe a que la enzima tiene más de un sitio activo
Sustrato
y la unión de una molécula de sustrato a un sitio activo aumenta la unión del
sustrato en los otros sitios. Además, el trifosfato de citidina (CTP), un producto
final de la biosíntesis de pirimidina, inhibe la enzima, mientras que la purina ATP
la activa. Ambos efectores alteran el valor K0.5 de la enzima pero no su velocidad
máxima. CTP inhibe aumentando K0.5 (es decir, cambiando la curva de
saturación del sustrato a valores más altos). Esto hace que la enzima opere más
lentamente a una concentración de sustrato particular cuando está presente
CTP. El ATP activa la enzima moviendo la curva a valores de concentración de
sustrato más bajos para que la enzima sea máximamente activa en un rango de
concentración de sustrato más amplio.
Por lo tanto, cuando la vía es tan activa que la concentración de CTP aumenta
demasiado, la CTP actúa como un freno para disminuir la actividad de la ACTasa.
Figura 8.22 Regulación alostérica. La estructura y función de una Por el contrario, cuando el ATP del producto final de purina aumenta en relación
enzima alostérica. En este ejemplo, el efector o modulador primero se une a con el CTP, estimula la síntesis de CTP a través de sus efectos sobre la ACTasa.
un sitio regulador separado y provoca un cambio en la conformación de la Síntesis de purinas, pirimidinas y nucleótidos (sección 10.6)
enzima que da como resultado una alteración en la forma del sitio activo. El sitio La aspartato carbamoiltransferasa de E. coli proporciona un claro ejemplo
activo ahora puede unirse más eficazmente al sustrato. Este efector es un de sitios regulatorios y catalíticos separados en enzimas alostéricas. La enzima
efector positivo porque estimula la unión al sustrato y la actividad catalítica. es una proteína grande compuesta por dos subunidades catalíticas y tres
subunidades reguladoras (figura 8.25). el catalizador
O O
NH2 C C
Carbamoil –O Aspartato –O
fosfato jefe CH2 CH2
carbamoiltransferasa NH2
sintetasa +
– – + Pi
L-Glutamina + HCO + 2ATP O CH +
3
C CH
–
O norte
ARRULLO-
–O PAGS
O H2N ARRULLO-
H
O–
carbamoilaspartato
Fosfato de aspartato
carbamoilo
atp
CTP Monofosfato de uridina (UMP)
Figura 8.23 Regulación de ACTasa. La reacción de aspartato carbamoiltransferasa y su papel en la regulación de la biosíntesis
de pirimidina. El producto final CTP inhibe su actividad ( ) mientras que el ATP activa la enzima (). La carbamoil fosfato sintetasa también
es inhibida por productos finales de la ruta, como UMP.
Las subunidades contienen solo sitios catalíticos y no se ven afectadas por CTP. grupo ril, metilo o adenilo. La enzima con un grupo unido
y ATP. Las subunidades reguladoras no catalizan la reacción pero puede ser activado o inhibido.
poseen sitios reguladores a los que se unen CTP y ATP. cuando estos Una de las enzimas reguladoras más estudiadas es
los efectores se unen a las subunidades reguladoras, provocan cambios E. coli glutamina sintetasa, una enzima involucrada en la asimilación de nitrógeno.
conformacionales tanto en las subunidades reguladoras como catalíticas. los Es una enzima grande y compleja que consta de 12 subunidades, cada una de
La enzima puede cambiar reversiblemente entre una forma T menos activa y una las cuales puede ser modificada covalentemente por una enzima adenílica.
forma R más activa (figura 8.25b, c). Por tanto, el sitio regulador influye en un residuo ácido (figura 8.26). Cuando un residuo de ácido adenílico se une a todas
sitio catalítico que está a unos 6,0 nm de distancia. sus 12 subunidades, la glutamina sintetasa no es muy
activo. La eliminación de los grupos AMP produce glutamina sintetasa lilada
muerta más activa y se forma glutamina. Síntesis de aminoácidos: asimilación de
Modificación covalente de enzimas nitrógeno (sección 10.5)
Las enzimas reguladoras también se pueden activar y desactivar mediante Hay algunas ventajas de usar la modificación covalente para
modificación covalente reversible. Por lo general, esto ocurre a través de la la regulación de la actividad enzimática. Estas enzimas interconvertibles a
adición y eliminación de un grupo particular, típicamente un fosfo menudo también son alostéricas. Por ejemplo, la glutamina sintetasa también se
regula alostéricamente. Porque cada forma puede
responder de manera diferente a los efectores alostéricos, sistemas de covalentemente
Vmax
enzimas modificadas son capaces de responder a más estímulos en variados
y maneras sofisticadas. La regulación también puede ejercerse sobre las enzimas
que catalizan las modificaciones covalentes, lo que añade un segundo nivel de
+ATP
regulación al sistema.
+CTP
Inhibición por retroalimentación

Vmax
2 La tasa de muchas rutas metabólicas se ajusta a través del control.
de la actividad de las enzimas reguladoras descritas en el apartado anterior.
Cada vía tiene al menos una enzima marcapasos
que cataliza la reacción más lenta o limitante de la velocidad en la vía.
Porque otras reacciones proceden más rápidamente que el marcapasos
reacción, los cambios en la actividad de esta enzima alteran directamente la
velocidad con la que opera una vía. Por lo general, el primer paso en un
La vía es una reacción de marcapasos catalizada por una enzima reguladora. El
K0.5 K0.5 K0.5
producto final de la vía a menudo inhibe esta enzima reguladora, un proceso
[Sustrato] conocido como inhibición por retroalimentación o inhibición final .
inhibición del producto. La inhibición por retroalimentación asegura la
Figura 8.24 La cinética del aspartato de E. coli producción equilibrada de un producto final de la vía. Si el producto final se vuelve demasiad
carbamoiltransferasa. CTP, un efector negativo, aumenta la concentrada, inhibe la enzima reguladora y retarda su propia
valor K0.5 mientras ATP, un efector positivo, baja el valor K0.5.The Vmax síntesis. A medida que disminuye la concentración del producto final, la vía
permanece constante.
subunidad catalítica
Ubicación
aproximada del
sitio catalítico
Regulador
subunidad
Sitios regulatorios
(a) Vista superior (b) Vista lateral de la forma menos activa (c) Vista lateral de la forma más activa
Figura 8.25 Estructura y regulación de la aspartato carbamoiltransferasa de E. coli. (a) Un diagrama esquemático de la enzima que muestra
las seis cadenas polipeptídicas catalíticas (azul), las seis cadenas reguladoras (bronceado) y los sitios catalíticos y reguladores. La enzima se ve desde arriba.
Cada subunidad catalítica contiene tres cadenas catalíticas y cada subunidad reguladora tiene dos cadenas. (b) El estado T menos activo de la ACTasa visto desde el
lado. (c) El estado R más activo de la ACTasa. Las subunidades reguladoras han girado y han separado las subunidades catalíticas.
atp PPi
Residuos de tirosina a
glutamina glutamina los que se añaden grupos
sintetasa sintetasa adenilo
Mn2+
Sin grupos adenilo 12 grupos adenilo

unidos covalentemente unidos covalentemente
Elevado Bajo
Nivel de actividad
(a) (B)
Figura 8.26 Regulación de la actividad de la glutamina sintetasa.

La glutamina sintetasa consta de 12 subunidades, cada una de las cuales puede
estar adenilado. (a) A medida que aumenta el número de grupos adenilo, el
disminuye la actividad de la enzima. (b) Vista superior de la glutamina
sintetasa que muestra 6 de las 12 subunidades. Las otras seis subunidades se encuentran
directamente debajo de los seis que se muestran aquí. Para mayor claridad, las subunidades son
color alternando verde y azul. Cada uno de los seis sitios catalíticos
que se muestra tiene un par de iones Mn2+ (círculos rojos). Los grupos adenilo pueden ser
unido a ciertos residuos de tirosina (pequeñas estructuras rojas) en cada
subunidad (c) Vista lateral. (C)
la actividad vuelve a aumentar y se forma más producto. De este modo mando independiente. En tal situación, un exceso de un solo extremo
la inhibición de la retroalimentación coincide automáticamente con el suministro del producto final el producto reduce la actividad de la vía pero no bloquea completamente
con la demanda La aspartato car bamoiltransferasa de E. coli discutida anteriormente es función de la vía porque algunas isoenzimas todavía están activas.
un excelente ejemplo de producto final o inhibición de retroalimentación.
1. Defina lo siguiente: enzima alostérica, efectora o moduladora, y [S]0.5
Con frecuencia, una vía biosintética se ramifica para formar más de o K0.5.
un producto final. En tal situación, la síntesis del final de la ruta 2. ¿Cómo pueden verse influidas las enzimas reguladoras por la modificación covalente
los productos deben coordinarse con precisión. no seria bueno tener reversible? Qué grupo se usa para este propósito con la glutamina sintetasa, y
un producto final presente en exceso mientras que otro falta. ¿Qué forma de esta enzima es activa?
Las rutas biosintéticas ramificadas generalmente logran un equilibrio entre los productos 3. ¿Qué es una enzima marcapasos? ¿Inhibición por retroalimentación? ¿Cómo ajusta
finales mediante el uso de enzimas reguladoras en automáticamente la inhibición por retroalimentación la concentración de un producto final de la vía?
puntos de ramificación (figura 8.27). Si un producto final está presente en exceso, 4. ¿Cuál es la importancia del hecho de que las enzimas reguladoras a menudo se
a menudo inhibe la enzima del punto de ramificación en la secuencia que conduce localicen en los puntos de ramificación de la ruta? ¿Qué son las isoenzimas y por qué son?
a su formación, regulando así su propia formación sin importante en la regulación de vías?
afectando la síntesis de otros productos. En la figura 8.27 observe que
ambos productos también inhiben la enzima inicial en la vía. Un exceso de un producto
ralentiza el flujo de carbono en todo el camino mientras inhibe la enzima de punto de
quimiotaxis
ramificación apropiada. Hasta aquí en nuestra discusión sobre la regulación de la actividad enzimática,
Debido a que se requiere menos carbono cuando una rama no está funcionando, nos hemos centrado en el control de las rutas metabólicas
la inhibición por retroalimentación de la enzima marcapasos inicial ayuda a igualar modulando la actividad de ciertas enzimas reguladoras
la oferta con la demanda en vías de ramificación. el reglamento que funcionan en la vía. Sin embargo, no todas las enzimas funcionan
de múltiples vías ramificadas a menudo se vuelve aún más sofisticada por la presencia en las rutas metabólicas. Más bien, algunas enzimas están involucradas en
de isoenzimas, diferentes formas de una enzima que catalizan la misma reacción. El procesos que son más complejos. Estos incluyen el comportamiento
paso inicial del marcapasos cambios realizados por los microbios en respuesta a su entorno.
puede ser catalizada por varias isoenzimas, cada una bajo condiciones separadas y La quimiotaxis es un ejemplo de las funciones que desempeñan las enzimas en micro-
producto final p Producto final Q

pequeños, a menudo pueden ser desviados por el movimiento de
moléculas en su entorno. Por lo tanto, deben continuamente
reajustar su dirección a través de un proceso de prueba y error que es
mediada por volteo. Cuando se examina el camino recorrido por el
celular, es similar a un paseo aleatorio, pero está sesgado hacia el atrayente. Por
lo tanto, el movimiento de la bacteria hacia el atrayente a menudo se denomina
F GRAMO
caminata aleatoria sesgada.
– Durante más de tres décadas, los científicos han estado diseccionando este
–
comportamiento complejo para entender cómo E. coli detecta el

mi presencia de un atrayente, cómo cambia de una carrera a una caída y
de nuevo, y cómo sabe que se dirige en la dirección correcta.
Ahora se comprenden muchos aspectos de la quimiotaxis, al menos
superficialmente, pero aún quedan muchas preguntas. Sin embargo, una cosa está clara: la
La respuesta quimiotáctica de E. coli implica una serie de enzimas y
otras proteínas que están reguladas por modificación covalente. Un componente
B importante es un sistema de fosforescencia. Los sistemas de fosforilación
constan de al menos dos proteínas: una quinasa sensora y una
– –
regulador de respuesta Como se describe aquí, un sistema de fosforescencia es
Sustrato A
Se utiliza para regular la actividad enzimática. Otros sistemas de fosforescencia son
se usa para regular la síntesis de proteínas y generalmente usa solo estos dos
Figura 8.27 Inhibición de retroalimentación. Inhibición de la retroalimentación en un componentes Estos sistemas se describen en el capítulo 12.
vía de ramificación con dos productos finales. El punto de bifurcación Para que ocurra la quimiotaxis, E. coli debe determinar si un
enzimas, las que catalizan la conversión del intermedio E en F el atrayente está presente y luego modulan la actividad del sistema de transferencia
y G, están regulados por inhibición por retroalimentación. Los productos P y Q también de fósforo que dicta la dirección de rotación del flagelo (es decir, correr o girar). E.
inhibir la reacción inicial en la vía. Una línea de color con un coli detecta sustancias químicas en su
El signo menos en un extremo indica que un producto final, P o Q, es ambiente cuando se unen a los quimiorreceptores (figura 8.28). Se han identificado
inhibiendo la enzima que cataliza el paso al lado del menos. Ver numerosos quimiorreceptores. nos centraremos en uno
texto para mayor explicación. clase de receptores llamados proteínas de quimiotaxis que aceptan metilo
(MCP). El sistema de fosforescencia que controla la dirección de la rotación flagelar
consta del sensor quinasa CheA y la respuesta
comportamiento bial, y cómo el control de la actividad enzimática cambia ese regulador CheY. Cuando se activa, CheAfosforila a sí mismo usando
conducta. ATP (figura 8.28c). Luego, el grupo fosforilo se transfiere rápidamente a CheY.
En el capítulo 3, se introdujo brevemente la quimiotaxis. Recordar que CheY fosforilado se difunde a través del citoplasma al motor flagelar. Al interactuar
Los microorganismos son capaces de detectar sustancias químicas en su entorno. con el motor, el
y moverse hacia ellos o alejarse de ellos, dependiendo de la dirección de rotación se cambia de CCW a CW, y una caída
si el producto químico es un atrayente o un repelente. Para simplificar la discusión, sigue Cuando CheA está inactivo, el flagelo gira en su forma predeterminada
solo nos ocuparemos del movimiento. modo (CCW), y la celda se mueve hacia adelante en un funcionamiento suave.
hacia un atrayente. El sistema quimiotáctico mejor estudiado es el Como implica la discusión anterior, el estado de los MCP
de E. coli, que, como muchas otras bacterias, exhibe dos modalidades de debe comunicarse al sistema de fosforescencia CheA/CheY.
movimiento: un movimiento de natación hacia adelante llamado carrera y un movimiento ¿Cómo se logra esto? Los MCP están enterrados en el plasma.
movimiento de volteo llamado caída. Se produce una corrida cuando el flagelo gira membrana con diferentes partes expuestas a cada lado de la membrana (figura
en sentido contrario a las agujas del reloj (CCW), y se produce una caída cuando 8.28c). El lado periplásmico de cada MCP tiene un sitio de unión para una o más
el flagelo gira en el sentido de las agujas del reloj (CW) (ver moléculas atrayentes. El lado citoplasmático
figuras 3.41 y 3.45). La célula alterna entre estos dos de un MCP interactúa con dos proteínas, CheW y CheA. los
tipos de movimientos, con la voltereta estableciendo la dirección La proteína CheW se une a la MCP y ayuda a unir la CheAprotein.
de movimiento en la carrera que sigue. Cuando E. coli está en un ambiente que es Junto con CheW y CheA, los receptores MCP forman grandes
homogéneo, es decir, la concentración de todos grupos en uno o ambos polos de la celda (figura 8.28b). Se piensa
Las sustancias químicas en el medio ambiente son las mismas en todo su hábitat: que agregaciones más pequeñas de los MCP, CheA y CheW, que
la célula se mueve al azar, sin dirección aparente. funcionan como equipos de señalización, son los componentes básicos del receptor
o propósito; esto se llama paseo aleatorio. Sin embargo, si un químico racimos El número de cada una de estas moléculas en la señalización
existe un gradiente en su entorno, la frecuencia de caídas disminuye mientras la equipo no está claro, pero se ha sugerido que cada equipo incluya
célula se mueve hacia el atrayente. En tres receptores, a menudo de diferentes tipos (figura 8.29), dos CheW
En otras palabras, el tiempo que se pasa moviéndose hacia el atrayente aumenta moléculas y un dímero CheA. También se ha sugerido que la
y eventualmente la célula se acerca al atrayente. Sin embargo, el proceso no es equipos de señalización se agregan entre sí para formar "señalización
perfecto. Porque las bacterias son leguas. Finalmente, los equipos de señalización (y quizás señalización
Masticar CheB
CheY
CheA
CheA
Chez CAMBIAR
Motor A Motor B
Volar
VUELO
CheR Chez
(a) FliM
Motor
(b)
(b)
Circuito de señalización de quimiotaxis Figura 8.28 Proteínas y vías de señalización de la respuesta a

la quimiotaxis en E. coli. (a) Las proteínas de quimiotaxis que aceptan
metilo (MCP) forman grupos asociados con las proteínas CheA y CheW. CheA
es una cinasa sensora que, cuando se activa, fosforila CheB, una metilesterasa
o CheY. CheY fosforilado interactúa con la proteína FliM del motor flagelar, lo
periplasma que hace que la rotación del flagelo cambie de sentido antihorario (CCW) a
sentido horario (CW). Esto da como resultado un cambio de una carrera
MCP (rotación CCW) a una caída (rotación CW). (b) Los complejos MCP, CheW,
Masticar CheA forman grandes grupos de receptores en cada extremo de la célula, como
CheA se muestra en esta micrografía electrónica de E. coli. Se utilizaron anticuerpos
marcados con oro para marcar los grupos de receptores, que aparecen como
PAGS
CH3 atp ADP puntos negros (encerrados en un círculo). (c) Las vías de señalización
citosol CH3 quimiotáctica de E. coli. Las vías que aumentan la probabilidad de rotación CCW
CW Motores se muestran en rojo. La rotación CCW es la rotación predeterminada. Se
flagelares
PAGS
PAGS
interrumpe periódicamente por la rotación de CW, lo que provoca caídas. Las

CheR
Chez vías que conducen a la rotación CW se muestran en verde. Las moléculas que
CheB CheY
Pi se muestran en gris no están fosforiladas e inactivas.

Pi
Tenga en cuenta que MCP, CheA y CheZ son homodímeros. CheW, CheB,
(C) CheY y CheR son monómeros.
segundos después de que se produce el cambio a la rotación CW, el grupo fosforilo

aspartato maltosa galactosa ribosa
se elimina de CheY por la proteína CheZ, y la rotación CCW es
serina dipéptidos
reanudado
Oxígeno Pero, ¿cómo mide E. coli la concentración de atrayente?
en su entorno, y ¿cómo sabe cuándo se está moviendo hacia el atrayente? E. coli
mide la concentración de un atrayente cada pocos segundos y determina si la
concentración es
Grifo Trg aumentando o disminuyendo con el tiempo. Siempre que la concentración
Alquitrán
aire aumenta, la célula continúa una carrera. Si la concentración disminuye,
Tsr se desencadena una caída. Para comparar las concentraciones de los
atrayente con el tiempo, E. coli debe tener un mecanismo para recordar la
MCP concentración anterior. E. coli logra esto al
comparando el nivel de metilación general de las MCP (en el lado citoplásmico)
Masticar con la cantidad total de atrayente unido (en
CheA
la cara periplásmica). La porción citoplasmática de cada MCP tiene
de cuatro a seis residuos de ácido glutámico que se pueden metilar. La adición y
Señal flagelar integrada eliminación de grupos metilo es catalizada por dos diferentes
enzimas La metilación es catalizada por la metil transferasa CheR específica de
Figura 8.29 Proteínas de quimiotaxis aceptoras de metilo de MCP. La desmetilación es catalizada por la metilesterasa CheB específica de MCP.
E. coli. Los atrayentes detectados por cada receptor de metilo La metilación se produce a un ritmo bastante estable.
se muestra la proteína de quimiotaxis (MCP). Algunos se sienten directamente, independientemente del nivel de atrayente. Sin embargo, un atrayente de MCP
cuando el atrayente se une a la MCP (líneas sólidas). Otros son sentidos complejo es un mejor sustrato para CheR que es un MCP que no es
indirectamente (líneas discontinuas). Los atrayentes maltosa, dipéptidos, ligado al atrayente. Por lo tanto, cuando se une el atrayente, la metilación de
la galactosa y la ribosa se detectan por su interacción con se favorece el MCP. La actividad metilesterasa de CheB también es
Proteínas de unión periplásmica. El oxígeno es detectado indirectamente por el modificada por la proteína CheA. Siempre que la concentración de la
Aer quimiorreceptor, que se diferencia de otras MCP en que carece de El atrayente sigue aumentando, el número de MCP unidas al atrayente sigue
dominio de detección periplásmico. En cambio, el dominio citoplasmático tiene siendo alto y el nivel de metilación de las MCP sigue siendo alto.
un sitio de unión para FAD. FAD es un importante transportador de electrones que se encuentra Sin embargo, si la concentración de atrayente disminuye, el nivel de
en muchos sistemas de transporte de electrones. El estado redox de la molécula la metilación excederá el nivel del atrayente unido. Esta disparidad en el nivel de
FAD unida a MCP se usa para controlar el funcionamiento de la metilación y el atrayente unido a MCP estimula
sistema de transporte de electrones. Esto a su vez media una respuesta táctica. CheA para autofosforilarse. Como resultado, la señal de fosforescencia
al oxígeno. para CW se inicia la rotación flagelar y la célula da vueltas en un intento de

reorientarse en el gradiente de modo que se mueva hacia arriba (hacia el atrayente)
en lugar de hacia abajo (alejándose).
del atrayente). Al mismo tiempo, parte del fosforilo
leguas) se interconectan por un mecanismo desconocido para
los grupos en CheA se transfieren a CheB. Esto activa CheB, y
forman los grupos de receptores visibles en los polos de la célula.
elimina los grupos metilo de las MCP. Esto reduce el nivel de metilación para que
No importa cuál sea la estequiometría precisa o la arquitectura del
sea proporcional al número de MCP.
grupos de receptores, existe evidencia de que las MCP en cada equipo de
ligado al atrayente. Unos segundos más tarde, el número de MCP
señalización trabajan en cooperación para modular la actividad de CheA. cuando cualquiera
unido al atrayente se comparará con este nuevo nivel de metilación.
uno de los MCP en el equipo de señalización está ligado a un atrayente,
Con base en la correspondencia de los dos, la celda determinará si
Se inhibe la autofosforilación de CheA, el flagelo continúa
de nuevo se está moviendo hacia arriba en el gradiente. Si es así, se suprimirá el
girando CCW, y la celda continúa su recorrido. Debido a esta cooperación, la célula
volteo (al igual que la actividad de la metilesterasa) y la serie continuará.
puede responder a concentraciones muy bajas de atrayente. Además, puede
integrar señales de todos los receptores en
1. ¿Qué es un sistema de fosforescencia?
el equipo (figura 8.29). Por otro lado, si los niveles de atrayente disminuyen, de
2. Describa el complejo del receptor MCP-CheW-CheA. ¿Qué dos proteínas son
modo que el nivel de atrayente unido a las MCP en un equipo de señalización
fosforilada por CheA? ¿Cuál es el papel de cada uno?
disminuye, CheA es estimulada para autofosforilarse,
3. ¿Cómo regula la MCP la tasa de autofosforilación de CheA? Cómo
el fosforelato se pone en movimiento y la celda comienza a dar vueltas. ¿Esto media la quimiotaxis?
Sin embargo, la caída no continúa indefinidamente. unos 10 segundos
Resumen
8.1 Una visión general del metabolismo B. Los pares redox con potenciales de reducción más negativos donan electrones a
un. El metabolismo es el conjunto de todas las reacciones químicas que ocurren en las células. Puede ser aquellos con potenciales más positivos, y la energía está disponible durante el
transferencia (figura 8.8, tabla 8.1).
dividido en dos partes: reacciones de conservación de energía (a veces llamadas catabolismo)
y anabolismo. C. Algunos de los transportadores de electrones más importantes en las células son NAD , NADP ,
FAD, FMN, coenzima Q, citocromos y proteínas de hierro no hemo.
B. Los organismos se definen nutricionalmente en función de cómo satisfacen sus necesidades de
carbono, energía y electrones. Las interacciones de los organismos pertenecientes a diferentes D. Los transportadores de electrones a menudo se organizan en sistemas de transporte de electrones que
tipos nutricionales es la base para el flujo de energía, carbono y electrones en se encuentran en las membranas. Estos sistemas son fundamentales para los procesos de
la biosfera La última fuente de energía para la mayoría de los microbios es la luz solar. conservación de energía observados durante la respiración aeróbica, la respiración anaeróbica,
atrapado por fotoautótrofos y utilizado para formar material orgánico a partir de CO2. Los la quimiolitotrofia y la fotosíntesis (figura 8.9).
fotoautótrofos y las moléculas orgánicas que han sintetizado se consumen
por quimioorganoheterótrofos (figuras 8.1 y 8.2). 8.7 Enzimas
un. Las enzimas son catalizadores de proteínas que catalizan reacciones específicas.
8.2 Energía y Trabajo
B. Las enzimas constan de un componente proteico, la apoenzima, y con frecuencia un cofactor no
un. La energía es la capacidad de realizar un trabajo. Las células vivas llevan a cabo tres tipos principales de proteico que puede ser un grupo prostético, una coenzima o un activador de metales.
trabajo: trabajo químico de biosíntesis, trabajo de transporte y trabajo mecánico. C. Las enzimas aceleran las reacciones al unir sustratos en sus sitios activos y reducir
ing la energía de activación (figura 8.15).
8.3 Las leyes de la termodinámica
D. La velocidad de una reacción catalizada por enzimas aumenta con la concentración de sustrato a
un. La primera ley de la termodinámica establece que la energía ni se crea ni se destruye. niveles bajos de sustrato y alcanza una meseta (la velocidad máxima)
B. La segunda ley de la termodinámica establece que los cambios ocurren de tal manera a concentraciones de sustrato saturadas. La constante de Michaelis es la concentración de
que la aleatoriedad o el desorden del universo aumenta al máximo posible. Es decir, la entropía sustrato que requiere la enzima para alcanzar la mitad de la velocidad máxima (figura 8.18).
siempre aumenta durante los procesos espontáneos.
mi. Las enzimas tienen pH y temperatura óptimos para la actividad (figura 8.19).
8.4 Energía libre y reacciones
F. La actividad enzimática puede ser ralentizada por inhibidores competitivos y no competitivos
un. La primera y la segunda ley se pueden combinar para determinar la cantidad de energía (figura 8.20).
disponible para un trabajo útil.
8.8 Naturaleza y significado de la regulación metabólica

GHT S
un. La regulación del metabolismo mantiene los componentes celulares en equilibrio adecuado y
En esta ecuación, el cambio en la energía libre (G) es la energía disponible conserva energía metabólica y material.
para el trabajo útil, el cambio en la entalpía (H) es el cambio en el contenido de calor, y
el cambio de entropía es S. 8.9 Canalización metabólica
B. El cambio de energía libre estándar (G°ÿ) para una reacción química está directamente relacionado un. La localización de metabolitos y enzimas en diferentes partes de la célula,
con la constante de equilibrio. llamada canalización metabólica, influye en la actividad de la vía. Un mecanismo común de
C. En reacciones exergónicas G°ÿ es negativo y la constante de equilibrio es mayor canalización es la compartimentación.
de una; la reacción se completa como está escrita. Reacciones endergónicas
tienen un G°ÿ positivo y una constante de equilibrio menor que uno (figura 8.4). 8.10 Control de la actividad enzimática
un. Muchas enzimas reguladoras son enzimas alostéricas, enzimas en las que un efector o modulador
8.5 El papel del ATP en el metabolismo
se une de forma no covalente y reversible a un sitio regulador separado del sitio catalítico y
un. El ATP es una molécula de alta energía que sirve como moneda de cambio de energía; transporta provoca un cambio conformacional en la enzima.
energía en una forma útil de una reacción o ubicación en una celda a otra. (figura 8.5) alterar su actividad (figura 8.22).
B. La actividad enzimática también puede regularse mediante modificación covalente reversible.

B. El ATP se sintetiza fácilmente a partir de ADP y Pi utilizando la energía liberada de las reacciones Por lo general, se une a la enzima un grupo fosforilo, metilo o adenilo.
exergónicas; cuando se hidroliza de nuevo a ADP y Pi , libera la energía, C. La primera enzima en una ruta y las enzimas en los puntos de ramificación a menudo están sujetas
que se utiliza para impulsar reacciones endergónicas. Este ciclo de ATP con ADP a la inhibición por retroalimentación por uno o más productos finales. El exceso de producto final se ralentiza
y Pi se denomina ciclo de energía de la célula (figura 8.7). su propia síntesis (figura 8.27).
D. Los comportamientos complejos como la quimiotaxis también pueden regularse alterando la

8.6 Reacciones de oxidación-reducción, transportadores de electrones y electrones
actividad enzimática (figuras 8.28 y 8.29).
Sistemas de Transporte
un. En las reacciones de oxidación-reducción (redox), los electrones se mueven de un electrón

donante a un aceptor de electrones. El potencial de reducción estándar mide la
Tendencia del donante a ceder electrones.
Resumen 189
Términos clave
energía de activación 177 efector o modulador 181 dinucleótido de flavina y adenina (FAD) 173 reacción de oxidación-reducción (redox) 172
sitio activo 177 aceptor de electrones 172 mononucleótido de flavina (FMN) 173 cambio enzima marcapasos 183 potencial de
adenosina difosfato (ADP) 171 adenosina donante de electrones 172 de energía libre 170 molécula de alta energía transferencia de grupo fosfato 171 sistema de
5ÿ-trifosfato (ATP) 171 enzimas alostéricas cadena de transporte de electrones (ETC) 171 holoenzima 176 isoenzimas 184 julio 170 fosforescencia 185 regulación postraduccional
181 anabolismo 168 173 sistema de transporte de electrones 181 producto 176 grupo protésico 176 poder
(ETS) 173 reacción endergónica 170 reductor 168 sitio regulador 181 regulador de
apoenzima 176 inhibición del producto final 183 energía respuesta 185 modificación covalente reversible
calorías 170 169 reacciones de conservación de energía trabajo mecanico 169 183
catabolismo 168 168 entalpía 170 entropía 169 enzima 176 canalización metabólica 180
catalizador complejo enzima-sustrato 177 equilibrio 170 metabolismo 167
176 sitio catalítico constante de equilibrio (Keq) 170 reacción proteínas de quimiotaxis aceptoras de metilo
177 trabajo químico 169 exergónica 170 inhibición de retroalimentación (MCP) 185 segunda ley de la termodinámica 169
coenzima 176 183 Constante de Michaelis (Km) 178 sensor quinasa 185
coenzima Q o CoQ (ubiquinona) 173 cofactor nicotinamida adenina dinucleótido cambio de energía libre estándar 170
176 (NAD) 173 potencial de reducción estándar 172
nicotinamida adenina dinucleótida sustrato 176
compartimentación 180
fosfato (NADP) 173
inhibidor competitivo 179 termodinámica 169
ferredoxina 174 inhibidor no competitivo 179
citocromo 174 desnaturalización complejo de estado de transición
179 proteína de hierro no hemo 174
primera ley de la termodinámica 169 177 trabajo de transporte 169
1. ¿Cómo podría impulsarse el transporte de electrones en la dirección opuesta? ¿Por qué Escenario 2: El microbio se cultiva en un medio que contiene un rico suministro de los cinco
ser deseable hacer esto? aminoácidos.
2. Suponga que una reacción química tuvo un gran valor negativo de G°ÿ. ¿Qué indicaría esto oxaloacetato
acerca de su constante de equilibrio? Si se desplazara del equilibrio, ¿procedería rápidamente
hasta completarse? ¿Se pondría a disposición mucha o poca energía libre?
aspartato
3. Echa un vistazo a las estructuras de las macromoléculas (apéndice I). ¿Qué tipo tiene más
electrones para donar? ¿Por qué los carbohidratos suelen ser la principal fuente de electrones Aspartato -semialdehído
para las bacterias quimioganotróficas?
4. La mayoría de las enzimas no funcionan a su nivel bioquímico óptimo dentro de las células. lisina
¿Por qué no?
5. Examine la vía ramificada que se muestra aquí para la síntesis de los aminoácidos aspartato,
homoserina
metionina, lisina, treonina e isoleucina. Para cada uno de estos dos escenarios responda las
siguientes preguntas:
metionina treonina
un. ¿Qué porción(es) de la vía necesitarían cerrarse en esta situación?
B. ¿Cómo podría usarse el control alostérico para lograr esto?

isoleucina
Escenario 1: el microbio se cultiva en un medio que contiene aspartato y lisina, pero que
carece de metionina, treonina e isoleucina.
Aprende más
Bren, A. y Eisenbach, M. 2000. Cómo se escuchan las señales durante los quimiotaxis McKee, T. y McKee, JR 2003. Bioquímica: la base molecular de la vida, 3d
bacterianos: interacciones proteína-proteína en la propagación de señales sensoriales. J. Bact. edición Nueva York: McGraw-Hill.
182(24):6865–73.
Nelson, DL y Cox, MM 2005. Principios de bioquímica de Lehninger, 4.ª ed.
Unión Internacional de Bioquímica y Biología Molecular. 1992. Nomenclatura de enzimas. Nueva York: WH Freeman.
San Diego: Prensa Académica.
Parkinson, JS 2004. Amplificación de señal en quimiotaxis bacteriana a través de recep
Kantrowitz, ER, y Lipscomb, WN 1988. Escherichia coli aspartato transcar bamilasa: La para el trabajo en equipo. Noticias de ASM 70 (12): 575–82.
relación entre estructura y función. Ciencia 241: 669–74.
Lodish, H.; Berk, A.; Matsudaira, P.; Kaiser, CS; Drieger, M.; Scott, parlamentario;
Zipursky, SL; y Darnell, J. 2004. Biología celular molecular, 5ª ed. Nueva York:
WH Freeman.

9Metabolismo:
Liberación de energía y
Conservación
El centro de reacción de la bacteria púrpura no sulfurosa, Rhodopseudomonas

viridis, con las bacterioclorofilas y otros grupos protésicos en amarillo.
Estos pigmentos atrapan la luz durante la fotosíntesis.
AVANCE
• Los quimioorganotrofos tienen tres opciones de proceso de alimentación. Ellos son
diferenciados por el aceptor de electrones utilizado. La respiración utiliza aceptores de mar abierto a un lago eutrófico, de un tronco que se pudre en
electrones exógenos: O2 para la respiración aeróbica y otros
un bosque a una microcervecería, y de un respiradero hidrotermal
Moléculas para la respiración anaeróbica. La fermentación utiliza aceptores de Desde a los relaves cerca de una mina de carbón, el impacto del abastecimiento de combustible
electrones endógenos.
Se pueden observar reacciones de microorganismos. Los fotótrofos convierten el
• Durante el catabolismo, los nutrientes se canalizan hacia unos pocos
energía del sol en energía química (figura 9.1), que alimenta
vías para un uso más eficiente de las enzimas (algunas vías
quimioorganotrofos. Los quimioorganotrofos reciclan los desechos de
procesar una amplia variedad de nutrientes).
otros organismos y juegan papeles importantes en la industria;
• Las vías más utilizadas son la vía de Embden-Meyerhof, la vía de las pentosas fosfato y Los quimiolitotrofos oxidan moléculas inorgánicas y en el proceso
el ciclo del ácido tricarboxílico. Estas vías son anfibólicas y funcionan tanto
contribuyen a los ciclos biogeoquímicos como el hierro y el azufre
catabólicamente
ciclos Todos pueden contribuir a la contaminación y todos pueden ayudar en la
y anabólicamente. El ciclo del ácido tricarboxílico es la vía final.
mantenimiento de ambientes prístinos.
para la oxidación aeróbica de nutrientes a CO2.
Este capítulo examina las reacciones de combustible de estos diversos
• La mayor parte de la energía liberada durante la respiración aeróbica y anaeróbica es
tipos nutricionales. Comenzamos con una descripción general del metabolismo de
generada por el movimiento de electrones de electrones
quimioorganotrofos. A esto le sigue una introducción a la oxidación de
transportistas con más potencial de reducción negativa a unos
carbohidratos, especialmente glucosa, y una discusión de
con potenciales de reducción más positivos. Debido a que la pareja redox O2/H2O
tiene un potencial de reducción estándar muy positivo, la respiración aeróbica es la generación de ATP por la respiración aeróbica y anaeróbica. Luego se describe
mucho más eficiente que el catabolismo anaeróbico. la fermentación, seguida de un estudio de la descomposición de otros carbohidratos
y sustancias orgánicas como lípidos,
• Los quimiolitotrofos usan moléculas inorgánicas reducidas como electrones
donantes para el transporte de electrones y la síntesis de ATP. proteínas y aminoácidos. Terminamos el capítulo con secciones sobre
quimiolitotrofia (la oxidación de fuentes de energía inorgánica) y
• En la fotosíntesis basada en clorofila, la energía de la luz atrapada aumenta
fototrofia (la conversión de energía luminosa en energía química).
electrones a potenciales de reducción más negativos (es decir, mayor energía
niveles). Estos electrones energizados se utilizan luego para producir ATP.
Algunos procariotas realizan fototrofia basada en rodopsina. El flujo de electrones no
está involucrado en este proceso.
• La fuerza motriz del protón es un tipo de energía potencial generada por: (1) 9.1 COMBUSTIBLE QUIMIORGANOTRÓFICO
oxidación de fuentes de energía química acopladas al transporte de electrones; (2) PROCESOS
transporte de electrones impulsado por la luz; y (3) bombeo de protones impulsado por
la luz durante la fototrofia basada en rodopsina; es usado para Recuerde del capítulo 8 que los quimioorganótrofos oxidan un compuesto orgánico
impulsar la producción de ATP y otros procesos como el transporte y la motilidad fuente de energía y conservar la energía liberada en forma de
bacteriana. ATP. Los electrones liberados son aceptados por una variedad de electrones.
Es en las reacciones de alimentación donde las bacterias muestran su extraordinaria diversidad y versatilidad metabólica.
Las bacterias han evolucionado para prosperar en casi todos los entornos naturales, independientemente de la naturaleza del medio ambiente disponible.
fuentes de carbono, energía y poder reductor. . . . Las capacidades metabólicas colectivas de las bacterias permiten
ellos para metabolizar prácticamente todos los compuestos orgánicos en este planeta. . . .
—FC Neidhardt, JL Ingraham y M. Schaechter

192 Capítulo 9 Metabolismo: liberación y conservación de energía
aceptores, y si el aceptor es exógeno (es decir, externamente

Fototrofeo Quimioorganotrofia Quimiolitotrofia
suministrado) o endógeno (suministrado internamente) define el proceso de
Reducido oxidado Reducido oxidado
conservación de energía utilizado por el organismo. Cuando el receptor de
orgánico orgánico inorgánico inorgánico
compuesto compuesto compuesto compuesto electrones es exógeno, el proceso metabólico se denomina respiración .
y puede dividirse en dos tipos diferentes (figura 9.2). En la respiración aeróbica,
el aceptor final de electrones es el oxígeno, mientras que el
aceptor terminal en la respiración anaeróbica es un exógeno diferente
2 2
aceptador como NO3 , SO4 , CO2, Fe3 y SeO4 . También
pueden usarse aceptores orgánicos tales como fumarato y ácidos húmicos. La
respiración implica la actividad de una cadena de transporte de electrones. Como
Los electrones pasan a través de la cadena hasta el aceptor final de electrones, un
Clorofila, tipo de energía potencial llamada fuerza motriz de protones (PMF) es
bacterioclorofila, generado y utilizado para sintetizar ATP a partir de ADP y Pi . Por el
bacteriorrodopsina,
proteorrodopsina contrario, fermentación [del latín fermentare, hacer que suba o fermente]
utiliza un aceptor de electrones endógeno y no implica una cadena de transporte
de electrones ni la generación de PMF. el endógeno
Energía química
El aceptor de electrones suele ser un intermedio (p. ej., piruvato) del
vía catabólica utilizada para degradar y oxidar la energía orgánica
fuente. Durante la fermentación, el ATP se sintetiza solo por fosforilación a nivel
Trabajo de sustrato, un proceso en el que un grupo fosfato se
transferida a ADP desde una molécula de alta energía (p. ej., fosfoenolpiruvato)
generada por el catabolismo de la fuente de energía.
Figura 9.1 Fuentes de energía para microorganismos. Más
En las siguientes secciones, exploramos el metabolismo de
Los microorganismos emplean una de tres fuentes de energía. Fotótrofos
quimioorganotrofos con más detalle. La discusión comienza con
atrapar la energía radiante del sol utilizando pigmentos como la bacteria oclorofila y la
respiración aeróbica e introduce una serie de vías metabólicas y otros procesos
clorofila. Los quimiotrofos se oxidan reducidos
que también ocurren durante la respiración anaeróbica
nutrientes orgánicos e inorgánicos para liberar y atrapar energía. los
La energía química derivada de estas tres fuentes puede entonces ser
utilizado en el trabajo como se discutió en el capítulo 8.
Procesos de abastecimiento de combustible quimioorganotróficos
Respiración
Cadena de transporte de electrones O2 Aerobio
respiración
mi
fósforo de buey
Energía orgánica FMP atp
y
fuente de electrones
mi
2
Cadena de transporte de electrones SO4 , anaeróbico
C
Figura 9.2 Combustible quimioorganotrófico NO3 , CO2, respiración
átomos
fumarato,
Procesos. Las moléculas orgánicas sirven como energía y CO2
etc
fuentes de electrones para los tres procesos de abastecimiento de combustible utilizados
SLP
por quimioorganotrofos. En la respiración aeróbica y Biosíntesis
respiración anaeróbica, los electrones pasan a través de un ADP atp
sistema de transporte de electrones. Esto genera un protón
fuerza motriz (PMF), que se utiliza para sintetizar la mayoría
Fermentación
del ATP celular por un mecanismo llamado oxidación
ADP atp
fosforilación (ox phos); una pequeña cantidad de ATP es
producido por un proceso llamado fosforilación a nivel de sustrato (SLP). Biosíntesis
SLP
En la respiración aeróbica, el O2 es el terminal Energía orgánica
átomos de C
y Fermentación
aceptor de electrones, mientras que en la respiración anaeróbica
productos
Las moléculas exógenas distintas del O2 sirven como electrón.
(p. ej., etanol, H2,
aceptantes. Durante la fermentación, orgánicos endógenos mi ácido láctico)
moléculas actúan como aceptores de electrones, el flujo de electrones Endógeno
electrón
no está acoplado con la síntesis de ATP, y el ATP se sintetiza solo por
aceptantes
fosforilación a nivel de sustrato. (p. ej., piruvato)
Respiración aeróbica 193
racionar. La fermentación involucra solo un subconjunto de las vías que se forman metabolitos como acetil coenzima A y piruvato. Además, la
funcionan durante la respiración, pero los microbios la utilizan ampliamente segunda etapa produce algo de ATP, así como NADH y/o FADH2.
y tiene importantes aplicaciones prácticas. Finalmente, durante la tercera etapa del catabolismo, el carbono
parcialmente oxidado se introduce en el ciclo del ácido tricarboxílico y se
oxida por completo a CO2 con la producción de ATP, NADH y FADH2. La
mayor parte del ATP derivado de la respiración aeróbica proviene de la
9.2 RESPIRACIÓN AERÓBICA
oxidación de NADH y FADH2 por la cadena de transporte de electrones,
La respiración aeróbica implica varias vías catabólicas importantes. que utiliza oxígeno como aceptor terminal de electrones.
Antes de aprender sobre algunos de los más importantes, es mejor mirar Aunque esta imagen está algo simplificada, es útil para discernir el
la "disposición del terreno" y orientarnos. patrón general de respiración. Observe que el microorganismo comienza
Albert Lehninger, un bioquímico que trabajó en la Escuela de Medicina con una amplia variedad de moléculas y reduce su número y diversidad
Johns Hopkins, ayudó considerablemente al señalar que la respiración en cada etapa. Es decir, las moléculas de nutrientes se canalizan hacia
aeróbica puede dividirse en tres etapas (figura 9.3). En la primera etapa, cada vez menos intermediarios metabólicos hasta que finalmente se
las moléculas de nutrientes más grandes (proteínas, polisacáridos y introducen en el ciclo del ácido tricarboxílico. Una vía común a menudo
lípidos) se hidrolizan o se descomponen en sus partes constituyentes. Las degrada muchas moléculas similares (p. ej., varios azúcares diferentes).
reacciones químicas que ocurren durante esta etapa no liberan mucha Estas vías metabólicas consisten en reacciones catalizadas por enzimas
energía. Los aminoácidos, monosacáridos, ácidos grasos, glicerol y otros dispuestas de manera que el producto de una reacción sirve como sustrato
productos de la primera etapa se degradan a unas pocas moléculas más para la siguiente. La existencia de unas pocas vías catabólicas comunes,
simples en la segunda etapa. Generalmente cada una de las cuales degrada muchos nutrientes,
Proteínas polisacáridos lípidos
Nivel 1
Aminoácidos Monosacáridos Glicerol + Ácidos grasos
atp NADH
Etapa 2 NADH FADH2

NH3
piruvato
NADH
Acetil-CoA
oxaloacetato Citrato
Etapa 3
atp
Figura 9.3 Las tres etapas de la NADH
respiración aeróbica. Diagrama isocitrato FADH2

Ciclo del ácido tricarboxílico
general de la respiración aeróbica en
un quimioorganoheterótrofo que muestra CO2
las tres etapas de este proceso y la posición
ÿ-cetoglutarato
central del ciclo del ácido tricarboxílico.
CoQ
Aunque hay muchas proteínas, polisacáridos
atp
y lípidos diferentes, se degradan a través de Succinil-CoA CO2
la actividad de algunas vías metabólicas
Cadena de
citocromos
comunes. Las líneas discontinuas muestran el
transporte de
flujo de electrones, transportados por NADH y electrones
FADH2, a la cadena de transporte de electrones.

O2
9.3 DESCOMPOSICIÓN DE LA GLUCOSA EN PIRUVATO

Los microorganismos emplean varias vías metabólicas para catabolizar la glucosa
y otros azúcares. Debido a esta diversidad metabólica,
su metabolismo es a menudo confuso. Para evitar confusiones tanto
catabolismo Intermedio A Anabolismo posible, las formas en que los microorganismos degradan los azúcares a
E1 E2
piruvato y productos intermedios similares se introducen centrándose en
Intermedio B + sólo tres rutas: (1) la vía Embden-Meyerhof, (2) la
la ruta de las pentosas fosfato y (3) la ruta de Entner-Doudoroff. En este texto,
estas tres vías se denominarán colectivamente vías glucolíticas o glucólisis [del
griego glico,
++ + dulce, y lysis, un desprendimiento]. Sin embargo, en otros textos, el término

glucólisis a menudo se reserva para usarse solo en referencia a la vía de Embden
Meyerhof. En aras de la simplicidad, las estructuras detalladas de los intermediarios
Figura 9.4 Vía anfibólica. Un diagrama simplificado de un
metabólicos no se utilizan en los diagramas de rutas.
vía anfibólica, como la glucólisis. Note que la interconversión de los
Vías metabólicas comunes (anexo II)
intermedios A y B es catalizada por dos
enzimas, E1 operando en la dirección catabólica, y E2 en la
anabólico.
La Vía Embden-Meyerhof
La vía Embden-Meyerhof es sin duda la más
vía común para la degradación de la glucosa a piruvato en la etapa
aumenta en gran medida la eficiencia metabólica al evitar la necesidad de un dos de respiración aeróbica. Se encuentra en todos los grupos principales de
gran número de vías metabólicamente menos flexibles. microorganismos y funciones en presencia o ausencia de O2. Como
Aunque la biosíntesis es el tema del capítulo 10, es importante señalado anteriormente, también es una vía anfibólica importante y
para señalar que muchas vías catabólicas también son importantes en un proporciona varios metabolitos precursores. El Embden-Meyerhof
abolismo. Suministran los materiales necesarios para la biosíntesis, incluidos La vía ocurre en la matriz citoplasmática de los procariotas y
metabolitos precursores y poder reductor. Metabolitos precursores eucariotas.
sirven como moléculas de partida para rutas biosintéticas. El poder reductor se La ruta en su conjunto puede dividirse en dos partes (figura 9.5 y anexo II).
utiliza para reducir los esqueletos de carbono proporcionados por el En la fase inicial de seis carbonos, la energía
metabolitos precursores a medida que se transforman en aminoácidos, nucleótidos se consume a medida que la glucosa se fosforila dos veces y se convierte en
y otras moléculas pequeñas necesarias para la síntesis de fructosa 1,6-bisfosfato. Esta fase preliminar
macromoléculas Las vías que funcionan tanto catabólica como abólicamente se consume dos moléculas de ATP por cada glucosa y “prepara el
denominan vías anfibólicas [del griego amphi, en ambas bomba” agregando fosfatos a cada extremo del azúcar. En
lados]. Tres de las vías anfibólicas más importantes son las esencia, el organismo invierte algo de su ATP para que más pueda
la vía de Embden-Meyerhof, la vía de las pentosas fosfato y hacerse más tarde en el camino.
el ciclo del ácido tricarboxílico (TCA). Muchas de las reacciones de los La fase de conservación de energía de tres carbonos comienza cuando el
La ruta de Embden-Meyerhof y el ciclo TCA son libremente reversibles y pueden la enzima fructosa 1,6-bisfosfato aldolasa cataliza la escisión
usarse para sintetizar o degradar moléculas dependiendo de los nutrientes de fructosa 1,6-bisfosfato en dos mitades, cada una con un grupo fosfato. Uno de
disponibles y las necesidades del microbio. los productos, el fosfato de dihidroxiacetona, es
Los pocos pasos catabólicos irreversibles se pasan por alto en la biosíntesis. se convierte inmediatamente en gliceraldehído 3-fosfato. Esta
con enzimas alternativas que catalizan la reacción inversa (figura 9.4). Por produce dos moléculas de gliceraldhído 3-fosfato, que son
ejemplo, la enzima fructosa bisfosfatasa invierte el paso de la fosfofructocinasa luego se convierte en piruvato en un proceso de cinco pasos. Porque el fosfato de
cuando se sintetiza glucosa. dihidroxiacetona se puede cambiar fácilmente a gliceraldehído
del piruvato. La presencia de dos enzimas separadas, una que cataliza la reversión 3-fosfato, ambas mitades de fructosa 1,6-bisfosfato se utilizan en
de la reacción de la otra, permite la fase de tres carbonos. Primero, el gliceraldehído 3-fosfato se oxida con NAD
regulación de las funciones catabólicas y anabólicas de estas vías como aceptor de electrones (para formar NADH), y un
anfibólicas. Los metabolitos precursores (sección 10.2) El fosfato (Pi ) se incorpora simultáneamente para dar una molécula de alta
energía llamada 1,3-bisfosfoglicerato. la alta energia
el fosfato en el carbono uno se dona posteriormente a ADP para producir ATP.
1. Compara y contrasta la fermentación y la respiración. Dar ejemplos de los
Esta síntesis de ATP se llama fosforilación a nivel de sustrato porque la
tipos de aceptores de electrones utilizados por cada proceso. Cuál es la diferencia
fosforilación de ADP está acoplada con la
entre la respiración aeróbica y la respiración anaeróbica?
Ruptura exergónica de un enlace de alta energía. El papel del ATP en el
2. ¿Por qué es ventajoso para la célula catabolizar diversas fuentes de energía orgánica?
metabolismo (sección 8.5)
canalizándolos hacia unas pocas vías comunes?
Un proceso algo similar genera un segundo ATP por fosforilación a nivel de
3. ¿Qué es una vía anfibólica? ¿Por qué las vías anfibólicas
sustrato. El grupo fosfato en 3-
¿importante?
el fosfoglicerato se desplaza al carbono dos y el 2-fosfoglicerato se
La descomposición de la glucosa en piruvato 195
1
Glucosa CCCCCC
La glucosa se fosforila a expensas de uno
ATP, creando glucosa 6-fosfato, un precursor atp
metabolito y la molécula de partida para la ruta de las pentosas
fosfato. ADP
PO4
1
Glucosa 6-fosfato CCCCCC
Isomerización de glucosa 6-fosfato (un aldehído)
a la fructosa 6-fosfato (una cetona y un precursor
metabolito). PO4
1
Fructosa 6-fosfato CCCCC C
El ATP se consume para fosforilar el C1 de la fructosa. atp

La célula está gastando parte de su moneda de
energía para ganar más en la siguiente parte. ADP PO4 PO4
de la glucólisis.
fase 6C
1
Fructosa 1, 6-bifosfato C CCCC C
dihidroxacetona PO4
La fructosa 1,6-bisfosfato se divide en dos fase 3C
fosfato
Moléculas de 3 carbonos, una de las cuales es un
C.C.C.
metabolito precursor.
HCCC PO4 Gliceraldehído 3-fosfato Gliceraldehído 3-fosfato
mi
NAD mi
NAD
El gliceraldehído 3-fosfato se oxida y simultáneamente
se fosforila, creando una sustancia de alta energía NADHH _ NADHH _
molécula. Los electrones liberados reducen el NAD a NADH.
Pi Pi
PO4 CCC PO4 1, 3-bisfosfoglicerato 1, 3-bisfosfoglicerato
ADP ADP
El ATP se produce por fosforilación a nivel de sustrato.
Se produce otro metabolito precursor. atp atp
CCC PO4 3-fosfoglicerato 3-fosfoglicerato
PO4
2-fosfoglicerato CCC 2-fosfoglicerato
Se produce otro metabolito precursor. H2O H2O

PO4
Fosfoenolpiruvato CCC Fosfoenolpiruvato

ADP ADP
La descomposición oxidativa de una glucosa resulta
en la formación de dos moléculas de piruvato.
El piruvato es uno de los precursores más importantes atp atp
metabolitos.
piruvato CCC piruvato
Figura 9.5 Vía Embden-Meyerhof. Esta es una de las tres vías glucolíticas que se utilizan para catabolizar la glucosa a piruvato, y puede
funcionan durante la respiración aeróbica, la respiración anaeróbica y la fermentación. Cuando se utiliza durante un proceso respiratorio, los electrones
aceptados por NAD se transfieren a una cadena de transporte de electrones y finalmente son aceptados por un aceptor de electrones exógeno. Cuándo
utilizados durante la fermentación, los electrones aceptados por NAD son donados a un aceptor de electrones endógeno (p. ej., piruvato). La vía de Embden
Meyerhof también es una vía anfibólica importante, ya que genera varios metabolitos precursores (mostrado en azul).
deshidratado para formar una segunda molécula de alta energía, figura 9.5. También se producen ATP y NADH. Los rendimientos de ATP
fosfoenolpiruvato. Esta molécula dona su fosfato al ADP formando un y NADH puede calcularse considerando las dos fases por separado. En
segundo ATP y piruvato, el producto final de la vía. la fase de seis carbonos, se utilizan dos ATP para formar fructosa 1,6-
La vía de Embden-Meyerhof degrada una glucosa a dos bisfosfato. Por cada gliceraldehído 3-fosfato
piruvatos por la secuencia de reacciones que se acaba de esbozar y se muestra en transformado en piruvato, se forman un NADH y dos ATP.
Debido a que dos gliceraldehído 3-fosfatos surgen de un solo La vía de las pentosas fosfato
glucosa (uno a través de fosfato de dihidroxiacetona), la fase de tres Una segunda vía, la vía de las pentosas fosfato o de las hexosas
carbonos genera cuatro ATP y dos NADH por glucosa. monofosfato, se puede utilizar al mismo tiempo que las vías de
La resta del ATP utilizado en la fase de seis carbonos del producido Embden-Meyerhof o de Entner-Doudoroff. Puede operar de forma
por la fosforilación a nivel de sustrato en la fase de tres carbonos. aeróbica o anaeróbica y es importante en ambos
fase da un rendimiento neto de dos ATP por glucosa. Así, el biosíntesis y catabolismo.
catabolismo de la glucosa a piruvato se puede representar mediante este simple La vía de las pentosas fosfato comienza con la oxidación de
ecuación. glucosa 6-fosfato a 6-fosfogluconato seguido de la oxidación de 6-
fosfogluconato a la pentosa azúcar ribulosa 5-
Glucosa 2ADP 2Pi 2NAD ÿÿÿ
fosfato y CO2 (figura 9.6 y anexo II). NADPH es
2 piruvato 2ATP 2NADH 2H producido durante estas oxidaciones. La ribulosa 5-fosfato es entonces
1 Glucosa 6-fosfato, un intermediario

de la vía Embden-Meyerhof y 2 El 6-fosfogluconato se oxida y se
un metabolito precursor, se oxida. los
descarboxila. Esto produce CO2 y
reacción proporciona poder reductor en el
mayor poder reductor en forma de
forma de NADPH.
NADPH.
3NADP+ 3NADPH + 3H+ 3NADP+ 3NADPH + 3H+
3 glucosa-6- P 3 6-fosfogluconato 3 ribulosa-5-P
3H2O
3CO2
Ribosa-5-P Xilulosa-5-P
transcetolasa
3 Reacciones de transformación de azúcar
(flechas azules) son catalizadas por
las enzimas transaldolasa y
transcetolasa. Algunos de los
Los azúcares se pueden utilizar en
Gliceraldehído-3-P Sedoheptulosa-7-P
biosíntesis o para regenerar
glucosa 6-fosfato. Ellos también
puede catabolizarse aún más a
piruvato.
transaldolasa
Fructosa-6- PAGS
Eritrosa-4- PAGS
Xilulosa-5-P
transcetolasa
Fructosa-6- PAGS
Gliceraldehído-3- PAGS
reacciones EMP
Pi
Fructosa-6-P Fructosa-1,6-bis P piruvato
Figura 9.6 La vía de las pentosas fosfato. El catabolismo de tres moléculas de glucosa 6-fosfato a dos fructosa 6-fosfatos,
se rastrea un gliceraldehído 3-fosfato y tres moléculas de CO2. Tenga en cuenta que la ruta de las pentosas fosfato genera varios intermediarios que
también son intermediarios de la ruta de Embden-Meyerhof (EMP). Estos intermedios se pueden introducir en el EMP con dos resultados: (1)
degradación continua a piruvato o (2) regeneración de glucosa 6-fosfato. La vía de las pentosas fosfato también juega un papel importante en
produciendo poder reductor (NADPH) y varios metabolitos precursores (mostrado en azul). Las transformaciones del azúcar se indican con azul.
flechas Estas reacciones son catalizadas por las enzimas transcetolasa y transaldolasa y se muestran con más detalle en la figura 9.7.
La descomposición de la glucosa en piruvato 197
convertido en una mezcla de fosfatos de azúcar de tres a siete 3 glucosa 6-fosfato 6NADP 3H2O ÿÿÿ
carbonos. Dos enzimas juegan un papel central en estas
transformaciones: (1) la transcetolasa cataliza la transferencia de 2 fructosa 6-fosfato gliceraldehído 3-fosfato
grupos cetol de dos carbonos y (2) la transaldolasa transfiere un 3CO2 6NADPH 6H
grupo de tres carbonos de la sedoheptulosa 7-fosfato al gliceraldehído
3-fosfato (figura 9.7). El resultado general es que tres 6-fosfatos de Estos intermedios se utilizan de dos maneras. La fructosa 6-fosfato
glucosa se convierten en dos 6-fosfatos de fructosa, 3-fosfato de se puede volver a convertir en glucosa 6-fosfato, mientras que el
gliceraldehído y tres moléculas de CO2, como se muestra en esta ecuación.
gliceraldehído 3-fosfato se convierte en piruvato mediante enzimas del
Las reacciones de transcetolasa
O H CH2OH
CH2OH C C O
O H
C O H C OH HO C H C
1 Dos moléculas de 5 carbonos reaccionan (10 carbonos en
HO C H + H C OH H C OH + H C OH
total), produciendo una molécula de 7 carbonos y una molécula
de 3 carbonos (10 carbonos en total).
H C OH H C OH H C OH CO
H2_ PAGS
CO
H2_ PAGS CH2O PAGS H C OH Gliceraldehído 3-
fosfato
CH2 O PAGS
Xilulosa Ribosa
5-fosfato 5-fosfato Sedoheptulosa 7-
fosfato
CH2OH CH2OH OH
O H
C O C C O C
HO C H + H C OH HO C H + H C OH 2 Una molécula de 5 carbonos y una molécula de 4 carbonos

reaccionan (9 carbonos en total), produciendo una molécula
de 6 carbonos y una molécula de 3 carbonos (9 carbonos en
H C OH H C OH H C OH C H2O PAGS
total).
CH2O PAGS
C H2O PAGS C H2O PAGS
Gliceraldehído 3-
fosfato
Xilulosa Eritrosa 4- Fructosa

5-fosfato fosfato 6-fosfato
La reacción de la transaldolasa
CH2OH CH2OH
C O C O
H O OH
HO C H C HO C H C
3 Una molécula de 7 carbonos y una molécula de 3 carbonos
H C OH + H C OH H C OH + H C OH reaccionan (10 carbonos en total), produciendo una molécula
de 6 carbonos y una molécula de 4 carbonos (10 carbonos
H C OH CH2O H C OH H C OH
PAGS
en total).
H C OH Gliceraldehído 3- C H2O PAGS C H2O PAGS
fosfato
CH2O PAGS
Fructosa Eritrosa 4-
6-fosfato fosfato
Sedoheptulosa 7-
fosfato
Figura 9.7 Reacciones de transcetolasa y transaldolasa. Ejemplos de las reacciones transcetolasa y transaldolasa de la ruta de las
pentosas fosfato. Los grupos transferidos en estas reacciones están en verde.
Vía Embden-Meyerhof. Alternativamente dos gliceraldehído 3- Glucosa

los fosfatos pueden combinarse para formar fructosa 1,6-bisfosfato, atp
que finalmente se convierte de nuevo en glucosa 6-fosfato. ADP
Esto da como resultado la degradación completa de la glucosa 6-fosfato. Glucosa 6-fosfato
a CO2 y la producción de una gran cantidad de NADPH. NADP
NADPH H
Glucosa 6-fosfato 12NADP 7H2O ÿÿÿ 6-fosfogluconato
6CO2 12NADPH 12H Pi H2O
2-ceto-3-desoxi-6-fosfogluconato (KDPG)
La vía de las pentosas fosfato es un buen ejemplo de vía anfibólica, ya
que tiene varias funciones catabólicas y anabólicas que se resumen a
continuación: Piruvato Gliceraldehído 3-fosfato
NAD
1. El NADPH de la ruta de las pentosas fosfato sirve como NADHH _

fuente de electrones para la reducción de moléculas durante ADP
biosíntesis. atp
2. La vía produce dos metabolitos precursores importantes:
eritrosa 4-fosfato, que se utiliza para sintetizar aromáticos
aminoácidos y vitamina B6 (piridoxal) y ribosa 5-fosfato,
que es un componente principal de los ácidos nucleicos. Tenga en cuenta que cuando
ADP
un microorganismo está creciendo en una fuente de carbono pentosa, el
vía puede funcionar biosintéticamente para suministrar azúcares de atp
hexosa (p. ej., la glucosa necesaria para la síntesis de peptidoglicanos). piruvato
3. Los intermediarios en la ruta de las pentosas fosfato pueden ser

utilizado para producir ATP. Gliceraldehído 3-fosfato de la Figura 9.8 Vía Entner-Doudoroff. La secuencia
puede entrar en la fase de tres carbonos de la vía de Embden Meyerhof Se cataliza el paso del gliceraldehído 3-fosfato al piruvato.
y convertirse en piruvato, ya que el ATP se produce por fosforilación a por enzimas comunes a la ruta de Embden-Meyerhof.
nivel de sustrato. El piruvato puede ser
oxidado en el ciclo del ácido tricarboxílico para proporcionar más energía.
1. Resuma las principales características de las vías de Embden-Meyerhof,
Aunque la vía de las pentosas fosfato puede ser una fuente de pentosa fosfato y Entner-Doudoroff. Incluya los puntos de partida, los
energía en muchos microorganismos, es más a menudo de mayor importancia productos de las vías, cualquier enzima crítica o única, los rendimientos de ATP,
en la biosíntesis. Varias funciones de las pentosas fosfato y las funciones metabólicas que tiene cada vía.
vía se mencionan de nuevo en el capítulo 10 cuando la biosíntesis es 2. ¿Qué es la fosforilación a nivel de sustrato?
considerado más directamente.
La vía Entner-Doudoroff 9.4 EL CICLO DEL ÁCIDO TRICARBOXÍLICO

Aunque la vía de Embden-Meyerhof es la más común
ruta para la conversión de hexosas a piruvato, la ruta de Entner Doudoroff En las vías glucolíticas, la energía captada por la oxidación
es utilizada por microbios del suelo, como de glucosa a piruvato se limita a no más de dos ATP generados por
Pseudomonas, Rhizobium, Azotobacter y Agrobacterium, y fosforilación a nivel de sustrato. Durante la respiración aeróbica, el proceso
algunas otras bacterias gramnegativas. Muy pocas bacterias grampositivas catabólico continúa al oxidar el piruvato a
tienen esta vía, siendo la bacteria intestinal Enterococ cus faecalis una rara tres CO2. El primer paso de este proceso emplea una multienzima
excepción. llamado complejo piruvato deshidrogenasa. se oxida
La vía de Entner-Doudoroff comienza con las mismas reacciones y escinde el piruvato para formar un CO2 y la molécula de dos carbonos acetil-
como la vía de las pentosas fosfato: la formación de glucosa 6- coenzima A (acetil-CoA) (figura 9.9). Acetil-CoA
fosfato, que luego se convierte en 6-fosfogluconato (figura es rico en energía porque un tiol de alta energía une el ácido acético con
9.8 y anexo II). En lugar de oxidarse más, el 6-fosfogluconato se deshidrata coenzima A. Tenga en cuenta que durante la etapa tres de la respiración aeróbica
para formar 2-ceto-3-desoxi-6-fosfogluconato o KDPG, el intermediario clave (figura 9.3), carbohidratos, así como ácidos grasos y aminoácidos
en esta vía. KDPG es puede convertirse en acetil-CoA.
luego escindido por KDPG aldolasa a piruvato y gliceraldehído 3- Acetil-CoA luego entra en el ciclo del ácido tricarboxílico (TCA), que
fosfato. El gliceraldehído 3-fosfato se convierte en piruvato en la vía de también se denomina ciclo del ácido cítrico o ciclo de Krebs (figura 9.9 y
Embden-Meyerhof. Si el Entner-Doudoroff apéndice II). En la primera reacción acetil-CoA
vía degrada la glucosa a piruvato de esta manera, produce una se condensa con (es decir, se agrega a) un intermedio de cuatro carbonos,
ATP, un NADPH y un NADH por glucosa metabolizada. oxaloacetato, para formar citrato, una molécula con seis carbonos. ciudad
De la glucólisis
C O
piruvato
C O
1 El piruvato se descarboxila (es decir, pierde un
carbono en forma de CO2). Los dos carbonos
CH3 restantes están unidos a la coenzima A por un enlace
de alta energía. La energía de este enlace se utilizará
para impulsar la siguiente reacción. Acetil-CoA es un
NAD metabolito precursor.
9 El malato se oxida, 1
NADHH _
generando más NADH y
regenerando oxaloacetato, CO2
que es necesario para aceptar O
CoA
los dos carbonos del acetil-CoA
CoA CS Acetil CoA 2
y continuar el ciclo. Los dos carbonos restantes del
piruvato se combinan con los cuatro
El oxaloacetato también es CH3 carbonos del oxalacetato. Esto crea el
un metabolito precursor. oxaloacetato Citrato citrato de molécula de 6 carbonos.
ARRULLO
ARRULLO
NADHH _ CO
2
CH2
CH2 HO C ARRULLO
NAD
ARRULLO
3 El citrato cambia la
CH2
disposición de los átomos para
9 ARRULLO
formar ácido isocítrico.
malato
3
ARRULLO
Ácido isocítrico
HO CH 6 carbonos
4 carbonos ARRULLO
escenario
HC escenario
CH2
ARRULLO
HC ARRULLO
H2O 8
Ciclo TCA HO CH
8 El fumarato
ARRULLO
ARRULLO NAD
reacciona con H2O 5 carbonos 4
para formar malato. CH
escenario NADHH _
ARRULLO
HC
CoA
ARRULLO CH2 CO2
Fumarato
4 Se elimina otro
CH2
7 carbono, creando el
ARRULLO CO metabolito precursor de 5
FADH2 carbonos:
ARRULLO-
CH2 O cetoglutarato. En el
MODA 5 -cetoglutarato proceso, se forma NADH.
CH2 C O
CoA NAD
6
7 El succinato se oxida a ARRULLO
CH2
fumarato. FAD sirve como
succinato NADHH _
aceptor de electrones. CH2
C CO2
PIB GTP
CoA del sistema operativo
5 El último carbono de la glucosa se
Pi Succinil CoA libera como dióxido de carbono.
6 La CoA se escinde de la Se forma más NADH para su uso
molécula de alta energía en el ETS, y se forma el metabolito
succinil-CoA. La energía liberada precursor de 4 carbonos succinil-
se usa para formar GTP, que CoA.
puede usarse para producir ATP o
usarse directamente para
suministrar energía a procesos
como la traducción.
Figura 9.9 El ciclo del ácido tricarboxílico. El ciclo TCA está vinculado a la glucólisis por una reacción de conexión catalizada por el piruvato
complejo deshidrogenasa. La reacción descarboxila el piruvato (elimina un grupo carboxilo como CO2) y genera acetil-CoA. El ciclo puede
dividirse en tres etapas según el tamaño de sus intermedios. Las tres etapas están separadas entre sí por dos descarboxilaciones.
reacciones Los metabolitos precursores, esqueletos de carbono utilizados en la biosíntesis, se muestran en azul. NADH y FADH2 se muestran en púrpura; todos pueden
transferir electrones a la cadena de transporte de electrones (ETC).
(un alcohol terciario) se reorganiza para dar isocitrato, un alcohol secundario que se oxida más La cadena de transporte de electrones La cadena
fácilmente. Posteriormente, el isocitrato se oxida y se descarboxila dos veces para producir
de transporte de electrones mitocondrial está compuesta por una serie de transportadores de
-cetoglutarato (cinco carbonos) y luego succinil-CoA (cuatro carbonos), una molécula con un
electrones que operan juntos para transferir electrones de donantes, como NADH y FADH2, a
enlace de alta energía. En este punto, se han formado dos moléculas de NADH y se han perdido
aceptores, como O2 (figura 9.10). Los electrones fluyen desde los portadores con potenciales de
dos carbonos del ciclo como CO2. El ciclo continúa cuando la succinil-CoA se convierte en
reducción más negativos hacia aquellos con potenciales más positivos y eventualmente se
succinato. Esto implica romper el enlace de alta energía en succinil-CoA y usar la energía liberada
combinan con O2 y H para formar agua. Este patrón de flujo de electrones es exactamente el
para formar un GTP por fosforilación a nivel de sustrato. El GTP también es una molécula de alta
mismo que se ve en la torre de electrones que se describe en el capítulo 8 (ver figura 8.8). Los
energía y es funcionalmente equivalente al ATP. Siguen dos pasos de oxidación, produciendo un
electrones descienden por este gradiente de potencial como el agua que desciende por una serie
FADH2 y un NADH. El último paso de oxidación regenera el aloacetato de buey, y siempre que
de rápidos. La diferencia en los potenciales de reducción entre el O2 y el NADH es grande,
haya un suministro de acetil-CoA, el ciclo puede repetirse. La inspección de la figura 9.9 muestra
alrededor de 1,14 voltios, lo que hace posible la liberación de una gran cantidad de energía. Las
que el ciclo TCA genera dos moléculas de CO2 , tres moléculas de NADH, una de FADH2 y una
diferencias en el potencial de reducción en varios puntos de la cadena son lo suficientemente
de GTP por cada molécula de acetil-CoA oxidada.
grandes como para proporcionar suficiente energía para la producción de ATP, al igual que la
energía de las cascadas puede ser aprovechada por ruedas hidráulicas y utilizada para generar
electricidad. Por lo tanto, la cadena de transporte de electrones divide la gran cantidad de energía
total liberada en pequeños pasos. Como se verá en breve, el transporte de electrones en estos
puntos genera protones y electricidad.

Las enzimas del ciclo TCA están ampliamente distribuidas entre los microorganismos. En
los procariotas, se localizan en la matriz citoplasmática. En eucariotas, se encuentran en la matriz
mitocondrial. El ciclo completo parece ser funcional en muchas bacterias aeróbicas, protistas de
vida libre y hongos. Esto no es sorprendente porque el ciclo es una fuente de energía muy
importante. Incluso aquellos microorganismos que carecen del ciclo TCA completo suelen tener la
mayoría de las enzimas del ciclo, porque el ciclo TCA también es una fuente clave de esqueletos
de carbono para usar en la biosíntesis. Síntesis de aminoácidos: Reacciones anapleróticas y –0.4

FeS
biosíntesis de aminoácidos (sección 10.5)
–0.3 NADH
FMN FeS
–0.2 Complejo
I
1. Dé el sustrato y los productos del ciclo del ácido tricarboxílico. Describa su organización
–0.1
FeS
en términos generales. ¿Cuáles son sus dos funciones principales? MODA
ÿ 0 Cit bL
2. ¿Qué intermediario químico une el piruvato con el ciclo del TCA? FeS Complejo
FeS CoQ Cit bH tercero
3. ¿Cuántas veces se debe realizar el ciclo TCA para oxidar completamente una molécula +0.1
de glucosa a seis moléculas de CO2? ¿Por qué?
succinato Complejo
4. ¿En qué orgánulo eucariótico se encuentra el ciclo TCA? ¿Dónde se ubica el ciclo en +0.2 II Cyt c1 Cyt un
cita c
los procariotas? FeS CuA
aproximado
(V)
E0
+0.3
5. ¿Por qué sería deseable que un microbio con la vía de Embden-Meyerhof y el ciclo
Cachorro
TCA también tuviera la vía de las pentosas fosfato?
+0.4 Complejo Cyt a3
6. ¿Por qué GTP es funcionalmente equivalente a ATP? IV
+0.5
+0.6
9.5 TRANSPORTE DE ELECTRONES Y
+0.7
FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
Durante la oxidación de glucosa a seis moléculas de CO2 por glucólisis y el ciclo TCA, se +0.8
O2
generan cuatro moléculas de ATP por fosforilación a nivel de sustrato. Así, en este punto, el
trabajo realizado por la célula ha producido relativamente poco ATP. Sin embargo, al oxidar la
glucosa, la célula también ha generado numerosas moléculas de NADH y FADH2. Ambas Posición aproximada en la cadena
moléculas tienen un E'0 relativamente negativo y pueden usarse para conservar energía (ver tabla
8.1). De hecho, la mayor parte del ATP generado durante la respiración aeróbica proviene de la Figura 9.10 La cadena de transporte de electrones mitocondrial.
oxidación de estos transportadores de electrones en la cadena de transporte de electrones. La Muchos de los portadores más importantes están dispuestos
cadena de transporte de electrones mitocondrial se examinará primero porque ha sido muy bien aproximadamente en el potencial y la secuencia de reducción correctos.
estudiada. Luego nos centraremos en las cadenas bacterianas y terminaremos con una discusión
En la mitocondria eucariótica, se organizan en cuatro complejos que están unidos
sobre la síntesis de ATP. por la coenzima Q (CoQ) y el citocromo c (Cyt c).
Los electrones fluyen desde el NADH y se succionan por el gradiente de
potencial de reducción a oxígeno. Ver texto para más detalles.
Transporte de electrones y fosforilación oxidativa 201
gradientes Estos gradientes pueden impulsar la síntesis de ATP y realizar La cadena de transporte se muestra en la figura 9.12. El NADH generado
otro trabajo. por la oxidación de sustratos orgánicos (durante la glucólisis y la
En los eucariotas, los portadores de la cadena de transporte de electrones residen ciclo TCA) se dona a la cadena de transporte de electrones, donde
dentro de la membrana interna de la mitocondria. En procariotas, se oxida a NAD por la NADH deshidrogenasa unida a la membrana. Luego, los
se encuentran dentro de la membrana plasmática. la mitocondrial electrones se transfieren a portadores con potenciales de reducción
El sistema está organizado en cuatro complejos de portadores, cada uno capaz progresivamente más positivos. como electrones
de transportar electrones parte del camino hacia el O2 (figura 9.11). moverse a través de los portadores, los protones se mueven a través del plasma
La coenzima Q y el citocromo c conectan los complejos entre sí. membrana al espacio periplásmico (es decir, fuera de la célula) en lugar
otro. Aunque algunas cadenas bacterianas se asemejan a las mitocondriales que a un espacio intermembrana como se ve en las mitocondrias
cadena, con frecuencia son muy diferentes. Como ya se señaló, las cadenas (comparar figuras 9.11 y 9.12). Otra diferencia significativa
bacterianas se encuentran dentro de la membrana plasmática. ellos también pueden entre la cadena de E. coli y la cadena mitocondrial es que la
estar compuesto de diferentes portadores de electrones (p. ej., sus citocromos) cadena de transporte de electrones bacteriano contiene una matriz diferente de
y puede estar muy ramificado. Los electrones a menudo pueden citocromos. Además, E. coli ha desarrollado dos ramas de
entran en la cadena por varios puntos y salen por varias oxidasas terminales. la cadena de transporte de electrones que operan bajo diferentes aireación
Las cadenas bacterianas también pueden ser más cortas, lo que resulta en la condiciones Cuando el oxígeno está fácilmente disponible, el citocromo
liberación de menos energía. Aunque las cadenas de transporte de electrones Se utiliza la rama bo . Cuando se reducen los niveles de oxígeno, se utiliza la
procariotas y eucariotas difieren en los detalles de construcción, operan rama citocromo bd porque tiene una mayor afinidad por
utilizando los mismos principios fundamentales. oxígeno. Sin embargo, es menos eficiente que la rama bo porque
La cadena de transporte de electrones de E. coli servirá como ejemplo de la rama bd mueve menos protones hacia el espacio periplásmico
estas diferencias. Una vista simplificada de la E. coli (figura 9.12).
4H+ 4H+ 2H+

Espacio Intermembrano ATP sintasa
3H+
2e
FeS Cyt c1 cita c
q Cyt a Cu
2e C
FeS a F0
Cit bL Cyt a3 Cu
1 qq
FeS 3 4
FMN Cyt 560 2e
FeS Cit bH
2e ÿÿ
2
MODA
NADH NAD+ 1 2H+
+ H+
4H+ 4H+ /2O2 + 2H+ H2O
fumarato de succinato B
ÿ
F1
d ÿ ÿ
Matriz ÿ
ADP+ Pi atp
Figura 9.11 La hipótesis quimiosmótica aplicada a las mitocondrias. En este esquema los transportistas se organizan asimétricamente
dentro de la membrana interna para que los protones sean transportados a medida que los electrones se mueven a lo largo de la cadena. La liberación de protones
en el espacio intermembrana se produce cuando se transfieren electrones de portadores, como FMN y coenzima Q (Q), que transportan tanto electrones como protones a
componentes como proteínas de hierro no hemo (proteínas FeS) y citocromos (Cyt) que transportan solo electrones. Complejo IV bombea protones
a través de la membrana a medida que los electrones pasan del citocromo a al oxígeno. La coenzima Q transporta electrones de los complejos I y II al complejo
tercero El citocromo c mueve electrones entre los complejos III y IV. El número de protones movidos a través de la membrana en cada sitio por par de
electrones transportados es todavía algo incierto; el consenso actual es que al menos 10 protones deben moverse hacia afuera durante NADH
oxidación. Una molécula de ATP es sintetizada y liberada por la enzima ATP sintasa por cada tres protones que cruzan la membrana.
al atravesarlo.
cadena mitocondrial; figura 9.11). En otros casos, la translocación de protones

Baja aireación, resulta de la yuxtaposición de portadores que aceptan tanto electrones como
fase estacionaria 2e– protones con portadores que aceptan solo electrones. Por ejemplo, la
( rama bd )
2H+ coenzima Q lleva dos electrones y dos protones al citocromo b en el complejo
b558 b595 III de la cadena mitocondrial. El citocromo b acepta solo un electrón a la vez
2e- y no aceptará protones. Así, por cada electrón transferido por la coenzima Q,
QH2
dd se libera un protón al espacio intermembrana.
H2O
Espacio El resultado de la expulsión de protones durante el transporte de
periplásmico QH2 2H+ + O2 1/2 electrones es la formación de un gradiente de concentración de protones
q (pH; energía potencial química) y un gradiente de carga
eléctrica).
(; energía
Así,
potencial
la matriz
mitocondrial es más alcalina y más negativa que el espacio intermembrana.
Del mismo modo, con procariotas, el citoplasma es más alcalino y más
Citoplasma
negativo que el espacio periplásmico. Las diferencias de potencial químico y
eléctrico combinadas constituyen la fuerza motriz de protones (PMF). El
NAD+
PMF se utiliza para realizar trabajo cuando los protones fluyen de regreso a
q FeS MODA NADH deshidrogenasa través de la membrana, bajando los gradientes de concentración y carga, y
NADH + H+ hacia la matriz mitocondrial (o citoplasma procariótico). Este flujo es
exergónico y se usa a menudo para fosforilar ADP en ATP.
El PMF también se utiliza para transportar moléculas directamente al interior

de la célula (es decir, sin la hidrólisis de ATP) y para hacer girar el motor
q
2H+
flagelar. Por lo tanto, el PMF juega un papel central en la fisiología procariótica
QH2
2H+ + O2 1/2 (figura 9.13). Absorción de nutrientes por la célula (sección 5.6); Componentes
externos a la pared celular: Flagelos y motilidad (sección 3.9)
H2O El uso de PMF para la síntesis de ATP está catalizado por la ATP
QH2 Cu2+
sintasa (figura 9.14), una enzima de múltiples subunidades también conocida
2e–
b562 o como F1F0 ATPasa porque consta de dos componentes y puede catalizar la
Cu2+ hidrólisis de ATP. El componente mitocondrial F1 aparece como una
2H+
estructura esférica unida a la superficie de la membrana interna mitocondrial
Alta aireación, por un tallo. El componente F0 está incrustado en la membrana. La ATP
fase tronco 2H+
( rama bo )
sintasa se encuentra en la superficie interna del plasma.
Figura 9.12 El sistema respiratorio aeróbico de E. coli.

NADH es la fuente de electrones. La ubiquinona-8 (Q) conecta la Donadores de electrones (reductores) Luz
NADH deshidrogenasa con dos sistemas de oxidasa terminales. La

rama superior opera cuando la bacteria está en fase estacionaria y
hay poco oxígeno. Están involucrados al menos cinco citocromos:
b558, b595, b562, d y o. La rama inferior funciona cuando E. coli crece
rápidamente con buena aireación. transporte Fotosíntesis
de electrones
Fosforilación oxidativa La fosforilación

oxidativa es el proceso mediante el cual se sintetiza ATP como resultado fuerza motriz de protones
del transporte de electrones impulsado por la oxidación de una fuente de
energía química. El mecanismo por el cual tiene lugar la fosforilación oxidativa
se ha estudiado intensamente durante años. La hipótesis más aceptada es la
hipótesis quimiosmótica, que fue formulada por el bioquímico británico Peter
Mitchell. De acuerdo con la hipótesis quimiosmótica, la cadena de
ADP + Pi atp Rotación de
transporte de electrones está organizada de manera que los protones se flagelos Transporte activo
mueven hacia afuera de la matriz mitocondrial a medida que los electrones bacterianos
son transportados por la cadena (figura 9.11).

El movimiento de los protones a través de la membrana no se entiende
por completo. Sin embargo, en algunos casos, los protones son bombeados Figura 9.13 El papel central de la fuerza motriz de protones. Cabe
activamente a través de la membrana (p. ej., por el complejo IV del señalar que el transporte activo no siempre es impulsado por PMF.
Transporte de electrones y fosforilación oxidativa 203
atp
atp atp
intermembrana
espacio
3H+
ÿTP 30º
rotación
ADP+PiÿHC ÿ
ÿTP ADP +
Pi
ÿHC ÿ
ÿTP
ÿ ÿE ÿDP entrar
ÿDP ÿDP
ADP + catalítico
ADP+Pi ADP+Pi sitio ADP+Pi
a C Pi
F0
90º
Funcionalmente equivalente rotación
Matriz ÿ ÿ pero girado 120º
Conformación
atp cambio #3:
B ATP puede ser
ÿ ÿE ÿE publicado
F1
d ÿ ÿ ADP ADP
ÿ ÿ
ÿ ÿDP ÿ TP ÿDP ÿ TP
+Pi +Pi
Conformación
Conformación cambio #2
acoplado a ATP
atp cambio #1
(a) ADP+ Pi (B) síntesis
Figura 9.14 Estructura y función de la ATP sintasa. (a) Las principales características estructurales de la ATP sintasa deducidas de la cristalografía de rayos X
y otros estudios. F1 es una estructura esférica compuesta en gran parte por subunidades alternas y; los tres sitios activos están en las subunidades. La subunidad se
extiende hacia arriba a través del centro de la esfera y puede rotar. El tallo (y las subunidades) conectan la esfera con F0, la membrana
complejo incrustado que sirve como canal de protones. F0 contiene una subunidad a, dos subunidades b y de 9 a 12 subunidades c. El brazo del estator se compone de
subunidad a, dos subunidades b y la subunidad; está incrustado en la membrana y unido a F1. Un anillo de subunidades c en F0 está conectado al tallo
y puede actuar como un rotor y moverse más allá de la subunidad a del estator. A medida que gira el anillo de la subunidad c, gira el eje (subunidades). (b) La vinculación
mecanismo de cambio es un modelo ampliamente aceptado de la síntesis de ATP. Este dibujo simplificado del modelo muestra las tres subunidades catalíticas y el
subunidad, que se encuentra en el centro del complejo F1 . A medida que la subunidad gira, provoca cambios conformacionales en cada subunidad. mi
La conformación (vacía) es una conformación abierta, que no une nucleótidos. Cuando la subunidad gira 30°, es una conformación se convierte en el (medio
mi HC
cerrada. Pi y ADP pueden ingresar al sitio catalítico cuando está en esta conformación. La subsiguiente rotación de 90 ° por parte de la subunidad es crítica.
porque produce tres cambios conformacionales significativos: (1) to (ADP enlazado), (2) para (ATP unido), y (3) para E. Cambiar
HC DP DP TP TP
from va acompañado
para de la formación de ATP; cambiar de para permite la liberación de ATP de la ATP sintasa.
DP TP TP mi
membrana en procariotas. F0 participa en el movimiento de protones categorías. Algunos bloquean directamente el transporte de electrones. El antibiótico
a través de la membrana. F1 es un gran complejo en el que tres subunidades se piericidina compite con la coenzima Q; el antibiótico antimicina A bloquea el
alternan con tres subunidades. Los sitios catalíticos para el ATP. transporte de electrones entre los citocromos by
de síntesis se localizan en las subunidades. En el centro de la F1 está el C; y tanto el cianuro como la azida detienen la transferencia de electrones entre el
subunidad La subunidad se extiende a través de F1 e interactúa con F0. citocromo a y el O2 porque son análogos estructurales de
Ahora se sabe que la ATP sintasa funciona como un motor rotativo. Se cree O2. Otro grupo de inhibidores conocidos como desacopladores detiene ATP
que el flujo de protones a favor del gradiente de protones síntesis sin inhibir el propio transporte de electrones. De hecho, ellos
a través de la subunidad F0 hace que F0 y la subunidad giren. Como puede incluso mejorar la tasa de flujo de electrones. Normalmente electrón
la subunidad gira rápidamente dentro de la F1 (al igual que un automóvil El transporte está estrechamente relacionado con la fosforilación oxidativa, por lo que
cigüeñal), la rotación provoca cambios de conformación en las subunidades (figura que la tasa de síntesis de ATP controla la tasa de transporte de electrones. Cuanto
9.14b). Un cambio de conformación ( E a HC) permite la entrada de ADP
el ysitio
Pi en más rápido se sintetiza ATP durante la fosforilación oxidativa, más rápido opera la
catalítico. Otro cambio de conformación ( HC a DP) une débilmente ADP y Pi en el cadena de transporte de electrones para
suministrar la energía requerida. Los desacopladores desconectan oxidativo
sitio catalítico. El ATP se sintetiza cuando la conformación esDP fosforilación por transporte de electrones; por lo tanto, la energía liberada por la
cambiado a los TP conformación, y ATP se libera cuando TP cadena se libera como calor y no como ATP. Muchos
cambios en la conformación,
mi para comenzar de nuevo el ciclo de síntesis. desacopladores como el dinitrofenol y la valinomicina permiten que el hidrógeno
Gran parte de la evidencia que respalda la hipótesis quimiosmótica proviene iones, iones de potasio y otros iones para cruzar la membrana sin activar la ATP
de estudios que utilizan sustancias químicas que inhiben la actividad aeróbica. sintasa. De esta manera destruyen el pH y
síntesis de ATP. Estos productos químicos pueden incluso matar células en gradientes de iones. La valinomicina también puede unirse directamente a la ATP
concentraciones suficientemente altas. Los inhibidores generalmente se dividen en dos sintasa e inhibir su actividad.
Rendimiento de ATP durante la respiración aeróbica conversión a acetil-CoA, y 6 del ciclo TCA) y 2
FADH2 (del ciclo TCA) se generan cuando la glucosa se oxida completamente
Es posible estimar el número de moléculas de ATP sintetizadas
a 6 CO2. Suponiendo una relación P/O de 3 para NADH
por NADH o FADH2 oxidado por la cadena de transporte de electrones.
oxidación y 2 para la oxidación de FADH2 , el 10 NADH teóricamente podría
Durante la respiración aeróbica, un par de electrones del NADH se donan a la
impulsar la síntesis de 30 ATP, mientras que la oxidación del 2
cadena de transporte de electrones y finalmente se usan para reducir
Las moléculas de FADH2 agregarían otros 4 ATP para un máximo de 34
un átomo de oxígeno a H2O. Esto libera suficiente energía para conducir
ATP generado a través de la fosforilación oxidativa. Debido a que la fosforilación
la síntesis de tres ATP. Esto se conoce como el fósforo para
a nivel de sustrato aporta solo cuatro ATP por molécula de glucosa oxidada, la
proporción de oxígeno (P/O) porque mide el número de ATP (fósforo) generado
fosforilación oxidativa representa al menos
por oxígeno (O) reducido. Porque FADH2 tiene un
ocho veces más. El rendimiento total máximo de ATP durante la respiración
potencial de reducción más positivo que el NADH (ver figura 8.8),
aeróbica es de 38 ATP. Debe recordarse que los cálculos recién resumidos y
los electrones que surgen de su oxidación fluyen por una cadena más corta,
presentados en la figura 9.15 son
liberando menos energía. Así, mientras que la relación P/O para NADH es 3, solo
teórico. De hecho, las relaciones P/O son más probables de 2.5 para
se pueden hacer dos ATP a partir de la oxidación de un solo FADH2.
NADH y 1,5 para FADH2. Por lo tanto, el rendimiento total de ATP de la glucosa
Así podemos calcular el rendimiento máximo de ATP (figura 9.15)
puede estar más cerca de 30 ATP en lugar de 38.
de la respiración aeróbica. Fosforilación a nivel de sustrato durante
Debido a que los sistemas de transporte de electrones procarióticos a menudo tienen
la glucólisis produce como máximo dos moléculas de ATP por glucosa
proporciones P/O más bajas que los sistemas eucarióticos, rendimientos de ATP procarióticos
convertida en piruvato (figuras 9.5, 9.6 y 9.8). Dos GTP adicionales
puede ser menos. Por ejemplo, E. coli, con su electrón truncado
(equivalentes de ATP) son generados por fosforilación a nivel de sustrato
cadenas de transporte, tiene una relación P/O de alrededor de 1,3 cuando se usa el
durante las dos vueltas del ciclo TCA necesarias para oxidar dos
camino bo del citocromo a altos niveles de oxígeno y solo una relación de aproximadamente
moléculas de acetil-CoA (figura 9.9). Sin embargo, la mayor parte del ATP
0.67 cuando se emplea la rama bd del citocromo (figura 9.12) en
producido durante la respiración aeróbica se genera por fosforilación oxidativa.
bajas concentraciones de oxígeno. En este caso la producción de ATP varía
Hasta 10 NADH (2 de glucólisis, 2 de piruvato
Figura 9.15 Rendimiento máximo teórico de ATP Glucosa

de la Respiración Aeróbica. para alcanzar el
rendimiento máximo teórico de ATP, se debe suponer
GLUCOLISIS
una relación P/O de 3 para la oxidación de NADH y de 2 para
FADH2. El rendimiento real es probablemente significativamente
Fructosa 1, 6-bis PO4
menos y varía entre eucariotas y procariotas y entre
especies procariotas.
2 Gliceraldehído 3 PO4
2NADH 6 ATP
Fosforilación oxidativa
2ATP
Fosforilación a nivel de sustrato
2 piruvato
2NADH 6 ATP
2 acetil-CoA
6NADH 18 ATP
2FADH2 4ATP
2 ciclos TCA
2ATP (GTP)
Fosforilación a nivel de sustrato
Rendimiento aeróbico total36–38 ATP

Respiración anaerobica 205
con las condiciones ambientales. Tal vez porque E. coli normalmente crece en hábitats
Tabla 9.1 Algunos aceptores de electrones utilizados en la respiración
como el tracto intestinal que son muy
rico en nutrientes, no tiene por qué ser especialmente eficaz en Electrón Reducido Ejemplos de
síntesis de ATP. Presumiblemente, la cadena de transporte de electrones funciona Productos aceptores microorganismos
cuando E. coli se encuentra en un ambiente de agua dulce óxico entre
Aerobio O2 H2O Todo aeróbico
Hospedadores.
bacterias, hongos
y protistas
1. Describa brevemente la estructura de la cadena de transporte de electrones y su función. bacterias entéricas
NO3 anaeróbico NO2
en la formación de ATP. ¿En qué se diferencian las cadenas mitocondriales y bacterianas?
NUMERO 3 NO2 , N2O, N2 Pseudomonas,
2. Describa el modelo actual de fosforilación oxidativa. Describa brevemente el bacilo, y
estructura de la ATP sintasa y explicar cómo se cree que funciona. ¿Qué es Paracoccus
un desacoplador? 2
SO4 H2S Desulfovibrio y
3. ¿En qué se diferencian la fosforilación a nivel de sustrato y la fosforilación oxidativa? Desulfotomaculum
4. Calcular el rendimiento de ATP cuando la glucosa se cataboliza completamente a seis CO2
CO2 CH4 Todos los metanógenos
por un microbio eucariótico. ¿Cómo se compara este valor con el rendimiento de ATP? y acetógenos
observado para una bacteria? Suponga que una bacteria usó la vía de S0 H2S Desulfuromonas
Entner Doudoroff para degradar la glucosa a piruvato. ¿Cómo afectaría esto y termoproteo
al rendimiento total de ATP? Explique su razonamiento. Fe3 Fe2 pseudomonas,
bacilo, y
Geobacter
2
HAsO4 HAsO2 Bacilo,
9.6 RESPIRACIÓN ANAERÓBICA
desulfotomaculo,
Como hemos visto, durante la respiración aeróbica, los azúcares y otras moléculas Sulfurospirillum
2
orgánicas se oxidan y sus electrones se transfieren a SeO4 Se, HSeO3 Aeromonas,
NAD y FAD para generar NADH y FADH2, respectivamente. Bacilo, Thauera
Estos portadores de electrones luego donan los electrones a un electrón. Fumarato succinato Wolinella
cadena de transporte que utiliza O2 como aceptor terminal de electrones.
Sin embargo, también es posible que otros aceptores de electrones terminales
ser utilizado para el transporte de electrones. Respiración anaeróbica, una
idación de nitrito a dinitrógeno gaseoso (N2). No tantos protones
proceso por el cual un aceptor de electrones terminal exógeno otro
son bombeados a través de la membrana durante el crecimiento anaeróbico, pero
que el O2 se utiliza para el transporte de electrones, lo llevan a cabo muchas bacterias
sin embargo, se establece un PMF.
y arqueas. Los aceptores de electrones terminales más comunes.
La reducción anaeróbica del nitrato hace que no esté disponible para el
utilizados durante la respiración anaeróbica son nitrato, sulfato y CO2,
célula para la asimilación o absorción. Por lo tanto, este proceso se llama
pero los metales y algunas moléculas orgánicas también pueden reducirse
reducción disimilatoria de nitrato. La nitrato reductasa reemplaza a la citocromo
(tabla 9.1).
oxidasa para catalizar la reacción:
Aunque algunas bacterias y arqueas crecen usando solo respiración anaeróbica,
muchas pueden realizar tanto respiración aeróbica como anaeróbica. NO3 2e 2 H ÿ NO2 H2O
respiración, dependiendo de la disponibilidad de oxígeno. Un ejemplo es Paracoccus
denitrificans, un gramnegativo, facultativo Sin embargo, la reducción de nitrato a nitrito no es un método particularmente eficiente.
bacteria anaeróbica del suelo que es metabólicamente extremadamente versátil. manera de hacer ATP porque se requiere una gran cantidad de nitrato
Puede degradar una amplia variedad de compuestos orgánicos y para el crecimiento (una molécula de nitrato aceptará sólo dos electrones). Además,
incluso puede crecer quimiolitotróficamente. En condiciones anóxicas, el nitrito es bastante tóxico. Bacterias como P. denitrificans
P. denitrificans utiliza NO3 como aceptor de electrones. Como se muestra en evitar los efectos tóxicos del nitrito reduciéndolo a gas nitrógeno, un
figura 9.16, dos cadenas de transporte de electrones diferentes son utilizadas por proceso conocido como desnitrificación. Al donar cinco electrones a un
esta bacteria, una para la respiración aeróbica y la segunda para molécula de nitrato, el NO3 se convierte en un producto no tóxico.
Respiración anaerobica. Note que durante la quimioorgantrofia
crecimiento, la fuente de electrones en ambas cadenas es NADH. La cadena aeróbica 2NO3 10e 12H ÿ N2 6H2O
tiene cuatro complejos que corresponden a la cadena mitocondrial (figura 9.16a).

Como se ilustra en la figura 9.16, la desnitrificación es un proceso de varios pasos
Cuando P. denitrificans crece sin
proceso en el que participan cuatro enzimas: nitrato reductasa, nitrito
oxígeno, utilizando NO3 como aceptor terminal de electrones, la cadena de transporte
reductasa, óxido nítrico reductasa y óxido nitroso reductasa.
de electrones es más compleja (figura 9.16b). la cadena es
muy ramificado y se reemplaza el complejo citocromo aa . NO3 ÿ NO2 ÿ NO ÿ N2O ÿ N2
Los electrones pasan de la coenzima Q al citocromo b para la
reducción de nitrato a nitrito (catalizada por nitrato reductasa). Dos tipos de nitrito reductasas bacterianas catalizan la formación
Luego, los electrones fluyen a través del citocromo c para el buey secuencial. de NO en bacterias. Uno contiene citocromos c y d1 (p. ej.,
CH3OH HCHO
Respiración aeróbica Maryland
H+ H+ Cyt c551 H+
periplasma
cita c
Cyt c1
FeS Cyt un
cita b
CoQ
Cyt a3
FP FeS
Citoplasma
NADH NAD+
NAD 1/2O2 H2O
H+ H+ H+
(a)
NO
NO2 –
Respiración anaerobica
Cyt c Cyt d1 N2
cobre
nir
números
H+ H+ H+
2NO N2O N2O
periplasma
cita c
Cyt c1
FeS cita b
cita b
CoQ cita c
cita b
FP FeS FeS
Ni
nar
Citoplasma
NADH NAD+ NO3 – NO2 –

H+ H+
(B)
Figura 9.16 Cadenas de transporte de electrones de Paracoccus denitrificans. (a) La cadena de transporte aeróbica se asemeja a una
cadena de transporte de electrones mitocondrial y utiliza oxígeno como su aceptor. El metanol y la metilamina pueden aportar electrones al nivel del
citocromo c. (b) La cadena anaeróbica altamente ramificada está formada por proteínas de membrana y periplásmicas. El nitrato se reduce a
nitrógeno diatómico por la acción colectiva de cuatro reductasas diferentes que reciben electrones de CoQ y citocromo c. Se muestran las ubicaciones
del movimiento de protones, pero no se indica el número de protones involucrados. Abreviaturas utilizadas: flavoproteína (FP), metanol deshidrogenasa
(MD), nitrato reductasa (Nar), nitrito reductasa (Nir), óxido nítrico reductasa (Nor) y óxido nitroso reductasa (Nos).
Fermentaciones 207
Paracoccus y Pseudomonas aeruginosa), y el otro es un uso por microorganismos capaces de respirar con O2 o nitrato. Mientras que el O2
proteína que contiene cobre (p. ej., Alcaligenes). Nitrito reductasa está disponible, los reductores de sulfato y los metanógenos son
parece ser periplásmico en bacterias gramnegativas. Óxido nítrico inhibidos porque estos grupos son anaerobios obligados.
reductasa cataliza la formación de óxido nitroso a partir de NO y Una vez que se agotan el O2 y el nitrato y se acumulan los productos de la
es un complejo de citocromo bc unido a la membrana . En las latas de P. denitrifi, la fermentación (sección 9.7), incluido el hidrógeno, comienza la competencia por el uso
nitrato reductasa y la óxido nítrico reductasa están unidas a la membrana, mientras de otros aceptores de electrones. Manganeso
que la nitrito reductasa y el óxido nitroso están unidas a la membrana. y el hierro se usan primero, seguidos de la competencia entre el sulfato
reductasa son periplásmicos (figura 9.16b). reductores y metanógenos. Esta competencia está influenciada por la
Además de P. denitrificans, algunos miembros de los géneros mayor rendimiento energético obtenido con sulfato como aceptor de electrones.
Pseudomonas y Bacillus realizan la desnitrificación. Los tres Las diferencias en la afinidad enzimática por el hidrógeno, una importante fuente de
los géneros utilizan la desnitrificación como alternativa a la respiración aeróbica energía y electrones utilizada por ambos grupos, también son importantes.
y pueden considerarse anaerobios facultativos. De hecho, si el O2 es El sulfato reductor Desulfovibrio crece rápidamente y utiliza la
presente, estas bacterias utilizan la respiración aeróbica, que es mucho más hidrógeno disponible a un ritmo más rápido que Methanobacterium. Cuándo
eficiente en la captación de energía. De hecho, la síntesis de nitrato reductasa es el sulfato se agota, Desulfovibrio ya no oxida hidrógeno y la concentración de
reprimida por el O2. Resultados de la desnitrificación en suelos anóxicos hidrógeno aumenta. Los metanógenos finalmente dominan el hábitat y reducen el
en la pérdida de nitrógeno del suelo y afecta adversamente la fertilidad del suelo. CO2 a metano. los
Ciclo biogeoquímico: ciclo del nitrógeno (sección 27.2) biosfera del subsuelo (sección 29.7)
No todos los microbios emplean facultativamente la respiración anaeróbica.
Algunos son anaerobios obligados que solo pueden realizar
1. Describa el proceso de la respiración anaeróbica. ¿Se produce tanto ATP en
Respiración anaerobica. Los metanógenos son un ejemplo. Estas
respiración anaeróbica como en la respiración aeróbica? ¿Por qué o por qué no?
las arqueas utilizan CO2 o carbonato como aceptor terminal de electrones.
2. ¿Qué es la desnitrificación? ¿Por qué a los agricultores no les gusta este proceso?
Se llaman metanógenos porque el aceptor de electrones es
3. E. coli puede usar O2, fumarato2 o, nitrato como aceptor terminal de electrones
reducido a metano. Las bacterias como Desulfovibrio son otra
bajo diferentes condiciones. ¿Cuál es el orden de producción de energía de mayor
ejemplo. Donan ocho electrones al sulfato, reduciéndolo a
al mínimo para estos aceptores de electrones? Explique su respuesta en términos
sulfuro (S2 o H2S).
termodinámicos.
2
SO4 8e 8H ÿ S2 4H2O
Cabe señalar que tanto los metanógenos como el Desulfovibrio son

9.7 FERMENTACIONES
capaces de funcionar como quimiolitotrofos, utilizando H2 como fuente de energía
fuente (sección 9.11). A pesar del tremendo rendimiento de ATP obtenido por fosforilación oxidativa, algunos
Como vimos para la desnitrificación, la respiración anaeróbica usando microbios quimioorganotróficos no respiran.
sulfato o CO2 como aceptores terminales de electrones no es tan eficiente en la porque o bien carecen de cadenas de transporte de electrones o reprimen
síntesis de ATP como lo es la respiración aeróbica. Reducción de ATP la síntesis de los componentes de la cadena de transporte de electrones bajo
rendimiento surge del hecho de que estos aceptores de electrones alternos condiciones anóxicas que imposibilitan la respiración anaeróbica. Aún
tienen potenciales de reducción menos positivos que el O2 (ver tabla 8.1). NADH producido por las reacciones de la vía de Embden-Meyerhof
La diferencia en el potencial de reducción estándar entre un donante durante la glucólisis (figura 9.5) todavía debe ser oxidado de nuevo a
como el NADH y el nitrato es menor que la diferencia entre NAD. Si el NAD no se regenera, la oxidación del gliceraldehído 3-fosfato cesará y la
NADH y O2. Debido a que la producción de energía está directamente relacionada con la glucólisis se detendrá. Muchos microorganismos resuelven este problema ralentizando
magnitud de la diferencia de potencial de reducción, menos energía es o deteniendo el piruvato.
disponible para producir ATP en la respiración anaeróbica. Sin embargo, actividad deshidrogenasa y utilizando piruvato o uno de sus derivados como aceptor
La respiración anaeróbica es útil porque permite la síntesis de ATP. de electrones para la reoxidación de NADH en un proceso de fermentación (figura
por transporte de electrones y fosforilación oxidativa en ausencia de O2. La respiración 9.17). Hay muchos tipos de
anaeróbica prevalece en suelos y sedimentos pobres en oxígeno. fermentaciones, y a menudo son característicos de grupos microbianos particulares
(figura 9.18). Algunas de las fermentaciones más comunes se presentan aquí, y
La capacidad de los microbios para usar una variedad de aceptores de electrones. varias otras se discuten en
tiene consecuencias ecológicas. A menudo se ve una sucesión de microorganismos puntos posteriores. Deben tenerse en cuenta tres temas unificadores al
en un entorno cuando varios aceptores de electrones Se examinan las fermentaciones microbianas: (1) el NADH se oxida a
están presentes. Por ejemplo, si O2, nitrato, ion manganeso, ion férrico, NAD, (2) el aceptor de electrones a menudo es piruvato o un derivado de piruvato, y
sulfato y CO2 están disponibles en un entorno particular, tiene lugar una secuencia (3) la fosforilación oxidativa no puede operar,
predecible de uso del aceptor de electrones cuando un sustrato oxidable está reduciendo significativamente el rendimiento de ATP por glucosa. En fermentación,
disponible para la población microbiana. Oxígeno el sustrato solo se oxida parcialmente, el ATP se forma exclusivamente
se emplea primero como aceptor de electrones porque inhibe el nitrato por fosforilación a nivel de sustrato, y no se necesita oxígeno.
Glucosa Muchos hongos, protistas y algunas bacterias fermentan azúcares para

glucólisis
etanol y CO2 en un proceso llamado fermentación alcohólica.
El piruvato se descarboxila a acetaldehído, que luego se reduce a etanol
mediante la alcohol deshidrogenasa con NADH como componente.
Gliceraldehído - 3 - P donante de electrones (figura 9.18, número 2). Fermentación de ácido láctico,
NAD+ NAD+ la reducción de piruvato a lactato (figura 9.18, número 1),
es aún más común. Está presente en bacterias (bacterias del ácido láctico,
NADH + H+ NADH + H+
Bacillus), protistas (Chlorella y algunos mohos acuáticos) y
1,3 -bisfosfoglicerato incluso en el músculo esquelético animal. Los fermentadores de ácido láctico se
pueden separar en dos grupos. Los fermentadores homolácticos utilizan la vía
de Embden Meyerhof y reducen directamente casi todo su piruvato
lactato con la enzima lactato deshidrogenasa. heteroláctico
piruvato los fermentadores forman cantidades sustanciales de productos distintos del
Fermentación NADH + H+
caminos NAD+ lactato; muchos producen lactato, etanol y CO2. Clase Gammaproteobacteria: Orden
Enterobacteriales (sección 22.3)
NADH + H+
Las fermentaciones alcohólicas y lácticas son muy útiles. La fermentación
X
lactato
alcohólica por levaduras produce bebidas alcohólicas;
NAD+
El CO2 de esta fermentación hace que el pan suba. La fermentación del ácido
láctico puede estropear los alimentos, pero también se usa para hacer yogur, sauer
Y
Figura 9.17 Reoxidación de NADH durante la fermentación.

El NADH de la glucólisis se reoxida al usarse para reducir el piruvato.
o un derivado de piruvato (X). Ya sea lactato o producto reducido Y resultado. 1 2
CO2
NADH NADH
lactato piruvato acetaldehído Etanol
CO2 piruvato
CO2
CoASH
3 4
oxaloacetato ÿAcetolactato
NADH Acetil-CoA formato

CO2
Pi NADH 5
CoA
H2 CO2
malato Acetilo- PAGS
acetaldehído acetoína
ADP
NADH
H2O atp NADH
Etanol
Acetato
Fumarato 6 2,3-butanodiol
Acetoacetil-CoA
NADH
CO2
Succinato Acetona Butiril-CoA
Pi
NADH CoA CoA
NADH
CO2
butiraldehído butirilo PAGS
ADP
NADH
Propionato Isopropanol atp
butanol butirato
1. Bacteria del ácido láctico (Streptococcus, lactobacillus), bacilo

Figura 9.18 Algunas fermentaciones microbianas comunes. 2. Levadura, Zymomonas
Solo se muestran las fermentaciones de piruvato con el fin de
3. Bacterias del ácido propiónico (Propionibacterium)
sencillez; muchas otras moléculas orgánicas pueden ser fermentadas.
4. Enterobacter, Serratia, Bacilo
La mayoría de estas vías se han simplificado mediante la eliminación de
5. Bacterias entéricas (Escherichia, Enterobacter, Salmonella, Proteus)
uno o más pasos e intermedios. Piruvato y mayor
los productos finales se muestran en color. 6. Clostridium
Fermentaciones 209
kraut, queso y pepinillos. El papel de las fermentaciones en la producción de alimentos alanina 2 glicina
se analiza en el capítulo 40. H2O NAD+
Muchas bacterias, especialmente miembros de la familia Enterobac teriaceae,
pueden metabolizar el piruvato a ácido fórmico y otros NADH + H+
NH3
2 NADH
productos en un proceso a veces llamado fermentación con ácido fórmico (figura 9.18,
número 5). El ácido fórmico se puede convertir en H2 piruvato
y CO2 por hidrogenoliasa fórmica (una combinación de al menos dos H2O
enzimas). CoA
NAD+
2 NAD+ 2 NH3
HCOOH ÿÿÿ CO2 H2 NADH + H+
CO2
Hay dos tipos de fermentación de ácido fórmico. Ácido mixto Acetil-CoA

la fermentación resulta en la excreción de etanol y un complejo
Pi 2 Acetato
mezcla de ácidos, particularmente acético, láctico, succínico y fórmico
ácidos (tabla 9.2). Si la hidrogenliasa fórmica está presente, el fórmico
CoA
el ácido se degradará a H2 y CO2. Este patrón se observa en Es cherichia, Salmonella,
Proteus y otros géneros. El segundo
Acetilo PAGS
tipo, la fermentación de butanodiol, es característica de Enterobacter, Serratia, Erwinia

ADP
y algunas especies de Bacillus (figura 9.18,
número 4). El piruvato se convierte en acetoína, que luego se reduce a 2,3-butanodiol
con NADH. Una gran cantidad de etanol. atp
también se produce, junto con cantidades más pequeñas de los ácidos

Acetato
encontrado en una fermentación ácida mixta. Clase Bacilli (sección 23.5)
Los microorganismos llevan a cabo una amplia gama de fermentaciones utilizando
Figura 9.19 La reacción de Stickland. La alanina se oxida a
numerosos azúcares y otros sustratos orgánicos como su energía
fuente (Puntos destacados históricos 9.1). Protozoos y hongos a menudo El acetato y la glicina se utilizan para reoxidar el NADH generado durante
degradación de alanina. La fermentación también produce algo de ATP.
fermentar azúcares a lactato, etanol, glicerol, succinato, formiato,
acetato, butanodiol y productos adicionales. algunos miembros de
el género Clostridium fermenta mezclas de aminoácidos. Los clostridios proteolíticos
Se utiliza para oxidar varios aminoácidos: alanina, leucina, isoleucina,
como los patógenos C. sporogenes y C. botulinum llevan a cabo la reacción de Stickland
valina, fenilalanina, triptófano e histidina. Las bacterias también
en la que un amino
fermentar aminoácidos (p. ej., alanina, glicina, glutamato, treo nueve y arginina) por otros
El ácido se oxida y un segundo aminoácido actúa como receptor de electrones. La figura
mecanismos. Además de azúcares
9.19 muestra la forma en que se oxida la alanina.
y se fermentan aminoácidos, ácidos orgánicos como acetato, lactato, propionato y citrato.
y glicina reducida para producir acetato, CO2 y NH3. Algunos
Algunas de estas fermentaciones son
El ATP se forma a partir del fosfato de acetilo por fosforilación a nivel de sustrato, y la
de gran importancia práctica. Por ejemplo, el citrato se puede convertir en diacetilo y dar
fermentación es muy útil para el cultivo en
sabor a la leche fermentada. Clase
ambientes anóxicos ricos en proteínas. La reacción de Stickland es
Clostridios (sección 23.4); Microbiología de alimentos fermentados (sección 40.6)
Tabla 9.2 Productos de fermentación ácida mixta de 1. ¿Qué son las fermentaciones y por qué son tan útiles para muchos microorganismos?
Escherichia coli 2. ¿En qué se diferencian los aceptores de electrones utilizados en la fermentación de los
aceptores de electrones terminales utilizados durante la respiración aeróbica o anaeróbica?

Equilibrio de fermentación ¿respiración?
(M Producto/100 M Glucosa)
3. Describa brevemente las fermentaciones alcohólicas, lácticas y fórmicas. Como hacer
Crecimiento Crecimiento alcalino ¿Difieren los fermentadores homolácticos y los fermentadores heterolácticos? como se mezclan
ácido (pH 6.0) (pH 8,0) ¿Difieren los fermentadores ácidos y los fermentadores de butanodiol?
Etanol 50 50 4. ¿Cuál es el rendimiento neto de ATP durante la fermentación homoláctica, acetato y butirato?
Ácido fórmico 2 86 mentaciones? ¿Cómo se comparan estos rendimientos con la respiración aeróbica en términos de
Ácido acético 36 39 tanto la cantidad como el mecanismo de fosforilación?

5. Algunas bacterias llevan a cabo la fermentación solo porque carecen de cadenas de transporte de
Ácido láctico 80 70
electrones. Sin embargo, estas bacterias todavía tienen una ATPasa unida a la membrana. ¿Por qué
ácido succínico 11 15
¿Crees que este es el caso? ¿Cómo crees que estas bacterias usan la ATPasa?
Dióxido de carbono 88 2
6. Cuando las bacterias llevan a cabo la fermentación, solo operan unas pocas
Gas de hidrogeno 75 0.5
reacciones del ciclo TCA. ¿Para qué crees que podrían servir estas reacciones? Por qué
butanodiol 0 0
¿Crees que algunas partes del ciclo están cerradas?
9.1 Microbiología y la Primera Guerra Mundial
Las presiones económicas únicas de los tiempos de guerra a veces proporcionan sal celular. Dunaliella crece en hábitats como el Great Salt
un incentivo para el descubrimiento científico. Dos ejemplos del Primer Mundo Lago de Utah y piscinas de rocas junto al mar.
La guerra involucra la producción de solventes orgánicos por parte de los microbios. El lado británico necesitaba los solventes orgánicos acetona y butanol. Se
fermentación de carbohidratos fácilmente disponibles, como el almidón o requería butanol para la producción de caucho artificial,
melaza. mientras que la acetona se utilizó como disolvente de la nitrocelulosa en el
El lado alemán necesitaba glicerol para hacer nitroglicerina. De acuerdo fabricación de cordita en polvo explosiva sin humo. Antes de
tiempo los alemanes haban importado su glicerol, pero tales importaciones 1914 La acetona se hizo mediante el calentamiento en seco (pirólisis) de la
fueron impedidos por el bloqueo naval británico. El científico alemán madera. Se necesitaban entre 80 y 100 toneladas de madera de abedul, haya o arce
Carl Neuberg sabía que los niveles de trazas de glicerol generalmente se producían para hacer 1 tonelada de acetona. Cuando estalló la guerra, la demanda de
durante la fermentación alcohólica del azúcar por parte de Saccharomyces. acetone superó rápidamente la oferta mundial existente. Sin embargo, en 1915
cerevisiae. Trató de desarrollar una fermentación modificada en la que Chaim Weizmann, un joven científico judío que trabaja en Manchester,
las levaduras producirían glicerol en lugar de etanol. Normalmente, el acetaldehído Inglaterra, había desarrollado un proceso de fermentación mediante el cual la
se reduce a etanol mediante NADH y alcohol deshidrogenasa (figura 9.18, vía 2). bacteria anaeróbica Clostridium acetobutylicum convertía 100 toneladas de
Neuberg encontró que esta reacción melaza o grano en 12 toneladas de acetona y 24 toneladas de butanol
podría prevenirse mediante la adición de sulfito de sodio al 3,5% a pH 7,0. (la mayoría de las fermentaciones clostridiales se detienen en el ácido butírico).
Los iones de bisulfito reaccionaron con el acetaldehído y lo hicieron inaccesible
para la reducción a etanol. Debido a que las células de levadura aún tenían que 2 piruvato ÿÿÿ acetoacetato ÿÿÿ acetona CO2
regenerar su NAD a pesar de que el acetaldehído ya no era NADH NADH
disponibles, Neuberg sospechó que simplemente aumentarían la Acetoacetato ÿ ÿÿÿ butirato ÿ ÿÿÿ butanol
tasa de síntesis de glicerol. El glicerol normalmente se produce por la reducción
del fosfato de dihidroxiacetona (un intermediario glucolítico) Esta vez las cervecerías británicas y canadienses se convirtieron
a fosfato de glicerol con NADH, seguido de la hidrólisis de hasta que se pudieran construir nuevas instalaciones de fermentación. Weizmann
fosfato de glicerol a glicerol. La corazonada de Neuberg era correcta y mejoró el proceso al encontrar una manera conveniente de seleccionar cepas de
Las cervecerías alemanas se convirtieron a la fabricación de glicerol por su C. acetobutylicum que producen altos disolventes. porque las tensiones
procedimiento, produciendo finalmente 1.000 toneladas de glicerol al mes. más eficientes en estas fermentaciones también hicieron las esporas más
La producción de glicerol por S. cerevisiae no era económicamente competitiva en resistentes al calor, Weizmann simplemente aisló a los sobrevivientes de choques
tiempos de paz y se terminó. hoy glicerol térmicos repetidos de 100°C. La acetona y el butanol se fabricaron comercialmente
es producido microbianamente por el protista halofílico Dunaliella salina, mediante este proceso de fermentación hasta que fue reemplazado por
en el que se acumulan altas concentraciones de glicerol intracelular petroquímicos mucho más baratos a finales de los años cuarenta y cincuenta. en 1948
contrarrestar la presión osmótica del alto nivel de extra Chaim Weizmann se convirtió en el primer presidente del Estado de Israel.
Los disacáridos comunes se escinden en monosacáridos.

9.8 CATABOLISMO DE CARBOHIDRATOS Y
por al menos dos mecanismos (figura 9.20). maltosa, sacarosa y
POLÍMEROS DE RESERVA INTRACELULAR
la lactosa se puede hidrolizar directamente a sus azúcares constituyentes.
Hasta ahora nuestro enfoque principal ha sido el catabolismo de la glucosa. Muchos disacáridos (p. ej., maltosa, celobiosa y sacarosa) son
Sin embargo, los microorganismos pueden catabolizar muchos otros también se divide por un ataque de fosfato en el enlace que une los dos
carbohidratos. Estos carbohidratos pueden provenir del exterior de la célula azúcares, un proceso llamado fosforólisis.
o de fuentes internas generadas durante el metabolismo normal. A menudo, Los polisacáridos, como los disacáridos, se escinden tanto
los pasos iniciales en la degradación de carbohidratos externos hidrólisis y fosforólisis. Los procariotas y los hongos degradan
Los polímeros difieren de los empleados con reservas internas. polisacáridos externos secretando enzimas hidrolíticas.
Estas exoenzimas escinden polisacáridos que son demasiado grandes para
cruzar la membrana plasmática en moléculas más pequeñas que pueden
carbohidratos luego ser asimilado. El almidón y el glucógeno son hidrolizados por
La figura 9.20 describe algunas vías catabólicas de los monosacáridos amilasas a glucosa, maltosa y otros productos. La celulosa es
(azúcares simples) glucosa, fructosa, manosa y galactosa. Los tres más difícil de digerir; muchos hongos y unas pocas bacterias (algunas
primeros se fosforilan usando ATP y entran fácilmente bacterias deslizantes, clostridios y actinomicetos) producen celulasas
la vía Embden-Meyerhof. Por el contrario, la galactosa debe ser extracelulares que hidrolizan la celulosa a celobiosa y
convierte en uridina difosfato galactosa (ver figura 10.11) después glucosa. Algunos actinomicetos y miembros de la bacteria
fosforilación inicial, luego se transformó en glucosa 6-fosfato en género Cytophaga, aisladas de hábitats marinos, excretan una
un proceso de tres pasos (figura 9.20). agarasa que degrada el agar. Muchas bacterias del suelo y bacterias
Catabolismo de lípidos 211
los patógenos de las plantas degradan la pectina, un polímero del ácido galacturónico Interconversiones de monosacáridos
(un derivado de la galactosa) que es un componente importante de las plantas
paredes celulares y tejidos. La lignina, otro componente importante de galactosa
paredes celulares de las plantas, generalmente es degradado solo por ciertos hongos que atp
Vía pentosa fosfato
liberar enzimas generadoras de peróxido. Microorganismos en el suelo Galactosa-1- PAGS
medio ambiente (sección 29.3)

UTP vía Entner-Doudoroff
En el contexto de compuestos que son recalcitrantes o difíciles
para digerir, cabe señalar que los microorganismos también pueden degradar galactosa UDP
compuestos xenobióticos (sustancias extrañas no formadas por
procesos biosintéticos) tales como pesticidas y varios aromáticos
Glucosa UDP Glucosa manosa
compuestos. Transforman estas moléculas en moléculas metabólicas normales. Gal-1- PAGS
atp atp
intermedios mediante el uso de enzimas y vías especiales, luego continúa el Chica UDP
catabolismo de la manera habitual. La biodegradación y la biorremediación se Glucosa-1- PAGS Glucosa-6- PAGS
manosa-6- PAGS
analizan en el capítulo 41. El hongo Phanerochaete

chrysosporium es un ejemplo extraordinario de la capacidad de degradar atp
Fructosa-6- PAGS
Fructosa
xenobióticos. Diversidad Microbiana y Ecología 41.4: Un hongo con un
apetito voraz
Vía Embden-Meyerhof
Polímeros de reserva
Los microorganismos a menudo sobreviven durante largos períodos en ausencia de
Escisión de disacáridos
nutrientes exógenos. En tales circunstancias catabolizan
+ maltasa
depósitos intracelulares de glucógeno, almidón, polihidroxibutirato, 1. Maltosa H2O 2 glucosa
y otras reservas de carbono y energía. El glucógeno y el almidón son maltosa fosforilasa
Maltosa + Pi ÿD- _-glucosa-1- P + Glucosa
degradado por fosforilasas. Las fosforilasas catalizan una reacción de sacarasa
2. sacarosa + H2O Glucosa + Fructosa
fosforólisis que acorta la cadena de polisacáridos en un
sacarosa fosforilasa
glucosa y produce glucosa 1-fosfato. sacarosa + Pi ÿ -D-glucosa-1- P + Fructosa
3. Lactosa +H2O ÿ -galactosidasa Galactosa + Glucosa

(Glucosa)n Pi ÿÿÿ (glucosa)n 1 glucosa-1-P Celobiosa fosforilasa +Pi
4. celobiosa
-glucosa-1- P + Glucosa -
ÿD
La glucosa 1-fosfato puede entrar en las vías glucolíticas a través de

glucosa 6-fosfato (figura 9.20).
El polihidroxibutirato (PHB) es un importante y ampliamente difundido Figura 9.20 Catabolismo de carbohidratos. Ejemplos de
material de reserva. Su catabolismo se ha estudiado más a fondo enzimas y vías utilizadas en disacáridos y monosacáridos
en la bacteria del suelo Azotobacter. Esta bacteria hidroliza catabolismo. UDP es una abreviatura de difosfato de uridina.
PHB a 3-hidroxibutirato, luego oxida el hidroxibutirato a
acetoacetato. El acetoacetato se convierte en acetil-CoA, que puede
oxidarse en el ciclo TCA. O
R1
CH2 O C
O
9.9 CATABOLISMO DE LÍPIDOS CH CO R2
O
Los microorganismos quimioorganotróficos utilizan con frecuencia los lípidos
R3
como fuente de energía. Triglicéridos o triacilgliceroles, ésteres de glicerol CH2 CO
y ácidos grasos (figura 9.21), son fuentes comunes de energía y

Figura 9.21 A Triacilglicerol o Triglicérido. Los grupos R
sirvan como nuestros ejemplos. Se pueden hidrolizar a glicerol y
representan las cadenas laterales de ácidos grasos.
ácidos grasos por lipasas microbianas. Luego, el glicerol se fosforila, se oxida
a fosfato de dihidroxiacetona y se cataboliza.
en la vía Embden-Meyerhof (figura 9.5).
Los ácidos grasos de los triacilgliceroles y otros lípidos a menudo se acetil-CoA, NADH y FADH2; NADH y FADH2 pueden ser oxidados por la
oxidado en la vía de oxidación después de la conversión a ésteres de coenzima cadena de transporte de electrones para proporcionar más ATP. los
A (figura 9.22). En esta ruta, los ácidos grasos se acortan en dos carbonos acil graso-CoA, acortado por dos carbonos, está listo para otro
con cada vuelta del ciclo. Los dos carbonos vuelta del ciclo. Los ácidos grasos son una rica fuente de energía para el
unidades se liberan como acetil-CoA, que se puede alimentar en el TCA crecimiento microbiano. De manera similar, algunos microorganismos crecen
ciclo o utilizado en la biosíntesis. Una vuelta del ciclo produce pozo en hidrocarburos de petróleo en condiciones óxicas.
O ARRULLO- ARRULLO- ARRULLO- ARRULLO-
Ácido graso acortado

R CH2 CH2 C SCoA CH NH2 + C O C O + CH NH2
por 2 átomos de C MODA
O Acil-CoA graso CH3 CH2 CH3 CH2
RC SCoA CH2 CH2

O FADH2
O ARRULLO- ARRULLO-
CH3C _ SCoA
-CoA R CH CH C SCoA alanina ÿ-cetoglutarato piruvato Glutamato
Acetilo
CoASH H2O
Figura 9.23 Transaminación. Un ejemplo común de esto
O O OH O proceso. El grupo -amino (azul) de la alanina se transfiere al
R C C SCoA aceptor -cetoglutarato formando piruvato y glutamato. los
CH2 R CH CH2 C SCoA
El piruvato puede catabolizarse en el ciclo del ácido tricarboxílico o usarse
en biosíntesis.
NAD+
NADH Molécula orgánica autóctona (normalmente piruvato) en fermentación
+
H+ (figura 9.2). En la fermentación, el ATP se sintetiza solo por fosforilación a nivel de
sustrato; Tanto en la respiración aeróbica como en la anaeróbica, la mayor parte del
Figura 9.22 Oxidación de ácidos grasos. las porciones de la ATP se forma utilizando el PMF derivado de
actividad de la cadena de transporte de electrones. Diversidad metabólica adicional
el ácido graso que se está modificando se muestra en rojo.
entre bacterias y arqueas se refleja en forma de metabolismo energético realizado por
quimiolitotrofos. Estos microbios obtienen
electrones para la cadena de transporte de electrones a partir de la oxidación de
9.10 CATABOLISMO DE PROTEÍNAS Y AMINOÁCIDOS moléculas inorgánicas en lugar de NADH generado por la oxidación
Algunas bacterias y hongos, particularmente patógenos, deterioro de los alimentos, de nutrientes orgánicos (figura 9.24). Cada especie es bastante específica.
y los microorganismos del suelo—pueden utilizar las proteínas como fuente de carbono en sus preferencias por donantes y aceptores de electrones (tabla 9.3).
y energía. Secretan enzimas proteasas que hidrolizan El aceptor suele ser O2, pero también se utilizan sulfato y nitrato.
proteínas y polipéptidos a aminoácidos, que son transportados Los donantes de electrones más comunes son hidrógeno, nitrógeno reducido
en la célula y se cataboliza. compuestos, compuestos reducidos de azufre y hierro ferroso (Fe2).
El primer paso en el uso de aminoácidos es la desaminación, la eliminación Mucha menos energía está disponible a partir de la oxidación de inorgánicos
del grupo amino de un aminoácido. Esto se logra a menudo por transaminación. El moléculas que de la oxidación completa de la glucosa a CO2,
grupo amino se transfiere de que se acompaña con un cambio de energía libre estándar de 686
un aminoácido a un aceptor de -cetoácido (figura 9.23). El ácido orgánico resultante kcal/mol (tabla 9.4). Esto se debe a que el NADH que dona electrones a la cadena
de la desaminación se puede convertir en piruvato, acetil-CoA o un intermedio del tras la oxidación de un sustrato orgánico
ciclo TCA y eventualmente como la glucosa tiene un potencial de reducción más negativo que la mayoría de
oxidado en el ciclo TCA para liberar energía. También se puede utilizar los sustratos inorgánicos que los quimiolitotrofos utilizan como donantes directos de
como fuente de carbono para la síntesis de constituyentes celulares. Exceso electrones para sus cadenas de transporte de electrones. Por lo tanto, las relaciones P/O
el nitrógeno de la desaminación puede excretarse como ion amonio, para la fosforilación oxidativa en quimiolitotrofos son probablemente
haciendo así el medio alcalino. alrededor de 1,0 (aunque en la oxidación de hidrógeno es considerablemente mayor).
Debido a que el rendimiento de ATP es tan bajo, los quimiolitotrofos
1. Analice brevemente las formas en que los microorganismos degradan y debe oxidar una gran cantidad de material inorgánico para crecer y reproducirse. Esto
utilizan monosacáridos, disacáridos y polisacáridos comunes de fuentes es particularmente cierto en el caso de los quimiolitotrofos autótrofos,
internas y externas. que fijan el CO2 en carbohidratos. Por cada molécula de CO2 fijada,
2. Describe cómo un microorganismo podría obtener carbono y energía de la estos microbios gastan tres moléculas de ATP y dos de NADPH. Debido a que deben
lípidos y proteínas en su dieta. ¿Qué es la -oxidación? ¿Desaminación? consumir una gran cantidad de material inorgánico,
¿Transaminación? Los quimiolitotrofos tienen un impacto ecológico significativo.
Varios géneros bacterianos pueden oxidar gas hidrógeno para producir
energía porque poseen una enzima hidrogenasa que cataliza la oxidación del
9.11 QUIMOLITOTROFÍA hidrógeno (tabla 9.3).
Hasta ahora, hemos considerado microbios que sintetizan ATP con la H2 ÿÿÿ 2H 2e
energía liberada cuando oxidan sustratos orgánicos como carbohidratos, lípidos y
proteínas. El aceptor de electrones es: (1) O2 en Debido a que el par redox H2/2H, 2e tiene un potencial de reducción estándar muy
respiración aeróbica, (2) una molécula exógena oxidada otra negativo, los electrones se donan a una cadena de transporte de electrones o al NAD,
que el O2 en la respiración anaeróbica, o (3) otro en más oxidado dependiendo de la hidrogenasa. Si
quimiolitotrofia 213
Se produce NADH, se puede utilizar en la síntesis de ATP por electrón. La nitrificación se diferencia de la desnitrificación en que la nitrificación
transporte y fosforilación oxidativa, con O2, Fe3 y , S0, consiste en la oxidación de compuestos inorgánicos de nitrógeno para producir
incluso el monóxido de carbono (CO) como aceptores terminales de electrones. nitrato. Por otra parte, la desnitrificación es la reducción de compuestos
A menudo, estos microorganismos oxidantes de hidrógeno utilizarán nitrogenados oxidados a gas nitrógeno (ver pág. 205). En la nitrificación, los
compuestos como fuentes de energía cuando tales nutrientes están disponibles. electrones se donan a la cadena de transporte de electrones,
Algunas bacterias utilizan la oxidación de compuestos nitrogenados como mientras que en la desnitrificación, las especies de nitrógeno se utilizan como
fuente de electrones. Entre estos quimiolitotrofos, el nitrificante aceptores de electrones y el nitrógeno se pierde en la atmósfera. Ciclo
Las bacterias que llevan a cabo la nitrificación se entienden mejor. Estas biogeoquímico: ciclo del nitrógeno (sección 27.2)
son bacterias del suelo y acuáticas de considerable importancia ecológica. La energía liberada por la oxidación tanto del amoníaco como del nitrito se
La nitrificación es la oxidación del amoníaco a nitrato. es de dos pasos utiliza para producir ATP por fosforilación oxidativa. Sin embargo, los
Proceso que depende de la actividad de al menos dos géneros diferentes. microorganismos autótrofos también necesitan NAD(P)H (reducción
En el primer paso, el amoníaco es oxidado a nitrito por un número de géneros potencia) así como ATP para reducir el CO2 y otras moléculas (figura 9.24). Dado
incluyendo Nitrosomonas: que moléculas como el amoníaco y el nitrito
tienen potenciales de reducción más positivos que el NAD, no pueden
NH4 1 1/2 O2 ÿ NO2 H2O 2H donan directamente sus electrones para formar el NADH requerido y
NADPH. Recuerde que los electrones se mueven espontáneamente sólo de
En el segundo paso, el nitrito se oxida a nitrato por géneros tales donantes con potenciales de reducción más negativos a los aceptores con
como Nitrobacter: potenciales más positivos (ver figura 8.8). Las bacterias oxidantes del azufre se
enfrentan a la misma dificultad. Ambos tipos de quimiolitotrofos resuelven
NO2 1/2 O2 ÿ NO3 este problema moviendo los electrones derivados de la oxidación
de su sustrato inorgánico (compuestos reducidos de nitrógeno o azufre) en la
cadena de transporte de electrones para reducir el NAD(P) a
Energía inorgánica NAD(P)H (figura 9.25). Esto se llama flujo de electrones inverso. De
mi
y Cadena de transporte de electrones O2 Por supuesto, esto no es termodinámicamente favorable, por lo que la energía en el
La forma de la fuerza motriz del protón debe ser desviada para que no realice
otro trabajo celular (p. ej., síntesis de ATP, transporte, motilidad).
fósforo de buey
FMP atp
Tabla 9.4 Rendimientos energéticos de oxidaciones utilizadas por

e- (NADPH) ATP ADP+Pi
quimiolitotrofos
fuente de carbono
(a menudo CO2)
Biosíntesis
Reacción G°ÿ
(kcal/mol)a
Figura 9.24 Procesos de abastecimiento de combustible quimiolitotróficos. H2 1/2 O2 ÿÿÿH2O 56,6
Las bacterias quimiolitotróficas y las arqueas oxidan inorgánicos NO2 1/2 O2 ÿÿÿNO3 17.4
moléculas (por ejemplo, H2S y NH3), que sirven como energía y electrones NH4 1 1/2 O2 ÿÿÿNO2 H2O 2H 65,0
fuentes. Los electrones liberados pasan a través de un transporte de electrones. S0 1 1/2 O2 H2O ÿÿÿH2SO4 118.5
2 2
sistema, generando una fuerza motriz de protones (PMF). Se sintetiza ATP 2H 223.7
S2O3 2O2 H2O ÿÿÿ2SO4
por fosforilación oxidativa (ox phos). La mayoría de los quimiolitotrofos 11.2
2Fe2 2H 1/2 O2 ÿÿÿ2Fe3 H2O
utiliza O2 como aceptor terminal de electrones. Sin embargo, algunos pueden usar
otras moléculas exógenas como aceptores terminales de electrones. Nota aEl G°ÿ para la oxidación completa de la glucosa a CO2 es de 686 kcal/mol. Una kcal equivale a
4.184kJ.
que una molécula distinta de la fuente de energía proporciona carbono para
biosíntesis. Muchos quimiolitotrofos son autótrofos.
Tabla 9.3 Quimiolitotrofos representativos y sus fuentes de energía
bacterias Donante de electrones Aceptor de electrones productos
Alcaligenes, Hydrogenophaga y Pseudomonas spp. H2 O2 H2O

Nitrobacter NO2 O2 NO3 , H2O
Nitrosomonas NH4 O2 NO2 , H2O
Thiobacillus denitrificans S0, H2S NUMERO 3 SO4 2, N2
Thiobacillus ferrooxidans Fe2 , S0, H2S O2 Fe3 , H2O, H2SO4
periplasma
H+
H+ 2H+
cita c cita c 4
2 3
1
cita b Cyt un
CoQ 2e
Cyt c1 Cyt a3
2H+
H+
H+
NAD+ NADH + 2H+
1/2O2 H2O
NO2 – + H2O NO3 – +
+ 2H+
H+
Flujo de electrones inverso Flujo directo de electrones
Fuente de energía Fuente de energía
para producir NADH para la biosíntesis para hacer ATP
Citoplasma
Figura 9.25 Flujo de electrones en la cadena de transporte de electrones de Nitrobacter. Nitrobacter oxida nitrito y transporta electrones normales.
transporte para generar fuerza motriz de protones para la síntesis de ATP. Esta es la rama derecha del diagrama. Parte de la fuerza motriz del protón
también se utiliza para forzar a los electrones a fluir hacia arriba en el gradiente de potencial de reducción de nitrito a NAD (rama izquierda). Citocromo c y cuatro
complejos están involucrados: NADH-ubiquinona oxidorreductasa (1), ubiquinol-citocromo c oxidorreductasa (2), nitrito oxidasa (3) y
citocromo aa3 oxidasa (4).
para “empujar” los electrones de moléculas de potenciales de reducción relativamente

1. ¿Cómo obtienen los quimiolitotrofos su ATP y NADH? ¿Cuál es su mayor
positivos a aquellas que son más negativas. Porque esto
fuente común de carbono?
energía se utiliza para generar NADH así como ATP, el rendimiento neto de
2. Describa la producción de energía por bacterias oxidantes de hidrógeno, bacterias
El ATP es bastante bajo. Los quimiolitotrofos pueden permitirse esta ineficiencia
nitrificantes y bacterias oxidantes de azufre.
ya que no tienen competidores serios por su energía única
3. ¿Por qué las bacterias oxidantes de hidrógeno y las arqueas pueden donar electrones al NAD
fuentes. Reacciones de oxidación-reducción, transportadores de electrones y sistemas de
mientras que las bacterias oxidantes de azufre y amoníaco y las arqueas no pueden?
transporte de electrones (sección 8.6)
4. ¿Qué es el flujo de electrones inverso y por qué lo realizan la mayoría de los quimiolitotrofos?
Los microbios oxidantes de azufre son el tercer grupo principal de
5. El arseniato es un compuesto que inhibe la fosforilación a nivel de sustrato.
quimiolitotrofos. El metabolismo de Thiobacillus ha sido mejor
Compare el efecto de este compuesto en un quimiolitotrofo oxidante de H2,
estudió. Estas bacterias oxidan azufre (S0 ), sulfuro de hidrógeno
en un quimiolitotrofo oxidante de sulfito, y en un quimioorganotrofo que
(H2S), tiosulfato (S2O3 2) y otros compuestos reducidos de azufre
lleva a cabo la fermentación.
al ácido sulfúrico; por lo tanto, tienen un impacto ecológico significativo (Diversidad
Microbiana y Ecología 9.2). Curiosamente ellos
generar ATP tanto por fosforilación oxidativa como por fosforilación a nivel de
sustrato que involucra adenosina 5ÿ-fosfosulfato
9.12 FOTOTROFÍA
(APS). APS es una molécula de alta energía formada a partir de sulfito y
monofosfato de adenosina (figura 9.26). Los microorganismos obtienen energía no solo de la oxidación de compuestos
Algunos procariotas oxidantes de azufre son metabólicamente orgánicos y orgánicos, sino también de la energía de la luz,
extraordinariamente flexibles. Por ejemplo, Sulfolobus brierleyi, un archaeon y que capturan y utilizan para sintetizar ATP y reducir la energía
algunas bacterias pueden crecer aeróbicamente al oxidar (p. ej., NADPH) (figura 9.1; véase también la figura 8.10). El proceso por
azufre con oxígeno como aceptor de electrones; en ausencia de O2, que la energía de la luz es atrapada y convertida en energía química
llevan a cabo la respiración anaeróbica y oxidan la materia orgánica se llama fotosíntesis. Por lo general, un organismo fototrófico reduce e incorpora
con azufre como aceptor de electrones. CO2. La fotosíntesis es una de las más
Las bacterias oxidantes de azufre y las arqueas, al igual que otros procesos metabólicos significativos en la Tierra porque casi todos nuestros
quimiolitotrofos, pueden utilizar el CO2 como fuente de carbono. Muchos crecerán la energía se deriva en última instancia de la energía solar. Aporta a los organismos
heterótrofamente si se les suministran fuentes reducidas de carbono orgánico como foto sintéticos el ATP y el poder reductor necesarios
glucosa o aminoácidos. sintetizar la materia orgánica necesaria para el crecimiento. En turno
Fototrofeo 215
9.2 Drenaje de ácido minero
Cada año, millones de toneladas de ácido sulfúrico fluyen hacia el río Ohio. teria oxidan ambos componentes elementales de la pirita para su crecimiento
de las Montañas Apalaches. Este ácido sulfúrico es de origen microbiano. y en el proceso forman ácido sulfúrico, que lixivia el resto
y lixivia suficientes metales de las minas para hacer que el río minerales
rojizo y ácido. El principal culpable es Thiobacillus ferrooxidans,
una bacteria quimiolitotrófica que obtiene su energía de la oxidación Autooxidación o acción bacteriana
ion ferroso a ion férrico y ion sulfuro a ion sulfato. La combinación de estas
2 4H
2FeS2 7O2 2H2O ÿÿÿ 2Fe2 4SO4
dos fuentes de energía es importante debido a las propiedades de solubilidad
del hierro. El ion ferroso es algo soluble y puede ser
T. ferrooxidans
formado a valores de pH de 3.0 o menos en ambientes moderadamente
2Fe2 1/2 O2 2H ÿÿÿ 2Fe3 H2O
reductores. Sin embargo, cuando el pH es mayor de 4,0 a 5,0, el ion ferroso
se oxida espontáneamente a iones férricos por el O2 en el agua y precipita La oxidación de pirita se acelera aún más porque el ion férrico generado por
como un hidróxido. Si el pH cae por debajo de 2,0 a 3,0 porque la actividad bacteriana oxida fácilmente más pirita a sulfúrico.
de la producción de ácido sulfúrico por oxidación espontánea de azufre u ácido y ión ferroso. A su vez, el ion ferroso favorece un mayor crecimiento
oxidación de azufre por tiobacilos y otras bacterias, el ion ferroso permanece bacteriano. Es difícil prevenir el crecimiento de T. ferrooxidans ya que solo
reducida, soluble y disponible como fuente de energía. Sorprendentemente, t. requiere pirita y sales inorgánicas comunes. porque t
ferrooxidans crece bien a pH tan ácidos y oxida activamente el ion ferroso a ferrooxidans obtiene su O2 y CO2 del aire, el único medio factible
un precipitado férrico insoluble. El agua se vuelve tóxica. método de prevenir su crecimiento dañino es sellar las minas para
para la mayoría de la vida acuática y no apto para el consumo humano. hacer que el hábitat sea anóxico.
Las consecuencias ecológicas de este estilo de vida metabólico surgen
de la presencia común de pirita (FeS2) en las minas de carbón. el trasero
(a) Oxidación directa de sulfito Tabla 9.5 Diversidad de organismos fototróficos

2 - sulfito oxidasa 2-
SO4 + 2e–
SO3
Organismos Eucarióticos Organismos procarióticos
(B) Formación de adenosina 5ÿ-fosfosulfato plantas cianobacterias
2-
+ 2AMP 2APS + 4e– Algas multicelulares verdes, bacterias verdes del azufre
2SO3
2- pardas y rojas Protistas Bacterias verdes sin azufre
2APS + 2Pi 2ADP + 2SO4
unicelulares (p. ej., euglenoides, Halobacterium (arqueón)
2ADP AMP + ATP
dinoflagelados, diatomeas) Bacterias de azufre púrpura
Bacterias moradas sin azufre
2- 2-
2SO3 + AMP + 2Pi 2SO4 + ATP + 4e– Procloron
NH2
norte
norte
O O norte norte
–O SO _ correos O
estos organismos sirven como base de la mayoría de las cadenas alimenticias en
CH2
Adenosina 5ÿ-fosfosulfato
la biosfera. Un tipo de fotosíntesis también es responsable de reponer nuestro
O O–
suministro de O2, un proceso notable llevado a cabo por un
variedad de organismos, tanto eucarióticos como bacterianos (tabla 9.5).
OH OH
(C) Aunque la mayoría de la gente asocia la fotosíntesis con los más grandes,
plantas más obvias, más de la mitad de la fotosíntesis en la Tierra es llevada a
Figura 9.26 Generación de energía por oxidación de azufre. cabo por microorganismos.
(a) El sulfito se puede oxidar directamente para proporcionar electrones para electrones La fotosíntesis en su conjunto se divide en dos partes. En el
transporte y fosforilación oxidativa. (b) El sulfito también puede ser reacciones de luz la energía de la luz es atrapada y convertida en química
oxidado y convertido en adenosina 5ÿ-fosfosulfato (APS). Esta energía. Esta energía se utiliza luego para reducir o fijar el CO2 y sintetizar los
ruta produce electrones para su uso en el transporte de electrones y ATP por constituyentes de las células de tamaño en las reacciones oscuras. En esta sección tres
fosforilación a nivel de sustrato con APS. (c) La estructura de APS. Se discuten los tipos de fototrofia: fotosíntesis oxigénica,
fotosíntesis anoxigénica y fototrofia basada en rodopsina pigmentos (tabla 9.6). En los fotótrofos oxigénicos, los pigmentos más
(figura 9.27). Se revisan las reacciones oscuras de la fotosíntesis. importantes son las clorofilas. Las clorofilas son planares grandes
en el capítulo 10. La fijación de CO2 por autótrofos (sección 10.3) anillos compuestos por cuatro anillos de pirrol sustituidos con un átomo de
magnesio coordinado con los cuatro átomos de nitrógeno centrales (figura
9.28). Varias clorofilas se encuentran en eucariotas, las dos
La reacción de la luz en la fotosíntesis oxigénica los más importantes son la clorofila a y la clorofila b. Estos dos
Los eucariotas fototróficos y las cianobacterias realizan la fotosíntesis Las moléculas difieren ligeramente en su estructura y propiedades espectrales.
oxigénica, llamada así porque se genera oxígeno Cuando se disuelve en acetona, la clorofila a tiene una absorción ligera
cuando la energía luminosa se convierte en energía química. central a este pico a 665 nm; el pico correspondiente para la clorofila b está en 645
proceso, y a todos los demás procesos fototróficos, son absorbentes de luz Nuevo Méjico. Además de absorber la luz roja, las clorofilas también absorben
Figura 9.27 Reacciones de combustible fototrófico. Fototrofia a base de clorofila

Los fototrofos utilizan la luz para generar una fuerza motriz de protones.
(PMF), que luego se utiliza para sintetizar ATP mediante un proceso Luz
llamada fotofosforilación (photo phos). El proceso

mi
requiere pigmentos absorbentes de luz. Cuando los pigmentos son
clorofila o bacterioclorofila, la absorción de la luz Clorofila
mi mi
desencadena el flujo de electrones a través de una cadena de transporte de electrones, o Cadena de transporte de electrones NAD(P)+
acompañado por el bombeo de protones a través de una membrana.
bacterioclorofila
NAD(P)H
El flujo de electrones puede ser cíclico (línea discontinua) o
acíclico (línea continua), dependiendo del organismo y su foto phos
necesidades. La fototrofia basada en rodopsina difiere en que el PMF FMP atp
está formado directamente por el pigmento absorbente de luz, que es un

fuente de carbono
bomba de protones impulsada por la luz. Muchos fotótrofos son autótrofos. Biosíntesis
(a menudo CO2)
y debe usar gran parte del ATP y el poder reductor que producen
para fijar el CO2.
Fototrofia basada en rodopsina
Luz
bacteriorrodopsina foto phos

(arqueorrodopsina) FMP atp
proteorrodopsina
fuente de carbono Biosíntesis
Tabla 9.6 Propiedades de los sistemas fotosintéticos basados en clorofila
Bacterias verdes, moradas

Propiedad eucariotas cianobacterias Bacterias y Heliobacterias
Pigmento fotosintético clorofila a clorofila a bacterioclorofila

Fotosistema II Regalo Regalo Ausente
Donadores de electrones fotosintéticos H2O H2O H2, H2S, S, materia orgánica

Patrón de producción de O2 Oxígeno oxigenada anoxigénico
Productos primarios de conversión de energía ATP NADPH ATP NADPH atp
fuente de carbono CO2 CO2 Orgánico y/o CO2
a
Algunas cianobacterias pueden funcionar anoxigénicamente bajo ciertas condiciones. Por ejemplo, Oscillatoria puede usar H2S como donante de electrones en lugar de H2O.
Fototrofeo 217
Bacterioclorofila a 470–630 nm) (ver figura 21.4). Esta luz se transfiere muy eficientemente
CH3 a la clorofila. De esta forma, los pigmentos accesorios hacen que la
CO fotosíntesis sea más eficiente en una gama más amplia de longitudes
de onda. Además, esto permite que los organismos utilicen luz que otros
fotótrofos no utilizan en su hábitat. Por ejemplo, los microbios debajo de
H O
un dosel de plantas pueden usar la luz que pasa a través del dosel. Los
H CH2 C
C H CH3 clorofila b pigmentos accesorios también protegen a los microorganismos de la luz
C solar intensa, que podría oxidar y dañar el aparato fotosintético.
C C CH3
C C Las clorofilas y los pigmentos accesorios se ensamblan en conjuntos
H3C C I II C C2H5 CH
H altamente organizados llamados antenas, cuyo propósito es crear una
norte
C
norte
C C C2H5 gran superficie para atrapar tantos fotones como sea posible. Una
HC C
H antena tiene alrededor de 300 moléculas de clorofila. La energía de la
Anillos magnesio
de pirrol luz se captura en una antena y se transfiere de clorofila a clorofila hasta

C norte CAROLINA DEL NORTE
Bacterioclorofila a
H que llega a un par de clorofilas en el centro de reacción especial
C IV directamente involucrado en el transporte de electrones fotosintéticos.
H3C
tercero
C C CH3
C C C clorofila a En los fotótrofos oxigénicos, hay dos tipos de antenas asociadas con
H H
H dos fotosistemas diferentes (figura 9.30). El fotosistema I absorbe luz
CC C C
S.S de longitud de onda más larga (680 nm) y canaliza la energía a un par
jefe H O
jefe de clorofila especial llamado P700. El término P700 significa que esta
O molécula absorbe con mayor eficacia la luz a una longitud de onda de
CH3
700 nm. Photosystem II atrapa la luz en longitudes de onda más cortas
R (680 nm) y transfiere su energía al par de clorofila especial P680.
Cuando la antena del fotosistema I transfiere energía luminosa al
Figura 9.28 Estructura de la clorofila. Las estructuras de la clorofila par de clorofila P700 del centro de reacción, P700 absorbe la energía y
a, la clorofila b y la bacterioclorofila a. Se da la estructura completa se excita; su potencial de reducción se vuelve muy negativo.
de la clorofila a. Solo se altera un grupo para producir clorofila b, y Esto le permite donar su electrón excitado de alta energía a un aceptor
se requieren dos modificaciones en el sistema de anillos para específico, probablemente una molécula de clorofila especial o una
cambiar la clorofila a en bacterioclorofila a. La cadena lateral (R) de proteína de hierro y azufre. El electrón finalmente se transfiere a la ferre
la bacterioclorofila a puede ser fitilo (una cadena de 20 carbonos doxina y luego puede viajar en cualquiera de las dos direcciones. En la
que también se encuentra en las clorofilas ayb) o geranilgeranilo ruta cíclica (las líneas discontinuas en la figura 9.30), el electrón se
(una cadena lateral de 20 carbonos similar al fitilo, pero con tres mueve en una ruta cíclica a través de una serie de transportadores de
dobles enlaces más). electrones y regresa al P700 oxidado. La ruta se denomina cíclica porque
el electrón de P700 regresa a P700 después de viajar a través de la
cadena de transporte de electrones fotosintéticos. El PMF se forma
luz azul fuertemente (el segundo pico de absorción para la clorofila a durante el transporte cíclico de electrones en la región del citocromo b6
está a 430 nm). Debido a que las clorofilas absorben principalmente en y se utiliza para sintetizar ATP. Este proceso se llama fotofosforilación
los rangos rojo y azul, se transmite la luz verde. En consecuencia, cíclica porque los electrones viajan en una vía cíclica y se forma ATP.
muchos fotótrofos oxigénicos son de color verde. La larga cola hidrofóbica Solo participa el fotosistema I.
unida al anillo de clorofila ayuda a su unión a las membranas, el sitio de Los electrones también pueden viajar en una vía no cíclica que
las reacciones luminosas. involucre a ambos fotosistemas. P700 se excita y dona electrones a la
Otros pigmentos fotosintéticos también atrapan la energía de la luz. ferredoxina como antes. Sin embargo, en la ruta no cíclica, la ferredoxina
Los más difundidos son los carotenoides, moléculas largas, reducida reduce el NADP a NADPH (figura 9.30). Debido a que los
generalmente de color amarillento, que poseen un extenso sistema de electrones aportados al NADP no pueden usarse para reducir el P700
dobles enlaces conjugados (figura 9.29). -El caroteno está presente en oxidado, se requiere la participación del fotosistema II. Dona electrones
las cianobacterias pertenecientes al género Prochloron y en la mayoría al P700 oxidado y genera ATP en el proceso. La antena del fotosistema
de los protistas fotosintéticos; La fucoxantina se encuentra en protistas II absorbe la energía de la luz y excita P680, que luego reduce la feofitina
como diatomeas y gelatos de dinofla. Las algas rojas y las cianobacterias a. La feofitina a es clorofila a en la que dos átomos de hidrógeno han
tienen pigmentos fotosintéticos llamados ficobiliproteínas, que consisten reemplazado al magnesio central. Posteriormente, los electrones viajan
en una proteína con un tetrapirrol lineal adjunto (figura 9.29). La al grupo de plastoquinonas y descienden por la cadena de transporte de
ficoeritrina es un pigmento rojo con una absorción máxima alrededor electrones hasta P700. Aunque P700 se ha reducido, P680 también
de 550 nm, y la ficocianina es azul (absorción máxima entre 620 y 640 nm). debe reducirse para aceptar más energía luminosa. La figura 9.30 indica
Los carotenoides y las ficobiliproteínas a menudo se denominan que el potencial de reducción estándar de P680 es más positivo que el
pigmentos accesorios debido a su papel en la fotosíntesis. Los del par redox O2/H2O . Por lo tanto , se puede usar H2O para donar
pigmentos accesorios son importantes porque absorben la luz en el electrones a P680, lo que da como resultado la liberación de oxígeno.
Debido a que los electrones fluyen de
rango no absorbido por las clorofilas (el rango azul-verde a amarillo; aproximadamente
H3C
CH3 CH3 CH3 H3C
CH3 CH3 CH3 CH3

CH3
ÿ-caroteno
OO
HO HO
fucoxantina OCOCH3
COOH COOH
CH3 CH2 CH2 CH3
CH3 CH CH3 CH2 CH2 CH3 CH3 CH2
O O
norte norte norte norte
H H H
ficocianobilina
Figura 9.29 Pigmentos accesorios representativos. El betacaroteno es un carotenoide que se encuentra en plantas y protistas fotosintéticos. Nota
que tiene una larga cadena de enlaces dobles y simples alternados llamados dobles enlaces conjugados. La fucoxantina es un carotenoide accesorio
pigmento en varias divisiones de algas (el punto en la estructura representa un átomo de carbono). La ficocianobilina es un ejemplo de una función de
tetrapir lineal que se une a una proteína para formar una ficobiliproteína.
agua a NADP con la ayuda de la energía de dos fotosistemas, Pelar los cuatro electrones del agua al NADP. Porque la proporción de
El ATP se sintetiza por fotofosforilación no cíclica. Parece que se ATP a NADPH requerido para la fijación de CO2 es 3:2, al menos uno más
forman un ATP y un NADPH cuando dos electrones viajan a través de la Se debe suministrar ATP. Fotofosforilación cíclica probablemente
vía no cíclica. opera independientemente para generar el ATP adicional. Esto requiere
Al igual que ocurre con el transporte de electrones mitocondriales, el absorción de otros 2 a 4 cuantos. Se deduce que alrededor de 10 a
transporte de electrones fotosintético tiene lugar dentro de una membrana. Se necesitan 12 cuantos de energía luminosa para reducir e incorporar
Las membranas granales de cloroplasto contienen fotosistemas y sus una molécula de CO2 durante la fotosíntesis.
antenas La figura 9.31 muestra una membrana tilacoide que lleva a cabo
fotofosforilación no cíclica por el mecanismo quimiosmótico. Los protones
se mueven hacia el interior de los tilacoides durante el transporte La reacción de la luz en la fotosíntesis anoxigénica
fotosintético de electrones y regresan al estroma cuando se libera ATP. Ciertas bacterias realizan un segundo tipo de fotosíntesis.
formado. Se cree que las laminillas del estroma poseen solo el fotosistema llamada fotosíntesis anoxigénica. Este proceso fototrófico
I y están involucradas solo en la fotofosforilación cíclica. deriva su nombre del hecho de que el agua no se utiliza como fuente de
En las cianobacterias, las reacciones de luz fotosintéticas se localizan en electrones y, por lo tanto , no se produce O2 . El proceso también
membranas tilacoides dentro de la célula. difiere en términos de los pigmentos fotosintéticos utilizados, la
Las reacciones oscuras requieren tres ATP y dos NADPH para participación de un solo fotosistema y los mecanismos utilizados para
reducir uno de CO2 y usarlo para sintetizar carbohidratos (CH2O). generar poder reductor. Tres grupos de bacterias realizan
fotosíntesis anoxigénica: bacterias fototróficas verdes, bacterias
CO2 3ATP 2NADPH 2H H2O ÿÿÿ fototróficas moradas y heliobacterias. La biología y
(CH2O) 3ADP 3Pi 2NADP La ecología de estos organismos se describe con mucho más detalle en
capítulos 21, 22 y 23.
El sistema no cíclico genera un NADPH y un ATP por Los fotótrofos anoxigénicos tienen pigmentos fotosintéticos.
par de electrones; por lo tanto, cuatro electrones que pasan por el sistema llamadas bacterioclorofilas (figura 9.28). Los máximos de absorción de
producirán dos NADPH y dos ATP. Un total de 8 cuantos las bacterioclorofilas (Bchl) están en longitudes de onda más largas que
de energía luminosa (4 cuantos para cada fotosistema) es necesaria para producir los de las clorofilas. Las bacterioclorofilas a y b tienen máximos
Fototrofeo 219
–1.4
P*700
centro de reacción
–1.2
–1.0
A o Fez
– 0,8
P*680 FeS
– 0,6
Fd
Feo. a
Piridina nucleótido
– 0,4 reductasa (FAD)
(Cíclico)
NADP+
– 0,2
PD: yo
Cit b 563
q 2e
0.0
ADP +P 2 fotones
PQ atp
+ 0.2 Cyt b6
FeS
PD II Cyt para PC 2e
+ 0.4 Antena
2e
P700
(no cíclico) 2 fotones
+ 0,6
OCE
+ 0.8
H2O 2e- Mn2+(3+)
Z 2e
+ 1.0
1 P680
/2O2 + 2H+
Figura 9.30 Fotosíntesis de las plantas verdes. Flujo de electrones durante la fotosíntesis en plantas superiores. Las cianobacterias y las algas
eucarióticas son similares por tener dos fotosistemas, aunque pueden diferir en algunos detalles. Los transportadores involucrados en el transporte
de electrones son la ferredoxina (Fd) y otras proteínas FeS; citocromos b6, b563 yf; plastoquinona (PQ); plastocianina (PC) que contiene cobre;
feofitina a (Pheo. a); posiblemente clorofila a (A); y la quinona Q desconocida, que probablemente sea una plastoquinona. Tanto el fotosistema I (PS I)
como el fotosistema II (PS II) están involucrados en la fotofosforilación no cíclica; solo PS I participa en la fotofosforilación cíclica. El complejo de
evolución de oxígeno (OEC) que extrae electrones del agua contiene iones de manganeso y la sustancia Z, que transfiere electrones al centro de
reacción PS II. Ver el texto para más detalles.
en éter a 775 y 790 nm, respectivamente. Los máximos in vivo son de aproximadamente paratus similar al fotosistema II, mientras que las bacterias verdes del azufre tienen
830 a 890 nm (Bchl a) y de 1020 a 1040 nm (Bchl b). un sistema similar al fotosistema I.
Este desplazamiento de los máximos de absorción hacia la región infrarroja adapta Los fotótrofos anoxigénicos enfrentan un problema adicional porque también
mejor a estas bacterias a sus nichos ecológicos. requieren poder reductor (NAD[P]H o ferredoxina reducida) para la fijación de CO2 y
Muchas de las diferencias encontradas en los fotótrofos anoxigénicos se deben otros procesos biosintéticos. Son capaces de generar poder reductor de al menos
a que tienen un solo fotosistema (figura 9.32). Debido a esto, están restringidos al tres formas, dependiendo de la bacteria. Algunos tienen hidrogenasas que se utilizan
flujo cíclico de electrones y no pueden producir O2 a partir de H2O. De hecho, casi para producir NAD(P)H directamente a partir de la oxidación del hidrógeno gaseoso.
todos los fotótrofos anoxigénicos son anaerobios estrictos. En la figura 9.33 se da un Esto es posible porque el hidrógeno gaseoso tiene un potencial de reducción más
esquema tentativo para la cadena de transporte de electrones fotosintéticos de una negativo que el NAD (ver tabla 8.1). Otras, como las bacterias moradas fotosintéticas,
bacteria púrpura no sulfurosa . Cuando se excita la bacterioclorofila P870 del centro deben utilizar un flujo de electrones inverso para generar NAD(P)H (figura 9.33). En
de reacción especial, dona un electrón a la bacteriofeofitina. este mecanismo, los electrones se extraen de la cadena de transporte de electrones
fotosintéticos y se “empujan” hacia NAD(P) usando PMF o la hidrólisis de ATP. Los
Luego, los electrones fluyen hacia las quinonas y, a través de una cadena de electrones de los donantes de electrones como el sulfuro de hidrógeno, el azufre
transporte de electrones, regresan a P870 mientras generan suficiente PMF para elemental y los compuestos orgánicos reemplazan los electrones extraídos del
impulsar la síntesis de ATP. Tenga en cuenta que aunque tanto las bacterias verdes electrón.
como las moradas carecen de dos fotosistemas, las bacterias moradas tienen un ap fotosintético.
cloroplasto
ADP + Pi atp
tilacoides estroma
estroma
piridina
nucleótido
fotones fotones reductasa F1 ATP
citocromo 2H+
sintasa
complejo bf 2NADP+ 2NADPH
8H+
mi
FAD
control de calidad
mi FeS
Cyt b6
4PQH2
mariscal de campo
mi
Feo
FeS A F0
4PQ
mi P680
cita f P700
mi- mi-
Minnesota
-Cu+
OCE
ordenador personal
8H+ ordenador personal

-Cu2+ Fotosistema I 3H+
2H 2O + Fotosistema II
O2 + 4H
luz de tilacoides
Figura 9.31 El mecanismo de la fotosíntesis. Una ilustración de la membrana tilacoide del cloroplasto que muestra la fotosíntesis
función de la cadena de transporte de electrones y fotofosforilación no cíclica. La cadena está compuesta por tres complejos: PS I, el citocromo bf
complejo y PS II. Dos portadores de electrones difusibles conectan los tres complejos. La plastoquinona (PQ) conecta PS I con el citocromo bf
complejo, y la plastocianina (PC) conecta el complejo citocromo bf con PS II. El flujo de electrones impulsado por la luz bombea protones a través del
membrana tilacoide y genera un gradiente electroquímico, que luego se puede utilizar para producir ATP. El agua es la fuente de electrones y
el complejo de evolución de oxígeno (OEC) produce oxígeno.
cadena de transporte de esta manera. Las bacterias verdes fototróficas y las Los microbios usan una proteína de membrana llamada bacteriorrodopsina .
heliobacterias también deben extraer electrones de sus cadenas de transporte (más correctamente llamado arqueorrodopsina). Una de esas arqueas es
de electrones. Sin embargo, debido a que el potencial de reducción de la la halófila Halobacterium salinarum.
componente de la cadena donde esto ocurre es más negativo que H. salinarum normalmente depende de la respiración aeróbica para el
NAD y ferredoxina oxidada, los electrones fluyen espontáneamente liberación de energía de una fuente de energía orgánica. Sin embargo, bajo
a estos aceptores de electrones. Por lo tanto, estas bacterias exhiben un simple condiciones de bajo oxígeno y alta intensidad de luz, sintetiza
forma de flujo de electrones fotosintéticos no cíclicos (figura 9.34). bacteriorrodopsina, un pigmento de color púrpura intenso que se parece mucho
la rodopsina de los conos y bastones de los ojos de los vertebrados. El
cromóforo de Bacte riorhodopsin es retinal, un tipo de carotenoide. los
Fototrofia basada en rodopsina El cromóforo se une covalentemente a la proteína del pigmento, que
La fotosíntesis oxigénica y anoxigénica se basan en la clorofila. está incrustado en la membrana plasmática de tal manera que la retina está
tipos de fototrofia, es decir, clorofila o bacterioclorofila en el centro de la membrana.
es el principal pigmento utilizado para absorber la luz e iniciar la conversión de La bacteriorrodopsina funciona como una bomba de protones impulsada por la luz.
la energía luminosa en energía química. Este tipo de fototrofia Cuando el retinal absorbe luz, se libera un protón y la bacteria orrodopsina
se observa solo en eucariotas y bacterias; no se ha observado en ninguna sufre una secuencia de cambios de conformación que
arquea, hasta la fecha. Sin embargo, algunas arqueas son capaces de translocar el protón en el espacio periplásmico (ver figura
Utilizar la luz como fuente de energía. En lugar de usar clorofila, estos 20.13). El bombeo de protones impulsado por la luz genera un gradiente de pH
Fototrofeo 221
Par especial de bacterioclorofila b

hv
Voyeur bacterioclorofila a
Bacteriofeofitina a
Ubiquinona ( QB )
Menaquinona ( QA )
Ion Fe
(a) (B)
Figura 9.32 Una cadena de reacción fotosintética. El centro de reacción de la bacteria púrpura no sulfurosa, Rhodopseudomonas viridis. (a) La
estructura de la columna vertebral C de las cadenas polipeptídicas del centro con las bacterioclorofilas y otros grupos protésicos en amarillo. (b) Una vista
de primer plano de los grupos protésicos del centro de reacción. Un fotón es primero absorbido por el “par especial” de moléculas de bacterioclorofila a,
excitándolas así. Luego, un electrón excitado se mueve hacia la molécula de bacteriofeofitina en el brazo derecho del sistema.
–1.0
P840*
P870*
–1.0
Bchl 663
BPh
–0.5
FeS
NAD+ –0.5
Fd
H2S
q succinato MK
NAD+
0 h Fumarato hÿ
Entonces
cita b
Cyt Flujo de electrones
0 FeS
b/ c1 invertido
2-
cit FeS Cyt mi S2O3
c2 c555
P870 P840 2-
+0.5 SO4
+0.5
centro de reacción
Figura 9.33 Fotosíntesis bacteriana púrpura no sulfurosa. Figura 9.34 Fotosíntesis bacteriana de azufre verde. El sistema de
El sistema de transporte de electrones fotosintéticos en la bacteria transporte de electrones fotosintéticos en la bacteria verde del azufre,
púrpura no sulfurosa, Rhodobacter sphaeroides. Este esquema es Chlorobium limicola. La energía de la luz se utiliza para producir ATP
incompleto y tentativo. La ubiquinona (Q) es muy similar a la mediante fotofosforilación cíclica y para mover electrones desde el
coenzima Q. BPh significa bacteriofeofitina. El succinato fuente de tiosulfato (S2O2 ) y H2S (verde
3 transporte y azul) hasta
de electrones tiene NAD. La cadena
una quinona de
llamada
electrones está en azul. menaquinona (MK).
que se puede utilizar para impulsar la síntesis de ATP por quimiosmosis.

1. Defina los siguientes términos: reacción a la luz, clorofila, carotenoide, ficobiliproteína,
Esta capacidad fototrófica es particularmente útil para Halobac terium porque el oxígeno no
antena y fotosistemas I y II.
es muy soluble en soluciones salinas concentradas y puede disminuir a un nivel
2. ¿Qué le sucede a un par de clorofilas del centro de reacción, como P700, cuando se ab
extremadamente bajo en
absorbe la luz?
Hábitat de Halobacterium . Cuando el entorno se vuelve temporalmente anóxico, el archaeon
3. ¿Cuál es la función de los pigmentos accesorios?
utiliza la energía de la luz para sintetizar
4. ¿Qué es la fotofosforilación? ¿Cuál es la diferencia entre cíclico y
suficiente ATP para sobrevivir hasta que los niveles de oxígeno vuelvan a subir. Halobac
¿fotofosforilación no cíclica?
terium no puede crecer anaeróbicamente por respiración anaeróbica o fermentación porque
5. ¿Por qué la reacción a la luz en bacterias verdes, bacterias moradas y heliobacterias es
necesita oxígeno para la síntesis de retinal.
llamado anoxigénico?
Sin embargo, puede sobrevivir al estrés de la limitación temporal de oxígeno.
6. Comparar y contrastar la fotosíntesis anoxigénica y la fotosíntesis oxigénica. ¿En
mediante fototrofia. Tenga en cuenta, sin embargo, que este tipo de fototrofia no implica el
qué se diferencian estos dos tipos de fototrofia de la basada en rodopsina?
transporte de electrones. se había pensado
fototrofia?
que la fototrofia basada en rodopsina es exclusiva de Archaea. Sin embargo, recientemente
7. Supón que aislaste una cepa bacteriana que lleva a cabo la fotosíntesis oxigénica.
se han descubierto rodopsinas que bombean protones.
¿Qué fotosistemas poseería y a qué grupo de bacterias probablemente pertenecería?
en algunas proteobacterias (proteorrodopsina) y un hongo. Genómica ambiental (sección 15.9)
Resumen
9.1 Procesos de abastecimiento de combustible quimioorganotróficos 9.5 Transporte de electrones y fosforilación oxidativa
un. Los microorganismos quimiotróficos pueden utilizar tres tipos de aceptores de electrones durante un. El NADH y FADH2 producidos a partir de la oxidación de carbohidratos, grasas
el metabolismo energético (figura 9.2). El nutriente puede oxidarse con un aceptor de electrones ácidos y otros nutrientes pueden oxidarse en la cadena de transporte de electrones. Los
endógeno (fermentación), con oxígeno como exógeno. electrones fluyen desde los portadores con potenciales de reducción más negativos hacia aquellos con
aceptor de electrones (respiración aeróbica), o con otro aceptor de electrones externo potenciales más positivos (figura 9.10 ver también figura 8.8), y la energía libre es
(respiración anaeróbica). liberada para la síntesis de ATP por fosforilación oxidativa.
B. Las cadenas de transporte de electrones bacterianos a menudo son diferentes de las cadenas eucarióticas.
9.2 Respiración aeróbica con respecto a aspectos tales como los transportistas y las ramificaciones. En eucariotas el P/O
la proporción de NADH es de alrededor de 3 y la de FADH2 es de alrededor de 2; Las relaciones P/O suelen
un. La respiración aeróbica se puede dividir en tres etapas: (1) descomposición de macromoléculas
ser mucho más bajas en las bacterias.
en sus partes constituyentes, (2) catabolismo a piruvato, acetil-CoA,
y otras moléculas por vías que convergen en vías glucolíticas y la C. La ATP sintasa cataliza la síntesis de ATP. En eucariotas, se encuentra en la
ciclo TCA, y (3) finalización del catabolismo por el ciclo TCA. La mayoría de la energía superficie interna de la membrana mitocondrial interna. La ATP sintasa bacteriana es
se produce en esta etapa y resulta de la oxidación de NADH y FADH2 por en la superficie interna de la membrana plasmática.
la cadena de transporte de electrones y la fosforilación oxidativa (figura 9.3). D. El mecanismo más ampliamente aceptado de fosforilación oxidativa es la
B. Las vías utilizadas durante la respiración aeróbica son anfibólicas y tienen tanto Hipótesis quimiosmótica en la que la fuerza motriz del protón (PMF) impulsa el ATP
Funciones catabólicas y anabólicas (figura 9.4). síntesis (figura 9.11).
mi. La respiración aeróbica en eucariotas puede producir un máximo de 38 ATP (figura 9.15).
9.3 La descomposición de la glucosa en piruvato

9.6 Respiración anaeróbica
un. La glucólisis, utilizada en su sentido más amplio, se refiere a todas las vías utilizadas para romper
reduce la glucosa a piruvato. un. La respiración anaeróbica es el proceso de producción de ATP por transporte de electrones en
B. La vía Embden-Meyerhof tiene una producción neta de dos NADH y dos el que el aceptor terminal de electrones es una molécula exógena.
ATP, este último producido por fosforilación a nivel de sustrato. También aparte del O2. Los aceptores más comunes son nitrato, sulfato y CO2.
produce varios metabolitos precursores (figura 9.5). (figura 9.16).
C. En la vía de las pentosas fosfato, la glucosa 6-fosfato se oxida dos veces y

9.7 Fermentaciones
convertido en pentosas y otros azúcares. Es una fuente de NADPH, ATP y
varios metabolitos precursores (figura 9.6). un. Durante la fermentación, se utiliza un aceptor de electrones endógeno para reoxidar
D. En la vía de Entner-Doudoroff, la glucosa se oxida a 6-fosfogluconato, que luego se deshidrata y cualquier NADH generado por el catabolismo de glucosa a piruvato (figura 9.17).
se escinde en piruvato y gliceraldehído. B. El flujo de electrones desde el donante de electrones hasta el aceptor de electrones no implica
3-fosfato (figura 9.8). Este último producto puede oxidarse mediante enzimas glucolíticas para una cadena de transporte de electrones, y el ATP se sintetiza solo por fosforilación a nivel de
proporcionar ATP, NADH y otra molécula de piruvato. sustrato.
9.4 El ciclo del ácido tricarboxílico 9.8 Catabolismo de carbohidratos y polímeros de reserva intracelular
un. El ciclo del ácido tricarboxílico es la etapa final del catabolismo en la mayoría de las células aeróbicas. un. Los microorganismos catabolizan muchos carbohidratos extracelulares. Los paseos de
(figura 9.9). Oxida acetil-CoA a CO2 y forma un GTP, tres NADH, Monosaccha se toman y se fosforilan; los disacáridos pueden escindirse en monosacáridos por
y un FADH2 por acetil-CoA. También genera varios metabolitos precursores. hidrólisis o fosforólisis.
Resumen 223
B. Los polisacáridos externos se degradan por hidrólisis y los productos se absorben. El glucógeno fluyen y producen el NADH que necesitan para la fijación de CO2 y otros procesos (figura
y el almidón intracelulares se convierten en glucosa 1-fosfato mediante fosforólisis (figura 9.20). 9.25).
9.12 Fototrofia
9.9 Catabolismo de lípidos
un. En la fotosíntesis oxigénica, los eucariotas y las cianobacterias atrapan la energía de la luz con
un. Los ácidos grasos del catabolismo de los lípidos generalmente se oxidan a acetil-CoA en la vía clorofila y pigmentos accesorios y mueven electrones a través de los fotosistemas I y II para
de oxidación (figura 9.22). producir ATP y NADPH (las reacciones de la luz). B. La fotofosforilación cíclica involucra la
actividad del fotosistema I solo y genera solo ATP. En la fotofosforilación no cíclica, los fotosistemas
9.10 Catabolismo de proteínas y aminoácidos I y II operan juntos para mover electrones del agua al NADP, produciendo ATP, NADPH y O2
(figura 9.30). C. Los fotótrofos anoxigénicos difieren de los fotótrofos oxigénicos en que poseen
un. Las proteínas se hidrolizan a aminoácidos que luego se desaminan; sus esqueletos de carbono
bacterioclorofila y tienen un solo fotosistema (figuras 9.33 y 9.34).
alimentan el ciclo TCA (figura 9.23).
9.11 Quimiolitotrofia
Utilizan la fotofosforilación cíclica para producir ATP. Son anoxigénicos porque no utilizan
un. Los quimiolitotrofos sintetizan ATP mediante la oxidación de compuestos inorgánicos,
agua como donante de electrones para el flujo de electrones a través de la cadena de transporte
generalmente hidrógeno, compuestos reducidos de nitrógeno y azufre o hierro ferroso, con una
de electrones fotosintéticos.
cadena de transporte de electrones y O2 como aceptor de electrones (figura 9.24 y tabla 9.3).
D. Algunas arqueas y bacterias usan un tipo de fototrofia que involucra el pigmento de bombeo de
protones bacteriorrodopsina y proteorrodopsina, respectivamente. Este tipo de fototrofia genera
B. Muchas de las fuentes de energía utilizadas por los quimiolitotrofos tienen un potencial de
PMF pero no involucra una cadena de transporte de electrones.
reducción estándar más positivo que el par redox NAD/NADH. Estos quimiolitotrofos deben
gastar energía (PMF o ATP) para impulsar electrones inversos.
Términos clave
pigmentos accesorios 217 hipótesis quimiosmótica 202 fermentadores heterolácticos 208 fotosistema II 217
acetil-coenzima A (acetil-CoA) 198 5ÿ- quimiolitotrofo 212 clorofilas 216 ruta de la hexosa monofosfato 196 ficobiliproteínas 217
fosfosulfato de adenosina (APS) 214 respiración ciclo del ácido cítrico 198 fermentadores homolácticos 208 ficocianina 217 ficoeritrina
aeróbica 193 fermentación alcohólica 208 fotofosforilación cíclica 217 Ciclo de Krebs 198 217 proteasa 212 fuerza
reacciones oscuras 215 Fermentación del ácido láctico 208 motriz de protones (PMF)
vías anfibólicas 194 respiración reacciones ligeras 215 202 par de clorofila del centro de
anaeróbica 205 fotosíntesis desaminación 212 fermentación ácida mixta 209 reacción 217 respiración 192 flujo de
anoxigénica 218 antena 217 desnitrificación 205 nitrificación 213 electrones inversos 213
reducción disimilatoria de nitrato 205 bacterias nitrificantes 213
ATP sintasa 202 cadena de transporte de electrones 200 fotofosforilación no cíclica 218 fosforilación Stickland reacción 209
bacterioclorofila 218 Vía Embden-Meyerhof 194 oxidativa 202 fotosíntesis oxigénica 216 vía fosforilación a nivel de sustrato 194
bacteriorrodopsina 220 vía Entner-Doudoroff 198 fermentación de las pentosas fosfato 196 fotosíntesis 214 transaminación 212
-vía de oxidación 211 207 fotosistema I 217 ciclo del ácido tricarboxílico (TCA) 198
fermentación de butanodiol 209 glucólisis 194 vía desacopladores 203
carotenoides 217 glucolítica 194
1. Sin mirar en el capítulo 21, predice algunas características que describirían 5. Se cultivan dos matraces de E. coli en cultivo discontinuo en el mismo medio (2% de glucosa y
nichos ocupados por bacterias fotosintéticas verdes y moradas. aminoácidos; sin nitrato) ya la misma temperatura (37°C). El cultivo #1 está bien aireado. El
2. Desde una perspectiva evolutiva, discuta por qué la mayoría de los microorganismos utilizan la cultivo #2 es anóxico. Después de 16 horas se hacen las siguientes observaciones:
respiración aeróbica para generar ATP.
3. ¿Cómo aislarías un quimiolitotrofo termofílico que utiliza compuestos de azufre como fuente de • El cultivo #1 tiene una alta densidad celular; las células parecen estar en fase estacionaria y el
electrones? ¿Qué cambios en el sistema de incubación serían necesarios para aislar bacterias nivel de glucosa en el medio se reduce al 1,2%.
utilizando compuestos de azufre en la respiración anaeróbica? • El cultivo #2 tiene una densidad celular baja; las células parecen estar en fase logarítmica,
¿Cómo se puede saber qué proceso está teniendo lugar a través del análisis de las moléculas aunque su tiempo de duplicación es prolongado (más de una hora). El nivel de glucosa se
de azufre presentes en el medio? reduce al 0,2%.
4. Ciertos desacopladores bloquean la síntesis de ATP al permitir que los protones y otros iones se ¿Qué tipo de catabolismo de la glucosa se utilizó en cada cultivo? ¿Por qué el cultivo n.° 2 tiene
“filtren a través de las membranas”, interrumpiendo los gradientes de carga y de protones tan poca glucosa restante en relación con el cultivo n.° 1, aunque el cultivo n.° 2 mostró un
establecidos por el flujo de electrones a través de una cadena de transporte de electrones. crecimiento más lento y tiene menos biomasa?
¿Apoya esta observación la hipótesis de la quimiosmosis? Explique su razonamiento.
Aprende más
Anraku, Y. 1988 Cadenas de transporte de electrones bacterianos. año Rev. Bioquímica. 57:101–32. McKee, T. y McKee, JR 2003. Bioquímica: la base molecular de la vida, 3d
edición Dubuque, Iowa: McGraw-Hill.
Panadero, Carolina del Sur; Ferguson, SJ; Luis, B.; Página, MD; Richter, O.-MH; y furgoneta
Expansión, RJM1998. Microbiol. mol. Biol. 62(4):1046–78 . Nelson, DL y Cox, MM 2005. Lehninger: Principios de bioquímica, 4.ª ed.
Nueva York: WH Freeman.
Faxén, K.; Gilderson, G.; Ädelroth, P.; y Brzezinski, P. 2005. A mechanistic prin ciple for proton pumping
by cytochrome c oxidase. Naturaleza 437: 286–89. Nicholls, DG y Ferguson, SJ 2002. Bioenergética, 3.ª ed. San Diego: Acá
Prensa démica.
Gao, YQ; Yang, W.; y Karplus, M. 2005. Un modelo basado en la estructura para la síntesis e hidrólisis
de ATP por F1-ATPasa. Celda 123: 195–205. Peschek, GA; Obinger, C.; y Paumann, M. 2004. La cadena respiratoria de las algas verdeazuladas
(cianobacterias). Physiologia Plantarum 120: 358–69.
Gottschalk, G. 1986. Metabolismo bacteriano, 2ª ed. Nueva York: Springer-Verlag.
Saier, MH, Jr. 1997. Peter Mitchell y sus teorías quimiosmóticas. Noticias de la MAPE
Gunsalus, RP 2000. Respiración anaeróbica. En Enciclopedia de microbiología, 2d
63(1):13–21.
ed., vol. 1, J. Lederberg, editor en jefe, 180–88. San Diego: Prensa Académica.
Kinosita, K., Jr.; Adachi, K.; e Itoh, H. 2004. Rotation of F1-ATPase: How an
La máquina molecular impulsada por ATP puede funcionar. año Rev. Biophys. Biomol. Estructura.
33:245–68.

10Metabolismo:
El uso de la energía en
Biosíntesis
Las subunidades de la proteína nitrogenasa Fe están dispuestas como un par de alas de mariposa.
La nitrogenasa consiste en la proteína Fe y la proteína MoFe; cataliza la
reducción del nitrógeno atmosférico durante la fijación del nitrógeno.
AVANCE
• En el anabolismo, las células usan energía libre para construir moléculas y
estructuras más complejas a partir de precursores más pequeños y simples.
• Las rutas biosintéticas están organizadas para optimizar la eficiencia al energía de muchas maneras. Gran parte de esta energía se utiliza en un
conservación de materias primas biosintéticas y energía. Esto se logra de varias Como deja claro el capítulo
abolismo Durante9,el
losanabolismo,
microorganismos pueden obtener
un microorganismo en
comienza
maneras, incluido el uso de rutas anfibólicas que funcionan tanto en direcciones con moléculas inorgánicas simples y una fuente de carbono y construye moléculas cada
catabólicas como anabólicas. Algunos vez más complejas hasta formar nuevos orgánulos y
Las reacciones clave en las vías anfibólicas requieren dos enzimas: una surgen las células (figura 10.1). Una célula microbiana debe fabricar muchas
para la reacción catabólica y otro para la reacción anabólica.
diferentes tipos de moléculas; Aquí, discutimos la síntesis de
• Los metabolitos precursores son esqueletos de carbono que sirven como punto de partida sólo los tipos más importantes de constituyentes celulares.
ing sustratos para vías biosintéticas.Son intermediarios de En este capítulo comenzamos con una introducción general al anabolismo y el
las vías metabólicas centrales. papel que juegan los metabolitos precursores en
• Se han identificado cuatro vías diferentes para la fijación de CO2 en los rutas biosintéticas. Luego nos enfocamos en la fijación de CO2 y la
microorganismos. La vía más utilizada es la de Calvin. síntesis de carbohidratos, aminoácidos, purinas y pirimidinas,
ciclo . Todas las vías de fijación de CO2 consumen ATP y poder reductor y lípidos. Debido a que la síntesis de proteínas y ácidos nucleicos es tan significativa y
(por ejemplo, NADPH).
compleja, las reacciones de polimerización que producen estos
• La gluconeogénesis se utiliza para sintetizar glucosa a partir de moléculas orgánicas macromoléculas se describe por separado en el capítulo 11.
no carbohidratadas. La glucosa y otras hexosas sirven como metabolitos
precursores para la síntesis de otros azúcares y
polisacáridos. La síntesis del polisacárido peptidoglicano es particularmente
compleja, requiere muchos pasos y ocurre en
varios lugares de la celda. El anabolismo es la creación de orden. Porque una célula está muy ordenada.
e inmensamente complejo, se requiere mucha energía para la biosíntesis. Esto es
• Muchos de los metabolitos precursores se utilizan en rutas biosintéticas de
fácilmente evidente a partir de las estimaciones de la capacidad biosintética de
aminoácidos. Los esqueletos de carbono se remodelan y
Escherichia coli de crecimiento rápido (tabla 10.1). Aunque
modificado por la adición de nitrógeno y, a veces azufre. Muchos
Las rutas biosintéticas de aminoácidos están ramificadas. Por lo tanto, un solo la mayor parte del ATP dedicado a la biosíntesis se emplea en la síntesis de proteínas,
metabolito precursor puede producir una familia de aminoácidos relacionados. el ATP también se utiliza para producir otros constituyentes celulares.
Las reacciones anapleróticas aseguran que un suministro adecuado de precursor Es intuitivamente obvio por qué las células de rápido crecimiento necesitan una gran
metabolitos está disponible para la biosíntesis de aminoácidos. suministro de ATP. Pero incluso las células que no crecen necesitan energía para el
• Ciertos aminoácidos y metabolitos precursores contribuyen a la procesos biosintéticos que llevan a cabo. Esto se debe a que no crece
síntesis de nucleótidos. También se requiere la asimilación de fósforo. las células continuamente degradan y resintetizan moléculas celulares durante un
• Las vías de acetil-CoA y malonil-CoA sintetizan ácidos grasos. proceso conocido como recambio. Por lo tanto, las células nunca son las mismas.
Estas vías no son anfibólicas, ya que solo funcionan en el de un instante al siguiente. Además, muchas células que no crecen usan
síntesis de lípidos, no en su degradación. energía para sintetizar enzimas y otras sustancias para su liberación en
Las estructuras biológicas casi siempre se construyen de manera jerárquica, con subconjuntos actuando
como intermediarios importantes en el camino desde las moléculas iniciales simples hasta los productos finales de organelos, células,
y organismos.
—WM Becker y DW Deamer
226 Capítulo 10 Metabolismo: el uso de la energía en la biosíntesis
su entorno. Claramente, el metabolismo debe ser cuidadosamente regulado 10.1 PRINCIPIOS QUE RIGEN LA BIOSÍNTESIS
si la tasa de renovación debe equilibrarse con la tasa de biosíntesis.
También debe regularse en respuesta al entorno de un microbio. El metabolismo biosintético generalmente sigue ciertos patrones y
Algunos de los mecanismos de regulación metabólica ya han sido está formado por unos pocos principios básicos. Seis de estos son ahora brevemente
discutido
introducido en el capítulo 8; otros se analizan en el capítulo 12.
1. La construcción de grandes macromoléculas (moléculas complejas) a partir

Nivel de organización Ejemplos de unas pocas unidades estructurales simples (monómeros) ahorra
mucha capacidad de almacenamiento genético, materia prima biosintética y
Células bacterias
energía. Una consideración de la síntesis de proteínas aclara esto. Las
hongos
protistas proteínas, cualquiera que sea su tamaño, forma o función, están formadas por solo 20
aminoácidos comunes unidos por enlaces peptídicos. Diferentes proteínas
simplemente tienen diferentes secuencias de aminoácidos, pero no nuevas.
orgánulos Núcleos
y aminoácidos diferentes. Suponga que las proteínas estuvieran compuestas
mitocondrias
Ribosomas de 40 aminoácidos diferentes en lugar de 20. La célula
flagelos entonces necesita las enzimas para fabricar el doble de amino
ácidos (o tendría que obtener los aminoácidos adicionales en su
Sistemas supramoleculares Membranas dieta). Se requerirían genes para las enzimas adicionales, y el
Complejos enzimáticos La célula tendría que invertir materias primas y energía en la síntesis de estos
genes, enzimas y aminoácidos adicionales.
Claramente, el uso de unos pocos monómeros unidos entre sí por un solo
macromoléculas Ácidos nucleicos tipo de enlace covalente hace la síntesis de macromoléculas
Proteínas
un proceso altamente eficiente. Proteínas y aminoácidos (anexo I)
polisacáridos
2. El uso de muchas de las mismas enzimas tanto para procesos catabólicos como
lípidos
Los procesos anabólicos ahorran materiales y energía adicionales. Para
Monómeros o bloques de construcción nucleótidos ejemplo, la mayoría de las enzimas glucolíticas están implicadas tanto en la
Aminoácidos la síntesis y la degradación de la glucosa.
Azúcares
3. El uso de enzimas separadas para catalizar las dos direcciones de
Ácidos grasos
un solo paso en una vía anfibólica permite independientes
Metabolitos precursores
regulación del catabolismo y el anabolismo (figura 10.2). Por lo tanto
piruvato
Acetil-CoA Las vías catabólica y anabólica nunca son idénticas, aunque
ÿ-cetoglutarato muchas enzimas son compartidas. Aunque esto se discute en más
Glucosa 6-fosfato
detalle en las secciones 8.8 a 8.10, tenga en cuenta que la regulación de
El anabolismo es algo diferente del catabolismo.
Carbón
3– Ambos tipos de vías pueden regularse por sus productos finales.
Moléculas CO2, NH3, H2O, PO4
fuente inorgánicas así como por las concentraciones de ATP, ADP, AMP y
NAD. Sin embargo, la regulación del producto final generalmente asume más
Figura 10.1 La construcción de células. La biosíntesis de importancia en las vías anabólicas.
Componentes de las células procarióticas y eucarióticas. La biosíntesis es 4. Para sintetizar moléculas de manera eficiente, las vías anabólicas deben
organizados en niveles de complejidad cada vez mayor. operan irreversiblemente en la dirección de la biosíntesis. Las células pueden
Tabla 10.1 Biosíntesis en Escherichia coli
Moléculas de ATP requeridas

Constituyente celular Número de moléculas por Cella Moléculas sintetizadas por segundo por segundo para síntesis
ADN 1b 0.00083 60.000

ARN 15.000 12.5 75,000
polisacáridos 39.000 32.5 65,000
lípidos 15.000.000 12.500,0 87,000
Proteínas 1.700.000 1.400,0 2,120,000
De Bioenergética de Albert Lehninger. Copyright © 1971 de Benjamin/Cummings Publishing Company. Reimpreso con permiso.
a
Estimaciones para una célula con un volumen de 2,25 µm3 , un peso total de 1 10 12 g, un peso seco de 2,5 10 13 gy un ciclo de división celular de 20 minutos.
B
Cabe señalar que las bacterias pueden contener múltiples copias de su ADN genómico.
Los metabolitos precursores 227
forman sistemas supramoleculares espontáneamente en un proceso conocido como

Anabólico ZYX
autoensamblaje. Por ejemplo, los ribosomas son grandes ensamblajes de muchas
proteínas y moléculas de ácido ribonucleico, pero surgen por el autoensamblaje de
sus componentes sin la participación de factores adicionales.
GRAMO
anfibólico
F 1. Defina anabolismo, recambio y autoensamblaje.

2. Resuma los seis principios por los cuales se organizan las rutas biosintéticas.
mi
10.2 LOS METABOLITOS PRECURSORES

D
La generación de los metabolitos precursores es un paso crítico en el anabolismo.

E1 E2
Los metabolitos precursores son esqueletos de carbono (es decir, cadenas de
C carbono) que se utilizan como sustratos de partida para la síntesis de monómeros y
otros componentes básicos necesarios para la síntesis de macromoléculas. Los
metabolitos precursores se denominan esqueletos de carbono porque son moléculas
B
que carecen de restos funcionales como los grupos amino y sulfhidrilo; estos se
agregan durante el proceso biosintético. Los metabolitos precursores y su uso en la
A biosíntesis se muestran en la figura 10.3. Hay que tener en cuenta varias cosas en
esta figura. En primer lugar, todos los metabolitos precursores son intermediarios de
las vías glucolíticas (vía de Embden-Meyerhof o vía de Entner-Doudoroff, y vía de las
Figura 10.2 Una vía biosintética hipotética. Las rutas que conectan G con
pentosas fosfato) y del ciclo del ácido tricarboxílico (TCA). Por lo tanto, estas vías
X, Y y Z son puramente anabólicas porque se usan solo para la síntesis de los
desempeñan un papel central en el metabolismo y, a menudo, se denominan vías
productos finales. La vía de A a G es anfibólica, es decir, tiene funciones tanto
metabólicas centrales. Tenga en cuenta, también, que la mayoría de los metabolitos
catabólicas como anabólicas. La mayoría de las reacciones se utilizan en ambos
roles; sin embargo, la interconversión de C y D es catalizada por dos enzimas precursores se utilizan para la síntesis de aminoácidos y nucleótidos.
separadas, E1 (catabólica) y E2 (anabólica).
A partir de un examen cuidadoso de la figura 10.3, debe quedar claro que si un

lograr esto conectando algunas reacciones biosintéticas con la descomposición
organismo es un quimioorganotrofo que usa glucosa como fuente de energía,
de ATP y otros nucleósidos trifosfatos. Cuando estos dos procesos están
electrones y carbono, genera los metabolitos precursores a medida que genera ATP
acoplados, la energía libre disponible durante la descomposición del nucleósido
y poder reductor. Pero, ¿y si el quimioorganótrofo utiliza un aminoácido como única
trifosfato impulsa la reacción biosintética hasta su finalización. El papel del ATP
fuente de carbono, electrones y energía? ¿Y qué hay de los autótrofos? ¿Cómo
en el metabolismo (sección 8.5)
generan metabolitos precursores a partir del CO2, su fuente de carbono? Los
heterótrofos que crecen con algo que no sea glucosa degradan esa fuente de
5. La compartimentación en las células eucarióticas, es decir, la localización de las
carbono y energía en uno o más intermediarios de las vías metabólicas centrales. A
vías biosintéticas en ciertos compartimentos celulares y las vías catabólicas en
partir de ahí, pueden generar los metabolitos precursores restantes. Los autótrofos
otros, facilita que las vías catabólicas y anabólicas operen de manera simultánea
primero deben convertir el CO2 en carbono orgánico a partir del cual pueden generar
pero independiente. Por ejemplo, la biosíntesis de ácidos grasos ocurre en la
los metabolitos precursores. Muchas de las reacciones que utilizan los autótrofos
matriz citoplasmática, mientras que la oxidación de ácidos grasos ocurre dentro
para generar los metabolitos precursores son reacciones de las vías metabólicas
de la mitocondria.
centrales, que operan en dirección catabólica o anabólica. Por tanto, las vías
metabólicas centrales son importantes para el anabolismo tanto de los heterótrofos
6. Finalmente, las vías anabólicas y catabólicas a menudo usan diferentes
como de los autótrofos.
cofactores. Por lo general, las oxidaciones catabólicas producen NADH, un
sustrato para el transporte de electrones. Por el contrario, cuando se necesita
un donante de electrones durante la biosíntesis, el NADPH en lugar del NADH
Comenzamos nuestra discusión sobre el anabolismo considerando primero la
normalmente sirve como donante. El metabolismo de los ácidos grasos
fijación de CO2 por parte de los autótrofos. Una vez que el CO2 se convierte en
proporciona un segundo ejemplo. Las moléculas de acil-CoA graso se oxidan
carbono orgánico, la síntesis de otros metabolitos precursores, aminoácidos,
para generar energía, mientras que la síntesis de ácidos grasos implica
nucleótidos y componentes básicos adicionales es esencialmente la misma tanto en
tioésteres de proteína transportadora de acilo (v. pág. 242).
los autótrofos como en los heterótrofos. Recuerde que los metabolitos precursores
Una vez que las macromoléculas se han construido a partir de precursores más proporcionan los esqueletos de carbono para la síntesis de otras moléculas orgánicas
simples, se ensamblan en estructuras más grandes y complejas, como sistemas importantes. En el proceso de transformación de un metabolito precursor en un
supramoleculares y orgánulos (figura 10.1). aminoácido o un nucleótido, el esqueleto de carbono se modifica de varias maneras,
Las macromoléculas normalmente contienen la información necesaria para incluida la
Figura 10.3 La organización del anabolismo. Otros Glucosa nucleósidos

Los productos biosintéticos (en azul) se derivan de carbohidratos
metabolitos precursores, que son intermediarios de las
Glucosa-6- PAGS ribosa PAGS
Eritrosa-4- PAGS
vías anfibólicas. Dos reacciones anapleróticas principales

se muestran en rojo. Estas reacciones aseguran un suministro
adecuado de metabolitos precursores derivados del ciclo Fructosa-6- PAGS
lípidos
TCA y son especialmente importantes para los organismos
fermentativos. en el que solo operan ciertas reacciones del
Glicerol - PAGS Triosa PAGS
ciclo TCA.
Fenilalanina Tirosina Triptófano
3-fosfoglicerato serina
Glicina
cisteína purinas
Histidina
Fosfoenolpiruvato
CO2
alanina
CO2, lisina
piruvato isoleucina
atp Valina
leucina
Acetil-CoA
Pirimidinas lípidos
aspartato oxaloacetato Citrato
asparagina
treonina
isoleucina
metionina
lisina isocitrato
Succinil-CoA
porfirinas ÿ-cetoglutarato
Glutamato
glutamina
prolina
Arginina
adición de nitrógeno, fósforo y azufre. Así, mientras discutimos la síntesis Tierra porque proporciona la materia orgánica de la que dependen los
de monómeros a partir de metabolitos precursores, también abordaremos heterótrofos. quimiolitotrofia (sección 9.11); Fototrofia (sección 9.12)
la asimilación de nitrógeno, azufre y fósforo. Se han identificado cuatro vías diferentes de fijación de CO2 en
microorganismos. La mayoría de los autótrofos utilizan el ciclo de Calvin,
también llamado ciclo de Calvin-Benson o ciclo de pentosa fosfato
10.3 LA FIJACIÓN DE CO2 POR AUTOTROFOS reductor. El ciclo de Calvin se encuentra en los eucariotas fotosintéticos
Los autótrofos usan CO2 como su única o principal fuente de carbono y y en la mayoría de las bacterias fotosintéticas. Está ausente en algunas
la reducción e incorporación de CO2 requiere mucha energía. Muchos bacterias anaeróbicas y microaerófilas obligatorias. Las arqueas
autótrofos obtienen energía atrapando la luz durante la fotosíntesis, pero autótrofas también utilizan una vía alternativa para la fijación de CO2.
algunos obtienen energía de la oxidación de donantes de electrones Consideramos primero el ciclo de Calvin y luego presentamos brevemente
inorgánicos reducidos. La fijación autótrofa de CO2 es crucial para la vida en las otras tres vías de fijación de CO2.
La fijación de Co2 por autótrofos 229
El ciclo de Calvin El
CH2O PAGS CARBOXILACIÓN
ciclo de Calvin también se denomina ciclo reductor de las pentosas FASE
C O
fosfato porque es esencialmente lo contrario de la vía de las pentosas
HCOH Ribulosa 1,5-
fosfato. Así, muchas de las reacciones son similares, en particular las bisfosfato
HCOH
transformaciones de azúcar. Las reacciones del ciclo de Calvin ocurren
en el estroma del cloroplasto de los autótrofos microbianos eucarióticos. CH2O P
Ribulosa CO2
En las cianobacterias, algunas bacterias nitrificantes y los tiobacilos
1,5-bisfosfato H2O
(quimiolitotrofos que oxidan el azufre), el ciclo de Calvin está asociado
carboxilasa
con cuerpos de inclusión llamados carboxisomas. Estas son estructuras
COOH
poliédricas que contienen la enzima crítica para el ciclo de Calvin y CH2O PAGS
pueden ser el sitio de fijación de CO2. La descomposición de la glucosa HOCH + HCOH 3-fosfoglicerato
en piruvato: la vía de las pentosas-fosfato (sección 9.3) COOH CH2O P

El ciclo de Calvin se divide en tres fases: fase de carboxilación, fase
Fosfoglicerato atp
de reducción y fase de regeneración (figura 10.4 y anexo II). Durante la
quinasa
fase de carboxilación, la enzima ribulosa 1,5-bisfosfato carboxilasa, ADP
ADP
también llamada ribulosa bisfosfato carboxilasa/oxigenasa (Rubisco),
REDUCCIÓN
cataliza la adición de CO2 a la molécula de 5 carbonos ribulosa-1,5- atp O
FASE
bisfosfato (RuBP), formando una intermedio de seis carbonos que se COP _
divide rápida y espontáneamente en dos moléculas de 3-fosfoglicerato HCOH
1,3-bisfosfoglicerato
(PGA) (figura 10.5). Tenga en cuenta que el PGA es un intermedio de
CH2O P
la vía de Embden-Meyerhof (EMP), y en la fase de reducción, el PGA NADPH + H+
se reduce a gliceraldehído 3-fosfato mediante dos reacciones que son Gliceraldehído 3-
esencialmente las inversas de dos reacciones de EMP. La diferencia es fosfato NADP+
deshidrogenasa
que la enzima gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa del ciclo de Pi
Calvin utiliza NADP en lugar de NAD (compárense las figuras 10.4 y
H O
9.5). Finalmente, en la fase de regeneración, se regenera RuBP, para C
que el ciclo pueda repetirse. Gliceraldehído 3- CH2OH
HCOH fosfato
Además, esta fase produce carbohidratos como gliceraldehído 3- CO
CH2O P
fosfato, fructosa 6-fosfato y glucosa 6-fosfato, todos los cuales son CH2O PAGS
metabolitos precursores (figura 10.4). Esta parte del ciclo es similar a la DHAP
ruta de las pentosas fosfato e involucra las reacciones de transcetolasa Ribulosa 5- (1)
REGENERACIÓN
y transaldolasa. fosfato Productos
FASE
(5) biosintéticos
Para sintetizar fructosa 6-fosfato o glucosa 6-fosfato a partir de
CO2, el ciclo debe funcionar seis veces para producir la hexosa deseada Fructosa 1,6-bifosfato
y reformar las seis moléculas de RuBP. Fructosa 6-fosfato
Eritrosa 4-fosfato
6RuBP 6CO2 ÿÿÿ 12PGA ÿÿÿ 6RuBP fructosa 6-P Ribosa 5-fosfato y
otros intermediarios
La incorporación de un CO2 a la materia orgánica requiere tres ATP y
dos NADPH. La formación de glucosa a partir de CO2 puede resumirse
mediante la siguiente ecuación. Figura 10.4 El ciclo de Calvin. Esta es una descripción general
6CO2 18ATP 12NADPH 12H 12H2O ÿÿÿ glucosa 18ADP 18Pi del ciclo con solo las fases de carboxilación y reducción en detalle.
12NADP Se carboxilan tres 1,5-bifosfatos de ribulosa para dar seis 3-
fosfogliceratos en la fase de carboxilación. Estos se convierten
Los metabolitos precursores formados en el ciclo de Calvin pueden
en seis 3-fosfatos de gliceraldehído, que se pueden convertir
luego usarse para sintetizar otros metabolitos precursores y moléculas
en fosfato de dihidroxiacetona (DHAP). Cinco de las seis triosas
esenciales, como se describe en las secciones 10.4 a 10.7.
(gliceraldehído fosfato y dihidroxiacetona fosfato) se utilizan
para reformar tres ribulosa 1,5-bifosfatos en la fase de regeneración.
Otras vías de fijación de CO2 Ciertas La triosa restante se utiliza en biosíntesis. Los números entre
bacterias y arqueas fijan CO2 mediante el ciclo reductivo TCA, el ciclo
paréntesis en la parte inferior derecha indican este flujo de carbono.
del 3-hidroxipropionato o la vía del acetil-CoA. El ciclo reductor del
TCA (figura 10.6) es utilizado por algunos totrofos quimiolitoau (p. ej., se llama así porque funciona en la dirección inversa del ciclo TCA
Thermoproteus y Sulfolobus, dos géneros de arqueas, y el género oxidativo normal (compárense las figuras 10.6 y 9.9). Algunos géneros
bacteriano Aquifex) y fotótrofos anoxigénicos como Chlorobium, una de arqueas y las bacterias verdes no sulfurosas (otro grupo de fotótrofos
bacteria de azufre verde. El ciclo reductivo del TCA anoxigénicos) utilizan el ciclo del 3-hidroxipropionato para fijar el CO2.
La figura 10.7 muestra el ciclo tal como se cree que funciona en la bacteria verde no
1. Describa brevemente las tres fases del ciclo de Calvin. ¿Qué otras vías
sulfurosa Chloroflexus aurantiacus. No está claro cómo se asimila su producto, el
se utilizan para fijar el CO2?
glioxilato. Los metanógenos utilizan porciones de la ruta de la acetil-CoA para la
2. ¿Qué dos enzimas son específicas del ciclo de Calvin?
fijación de carbono; la vía tal como la utiliza Methanobacterium thermoautotrophicum
se ilustra en la figura 10.8. Tanto la ruta de la acetil-CoA como la metanogénesis
involucran la actividad de varias enzimas y coenzimas inusuales.
Estos se describen con más detalle en el capítulo 20. Phylum Crenar chaeota
10.4 SÍNTESIS DE AZÚCARES
(sección 20.2); Aquificae y Thermotogae (sección 21.1); Bacterias fotosintéticas Y POLISACÁRIDOS
(sección 21.3) Los autótrofos que utilizan procesos de fijación de CO2 distintos del ciclo de Calvin y
los heterótrofos que crecen en fuentes de carbono distintas de los azúcares deben
ser capaces de sintetizar glucosa. La síntesis de glucosa a partir de precursores
CH2O PAGS
CH2O PAGS
distintos de los carbohidratos se denomina gluconeogénesis. La vía gluconeogénica
CH2O PAGS
HC OH comparte siete enzimas con la vía de Embden-Meyerhof. Sin embargo, los dos
OOC CO OH
C O
CO2 H2O COOH caminos no son idénticos (figura 10.9). Tres pasos glucolíticos son irreversibles en la
H OH C O
C célula: (1) la conversión de fosfoenolpiruvato en piruvato, (2) la formación de fructosa
COOH
H C OH 1,6-bisfosfato a partir de fructosa 6-fosfato y (3) la fosforilación de glucosa.
H C OH
H C OH
CH2O PAGS
CH2O PAGS
CH2O PAGS
Estos deben pasarse por alto cuando la vía está operando biosintéticamente. Por
Ribulosa 1,5- 3-fosfoglicerato
ejemplo, la formación de fructosa 1,6-bifosfato por la fosfofructoquinasa es revertida
bisfosfato (AGP)
(RuBP) por una enzima diferente, la fructosa bisfosfatasa, que elimina hidrolíticamente un
fosfato de la fructosa bisfosfato. Por lo general, al menos dos enzimas están
Figura 10.5 Reacción de la ribulosa 1,5-bisfosfato carboxilasa. Esta enzima involucradas en la conversión de piruvato a fosfoenolpiruvato (la inversión del paso
cataliza la adición de dióxido de carbono a la ribulosa 1,5-bisfosfato, formando un de la piruvato quinasa).
intermediario inestable, que luego se descompone en dos moléculas de 3-
fosfoglicerato.
Biosíntesis
oxaloacetato
2[H]
Acetil-CoA
malato
H2O
Fumarato
2[H]
ADP+Pi
succinato
atp CoASH
CoASH
atp
ADP+Pi Citrato
Succinil-CoA
2[H] CoASH
isocitrato
CO2
ÿ-cetoglutarato
2[H] CO2
Figura 10.6 El Ciclo TCA Reductivo. Este ciclo lo utilizan las bacterias verdes del azufre y algunas arqueas quimiolitotróficas para fijar el CO2. El ciclo
corre en la dirección opuesta al ciclo TCA. El ATP y los equivalentes reductores [H] impulsan la inversión. En las bacterias verdes del azufre, los
equivalentes reductores los proporciona la ferredoxina reducida. El producto de este proceso es acetil-CoA, que se puede utilizar para sintetizar otras
moléculas orgánicas y metabolitos precursores.
Síntesis de Azúcares y Polisacáridos 231
atp + CO2
Acetil-CoA Malil-CoA CoA
Malonil-CoA 2[H]
2[H] COOH
2[H] C
CoA
O H
glioxilato
3-hidroxipropionato Succinil-CoA
atp Biosíntesis
CoA
Metilmalonil-CoA
2[H]
propionil-CoA
atp + CO2
Figura 10.7 La vía del 3-hidroxipropionato. Esta vía funciona en bacterias verdes sin azufre, un grupo de fotótrofos anoxigénicos. El
producto del ciclo es el glioxilato, que se utiliza en la biosíntesis por mecanismos que no se han dilucidado definitivamente.
6[H] Corrin-E2
CO2 CH3X _ CH3 Corrin-E2

MFR
H4MPT O CoASH O CO2
CH3C _ mi
1 CH3C _ SCoA piruvato Biosíntesis
CO deshidrogenasa (E1)
2[H]
CO2 CO E1
CO
Figura 10.8 Vía Acetil-CoA. Los metanógenos reducen dos moléculas de CO2, cada una por un mecanismo diferente, y las combinan para
formar acetilo y luego acetil-CoA. Las bacterias acetogénicas usan una versión ligeramente diferente de la vía.
Síntesis de monosacáridos Como célula para participar en reacciones enzimáticas al igual que el ADP
puede verse en la figura 10.9, la gluconeogénesis sintetiza fructosa lleva fosfato en forma de ATP. La UDP-galactosa se sintetiza a partir
6-fosfato y glucosa 6-fosfato. Una vez que se han formado estos dos de UDPG a través de un reordenamiento de un grupo hidroxilo. Una
metabolitos precursores, se pueden fabricar otros azúcares comunes. enzima diferente cataliza la síntesis de ácido UDP-glucurónico a
Por ejemplo, la manosa proviene directamente de la fructosa 6-fosfato través de la oxidación de UDPG (figura 10.11).
por un simple reordenamiento.
Síntesis de polisacáridos Los
Fructosa 6-fosfato ÿmanosa 6-fosfato
azúcares nucleósidos difosfato también juegan un papel central en la
Varios azúcares se sintetizan mientras están unidos a un nucleósido síntesis de polisacáridos como el almidón y el glucógeno. Una vez
difosfato. El azúcar de difosfato de nucleósido más importante es la más, la biosíntesis no es simplemente una inversión directa del
glucosa de difosfato de uridina (UDPG). La glucosa se activa catabolismo. El catabolismo del glucógeno y del almidón procede ya
uniéndose al pirofosfato de uridina difosfato a través de una reacción sea por hidrólisis para formar azúcares libres o por la adición de
con uridina trifosfato (figura 10.10). La porción UDP de UDPG es fosfato a estos polímeros con la producción de glucosa 1-fosfato. Los
reconocida por enzimas y transporta glucosa alrededor del azúcares de difosfato de nucleósido no están involucrados. En cambio, durante
Glucosa O
atp
Pi
Hexoquinasa Glucosa 6-fosfatasa hn
ADP H2O
CH2OH
Glucosa 6-fosfato
O
O O O norte
OH O O
CH2 O
PAGS PAGS
Fructosa 6-fosfato
atp OH
Pi OH O– O–
Fosfofructoquinasa ADP Fructosa bisfosfatasa

H2O
Fructosa 1,6-bifosfato OH OH
difosfato de uridina
Gliceraldehído 3-fosfato Fosfato de

dihidroxiacetona Figura 10.10 Glucosa de difosfato de uridina. La glucosa está en color.
Pi
NAD+
NADH+H+
1,3-bisfosfoglicerato CH2OH
ADP O
atp UDP-glucosa
OH UDP
3-fosfoglicerato OH
OH H2O
NADH
2-fosfoglicerato
NAD+
H2O
CH2OH COOH
Fosfoenolpiruvato OH O O
CO2 OH UDP OH UDP

PIB Fosfoenolpiruvato OH
ADP carboxiquinasa OH OH
GTP
piruvato quinasa oxaloacetato UDP-galactosa Ácido UDP-glucurónico
atp ADP
atp Piruvato carboxilasa Figura 10.11 Síntesis de uridina difosfato galactosa y
glucuronato. La síntesis de UDP-galactosa y ácido UDP-glucurónico a
CO2
piruvato partir de UDP-glucosa. Los cambios estructurales se indican mediante
recuadros azules.
Figura 10.9 Gluconeogénesis. La vía gluconeogénica utilizada en muchos
microorganismos. Los nombres de las cuatro enzimas que catalizan
reacciones diferentes de las que se encuentran en la vía de Embden grupos Las cadenas de polisacáridos están conectadas a través de sus
Meyerhof (EMP) están en recuadros sombreados. Los pasos de EMP se pentapéptidos o por interpuentes (véanse las figuras 3.20 y 3.21). La pared
muestran en azul para comparar. celular bacteriana (sección 3.6)
No es sorprendente que una estructura tan intrincada requiera un
proceso biosintético igualmente intrincado, especialmente porque algunas
glucógeno y almidón en bacterias y algas, la glucosa difosfato de adenosina reacciones ocurren en el citoplasma, otras en la membrana y otras en el
se forma a partir de glucosa 1-fosfato y luego dona glucosa al final de las espacio periplásmico. La síntesis de peptidoglicano involucra dos
cadenas de glucógeno y almidón en crecimiento. transportadores (figura 10.12). El primero, el difosfato de uridina (UDP)
funciona en las reacciones citoplasmáticas. En el primer paso de la síntesis
ATP glucosa 1-fosfato ÿÿÿ ADP-glucosa PPi de peptidoglicanos, se forman derivados UDP de ácido N-acetilmurámico
(Glucosa)n ADP-glucosa ÿÿÿ (glucosa)n1 ADP y N - acetilglucosamina. Luego se agregan aminoácidos secuencialmente
a UDP-NAM para formar la cadena pentapeptídica.
Luego, el pentapéptido NAM se transfiere al segundo transportador,
Síntesis de peptidoglicano Los fosfato de bac toprenol, que se encuentra en el lado citoplásmico de la
azúcares nucleósidos difosfato también participan en la síntesis de membrana plasmática. El producto intermedio resultante suele denominarse
peptidoglicano. Recuerde que el peptidoglicano es una molécula grande y lípido I. El batoprenol (figura 10.13) es un alcohol de 55 carbonos y está
compleja que consta de largas cadenas de polisacáridos formadas por unido a NAM por un grupo pirofosfato. A continuación, UDP transfiere NAG
residuos alternantes de ácido N-acetilmurámico (NAM) y N-acetilglucosamina al complejo bactoprenol-NAM-pentapéptido (lípido I) para generar el lípido
(NAG). Las cadenas de pentapéptidos están unidas a la NAM. II. Esto crea la unidad de repetición de peptidoglicano. los
Síntesis de Azúcares y Polisacáridos 233
1 Derivados UDP de NAM y 3 El pentapéptido NAM se transfiere 4 UDP transfiere NAG al pentapéptido bactoprenol-NAM.
Se sintetizan NAG (no al fosfato de bactoprenol. Están unidos Si se requiere un puente intermedio de pentaglicina,
mostrado). por un enlace pirofosfato. se crea utilizando glicil-tRNA especial
moléculas, pero no ribosomas. La formación de
interpuentes se produce en la membrana.
NAM UDP
L-ala L-ala
2 Adición secuencial de amino
–
ácidos a UDP-NAM para formar el
pentapéptido NAM. El ATP se usa D-Glu
para alimentar esto, pero el ARNt y cicloserina 5 El portador de bactoprenol transporta el
los ribosomas no están involucrados D-Ala
– unidad de repetición NAG-NAM-pentapéptido
en la formación de los enlaces 2 Lys-L (DAP) completada a través de la membrana.
peptídicos que unen los aminoácidos.
D-Ala D-Ala
Lípido I UDP NAG Lípido II
Citoplasma pentapéptido pentapéptido

NAM UDP pentapéptido
NAM UDP NAM
PAGS
UMP PÁGINAS PÁGINAS ROCÍN
3 4
Pi
Bactoprenol Bactoprenol Bactoprenol
Bacitracina – 7 Membrana 5
Bactoprenol Bactoprenol
–
6
periplasma PÁGINAS
NAM NAG PÁGINAS NAM NAG
peptidoglicano peptidoglicano
vancomicina pentapéptido
pentapéptido
8 Enlaces cruzados de péptidos entre peptidoglicano 7 El portador de bactoprenol retrocede 6 El pentapéptido NAG-NAM se une al extremo
Las cadenas se forman por transpeptidación. a través de la membrana. Como lo hace, creciente de un peptidoglucano
(no mostrado). pierde un fosfato, convirtiéndose en cadena, aumentando la longitud de la cadena en
fosfato de bactoprenol. Ahora está listo una unidad de repetición.
para comenzar un nuevo ciclo.
Figura 10.12 Síntesis de peptidoglicano. NAM es ácido N-acetilmurámico y NAG es N-acetilglucosamina. El pentapéptido contiene L lisina en Staphylococcus
aureus peptidoglicano y ácido diaminopimélico (DAP) en E. coli. Inhibición por bacitracina, cicloserina y vancomicina
también se muestra. Los números corresponden a seis de las ocho etapas discutidas en el texto. La etapa ocho se representa en la figura 10.14.
CH3 CH3 CH3 O O
CH3 C CH CH2 ( CH2 C CH CH2 )9 CH2 C CH CH2 OOO PAGS PAGS

NAM
O– O–
Figura 10.13 Pirofosfato de Bactoprenol. Pirofosfato de bactoprenol conectado al ácido N-acetilmurámico (NAM).
la unidad repetida es transferida a través de la membrana por el bactoprenol. Si (figura 10.14), que crea los enlaces cruzados peptídicos entre los
la unidad de peptidoglucano requiere un interpuente, se agrega mientras que la cadenas de peptidoglicano. La enzima que cataliza la reacción elimina la D-alanina
unidad de repetición está dentro de la membrana. Bactoprenol se mantiene dentro del terminal a medida que se forma el enlace cruzado.
membrana y no entra en el espacio periplásmico. Después de liberar la unidad de Para crecer y dividirse eficientemente, una célula bacteriana debe agregar nuevos
repetición de peptidoglicano en el espacio periplásmico, peptidoglicano a su pared celular de forma precisa y bien regulada
el pirofosfato de bactoprenol se desfosforila y vuelve a manteniendo la forma e integridad de la pared en presencia de
el lado citoplásmico de la membrana plasmática, donde puede funcionar en la alta presión osmótica. Debido a que el peptidoglicano de la pared celular es
siguiente ronda de síntesis. Mientras tanto, el peptidoglicano esencialmente una única y enorme red, la bacteria en crecimiento
La unidad de repetición se agrega al extremo creciente de una cadena de peptidoglicano. debe ser capaz de degradarlo lo suficiente para proporcionar extremos aceptores
El paso final en la síntesis de peptidoglicanos es la transpeptidación. para la incorporación de nuevas unidades de peptidoglicano. también debe
Transpeptidación de E. coli
••• NAG NAM ••• ••• ROCÍN NAM ••• D ala

Ala D
L ala Ala D L ala Ala D
D -Glu D Glú SALTO

DAP H2N
D -Glu D -Glu
SALTO SALTO
L ala L ala
D ala Ala D
D ala ••• ROCÍN NAM ••• ••• ROCÍN NAM •••
penicilinas
Transpeptidación de S. aureus
••• ROCÍN NAM ••• ••• ROCÍN NAM •••

Ala D Ala D
L ala D ala L ala D ala
D L D L Lys
-GluNH2 Lys GluNH2
D GluNH2 L Lys D
L Lys (Gly)5 GluNH2
H2N (Gly)5 L ala D ala L ala

Ala D
D ala ••• NAG NAM ••• ••• NAG NAM •••
Figura 10.14 Transpeptidación. Las reacciones de transpeptidación en la formación de los peptidoglicanos de Escherichia coli y Staphy lococcus aureus.
región septal
(a)
(B)
Figura 10.15 Patrones de síntesis de pared. Patrones de síntesis de nueva pared celular en bacterias en crecimiento y división. (a) Estreptococos y algunos
otros cocos grampositivos. (b) Síntesis en bacterias con forma de bastón (E. coli, Salmonella, Bacillus). Las zonas de crecimiento están en turquesa. La situación
real es más compleja de lo indicado porque las células pueden comenzar a dividirse nuevamente antes de que se complete la primera división.
reorganizar la estructura del peptidoglicano cuando sea necesario. Esta zonas de crecimiento. La principal zona de crecimiento suele estar en el sitio
digestión limitada de peptidoglicanos se logra mediante enzimas conocidas de formación del tabique, y las nuevas mitades de células se sintetizan una
como autolisinas, algunas de las cuales atacan las cadenas de polisacáridos, tras otra. El segundo patrón de síntesis ocurre en las bacterias con forma de
mientras que otras hidrolizan los enlaces cruzados de péptidos. Los bastón Escherichia coli, Salmonella y Bacillus. La síntesis de peptidoglicano
inhibidores de autolisina se producen para mantener la actividad de estas activo ocurre en el sitio de formación del tabique, pero los sitios de crecimiento
enzimas bajo estricto control. también están dispersos a lo largo de la porción cilíndrica del bastón. Así, el
Aunque la ubicación y distribución de la actividad sintética de la pared crecimiento se distribuye de forma más difusa en las bacterias con forma de
celular varía según la especie, parece haber dos patrones generales (figura bastón que en los estreptococos. La síntesis debe alargar las células en
10.15). Muchos cocos grampositivos (p. ej., Enterococcus faecalis y forma de bastón y dividirlas. Presumiblemente, esto explica las diferencias
Streptococcus pyogenes) tienen de uno a unos pocos en el patrón de crecimiento de la pared. El ciclo celular procariótico (sección 6.1)
Síntesis de aminoácidos 235
Debido a la importancia del peptidoglicano para la estructura y función de la del -cetoglutarato, catalizado en muchas bacterias y hongos por la glutamato
pared celular, su síntesis es un objetivo particularmente efectivo para los agentes deshidrogenasa cuando la concentración de amoníaco es alta.
antimicrobianos. La inhibición de cualquier etapa de la síntesis debilita la pared

celular y puede conducir a la lisis osmótica. Muchos antibióticos de uso común
interfieren con la síntesis de peptidoglucanos. Por ejemplo, la penicilina inhibe la -cetoglutarato NH4 NADPH (NADH) H ÿglutamato NADP (NAD ) H2O
reacción de transpeptidación (figura 10.14) y la bacitracina bloquea la

desfosforilación del pirofosfato de bactoprenol (figura 10.12). Medicamentos
antibacterianos (sección 34.4) Una vez que se ha sintetizado el glutamato, el grupo amino recién formado se puede
transferir a otros esqueletos de carbono mediante reacciones de transaminación para
formar diferentes aminoácidos.
1. ¿Qué es la gluconeogénesis? ¿Por qué es importante?
Las transaminasas poseen la coenzima piridoxal fosfato, que es responsable de la
2. Describe la formación de manosa, galactosa, almidón y glucógeno. ¿Qué son
transferencia del grupo amino. Los microorganismos tienen varias transaminasas, cada
los azúcares nucleósidos difosfato? ¿Cómo los utilizan los microorganismos?
una de las cuales cataliza la formación de varios aminoácidos utilizando el mismo
3. Suponga que un microorganismo crece en un medio que contiene aminoácidos
aminoácido como donante de grupo amino. Cuando la glutamato deshidrogenasa funciona
pero no azúcares. En términos generales, ¿cómo sintetizaría las pentosas y
en cooperación con las transaminasas, el amoníaco se puede incorporar a una variedad
hexosas que necesita? ¿Cómo podría generar todos los metabolitos precursores
de aminoácidos (figura 10.16).
que necesita?
4. Haga un diagrama de los pasos involucrados en la síntesis de peptidoglicano y

El sistema glutamina sintetasa-glutamato sintasa (GS GOGAT) se observa en
muestre dónde ocurren en la célula. ¿Cuáles son las funciones del bactoprenol y el UDP?
E. coli, Bacillus megaterium y otras bacterias (figura 10.17). Funciona cuando los niveles
¿Qué tiene de inusual la síntesis de la cadena pentapeptídica?
de amoníaco son bajos. La incorporación de amoníaco por este sistema comienza cuando
5. ¿Cuál es la función de las autolisinas en la síntesis de la pared celular? Describa los
se usa amoníaco para sintetizar glutamina a partir de glutamato en una reacción catalizada
patrones de síntesis de peptidoglicanos que se observan en cocos grampositivos y en
por la glutamina sintetasa (figura 10.18). Luego, el nitrógeno amídico de la glutamina se
bacterias con forma de bastón como E. coli.
transfiere a -cetoglutarato para generar una nueva molécula de glutamato. Esta reacción
es catalizada por la glutamato sintasa. Debido a que el glutamato actúa como un donante
de amino en las reacciones de transaminasas, el amoníaco puede usarse para sintetizar
10.5 SÍNTESIS DE AMINOÁCIDOS todos los aminoácidos comunes cuando están presentes las transaminasas adecuadas.
Muchos de los metabolitos precursores (figura 10.3) sirven como sustratos de partida para
la síntesis de aminoácidos. En las rutas biosintéticas de aminoácidos, el esqueleto de
carbono se remodela y se agrega un grupo amino y, a veces, azufre. En esta sección,
primero examinamos los mecanismos por los cuales el nitrógeno y el azufre se asimilan e Reducción asimilatoria de nitrato El
incorporan a los aminoácidos. A esto le sigue una breve consideración de la organización nitrógeno en el nitrato (NO3 ) está mucho más oxidado que el del amoníaco. Por lo tanto,
el nitrato primero debe reducirse a amoníaco antes de que el nitrógeno pueda convertirse
de las rutas biosintéticas de aminoácidos.
en una forma orgánica. Esta reducción de nitrato se denomina reducción asimilatoria de
nitrato, que no es lo mismo que la que ocurre durante la respiración anaeróbica (reducción
disimilatoria de nitrato). En la reducción de nitrato por asimilación, el nitrato se incorpora a
la materia orgánica y no participa en la generación de energía. El proceso está muy
Asimilación de nitrógeno El extendido entre bacterias, hongos y protistas fotosintéticos. respiración anaeróbica
nitrógeno es un componente importante no solo de las proteínas, sino (sección 9.6); Ciclo biogeoquímico: ciclo del nitrógeno (sección 27.2)
también de los ácidos nucleicos, las coenzimas y muchos otros componentes
celulares. Por lo tanto, la capacidad de la célula para asimilar nitrógeno
inorgánico es excepcionalmente importante. Aunque el gas nitrógeno es
abundante en la atmósfera, pocos microorganismos pueden reducir el gas
+ Aminoácidos
y utilizarlo como fuente de nitrógeno. La mayoría debe incorporar amoníaco NH4 ÿ-cetoglutarato
o nitrato. Primero examinamos la asimilación de amoníaco y nitrato, y luego NAD(P)H
discutimos brevemente la asimilación de nitrógeno en microbios que fijan N2.
GDH Transaminasas
Incorporación de amoníaco El NAD(P)+
nitrógeno amoniacal se puede incorporar al material orgánico de manera relativamente
fácil y directa porque es más reducido que otras formas de nitrógeno inorgánico. El H2O Glutamato ÿ-cetoácido
amoníaco se incorpora inicialmente a los esqueletos de carbono por uno de dos

mecanismos: aminación reductora o por el sistema glutamina sintetasa-glutamato sintasa. Figura 10.16 Vía de asimilación de amoníaco.
Asimilación de amoníaco mediante el uso de glutamato deshidrogenasa

Una vez incorporado, el nitrógeno puede transferirse a otros esqueletos de carbono (GDH) y transaminasas. Pueden estar involucradas las glutamato
mediante enzimas denominadas transaminasas. La principal vía de aminación reductora deshidrogenasas dependientes de NADP o NAD. Esta ruta es más activa
implica la formación de glutamato a altas concentraciones de amoníaco.
Reacción de glutamina sintetasa
COOH C NH2
CH2 CH2
CH2 + NH3 + atp CH2 + ADP Pi +
CH NH2 CH NH2
COOH COOH
Ácido glutamico glutamina
Reacción de glutamato sintasa
COOH COOH COOH COOH
C O CH NH2 CH NH2 CH NH2
CH2 + CH2 + NADPH + H+ CH2 + CH2 + NADP+

o o
CH2 CH2 CH2 CH2 Fdoxidado
Reducido
COOH C NH2 COOH COOH
Ácido ÿ- glutamina Dos ácidos glutámicos

cetoglutárico
Figura 10.17 Glutamina sintetasa y glutamato sintasa. Las reacciones de glutamina sintetasa y glutamato sintasa involucradas en la asimilación
de amoníaco. Algunas glutamina sintasas utilizan NADPH como fuente de electrones; otros usan ferredoxina reducida (Fd). El nitrógeno que se
incorpora y transfiere se muestra en turquesa.
NH3 Glutamato Glutamato RC COOH ÿ-

cetoácido
atp
NADP+
Glutamina Fd (buey) glutamato
Transaminasas
sintetasa sintasa
ADP NADPH
+ NH2
Fd (rojo)
Pi glutamina ÿ-cetoglutarato R CH COOH
Aminoácidos
Figura 10.18 Incorporación de amoníaco usando glutamina sintetasa y glutamato sintasa. Esta ruta es eficaz a bajas concentraciones de
amoníaco.
La reducción asimilatoria de nitrato tiene lugar en el citoplasma de las Fijación de

bacterias. El primer paso en la asimilación de nitrato es su reducción a nitrógeno La reducción del nitrógeno gaseoso atmosférico a amoníaco se
nitrito por la nitrato reductasa, una enzima que contiene tanto FAD como denomina fijación de nitrógeno. Debido a que los niveles de amoníaco y
molibdeno (figura 10.19). NADPH es la fuente de electrones. nitrato de diez son bajos y solo unas pocas bacterias y arqueas pueden
llevar a cabo la fijación de nitrógeno (las células eucariotas carecen por
NO3 NADPH H ÿÿÿ NO2 NADP H2O completo de esta capacidad), la velocidad de este proceso limita el
crecimiento de las plantas en muchas situaciones. La fijación de nitrógeno
A continuación, el nitrito se reduce a amoníaco con una serie de adiciones se produce en (1) bacterias y arqueas de vida libre (p. ej., Azotobacter,
de dos electrones catalizadas por la nitrito reductasa y posiblemente Klebsiella, Clostridium y Methanococcus), (2) bacterias que viven en
otras enzimas. A continuación, el amoníaco se incorpora a los aminoácidos asociación simbiótica con plantas como las leguminosas (Rhizobium) y (3)
por las rutas ya descritas. cianobacterias ( Nostoc, Anabaena y Trichodesmia). Los aspectos biológicos de la fijación de nitró
Enzima
NO3 –
2H+ Nitrato reductasa N2
2e- 2e-
Mo5+ MODA NADPH
H2O _
Enzima •N N
NO2 –
2e- , 2H+
3H+
2e-
H2O _
Enzima • HN NH
[NO H] nitroxilo 2e–, 2H+
2H+
2e- Nitrito reductasa
Enzima •H2N NH2
NH2OH _ Hidroxilamina 2e–, 2H+
2H+
2e-
2NH3
H2O _
Enzima
NH3
Figura 10.20 Reducción de nitrógeno. Una secuencia hipotética de

Figura 10.19 Reducción asimilatoria de nitrato. Se cree que
reducción de nitrógeno por nitrogenasa.
esta secuencia opera en bacterias que pueden reducir y asimilar el
nitrógeno de nitrato. Ver texto para más detalles.
se analizan en los capítulos 28 y 29. La bioquímica de la fijación de

nitrógeno es el tema central de esta sección.
La enzima nitrogenasa cataliza la reducción de nitrógeno a
amoníaco . Aunque todavía se desconocen los intermediarios unidos a
enzimas en este proceso, se cree que el nitrógeno se reduce mediante
adiciones de dos electrones de una manera similar a la ilustrada en la
figura 10.20. La reducción de nitrógeno molecular a amoníaco es
bastante exergónica, pero el La reacción tiene una alta energía de
activación porque el nitrógeno molecular es un gas no reactivo con un
enlace triple entre los dos átomos de nitrógeno. Por lo tanto, la reducción
de nitrógeno es costosa y requiere un gran gasto de ATP. Se requieren
al menos 8 electrones y 16 moléculas de ATP, 4 ATP por par de electrones.
N2 8H 8e 16ATP ÿÿÿ Figura 10.21 Estructura de la proteína nitrogenasa Fe.

2NH3 H2 16ADP 16Pi
Las dos subunidades de la proteína Fe están dispuestas como un par de
alas de mariposa con el grupo de azufre de hierro entre las alas y en la
Los electrones provienen de la ferredoxina que se ha reducido de diversas
"cabeza" de la mariposa. El grupo de azufre de hierro está muy expuesto,
formas: por fotosíntesis en cianobacterias, procesos respiratorios en
lo que ayuda a explicar la sensibilidad de la nitrogenasa al oxígeno. El
fijadores de nitrógeno aeróbicos o fermentaciones en bacterias
oxígeno puede atacar fácilmente los átomos de hierro expuestos.
anaeróbicas. Por ejemplo, Clostridium pasteurianum (una bacteria
anaeróbica) reduce la ferredoxina durante la oxidación del piruvato,
mientras que la aeróbica Azotobacter usa electrones de NADPH para
reducir la ferredoxina. tivo al O2 y debe protegerse de la inactivación del O2 dentro de la célula.
La nitrogenasa es un sistema complejo que consta de dos En muchas cianobacterias, esta protección contra el oxígeno la
componentes proteicos principales, una proteína MoFe (MW 220 000) proporciona una estructura especial llamada heterociste (ver figura 21.9).
unida a una o dos proteínas Fe (MW 64 000). La proteína MoFe contiene La reducción de N2 a NH3 ocurre en tres pasos, cada uno de los
2 átomos de molibdeno y de 28 a 32 átomos de hierro; la proteína Fe cuales requiere un par de electrones (figuras 10.20 y 10.22). Se llevan a
tiene 4 átomos de hierro (figura 10.21). La proteína Fe se reduce primero cabo seis transferencias de electrones, y esto requiere un total de 12 ATP
por la ferredoxina, luego se une al ATP (figura 10.22). La unión de ATP por N2 reducido. El proceso general en realidad requiere al menos 8
cambia la conformación de la proteína Fe y reduce su potencial de electrones y 16 ATP porque la nitrogenasa también reduce los protones
reducción, lo que le permite reducir la proteína MoFe. El ATP se hidroliza a H2. El H2 reacciona con la diimina (HN NH) para formar N2 y H2. Este
cuando se produce esta transferencia de electrones. Finalmente, la ciclo inútil produce algo de N2 incluso en condiciones favorables y hace
proteína MoFe reducida dona electrones al nitrógeno atómico. La nitrogenasa esque
bastante sensible.
la fijación de nitrógeno sea aún más costosa. simbiótico
provenientes de fuentes externas o de reservas de aminoácidos intracelulares.

Ferredoxinoxidado Ferredoxinareducida
Además, el sulfato puede proporcionar azufre para la biosíntesis.
El átomo de azufre en el sulfato está más oxidado que en la cisteína.
y otras moléculas orgánicas; por lo tanto, el sulfato debe reducirse antes
2e
se puede asimilar. Este proceso se conoce como reducción de sulfato
asimilatorio para distinguirlo del sulfato disimilatorio .
Fe proteinred. Fe proteinox. reducción, que tiene lugar cuando el sulfato actúa como receptor de electrones
durante la respiración anaeróbica. Respiración anaeróbica (sección
9.6); Ciclo biogeoquímico: ciclo del azufre (sección 27.2)
4MgATP 4MgADP
La reducción asimilatoria de sulfato implica la activación de sulfato.
a través de la formación de fosfoadenosina 5'-fosfosulfato
Fe proteinred. •4MgATP Fe proteinox.•4MgATP (figura 10.23), seguido de reducción del sulfato. los
El proceso es complejo (figura 10.24). El sulfato se reduce primero a
2e Pi 2
sulfito (SO3 ), luego al sulfuro de hidrógeno. La cisteína se puede
sintetizar a partir de sulfuro de hidrógeno de dos formas. Los hongos parecen
combinar sulfuro de hidrógeno con serina para formar cisteína
MoFe proteinox. MoFe rojo proteico.
2H+ O O
2e
–
O S O PO CH2 adenina
O
O O–
2NH3 + H2 N2 + 8H+ O OH
OPO–
Figura 10.22 Mecanismo de acción de la nitrogenasa. El flujo O–
de dos electrones de ferredoxina a nitrógeno. Este proceso

se repite tres veces para reducir el N2 a dos moléculas de Figura 10.23 Fosfoadenosina 5'-fosfosulfato
amoníaco. La estequiometría en la parte inferior incluye protón (PAPAS). El grupo sulfato está en color.
reducción a H2. Ver el texto para una explicación más detallada.
2-
SO4
atp
Las bacterias fijadoras de nitrógeno pueden consumir casi el 20% del ATP
producido por la planta huésped.
La nitrogenasa puede reducir una variedad de moléculas que contienen PPi
enlaces triples (p. ej., acetileno, cianuro y azida). Adenosina 5ÿ-fosfosulfato
atp
HC ‚ CH + 2H+ + 2e- ÿÿ H2C “ CH2

ADP
La tasa de reducción de acetileno a etileno se usa a menudo para estimar la Fosfoadenosina 5ÿ-fosfosulfato
NADPH + H+
actividad de la nitrogenasa.
Una vez que el nitrógeno molecular se ha reducido a amoníaco, el Fosfoadenosina 5ÿ-fosfato
NADP+
el amoníaco se puede incorporar en compuestos orgánicos. los
2-
mecanismos por los cuales las células heterocistas intercambian NH3 con SO3
NADPH + H+
las células vegetativas de cianobacterias, así como la forma simbiótica
los rizobios fijadores de nitrógeno comparten amoníaco con las plantas huésped,
NADP+
constituyen un área de investigación activa. Asociaciones de microorganismos con
plantas vasculares: fijación de nitrógeno (sección 29.5) H2S
Asimilación de azufre
El azufre es necesario para la síntesis de los aminoácidos cisteína y Compuestos orgánicos de azufre
metionina También se necesita para la síntesis de varias coenzimas (p. ej., (p. ej., cisteína)
coenzima A y biotina). El azufre se obtiene de dos
fuentes. Muchos microorganismos usan cisteína y metionina, ob Figura 10.24 La ruta de reducción de sulfato.
(proceso 1), mientras que muchas bacterias unen sulfuro de hidrógeno con oxaloacetato
O-acetilserina en su lugar (proceso 2).
(1) H2S serina ÿÿÿÿÿÿ cisteína H2O aspartato
acetil-CoA CoA
(2) Serina ÿÿÿÿÿÿ Aspartato ÿ-semialdehído
H2S acetato
O-acetilserina ÿÿÿÿÿÿ cisteína homoserina lisina
Una vez formada, la cisteína se puede utilizar en la síntesis de otros

compuestos orgánicos que contienen azufre, incluido el aminoácido
metionina metionina treonina
Vías biosintéticas de aminoácidos

isoleucina
Algunos aminoácidos se producen directamente por transaminación de un
metabolito precursor. Por ejemplo, la alanina y el aspartato se fabrican
directamente a partir de piruvato y oxaloacetato, respectivamente, utilizando Figura 10.25 Vía de ramificación de aminoácidos
glutamato como donante del grupo amino. Sin embargo, para la mayoría de los aminoácidos, Síntesis. Las vías a la metionina, treonina, isoleucina y
el metabolito precursor a partir del cual se sintetizan debe ser lisina. Aunque algunas flechas representan un paso, la mayoría de las
alterado por algo más que la simple adición de un grupo amino. En muchos interconversiones requieren la participación de varias enzimas. Tampoco se muestra
casos, el esqueleto de carbono debe reconfigurarse, y para la cisteína el consumo de poder reductor y ATP. por ejemplo, el
y metionina, el esqueleto de carbono debe modificarse mediante la adición La síntesis de isoleucina consume dos ATP y tres NADPH.
de azufre. Estas vías biosintéticas son más complejas.
A menudo implican muchos pasos y están ramificados. Mediante el uso
vías ramificadas, se puede utilizar un solo metabolito precursor para Fosfoenolpiruvato
+
la síntesis de una familia de aminoácidos relacionados. por ejemplo, el
Eritrosa -4- P
Los aminoácidos lisina, treonina, isoleucina y metionina son
sintetizado a partir de oxaloacetato por una ruta anabólica de ramificación
(figura 10.25). Las rutas biosintéticas para el amino aromático
Shikimate
Los ácidos fenilalanina, tirosina y triptófano también comparten muchos
intermediarios (figura 10.26). Debido a la necesidad de conservar nitrógeno,
carbono y energía, las rutas de síntesis de aminoácidos son Corismato
por lo general estrechamente regulado por mecanismos alostéricos y de retroalimentación.
Control de la actividad enzimática (sección 8.10)
prefenato antranilato
Reacciones anapleróticas y biosíntesis de aminoácidos
Cuando un organismo está sintetizando activamente aminoácidos, un pesado
la demanda de metabolitos precursores se sitúa en las vías metabólicas Fenilalanina tirosina triptófano
centrales. Debido a que muchas vías biosintéticas de aminoácidos
comenzar con los intermedios del ciclo TCA, es fundamental que sean Figura 10.26 Síntesis de aminoácidos aromáticos. los
fácilmente disponibles. Esto es especialmente cierto para los organismos que llevan síntesis de los aminoácidos aromáticos fenilalanina, tirosina y
fermentación, donde el ciclo TCA no funciona en el catabolismo de la triptófano. La mayoría de las flechas representan más de una enzima
glucosa. Para asegurar un suministro adecuado de metabolitos precursores reacción.
generados por el ciclo TCA, los microorganismos usan reacciones
que reponen los intermedios del ciclo TCA. Las reacciones que reemplazan
a los intermedios del ciclo se denominan reacciones anapleróticas [en griego (es decir, se agrega CO2 a la molécula, formando un carboxilo
anaplerótico, llenando]. grupo).
La mayoría de los microorganismos pueden reemplazar los intermedios del ciclo TCA La conversión de piruvato a oxaloacetato es catalizada por la
usando dos reacciones que generan oxaloacetato a partir de fosfoenolpiruvato enzima piruvato carboxilasa, que requiere el cofactor biotina.
o piruvato, los cuales son intermedios de biotina
la vía de Embden-Meyerhof (figura 10.3). Estos 3 carbonos Piruvato CO2 ATP H2O ÿ ÿÿ
Las moléculas se convierten en oxaloacetato por una reacción de carboxilación. oxaloacetato ADP Pi
La biotina es a menudo el cofactor de las enzimas que catalizan las Este ciclo es posible gracias a dos enzimas únicas, isocitrato liasa y
reacciones de carboxilación. Debido a su importancia, la biotina es un malato sintasa, que catalizan las siguientes reacciones.
factor de crecimiento necesario para muchas especies. La reacción de
isocitrato liasa
la piruvato carboxilasa se observa en levaduras y algunas bacterias. Isocitrato ÿÿ ÿÿÿ glioxilato de succinato
Otros microorganismos, como las bacterias E. coli y Salmonella spp.,
malato sintasa
tienen la enzima fosfoenolpiruvato carboxilasa, que cataliza la Acetil-CoA de glioxilato ÿÿ ÿÿÿ malato CoA
carboxilación del fosfoenolpiruvato.
El ciclo del glioxilato es en realidad un ciclo TCA modificado. Las dos
Fosfoenolpiruvato CO2 ÿÿÿ oxalacetato Pi descarboxilaciones del ciclo TCA (los pasos de isocitrato deshidrogenasa
y -cetoglutarato deshidrogenasa) se pasan por alto, lo que hace posible
Otras reacciones anapleróticas forman parte del ciclo del glioxilato la conversión de acetil-CoA para formar oxaloacetato sin pérdida de
(figura 10.27), que funciona en algunas bacterias, hongos y protistas. carbono de acetil-CoA como CO2. De esta manera acetato y cualquier mol
H O
HC CS CoA
H
Acetil-CoA
oxaloacetato O
O Citrato sintasa
Malato O CCO CoASH
deshidrogenasa HO
-O _ CCH
HO O H HCCO
oxaloacetato O
H CCO
O Ciclo de glioxilato HO CCO
O
-O _ CCH CoASH
H O -O _ CCH
H malato HC CS CoA H
malato
sintasa aconitasa
H Citrato
Acetil-CoA
OH
H2O O O HCCO
H O
O
HCCO
O CCO HCCO
glioxilato
Isocitrato O
-O _ CC
liasa
H
-O _ CC OH
Fumarato H
isocitrato
H O HO
CO2
H CCO HCCO
O HCH
-O _ CC H HO O
H HCCO -O _ CC
succinato HCH
CO2
O ÿ-cetoglutarato
CoA CS
O
Succinil-CoA
Ecuación general:
2 Acetil-CoA + FAD + 2NAD++ 3H2O Oxalacetato + 2CoA + FADH2 + 2NADH + 2H+
Figura 10.27 El ciclo del glioxilato. Las reacciones y enzimas exclusivas del ciclo se muestran en rojo. Las enzimas del ciclo del ácido
tricarboxílico que se han desviado están en la parte inferior.
Síntesis de purinas, pirimidinas y nucleótidos 241
Las moléculas que lo originan pueden aportar carbono al ciclo y apoyar el crecimiento Los microorganismos pueden obtener fosfatos orgánicos a partir de sus
microbiano. El ciclo del ácido tricarboxílico (sección 9.4) entorno en forma disuelta o de partículas. Fosfatasas muy
a menudo hidrolizan ésteres de fosfato orgánico para liberar inorgánicos
fosfato. Las bacterias gramnegativas tienen fosfatasas en el
1. Describir las funciones de la glutamato deshidrogenasa, la glutamina sintetasa,
espacio periplásmico, que permite que el fosfato sea absorbido inmediatamente
glutamato sintasa y transaminasas en la asimilación de amoníaco.
después de su liberación. Por otro lado, los protistas pueden usar directamente
2. ¿Cómo se asimila el nitrato? ¿En qué difiere la reducción asimilatoria de nitrato
fosfatos orgánicos después de la ingestión o hidrolizarlos en lisosomas e incorporar el
de la reducción disimilatoria de nitrato? ¿Cuál es el destino del nitrato después de una
fosfato.
reducción de nitrato similar frente a su destino después de la desnitrificación?
3. ¿Qué es la fijación de nitrógeno? Describa brevemente la estructura y el mecanismo de

acción de la nitrogenasa. Biosíntesis de purina
4. ¿Cómo asimilan los organismos el azufre? ¿En qué se diferencia la reducción de sulfato La vía biosintética de las purinas es una secuencia compleja de 11 pasos (ver apéndice
por asimilación de la reducción de sulfato por disimilación? II) en la que siete moléculas diferentes contribuyen con partes al esqueleto de purina
5. ¿Por qué el uso de vías ramificadas es un mecanismo eficiente para sintetizar final (figura 10.28). Porque
¿aminoácidos? la vía comienza con la ribosa 5-fosfato y el esqueleto de purina se construye sobre este
6. Defina una reacción anaplerótica. Dé tres ejemplos de reacciones anapleróticas. azúcar, el primer producto de purina del
7. Describe el ciclo del glioxilato. ¿En qué se parece al ciclo TCA? Cómo vía es el nucleótido ácido inosínico, no una base de purina libre.
¿Difiere del ciclo TCA? El cofactor ácido fólico es muy importante en la biosíntesis de purinas.
Los derivados del ácido fólico contribuyen con los carbonos dos y ocho al
esqueleto de purina. De hecho, la droga sulfonamida inhibe bacterias
crecimiento bloqueando la síntesis de ácido fólico. Esto interfiere con
10.6 SÍNTESIS DE PURINAS, PIRIMIDINAS Y biosíntesis de purinas y otros procesos que requieren ácido fólico.
NUCLEOTIDOS Fármacos antibacterianos: antagonistas metabólicos (sección 34.4)

Una vez que se ha formado el ácido inosínico, vías relativamente cortas sintetizan
La biosíntesis de purinas y pirimidinas es crítica para todas las células porque
monofosfato de adenosina y guanosina.
estas moléculas se utilizan en la síntesis de ATP, varios cofactores,
monofosfato (figura 10.29) y producen nucleósidos difosfatos y trifosfatos mediante
ácido ribonucleico (ARN), ácido desoxirribonucleico (ADN) y otros
transferencias de fosfato desde ATP. ADN
componentes celulares importantes. Casi todos los microorganismos pueden sintetizar
contiene desoxirribonucleótidos (la ribosa carece de un hidroxilo
sus propias purinas y pirimidinas, ya que estas son tan cruciales
grupo en el carbono dos) en lugar de los ribonucleótidos que se encuentran en
a la función celular. replicación del ADN (sección 11.4); Transcripción (sección 11.6)
ARN. Los desoxirribonucleótidos surgen de la reducción de nucleósidos difosfatos o
Las purinas y las pirimidinas son bases nitrogenadas cíclicas con
nucleósidos trifosfatos por dos
varios enlaces dobles y propiedades aromáticas pronunciadas.
rutas Algunos microorganismos reducen los trifosfatos con una
Las purinas consisten en dos anillos unidos, mientras que las pirimidinas tienen
sistema que requiere vitamina B12 como cofactor. Otros, como E.
sólo uno. Las purinas adenina y guanina y las pirimidinas
coli, reducen la ribosa en los nucleósidos difosfatos. Ambos sistemas
el uracilo, la citosina y la timina se encuentran comúnmente en los microorganismos.
emplean una pequeña proteína que contiene azufre llamada tiorredoxina como
Una base de purina o pirimidina unida con un azúcar pentosa,
su agente reductor.
ya sea ribosa o desoxirribosa, es un nucleósido . Un nucleótido es un nucleósido con
uno o más grupos fosfato unidos al azúcar.
Como se discutió en la sección 10.6, los aminoácidos participan en la
síntesis de bases nitrogenadas y nucleótidos en una serie de CO2
maneras, incluyendo el suministro de nitrógeno que es parte de todas las purinas Nitrógeno amino Glicina
C norte
y pirimidinas. El fósforo presente en los nucleótidos es proporcionado por otros de aspartato

6 7
mecanismos. Comenzamos esta sección examinando norte
1 5C
grupo de formato
asimilación de fósforo. Luego examinamos las vías para la síntesis de bases del ácido fólico
C8
nitrogenadas y nucleótidos.
C 2 C
4 9
3
Asimilación de fósforo grupo de formato
norte
norte
H
del ácido fólico
Además de los ácidos nucleicos, el fósforo se encuentra en las proteínas,
fosfolípidos, ATP y coenzimas como NADP. Las fuentes de fósforo más comunes son
el fosfato inorgánico y el orgánico. Nitrógeno de amida
ésteres de fosfato. El fosfato inorgánico se incorpora a través de la de glutamina
formación de ATP en una de tres formas: por (1) fotofosforilación, (2) fosforilación
oxidativa y (3) fosforilación a nivel de sustrato. La descomposición de la glucosa en Figura 10.28 Biosíntesis de purina. Las fuentes de purina
piruvato (sección 9.3); Electrón se indican el nitrógeno y el carbono del esqueleto. La contribución de
transporte y fosforilación oxidativa (sección 9.5); Fototrofia (sección 9.12) la glicina está sombreada en azul.
O
1. ¿Cómo se asimila el fósforo? ¿Qué papel juegan las fosfatasas en
norte
hn asimilación de fósforo? ¿Por qué el fosfato puede incorporarse directamente a los
componentes celulares, mientras que el nitrato, el nitrógeno gaseoso y el sulfato no pueden?
norte norte
2. Defina purina, pirimidina, nucleósido y nucleótido.
3. Resuma la forma en que se sintetizan las purinas y las pirimidinas. ¿Cómo se
ribosa PAGS
forma el componente desoxirribosa de los desoxirribonucleótidos?

ácido inosínico
10.7 SÍNTESIS DE LÍPIDOS

Una variedad de lípidos se encuentran en los microorganismos, particularmente
adenilosuccinato ácido xantílico en las membranas celulares. La mayoría contienen ácidos grasos o sus derivados.
Los ácidos grasos son ácidos monocarboxílicos con largas cadenas alquílicas
que suelen tener un número par de carbonos (la longitud media es de 18
carbonos). Algunos pueden estar insaturados, es decir, tener uno o más
enlaces dobles. La mayoría de los ácidos grasos microbianos son de cadena
NH2 O lineal, pero algunos están ramificados. Las bacterias gramnegativas suelen
norte norte
tener ácidos grasos de ciclopropano (ácidos grasos con uno o más anillos
norte hn
de ciclopropano en sus cadenas). Lípidos (apéndice I)
La síntesis de ácidos grasos es catalizada por el complejo de ácido
H2N
norte norte norte norte
graso sintasa con acetil-CoA y malonil-CoA como sustratos y NADPH
ribosa PAGS Ribosa P como donante de electrones. Malonil-CoA surge de la carboxilación
impulsada por ATP de acetil-CoA (figura 10.32). La síntesis tiene lugar
Monofosfato de adenosina Monofosfato de guanosina después de que el acetato y el malonato se hayan transferido de la
coenzima A al grupo sulfhidrilo de la proteína transportadora de acilo
Figura 10.29 Síntesis de monofosfato de adenosina y (ACP), una pequeña proteína que transporta la cadena de ácidos grasos
monofosfato de guanosina. Los grupos resaltados son en crecimiento durante la síntesis. La sintasa agrega dos carbonos a la
los que difieren de los del ácido inosínico. vez al extremo carboxilo de la cadena de ácidos grasos en crecimiento en
un proceso de dos etapas (figura 10.32). Primero, el malonil-ACP reacciona
con el acil graso-ACP para producir CO2 y un acil graso-ACP dos carbonos
más largo. La pérdida de CO2 lleva a que esta reacción se complete.
Observe que el ATP se usa para agregar CO2 a la acetil-CoA, formando
Biosíntesis de pirimidina La malonil-CoA. El mismo CO2 se pierde cuando el malonil-ACP dona
biosíntesis de pirimidina comienza con ácido aspártico y fosfato carbonos a la cadena. Por tanto, el dióxido de carbono es esencial para la
de carbamoilo, una molécula de alta energía sintetizada a partir síntesis de ácidos grasos, pero no se incorpora de forma permanente. De
de CO2 y amoníaco (figura 10.30). La aspartato carbamoiltransferasa hecho, algunos microorganismos requieren CO2 para un buen crecimiento,
cataliza la condensación de estos dos sustratos para formar pero pueden prescindir de él en presencia de un ácido graso como el ácido
carbamoilaspartato, que luego se convierte en el producto de oleico (un ácido graso insaturado de 18 carbonos). En la segunda etapa de
pirimidina inicial, el ácido orótico. síntesis, el grupo -ceto que surge de la reacción de condensación inicial se
Después de la síntesis del esqueleto de pirimidina, se produce elimina en un proceso de tres pasos que implica dos reducciones y una
un nucleótido mediante la adición de ribosa 5-fosfato, utilizando el deshidratación. El ácido graso está entonces listo para la adición de dos átomos de carbono más.
intermedio de alta energía 5-fosforribosil 1-pirofosfato. Por lo tanto, Los ácidos grasos insaturados se sintetizan de dos maneras.
la construcción del anillo de pirimidina se completa antes de Eucariotas y bacterias aeróbicas como B. megaterium emplean una
agregar la ribosa, en contraste con la síntesis del anillo de purina, vía aeróbica que utiliza tanto NADPH como O2.
que comienza con la ribosa 5-fosfato. La descarboxilación del
O
monofosfato de orotidina produce monofosfato de uridina y,
finalmente, trifosfato de uridina y trifosfato de citidina. '
La tercera pirimidina común es la timina, un constituyente del R ¬ (CH2)9 ¬ C ¬ SCoA + NADPH + H+ + O2 ÿÿ
ADN. La ribosa en los nucleótidos de pirimidina se reduce de la O
misma manera que en los nucleótidos de purina. Luego, el
monofosfato de desoxiuridina se metila con un derivado del ácido '
fólico para formar monofosfato de desoxiuridina (figura 10.31). R ¬ CH “ CH ¬ (CH2)7 ¬ C ¬ SCoA + NADPH+ + 2H2O
Síntesis de lípidos 243
HOOC
CH2
CH
H2N COOH
NH2 Ácido aspártico HOOC

Pi
NH2 CH2
jefe
HCO3 - + Glutamina
+ 2 ATP + H2O C CH
O
O COOH
norte
H
PAGS
Fosfato de carbamoilaspartato
carbamoilo
ácido dihidroorótico
PPi PRPP
hn
Orotidina
5ÿ-monofosfato
O norte
COOH
H
CO2 ácido orótico
O NH3
glutamina
hn HN
o NH3
UDP uridina
trifosfato
O O
norte norte
Ribosa P Ribosa P PP
Uridina 5ÿ- monofosfato (UMP) trifosfato de citidina
Figura 10.30 Síntesis de pirimidina. PRPP significa ácido 5-fosforribosil 1-pirofosfórico, que proporciona la cadena ribosa 5-fosfato.
La parte derivada del fosfato de carbamoilo está sombreada en turquesa.
Se forma un doble enlace entre los carbonos nueve y diez, y el O2

se reduce a agua con electrones suministrados tanto por el ácido
O O graso como por el NADPH. Las bacterias anaerobias y algunos
N5, N10-metilenetetraácido CH3 aerobios crean enlaces dobles durante la síntesis de ácidos grasos
hn hidrofólico hn
al deshidratar los ácidos grasos hidroxi. No se requiere oxígeno para
la síntesis del doble enlace por esta vía. La vía anaeróbica está
O O
norte norte
presente en varias bacterias gramnegativas comunes (p. ej., E. coli
desoxirribosa PAGS
Desoxirribosa P y Salmonella spp.), bacterias grampositivas (p. ej., Lactobacillus
plantarum y Clostridium pasteurianum) y cianobacterias.
Monofosfato de desoxiuridina Monofosfato de desoxitimidina Los microorganismos eucarióticos frecuentemente almacenan
carbono y energía como triacilglicerol, glicerol esterificado a tres
Figura 10.31 Síntesis de monofosfato de desoxitimidina. ácidos grasos. El glicerol surge de la reducción de los metabolitos
La desoxitimidina difiere de la desoxiuridina en que tiene el grupo metilo precursores dihidroxiacetona fosfato a glicerol 3-fosfato, que luego
sombreado. se esterifica con dos ácidos grasos para dar ácido fosfatídico (figura 10.33
244 Capítulo 10 Metabolismo: el uso de la energía en la biosíntesis O 10.1
CH3C _ CoA
O atp C __
HO3-
O
CoA ADP+ Pi
CH3C _
Acetil-CoA HOO C CH2C _ CoA
ACP Malonil-CoA
ACP
CoA
CoA
O
O
CH3C _ ACP
HOO C CH2C _ ACP
C O2 + ACP
Malonil-ACP CO2 + ACP O O
CH3 C CH2C _ ACP

O
etc NADPH + H+
CH3 CH2 CH2C _ ACP
NADP+
NADP+
NADPH + H+
O OH O
CHCH 3 CH C ACP CH3 CH CH2C _ ACP

Figura 10.32 Síntesis de ácidos grasos. El ciclo se
repite hasta que se alcanza la longitud adecuada de la cadena.
El dióxido de carbono y el resto de malonil-CoA se muestran en
rojo. ACP significa proteína transportadora de acilo. H2O
CH2OH
CO
Fosfato de dihidroxiacetona
CH2O PAGS
NADH + H+
NAD+
CH2OH
HO CH Glicerol 3-fosfato
CH2O PAGS
O
2R C CoA
O
O CH2 O C R1
R2 OC CH
Ácido fosfatídico
CH2O PAGS
H2O
CTP
Pi O
O O CH2 O C R1
O CH2 O C R1 R2 OC CH CDP-diacilglicerol
R2 OC CH CH2 OPPO citidina

serina
CH2OH
R3COOH CMP
O
Fosfatidilserina
O CH2 O C R1
R2 OC CH O
CO2 O
Figura 10.33 Síntesis de CH2 O C R3
O CH2 O C R1
triacilglicerol y fosfolípidos. triacilglicerol
R2 OC CH O
CH2 O PAGS O CH2 CH2 NH2

O
Fosfatidiletanolamina
244
Resumen 245
El fosfato se hidroliza del ácido fosfatídico dando un diacilglicerol, y el tercer ácido graso se se construye un lípido de membrana complejo a partir de los productos de la glucólisis, la
une para producir un triacilglicerol. biosíntesis de ácidos grasos y la biosíntesis de aminoácidos.
Los fosfolípidos son los principales componentes de las membranas celulares
eucarióticas y bacterianas. Su síntesis también suele proceder por
1. ¿Qué es un ácido graso? Describa en términos generales cómo la sintasa de
vía del ácido fosfatídico. Un difosfato de citidina especial (CDP)
ácido graso fabrica un ácido graso.
transportador juega un papel similar al de la uridina y la adenosina
2. ¿Cómo se fabrican los ácidos grasos insaturados?
transportadores de difosfato en la biosíntesis de carbohidratos. Por ejemplo, las bacterias
3. Describa brevemente las vías para la síntesis de triacilglicerol y fosfolípidos.
sintetizan fosfatidiletanolamina, un importante
¿Qué importancia tienen el ácido fosfatídico y el CDP-diacilglicerol?
componente de la membrana celular, a través de la formación inicial de
4. Los transportadores activados participan en carbohidratos, peptidoglicanos y lípidos.
CDP-diacilglicerol (figura 10.33). Este derivado de CDP entonces
síntesis. Describa brevemente estos transportistas y sus funciones. ¿Hay alguna
reacciona con la serina para formar el fosfolípido fosfatidilserina,
características comunes a todos los transportistas? Explica tu respuesta.
y la descarboxilación produce fosfatidiletanolamina. De este modo
Resumen
En la biosíntesis o anabolismo, las células usan energía para construir moléculas complejas a partir de B. El nitrógeno amoniacal puede asimilarse directamente por la actividad de las transaminasas
precursores más pequeños y simples. y la glutamato deshidrogenasa o la glutamina sintetasa-glutamato
sistema sintasa (figuras 10.16–10.18).
10.1 Principios que rigen la biosíntesis
C. El nitrato se incorpora a través de la reducción asimilatoria de nitrato catalizada por la
un. Muchos constituyentes celulares importantes son macromoléculas, polímeros grandes construidos enzimas nitrato reductasa y nitrito reductasa (figura 10.19).
a partir de monómeros simples.
D. La fijación de nitrógeno es catalizada por el complejo nitrogenasa. El nitrógeno molecular atmosférico
B. Aunque muchas vías catabólicas y anabólicas comparten enzimas por el bien se reduce a amoníaco, que luego se incorpora en amino
de eficiencia, algunas de sus enzimas están separadas y reguladas de forma independiente. ácidos (figuras 10.20 y 10.22).
C. Los componentes macromoleculares a menudo se autoensamblan para formar el mi. Los microorganismos pueden usar cisteína, metionina y sulfato inorgánico como azufre.
molécula o complejo. fuentes. El sulfato debe reducirse a sulfuro antes de ser asimilado. este jefe
curs durante la reducción de sulfato asimilatoria (figura 10.24).
10.2 Los metabolitos precursores
F. Aunque algunos aminoácidos se fabrican directamente mediante la adición de un amino
un. Los metabolitos precursores son esqueletos de carbono que se utilizan como sustratos de partida para
grupo a un metabolito precursor, la mayoría de los aminoácidos son hechos por compuestos más complejos
rutas biosintéticas. Son intermediarios de las vías glucolíticas y los
caminos Muchas rutas biosintéticas de aminoácidos están ramificadas. Así, un solo metabolito
Ciclo TCA (es decir, las vías metabólicas centrales) (figura 10.3).
precursor puede dar lugar a varios aminoácidos (figuras 10.25
B. La mayoría de los metabolitos precursores se utilizan para la biosíntesis de aminoácidos. y 10.26).
gramo. Las reacciones anapleróticas reemplazan los intermedios del ciclo TCA para mantener el ciclo en
10.3 La fijación de CO2 por autótrofos
equilibrio mientras suministra precursores biosintéticos. Las reacciones anapleróticas
un. Se han identificado cuatro vías diferentes de fijación de CO2 en microorganismos autótrofos: el
incluyen el ciclo del glioxilato (figura 10.27).
ciclo de Calvin, el ciclo reductor de TCA, el ciclo de acetil-CoA
vía y el ciclo del hidroxipropionato. 10.6 Síntesis de purinas, pirimidinas y nucleótidos
B. La mayoría de los autótrofos utilizan el ciclo de Calvin para fijar CO2. Se puede dividir en un. Las purinas y las pirimidinas son bases nitrogenadas que se encuentran en el ADN, el ARN y otros
tres fases: la fase de carboxilación, la fase de reducción y la fase de regeneración (figura 10.4). moléculas. El nitrógeno es aportado por ciertos aminoácidos que participan en
Se utilizan tres ATP y dos NADPH durante la incorporación de un CO2. Biosíntesis de purinas y pirimidinas. El fósforo lo proporciona el fosfato inorgánico o el fosfato
orgánico.
B. El fósforo se puede asimilar directamente mediante reacciones de fosforilación que forman

10.4 Síntesis de azúcares y polisacáridos
ATP de ADP y Pi . Las fuentes de fósforo orgánico son los sustratos de las fosfatasas que liberan
un. La gluconeogénesis es la síntesis de glucosa y azúcares relacionados a partir de nonglu
fosfato de la molécula orgánica.
precursores de cosa.
C. El esqueleto de purina se sintetiza comenzando con ribosa 5-fosfato e inicialmente produce ácido
B. La glucosa, la fructosa y la manosa son intermediarios gluconeogénicos o se obtienen directamente
inosínico. La biosíntesis de pirimidina comienza con carbamoilo
de ellos; la galactosa se sintetiza con derivados de nucleósido difosfato. Las bacterias y los
se agrega fosfato y aspartato, y ribosa después de que se ha construido el esqueleto (figuras
protistas fotosintéticos sintetizan glucógeno y almidón.
10.28–10.30).
de glucosa de difosfato de adenosina (figura 10.9).
C. La síntesis de peptidoglicano es un proceso complejo que involucra tanto a los derivados UDP 10.7 Síntesis de lípidos
y el transportador de lípidos bactoprenol, que transporta NAG-NAM-pentapéptido un. Los ácidos grasos se sintetizan a partir de acetil-CoA, malonil-CoA y NADPH por
unidades a través de la membrana celular. Los enlaces cruzados se forman por transpeptidación. el sistema de ácido graso sintasa. Durante la síntesis, los intermediarios se unen
(figuras 10.12 y 10.14). a la proteína transportadora de acilo. Los dobles enlaces se pueden agregar de dos maneras diferentes.
D. La síntesis de peptidoglicano se produce en zonas discretas de la pared celular. El péptidoglicano (figura 10.32).
existente es degradado selectivamente por las autolisinas para que se pueda agregar nuevo material. B. Los triacilgliceroles están hechos de ácidos grasos y fosfato de glicerol. El ácido fosfatídico es un
(figura 10.15). intermediario importante en esta vía (figura 10.33).
C. Los fosfolípidos como la fosfatidiletanolamina se pueden sintetizar a partir del ácido fosfatídico
10.5 Síntesis de aminoácidos
formando CDP-diacilglicerol y luego agregando un aminoácido.
un. La adición de nitrógeno a la cadena de carbono es un paso importante en la formación de aminoácidos.
biosíntesis. El amoníaco, el nitrato o el nitrógeno pueden servir como fuente de nitrógeno.
Términos clave
vía acetil-CoA 230 proteína ácido graso 242 Lípido II 232 pirimidina 241
transportadora de acilo (ACP) 242 ácido graso sintasa 242 macromolécula 226 ciclo reductor del TCA 229
adenina 241 gluconeogénesis 230 monómeros 226 ribulosa-1,5-bisfosfato
reacciones anapleróticas 239 glutamato deshidrogenasa 235 nitrato reductasa 236 carboxilasa 229
reducción asimilatoria de nitrato 235 glutamato sintasa 235 glutamina nitrito reductasa 236 autoensamblaje 227 timina 241
reducción asimilatoria de sulfato 238 sintetasa 235 sistema glutamina nitrogenasa 237 transaminasas 235
autolisinas 234 bactoprenol 232 sintetasa-glutamato sintasa (GS- fijación de nitrógeno 236
GOGAT) 235 ciclo del glioxilato nucleósido 241 transpeptidación 233
ciclo de Calvin 228 240 guanina 241 ciclo del 3- nucleótido 241 triacilglicerol 243
carboxisomas 229 hidroxipropionato 229 fosfatasa 241 ácido recambio 225
vías metabólicas centrales 227 citosina fosfatídico 243 metabolitos uracilo 241
241 reducción disimilatoria de sulfato precursores 227 purina 241 uridina difosfato glucosa
238 Lípido I 232 (UDPG) 231
1. Discuta la relación entre catabolismo y anabolismo. ¿Cómo depende un abolismo del de estos portadores e indicar si están implicados principalmente en el anabolismo o el
catabolismo? catabolismo.
2. En el metabolismo, los intermediarios importantes se unen covalentemente a los transportadores, 3. Los transportadores intermediarios tienen un suministro limitado: cuando no se pueden reciclar
como para marcarlos como importantes para que la célula no los pierda de vista. Piense en un debido a un bloqueo metabólico, se producen graves consecuencias. Piense en algunos
hotel que coloca la llave de su habitación en un anillo muy grande. Enumere algunos ejemplos ejemplos de estas consecuencias.
Aprende más
Gottschalk, G. 1986. Metabolismo bacteriano, 2ª ed. Nueva York: Springer-Verlag. McKee, T. y McKee, JR 2003. Bioquímica: La base molecular de la vida, 3d ed. Dubuque, Iowa:
Herter, S.; Farfsing, J.; Gad'on, N.; Rieder, C.; Eisenreich, W.; Bacher, A.; y Fuchs, G. 2001. Fijación McGraw-Hill.
autotrófica de CO2 por Chloroflexus aurantiacus: Estudio de la formación y asimilación de Nelson, DL y Cox, MM 2005. Lehninger: Principios de bioquímica, 4.ª ed.
glioxilatos a través del ciclo del 3-hidroxipropionato. j Nueva York: WH Freeman.
Bacteriol. 183(14):4305–16.
Schweizer, E. y Hofmann, J. 2004. Sintasas de ácidos grasos microbianos de tipo I (FAS): actores
Höltje, J.-V. 2000. Paredes celulares bacterianas. En Enciclopedia de microbiología, 2ª ed., vol. 1, J. principales en una red de sistemas celulares de FAS. Microbiol. mol. Biol. 68(3):501–17 .
Kuykendall, LD; Dadson, RB; Hashem, FM; y Elkan, GH 2000. Fijación de nitrógeno. En Enciclopedia Blanco, SO; Zheng, J.; Zhang, Y.-M.; y Rock, CO 2005. La biología estructural de la biosíntesis de
de microbiología, 2ª ed., vol. 3, J. Lederberg, editor en jefe, 392–406. San Diego: Prensa ácidos grasos tipo II. año Rev. Bioquímica. 74:791–831.
Académica.
Yoon, K.-S.; Hanson, TE; Gibson, JL; y Tabita, FR 2000. Metabolismo autotrófico del CO2. En
Lens, P. y Pol, LH 2000. Ciclo del azufre. En Enciclopedia de microbiología, 2ª ed., vol. 4, J. Enciclopedia de microbiología, 2ª ed., vol. 1, J. Lederberg, editor en jefe, 349–58. San Diego:
Lederberg, editor en jefe, 495–505. San Diego: Prensa Académica. Prensa Académica.

11 Genética microbiana:
Estructura genética, replicación,

y expresión
Este modelo ilustra el ADN de doble cadena. El ADN es el material genético para
procariotas y eucariotas. La información genética está contenida en la secuencia de
pares de bases que se encuentran en el centro de la hélice.
AVANCE
• Los dos tipos de ácido nucleico, el ácido desoxirribonucleico (ADN) y el ácido ribonucleico
(ARN), difieren entre sí en su composición química y estructura. En las células, el ADN
sirve como depósito para metabolismo. Se centran en los procesos que proporcionan la
Información genética. Los capítulos 8 a y10precursores
energía introducen metabólicos
los elementos esenciales
utilizados por de
laslacélulas
microbiota
para
• El flujo de información genética generalmente procede del ADN sintetizar las macromoléculas necesarias para la construcción de cromosomas,
a través del ARN a la proteína. La secuencia de aminoácidos de una proteína refleja ribosomas, paredes celulares y otros componentes celulares. Nosotros
la secuencia de nucleótidos de su ARNm, que es complementaria a Ahora dirijamos nuestra atención a la síntesis de tres macromoléculas
una parte del genoma del ADN.
principales (ADN, ARN y proteínas) a partir de sus constituyentes.
• La replicación del ADN es un proceso muy complejo que involucra una variedad de monómeros. El ADN sirve como molécula de almacenamiento para la genética.
proteínas y una serie de pasos. Está diseñado para operar rápidamente. instrucciones que permiten a los organismos llevar a cabo el metabolismo y
al mismo tiempo que minimiza los errores y corrige los que surgen cuando el ADN
reproducción. El ARN funciona en la expresión de información genética para
es copiado.
que se puedan producir enzimas y otras proteínas. Estas
• Un gen es una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido, Las proteínas se utilizan para construir ciertas estructuras celulares y para hacer
ARNt o ARNr. La mayoría de los genes procarióticos tienen al menos cuatro
otro trabajo celular. El estudio de la síntesis de ADN, ARN,
partes, cada una con funciones diferentes: promotores, líderes, regiones codificantes
y la proteína cae en los reinos de la genética y molecular
y remolques. Cuando un gen dirige la síntesis de un polipéptido, cada aminoácido se
biología.
especifica mediante un codón triplete.
A mediados del siglo XIX, nació la disciplina de la genética a partir de
• En la transcripción, la polimerasa de ARN copia la secuencia apropiada en la hebra molde
el trabajo de Gregor Mendel, quien estudió la herencia de varios rasgos en las
de ADN para producir una cadena complementaria.
plantas de guisantes. A principios del siglo XX, Mendel
Copia de ARN del gen. La transcripción difiere en varios aspectos
El trabajo fue redescubierto y fomentado por científicos que trabajaban con
entre bacterias, arqueas y eucariotas, aunque la base
El mecanismo de acción de la ARN polimerasa es esencialmente el mismo.
moscas de la fruta y plantas como el maíz. El uso de microorganismos como
pronto siguieron modelos para estudios genéticos. Los microorganismos,
• La traducción es el proceso por el cual la secuencia de nucleótidos de
especialmente las bacterias, tienen ventajas significativas como organismos modelo,
El ARNm se convierte en la secuencia de aminoácidos de un polipéptido.
a través de la acción de los ribosomas, tRNAs, aminoacil-tRNA sintetasas, energía
en parte debido a sus características únicas. Una característica importante es
ATP y GTP, y una variedad de factores proteicos. Como en la naturaleza de sus genomas. El término genoma se refiere a todos
En el caso de la replicación del ADN, este complejo proceso está diseñado para el ADN presente en una célula o virus. Los procariotas normalmente tienen uno
minimizar los errores. conjunto de genes; es decir, son haploides (1N). Además, a menudo
Pero la calificación más importante de las bacterias para los estudios genéticos es su tasa de crecimiento extremadamente rápida. . . .
una sola célula de E. coli crecerá durante la noche en una colonia visible que contiene millones de células, incluso bajo
condiciones de crecimiento relativamente pobres. Así, los experimentos genéticos con E. coli suelen durar un día, mientras que
los experimentos con maíz, por ejemplo, toman meses. No es de extrañar que sepamos mucho más sobre el
genética de E. coli que sobre la genética del maíz, aunque llevamos mucho más tiempo estudiando el maíz.
—RF Weaver y PW Hedrick
248 Capítulo 11 Genética microbiana: estructura, replicación y expresión de genes
llevan elementos genéticos extracromosómicos llamados plásmidos. Los y el entorno influye profundamente en qué genes se expresan en un momento
organismos eucarióticos, incluidos los microorganismos eucarióticos, suelen dado. Finalmente, el capítulo 13 contiene información sobre la naturaleza de la
tener dos juegos de genes o son diploides (2N) y rara vez mutación, la reparación del ADN y la genética.
tienen plásmidos. Los genomas virales difieren significativamente de los de recombinación Estos tres capítulos proporcionan los antecedentes
organismos celulares, y su genética y biología molecular son necesarios para comprender el material sobre la tecnología del ADN recombinante
discutido en los capítulos 16–18. Plásmidos (sección 3.5) (capítulo 14) y la genómica microbiana (capítulo 15). Mucho
de la información presentada en los capítulos 11 a 13 será familiar para aquellos
que han tomado un curso de introducción a la genética.
Debido a la importancia de las bacterias como organismos modelo, el énfasis
En este capítulo repasamos algunos de los conceptos más básicos de la genética principal se pone en su genética. La genética de Archaea se analiza en el capítulo
molecular: cómo se almacena y organiza la información genética 20.
en la molécula de ADN, la forma en que se replica el ADN, el gen Aunque el análisis genético moderno comenzó con estudios de frutas
estructura y cómo funcionan los genes (es decir, la expresión génica). Establecido moscas y maíz, la naturaleza de la información genética, la estructura del gen,
sobre la base provista en el capítulo 11, el capítulo 12 considera el código genético y la mutación fueron esclarecidos mediante elegantes
la regulación de la expresión génica. La regulación de la expresión génica es experimentos con bacterias y virus bacterianos. Primero revisaremos algunos de
importante porque vincula el genotipo de un organismo : estos primeros experimentos y luego resumiremos los
el conjunto específico de genes que posee, hasta el fenotipo de un vista de las relaciones entre el ADN, el ARN y las proteínas—a veces
organismo—la colección de características que son observables. llamado el "dogma central", que han guiado gran parte de la moderna
No todos los genes se expresan al mismo tiempo o en el mismo lugar, investigación.
11.1 La aclaración de la estructura del ADN
La composición química básica de los ácidos nucleicos se dilucida en El mismo año en que Franklin comenzó a trabajar en el King's College, el
la década de 1920 gracias a los esfuerzos de PA Levene. A pesar de su mayor El biólogo estadounidense James Watson fue a la Universidad de Cambridge.
contribuciones a la química de los ácidos nucleicos, Levene creyó erróneamente que y conoció a Francis Crick. Aunque Crick era físico, era muy
el ADN era una molécula muy pequeña, probablemente de sólo cuatro nucleótidos de interesado en la estructura y función del ADN, y los dos pronto
largo, compuesta de cantidades iguales de los cuatro diferentes comenzó a trabajar en su estructura. Sus intentos no tuvieron éxito hasta que los
nucleótidos dispuestos en una secuencia fija. En parte debido a su influencia, los datos de Franklin les proporcionaron las pistas necesarias. Su fotografía de ADN
biólogos creyeron durante muchos años que los ácidos nucleicos eran fibroso contenía un patrón cruzado de manchas oscuras,
De estructura demasiado simple para transportar información genética compleja. Ellos lo que demostró que la molécula era helicoidal. Las regiones oscuras en el
llegó a la conclusión de que la información genética debe estar codificada en proteínas Las partes superior e inferior de la fotografía mostraban que las bases de purina y
porque las proteínas son moléculas grandes con aminoácidos complejos pirimidina estaban apiladas una encima de la otra y separadas por 0,34
secuencias que varían entre diferentes proteínas. Nuevo Méjico. Franklin ya había llegado a la conclusión de que los grupos fosfato se encuentran
Como sucede tan a menudo, los nuevos avances en nuestra comprensión de al exterior del cilindro. Finalmente, los datos de rayos X y su determinación de la
La estructura del ADN esperaba el desarrollo de nuevas y significativas técnicas densidad del ADN indicaron que la hélice contenía
analíticas en química. Un desarrollo fue la invención de dos hilos, no tres o más como algunos habían propuesto.
cromatografía en papel por Archer Martin y Richard Synge entre 1941 y 1944. Para Sin hacer ningún experimento, Watson
1948, el químico Erwin Chargaff había empezado a utilizar la cromatografía en papel y Crick construyeron su modelo combinando las reglas de Chargaff
para analizar la composición base. en la composición de bases con los datos de rayos X de Franklin y sus predicciones
de ADN de varias especies. Pronto descubrió que la composición básica del ADN del sobre cómo debería comportarse el material genético. Al construir modelos,
material genético sí variaba entre encontraron que una hélice suave de dos hebras de constante
especie tal como esperaba. Además, la cantidad total de diámetro podría construirse sólo cuando un hidrógeno de adenina
las purinas siempre igualaron la cantidad total de pirimidinas; y el unido a la timina y cuando una guanina se une a la citosina en
relaciones adenina/timina y guanina/citosina siempre fueron 1. Estos el centro de la hélice. Inmediatamente se dieron cuenta de que el doble
Los hallazgos, conocidos como reglas de Chargaff, fueron la clave para comprender estructura helicoidal proporcionó un mecanismo por el cual el material genético
la estructura del ADN. podría ser replicado. Las dos hebras parentales podrían desenrollarse y dirigir la
Otro punto de inflexión en la investigación sobre la estructura del ADN fue síntesis de hebras complementarias, formando así dos nuevas
alcanzado en 1951 cuando Rosalind Franklin llegó al King's College, moléculas de ADN idénticas (figura 11.10). Watson, Crick y
Londres, y se unió a Maurice Wilkins en sus esfuerzos para preparar altamente Wilkins recibió el Premio Nobel en 1962 por sus descubrimientos. Naciones Unidas
fibras de ADN orientadas y estudiarlas mediante cristalografía de rayos X. Por Afortunadamente, Franklin no pudo ser considerado para el premio porque
el invierno de 1952-1953, Franklin había obtenido una excelente radiografía había muerto de cáncer en 1958 a la edad de treinta y siete años.
fotografía de difracción del ADN.
El ADN como Material Genético 249
11.1 EL ADN COMO MATERIAL GENÉTICO ratones muertos. Griffith llamó a este cambio de bacterias no virulentas en
transformación de patógenos virulentos .
Aunque ahora es difícil de imaginar, alguna vez se pensó que el ADN Oswald Avery y sus colegas se dispusieron a descubrir
era una molécula demasiado simple para almacenar información genética qué componente de los neumococos virulentos muertos por calor fue responsable
(Aspectos destacados históricos 11.1). Los primeros trabajos de Fred Griffith en 1928 sobre
de la transformación de Griffith. Estos investigadores destruyeron selectivamente
la transferencia de virulencia en el patógeno Streptococcus pneumo niae, los constituyentes en extractos purificados de virulentos
comúnmente llamado neumococo (figura 11.1), sentó las bases neumococos (células S), usando enzimas que hidrolizarían
para la investigación que demuestra que el ADN era de hecho el material genético. ADN, ARN o proteína. Luego expusieron cepas neumocócicas no virulentas (cepas
Griffith descubrió que si hervía bacterias virulentas y las inyectaba R) a los extractos tratados. Transformación
en ratones, los ratones no se vieron afectados y ningún neumococo pudo de las bacterias no virulentas se bloqueaba solo si se destruía el ADN, lo que
recuperarse de los animales. Cuando inyectó una combinación sugiere que el ADN llevaba la información necesaria para la transformación (figura
de bacterias virulentas muertas y una cepa viva no virulenta, los ratones 11.2). La publicación de estos
fallecido; además, podía recuperar bacterias virulentas vivas de la estudios de Avery, CM MacLeod y MJ McCarty en 1944
Cepa de Cepa de
Colonia Colonia
Efecto Efecto
Tipo de célula Tipo de célula
Cápsula Sin cápsula
Suave (S) Vive Áspero (R) Hígado

tensión tensión
(a) (B)
+ Cepa R viva
muerto por calor

tensión S
muerto por calor
tensión S
Cepas vivas S y R
(C) (D) aislado de muerto
ratón
Figura 11.1 Experimentos de transformación de Griffith. (a) Los ratones murieron de neumonía cuando se les inyectó cepas patógenas de S pneu mococci, que tienen una cápsula y
forman colonias de aspecto liso. (b) Los ratones sobrevivieron cuando se les inyectó una cepa no patógena de R pneu mococci, que carece de cápsula y forma colonias rugosas. (c) La
inyección con cepas de S neumococos muertas por calor no tuvo efecto. (d) Inyección
con una cepa R viva y una cepa S muerta por calor provocaron neumonía en los ratones, y los neumococos de la cepa S viva pudieron aislarse de los ratones muertos.
1 Mezcle las células R y el

extracto de ADN de las
células S (tratadas o no tratadas).
2 Permitir que el ADN sea

absorbido por las células R.
3 Agregue anticuerpos que

hagan que las células R no
transformadas se agreguen.
4 Centrifugar suavemente
para eliminar las células R
agregadas, dejando solo las
células S.
5 Placa de muestra de
la mezcla e incubar.
Células Tipo R Células Células Tipo S Células Tipo S Tipo R Células

tipo R tipo S extracto de ADN tipo R extracto de ADN tipo R extracto de ADN tipo S extracto de ADN
+ + +
ADNasa ARNasa proteasa
Sin ADN ADN destruido sin Transformación de Transformación de ADN

sin transformación transformación de ADN transformación ADN pero no de ARN pero no de proteínas.
Figura 11.2 Algunos experimentos sobre el principio de transformación. Experimentos anteriores realizados por Avery, MacLeod y McCarty habían demostrado
que solo los extractos de ADN de las células S causaban la transformación de las células R en células S. Para demostrar que las moléculas contaminantes en el
extracto de ADN no eran responsables de la transformación, el extracto de ADN de las células S fue tratados con RNasa, DNasa y proteasa y luego mezclados con células R.
Se dejó tiempo para que el ADN de las células S fuera absorbido por las células R y expresado, transformando las células R en células S. Luego, los
anticuerpos (proteínas del sistema inmunitario que reconocen estructuras específicas) que reconocían las células R, pero no las células S, se agregados a
la mezcla. La adición de anticuerpos hizo que las células R (es decir, aquellas células R que no se habían transformado) se agregaran. Estas células R
agregadas se eliminaron de la mezcla mediante centrifugación suave. eran células que habían sido transformadas y ahora eran células S. Sólo el tratamiento
del extracto de ADN de las células S con ADNasa destruyó la capacidad del extracto para transformar las células R.
proporcionó la primera evidencia de que el principio transformador de Griffith ción podría haber durado considerablemente más de lo que hizo. Hershey y
era el ADN y, por lo tanto, que el ADN portaba información genética. Chase hicieron que el ADN del virus fuera radiactivo con 32P o etiquetaron su
Algunos años más tarde (1952), Alfred Hershey y Martha Chase realizaron cubierta proteica con 35S. Mezclaron bacteriófagos radiactivos
varios experimentos que indicaban que el ADN era el material genético de un con Escherichia coli y se incubó la mezcla durante unos minutos.
virus bacteriano llamado bacteriófago T2. Un poco de suerte estuvo involucrada Luego, la suspensión se agitó violentamente en una licuadora para eliminar
en su descubrimiento, ya que el material genético de muchos virus es ARN y cualquier partícula de bacteriófago adsorbida (figura 11.3). Después de la
los investigadores seleccionaron un virus de ADN para sus estudios. ¡Imagínese centrifugación, se determinó la radiactividad en el sobrenadante (donde
la confusión si T2 hubiera sido un virus de ARN! La controversia en torno a la permaneció el virus) frente a las células bacterianas en el sedimento.
naturaleza de la información genética Descubrieron que la mayor parte de la proteína radiactiva se liberaba en el sobrenadante,
El flujo de información genética 251
Proteína 35S
en la capa
35S 35S
ADN Licuadora
tratamiento
(un)
(un)
Proteína
de la cubierta
ADN 32P 32P Licuadora 32P
tratamiento
(B)
Figura 11.3 El experimento de Hershey-Chase. (a) Cuando se infectó E. coli con un fago T2 que contenía proteína 35S , la mayor parte de la radiactividad permaneció
fuera de la célula huésped. (b) Cuando se mezcló un fago T2 que contenía ADN 32P con la bacteria huésped, se inyectó el ADN radiactivo en la célula y se produjeron
fagos. Así, el ADN llevaba la información genética del virus.
mientras que el ADN 32P permaneció dentro de las bacterias. Dado que se inyectó transmitido a su descendencia. La síntesis del ADN duplicado está dirigida por la
material genético y se produjo la progenie T2, el ADN debe haber transportado la molécula original y se denomina replicación. El proceso es catalizado por enzimas
información genética para T2. Fagos virulentos de ADN de doble cadena (sección ADN polimerasa.
17.2) La información genética almacenada en el ADN se divide en unidades llamadas
Los estudios posteriores sobre la genética de virus y bacterias fueron en gran genes. Para que un organismo funcione correctamente y se reproduzca, sus genes
parte responsables del rápido desarrollo de la genética molecular. Además, gran deben expresarse en el momento y lugar adecuados. La expresión génica comienza
parte de la tecnología del ADN recombinante descrita en el capítulo 14 ha surgido con la síntesis de una copia de ARN del gen. Este proceso de síntesis de ARN
de estudios de genética bacteriana y viral. La investigación en genética microbiana dirigida por ADN se denomina transcripción porque la secuencia de bases de ADN
ha tenido un profundo impacto en la biología como ciencia y en la tecnología que se escribe en una secuencia de bases de ARN. Las enzimas ARN polimerasa
afecta la vida cotidiana. catalizan la transcripción. Aunque el ADN tiene dos cadenas complementarias, solo
se transcribe una cadena, la cadena molde, de un gen particular. Si se transcribieran
1. Definir genoma, genotipo y fenotipo. ambas cadenas de un solo gen, se producirían dos moléculas de ARN diferentes y
2. Resuma brevemente los experimentos de Griffith; Avery, MacLeod y se produciría una confusión genética. Sin embargo, diferentes genes pueden estar
McCarty; y Hershey y Chase. ¿Qué mostró cada uno y por qué estos codificados en cadenas opuestas, por lo que ambas cadenas de ADN pueden servir
experimentos fueron importantes para el desarrollo de la genética microbiana? como moldes para la síntesis de ARN dependiendo de la orientación del gen en el
ADN. La transcripción produce tres tipos diferentes de ARN según el gen que se
transcribe. Estos son el ARN mensajero (ARNm), el ARN de transferencia (ARNt) y
el ARN ribosomal (ARNr) (figura 11.4b).
11.2 EL FLUJO DE INFORMACIÓN GENÉTICA
Los biólogos han reconocido durante mucho tiempo una relación entre el ADN, el
ARN y las proteínas, y este reconocimiento ha guiado una gran cantidad de
investigaciones en las últimas décadas. La vía del ADN al ARN y del ARN a la Durante la última fase de la expresión génica, la traducción, la información
proteína se conserva en todas las formas de vida y a menudo se la denomina dogma genética en forma de una secuencia de bases de ARN en un ARN mensajero
central. La figura 11.4 ilustra dos conceptos esenciales: el flujo de información (ARNm) se decodifica y se utiliza para controlar la síntesis de un polipéptido. Así, la
genética de una generación a la siguiente (replicación); y el flujo de información secuencia de aminoácidos de una proteína es un reflejo directo de la secuencia de
dentro de una sola célula, un proceso también llamado expresión génica. bases en el ARNm. A su vez, la secuencia de nucleótidos del ARNm es
complementaria a una porción del genoma del ADN. Además del ARNm, la
La transmisión de información genética de una generación a la siguiente se traducción también requiere las actividades del ARN de transferencia y el ARN
muestra en la figura 11.4a. El ADN funciona como una molécula de almacenamiento, ribosómico. Por lo tanto, los tres tipos de ARN están involucrados en la producción
que contiene información genética durante toda la vida de un organismo celular y de proteínas, según el código presente en el ADN.
permite que esa información se duplique y se reproduzca.
11.3 ESTRUCTURA DEL ÁCIDO NUCLEICO
Los ácidos nucleicos, ADN y ARN, son polímeros de nucleótidos (figura 11.5) unidos
ADN
entre sí por enlaces fosfodiéster (figura 11.6a).
Sin embargo, el ADN y el ARN difieren en cuanto a las bases nitrogenadas.
contienen, el componente de azúcar de sus nucleótidos, y
ya sean de doble o simple cadena. desoxirribonucleico
Replicación del ADN Transcripción de ADN
ácido (ADN) contiene las bases adenina, guanina, citosina y
timina El azúcar que se encuentra en los nucleótidos es desoxirribosa, y
Las moléculas de ADN suelen ser de doble cadena. Ácido ribonucleico
(ARN), por otro lado, contiene las bases adenina, guanina,
citosina y uracilo (en lugar de timina, aunque el ARNt contiene
una forma modificada de timina). Su azúcar es la ribosa y la mayor parte del ARN
Las moléculas son monocatenarias. La estructura del ADN y el ARN es
ARNt* ARNm ARNr se describe con más detalle a continuación.
Traducción de ARNm
Estructura del ADN
Ribosoma El descubrimiento de que el ADN es el material genético puso en marcha una
(ARNr + proteína)
competencia feroz para determinar la estructura precisa del ADN
ARNt
(Históricos Destacados 11.1). Las moléculas de ADN son muy grandes y
generalmente se componen de dos cadenas de polinucleótidos enrolladas entre sí para
formar una doble hélice de 2,0 nm de diámetro (figura 11.6 y
figura 11.7). Cada cadena contiene purina y pirimidina desoxirribonucleósidos unidos
herencia de
por enlaces fosfodiéster (figura 11.6a).
ADN en células hijas
Es decir, una molécula de ácido fosfórico forma un puente entre un
ARNm 3'-hidroxilo de un azúcar y 5'-hidroxilo de un azúcar adyacente.

Las bases de purina y pirimidina están unidas al carbono 1ÿ del
azúcares desoxirribosa y se extienden hacia la mitad del cilindro
Proteína formado por las dos cadenas. Están apilados uno encima del otro
en el centro, un par de bases cada 0,34 nm. La purina adenina (A)
de una hebra siempre se empareja con la pirimidina timina (T) de
Expresión de ADN la hebra opuesta por dos enlaces de hidrógeno. La purina guanina
para la estructura y
(G) se empareja con la citosina (C) por tres enlaces de hidrógeno. Este AT y
funciones de la celula
El apareamiento de bases GC significa que las dos hebras en una doble hélice de ADN
son complementarias. En otras palabras, las bases en una hebra
(a) (B)
emparejarse con los del otro de acuerdo con reglas específicas de emparejamiento de
*Los tamaños del ARN no están a escala: el ARNt y el ARNm están agrandados a bases. Debido a que las secuencias de bases en estas hebras codifican
mostrar detalles.
información genética, se ha dedicado un esfuerzo considerable a determinar las secuencias
de bases de ADN y ARN de muchos organismos, incluida una variedad de microbios.
Figura 11.4 Resumen del flujo de información genética
Genómica microbiana (capítulo 15)
en Celdas. El ADN sirve como almacén de información genética.
Las dos cadenas de polinucleótidos encajan entre sí como las piezas
(a) Durante la reproducción celular, el ADN se replica y pasa a
en un rompecabezas debido al apareamiento de bases complementarias. Inspección
células de progenie. (b) Para funcionar correctamente, una célula debe expresar
de la figura 11.6b, c, que representa la forma B de ADN (probablemente la
la información genética almacenada en el ADN. Esto se logra cuando
forma más común en las células), muestra que las dos hebras no están posicionadas
el código genético se transcribe en moléculas de ARNm. La información en el
directamente una frente a la otra en el cilindro helicoidal. Por lo tanto, cuando los hilos
ARNm luego se traduce en proteína.
se retuercen unos sobre otros, se forma un amplio surco principal .
y el surco menor más estrecho está formado por la columna vertebral. cada base
par gira 36° alrededor del cilindro con respecto a los pares adyacentes, por lo que
que hay 10 pares de bases por vuelta de la espiral helicoidal. Cada turno
1. Describir la relación general entre ADN, ARN y proteína.
de la hélice tiene una longitud vertical de 3,4 nm. La hélice es de mano derecha, es
2. ¿Cuáles son los productos de la replicación, transcripción y traducción?
decir, las cadenas giran en sentido contrario a las agujas del reloj a medida que se acercan.
3. Hasta hace relativamente poco tiempo, se utilizaba la hipótesis de “un gen, una proteína”
un espectador mirando hacia abajo en el eje longitudinal. Las dos columnas son
para definir el papel de los genes en los organismos. Consulte la figura 11.4 y explique
antiparalelas, lo que significa que corren en direcciones opuestas con respecto a la
por qué esta descripción de un gen ya no se aplica.
orientación de sus azúcares. Un extremo de cada hebra tiene
Replicación de ADN 253
Purina y ribosa o
bases de pirimidina desoxirribosa NH2 NH2 NH2
norte norte
norte
norte
norte norte
nucleósido
o norte norte 9 N norte 9 O norte norte 9
ÿ ÿ
desoxinucleósido Ácido fosfórico 5 5

HOCH2 O HOCH2O _ OO PAGS
CH2 O
ÿ
ÿ ÿ
5 ÿ
ÿ
ÿ ÿ
1 4ÿ32
ÿ
ÿ
1 O 4
ÿ
ÿ ÿ
1
43 2 32
Nucleótido o desoxinucleótido
OH OH OH OH
ÿ
Ácido nucleico (ARN, ADN) adenosina 2 -desoxiadenosina 2ÿ -desoxiadenosina monofosfato
(a) (B)
Figura 11.5 La composición de los ácidos nucleicos. (a) Un diagrama que muestra las relaciones de varios componentes de ácido nucleico. La combinación de una base de
purina o pirimidina con ribosa o desoxirribosa da un nucleósido (un ribonucleósido o desoxirribonucleósido). un nucleótido
contiene un nucleósido y una o más moléculas de ácido fosfórico. Los ácidos nucleicos resultan cuando los nucleótidos se conectan entre sí en cadenas de polinucleótidos. (b)
Ejemplos de nucleósidos, adenosina y 2ÿ-desoxiadenosina, y el nucleótido 2-desoxiadenosina monofosfato.
Los carbonos de los azúcares nucleósidos y nucleótidos se indican mediante números con números primos.
un grupo 5ÿ-hidroxilo expuesto, a menudo con fosfatos unidos, complejo proteico, se llama nucleosoma. ADN suavemente aislado
mientras que el otro extremo tiene un grupo 3'-hidroxilo libre (figura 11.6a). Si de la cromatina parece una sarta de cuentas. El tramo de ADN
se examina un extremo de una doble hélice, el extremo 5 'de una hebra y entre las perlas o nucleosomas, la región enlazadora, varía en
el extremo 3ÿ del otro son visibles. En una dirección dada, una hebra es longitud de 14 a más de 100 pares de bases. La histona H1 se asocia con
orientada de 5ÿ a 3ÿ y la otra, de 3ÿ a 5ÿ (figura 11.6). las regiones enlazadoras para ayudar al plegamiento del ADN en estructuras más complejas
estructuras de cromatina (figura 11.9b). Cuando el plegamiento alcanza un máximo, la
cromatina toma la forma de los cromosomas visibles.
Estructura del ARN visto en células eucarióticas durante la mitosis y la meiosis.
El ARN difiere químicamente del ADN y, por lo general, es único. Aunque las Archaea comparten el estilo procariótico de células
trenzado en lugar de doble cadena. Sin embargo, una cadena de ARN organización con las Bacterias, hay algunas diferencias importantes. Hasta ahora, todos
puede enrollarse sobre sí mismo para formar una estructura en forma de horquilla con los genomas de arqueas examinados son circulares. En
apareamiento de bases complementarias y organización helicoidal. El tres muchas arqueas, el ADN forma complejos con proteínas histonas. Me gusta
diferentes tipos de ARN: ARN mensajero, ARN ribosómico y Las histonas eucarióticas, las histonas arqueales forman complejos de nucleoproteínas
ARN de transferencia: difieren entre sí en función, sitio de síntesis en células eucarióticas llamados nucleosomas arqueales. En arqueas, tetrámeros de
y estructura. histonas (es decir, cuatro proteínas histonas) interactúan con alrededor de 60 bases
empareja cada uno, protegiendo el ADN de las nucleasas que digieren el ADN.
La estructura de las histonas arqueales y su interacción con el ADN.
sugiere fuertemente que los nucleosomas arqueales son evolutivamente
La organización del ADN en las células
similar a los nucleosomas eucarióticos formados por ADN y sus tonos H3 y H4.
Aunque el ADN existe como una doble hélice en todas las células, su organización
Evolución microbiana (sección 19.1)
difiere entre las células en los tres dominios de la vida. El ADN está organizado
en forma de círculo cerrado en todas las Archaea y la mayoría de las bacterias. Esta
1. ¿Qué son los ácidos nucleicos? ¿Cómo difieren el ADN y el ARN en estructura?
la doble hélice circular se retuerce aún más en ADN superenrollado (figura 11.8). En
2. Describe con cierto detalle la estructura de la doble hélice del ADN. ¿Qué hace
las bacterias, el ADN está asociado con proteínas básicas que
¿Quiere decir que las dos hebras son complementarias y antiparalelas?
parecen ayudar a organizarla en una estructura enrollada similar a la cromatina.
3. ¿Qué son las histonas y los nucleosomas? Describir la forma en que el ADN es
El ADN está mucho más organizado en la cromatina eucariótica.
organizados en los cromosomas de bacterias, arqueas y eucariotas.
y está asociado con una variedad de proteínas, la más prominente de
que son las histonas. Son pequeñas proteínas básicas ricas en
aminoácidos lisina y/o arginina. Hay cinco tipos de tonos his en casi todas las células
eucariotas estudiadas: H1, H2A, H2B, H3,
11.4 REPLICACIÓN DEL ADN
y H4. Ocho moléculas de histonas (dos de cada una de H2A, H2B, H3 y
H4) forman un elipsoide de unos 11 nm de largo y de 6,5 a 7 nm de diámetro (figura La replicación del ADN es un proceso extraordinariamente importante y complejo.
11.9a). El ADN se enrolla alrededor de la superficie del elipsoide. proceso del que depende toda la vida. Se requieren al menos 30 proteínas para replicar
aproximadamente 1 3/4 vueltas o 166 pares de bases antes de continuar el cromosoma de E. coli (tabla 11.1). Presumiblemente, gran parte de la complejidad es
al siguiente Esta combinación de histonas más ADN o nucleo necesaria para la precisión en la copia
H
7
H norte O NUEVA HAMPSHIRE H
5
6
45
N
GNN H 3 6C2 1 H
94
norte norte
2
3 NUEVA HAMPSHIRE O
Azúcar
H
Fosfato pares de bases Fosfato

de azúcar nitrogenadas de azúcar
5´ÿ 3ÿ
P 3
ÿ
Enlace fosfodiéster
OH pares de bases
5ÿ
4
ÿ
D GRAMO C D
1ÿ
ÿ
PAGS 2 5ÿ
PAGS
Fosfato
3ÿ
PAGS
T A
5ÿ
D D 4ÿ Esqueleto de fosfato de
D 1ÿ Desoxirribosa con azúcar
PAGS 3ÿ
número de carbonos
C GRAMO
PAGS
2ÿ
D D C Citosina
PAGS
(pirimidina)
GRAMO C PAGS
Guanina
D D
GRAMO
(purina)
PAGS Surco
T PAGS T Timina
D A (pirimidina)
menor
D
PAGS
A adenina
C GRAMO
PAGS
(purina) surco
D D mayor
Enlace de
PAGS hidrógeno
A T PAGS
Enlace 5ÿ 3ÿ
5ÿ covalente
3ÿ (b)
D
D (b)
3ÿ
5ÿ
OH PAGS
(c)
(c)
H norte NUEVA HAMPSHIRE O CH3
NA NN H T H
norte norte
H O Figura 11.6 Estructura del ADN. El ADN suele ser una molécula de doble cadena. (a) Un
Azúcar
modelo esquemático, no helicoidal. En cada hebra, las moléculas de ácido fosfórico se esterifican al
carbono 3ÿ de un azúcar desoxirribosa (azul) y al carbono 5ÿ del azúcar adyacente. Las dos hebras
se mantienen unidas por enlaces de hidrógeno (líneas discontinuas). Los pares de bases adenina-
timina están unidos por dos enlaces de hidrógeno y los pares de bases guanina-citosina tienen tres
(a) enlaces de hidrógeno. Debido al apareamiento de bases específico, la secuencia de bases de una
(a)
hebra determina la secuencia de la otra. Las dos hebras son antiparalelas, es decir, los esqueletos
corren en direcciones opuestas como lo indican las dos flechas, que apuntan en la dirección 5ÿ a 3ÿ.
(b) Modelo simplificado que destaca la disposición antiparalela y los surcos mayor y menor. ( c )
Modelo de relleno de espacio de la forma B de ADN. Tenga en cuenta que el esqueleto de fosfato de
azúcar gira en espiral alrededor del exterior de la hélice y los pares de bases están incrustados en el
interior.
(a) (B)
Figura 11.8 Formas de ADN. (a) La doble hélice del ADN de la mayoría de los
procariotas tiene forma de círculo cerrado. (b) Las hebras circulares de ADN, ya
Figura 11.7 Estructura de la doble hélice del ADN. Vista final de una enrolladas en una doble hélice, se retuercen por segunda vez para producir
doble hélice que muestra la columna vertebral exterior y las bases superenrollamientos.
apiladas en el centro del cilindro. Los oxígenos del anillo ribosa son rojos.
El par de bases más cercano, un par de bases AT, está resaltado en blanco.
(a)
Figura 11.9 Organización interna y función del nucleosoma. (a) La

partícula central del nucleosoma es un octámero de histona rodeado por la hélice
de ADN de 146 pares de bases (marrón y turquesa).
El octámero es una estructura en forma de disco compuesta por dos dímeros H2A-
H2B y dos dímeros H3-H4. Las ocho proteínas histonas tienen un color diferente:
H1
azul, H3; verde, H4; amarillo, H2A; y rojo, H2B.
Las proteínas histonas interactúan con la columna vertebral del surco menor ADN
del ADN. La doble hélice del ADN rodea el octámero de histonas en un camino
helicoidal a la izquierda. (b) Una ilustración de cómo una cadena de nucleosomas,
cada uno asociado con una histona H1, podría organizarse para formar una fibra
de cromatina altamente superenrollada. Los nucleosomas se dibujan como cilindros.
(B)
Cuadro 11.1 Componentes de la maquinaria de replicación de E. coli
Proteína Función
Proteína ADNA Inicio de la replicación; se une al origen de replicación (oriC)
Proteína ADNB Helicasa (5ÿÿ3ÿ); rompe los enlaces de hidrógeno que mantienen unidas dos hebras de doble hélice;
promueve la actividad de la ADN primasa; involucrado en el ensamblaje de primosomas
ADN girasa Alivia el superenrollamiento del ADN producido cuando las helicasas separan las hebras de ADN; coordinados
moléculas hijas en etapas finales de replicación
Proteínas SSB Se unen al ADN monocatenario después de que las helicasas separan las hebras
DnaC proteína nÿ cargador de helicasa; ayuda a dirigir la proteína DnaB (helicasa) a la plantilla de ADN
proteína n proteína Componente del primosoma; helicasa (3ÿÿ5ÿ)
nÿ proteína ensamblaje de primosomas; componente del primosoma
Ensamblaje de primosomas
Yo proteína Ensamblaje de primosomas
ADN primasa Síntesis de cebador de ARN; componente del primosoma
Holoenzima ADN polimerasa III Complejo de unos 20 polipéptidos; cataliza la mayor parte de la síntesis de ADN que ocurre durante
replicación del ADN; tiene actividad de exonucleasa 3ÿÿ5ÿ (corrección de pruebas)
ADN polimerasa I Elimina los cebadores de ARN; llena los vacíos en el ADN formados por la eliminación del cebador de ARN
Ribonucleasa H Elimina los cebadores de ARN
ADN ligasa Sella el ADN cortado, uniendo los fragmentos de ADN
Proteína de unión al sitio terminal de replicación del ADN Terminación de la replicación
Topoisomerasa IV Segregación de cromosomas al completarse la replicación del ADN.
ADN. Sería peligroso que un organismo cometiera muchos errores durante la 5ÿ 3ÿ
replicación porque eso sin duda sería letal. En hélice parental

9 o 10 10 C.G.
hecho, E. coli comete errores con una frecuencia de sólo 10
6 ejército de reserva
por par de bases replicadas (o aproximadamente uno en un millón [10] por gen
GRAMO
por generación). A pesar de su complejidad y precisión, la replicación

C
es muy rapido En bacterias, las tasas de replicación se acercan a 750 a 1000
ejército de reserva
pares de bases por segundo. La replicación eucariótica es más lenta, alrededor de 50

ejército de reserva
a 100 pares de bases por segundo.

CG
Durante la replicación del ADN, las dos hebras de la doble hélice ejército de reserva
A
están separados; cada uno sirve entonces como plantilla para la síntesis de
EN
una hebra complementaria de acuerdo con las reglas de apareamiento de bases. Cada
C GRAMO
de las dos moléculas de ADN de la progenie consiste en una nueva hebra horquilla de replicación
y una hebra vieja. Por lo tanto, la replicación del ADN es semiconservadora. C GRAMO
(figura 11.10). Watson y Crick sugirieron semiconservador ejército de reserva ejército de reserva
la replicación del ADN solo un mes después de que publicaran su artículo sobre la CG CG
estructura del ADN en abril de 1953; investigaciones posteriores confirmaron su GRAMO GRAMO
hipótesis y dilucidaron los detalles de la replicación

ejército de reserva ejército de reserva
observado en procariotas y eucariotas.

En esta sección, primero discutimos los diversos patrones de ADN.

EN EN
replicación observada en células y virus. Entonces consideraremos C.G. C.G.
Réplicas
el mecanismo de replicación del ADN en E. coli, comenzando con una C C
examen de la maquinaria de replicación y luego eventos en el

horquilla de replicación.
3ÿ CG 5ÿ 3ÿ CG 5ÿ
De los padres Nuevo nuevo De los padres
Patrones de síntesis de ADN

Los patrones de replicación son algo diferentes en Bacteria, Archaea, Figura 11.10 Replicación de ADN semiconservadora. La horquilla de replicación
y eucariotas. Por ejemplo, cuando se copia el cromo del ADN circular de E. coli , la del ADN que muestra la síntesis de dos cadenas de progenie.
replicación comienza en un solo punto, el Las hebras recién sintetizadas son de color púrpura. Cada copia contiene una nueva
origen. La síntesis ocurre en la horquilla de replicación, el lugar en y una hebra vieja. Este proceso se llama replicación semiconservadora.
Origen de la
replicación
Tenedor
ter
Sitio donde
termina la
replicación
estructura theta
(a) Replicación cromosómica bacteriana (a) Replicación

cromosómica bacteriana
Tenedor
Tenedor
0,25 micras
(b) Micrografía de un cromosoma de E. coli durante la replicación (b) Micrografía de un

cromosoma de E. coli durante la replicación
Figura 11.11 Replicación bidireccional del cromosoma de E. coli. (a) La replicación comienza en un sitio del cromosoma, llamado origen de replicación. Dos horquillas
de replicación avanzan en direcciones opuestas desde el origen hasta que se encuentran en un sitio especial llamado sitio de terminación de la replicación (ter). La estructura
theta es un intermedio comúnmente observado del proceso. (b) Una autorradiografía de un cromosoma de E. coli en replicación; aproximadamente un tercio del cromosoma se
ha replicado. A la derecha hay una representación esquemática del cromosoma.
El ADN de los padres es azul; las nuevas hebras de ADN son de color púrpura, la flecha representa la dirección del movimiento de la horquilla.
en el que la hélice del ADN se desenrolla y las hebras individuales se replican. Se produce un patrón diferente de replicación del ADN durante la
Dos horquillas de replicación se mueven hacia afuera desde el origen hasta que conjugación de E. coli , un tipo de mecanismo de intercambio genético observado
copian todo el replicón, esa parte del genoma que contiene un origen y se en muchas bacterias. El patrón se denomina replicación de círculo rodante y
replica como una unidad. Cuando las horquillas de replicación se mueven también se observa durante la replicación de plásmidos y la reproducción de
alrededor del círculo, se forma una estructura con la forma de la letra griega algunos virus (p. ej., el fago lambda). Durante la replicación en círculo rodante
theta ( ) (figura 11.11). Finalmente, dado que el cromosoma bacteriano es un (figura 11.12), una hebra se mella y el extremo 3'-hidroxilo libre se extiende
solo replicón, las horquillas se encuentran en el otro lado y se liberan dos mediante enzimas de replicación. A medida que el extremo 3ÿ se alarga mientras
cromosomas separados. Hasta hace poco tiempo se pensaba que todos los el punto de crecimiento rueda alrededor de la plantilla circular, el extremo 5ÿ de
procariotas tenían un único origen de replicación. Sin embargo, dos miembros la hebra se desplaza y forma una cola cada vez más larga, muy similar a como
del género archaeal Sol folobus tienen más de un origen. se desplaza la cáscara de una manzana con un cuchillo como se hace con una manzana.
La cola monocatenaria se puede convertir en bicatenaria
Cromosoma Cromátidas hermanas
Origen
Origen
Mella
Origen
Centrómero
Origen
punto de crecimiento
3ÿ Origen
5ÿ
Hebra
desplazada
Antes de la fase S Durante la fase S Fin de la fase S
(a) replicación del ADN desde múltiples orígenes de replicación
3ÿ
5ÿ
La hebra desplazada tiene casi 1 unidad de longitud
5ÿ
La hebra desplazada es > 1 unidad de longitud
(b) Una micrografía de un cromosoma eucariótico en replicación
3
ÿ
Síntesis de cadenas complementarias 3ÿ
Figura 11.13 La replicación del ADN eucariótico. La replicación se inicia
5ÿ
cada 10 a 100 my las horquillas de replicación se alejan del origen. El ADN
recién copiado está en azul.
Figura 11.12 Replicación en círculo rodante. Se genera una cola de cadena

sencilla, a menudo compuesta por más de una copia del genoma, y se puede Claramente, muchas horquillas de replicación deben copiar el ADN eucariótico
convertir a la forma de cadena doble mediante la síntesis de una cadena simultáneamente para que la molécula pueda duplicarse en un período
complementaria. El "extremo libre" de la cadena del círculo rodante relativamente corto. Por lo tanto, muchos replicones están espaciados de tal
probablemente esté unido a la primosoma. OH 3 'es el 3'-hidroxilo y P 5' es el manera que hay un origen cada 10 a 100 m a lo largo del ADN. Las bifurcaciones
grupo 5'-fosfato creado cuando se corta la cadena de ADN. de replicación se mueven hacia afuera desde estos sitios y eventualmente se
encuentran con bifurcaciones que han estado copiando el tramo de ADN adyacente (figura 11.13).
De esta manera, una molécula grande se copia rápidamente.
se forman por síntesis de cadenas complementarias. Este mecanismo es Otra razón del diferente patrón de replicación en los eucariotas es que sus
particularmente útil para los virus porque permite la producción rápida y continua cromosomas son lineales. Los cromosomas lineales presentan a las células un
de muchas copias del genoma a partir de un solo evento de iniciación. dilema: cómo replicar los extremos de los cromosomas. Sin embargo, la razón de
El patrón de replicación cromosómica en los eucariotas difiere del de los este dilema y los mecanismos por los que se resuelve solo pueden entenderse
procariotas en parte porque el ADN eucariota es mucho más largo que el ADN comprendiendo primero los mecanismos de replicación del ADN. Por lo tanto, lo
procariota. Por ejemplo, el ADN de E. coli tiene una longitud de unos 1300 m, consideraremos primero y luego volveremos al problema de replicar los extremos
mientras que los 46 cromosomas del núcleo humano tienen una longitud total de de los cromosomas lineales.
1,8 m (casi 1400 veces más).
reacción de polimerasa de ADN Enzima central (ÿÿÿ)

abrazadera deslizante ÿ
ADN polimerasa
n[dATP, dGTP, dCTP, dTTP] ADN + nPPi
plantilla de ADN
El mecanismo de crecimiento de la cadena.

• •
• •
• •
5ÿ
ÿ
O O
5ÿ
CH2 O CH2 O
T T ADN
helicasa
O O
–
OP O– O OP complejo ÿ
O O
CH2 CH2
O A O A
3ÿ
OH O
O O O –
O OP
– ÿ
O PAGS
O PO PO CH2 + PPi
O
O C
O– O– O–
CH2
O C
OH
OH
Figura 11.15 Holoenzima de ADN polimerasa III. La
3ÿ extremo de la cadena
holoenzima consta de dos enzimas centrales (tres subunidades
, , , cada una; no se muestra) y varias otras subunidades. Los dos tau ( )
Figura 11.14 La reacción de la ADN polimerasa y su
Las subunidades conectan las dos enzimas centrales a un gran complejo
mecanismo. El mecanismo implica un ataque nucleofílico por parte
llamado complejo gamma ( ). Cada enzima central está asociada con una
del hidroxilo de la desoxirribosa terminal 3ÿ sobre el grupo alfa
abrazadera deslizante, que ata una plantilla de ADN a cada núcleo.
fosfato del sustrato de nucleótidos (en este ejemplo, la adenosina
ataca al trifosfato de citidina).
Para que las polimerasas de ADN catalicen la síntesis de una

La maquinaria de replicación cadena complementaria de ADN, se necesitan tres cosas: (1) una
Debido a que la replicación del ADN es tan esencial para los organismos, plantilla, leída en la dirección 3' a 5', que dirige la síntesis de una cadena
se ha dedicado un gran esfuerzo a comprender su mecanismo. La de ADN complementaria; (2) un cebador (p. ej., una cadena de ARN o
replicación del ADN de E. coli probablemente se comprende mejor y es una cadena de ADN) para proporcionar un grupo 3'-hidroxilo libre al que
el foco de atención en esta discusión. Se cree que el proceso general en se pueden agregar nucleótidos (figura 11.14); y (3) dNTP. E. coli tiene
otras bacterias, Archaea y eucariotas es similar. cinco enzimas polimerasas de ADN diferentes (DNA Pol IV).
Las enzimas llamadas ADN polimerasa catalizan la síntesis de ADN. La ADN polimerasa III juega el papel principal en la replicación, aunque
Todas las enzimas polimerasas de ADN conocidas catalizan la síntesis es asistida por la ADN polimerasa I.
de ADN en la dirección 5' a 3'. Esto se debe a que el grupo 3ÿ-hidroxilo La holoenzima de la ADN polimerasa III es un complejo de 10
de la desoxirribosa del nucleótido al final de la cadena de ADN en proteínas que incluye dos enzimas centrales, cada una compuesta por
crecimiento ataca al alfa fosfato (el fosfato más cercano al carbono 5ÿ) tres subunidades de proteínas (figura 11.15). Como veremos, las
del desoxinucleósido trifosfato que se va a incorporar (figura 11.14). enzimas centrales son responsables de catalizar la síntesis de ADN y
Esto da como resultado la formación de un enlace fosfodiéster; la energía corregir el producto para garantizar la fidelidad de la replicación. Un
necesaria para formar este enlace covalente la proporciona la liberación dímero de otra subunidad (tau) conecta las dos enzimas centrales.
del difosfato terminal (los fosfatos beta y gamma) del nucleótido que se Asociada con cada enzima central hay una subunidad llamada abrazadera
agrega a la cadena en crecimiento. deslizante. Esta proteína une la enzima central a una hebra de la
Por lo tanto, los desoxinucleósidos trifosfatos (dNTP: dATP, dTTP, molécula de ADN. Otro complejo de proteínas, llamado complejo, es
dCTP, dGTP) sirven como sustratos de la ADN polimerasa, mientras responsable de cargar la abrazadera deslizante en el ADN. Debido a
que los desoxinucleósidos monofosfatos (dNMP: dAMP, dTMP, dCMP, que hay dos enzimas centrales, ambas cadenas de ADN están unidas
dGMP) se incorporan a la cadena en crecimiento. por una sola holoenzima de ADN polimerasa III.
Síntesis de la cadena principal ADN topoisomerasa II

la hélice (así como la separación rápida de dos hebras de una cuerda puede
(ADN polimerasa III) (ADN girasa) provocar que la cuerda se anude o se enrolle), y estos pueden impedir la
3ÿ replicación si no se eliminan. Las topoisomerasas cambian la estructura del
5ÿ
ADN al romper transitoriamente una o dos hebras de tal manera que la
Movimiento de la 5ÿ
Hebra
rezagada horquilla de replicación 3ÿ
secuencia de nucleótidos del ADN permanece inalterada a medida que cambia
3ÿ su forma (p. ej., una topoisomerasa puede anudar o deshacer un nudo en una
5ÿ ADN
hebra de ADN). La ADN girasa es una topoisomerasa importante en E. coli.
helicasa
cebador de Una vez que se prepara la plantilla, se puede sintetizar el cebador que
ARN de anterior SSB ADN
necesita la ADN polimerasa III. Una polimerasa especial llamada primasa
Fragmento de Okazaki primasa
cebador de ARN
sintetiza una cadena corta de ARN, generalmente de alrededor de 10
(a) nucleótidos de largo y complementaria al ADN; esto sirve como base (figura
11.16). El ARN se usa como cebador porque, a diferencia de la ADN polimerasa,
las ARN polimerasas (como la primasa) pueden iniciar la síntesis de ARN sin
agregar un nucleótido a un 3'-OH existente. Parece que la primasa requiere la
Fragmentos de Okazaki asistencia de varias otras proteínas, y el complejo de la primasa y sus proteínas
accesorias se denomina primosoma (tabla 11.1). El primosoma es otro
componente importante del replisoma.
Síntesis de cadena retrasada
(ADN polimerasa III) Debido a que las enzimas ADN polimerasa deben sintetizar ADN en la
(B)
dirección 5' a 3', solo una de las cadenas, llamada cadena principal, puede
sintetizarse continuamente en su extremo 3' a medida que el ADN se desenrolla
(figura 11.16). La otra cadena, llamada cadena rezagada, no puede extenderse
en la misma dirección porque no hay 3'-OH libre al que se pueda agregar un
nucleótido. Como resultado, la hebra rezagada se sintetiza de forma discontinua
Fragmentos de Okazaki
en la dirección 5ÿ a 3ÿ como una serie de fragmentos, llamados fragmentos
de Okazaki en honor a su descubridor, Reiji Okazaki. La síntesis discontinua
(C) ocurre cuando la primasa agrega muchos cebadores de ARN a lo largo de la
cadena rezagada monocatenaria. Luego, la ADN polimerasa III extiende estos
Figura 11.16 Replicación del ADN bacteriano. Un diagrama cebadores con ADN para formar fragmentos cortos. Estos fragmentos
general de la replicación del ADN en E. coli. Se ilustra una única finalmente se unen para formar una hebra completa; los pasos de este proceso
horquilla de replicación que muestra la síntesis tanto de la cadena principal se detallan a continuación. Por lo tanto, mientras que la hebra principal requiere
como de la cadena retrasada. La hebra rezagada se sintetiza en fragmentos solo un cebador de ARN (y solo un primosoma) para iniciar la síntesis, la hebra
cortos llamados fragmentos de Okazaki. Se requiere un nuevo cebador para rezagada tiene muchos cebadores de ARN (y primosomas) que finalmente
la síntesis de cada fragmento de Okazaki. deben eliminarse. Los fragmentos de Okazaki tienen una longitud de
aproximadamente 1.000 a 2.000 nucleótidos en bacterias y aproximadamente
En E. coli, la replicación comienza cuando una colección de proteínas 100 nucleótidos en células eucarióticas.
DnaA se une a secuencias de nucleótidos específicas (cajas de DnaA) dentro
del origen de la replicación. Las proteínas DnaA hidrolizan el ATP para romper
o "fundir" los enlaces de hidrógeno entre las cadenas de ADN, lo que hace que Eventos en la horquilla de replicación
esta región localizada sea monocatenaria. Aunque esto proporciona la plantilla
Los detalles de la replicación del ADN se describen en un diagrama de la
inicial para la replicación, la ADN polimerasa III no puede por sí misma
horquilla de replicación (figura 11.17). En E. coli, la replicación del ADN se
desenrollar y mantener el ADN monocatenario.
inicia en nucleótidos específicos denominados locus oriC (por el origen de la
Estas actividades son proporcionadas por la acción de otras proteínas, muchas
replicación cromosómica). Aquí presentamos la replicación como una serie de
de las cuales se encuentran en el replisoma, un enorme complejo de proteínas
pasos discretos, pero debe recordarse que la síntesis es extremadamente
que incluye la holoenzima ADN polimerasa III. Estas otras proteínas incluyen
rápida y ocurre simultáneamente tanto en la cadena principal como en la
helicasas, proteínas de unión al ADN monocatenario y topoisomerasas (figura
retrasada.
11.16). Las helicasas son responsables de separar (desenrollar) las hebras
de ADN. Estas enzimas también usan la energía del ATP para desenrollar 1. Para iniciar la replicación, hasta 40 proteínas DnaA se unen a oriC mientras
tramos cortos de hélice justo antes de la horquilla de replicación. Las proteínas hidrolizan ATP. La unión de las proteínas DnaA hace que el ADN se doble
de unión al ADN (SSB) monocatenarias mantienen separadas las hebras alrededor del complejo proteico, lo que da como resultado la separación
una vez que se han separado, y topoi somerases alivian la tensión generada del ADN bicatenario en regiones dentro del origen que tienen muchos
por el rápido desenrollamiento de la doble hélice (la horquilla de replicación pares de bases AT. Recuerde que las adeninas se emparejan con las
puede girar tan rápidamente como de 75 a 100 revoluciones por segundo). timinas usando solo dos enlaces de hidrógeno, por lo que los segmentos
Esto es importante porque el desenrollado rápido puede conducir a la formación de ADN ricos en AT se vuelven monocatenarios más fácilmente que las
de superespiras o supergiros en regiones ricas en GC. Una vez el
abrazadera ÿ
Filamento
Centro
principal
1 La polimerasa central de cadena principal sintetiza ADN a medida
que la helicasa DnaB desenrolla las cadenas de ADN originales. La
abrazadera ÿ
ADN de los padres polimerasa del núcleo de cadena rezagada está a punto de completarse
esperando ser
hebras en un fragmento de Okazaki. La ADN primasa comienza la síntesis del
cargado ADN helicasa
complejo ÿ cebador de ARN para sintetizar el siguiente fragmento de Okazaki.
Rezagado
ADN primasa
hebra
Previamente sintetizado
Fragmento de Okazaki
cebador de ARN
2 Una vez completado el nuevo cebador de ARN, la ADN primasa

se disocia y el complejo ÿ (cargador de abrazadera) carga una
abrazadera ÿ en el cebador de plantilla.
Abrazadera ÿ siendo cargada
sobre imprimación de plantilla
3 La polimerasa central de la hebra retrasada alcanza el fragmento de

Okazaki sintetizado previamente y se disocia del ADN.
Descartado
abrazadera ÿ
ADN polimerasa I
(no se muestra) finalmente
elimina la imprimación y llena
el espacio
4 La polimerasa central de hebra retrasada se asocia con la pinza ÿ

recién cargada y comienza la síntesis de un nuevo fragmento de
Okazaki.
Figura 11.17 Un modelo de actividad en la horquilla de replicación. holoenzima ADN polimerasa III y otros componentes de la
Los replisomas son responsables de la síntesis de las hebras principales y rezagadas. Las flechas muestran el movimiento de cada polimerasa central
de ADN. Después de completar cada nuevo fragmento de Okazaki, se descarta la abrazadera deslizante anterior y se carga una nueva en la plantilla de ADN.
(paso 3). Esto se logra mediante la actividad del complejo (ver figura 11.15), que también se conoce como pinza cargadora. Los fragmentos de Okazaki
finalmente se unen (ver figura 11.18) después de la eliminación del cebador de ARN y la síntesis de ADN para llenar el vacío, ambos catalizados por
ADN polimerasa I; Luego, la ADN ligasa sella la muesca y une los dos fragmentos (ver figura 11.19).
261
las hebras se han separado, el proceso de replicación continúa a través •• ••

• •
de cuatro etapas.
O O
2. Las helicasas desenrollan la hélice con la ayuda de topoisomerasas
como la ADN girasa (figura 11.17, paso 1). Parece que la proteína DnaB CH2 O CH2 O
Base 1 Base 1
es la helicasa que participa más activamente en la replicación, pero la
proteína n' también puede participar en el desenrollado.
Las hebras simples se mantienen separadas por SSB. O O
3. La primasa sintetiza cebadores de ARN según sea necesario (figura – –
O OP O OP
11.17, paso 1) y una única holoenzima de ADN polimerasa III cataliza la
síntesis tanto de la cadena principal como de la cadena retrasada a O O
partir de los cebadores de ARN. La síntesis de la hebra rezagada es
CH2 CH2
particularmente sorprendente debido a las hazañas "gimnásticas" O Base 2 Base O 2
realizadas por el replisoma. Debe desechar las abrazaderas deslizantes
antiguas (figura 11.17, paso 3), cargar abrazaderas deslizantes nuevas
(figura 11.17, paso 2) y unir la plantilla a la enzima central con cada OH O
ADN ligasa
nueva ronda de síntesis de fragmentos de Okazaki. Todo esto ocurre –
NAD+ o ATP
O– O OP
cuando la ADN polimerasa III está sintetizando ADN. Por lo tanto, la
–
ADN polimerasa III es una enzima multifuncional. O OP O
4. Después de que la mayor parte de la región monocatenaria de la cadena
O CH2
rezagada se haya replicado mediante la formación de fragmentos de O Base 3
Okazaki, la ADN polimerasa I o (más raramente) la RNasaH elimina el CH2
O Base 3
cebador de ARN. La ADN polimerasa puedo hacer esto porque, a
diferencia de otras ADN polimerasas, tiene actividad de exonucleasa de O
5ÿ a 3ÿ, es decir, puede cortar nucleótidos uno a la vez comenzando en –
O O OP
el extremo 5ÿ. Así, la ADN polimerasa I comienza su actividad de
–
exonucleasa en el extremo libre del cebador de ARN. Con la eliminación O OP O
de cada ribonucleótido, la ADN polimerasa I utiliza el 3'-OH adyacente •
O •
•
del desoxinucleótido para llenar el espacio entre los fragmentos de
•
Okazaki (figura 11.18). •
•
3ÿ 5ÿ hebra parental
Figura 11.19 La reacción de la ADN ligasa. Los grupos que se modifican
3'OH
están sombreados en azul. Las ligasas bacterianas utilizan el enlace
5ÿ 3ÿ pirofosfato de NAD como fuente de energía; muchas otras ligasas emplean ATP.
hebra rezagada–
Fragmentos de Okazaki
Mella
con cebador de ARN
La ADN polimerasa I
NMP
elimina el cebador de ARN y 5. Finalmente, los fragmentos de Okazaki se unen mediante la enzima ADN
dNTP llena el espacio con
ligasa, que forma un enlace fosfodiéster entre el 3ÿ-hidroxilo de la
ADN; mella permanece
cadena en crecimiento y el 5ÿ-fosfato de un fragmento de Okazaki
(figura 11.19).
3ÿ 5ÿ
Como hemos visto, la ADN polimerasa III es un asombroso complejo
multiproteico, con múltiples actividades enzimáticas. En E. coli, el componente
3'OH 5'PO4
polimerasa está codificado por el gen dnaE . La secuenciación del genoma
5ÿ 3ÿ
de otras bacterias ha revelado que algunas tienen un segundo gen dnaE .
ATP
En Bacillus subtilis, una bacteria grampositiva que es otro modelo experimental
(o NAD+)
importante, este segundo gen de polimerasa se llama dnaEBs, y su producto
Enlaces de ADN ligasa
Okazaki se fragmenta al proteico parece ser responsable de replicar la hebra rezagada. Por tanto,
sellar la mella aunque el mecanismo global por el que se replica el ADN está muy
AMP + PPi (o conservado, puede haber variaciones en los componentes del replisoma.
NMN)
3ÿ 5ÿ Sorprendentemente, la ADN polimerasa III, como todas las ADN

polimerasas, tiene una función adicional que es de vital importancia: la
5ÿ 3ÿ
corrección de pruebas. La revisión es la eliminación de una base que no
coincide inmediatamente después de haberla agregado; su remoción debe
Figura 11.18 Finalización de la síntesis de la cadena retrasada. ocurrir antes de incorporar la siguiente base. Recuerde que el núcleo de la polimerasa III es
compuesto por tres subunidades: ,, y . Mientras hemos discutido Telómero

la subunidad de actividad polimerasa, la subunidad tiene 3' a 5' actividad
5ÿ 3ÿ
exonucleasa. Esto le permite verificar cada base recién incorporada para ver si 3ÿ 5ÿ
forma enlaces de hidrógeno estables. De este modo eucariótico
se pueden detectar bases no coincidentes. Si se ha colocado la base incorrecta cromosoma
agregado por error, esta subunidad es capaz de eliminarlo. Porque tiene
actividad exonucleasa (exo significa fuera o en este caso, de Repetir unidad
al final), puede eliminar una base no coincidente, siempre y cuando todavía esté en
T TGGGGT TG GGGT TG T TG GGG 3ÿ
el extremo 3ÿ de la hebra en crecimiento. Una vez eliminada, la holoenzima
retrocede y agrega el nucleótido apropiado en su lugar. La lectura de prueba de
A A CCCCA AC
AACCCCAAC
ARN
ADN no es 100% eficiente y, como se discutió en el capítulo 12, la
3ÿ 5ÿ
El sistema de reparación de desajustes es la segunda línea de defensa de la célula.
La telomerasa sintetiza
una repetición de 6 nucleótidos.
telomerasa
Terminación de la replicación GRAMO
T
En E. coli, la replicación del ADN se detiene cuando el replisoma alcanza un
T TGGGGT TG GGGT TG TT GGG GG GG T
sitio de terminación (ter) en el ADN. La proteína Tus se une a la
ter sitios y detiene la progresión de las bifurcaciones. En muchas otras bacterias, la A A CCCCA AC
AACCCCAAC
replicación se detiene al azar cuando las bifurcaciones se encuentran.
Independientemente de cómo se detenga el movimiento de la horquilla, a menudo hay un problema
La telomerasa se
a resolver por el replisoma: separación de moléculas hijas. Cuando se completa mueve 6 nucleótidos a la derecha y
la replicación de un cromosoma circular, comienza a hacer otra repetición.
los dos cromosomas hijos circulares pueden permanecer entrelazados. Estos GRAMO
GRAMO
cromosomas entrelazados se denominan catenanos.

T TGGGGT TG GGGT TG TT
GGG GGGG T TG
Obviamente, esto es un problema si cada célula hija va a heredar una
AA CCCCA AC
cromosoma único. Afortunadamente, las topoisomerasas resuelven el AACCCCAAC
problema al romper temporalmente las moléculas de ADN, de modo que el
las hebras se pueden separar. el complementario
hebra está hecho por primasa,
ADN polimerasa y ligasa.
Replicación de cromosomas lineales
El hecho de que los cromosomas eucarióticos sean lineales plantea un problema T TGGGGT TGGGGT TG TT
GGG GGGG TT GRAMO G GGGTT 3ÿ
durante la replicación debido a la necesidad de la ADN polimerasa de un
imprimación, proporcionando un 3'-OH libre. En los extremos (telómeros) de los AACCCCAACCCCAAC AA CCC CCCC CCCC Automóvil club británico
cromosomas eucarióticos, no hay espacio disponible para la síntesis de un cebador.

en la hebra rezagada, y por lo tanto debería ser imposible Figura 11.20 Replicación de los telómeros de eucariotas
replicar el final de esa hebra. A lo largo de numerosas rondas de ADN Cromosomas por Telomerasa. La telomerasa contiene un ARN
replicación y división celular, esto llevaría a una progresiva molécula que puede formar pares de bases con una pequeña porción del 3ÿ
cromosoma acortado. En última instancia, el cromosoma perdería sobresalir. El ARN sirve como molde para la síntesis de ADN.
información genética crítica, que sería letal para la célula. catalizada por la actividad transcriptasa inversa de la enzima. los
Claramente, las células eucarióticas deben haber desarrollado un mecanismo para El 3'-OH del ADN de los telómeros sirve como cebador y se alarga.
replicando sus telómeros. La solución a la “replicación final El proceso que se muestra se repite muchas veces hasta que se alcanza el voladizo de 3ÿ.
problema” es la enzima telomerasa. La telomerasa tiene dos componentes: una el tiempo suficiente para servir como plantilla para el complementario
proteína que puede sintetizar ADN usando una plantilla de ARN (telomerasa hebra de ADN de telómero.
transcriptasa inversa) y un ARN interno.
plantilla. El ARN interno es complementario al monocatenario.
de ADN que sobresale del extremo del cromosoma (figura 11.20) Desafortunadamente, se sabe poco sobre la replicación de los cromosomas
y actúa como molde para la síntesis de ADN para alargar esa hebra bacterianos lineales. Sin embargo, un descubrimiento reciente en Strepto myces,
(es decir, el 3'-OH de la hebra de ADN del telómero sirve como cebador para un importante grupo de bacterias del suelo, ha llevado a la especulación
síntesis de ADN). Después de alargarse lo suficiente, el sencillo que un proceso similar a la telomerasa puede funcionar en estas bacterias. los
hebra de ADN del telómero puede servir como molde para la síntesis de extremos del cromosoma lineal de Streptomyces coelicolor están asociados con
la cadena complementaria por la ADN polimerasa III. Así la longitud un complejo de proteínas, incluyendo uno con in vitro
del cromosoma se mantiene. actividad transcriptasa inversa. No se ha encontrado ARN en el
La telomerasa ha resuelto el problema de la replicación final de los eucariotas, complejo de Streptomyces , por lo que no está claro si la proteína funciona como
pero recuerde que algunas bacterias también tienen cromosomas lineales. ¿Cómo una transcriptasa inversa en las células y lo que podría usar como plantilla, si lo
replican los extremos de sus cromosomas? hace.
Al principio, se pensó que un gen contenía información para

1. Defina los siguientes términos: origen de replicación, replicón, replicación
la síntesis de una enzima, la hipótesis de un gen-una enzima. Luego se modificó a la
tenedor, primosoma y replisoma.
hipótesis de un gen-un polipéptido debido a la existencia de enzimas y otras proteínas.
2. Describa la naturaleza y las funciones de los siguientes componentes de replicación
e intermedios: ADN polimerasas I y III, topoisomerasa, ADN girasa,
compuesto por dos o más cadenas polipeptídicas diferentes codificadas para
helicasa, proteína de unión a ADN monocatenario, fragmento de Okazaki, ADN ligasa,
por genes separados. Históricamente, un segmento de ADN que codifica un
hebra principal, hebra rezagada, primasa y telomerasa.
el polipéptido único se denominó cistrón; este término todavía se usa algunas veces.
3. ¿Cómo difieren los patrones de replicación entre procariotas y eucariotas?
Sin embargo, no todos los genes codifican proteínas; algún código
Describa el funcionamiento de las horquillas de replicación en la generación de
en cambio, para rRNA y tRNA (ver figura 11.4). Además, es
intermedios.
Ahora se sabe que algunos genes eucarióticos codifican más de un
4. ¿En qué se diferencia la replicación de círculo rodante del tipo habitual de replicación?
proteína. Por lo tanto, un gen podría definirse como una secuencia de polinucleótidos
observado para los cromosomas celulares?
que codifica un producto funcional (es decir, un polipéptido,
5. Resuma los pasos involucrados en la síntesis de ADN en la horquilla de replicación. Cómo
ARNt o ARNr). Las secuencias de nucleótidos de la codificación de proteínas
¿Las ADN polimerasas corrigen sus errores?
Los genes son distintos de los genes codificadores de ARN y las regiones no
codificantes porque cuando se transcriben, el ARNm resultante puede ser
“leer” en secuencias discretas de conjuntos de tres nucleótidos, cada conjunto
siendo un codón. Cada codón codifica para un solo aminoácido. La secuencia de
11.5 ESTRUCTURA DEL GEN
codones se "lee" de una sola manera para producir un solo
La replicación del ADN permite que la información genética pase de producto. Es decir, el código no se superpone y hay un único
una generación a la siguiente. Pero, ¿cómo es la información genética? punto de partida con un marco de lectura o forma en que los nucleótidos se agrupan
¿usado? Para responder a esa pregunta, primero debemos observar cómo la genética en codones (figura 11.21). cada hebra de
se organiza la información. La unidad básica de la información genética es Por lo tanto, el ADN generalmente consta de secuencias de genes que no
el gen El gen ha sido definido de varias maneras. Inicialmente los genetistas la se superponen entre sí (figura 11.22a). Sin embargo, hay excepciones a la regla.
consideraban la entidad responsable de conferir rasgos al organismo y la entidad que Algunos virus como el fago X174 tienen
podía sufrir una recombinación. La recombinación implica el intercambio de ADN de genes superpuestos (figura 11.22b), y partes de los genes se superponen en
algunos genomas bacterianos.
una fuente (por ejemplo, virus, bacteria) con la de otra y es La estructura de los genes procarióticos y virales difiere mucho de la
responsable de generar gran parte de la variabilidad genética encontrada de eucariotas. En sistemas procarióticos y virales, la información de codificación
en virus y organismos vivos. Con el descubrimiento y la caracterización del ADN, el dentro de un gen normalmente es continua. Sin embargo, en los organismos
gen se definió con mayor precisión como una secuencia lineal de nucleótidos con eucarióticos, muchos genes contienen información de codificación.
puntos de inicio y finalización fijos. (exones) interrumpidos periódicamente por secuencias no codificantes (en
Creando variabilidad genética: Recombinación a nivel molecular (sección 13.4)
Leer Leer
comienzo comienzo
ADN T ACGT ATGACCT T ACGGT ATGACCT
ARNm A UGCCAUACUGGU UGCCAUACUGGU
péptido Reunió Pro Tyr TRP Cis Su Thr gly
Figura 11.21 Marcos de lectura y su importancia. El lugar en el que comienza la lectura de la secuencia de ADN determina la forma
los nucleótidos se agrupan en grupos de tres (delineados con corchetes), y esto especifica los codones de ARNm y el producto peptídico.
En el ejemplo, un cambio en el marco de lectura de un nucleótido produce un ARNm y un péptido final bastante diferentes.
Estructura del gen 265
D
tyrB C
metA
B
argumento
A B C pyrA
purD,H A
leu
thiA,B,C pyrB thr PROA,B
GRAMO
purA
mi ARGF
D A
PROC
mi C B
PURO
B argumento
100/0
PAGS F
A H C
biografía
I LV
Y D
C arol
aroA
cys H A
pyrD
pirc
A
ilvH,J,K
Escherichia coli 25 B
aroB 75 purB
C
cysG trp A*
D
argG cysB
mi
GRAMO
ÿX174
aroH B
asignar k
aroD
SERA 50
GRAMO
lysA D
thyA su C
phea puro C
metG B
argA
tyra arof aroC H
C pyrG
cysA,K A mi
D cis D
F F
H purC
I j
I cysA,K
mi
j
(a) (B)
Figura 11.22 Organización cromosómica en bacterias y virus. (a) Mapa genético simplificado de E. coli. El mapa de E. coli se divide en 100 minutos. (b) El mapa del fago
X174 muestra la superposición del gen B con A, K con A y C, y E con D. Las regiones sólidas son espacios que se encuentran entre genes. La proteína A* consiste en la última parte
de la proteína A y surge del reinicio de la transcripción dentro del gen A.
trons). Los intrones deben ser cortados o empalmados fuera del ARNm está hecho desde el extremo 5 'a 3', la polaridad de la hebra de plantilla
antes de que se produzca la proteína. Como veremos, esto otorga a los de ADN es de 3 'a 5'. Por lo tanto, el comienzo del gen se encuentra en el
eucariotas la capacidad de cortar y pegar moléculas de ARNm para que extremo 3' de la hebra molde. Un sitio importante, el promotor, se ubica
puedan codificar más de un polipéptido, un proceso conocido como al comienzo del gen. El promotor es un sitio de reconocimiento/unión para
empalme alternativo. Una excepción interesante a esta regla son los la ARN polimerasa, la enzima que sintetiza el ARN.
genes histone eucarióticos, que carecen de intrones. Debido a que los El promotor no se transcribe ni se traduce; funciona estrictamente para
sistemas procariótico y viral son los mejor caracterizados, la descripción orientar la ARN polimerasa a una distancia específica del primer nucleótido
más detallada de la estructura génica que sigue se centrará en los genes de E. coli
de. ADN que servirá como plantilla. Como veremos en el capítulo 12, el
promotor también es muy importante para regular cuándo y dónde se
transcribirá o expresará un gen.
Genes que codifican proteínas
El sitio de inicio de la transcripción (marcado como 1 en la figura
Para poder usar la información genética en el ADN, primero debe 11.23) representa el primer nucleótido en el ARNm sintetizado a partir del
transcribirse para formar una molécula de ARN. El producto de ARN de un gen. Sin embargo, la porción del gen transcrita inicialmente no codifica
gen que codifica una proteína es el ARN mensajero (ARNm). Recuerde de necesariamente para los aminoácidos. En cambio, es una secuencia líder
la discusión sobre el flujo de información que, aunque el ADN es de doble que se transcribe en ARNm, pero no se traduce en aminoácidos. La
cadena, solo una cadena de un gen contiene información codificada y secuencia líder incluye una región llamada secuencia Shine-Dalgarno
dirige la síntesis de ARN. Esta hebra se denomina hebra plantilla, y la que es importante en el inicio de la traducción. El líder a veces también
hebra complementaria se conoce como hebra codificante porque tiene la está involucrado en la regulación de la transcripción y traducción.
misma secuencia de nucleótidos que el ARNm, excepto en las bases de Regulación de la elongación de la transcripción (sección 12.3); Regulación
ADN (figura 11.23). Porque el ARNm a nivel de traducción (sección 12.4)
Sitio de reconocimiento de ARN polimerasa
Sitio de unión de la ARN polimerasa

(Caja Pribnow)
Hilo de codificación Hilo de plantilla

–35 –10 +1
ÿ ÿ
5 3
ADN
ÿ
3
ÿ
Promotor Líder Región de codificación Terminador de tráiler
Transcripción
comienzo
Dirección de transcripción
(a)
(a)
Shine-Dalgarno
GRAMO
secuencia
o
AGO
A
ÿ
5
ÿ
ARNm 3
Líder Remolque
Inicio de la traducción Traducción

(codón de iniciación) codón de parada
(B)
Figura 11.23 Un gen estructural bacteriano y su producto de ARNm. (a) La organización de un gen estructural típico en bacterias.
Las secuencias líder y final están incluidas aunque algunos genes carecen de una o ambas. La transcripción comienza en la posición 1 del ADN y
continúa hacia la derecha como se muestra. La plantilla se lee en la dirección de 3ÿ a 5ÿ. (b) Producto de ARN mensajero del gen que se muestra en la parte a. los
El primer nucleótido incorporado al ARNm suele ser GMP o AMP. La traducción del ARNm comienza con el codón de iniciación AUG. Regulador
los sitios no se muestran.
Inmediatamente al lado (y corriente abajo) del líder está el expresión. Los sitios reguladores a menudo están asociados con el promotor
parte más importante del gen, la región codificante (figura 11.23). y algunos los consideran parte de promotores especiales. Dos de estos sitios, los
En los genes que dirigen la síntesis de proteínas, la región codificante sitios de unión al operador y al activador, se analizan en las secciones 12.2 y 12.5.
normalmente comienza con la secuencia de ADN molde 3ÿ-TAC-5ÿ. Ciertamente no todo es
Esto produce el codón 5ÿ-AUG-3ÿ, que en bacterias codifica conoce acerca de los genes y su estructura. Con la disponibilidad inmediata de
para N-formilmetionina, un aminoácido especialmente modificado utilizado genes clonados y la tecnología de secuenciación del ADN, se siguen realizando
para iniciar la síntesis de proteínas. El resto de la región codificante importantes descubrimientos en esta área.
consiste en una secuencia de codones que especifica la secuencia de
aminoácidos para esa proteína en particular. La región de codificación termina
con un codón especial llamado codón de parada, que señala el
Genes que codifican para tRNA y rRNA
final de la proteína y detiene el ribosoma durante la traducción. Los segmentos de ADN que codifican para tRNA y rRNA también se consideran
El codón de terminación es seguido inmediatamente por la secuencia final (figura genes, aunque dan lugar a ARN importante en lugar de
11.23), que es necesaria para la expresión adecuada de que la proteína. En E. coli , los genes para el ARNt son bastante típicos y consisten
la región codificante del gen. No se reconoce el codón de parada. en un promotor y secuencias líder y final transcritas que se eliminan durante el
por la ARN polimerasa durante la transcripción. En cambio, un terminador proceso de ARNt.
secuencia se utiliza para detener la transcripción al desalojar el ARN maduración (figura 11.24a). La función precisa del líder es
polimerasa del ADN molde. no es claro; sin embargo, se requiere el tráiler para la terminación de la
Además de estos componentes básicos (el promotor, el líder, la región transcripción. Los genes que codifican tRNA pueden codificar más de una sola
codificante, el tráiler y el terminador), muchos genes bacterianos tienen un molécula de tRNA o tipo de tRNA (figura 11.24a). los
variedad de sitios regulatorios. Estos son lugares donde las proteínas reguladoras Los segmentos que codifican los ARNt están separados por secuencias
que reconocen el ADN se unen para estimular o prevenir el cambio de genes. espaciadoras cortas que se eliminan después de la transcripción mediante ribonu especiales.
Estructura del gen 267
GRAMO
tu
tu
C
C tu OH
C GRAMO
A tu
tu A
GRAMO
C
anticodón GRAMO C anticodón
A
tu A GRAMO
C GRAMO
A C
A tu C GRAMO
tu A
C
A CGACU GACGGGCG CGACUAU GUGGGG
tu
GRAMO
GRAMO
tu GCUGA UGCCCGC AGAUGU GCUGAUA CACCC GRAMO
GRAMO C GRAMO C
C GRAMO C GRAMO
GRAMO C tu A
GRAMO C C GRAMO
GRAMO C
Ser de ARNt Espaciador ARNt Thr
(a)
23S
16S
1o2 0-2
5S
ARNt espaciador Tráiler de ARNt
(B)
Figura 11.24 Genes de ARNt y ARNr. (a) Un precursor de ARNt de E. coli que contiene dos moléculas de ARNt. El espaciador y los nucleótidos adicionales en ambos
extremos se eliminan durante el procesamiento. (b) El gen del ARN ribosómico de E. coli codifica un gran producto de transcripción que se escinde en tres ARNr y de uno a tres
ARNt. Los segmentos de ARNr 16S, 23S y 5S están representados por líneas azules y las secuencias de ARNt se colocan entre paréntesis. Las siete copias de este gen varían
en el número y tipo de secuencias de ARNt.
cleases, al menos uno de los cuales contiene ARN catalítico. Las moléculas de ARN con modificación postranscripcional, un proceso relativamente raro en procariotas.
actividad catalítica se denominan ribozimas (Micro bial Tidbits 11.2).
Los genes para el ARNr también tienen una organización similar a los genes que
1. Defina o describa lo siguiente: gen, plantilla y hebras de codificación, promotor,
codifican proteínas porque tienen promotores, remolques y terminadores (figura 11.24b).
líder, región de codificación, marco de lectura, avance y terminador.
Curiosamente, todos los rRNA se transcriben como una única molécula precursora grande
2. ¿En qué suelen diferir entre sí los genes de procariotas y eucariotas?
que las ribonucleasas cortan después de la transcripción para producir los productos
3. Discuta brevemente la organización general de los genes tRNA y rRNA. Cómo
finales de rRNA. Las regiones de remolque y espaciador de pre-ARNr de E. coli incluso
¿diferencia su expresión de la de los genes estructurales con respecto a la
contienen genes de ARNt. Por lo tanto, la síntesis de tRNA y rRNA implica
modificación postranscripcional del producto génico?
11.2 ARN catalítico (ribozimas)

Los biólogos alguna vez pensaron que todas las reacciones celulares eran catalizadas por
proteínas llamadas enzimas (ver sección 8.7). El descubrimiento durante
1981–1984 por Thomas Cech y Sidney Altman que el ARN también puede
a veces catalizar reacciones ha transformado nuestra forma de pensar
sobre temas tan diversos como la catálisis y el origen de la vida. Esto es ahora
claro que algunas moléculas de ARN, llamadas ribozimas, catalizan reacciones que
GOH
alteran su propia estructura o la de otros ARN. G UA AGG tu 3ÿ
Este descubrimiento ha estimulado a los científicos a formular la hipótesis de que el pre-ARNr 5ÿ C UCUCU A
tu
La Tierra primitiva era un “mundo de ARN” en el que el ARN actuaba tanto como material tu
AGGGA GGU
genético como catalizador de reacción. Experimentos que muestran que en trones de
Tetrahymena thermophila pueden catalizar la formación de
ácido policitidílico en determinadas circunstancias han alentado aún más tales
especulaciones. Algunos han sugerido que los virus de ARN son
"fósiles vivientes" del mundo del ARN original. La primera autorreplicante G UA A GGU 3ÿ
entidad: El mundo del ARN (sección 19.1) 5ÿ C UCUCU OH
La actividad ribozima mejor estudiada es el autoempalme del ARN.

GGA GAGG UUUAG _
Este proceso está muy extendido y ocurre en el pre-rRNA de Tetrahymena ; los
rRNA mitocondrial y mRNA de levadura y otros hongos; cloroplasto
ARNt, ARNr y ARNm; en el ARNm de algunos bacteriófagos (p. ej.,
el fago T4 de E. coli); y en el virusoide de la hepatitis delta. El 413-
El intrón de ARNr de nucleótidos de T. thermophila proporciona un buen ejemplo .
de la reacción de auto-empalme. La reacción ocurre en tres pasos y requiere la presencia 5ÿ C UCUCUUAAGGU 3ÿ
exones ligados
+ HO-G3 ÿ
de guanosina (ver la figura del recuadro). Primero, el 3ÿ-OH
GGA GAGGUUUA G
grupo de guanosina ataca el grupo 5'-fosfato del intrón y intrón lineal 5ÿ
rompe el enlace fosfodiéster. En segundo lugar, el nuevo 3ÿ-hidroxilo en el (interviniendo
el exón izquierdo ataca al 5ÿ-fosfato del exón derecho. Esto une a los dos secuencia)
Cambio conformacional
exones y libera el intrón. Finalmente, los ataques 3ÿ-hidroxilo del intrón
el enlace fosfato del nucleótido 15 residuos de su extremo. Esta
libera un fragmento terminal y cicla el intrón. Auto empalme de CERDO
este ARNr se produce unas 10 mil millones de veces más rápido que el ARN espontáneo intrón lineal G AUUUG
GRAMO
hidrólisis. Al igual que con las proteínas enzimáticas, la forma del ARN es esencial para
A
la eficiencia catalítica. La ribozima incluso tiene Michaelis-Menten AGGG
cinética (ver figura 8.18). La ribozima del virus de la hepatitis delta cataliza la escisión del
ARN que participa en su replicación. Está
inusual en el sentido de que el mismo ARN puede plegarse en dos formas con actividades
catalíticas bastante diferentes: la actividad regular de escisión del ARN y una
Reacción de ligadura de ARN. 5ÿ GAUUU _ 3ÿ
El descubrimiento de las ribozimas tiene muchos aspectos potencialmente importantes

+G
GRAMO
consecuencias prácticas. Las ribozimas actúan como "tijeras moleculares" y intrón circular
GRAMO
permitirá a los investigadores manipular fácilmente el ARN en experimentos de laboratorio. A

AGGG
También podría ser posible proteger a los hosts específicamente
eliminando el ARN de virus patógenos, bacterias y hongos. Para
Por ejemplo, se están probando ribozimas contra el SIDA, el herpes y Acción Ribozima. El mecanismo de autoempalme pre-rRNA de
virus del mosaico del tabaco. Tetrahymena ther mophila. Ver texto para más detalles.
durante la replicación del ADN, por lo general codifica para uracilo durante el ARN
11.6 TRANSCRIPCIÓN
síntesis. La transcripción genera tres tipos de ARN. El ARN mensajero (ARNm)
Como se mencionó anteriormente, la síntesis de ARN bajo la dirección de lleva el mensaje para la síntesis de proteínas. En
El ADN se llama transcripción. El producto de ARN tiene una secuencia Bacteria y Archaea, el ARNm suele contener información de codificación transcrita
complementario a la plantilla de ADN que dirige su síntesis de genes adyacentes. Por eso se dice que es
(tabla 11.2). La timina normalmente no se encuentra en el ARNm y poligénico o policistrónico (figura 11.25). ARNm eucariotas,
ARNr. Aunque la adenina dirige la incorporación de la timina por otro lado, suelen ser monocistrónicos, que contienen infor
Transcripción 269
parecen estar involucrados en el ensamblaje de la enzima central, el

Tabla 11.2 Bases de ARN codificadas por ADN
reconocimiento de promotores y la interacción con algunos factores reguladores.
Base de ADN Purina o pirimidina incorporada en el ARN El sitio de unión para el ADN está en ÿ y la subunidad parece estar
ÿ
implicado en la estabilización de la conformación de la subunidad los

adenina uracilo
subunidad se une a sustratos de ribonucleótidos. La rifampicina, un inhibidor de
guanina Citosina la ARN polimerasa, se une a la subunidad.
Citosina guanina
Recientemente se ha determinado la estructura atómica de la ARN
timina adenina polimerasa de Thermus aquaticus (figura 11.27a,b). En esta bacteria, la enzima
central se compone de cuatro subunidades diferentes
( 2, , ÿ y ) y está complejado con el factor sigma ( ). los
enzima tiene forma de garra con un dominio de abrazadera que se cierra en un
codón de iniciación codón de terminación
(normalmente AGO) (UAA, UAG, UGA)
canal interno, que contiene un magnesio esencial y el
sitio activo. Sigma interactúa ampliamente con la enzima central y
ÿ
5ÿ 3 se une específicamente a elementos del promotor. También puede ensancharse

el canal para que el ADN pueda entrar en el interior de la polimerasa
Líder Gen 1 Espaciador Gen 2 Tbarandilla
complejo.
La transcripción involucra tres procesos separados: iniciación,
Figura 11.25 Un ARN mensajero bacteriano policistrónico.
elongación y terminación. Sólo un segmento relativamente corto de
El ADN se transcribe (a diferencia de la replicación en la que se debe copiar todo
mación para un solo polipéptido. El ARN de transferencia (ARNt) transporta
el cromosoma) y la iniciación comienza cuando el ARN
aminoácidos durante la síntesis de proteínas y ARN ribosomal
la polimerasa se une al promotor del gen. ARN polimerasa
Las moléculas de ARNr son componentes de los ribosomas. La síntesis
La enzima central no puede unirse al ADN de manera estrecha o específica. Esta
de ARNm bacteriano se describe primero.
la situación cambia drásticamente cuando sigma está vinculado al núcleo para
hacer la holoenzima, que se une fuertemente al promotor. Recordar
que el promotor sirve sólo como un objetivo para la unión de la
Transcripción en bacterias
ARN polimerasa y no se transcribe. Los promotores bacterianos tienen
El ARN se sintetiza bajo la dirección del ADN por la enzima dos rasgos característicos: una secuencia de seis bases (a menudo
ARN polimerasa. La reacción es bastante similar a la catalizada TTGACA) alrededor de 35 pares de bases antes de que comience la transcripción
por la ADN polimerasa (figura 11.14). ATP, GTP, CTP y UTP son punto y una secuencia TATAAT, o cuadro de Pribnow, por lo general alrededor de 10
utilizado para producir un ARN complementario a la plantilla de ADN. Como pares de bases aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción (figura 11.28;
Como se mencionó anteriormente, estos nucleótidos contienen ribosa en lugar
también 11.23). Estas regiones se denominan sitios 35 y 10, respectivamente,
de desoxirribosa (figura 11.15). mientras que el primer nucleótido que se transcribe se denomina
ARN como el 1 sitio. Como se señaló anteriormente, la holoenzima de la ARN
polimerasa n[ATP, GTP, CTP, UTP] ÿÿÿÿÿ ARN nPPi
plantilla de ADN polimerasa reconoce las secuencias específicas en los sitios 10 y 35
de promotores. Debido a que los sitios deben ser similares en todos los promotores,
La síntesis de ARN, como la síntesis de ADN, procede en una dirección de 5ÿ a se denominan secuencias consenso.
3ÿ y se agregan nuevos nucleótidos al extremo 3ÿ de la cadena en crecimiento Una vez unida al sitio del promotor, la ARN polimerasa puede
a una velocidad de aproximadamente 40 nucleótidos por segundo a 37 °C. desenrollar el ADN sin la ayuda de helicasas (figura 11.29). los
(figura 11.26). Tanto en las reacciones de polimerasa de ADN como de ARN, se 10 sitio es rico en adeninas y timinas, por lo que es más fácil de
produce pirofosfato (PPi). Luego se hidroliza a ortofosfato en una reacción romper los puentes de hidrógeno que mantienen el ADN bicatenario;
catalizada por la enzima pirofosfatasa. La hidrólisis del producto pirofosfato cuando el ADN se desenrolla en esta región, se denomina complejo abierto.
produce ADN y Una región de ADN desenrollado equivalente a unas dos vueltas de
Síntesis de ARN irreversible. Si el nivel de pirofosfato fuera demasiado la hélice (alrededor de 16 a 20 pares de bases) se convierte en la "transcripción
alto, el ADN y el ARN se degradarían por una inversión de la burbuja ", que se mueve con la polimerasa de ARN a medida que procede a
reacciones de polimerasa. transcriba el ARNm de la cadena de ADN molde durante la elongación (figura
La mayoría de las ARN polimerasas bacterianas contienen cinco tipos de 11.30). Dentro de la burbuja de transcripción, un temporal
, , 11.27).
cadenas polipeptídicas: y (figura ÿ, , el núcleo Se forma el híbrido ARN:ADN. A medida que avanza la ARN polimerasa
La enzima está compuesta por cinco cadenas ( 2, , ÿ y ) y cataliza la síntesis de en la dirección 3' a 5' a lo largo de la plantilla de ADN, el factor sigma
ARN. El factor sigma ( ) no tiene actividad catalítica pero ayuda a la enzima pronto se disocia de la ARN polimerasa central y está disponible para ayudar
central a reconocer el inicio de los genes. otra unidad de la enzima central inicia la transcripción. El ARNm es
Cuando sigma se une a la enzima central, el complejo de seis subunidades se hecho en la dirección 5 'a 3', por lo que es complementario y antiparalelo al ADN
denominada holoenzima ARN polimerasa. Sólo la holoenzima puede molde. A medida que continúa la elongación del ARNm,
comienza la transcripción, pero como veremos, la enzima central completa Se libera ARNm monocatenario y las dos cadenas de ADN detrás de la burbuja
Síntesis de ARN una vez iniciada. Las funciones precisas de de transcripción recuperan su estructura de doble hélice.
el ÿ, y los
, polipéptidos
, aún no están claros. las subunidades Como se muestra en la figura 11.26, la ARN polimerasa es un notable
(a) Cada gen o conjunto

de genes contiene una
región promotora
específica para guiar el
comienzo de la
transcripción. A esto le
sigue la región de los
genes que se transcribe y
termina con un terminador ARN
que detiene la transcripción.
polimerasa
enzima central
El ADN se desenrolla en
el promotor por la ARN terminador
polimerasa. Solo una Hilo de plantilla
cadena de ADN, llamada factor sigma 3 5
cadena molde, se utiliza
para guiar la síntesis de
ARN por parte de la ARN
polimerasa. Esta hebra
corre en los 3
a 5 dirección. 5 3
hebra de codificación
Desenrollado del ADN
El factor sigma se va después de que se inicia la transcripción

Dirección de
(B) A medida que transcripción
la ARN polimerasa se
mueve a lo largo de la
hebra, agrega nucleótidos
complementarios según lo
3
dicta la plantilla de ADN,
formando el ARNm
monocatenario que se lee
en la dirección 5 a 3. nucleótido
5 piscina
ARNm temprano
transcripción
(C) La polimerasa
Alargamiento
continúa transcribiendo
hasta que alcanza un sitio
de terminación y la
transcripción de ARNm se
libera por 3
traducción. Tenga en
cuenta que la sección de la
ADN que ha sido
transcrito se 5
rebobina a su
Transcripción tardía de ARNm
configuración original.
Figura 11.26 Los eventos principales en la transcripción.
enzima capaz de varias actividades, incluyendo desenrollar el Horquilla de ARNm seguida de un tramo de aproximadamente seis residuos de uridina.
ADN, moviéndose a lo largo de la plantilla y sintetizando ARN. Una vez que la ARN polimerasa se detiene en el bucle en horquilla, el
La terminación de la transcripción se produce cuando la polimerasa Los pares de bases AU en la región rica en uracilo son demasiado débiles para sostener la
de ARN central se disocia del ADN molde. El final de un gen o El dúplex ARN:ADN se une y la ARN polimerasa se cae.
grupo de genes está marcado por secuencias de ADN en el tráiler (que El segundo tipo de terminador carece de una región poli-U y, a menudo,
se transcribe pero no se traduce) y el terminador. Las secuencias dentro la horquilla requiere la ayuda de una proteína especial, el factor rho ( ).
de los terminadores procarióticos a menudo contienen nucleótidos Este terminador provoca una terminación dependiente de rho. Eso
que, cuando se transcriben en ARN, forman enlaces de hidrógeno dentro Se cree que rho se une al mRNA y se mueve a lo largo de la molécula
el ARN monocatenario. Este apareamiento de bases intrahebra crea un hasta que alcanza la RNA polimerasa que se ha detenido en un punto.
estructura de bucle y tallo en forma de horquilla. Esta estructura parece terminador (figura 11.32). El factor rho, que tiene híbrido
hacer que la ARN polimerasa haga una pausa o deje de transcribir el ADN. La actividad helicasa ARN:ADN hace que la polimerasa se disocie del
Hay dos tipos de terminadores. El primer tipo causa intrínseca ARNm, probablemente al desenrollar el complejo ADN ARNm.
o terminación independiente de rho (figura 11.31). Cuenta con el
Río arriba Río abajo
10 elementos
extendidos
ÿ35
ÿ4
elemento
ÿ40 ÿ30 ÿ20
ÿ2
Abrazadera ÿ2 5 ' nt
ÿ10
ÿ
elemento
ÿ4 3 ' nt
ÿII 5't
ÿÿ ÿ3
ÿ ÿÿ
ÿI
ÿl
(a) (B)
ADN transcrito (aguas

arriba)
Tapa
Salida Abrazadera
Timón Entrando en el
ADN (aguas abajo)
muro
Poro
Mg2+ Puente Mandíbula
amanitina
Embudo
Transcripción
NTP
(C) (D)
Figura 11.27 Estructura de la ARN polimerasa. Aquí se presentan las estructuras atómicas de la ARN polimerasa de la bacteria Thermus
aquaticus ( a y b) y la ARN polimerasa II de levadura (c y d) . cilindros para hélices. Dos de los dominios de tres factores están etiquetados. (b) El
complejo holoenzima-ADN con la superficie ligeramente transparente para mostrar el esqueleto de carbono en el interior. Las superficies de proteínas
que entran en contacto con el ADN están en verde y están ubicadas en el factor. Los elementos 10 y 35 en el promotor están en amarillo. El sitio
activo interno está cubierto por la subunidad en esta vista. (c) Complejo de transcripción de ARN polimerasa II de levadura con algunas cadenas
peptídicas eliminadas para mostrar el ADN. El metal del sitio activo es una esfera roja. Un tramo corto de ADN-ARN híbrido (azul y rojo) se encuentra
sobre el metal. (d) Una vista lateral en corte del complejo de transcripción de la polimerasa II con la ruta de los ácidos nucleicos y algunas de las
partes más importantes que se muestran. La enzima es moviéndose de izquierda a derecha y la hebra de plantilla de ADN está en azul. Una “pared”
de proteína obliga al ADN a girar en ángulo recto y ayuda a la unión de los nucleósidos trifosfatos al extremo 3ÿ en crecimiento del ARN. El ARN
recién sintetizado (rojo) se separa de la hebra molde de ADN y sale por debajo del timón y tapa del complejo proteico polimerasa. También se muestra
el sitio de unión del inhibidor -amanitina.
271
hebra de codificación Sitio de inicio de la –35 –10

Región promotora transcripción
secuencia –35 16 –18 pb –10 secuencia

+1 Unión de la
5ÿ 3ÿ
holoenzima ARN polimerasa
T T C T T T para formar un complejo cerrado
GRAMO A A A A A A
A A GRAMO A A A –35
C T T T T T T
3ÿ 5ÿ –10
A Enzima del núcleo de
factor sigma la ARN polimerasa
Hilo de plantilla
5ÿ 3ÿ
ARN
Transcripción Complejo cerrado
Figura 11.28 El sistema de numeración convencional de los Formación de un

complejo abierto.
promotores. El primer nucleótido que actúa como plantilla para la transcripción
se designa como 1. La numeración de los nucleótidos a la izquierda de este –35
punto tiene una dirección negativa, mientras que la numeración de la derecha –10
tiene una dirección positiva. Por ejemplo, el nucleótido que está inmediatamente Enzima del núcleo de
factor sigma la ARN polimerasa
a la izquierda del 1 nucleótido se numera 1, y el nucleótido a la derecha del 1
nucleótido se numera 2. No hay ningún nucleótido cero en este sistema de
numeración. En muchos
Complejo abierto
promotores bacterianos, los elementos de secuencia en las regiones 35 y
10 juegan un papel clave en la promoción de la transcripción. Liberación del
factor sigma
–35
Transcripción en eucariotas Los –10 Enzima del núcleo de

la ARN polimerasa
procesos de transcripción en microorganismos eucariotas (y en otras células
eucariotas) difieren en varios aspectos de la transcripción bacteriana. Hay
tres ARN polimerasas principales, no una como en Bacteria. La ARN factor sigma
polimerasa II, asociada con la cromatina en la matriz nuclear, es responsable
Transcripción de ARN
de la síntesis de ARNm. Las polimerasas I y III sintetizan rRNA y tRNA,
respectivamente (tabla 11.3).
Figura 11.29 La iniciación de la transcripción en bacterias.
La ARN polimerasa II eucariótica es un gran agregado, de al menos 500.000
El factor sigma de la holoenzima de la ARN polimerasa es responsable de
daltons de tamaño, con unas 10 o más subunidades. Se ha determinado la
colocar correctamente la enzima central en el promotor.
estructura atómica de la ARN polimerasa II de levadura de 10 subunidades
El factor Sigma reconoce dos regiones en el promotor, una centrada en 35 y la
asociada con el ADN y el ARN (figura 11.27c, d).
otra centrada en 10. Una vez colocado correctamente, el ADN en la región 10 se
El ADN que ingresa se sujeta en una abrazadera que se cierra sobre él. Un
desenrolla para formar un complejo abierto. El factor sigma se disocia de la
ion de magnesio se encuentra en el sitio activo y el híbrido de ARN de ADN
enzima central cuando comienza a transcribir el gen.
de 9 pares de bases en la burbuja de transcripción se une en una hendidura
formada por las dos subunidades de polimerasa grandes. El ARN recién
sintetizado sale de la polimerasa por debajo de las regiones del timón y el
párpado. Los trifosfatos de nucleósidos del sustrato probablemente alcanzan
el sitio activo a través de un poro en el complejo. A diferencia de la polimerasa El complejo proteico contiene la proteína de unión a TATA (TBP). Se ha
bacteriana, la ARN polimerasa II requiere factores de transcripción adicionales demostrado que TBP dobla bruscamente el ADN en la unión. Esto hace que
para reconocer a sus promotores (figura 11.33). La polimerasa se une cerca el ADN sea más accesible a otros factores de iniciación. Se han descubierto
del punto de inicio; los factores de transcripción se unen al resto del promotor. una variedad de factores de transcripción generales, factores específicos de
Los promotores eucarióticos también difieren de los de las bacterias. Tienen promotores y elementos promotores en diferentes células eucarióticas. Cada
combinaciones de varios elementos. Tres de las más comunes son la caja gen eucariótico parece estar regulado de manera diferente, y se requerirá
TATA (ubicada unos 30 pares de bases antes o aguas arriba del punto de más investigación para comprender completamente la regulación de la
inicio) y las cajas GC y CAAT ubicadas entre 50 y 100 pares de bases aguas transcripción de genes eucarióticos.
arriba del sitio de inicio (figura 11.34). El factor de transcripción TFIID (figura A diferencia del ARNm bacteriano, el ARNm eucariótico surge de la
11.33) juega un papel importante en el inicio de la transcripción en eucariotas. modificación postranscripcional de grandes precursores de ARN, de
este multi alrededor de 5000 a 50 000 nucleótidos de largo, a veces llamados heterogéneos.
Transcripción 273
5ÿ 3ÿ Rebobinado de ADN
ARN rico en U en
hebra de
el híbrido ARN-ADN
codificación ARN polimerasa 5ÿ
Hilo de Complejo abierto

plantilla
Stem-loop que provoca
Desenrollado del ADN
ARN polimerasa para hacer una pausa NusA
Dirección de
transcripción Mientras la ARN polimerasa se detiene, la
ARN
secuencia rica en U en el complejo abierto no
5'
puede mantener unido el híbrido ARN-ADN. Se
3ÿ produce la terminación.
Región híbrida terminador
ARN-ADN 5ÿ
Nucleótido que se
agrega al extremo 3 '
del ARN
5ÿ tu tu
Trifosfatos de tu 3ÿ
tu
ribonucleósidos
Puntos clave:
La ARN polimerasa se desliza a lo largo del ADN, creando un complejo

abierto a medida que se mueve.
Figura 11.31 Terminación intrínseca de la transcripción. Este tipo de
La cadena de ADN conocida como cadena molde se utiliza para hacer una copia terminador contiene una secuencia rica en U aguas abajo de un tramo de
complementaria de ARN como un híbrido ARN-ADN.
nucleótidos que puede formar una estructura de tallo-bucle y tallo. La
El ARN se sintetiza en una dirección de 5 ' a 3' utilizando ribonucleósidos trifosfatos formación del bucle de tallo en el ARN recién sintetizado hace que la ARN
como precursores. Se libera pirofosfato (no mostrado). polimerasa se detenga. Esta pausa está estabilizada por la proteína NusA.
Los enlaces UA en la región rica en uracilo no son lo suficientemente fuertes
La regla de complementariedad es la misma que la regla AT/GC excepto que U se
sustituye por T en el ARN. para mantener juntos el ARN y el ADN. Por lo tanto, el ARN, el ADN y la
ARN polimerasa se disocian y se detiene la transcripción.
Figura 11.30 La "burbuja de transcripción".
cesando Los genes divididos o interrumpidos tienen exones (secuencias

ARN nuclear nuevo (hnRNA) (figura 11.35). A medida que se sintetiza el expresadas), regiones que codifican ARN que terminan en el ARNm.
hnRNA, se agrega un casquete 5ÿ . Una vez que se completa la síntesis, el Los exones están separados unos de otros por intrones (secuencias
ARN precursor se modifica mediante la adición de una cola poli-A 3 '. intermedias), secuencias que codifican ARN que nunca se traduce en
También se procesa, si es necesario, para eliminar los intrones. La tapa 5 proteína (figura 11.37). La transcripción de ARN inicial contiene secuencias
'es el nucleótido inusual 7-metilguanosina. Está unido al 5ÿ-hidroxilo del tanto de exones como de intrones. Los genes que codifican para rRNA y
hnRNA por un enlace trifosfato (figura 11.36). La adición de una cola poli-A tRNA también pueden interrumpirse. Con excepción de las cianobacterias y
se inicia mediante una endonucleasa que acorta el hnRNA y genera un grupo Archaea (véanse los capítulos 20 y 21), no se han encontrado genes
3ÿ-OH. La enzima poliadenilato polimerasa luego cataliza la adición de ácido interrumpidos en procariotas.
adenílico al extremo 3' del hnRNA para producir una secuencia poli-A de Los intrones se eliminan del transcrito de ARN inicial (también llamado
unos 200 nucleótidos de largo. Las funciones de la tapa 5 'y la cola poli-A no pre-ARNm o transcrito primario) mediante un proceso llamado empalme de
están completamente claras. El casquete 5' del mRNA eucariótico puede ARN (figura 11.37). Los bordes del intrón están claramente marcados para
promover la unión inicial de los ribosomas al mRNA. También puede proteger una eliminación precisa. Las uniones exón-intrón tienen una secuencia GU
el ARNm del ataque enzimático. en el límite 5' del intrón y una secuencia AG en su extremo 3'. Estas dos
secuencias definen las uniones de empalme y son reconocidas por moléculas
Poly-A protege el ARNm de la rápida degradación enzimática. La cola poli-A de ARN especiales. El núcleo contiene varias moléculas pequeñas de ARN
debe acortarse a unos 10 nucleótidos antes de que el ARNm pueda nuclear (snRNA) , de aproximadamente 60 a 300 nucleótidos de largo.
degradarse. Poly-A también parece ayudar en la traducción del ARNm. Estos forman complejos con proteínas para formar pequeñas partículas
nucleares de ribonucleoproteína llamadas snRNP o snurps. Algunos de los
Como se señaló anteriormente, muchos genes eucarióticos se dividen snRNP reconocen las uniones de empalme y aseguran la precisión del
o interrumpen, lo que conduce al último tipo de progenitor postranscripcional. empalme. Por ejemplo, U1-snRNP reconoce la unión de empalme 5ÿ y U5-snRNP reco
ÿ sitio de reconocimiento
Tabla 11.3 ARN polimerasas eucarióticas
terminador
Enzima Ubicación Producto
5ÿ
ARN polimerasa I nucléolo ARNr (5.8S, 18S, 28S) rodera
ARN polimerasa II cromatina, ARNm

matriz nuclear 3ÿ
ARN polimerasa III Cromatina, matriz ARNt, ARNr 5S sitio de

nuclear reconocimiento ÿ en el ARN
La proteína ÿ se une al sitio rut

en el ARN y se mueve hacia el extremo
3' , siguiendo a la ARN polimerasa.
la unión 3ÿ. El empalme del pre-ARNm se produce en un gran complejo llamado espliceosoma
que contiene el pre-ARNm, al menos cinco tipos de snRNP y factores de empalme que no son
snRNP. A veces, se empalmará un pre-ARNm para que permanezcan diferentes patrones de
exones. Este empalme alternativo permite que un solo gen codifique más de una proteína. El 5ÿ
patrón de empalme determina qué proteína se sintetizará. Los patrones de empalme pueden ser
específicos del tipo de celda o determinados por las necesidades de la celda. La importancia del 3ÿ
empalme alternativo en eucariotas multicelulares se enfatizó cuando se descubrió que el genoma
ÿ proteína
humano tiene solo unos 20.000 genes en lugar de los 100.000 anticipados. Se cree que el empalme
La ARN polimerasa llega al terminador.
alternativo es un mecanismo por el cual las células humanas producen una gran variedad de
Una estructura de tallo-bucle hace que la ARN
proteínas. polimerasa se detenga.
Como se acaba de mencionar, algunos genes de ARNr también tienen intrones. Algunas de
5ÿ terminador
estas moléculas de pre-ARNr se autoempalman, es decir, el pre-ARNr es una ribozima (Microbial
Tidbits 11.2). Thomas Cech descubrió por primera vez que el pre-ARNr del protozoo ciliado Tetrahy
mena thermophila se autoempalma. Sidney Altman luego demostró que la ribonucleasa P, que 3ÿ
Vástago-bucle
escinde un fragmento de un extremo del pre-ARNt, contiene un fragmento de ARN que cataliza la
reacción.
La ARN polimerasa se detiene
debido a su interacción con la
Desde entonces, se han descubierto varios otros intrones de ARNr que se autoempalman. Cech y Altman estructura de bucle de tallo. La
proteína ÿ alcanza el complejo abierto
recibieron el Premio Nobel de Química de 1989 por estos descubrimientos. Evolución microbiana (sección
y separa el híbrido ARN-ADN.
19.1)
Transcripción en Archaea La transcripción en

3ÿ
Archaea es similar y distinta de lo que se observa en bacterias y eucariotas. Cada archaeon tiene
una única ARN polimerasa responsable de transcribir todos los genes en la célula (como en las
bacterias). Sin embargo, la ARN polimerasa es más grande y contiene más subunidades, muchas 5ÿ
de las cuales son similares a las subunidades de la ARN polimerasa II de los eucariotas. Los
promotores de los genes de las arqueas son similares a los de los eucariotas por tener una caja
TATA; la unión de la polimerasa de ARN de arqueas a su promotor requiere una proteína de unión Figura 11.32 Terminación de la transcripción dependiente del
a TATA, al igual que en los eucariotas. Al igual que la contraparte eucariótica, la ARN polimerasa factor Rho ( ). El sitio rut significa sitio de utilización de rho.
de las arqueas también necesita varios factores de transcripción adicionales para funcionar
correctamente. Además, algunos genes de arqueas tienen intrones, que deben eliminarse mediante
1. Defina los siguientes términos: ARNm poligénico, enzima central de ARN polimerasa,
procesamiento postranscripcional. Finalmente, las moléculas de ARNm producidas por transcripción
factor sigma, holoenzima de ARN polimerasa y factor rho.
en Archaea suelen ser policistrónicas, como en Bacteria. Esta mezcla intrigante de características
2. Defina o describa la modificación postranscripcional, el ARN nuclear heterogéneo, la
bacterianas y eucarióticas en Archaea ha alimentado una gran cantidad de especulaciones sobre
secuencia 3'poli-A, la terminación en 5', los genes divididos o interrumpidos, el exón, el
la evolución de los tres dominios de la vida. Introducción a la
intrón, el empalme del ARN, el ARNsn, el empalmesoma y la ribozima.
3. Describir cómo la ARN polimerasa transcribe el ADN bacteriano. ¿Cómo funciona el poli?
¿Merase sabe cuándo comenzar y finalizar la transcripción?
4. ¿En qué se diferencian las ARN polimerasas y los promotores bacterianos de los de
Archaea y eucariotas?
Archaea: Genética y biología molecular (sección 20.1)
El código genético 275
TFIID se une a la caja TATA. TFIID es un

11.7 EL CÓDIGO GENÉTICO
complejo de proteínas que incluye la proteína de
unión a TATA (TBP) y varios factores asociados a El paso final en la expresión de genes que codifican proteínas es la traducción.
TBP (TAF).
La secuencia de nucleótidos del ARNm se traduce en la secuencia de
TFIID
aminoácidos de una cadena polipeptídica. La síntesis de proteínas se llama
traducción porque es un proceso de decodificación. La información codificada
caja tata en el lenguaje de los ácidos nucleicos debe reescribirse en el lenguaje de las
TFIIB se une a TFIID. proteínas. Por lo tanto, antes de discutir la síntesis de proteínas, examinaremos
la naturaleza del código genético.
TFIID TFIIB
Establecimiento del Código Genético

TFIIB actúa como un puente para La comprensión de que el ADN es el material genético desencadenó esfuerzos
unirse a la ARN polimerasa II/TFIIF.
para comprender cómo se almacenan y organizan las instrucciones genéticas
TFIID en la molécula de ADN. Los primeros estudios sobre la naturaleza del código
TFIIB genético mostraron que la secuencia de bases del ADN corresponde a la
TFIIF
secuencia de aminoácidos del polipéptido especificado por el gen.
Es decir, las secuencias de nucleótidos y aminoácidos son colineales.
También se hizo evidente que muchas mutaciones son el resultado de
cambios de aminoácidos individuales en una cadena polipeptídica. Sin
ARN polimerasa
embargo, la naturaleza exacta del código aún no estaba clara.
TFIIE y TFIIH se unen a Las consideraciones teóricas dirigieron gran parte del trabajo inicial para
la ARN polimerasa II.
descifrar el código. Los científicos razonaron que debido a que normalmente
solo 20 aminoácidos están presentes en las proteínas, debe haber al menos
TFIID
TFIIB 20 palabras clave diferentes en el ADN. Por lo tanto, el código debe estar
TFIIF contenido en alguna secuencia de los cuatro nucleótidos que se encuentran
complejo de
TFIIH comúnmente en el ADN.
TFIIE preiniciación
Si las palabras del código tuvieran dos nucleótidos de longitud, habría
solo 16 combinaciones posibles (42 ) de los cuatro nucleótidos y esto no sería
suficiente para codificar los 20 aminoácidos. Por lo tanto, una palabra clave,
TFIIH actúa como una helicasa para formar o codón, tenía que constar de al menos tripletes de nucleótidos, aunque esto
un complejo abierto. TFIIH también fosforila el dominio daría 64 combinaciones posibles (43 ), muchas más que el mínimo de 20
C-terminal (CTD) de la ARN polimerasa II. La
necesario para especificar los aminoácidos comunes. La investigación
fosforilación de CTD rompe el contacto entre TFIIB y la
ARN polimerasa II. Se publican TFIIB, TFIIE y TFIIH. finalmente lo confirmó y el código fue descifrado a principios de la década de
1960 por Marshall Nirenberg, Heinrich Matthaei, Philip Leder y Har Gobind
Khorana. En 1968, Nirenberg y Khorana compartieron el Premio Nobel con
TFIID
Robert Holley, la primera persona en secuenciar un ácido nucleico (fenilalanil-
TFIIF tRNA).
Complejo abierto
TFIIB
Organización del código El código
genético, presentado en forma de ARN, se resume en la tabla 11.4. Tenga
TFIIE CTD de ARN
PO4
TFIIH en cuenta que hay degeneración de código. Es decir, hay hasta seis
polimerasa II
PO4 codones diferentes para un aminoácido dado. Solo 61 codones, los codones
sentido, incorporan directamente los aminoácidos en la proteína.
Figura 11.33 Inicio de la transcripción en eucariotas. Los tres codones restantes (UGA, UAG y UAA) están implicados en la
La caja TATA es un componente importante de los promotores eucarióticos. La terminación de la traducción y se denominan codones de parada o codones
proteína de unión a TATA (TBP), que es un componente de un complejo de proteínas sin sentido. A pesar de la existencia de 61 codones con sentido, no hay 61
llamado TFIID (factor de transcripción IID), se une a la caja TATA. tRNA diferentes, uno para cada codón. El nucleótido 5' en el anticodón puede
Tenga en cuenta que se requieren muchos otros factores de transcripción para variar, pero generalmente, si los nucleótidos en la segunda y tercera posición
iniciar la transcripción, a diferencia de Bacteria, donde solo se necesita el factor del anticodón complementan las dos primeras bases del codón de ARNm, un
sigma. El inicio de la transcripción en Archaea es similar al observado en eucariotas. aminoacil-ARNt con el aminoácido adecuado se unirá al complejo ARNm-
ribosoma. . Este patrón es evidente al inspeccionar los cambios en el
aminoácido especificado
transcripcional
caja tata sitio de inicio
Secuencias de cadena codificante: TATAAAA Py2 Py A 5
–100 Cajas GC + CAAT –50 –25 +1
ADN
Transcripción
Figura 11.34 La caja TATA y otros elementos de los promotores eucarióticos.
ADN 11.8 TRADUCCIÓN

La traducción implica la decodificación del ARNm y la unión covalente
aminoácidos juntos para formar un polipéptido. Así como el ADN y
ARN polimerasa II La síntesis de ARN procede en una dirección (5ÿ a 3ÿ), al igual que
síntesis de proteínas. Los polipéptidos se sintetizan mediante la adición de
aminoácidos al final de la cadena con el grupo -carboxilo libre
pre-ARNm 5ÿ 3ÿ (el extremo C-terminal). Es decir, comienza la síntesis de polipéptidos.

con el aminoácido al final de la cadena con un grupo amino libre
tapa de 5ÿ
(el N-terminal) y se mueve en la dirección del C-terminal. El ribosome es el sitio de
endonucleasa síntesis de proteínas. La síntesis de proteínas no es sólo
bastante preciso pero también muy rápido. En E. coli la síntesis ocurre en un
tasa de al menos 900 residuos por minuto; la traducción eucariótica es
5ÿ 3ÿ más lento, unos 100 residuos por minuto. Proteínas (anexo I)
Las células que crecen rápidamente deben usar cada ARNm con gran eficiencia
para sintetizar proteínas a un ritmo suficientemente rápido. Los dos
atp
poliadenilato subunidades del ribosoma (la subunidad 50S y la subunidad 30S en
polimerasa
bacterias y arqueas; 60S y 40S en eucariotas) están libres en el citoplasma si no se
sintetiza proteína. se juntan para
ÿ
ÿ
forman el ribosoma completo sólo cuando se produce la traducción. Frecuentemente,
5 AAAA 3
los ARNm se combinan simultáneamente con varios ribosomas, cada ribosoma lee el
mensaje de ARNm y sintetiza
intrones
empalme un polipéptido. A tasas máximas de uso de ARNm, puede haber un ribo cada 80
nucleótidos a lo largo del mensajero o hasta 20
ribosomas leyendo simultáneamente un ARNm que codifica para un
Polipéptido de 50.000 dalton. Un complejo de ARNm con varios ribosomas se
ARNm 5ÿ AAAA 3ÿ
denomina polirribosoma o polisoma (figura 11.39).
Los polisomas están presentes tanto en procariotas como en eucariotas. Bac teria y
Figura 11.35 Síntesis de ARNm eucariótico. La producción Archaea pueden aumentar aún más la eficiencia de la expresión génica a través de la
de ARN mensajero eucariótico. El límite de 5 'se agrega poco después transcripción y traducción acopladas (figura
comienza la síntesis del ARNm. 11.39b). Mientras la ARN polimerasa está sintetizando un ARNm, los ribosomas ya
pueden unirse al mensajero para que la transcripción y la traducción ocurran
simultáneamente. Transcripción acoplada
con variación en la tercera posición (tabla 11.4). esto un poco y la traducción es posible en los procariotas porque una envoltura nuclear no separa
el emparejamiento de bases sueltas se conoce como bamboleo y alivia las células de la la maquinaria de traducción del ADN como lo hace.
necesidad de sintetizar tantos ARNt (figura 11.38). Tambalearse también lo hace en eucariotas (ver figura 3.16).
disminuye los efectos de las mutaciones del ADN.
Transferencia de ARN y activación de aminoácidos

1. ¿Por qué un codón debe contener al menos tres nucleótidos?
La primera etapa de la síntesis de proteínas es la activación de aminoácidos, un
2. Defina lo siguiente: degeneración de código, codón de sentido, parada o sin sentido
Proceso en el que los aminoácidos se unen a las moléculas de ARN de transferencia.
codón y bamboleo.
Estas moléculas de ARN normalmente tienen entre 73 y 93 nu
Traducción 277
O CH3
norte
hn
H2N O O O
norte norte
CH2 O P PP O O O CH 2
OH OH O Base 1
O– O– O–
O
O OCH3
7-metilguanosina O PAGS
CH2
Base O 2
O–
oh oh
•
•
•
Figura 11.36 La tapa 5' del ARNm eucariótico. Los grupos metilo están en azul.
EE E I I I mi
plantilla de ADN
exón intrón
EE E I I I mi
Transcripción primaria de ARNm
Formación de lazo espliceosomas

Ocurre en
el núcleo
Transcripción
procesada EE E mi
por enzimas
especiales
Lariat extirpado
Exones
Liberación de espliceosomas
empalmados juntos
E EEE
Ocurre en
el citoplasma
La transcripción de ARNm
ahora se puede traducir
Figura 11.37 Empalme de moléculas de ARNm eucariótico.
cleotides de longitud y poseen varios rasgos estructurales característicos. aminoácido activado en el extremo 3ÿ del tRNA. El extremo 3ÿ de todos
La estructura del tRNA se vuelve más clara cuando su cadena se pliega los tRNA tiene la misma secuencia —C—C—A; el aminoácido está
de tal manera que maximiza el número de pares de bases normales, lo unido al ácido adenílico terminal. En el otro extremo de la hoja de trébol
que da como resultado una conformación de hoja de trébol de cinco está el brazo del anticodón, que contiene el triplete del anticodón
tallos y bucles (figura 11.40). El aceptor o tallo de aminoácido contiene el complementario al triplete del codón del ARNm. Hay dos
Cuadro 11.4 El código genético

Segunda Posición
UC A GRAMO
UUU UCU UAU UGU tu

tu
CUU f Phe UCC UAC de Tyr CGU f Cys C
Ser
UUA UCA SAU PARADA UGA A
UUG f Leu UCG t UAG f PARAR Compra UGG GRAMO
CUU UCC CAU UGE tu

CUC CCC CAC f Su CGC C
C Leu Pro Argentina
ACU CCA CAA CGA A
CUG t CCG t CAG f Gln CGG t GRAMO
AUU UCA UCA AGU tu

A ABC isla CAC CAA f Asn CAG f Ser C
Thr
AUA _ ACA AAA AGA A
AGO Met CAG t AAG f Lys AGG fArg GRAMO
GUU GCU GAU GGU tu

GUC CCG CAG f Asp GGC C
valle ala gly
GUG t GGG t
GRAMO
GUA GCA AGA GGA A

GCG t GAG f Glu GRAMO
a
El código se presenta en forma de ARN. Los codones corren en la dirección 5ÿ a 3ÿ. Ver texto para más detalles.
gly 5ÿ gly
3ÿ
O O
ARNt
CCG CCG
5ÿ 3ÿ
ARNm GGU GGC
(a) Emparejamiento de bases de un ARNt de glicina con dos codones debido a la oscilación
ÿ ÿ
Codones de ARNm de glicina: GGU, GGC, GGA, GGG (5 3)

ÿ ÿ
Anticodones de ARNt de glicina: CCG, CCU, CCC (3 5)
(b) Codones y anticodones de glicina
Figura 11.38 Oscilación y codificación. El uso de bamboleo en la codificación del aminoácido glicina. (a) Debido al bamboleo, G en la posición 5' del
anticodón puede emparejarse con C o U en la posición 3' del codón. Por lo tanto, dos codones pueden ser reconocidos por el mismo ARNt. (b) Debido
a la oscilación, solo se necesitan tres anticodones de ARNt para traducir los cuatro codones de glicina (Gly).
Traducción 279
Polipéptidos
en crecimiento
ARN
polimerasa
2
3
Complejo
polirribosómico
4
5 7
6
Comienzo
(a) (B)
Figura 11.39 Transcripción y traducción acopladas en procariotas. (a) Una micrografía electrónica de transmisión que muestra la transcripción y la traducción acopladas. (b)
Una representación esquemática de la transcripción y traducción acopladas. A medida que se transcribe el ADN, los ribosomas se unen al extremo 5' libre del ARNm. Por lo tanto, la
traducción se inicia antes de que se complete la transcripción. Tenga en cuenta que hay múltiples ribosomas unidos al ARNm, formando un polirribosoma.
A extremo 3ÿ
extremo 5ÿ
Vástago aceptor
Vástago TÿC
Py A
Vástago D brazo TÿC
tu C
PU PU
A
brazo D Bucle TÿC
GRAMO
C
Bucle D
GRAMO
Py T ÿ
GRAMO
A
brazo variable
Figura 11.40 Estructura del ARNt.

La estructura de hoja de trébol para tRNA en Tallo anticodón
Py
procariotas y eucariotas. Las bases que se
tu PU brazo anticodón
encuentran en todos los ARNt están en
diamantes; Las posiciones de purina y
5ÿ 3ÿ Bucle de anticodón
pirimidina en todos los ARNt se etiquetan
como Pu y Py respectivamente. anticodón
otros brazos grandes: el brazo D o DHU tiene el inusual nucleósido de

pirimidina dihidrouridina; y el brazo T o TC tiene ribotimidina (T) y
pseudouridina ( ), los cuales son exclusivos de tRNA. Finalmente, la hoja
de trébol tiene un brazo variable cuya longitud cambia con la longitud
total del tRNA; los otros brazos son bastante constantes en tamaño.
Las moléculas de ARN de transferencia se pliegan en una estructura

en forma de L (figura 11.41). El aminoácido se mantiene en un extremo
de la L, el anticodón se coloca en el extremo opuesto y la esquina de la
L está formada por los bucles D y T. Debido a que debe haber al menos
un tRNA para cada uno de los 20 aminoácidos incorporados en las
proteínas, se necesitan al menos 20 moléculas de tRNA diferentes.
Actualmente existen más especies de ARNt.
Los aminoácidos se activan para la síntesis de proteínas a través
de una reacción catalizada por aminoacil-tRNA sintetasas (figura 11.42).
mg2 +
Aminoácido ARNt ATP ÿÿÿ
aminoacil-tRNA AMP PPi
Al igual que ocurre con la síntesis de ADN y ARN, la reacción se completa

cuando el producto pirofosfato se hidroliza a dos ortofosfatos. El Figura 11.42 Una aminoacil-tRNA sintetasa. Un modelo de glutamil-
aminoácido se une al 3'-hidroxilo del ácido adenílico terminal en el tRNA tRNA sintetasa de E. coli complejado con su tRNA y ATP.
mediante un enlace de alta energía (figura 11.43) y se transfiere La enzima está en azul, el ARNt en rojo y amarillo y el ATP en verde.
fácilmente al final de una cadena peptídica en crecimiento. Por eso se
dice que el aminoácido está activado.
Hay al menos 20 aminoacil-tRNA sintetasas, cada una específica
para un solo aminoácido y sus tRNA (tRNA cognados). Es fundamental
que cada ARNt se una al aminoácido correspondiente porque si se une
un aminoácido incorrecto a un ARNt, se incorporará a un polipéptido en
lugar del aminoácido correcto.
La maquinaria de síntesis de proteínas reconoce solo el anticodón del R O
aminoacil-tRNA y no puede decir si está unido el aminoácido correcto.
H2N CH C
Algunas aminoacil-tRNA sintetasas corrigen como lo hacen las ADN oh oh
polimerasas. Si se une el aminoácido incorrecto al ARNt, la enzima Aminoácidos
hidroliza el aminoácido del ARNt en lugar de liberar el producto incorrecto.
O adenina
CH2
Vástago TC ÿ Vástago aceptor
O–
Bucle 64
54 1
T Cÿ
OO PAGS
56 O–
72
ÿ
Bucle D 3 final C
7 aceptador
20 69
5ÿ
Bucle 12
variable Vástago D
44
26
Tallo
anticodón
38
32 anticodón
anticodón
Figura 11.41 Conformación del ARN de transferencia. La
estructura tridimensional del ARNt. Las diversas regiones se Figura 11.43 Aminoacil-tRNA. El aminoácido está unido al 3ÿ-hidroxilo
distinguen con diferentes colores. del ácido adenílico por un enlace de alta energía (rojo).
Traducción 281
el ribosoma (excepto en la mitocondria y el cloroplasto) y la síntesis de proteínas arqueales

comienzan con un iniciador especial metionil-tRNAMet. Aunque la mayoría de
El proceso real de síntesis de proteínas tiene lugar en los ribosomas que
las bacterias inician la síntesis de proteínas con formilmetionino, el grupo
sirven como bancos de trabajo, con el ARNm actuando como modelo. Los
formilo no permanece sino que se elimina hidrolíticamente. De hecho, se
ribosomas procarióticos tienen un valor de sedimentación de 70S y una masa
pueden eliminar de uno a tres aminoácidos del extremo amino terminal del
de 2,8 millones de daltons. Una célula de E. coli que crece rápidamente puede
polipéptido después de la síntesis.
tener entre 15 000 y 20 000 ribosomas, aproximadamente el 15 % de la masa celular.
La etapa de iniciación es crucial para la traducción del ARNm en el
Cada una de las dos subunidades del ribosoma procariótico es una
polipéptido correcto (figura 11.47). En las bacterias, comienza cuando el
estructura extraordinariamente compleja construida a partir de una o dos
iniciador N-formilmetionil-tRNAfMet (fMet-tRNA) se une a una subunidad
moléculas de ARNr y muchos polipéptidos (figura 11.44). La forma de las
subunidades y su asociación para formar el ribosoma 70S se muestran en la ribosomal 30S libre. Como se señaló anteriormente, la subunidad 30S posee
una molécula de ARNr 16S con secuencias de nucleótidos que son
figura 11.45. La región del ribosoma directamente responsable de la traducción
complementarias a la secuencia de Shine-Dalgarno en la secuencia líder del
se denomina dominio de traducción (figura 11.45d). Ambas subunidades
ARNm. Recuerde que el líder se transcribe pero no se traduce. Esto se debe
contribuyen a este dominio. La cadena peptídica en crecimiento emerge de la
a que el papel de la secuencia líder es alinear el ARNm con bases
subunidad grande en el dominio de salida.
complementarias en el ARNr 16S de la subunidad ribosómica 30S de modo
Está situado en el lado de la subunidad opuesto a la protuberancia central
que el codón para el fMet-ARNt iniciador se traduzca primero. Los ARN
(figura 11.45b). Los estudios de difracción de rayos X ahora han confirmado
mensajeros tienen un codón iniciador especial (AUG o, a veces, GUG) que
esta imagen general de la estructura de los ribosomas (figura 11.45e-g).
se une específicamente con el anticodón fMet-tRNA. Finalmente, la subunidad
Se cree que el ARN ribosomal tiene tres funciones. Obviamente contribuye
a la estructura del ribosoma. El ARNr 16S de la subunidad 30S es necesario 50S se une a la subunidad 30S-mRNA formando un complejo activo ribosoma-
mRNA. El fMet-tRNA debe colocarse en el sitio peptidilo o P (consulte la
para el inicio de la síntesis de proteínas en las bacterias.
descripción del ciclo de elongación). Existe cierta incertidumbre acerca de la
Hay evidencia de que el extremo 3ÿ del 16S rRNA forma complejos con un
secuencia de iniciación exacta, y el ARNm puede unirse antes que el ARNt-
sitio en el mRNA llamado secuencia Shine-Dalgarno, que se encuentra en el
fMet en las bacterias. La iniciación eucariótica y archaeal parece comenzar
sitio de unión al ribosoma (RBS). Esto ayuda a posicionar el ARNm en el
ribosoma. El rRNA 16S también se une a una proteína necesaria para iniciar con la unión del iniciador Met-tRNA a la subunidad pequeña, seguida por la
unión del mRNA.
la traducción, el factor de iniciación 3 y el extremo 3' CCA del aminoacil-tRNA.
Finalmente, parece que el rRNA 23S tiene un papel catalítico en la síntesis de
En Bacteria, se requieren tres factores de iniciación de proteínas (figura
proteínas.
11.47). El factor de iniciación 3 (IF-3) evita que la subunidad 30S se una a la
subunidad 50S y promueve la unión adecuada del ARNm a la subunidad 30S.
Inicio de la síntesis de proteínas Al igual IF-2, el segundo factor de iniciación, se une a GTP y fMet-tRNA y dirige la
que la transcripción, la síntesis de proteínas puede dividirse en tres etapas: unión de fMet-tRNA al sitio P de la subunidad 30S. GTP se hidroliza durante
iniciación, elongación y terminación. En la etapa de iniciación, E. coli y la la asociación de las subunidades 50S y 30S. El tercer factor de iniciación, IF-1,
mayoría de las bacterias comienzan la síntesis de proteínas con un aminoacil- parece ser necesario para la liberación de IF-2 y GDP del ribosoma 70S
tRNA especialmente modificado, N-formilmetionil-tRNAfMet (figura 11.46). completo. IF-1 puede ayudar en la unión de la subunidad 50S a la subunidad
Debido a que el -amino está bloqueado por un grupo formilo, este aminoacil- 30S. También bloquea la unión del ARNt al sitio A. Los eucariotas requieren
tRNA puede usarse solo para la iniciación. Cuando se va a añadir metionina a más factores de iniciación; por lo demás, el proceso es bastante similar al de
una cadena polipeptídica en crecimiento, se emplea un metionil-tRNAMet Bacteria.
normal . Síntesis de proteínas eucarióticas
20nm
70S
(2,8 106 dalton)
30S 50S
(0,9 106 dalton) (1.8 106 dalton)
ARNr 16S ARNr 5S

+ +
21 cadenas polipeptídicas ARNr 23S
+
Figura 11.44 El ribosoma 70S. 34 cadenas polipeptídicas
protuberancia central
Hendido
Cabeza EF-Tu
Plataforma EF-G
Base
ARNt
Mensajero
ARN
subunidad pequeña subunidad grande Ribosoma
dominio
(30S) (50S) (70S)
traslacional
Cresta protuberancia central
Cabeza Valle Tallo Salir

del dominio
Plataforma
Proteína
naciente
(a) (B) (C) (D)
(mi) (F) (gramo)
Figura 11.45 Estructura del ribosoma procariótico. Las partes (a) a (d) ilustran la organización de los ribosomas de E. coli; las partes (e)–(g) muestran la
estructura molecular del ribosoma de Thermus thermophilus. (a) La subunidad 30S. (b) La subunidad 50S. (c) El ribosoma 70S completo. ( d ) Un diagrama
de la estructura ribosómica que muestra los dominios de traducción y salida. Se indican las ubicaciones del factor de elongación y la unión del ARNm. La
cadena peptídica en crecimiento probablemente permanece desplegada y extendida hasta que abandona la subunidad grande. ( e ) Vista de la interfaz interior
de la subunidad 30S del ribosoma 70S de T. thermophilus que muestra las posiciones de los ARNt del sitio A, P y E. (f) Vista de la interfaz interior de la
subunidad 50S de T. thermophilus y partes de sus tres ARNt. ( g ) El ribosoma 70S completo de T. thermophilus visto desde el lado derecho con la subunidad
30S a la izquierda y la subunidad 50S a la derecha. El brazo anticodón del ARNt del sitio A es visible en la cavidad de la interfaz. Los componentes de las
figuras (e)–(g) están coloreados de la siguiente manera: 16S rRNA, cian; ARNr 23S, gris; ARNr 5S, azul claro; proteínas 30S, azul oscuro; proteínas 50S,
magenta; y ARNt de sitio A, P y E (dorado, naranja y rojo, respectivamente).
Traducción 283
O El inicio de la síntesis de proteínas es muy elaborado. Aparentemente,

la complejidad es necesaria para garantizar que el ribosoma no comience
CH3S _ CH2 CH2 CH C tRNAfMet
a sintetizar una cadena polipeptídica en medio de un gen, un error
NUEVA HAMPSHIRE
desastroso.
C O
H
Elongación de la cadena polipeptídica Cada
adición de un aminoácido a una cadena polipeptídica en crecimiento
Figura 11.46 ARNt iniciador bacteriano. Bacteria utiliza el es el resultado de un ciclo de elongación compuesto por tres fases:
aminoacil-tRNA iniciador, N-formilmetionil-tRNA fMet . unión de aminoacil tRNA, reacción de transpeptidación y translocación.
El grupo formilo está en color. Archaea y eucariotas usan El proceso es asistido por factores especiales de elongación de
metionil-tRNA para la iniciación. proteínas (al igual que con el inicio de la síntesis de proteínas). En cada vuelta de
SI-3
3
fMet
fMet subunidad 30S
SI-2 Región
complementaria del ARNr 16S
GTP
2
2
ARNt iniciador ARNm 3ÿ
5ÿ
1
AGO
SI-1 o
GUG
3
fMet
5ÿ 1 3ÿ
complejo de iniciación 30S
Pi
subunidad 50S
SI-2
1 y PIB
2
Figura 11.47 Inicio de la síntesis de 2
proteínas. El inicio de la síntesis de sitio p
proteínas en las bacterias. Se emplean las sitio electrónico
siguientes abreviaturas: IF-1, IF-2 e IF-3

Un sitio
representan los factores de iniciación 1, 2 y 3; el
ARNt iniciador es N-formilmetionil-ARNtfMet. Las
ubicaciones ribosómicas de los factores de
iniciación se representan únicamente con fines
ilustrativos. No representan los sitios de unión 5ÿ
3ÿ
reales del factor de iniciación. Véase el texto para más discusión. complejo de iniciación 70S
El aminoácido correspondiente al codón de ARNm apropiado se agrega a hidrólisis de proteínas y GTP. El ribosoma cambia de forma a medida que
el extremo C-terminal de la cadena polipeptídica. El ciclo de elongación bacteriana se mueve hacia abajo en el ARNm en la dirección 5 'a 3'.
se describe a continuación.
El ribosoma tiene tres sitios para unirse a los tRNA: (1) el peptidil o sitio Terminación de la síntesis de proteínas
donador (el sitio P), (2) el aminoacilo o aceptor
La síntesis de proteínas se detiene cuando el ribosoma alcanza uno de los tres
(el sitio A) y (3) el sitio de salida (el sitio E). Al principio
codones sin sentido: UAA, UAG y UGA (figura 11.50). los
de un ciclo de elongación, el sitio peptídico se llena con N-formilmetionil-tRNAfMet
El codón sin sentido (parada) se encuentra en el ARNm inmediatamente antes de
o peptidil-tRNA, y los sitios aminoacilo y de salida están vacíos (figura 11.48). El
la región final. Tres factores de liberación (RF-1, RF-2 y
ARN mensajero es
RF-3) ayudan al ribosoma a reconocer estos codones. Porque
unido al ribosoma de tal manera que el codón adecuado interactúa con el ARNt del
no hay tRNA afín para un codón sin sentido, el ribosoma
sitio P (p. ej., un codón AUG para fMet-tRNA).
se detiene La peptidil transferasa hidroliza el péptido libre de
El siguiente codón está ubicado dentro del sitio A y está listo para aceptar
el ARNt en el sitio P y el ARNt vacío se libera. La hidrólisis de GTP parece ser
un aminoacil-tRNA.
necesaria durante esta secuencia, aunque
La primera fase del ciclo de elongación es el aminoacil-tRNA
puede no ser necesario para la terminación en bacterias. Luego, el ribo algunos se
fase vinculante. El aminoacil-tRNA correspondiente al codón
disocia de su ARNm y se separa en 30S y 50S
en el sitio A se inserta de modo que su anticodón esté alineado con el codón
subunidades IF-3 se une a la subunidad 30S para evitar que se vuelva a asociar
sobre el ARNm. Para esta inserción se requieren GTP y el factor de elongación EF-
con la subunidad 50S hasta la etapa adecuada en la iniciación
Tu, que transporta el aminoacil-tRNA al ribosoma. Cuando GTP se une a EF-Tu, la
es alcanzado. Así, las subunidades ribosómicas se asocian durante la proteína
proteína está en su estado activo.
sintetizar y separar después. La terminación de la eucariota.
estado y entrega aminoacil-tRNA al sitio A. esto es seguido
La síntesis de proteínas es similar excepto que sólo un factor de liberación
por hidrólisis de GTP, y el complejo EF-Tu GDP abandona el ribosoma. EF-Tu ·
parece estar activo.
PIB se convierte a EF-Tu GTP con la ayuda
La síntesis de proteínas es un proceso muy costoso. Tres GTP
de un segundo factor de elongación, EF-Ts. Posteriormente otro
moléculas probablemente se utilizan durante cada ciclo de elongación, y
aminoacil-tRNA se une a EF-Tu · GTP (figura 11.48).
se requieren dos enlaces ATP de alta energía para la activación de aminoácidos
La unión de aminoacil-tRNA al sitio A inicia el segundo
(el ATP se convierte en AMP en lugar de ADP). Por lo tanto
fase del ciclo de elongación, la reacción de transpeptidación (figura 11.48 y figura
Se requieren cinco enlaces de alta energía para agregar un aminoácido a un
11.49). Esto es catalizado por el rRNA 23S
cadena polipeptídica en crecimiento. GTP también se utiliza en la iniciación y
actividad ribozima llamada peptidil transferasa, ubicada en el
terminación de la síntesis de proteínas (figuras 11.47 y 11.50). Presumiblemente,
subunidad 50S. El grupo -amino del núcleo del aminoácido del sitio A ataca
este gran gasto de energía es necesario para asegurar la fidelidad de la síntesis
fílicamente al grupo -carboxilo del aminoácido C-terminal.
de proteínas. Se pueden tolerar muy pocos errores.
ácido en el ARNt del sitio P (figura 11.49). La cadena peptídica unida
Aunque el mecanismo de síntesis de proteínas es similar en
al tRNA en el sitio P se transfiere al sitio A como un péptido
Bacterias y eucariotas, los ribosomas bacterianos difieren sustancialmente
se forma un enlace entre la cadena y el aminoácido entrante.
de aquellos en eucariotas. Esto explica la eficacia de muchos
No se requiere una fuente de energía adicional para la formación de enlaces peptídicos
Agentes antibacterianos importantes. Ya sea la subunidad 30S o la 50S
porque el enlace que une un aminoácido con el tRNA tiene mucha energía
pueden ser afectados. Por ejemplo, la unión de estreptomicina al 30S
(figura 11.43). La evidencia sugiere fuertemente que el rRNA 23S contiene
subunidad ribosómica inhibe la síntesis de proteínas y provoca mRNA
la función peptidil transferasa y, por lo tanto, es una ribozima. Casi toda la proteína
leyendo mal La eritromicina se une a la subunidad 50S e inhibe
se puede eliminar de la subunidad 50S, dejando la
elongación de la cadena peptídica. Medicamentos antibacterianos (sección 34.4)
23S rRNA y fragmentos de proteína y el complejo restante todavía
Tiene actividad de peptidil transferasa. La estructura de alta resolución de
la subunidad grande se ha obtenido por cristalografía de rayos X.
Chaperonas de plegamiento de proteínas y moleculares
No hay proteína en la región del sitio activo. Una base de adenina específica Durante muchos años se creyó que los polipéptidos espontáneamente
parece participar en la catalización de la formación de enlaces peptídicos. Por lo tanto, la doblados en su forma nativa final, ya sea como fueron sintetizados
23S rRNA parece ser el componente principal del peptidil por los ribosomas o poco después de la finalización de la síntesis de proteínas.
transferasa y contribuye a las funciones de los sitios A y P. Aunque la secuencia de aminoácidos de un polipéptido determina
La fase final en el ciclo de elongación es la translocación. su conformación final, ahora está claro que las proteínas auxiliares especiales
Tres cosas suceden simultáneamente: (1) el peptidil-tRNA ayudar al polipéptido recién formado o naciente a plegarse a su
se mueve alrededor de 20 Å del sitio A al sitio P; (2) el ribosoma forma funcional adecuada. Estas proteínas, denominadas chaperonas moleculares
mueve un codón a lo largo del ARNm para que se posicione un nuevo codón o chaperonas, reconocen únicamente polipéptidos desplegados o
en el sitio A; y (3) el ARNt vacío abandona el sitio P. En lugar de proteínas parcialmente desnaturalizadas y no se unen a proteínas normales y funcionales
inmediatamente siendo expulsado del ribosoma cuando el ribosoma proteinas Su papel es fundamental porque la matriz citoplasmática es
se mueve a lo largo del mRNA, el tRNA vacío se mueve desde el P lleno de cadenas polipeptídicas nacientes y proteínas. Bajo tal
sitio al sitio E y luego sale del ribosoma. Las proteínas ribosómicas están condiciones, es bastante probable que las nuevas cadenas polipeptídicas a menudo
involucradas en estos movimientos de ARNt. el intrincado plegarse incorrectamente y agregarse para formar complejos no funcionales.
proceso también requiere la participación de la EF-G o translocase Las chaperonas moleculares suprimen el plegamiento incorrecto y pueden revertir
Traducción 285
Figura 11.48 Ciclo de elongación. aa

aa
El ciclo de elongación de la síntesis
sitio p
de proteínas. El ribosoma posee tres sitios,
un sitio peptídico o donante (sitio P), un sitio Peptidil-ARNt
Vaciar un sitio
aminoacilo o aceptor (sitio A) y un sitio de Automóvil club británico
salida (sitio E). La flecha debajo del ribosoma Sitio electrónico vacío
en el paso de translocación muestra la

dirección del movimiento del ARNm. Ver
EF-Tu
texto para más detalles. 5 Automóvil club británico
3
GTP
ARNm
Unión de AA-tRNA al sitio A
EF-T
Complejo AA-ARNt-GTP-EF-Tu
aa
GTP
aa
Automóvil club británico
EF-Tu EF-Tu
PIB
PIB
EF-T
PAGS
EF-T
5
3
Formación de enlaces peptídicos

ARNm
5
3
GTP
ARNm
complejo EF-G-GTP
translocación
aa
aa PIB
EF-G PIB
PAGS
descarga de ARNt ARNm

sitio p AA-ARNt
•
•
•
• Un sitio aa
• • cadena peptídica
NH2 O O NH2
norte – norte
norte
O correos correos O– norte
norte
norte
O O norte SAU ARNm
norte
O CH2 CH2 O
1ÿ 1ÿ
2ÿ 3ÿ 3ÿ 2ÿ RF-1, RF-2, RF-3
HO O O OH
O
C C O
Rn + 1 C H C H
H2N SAU
NUEVA HAMPSHIRE
Rn + 2
CO GTP
Rn CH
PIB + Pi
NUEVA HAMPSHIRE
•
•
•
SAU
sitio p •
•
•
•
• Un sitio
•
NH2 O O NH2 SI-3
norte –
norte
O correos correos O–
norte
norte
norte
norte
O O norte
norte
O CH2 50S
CH2 O
1ÿ
2ÿ 3ÿ
1ÿ 3ÿ 2ÿ
SAU
HO OH
O OH
C O 30S SI-3
Rn + 2 C H
NUEVA HAMPSHIRE
Figura 11.50 Terminación de la síntesis de proteínas en bacterias.
Aunque tres codones sin sentido diferentes pueden terminar el alargamiento
C O
de la cadena, el UAA se usa con mayor frecuencia para este propósito. Tres
Rn + 1 CH
factores de liberación (RF) ayudan al ribosoma a reconocer codones sin sentido y
NUEVA HAMPSHIRE
terminar la traducción. La hidrólisis de GTP probablemente esté involucrada en la
C O
terminación. Los ARN de transferencia están en rosa.
Rn CH
NUEVA HAMPSHIRE
dos chaperonas evitan que el polipéptido se pliegue incorrectamente a
•
•
• medida que se sintetiza. Cuando se completa la síntesis del polipéptido, la
proteína GrpE se une al complejo chaperona-polipéptido y hace que DnaK
Figura 11.49 Transpeptidación. La reacción de la peptidil transferasa.
libere ADP. DnaJ también se puede liberar en este paso. Luego, el ATP se
El péptido crece un aminoácido y se transfiere al sitio A.
une a DnaK y DnaK se disocia del polipéptido. El polipéptido se ha estado
plegando durante esta secuencia de eventos y puede haber alcanzado su
conformación nativa final. Si todavía está parcialmente doblado, puede volver
cualquier plegado incorrecto que ya haya tenido lugar. Son tan importantes a unir DnaJ y DnaK y repetir el proceso, o transferirse a otro conjunto de
que las chaperonas están presentes en todas las celdas. acompañantes, GroEL y GroES, donde se lleva a cabo el plegamiento final.
Varias chaperonas y proteínas cooperantes ayudan al plegamiento Al igual que con DnaK, la unión de ATP a GroEL y la hidrólisis de ATP
adecuado de proteínas en las bacterias. El proceso ha sido bien estudiado en cambian la afinidad de la chaperona por el polipéptido plegable y regulan la
E. coli e involucra al menos cuatro acompañantes (DnaK, DnaJ, GroEL y unión y liberación del polipéptido (la liberación del polipéptido depende de
GroES) y la proteína de estrés GrpE. Después de que una longitud suficiente ATP). GroES se une a GroEL y ayuda en su unión y liberación del polipéptido
de polipéptido naciente se extiende desde el ribosoma, DnaJ se une a la replegable.
cadena desplegada (figura 11.51). DnaK, que forma complejos con ATP,
luego se une al polipéptido. Estas
Traducción 287
1 DnaJ se une al 2 DnaJ estimula ATP

desplegado o parcialmente hidrólisis por DnaK.
proteína plegada y atp DnaK-ADP se une fuertemente
luego a DnaK. 2Pi _ a la proteína desplegada.
ADNJ
Proteína atp ADP

desplegada
atp
DnaK
A GroEL atp
sistema ADP
Proteína
parcialmente
plegada
atp
GrpE
Proteína plegada
(conformación nativa)
ADP GrpE ( DnaJ?)

4 ATP se une a
DnaK y la
proteína se disocia. atp
3 En bacterias, la
intercambio de nucleótidos
el factor GrpE estimula la
liberación de ADP.
Figura 11.51 Chaperonas y plegamiento de polipéptidos. La participación de las chaperonas bacterianas en el plegamiento adecuado de un recién nacido
cadena polipeptídica sintetizada se representa en este diagrama. Se muestran tres posibles resultados de un ciclo de reacción de chaperona. Un nativo
puede resultar una proteína, el polipéptido parcialmente plegado puede unirse nuevamente a DnaK y DnaJ, o el polipéptido puede transferirse a GroEL y
GroES.
Los chaperones fueron descubiertos por primera vez porque dramáticamente crecen a temperaturas tan altas como 110°C. P. occultum tiene un capítulo uno
aumento en la concentración cuando las células están expuestas a altas similar al GroEL de E. coli. La chaperona hidroliza
temperaturas, venenos metabólicos y otras condiciones estresantes. Por lo tanto ATP más rápidamente a 100°C y constituye casi 3/4 de la célula
muchas chaperonas a menudo se denominan proteínas de choque térmico o estrés proteína soluble cuando P. occultum crece a 108°C.
proteinas Cuando un cultivo de E. coli se cambia de 30 a 42°C, el Los chaperones también tienen otras funciones. Son particularmente
aumentan las concentraciones de unas 20 proteínas diferentes de choque térmico importantes en el transporte de proteínas a través de las membranas. Para
en gran medida dentro de unos 5 minutos. Si las células están expuestas a un letal Por ejemplo, en E. coli , la chaperona SecB se une a las formas parcialmente
temperatura, las proteínas de choque térmico todavía se sintetizan pero desplegadas de muchas proteínas y las mantiene en un estado competente para
la mayoría de las proteínas no lo son. Por lo tanto, las chaperonas protegen a la la exportación hasta que se translocan a través del plasma.
célula del daño térmico y otras tensiones, así como promueven el plegamiento membrana. Proteínas translocadas por el sistema dependiente de Sec
adecuado de nuevos polipéptidos. Por ejemplo, DnaK protege a E. coli se sintetizan con una secuencia señal amino-terminal. La secuencia de la señal
ARN polimerasa de inactivación térmica in vitro. Además, es un tramo corto de aminoácidos que ayuda a dirigir el
DnaK reactiva la polimerasa de ARN inactivada térmicamente, especialmente si polipéptido completo hasta su destino final. Los polipéptidos se asocian con SecB
están presentes ATP, DnaJ y GrpE. GroEL y GroES también y la chaperona luego se adhiere a la membrana.
proteger las proteínas intracelulares de la agregación. Como era de esperar, translocasa. Los polipéptidos se transportan a través de la membrana a medida
grandes cantidades de chaperonas están presentes en hipertermófilos como que se hidroliza el ATP. Cuando ingresan al periplasma, una enzima peptidasa
Pyrodictium occultum, un archaeon que señal elimina la secuencia señal y la
la proteína se mueve a su ubicación final. DnaK, DnaJ y GroEL/GroES también pueden ayudar en Inteín
N-exteína C-exteína
la translocación de proteínas a través de las membranas.
Cis/Ser His-Asn-Cys/Ser/Thr
Secreción de proteínas en procariotas (sección 3.8)
(a)
Las investigaciones indican que los procariotas y los eucariotas pueden diferir con respecto
al momento del plegamiento de las proteínas. En términos de conformación, las proteínas se
componen de regiones compactas, autoplegables y estructuralmente independientes. Estas

N-exteína Inteín C-exteína
regiones, normalmente alrededor de 100 a 300 aminoácidos de longitud, se denominan dominios.
Las proteínas más grandes como las inmunoglobulinas (proteínas importantes en la respuesta
inmunitaria) pueden tener dos o más dominios que están unidos por porciones menos estructuradas
de la cadena polipeptídica. En los eucariotas, los nutrientes se pliegan de forma independiente O

N-exteína
justo después de ser sintetizados por el ribosoma. Parece que los polipéptidos procarióticos, por el
contrario, no se pliegan hasta que se ha sintetizado la cadena completa. Solo entonces se retiran Inteín C-exteína
los dominios individuales. Esta diferencia en el tiempo puede explicar la observación de que las
chaperonas parecen ser más importantes en el plegamiento de las proteínas procarióticas. Plegar
un polipéptido completo es más complejo que plegar un dominio a la vez y requeriría la ayuda de
chaperonas. Anticuerpos (sección 32.7)

HO
O
Inteín + N-exteína norte C-exteína
H
(B)
Empalme de proteínas Se
Figura 11.52 Empalme de proteínas. (a) Una ilustración generalizada de la
ha descubierto un mayor nivel de complejidad en la formación de proteínas. Algunas proteínas estructura intein. Se muestran los aminoácidos que comúnmente están
microbianas se empalman después de la traducción. presentes en cada extremo de las inteínas. Tenga en cuenta que muchos
En el empalme de proteínas, una parte del polipéptido se elimina antes de que el polipéptido se son aminoácidos que contienen tiol o hidroxilo. (b) Una descripción general
pliegue en su forma final. Las proteínas autoempalmadas comienzan como proteínas precursoras del patrón o secuencia de empalme propuesto. El mecanismo preciso aún no
más grandes compuestas de una o más secuencias internas intermedias llamadas inteínas se conoce, pero presumiblemente involucra a los hidroxilos o tioles ubicados
flanqueadas por secuencias externas o exteínas, las exteínas N y las exteínas C (figura 11.52a). en cada extremo de la inteína.
Las proteínas, que tienen entre 130 y 600 aminoácidos de longitud, se eliminan en un proceso
2. Describa brevemente la estructura del ARN de transferencia y relaciónela con su función.
autocatalítico que implica un intermedio ramificado (figura 11.52b). Hasta el momento, se han
¿Cómo se activan los aminoácidos para la síntesis de proteínas y por qué es tan
descubierto más de 130 inteínas en 34 tipos de proteínas de autoempalme.
importante la especificidad de la reacción aminoacil-tRNA sintetasa?
3. ¿Cuáles son los dominios de traducción y de salida del ribosoma? Contraste los
Se han encontrado más de 120 inteínas en bacterias y arqueas. Algunos ejemplos son una ATPasa
ribosomas procarióticos y eucarióticos en términos de estructura. ¿Qué funciones tiene
en la levadura Saccharomyces cerevisiae, la proteína RecA de Mycobacterium tuberculosis y la
el ARN ribosomal?
ADN polimerasa en el archaeon Pyrococcus. Por lo tanto, las proteínas de auto-empalme están
4. Describa la naturaleza y función de lo siguiente: fMet-tRNA, iniciador
presentes en los tres dominios de la vida.
codón, IF-3, IF-2, IF-1, ciclo de elongación, sitios de peptidilo y aminoacilo, EF-Tu, EF-
Ts, reacción de transpeptidación, peptidil transferasa, translocación, EF-G o translocasa,

codón sin sentido y factores de liberación .
5. ¿Qué son las chaperonas moleculares y las proteínas de choque térmico? Describa su
1. ¿En qué dirección se sintetizan los polipéptidos? ¿Qué es un polirribosoma y por qué es
funciones
útil?
Resumen
11.1 El ADN como material genético B. Durante la transcripción, la información genética del ADN se reescribe como una molécula de
ARN. Los tres productos de la transcripción son el ARN mensajero, el ARN ribosómico y el
un. El conocimiento de que el ADN es el material genético de las células provino de los estudios
ARN de transferencia.
sobre transformación realizados por Griffith y Avery y de los experimentos sobre la
reproducción del fago T2 realizados por Hershey y Chase (figuras 11.1–11.3). C. La traducción convierte la información genética en forma de una molécula de ARN mensajero
en un polipéptido. El ARN ribosomal y el ARN de transferencia participan en la decodificación
11.2 El flujo de información genética de la información genética durante la traducción.
un. El ADN sirve como molécula de almacenamiento para la información genética. La replicación
11.3 Estructura del ácido nucleico
del ADN es el proceso mediante el cual se duplica el ADN para que pueda pasar a la
siguiente generación (figura 11.4). un. El ADN difiere en composición del ARN por tener desoxirribosa y timina.
en lugar de ribosa y uracilo.
Resumen 289
B. El ADN es de doble cadena, con apareamiento de bases AT y GC complementario entre las cadenas. 11.6 Transcripción
Los hilos corren antiparalelos y se retuercen en una doble hélice hacia la derecha (figuras 11.6).
un. La ARN polimerasa sintetiza ARN que es complementario al tem de ADN.
C. El ARN normalmente es monocatenario, aunque puede enrollarse sobre sí mismo y formar
torón de placa (figura 11.26).
pares de bases.
B. El factor sigma ayuda a que la ARN polimerasa bacteriana se una al promotor re
para formar estructuras en horquilla.
región al comienzo de un gen (figura 11.29).
D. En casi todos los procariotas, el ADN existe como un círculo cerrado que se retuerce en
C. Un terminador marca el final de un gen. Se necesita un factor rho para que la ARN polimerasa se
superenrollamientos. En bacterias, el ADN está asociado con proteínas básicas pero no con
libere de algunos terminadores (figuras 11.31 y 11.32). D. En los eucariotas, la ARN polimerasa
histonas.
II sintetiza pre-ARNm, que luego se somete a una modificación postranscripcional mediante la escisión
mi. El ADN eucariótico está asociado con cinco tipos de proteínas histonas. Ocho tonos suyos se
del ARN y la adición de una secuencia poli-A en 3ÿ y una caperuza en 5ÿ para generar ARNm
asocian para formar octámeros elipsoidales alrededor de los cuales se enrolla el ADN para producir
(figura 11.36). mi. Muchos genes eucarióticos son genes divididos o interrumpidos que tienen
el nucleosoma. El ADN de muchas arqueas forma complejos con histonas arqueales (figura 11.9).
exones y en trones. Los exones se unen mediante empalme de ARN. El empalme involucra pequeñas
moléculas de ARN nuclear, spliceosomas y, a veces, ribozimas (figura 11.37).
11.4 Replicación del ADN
un. La mayoría de los ADN procarióticos circulares se copian mediante dos horquillas de replicación que 11.7 El código genético
se mueven alrededor del círculo para formar una figura en forma de theta ( ) (figura 11.11). A
un. La información genética se transporta en forma de tripletes de 64 nucleótidos llamados codones
veces se emplea en su lugar un mecanismo de círculo rodante (figura 11.12). B. El ADN eucariótico
(tabla 11.4); los codones con sentido dirigen la incorporación de aminoácidos, y los codones de
tiene muchos replicones y orígenes de replicación ubicados cada 10 parada o sin sentido terminan la traducción.
a 100 m a lo largo del ADN (figura 11.13).
B. El código es degenerado, es decir, hay más de un codón para la mayoría de los aminoácidos.
C. El replisoma es un enorme complejo de proteínas y es responsable del ADN. ácidos.
replicación.
D. Las enzimas ADN polimerasa catalizan la síntesis de ADN en la dirección 5' a 3' mientras leen la 11.8 Traducción
plantilla de ADN en la dirección 3' a 5'. mi. La doble hélice es desenrollada por helicasas con la
un. En la traducción, los ribosomas se adhieren al ARNm y sintetizan un polipéptido que comienza en
ayuda de topoisomerasas como la ADN girasa. Las proteínas de unión al ADN mantienen las hebras
el extremo N-terminal. Un polisoma o polirribosoma es un complejo de ARNm con varios ribosomas
separadas. F. La holoenzima de ADN polimerasa III sintetiza una copia de ADN complementaria
(figura 11.39).
que comienza con un cebador de ARN corto producido por la enzima primasa. gramo. La hebra principal
B. Los aminoácidos se activan para la síntesis de proteínas al unirse al extremo 3 'de los ARN de
se replica continuamente, mientras que la síntesis de ADN en la hebra retrasada es discontinua y
transferencia. La activación requiere ATP y la reacción es catalizada por aminoacil-tRNA sintetasas
forma fragmentos de Okazaki (figuras 11.16 y 11.17). (figura 11.43).
C. Los ribosomas son orgánulos grandes y complejos compuestos de ARNr y muchos polipéptidos. Los
aminoácidos se agregan a una cadena peptídica en crecimiento en el dominio de traducción (figura
H. La ADN polimerasa I escinde el cebador de ARN y llena el hueco resultante. Luego, la ADN ligasa 11.45). D. La síntesis de proteínas comienza con la unión de fMet-tRNA (bacterias) o un iniciador
une los fragmentos (figuras 11.18 y 11.19). i La telomerasa es responsable de repetir los extremos
metionil-tRNAMet (eucariotas y arqueas) a un codón iniciador en el mRNA ya las dos subunidades
de los cromosomas eucarióticos ribosómicas. Esto implica la participación de factores de iniciación de proteínas (figura 11.47).
(figura 11.20).
11.5 Estructura del gen

mi. En el ciclo de elongación, el aminoacil-tRNA apropiado se une al sitio A con la ayuda de EF-Tu y
un. Un gen se puede definir como la secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido, ARNt o GTP (figura 11.48). Luego, la reacción de transpeptidación es catalizada por la peptidil transferasa.
ARNr. B. La hebra molde de ADN transporta información genética y dirige la síntesis de la Finalmente, durante la translocación, el peptidil tRNA se mueve al sitio P y el ribosoma viaja a lo
transcripción de ARN. largo del codón uno del mRNA. La translocación requiere GTP y EF-G o translocasa. El ARNt
vacío sale del ribosoma por el sitio de salida.
C. El gen también contiene una región codificante y un terminador; puede tener un líder
y un remolque (figura 11.23). F. La síntesis de proteínas se detiene cuando se alcanza un codón sin sentido. Las bacterias requieren
tres factores de liberación para el reconocimiento de codones y la disociación de los ribosomas del
D. La ARN polimerasa se une a la región promotora, que contiene sitios de reconocimiento de ARN
ARNm (figura 11.50).
polimerasa y de unión a ARN polimerasa (figura 11.28). mi. Los genes de tRNA y rRNA a menudo
gramo. Las chaperonas moleculares ayudan a las proteínas a plegarse correctamente, protegen las células
codifican un precursor que posteriormente se procesa para producir varios productos (figura 11.24).
contra el estrés ambiental y transportan proteínas a través de las membranas (figura 11.51). H. Es
posible que las proteínas procarióticas no se plieguen hasta que estén completamente sintetizadas, mientras
que los dominios de proteínas eucarióticas se doblan cuando abandonan el ribosoma.
I. Algunas proteínas se auto-empalman y cortan porciones de sí mismas antes de plegarse en su forma

final.
Términos clave
empalme alternativo 265 cistrón 264 ácido desoxirribonucleico (ADN) 252 factores de elongación 283
activación de aminoácidos 276 código degeneración 275 Proteínas ADNA 260 sitio de salida (E) 284
sitio de aminoacil (aceptor; A) 284 región de codificación 266 ADN girasa 260 exones 273
aminoacil-tRNA sintetasas 280 anticodón codón 264 ADN ligasa 262 Extremos 288
277 cadena complementaria 252 ADN polimerasa 259 gen 251
nucleosoma arqueal 253 secuencia consenso 269 enzima dominios 288 genoma 247
catenanas 263 central 269 ciclo de elongación 283 genotipo 248
proteínas de choque térmico complejo abierto 269 replicón 257 ARN nuclear pequeño (ARNsn) 273 genes
287 helicasa 260 sitio de peptidilo (donante; P) 284 replisoma 260 divididos (interrumpidos) 273
histona 253 peptidil transferasa 284 fenotipo factor rho 270 empalmeosoma 274 codón de terminación
factores de iniciación 281 248 polirribosoma 276 modificación ácido ribonucleico (ARN) 252 ARN 266 telomerasa 263
codón iniciador 281 postranscripcional 272 ribosómico (ARNr) 269 sitio de unión
intenciones 288 al ribosoma (RBS) 281 ribozima 267 hebra plantilla 265
intrones 273 Pribnow caja 269 secuencia terminadora 266
hebra retrasada 260 primasa 260 ARN polimerasa 269 topoisomerasa 260 secuencia
secuencia líder 265 hebra primosoma 260 ARN polimerasa holoenzima 269 final 266 transcripción 251
líder 260 surco principal promotor 265 Empalme de ARN 273 ARN de transferencia (ARNt)
252 ARN mensajero revisión 262 empalme replicación en círculo rodante 257 269 transformación 249
(ARNm) 251 surco menor 252 de proteínas 288 marco codones sentido 275
chaperonas moleculares 284 codón de lectura 264 factores Shine-Dalgarno secuencia 265 factor traducción 251
sin sentido 275 de liberación 284 sigma 269 proteínas de unión a ADN translocación 284
replicación 251 monocatenario reacción de transpeptidación 284

nucleosoma 253 horquilla de replicación 256 (SSB) 260 tambaleo 276
Fragmento de Okazaki 260
1. Muchos científicos dicen que el ARN fue la primera de las moléculas de información (es decir, ARN, El mutante #2 tiene una mutación en la región 35 del promotor del mismo gen.
ADN, proteína) que surgió durante la evolución. Dada la información de este capítulo, ¿qué
El mutante #3 es un doble mutante con mutaciones tanto en la región 10 como en la 35 del
evidencia hay para apoyar esta hipótesis?
promotor del mismo gen.
2. Streptomyces coelicolor tiene un cromosoma lineal. Curiosamente, no hay genes que codifiquen Solo el mutante n. ° 3 no puede producir serina. ¿Por qué crees que esto es así?
proteínas esenciales cerca de los extremos del cromosoma en esta bacteria. ¿Por qué crees que
4. Suponga que ha aislado un microorganismo de una muestra de suelo. Describe cómo harías para
este es el caso?
determinar la naturaleza de su material genético.
3. Ha aislado varios mutantes de E. coli :
El mutante #1 tiene una mutación en la región 10 del promotor de un gen estructural que codifica
una enzima necesaria para la síntesis del aminoácido serina.
Aprende más
Bao, K. y Cohen, SN 2004. Actividad de transcriptasa inversa innata a las proteínas ADN polimerasa I y McKee, T. y McKee, JR 2003. Bioquímica: La base molecular de la vida, 3d ed. Dubuque, Iowa: McGraw-
ADN topoisomerasa I del complejo de telómeros de Streptomyces . Hill.
proc. nacional Academia ciencia 101(40):14361–66.
Narberhaus, F. 2002. Proteínas de choque térmico de tipo cristalino: socialización de los minichaper en
Borukhov, S. y Nudler, E. 2003. Holoenzima de polimerasa de ARN: estructura, función e implicaciones el contexto de una red multichaperone. Microbiol. mol. Biol. 66(1):64–93 .
biológicas. Opinión actual Microbiol. 6:93–100.
Brooker, RJ 2005. Genética: Análisis y principios, 2d ed. Nueva York: McGraw Nelson, DL y Cox, MM 2005. Lehninger: Principios de bioquímica, 4.ª ed.
Colina. Nueva York: WH Freeman.
Gogarten, JP; Senejani, AG; Zhaxybayeva, O.; Olendzenski, L.; y Hilario, E. Neylon, C.; Kralicek, AV; Colina, TM; y Dixon, NE 2005. Terminación de la replicación en Escherichia
2002. Inteins: Estructura, función y evolución. año Rev. Microbiol. 56:263–87. coli: estructura y actividad antihelicasa del complejo Tus-Ter. Microbiol. mol. Biol. 69(3):501–26 .
Grabowski, B. y Kelman, Z. 2003. Replicación del ADN de las arqueas: Proteínas eucariotas en un Pablo, BJ; Ross, W.; Gaal, T.; y Gourse, RL 2004. Transcripción de ARNr en Es
contexto bacteriano. año Rev. Microbiol. 57:487–516. Cherichia coli. año Rev. Genet. 38:749–70.
Hartl, FJ y Hayer-Hartl, M. 2002. Molecular chaperones in the cytosol: From Reeve, JN 2003. Archaeal chromatin and transcription. mol. Microbiol. 48(3):587–98.
cadena naciente a proteína plegada. Ciencia 295: 1852–58.
Johnson, A. y O'Donnell, M. 2005. Replicasas de ADN celular: componentes y dinámica en la horquilla Reeve, JN; Bailey, KA; Li, WT.; Marc, F.; Sandman, K.; y Soares, DJ 2004.
de replicación. año Rev. Bioquímica. 74:283–315. Histonas arqueológicas: Estructuras, estabilidad y unión al ADN. Bioquímica Soc. Trans. 32 (parte
2):227–30.
Kelman, LM y Kelman, Z. 2004. Múltiples orígenes de replicación en arqueas.
Tendencias Microbiol. 12(9):399–401. Smogorzewska, A. y deLange, T. 2004. Regulación de la telomerasa por telomérico
proteinas año Rev. Bioquímica. 73:177–208.
Laurensen, BS; Sojorensen, HP; Mortensen, KK; y Sperling-Petersen, HU
2005. Iniciación de la síntesis de proteínas en bacterias. Microbiol. mol. Biol. Rev. 69(1):101–23. Yarus, M.; Caporaso, JG; y Knight, R. 2005. Orígenes del código genético: La teoría del triplete escapado.
año Rev. Bioquímica. 74:179–98.
Visite el sitio web de Prescott en www.mhhe.com/prescott7 para obtener referencias adicionales.

12 Genética microbiana:
Regulación de
La expresion genica
La actividad del operón de lactosa está bajo el control de proteínas represoras y activadoras.
El represor lac (rosa) y la proteína activadora de catabolitos (azul) están unidos al
operón lac . El represor bloquea la transcripción cuando se une a los operadores (rojo).
AVANCE
• La regulación a largo plazo del metabolismo, el comportamiento y la morfología se
produce mediante el control de la expresión génica. Esto puede ocurrir
en muchos niveles, incluidos el inicio de la transcripción, el alargamiento de la que los niveles de nutrientes en su entorno están disminuyendo,
transcripción, la traducción y la postraducción. La bacteria grampositiva
y debe delsisuelo
determinar debeBacillus
iniciar lasubtilis siente Un
esporulación.
• En Bacteria, el control al nivel del inicio de la transcripción a menudo es La célula de Escherichia coli se encuentra en un ambiente rico en carbono y
alcanzado por las proteínas reguladoras. Algunos bloquean la transcripción y fuentes de energía, y debe determinar cuál usar y cuándo usar
otros promueven la transcripción. Además, la transcripción puede ser ellos. Un patógeno se transmite de un arroyo al intestino
terminado prematuramente por un proceso llamado atenuación, en
tracto de su huésped animal, y debe adaptarse a la temperatura más cálida, al
qué comportamiento de los ribosomas afecta la actividad de la ARN polimerasa. La
aumento del suministro de nutrientes y a las defensas del huésped. Estas
traducción en bacterias puede ser regulada por pequeñas moléculas que se unen
son solo algunos ejemplos de situaciones a las que los microbios deben responder.
el líder del ARNm. La conformación cambia ese bloque resultante.
Para hacer el uso más eficiente de los recursos en el entorno actual y su propia
unión a ribosomas. La traducción también puede ser bloqueada por antisentido.
moléculas de ARN. maquinaria celular, microbios
debe responder a los cambios alterando los comportamientos fisiológicos y conductuales.
• Los microorganismos deben ser capaces de responder rápidamente a las condiciones
procesos. ¿Cómo se logra esto?
ambientales cambiantes. Sus respuestas a menudo involucran muchos genes
El control de los procesos celulares mediante la regulación de la actividad
u operones. El control simultáneo de muchos genes u operones es
llamado control global. Ejemplos importantes de sistemas de control global bacteriano de las enzimas y otras proteínas es un mecanismo de ajuste fino:
son la represión catabólica, la detección de quórum y la formación de endosporas. actúa rápidamente para ajustar la actividad metabólica de un momento a otro.
Los microorganismos también son capaces de controlar la expresión de sus
• La expresión de genes eucarióticos involucra más pasos que la expresión de genes genoma, aunque en intervalos más largos. Por ejemplo, la E. coli
bacterianos; así hay más puntos en el proceso cromosoma puede codificar alrededor de 4500 polipéptidos, pero no todos
donde puede ocurrir la regulación. las proteínas se producen al mismo tiempo. La regulación de la expresión génica
• Aunque la organización del genoma de las arqueas es similar a la observada en sirve para conservar energía y materias primas, para mantener
Las bacterias, la maquinaria utilizada por Archaea durante la información equilibrio entre las cantidades de varias proteínas celulares, y para
el flujo es más como el de Eucarya. Por lo tanto, la regulación de las arqueas adaptarse a los cambios ambientales a largo plazo. Por lo tanto, el control de genes
los mecanismos pueden ser similares a los observados en los otros dominios de la la expresión complementa la regulación de la actividad enzimática. Control de la
vida. actividad enzimática (sección 8.10)
El campo particular que suscita mi interés es la división entre lo vivo y lo no vivo,

tipificado por, digamos, proteínas, virus, bacterias y la estructura de los cromosomas. El objetivo final,
lo que es algo remoto, es la descripción de estas actividades en términos de su estructura, es decir, la
distribución espacial de sus átomos constituyentes, en la medida en que esto sea posible. Esto podría
llamarse la física química de la biología.
—Francis Crick
292 Capítulo 12 Genética microbiana: regulación de la expresión génica
En este capítulo exploramos los diversos mecanismos que utilizan los la cripción y la traducción en los tres dominios de la vida son similares, existen
organismos para regular la expresión génica. Comenzamos con una breve diferencias que afectan la expresión génica. Por ejemplo, la estructura de la
discusión de los muchos niveles en los que puede ocurrir la regulación. Luego cromatina varía. Los cromosomas bacterianos carecen de sus tonos, mientras
presentamos algunos ejemplos importantes de la regulación del inicio de la que los cromosomas eucarióticos y algunos cromosomas de arqueas están
transcripción, el alargamiento de la transcripción y la traducción. Finalmente, asociados con histonas. El ADN condensado por histonas es menos accesible
examinamos cómo las células usan estos diversos mecanismos reguladores a la ARN polimerasa, y la expresión de genes eucarióticos implica el paso
para controlar conjuntos de genes en respuesta a cambios en sus entornos. adicional de abrir la cromatina para exponer los promotores. También es
importante recordar que en los procariotas, los genes de función relacionada a
menudo se transcriben a partir de un solo promotor, lo que da lugar a un ARNm
12.1 NIVELES DE REGULACIÓN
policistrónico. Además, la transcripción y la traducción están estrechamente
DE LA EXPRESIÓN GÉNICA
acopladas en los procariotas. Las moléculas de ARNm eucariótico, por otro
La figura 12.1 resume la expresión de genes bacterianos, arqueales y lado, son monocistrónicas y son el producto del procesamiento del ARN, que
eucarióticos y destaca los puntos del proceso en los que a menudo se produce agrega la tapa 5 'y la cola poli-A y elimina los intrones. Pelo-
la regulación. Aunque los procesos generales de tran
BACTERIAS ARQUEA
Gen
Las proteínas reguladoras genéticas pueden Gene
Transcripción
unirse al ADN y controlar si comienza o no la
transcripción. Transcripción Las proteínas reguladoras genéticas
pueden unirse al ADN y controlar si
Atenuación: la transcripción puede terminar muy
pronto después de haber comenzado debido a la comienza o no la transcripción.
formación de un terminador transcripcional. El nivel de compactación de la cromatina
La unión de un metabolito a un ribointerruptor en el puede influir en la transcripción.
ARNm puede provocar la terminación prematura de
la transcripción. ARNm
ARNm
Traducción Las proteínas represoras de la traducción
pueden unirse al ARNm y evitar que Traducción El ARN antisentido puede unirse al ARNm
comience la traducción. y controlar si la traducción o no
El ARN antisentido puede unirse al ARNm y comienza
controlar si comienza o no la traducción.
La unión de un metabolito a un ribointerruptor en el Proteína

ARNm puede bloquear la traducción.
Proteína postraducción La inhibición de la retroalimentación y las
postraducción Las moléculas pequeñas pueden modificaciones covalentes (reversibles e
unirse (de forma no covalente) a una proteína y irreversibles) pueden regular la función de
afectar su función. Un ejemplo es la inhibición las proteínas.
por retroalimentación, en la que el producto de
una vía metabólica inhibe la primera enzima de
la vía.
Proteína funcional
La estructura y la función de una
proteína pueden alterarse mediante
cambios covalentes en la proteína. Estos
pueden ser reversibles (p. ej., fosforilación/
desfosforilación) o irreversibles (p. ej.,
eliminación de residuos de aminoácidos).
Estas se denominan modificaciones
postraduccionales.
Proteína funcional (B)
Figura 12.1 Expresión génica y mecanismos reguladores comunes

en los tres dominios de la vida.
(a)
Reglamento de Inicio de Transcripción 293
Figura 12.1 (Continuación). EUCARYA
Gene
Transcripción reglamentaria
los factores pueden activar o inhibir la
transcripción.
Transcripción
El nivel de compactación de la cromatina.
influye en la transcripción.
La metilación del ADN (generalmente) inhibe

transcripción.
pre-ARNm
ARN
El empalme alternativo altera las
Procesando opciones de exón.
La edición de ARN altera la
secuencia de bases de los ARNm.
Traducción La traducción puede estar regulada por la fosforilación.

de factores de iniciación de la traducción.
La traducción puede estar regulada por proteínas que se unen al
extremo 5' del ARNm.
El ARN antisentido puede unirse al ARNm y controlar si comienza o
no la traducción.
La estabilidad del ARNm puede estar influenciada por las proteínas de
unión al ARN.
Proteína
Inhibición de la retroalimentación y modificaciones covalentes.

postraducción
puede regular la función de las proteínas.
Proteína funcional
(C)
Además, aunque los genes están organizados de manera similar en el 12.2 REGLAMENTO DE INICIACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN
Las bacterias y las arqueas, las enzimas arqueales, las moléculas y
secuencias de señalización que funcionan en la transcripción y traducción La inducción y la represión son históricamente importantes, ya que fueron
son más como los de la Eucarya. los primeros procesos regulatorios para ser entendidos en detalle. En
Debido a estas diferencias, la regulación de la expresión génica es En esta sección, primero describimos estos fenómenos y luego examinamos
algo diferente en cada dominio de la vida. Nuestro enfoque en este capítulo los eventos regulatorios subyacentes.
está en los procesos reguladores bacterianos bien conocidos. Comenzaremos

nuestra discusión introduciendo dos fenómenos: la inducción de
síntesis de enzimas y represión de la síntesis de enzimas. Inducción Inducción y represión de la síntesis de enzimas
y la represión proporcionó los primeros modelos para la regulación génica Muchas enzimas se producen casi todo el tiempo porque catalizan reacciones
(Puntos destacados históricos 12.1). Estos primeros modelos implicaban la acción en la célula que se necesitan de manera rutinaria. Estas enzimas
de proteínas reguladoras, y la noción de que la expresión génica está regulada incluyen los de las vías metabólicas centrales. Sus funciones son
únicamente por proteínas persistió durante muchos años. Eventualmente a menudo denominadas "funciones de mantenimiento" y los genes que las
Se demostró claramente que las moléculas de ARN también pueden tener codifican se denominan a menudo genes de mantenimiento. Esos
funciones reguladoras. La inducción y la represión también demuestran la Se dice que los genes domésticos que se expresan continuamente son
regulación del inicio de la transcripción. Aunque muchas normativas genes constitutivos. Muchos genes, sin embargo, se expresan sólo cuando
procesos ocurren en este nivel, existen numerosos reglamentos necesario. El gen -galactosidasa es un ejemplo de un gen regulado.
mecanismos que ocurren en otros niveles. Describimos algunos de estos -galactosidasa cataliza la hidrólisis del disacárido
mecanismos también. azúcar lactosa en glucosa y galactosa (figura 12.2). Cuando E. coli
12.1 El descubrimiento de la regulación génica
La capacidad de los microorganismos para adaptarse a su entorno mediante el Joshua Lederberg emprendió un estudio de la genética de la inducción de
ajuste de los niveles de enzimas fue descubierta por primera vez por Emil lactosa en E. coli unos años después de que Monod comenzara su investigación.
Duclaux, un colega de Louis Pasteur. Encontró que el hongo Aspergillus niger trabajo. Lederberg aisló no solo mutantes que carecen de -galactosidasa
produciría la enzima que hidroliza la sacarosa (invertasa) sólo sino también un mutante constitutivo en el que la síntesis de la enzima
cuando se cultiva en presencia de sacarosa. En 1900 F. Dienert descubrió que procedió en ausencia de un inductor (lacI). durante bacterias
la levadura contenía las enzimas para el metabolismo de la galactosa sólo cuando conjugación, los genes de la bacteria donante ingresan al receptor para
crecido con lactosa o galactosa y perdería estas enzimas al forman temporalmente un organismo con dos copias de esos genes
transferir a un medio de glucosa. Tal respuesta tenía sentido porque proporcionados por el donante. Cuando Arthur Pardee, François Jacob y
las células de levadura no necesitarían enzimas para el metabolismo de la galactosa Monod transfirió el gen de inducibilidad a un receptor constitutivo no sensible a
cuando se usa la glucosa como su fuente de carbono y energía. Se descubrieron los inductores, el gen recién adquirido hizo que la bacteria receptora volviera a
más ejemplos de adaptación y, en la década de 1930, H. Karström ser sensible al inductor. Este gen funcional
dividió las enzimas en dos clases: (1) enzimas adaptativas que son no formaba parte del cromosoma del receptor. Así, el gen especial
formada sólo en presencia de sus sustratos, y (2) constitutiva dirigió la síntesis de un producto citoplasmático que inhibía la
enzimas que siempre están presentes. Originalmente se pensó que las enzimas formación de -galactosidasa en ausencia del inductor. en 1961
podrían formarse a partir de precursores inactivos y que la presencia del sustrato Jacob y Monod llamaron a este producto especial el represor y
simplemente cambiaba el equilibrio entre sugirió que era una proteína. Propusieron además que la proteína represora
precursor y enzima hacia la formación de enzimas. ejercía sus efectos uniéndose al operador, un sitio especial junto a los genes
En 1942 Jacques Monod, trabajando en el Instituto Pasteur de estructurales. Ellos proporcionaron genética
Paris, inició un estudio de adaptación en la bacteria E. coli. Ya se sabía que la evidencia de su hipótesis. El nombre operón se le dio al
enzima -galactosidasa, que hidroliza complejo del operador y los genes que controla. Varios años
el azúcar lactosa a glucosa y galactosa, estaba presente sólo cuando más tarde en 1967, Walter Gilbert y Benno Müller-Hill lograron
Se cultivó E. coli en presencia de lactosa. Monod descubrió que aislar el represor lac y demostrar que era de hecho una proteína y
los análogos no metabolizables de los -galactósidos, como el tiometilgalactósido, se unió a un sitio específico en el operón lac . Conjugación bacteriana
también podrían inducir la producción de enzimas. este descubrimiento (sección 13.7)
permitió estudiar la inducción en células que crecen sobre carbono y La existencia de la represión fue descubierta por Monod y G.
fuentes de energía distintas de la lactosa para que la tasa de crecimiento y el inductor Cohen-Bazire en 1953 cuando encontraron que la presencia del
la concentración no dependería del aporte de lactosa. el siguiente el aminoácido triptófano reprimiría la síntesis de triptófano
demostró que la inducción implicaba la síntesis de nuevas enzimas, sintetasa, la enzima final en el camino para la biosíntesis de triptófano.
no solo la conversión del precursor ya disponible. Monod ac logró esto haciendo Investigaciones posteriores en muchos laboratorios mostraron que la inducción
radiactivas las proteínas de E. coli con 35S, y la represión operaban de manera bastante similar.
luego transferir las bacterias marcadas a un medio no radiactivo y mecanismos, cada uno de los cuales involucra proteínas represoras que se unen
añadiendo inductor. La -galactosidasa recién formada no era radiactiva y debe a operadores en el genoma. Jacob, Monod y Lederberg se convirtieron en
haberse sintetizado después de la adición del inductor. premios Nobel por su trabajo sobre la regulación genética.
crece con lactosa como única fuente de carbono, cada célula contiene por el contrario, se requieren solo cuando su sustrato está disponible;
unas 3.000 moléculas de galactosidasa, pero tiene menos de tres faltan en ausencia del inductor.
moléculas en ausencia de lactosa. La enzima -galactosidasa es Aunque las variaciones en los niveles de enzimas podrían deberse a cambios
una enzima inducible , es decir, su nivel aumenta en presencia de una en las tasas de degradación enzimática, la mayoría de las enzimas son relativamente
pequeña molécula efectora llamada inductor (en este caso la lactosa estable en bacterias en crecimiento. La inducción y la represión resultan
derivado de la alolactosa). Asimismo, los genes que codifican enzimas inducibles principalmente de cambios en la tasa de transcripción. Cuando E. coli es
tales como -galactosidasa se denominan genes inducibles. al crecer en ausencia de lactosa, carece de moléculas de ARNm que codifiquen
-galactosidasa es una enzima que funciona en un catabólico la síntesis de -galactosidasa. Sin embargo, en presencia de lactosa, cada célula
y muchas enzimas catabólicas son enzimas inducibles. tiene de 35 a 50 mRNA de galactosidasa.
Los genes de las enzimas involucradas en la biosíntesis de amino moléculas. La síntesis de ARNm está fuertemente influenciada por
los ácidos y otras sustancias, por otro lado, a menudo se denominan enzimas la presencia de lactosa.
reprimibles. Por ejemplo, un aminoácido presente en el
entorno puede inhibir la formación de enzimas responsables
para su biosíntesis. Esto tiene sentido porque el microorganismo no necesita las
Control del inicio de la transcripción
enzimas biosintéticas para un determinado
por proteínas reguladoras
sustancia si ya está disponible. Generalmente, las enzimas reprimibles son La acción de las proteínas reguladoras suele ser responsable de la inducción y la
necesarias para la síntesis y siempre están presentes a menos que represión. Las proteínas reguladoras pueden ejercer un control positivo o
el producto final de su camino está disponible. enzimas inducibles, negativo. Se produce un control transcripcional negativo
Lactosa H+
permeasa de lactosa
H+ Citoplasma
CH2OH CH2OH
HO O H O OH ÿ-galactosidasa
Lactosa H H reacción secundaria
O
HOH HOH
H H H
H OH H OH CH2OH O CH2
HO O H O OH
ÿ-galactosidasa H H alolactosa
HOH HOH
H H HO H
CH2OH CH2OH H OH H OH
HO O OH H O OH
H + H
HOH HOH ÿ-galactosidasa
H H HO H
H OH H OH
galactosa Glucosa
Figura 12.2 Las reacciones de -galactosidasa. La principal reacción catalizada por la -galactosidasa es la hidrólisis de la lactosa, un disacárido, en los
monosacáridos galactosa y glucosa. La enzima también cataliza una reacción menor que convierte la lactosa en alolactosa.
La alolactosa actúa como inductor de la síntesis de -galactosidasa.
cuando la proteína inhibe el inicio de la transcripción. Las proteínas reguladoras que ucto de la vía (p. ej., un aminoácido). (3) El activador de un
actúan de esta manera se denominan proteínas represoras. Positivo el gen inducible regulado positivamente es activado por el inductor
el control transcripcional ocurre cuando la proteína promueve el inicio de la (figura 12.3c); mientras que (4) el activador de un regulado positivamente
transcripción. Estas proteínas se denominan proteínas activadoras. el gen reprimible es inactivado por un inhibidor (figura 12.3d).
Las proteínas represoras y activadoras suelen actuar uniéndose al ADN Control de la actividad enzimática: Regulación alostérica (sección 8.10)
en sitios específicos. Las proteínas represoras se unen a una región llamada Recuerde que los genes bacterianos y arqueales funcionalmente relacionados son
operador, que por lo general se superpone o está aguas abajo del promotor . a menudo transcrito de un solo promotor. Los genes estructurales—
(es decir, más cerca de la región de codificación) (figura 12.3a,b). Cuando está atado, los genes que codifican polipéptidos simplemente se alinean juntos en
la proteína represora bloquea la unión de la ARN polimerasa a el ADN, y un único ARNm policistrónico lleva todos los mensajes. La secuencia de
el promotor o impide su movimiento. Las proteínas activadoras se unen bases que codifican uno o más polipéptidos,
sitios de unión al activador (figura 12.3c,d). Éstos a menudo se encuentran aguas junto con el promotor y el operador o los sitios de unión al activador,
arriba del promotor (es decir, más lejos de la región de codificación). Unión de un se llama operón. Se han descubierto y estudiado muchos operones. A continuación
activador a su sitio regulador generalmente se analizan tres operones bien estudiados. Demuestran diferentes formas en que
promueve la unión de la ARN polimerasa. las proteínas reguladoras pueden usarse para controlar
Las proteínas represoras y activadoras deben existir tanto en el estado activo como en el expresión génica a nivel de iniciación de la transcripción.
formas inactivas si se va a controlar adecuadamente el inicio de la transcripción. La
actividad de las proteínas reguladoras es modificada por pequeñas
moléculas efectoras, la mayoría de las cuales se unen a la proteína reguladora El operón de lactosa: transcripcional negativo
Control de genes inducibles
no covalentemente La figura 12.3 muestra las cuatro formas básicas en las que
las interacciones de un efector y una proteína reguladora pueden afectar El sistema de control negativo mejor estudiado es el operón de lactosa (lac)
transcripción: (1) Para genes inducibles controlados negativamente (p. ej., de E.coli. El operón lac contiene tres genes estructurales controlados
aquellas que codifican las enzimas necesarias para el catabolismo de un azúcar), la por el represor lac , que está codificado por lacI (figura 12.4). Una
proteína represora está activa e impide la transcripción cuando el sustrato de la vía códigos genéticos para -galactosidasa; un segundo gen dirige la síntesis de
no está disponible (figura 12.3a). Está -galactosido permeasa, la proteína responsable de la lactosa
inactivado por la unión del inductor (p. ej., el sustrato del consumo. El tercer gen codifica la enzima -galactósido
ruta). (2) Para genes reprimibles controlados negativamente (p. ej., transacetilasa, cuya función aún es incierta. La presencia de
aquellos que codifican las enzimas necesarias para la síntesis de un amino los primeros dos genes en el mismo operón aseguran que las tasas de absorción y
ácido), la proteína represora se sintetiza inicialmente en un inactivo descomposición de la lactosa varíen juntas.
forma llamada aporepresor. Se activa por unión del Antes de describir la regulación del operón lac , debemos
correpresor (figura 12.3b). Para las enzimas reprimibles que funcionan en una vía considerar dos aspectos generales de la regulación. La primera es que la expresión
biosintética, el correpresor es a menudo el producto. génica rara vez es un fenómeno de todo o nada; es un continuo.
ARN
polimerasa
Promotor ADN
Operador
Proteína sin transcripción o Se produce la transcripción

represora
inductor
(a) Control negativo de un gen inducible Proteína

represora
ARN
polimerasa
Se produce la transcripción o sin transcripción

correpresor
Proteína represora
Proteína
represora (aporepresora)
(b) Control negativo de un gen reprimible
Sitio de unión del activador inductor
ARN
polimerasa
sin transcripción
o
Proteína
activadora Se produce la transcripción
Activador
(c) Control positivo de un gen inducible
proteína
ARN
polimerasa
sin transcripción
inhibidor
Se produce la transcripción o Activador

proteína
Proteína
activadora
(d) Control positivo de un gen reprimible
Figura 12.3 Acción de las proteínas reguladoras bacterianas. Las proteínas reguladoras bacterianas tienen dos sitios de unión: uno para una
molécula efectora pequeña y otro para el ADN. La unión de la molécula efectora cambia la capacidad de la proteína reguladora para unirse al ADN. (a)
En ausencia del inductor, la proteína represora bloquea la transcripción. La presencia del inductor evita que el represor se una al ADN y se produce la
transcripción. (b) En ausencia de un correpresor, el represor no puede unirse al ADN y se produce la transcripción. Cuando el correpresor se une al
represor, el represor puede unirse al ADN y se bloquea la transcripción. (c) La proteína activadora puede unirse al ADN y activar la transcripción solo
cuando está unida al inductor. (d) El activador se une al ADN y promueve la transcripción a menos que esté presente el inhibidor. Cuando está presente
el inhibidor, el activador sufre un cambio conformacional que le impide unirse al ADN; esto inhibe la transcripción.
La inhibición de la transcripción generalmente no significa que los genes en que siempre hay un nivel basal bajo de transcripción. El segundo aspecto
estén "apagados" (aunque esta terminología se usa con frecuencia). Más de la regulación a considerar es el proceso de “toma de decisiones” utilizado
bien significa que el nivel de síntesis de ARNm se reduce significativamente por las células microbianas. Considere las decisiones regulatorias hechas
y, en la mayoría de los casos, se produce a niveles muy bajos. En otras por una célula de E. coli . Solo necesita sintetizar las enzimas de una vía
palabras, muchos promotores de genes y operones regulados se consideran "con fugas".
catabólica específica si el sustrato de la vía es
Gen regulador operón lac
lacI lacZ de encaje laca cromosoma de E.coli

Codifica la lactosa Codifica
Codifica ÿ-galactosidasa
promotor lacI sitio de la PAC Operador permeasa galactósido terminador lac
promotor de laca transacetilasa
Figura 12.4 El operón lac. El operón lac consta de tres genes: lacZ, lacY y lacA, que se transcriben como una sola unidad del promotor lac. El operón
se regula tanto negativa como positivamente. El control negativo lo provoca el represor lac, que es el producto del gen lacI. El operador es el sitio de
unión del represor lac. El control positivo resulta de la acción de CAP. CAP se une al sitio CAP ubicado justo aguas arriba del promotor lac. CAP es, en
parte, responsable de un fenómeno llamado represión catabólica, un ejemplo de una red de control global, en la que numerosos operones son controlados
por una sola proteína.
Decisiones regulatorias
Enzimas catabólicas Enzimas Biosintéticas

¿Sustrato de ¿Producto final
la vía presente? de la vía presente?
sí No sí No
¿Está presente la
fuente preferida de
carbono y energía?
No sí
Sintetizar No
enzimas sintetiza Sintetizar
enzimas. enzimas
Gen/operón Gen/operón Gen/operón
"on" "apagado" "en"
Figura 12.5 Ejemplos de decisiones regulatorias tomadas por células.
presentes en el medio ambiente y una fuente de carbono preferida (p. ej., por el represor si se va a inhibir la transcripción. Cuando un dímero está en
glucosa) no lo está (figura 12.5). Por el contrario, la síntesis de las enzimas O1 y otro está en uno de los otros dos sitios operadores, los dímeros
implicadas en las vías biosintéticas se inhibe cuando está presente el acercan los dos sitios operadores y se forma un bucle de ADN entre ellos.
producto final de la vía. La unión del represor lac es un proceso de dos pasos. Primero, el represor
¿Cómo afectan estos dos aspectos de la regulación a la expresión del se une de manera no específica al ADN. Luego se desliza rápidamente a
operón lac ? La lactosa es una de las muchas moléculas orgánicas que E. lo largo del ADN hasta llegar a un sitio operador. Una parte del represor
coli puede usar como fuente de carbono y energía. Es un desperdicio encaja en el surco principal del ADN del sitio del operador (figura 12.6b).
sintetizar enzimas del operón lac cuando no se dispone de lactosa. Por Por tanto, la forma del represor es ideal para la unión específica a la doble
tanto, la célula sólo expresa este operón en niveles elevados cuando la hélice del ADN.
lactosa es la única fuente de carbono y energía presente en el medio ¿Cómo inhibe el represor la transcripción? El promotor al que se une
ambiente; el represor lac se encarga de inhibir la transcripción cuando no la ARN polimerasa se encuentra cerca de los sitios del operador lac .
hay lactosa. Cuando no hay lactosa, el represor se une a O1 y uno de los otros sitios
El represor lac es un tetrámero compuesto por cuatro subunidades operadores, doblando el ADN en la región promotora.
idénticas. El tetrámero se forma cuando interactúan dos dímeros. Cuando Esto evita el inicio de la transcripción, ya sea porque la ARN polimerasa
no se requiere el catabolismo de la lactosa, cada dímero reconoce y se une no puede acceder al promotor o porque está bloqueada para moverse
estrechamente a uno de los tres sitios diferentes del operador lac : O1, O2 hacia la región codificante (figura 12.7a). Cuando la lactosa está disponible,
y O3 (figura 12.6a). O1 es el sitio principal del operador y debe estar vinculado es absorbida por la lactosa permeasa. Una vez dentro del
O3 PAGS O1 lacZ O2
Unión del represor lac
O3 O1 O1 O2
tetrámero represor lac tetrámero represor lac
Posibles bucles de ADN causados por

(a) la unión del represor lac
(b) Modelo propuesto del represor lac que se une a

O1 y O3 basados en estudios de cristalografía
Figura 12.6 Los sitios del operador lac. El operón lac tiene tres sitios de operador: O1, O2 y O3 (a). O1 es el mismo operador que se muestra en la figura
12.4. Como se muestra en (a) y (b), el represor lac (violeta) se une a O1 y uno de los otros sitios operadores (rojo) para bloquear la transcripción, formando un
bucle de ADN. El bucle de ADN contiene los sitios de unión 35 y 10 (verde) reconocidos por la ARN polimerasa. Por lo tanto, estos sitios son inaccesibles.
y se bloquea la transcripción. El bucle de ADN también contiene el sitio de unión de CAP y CAP (azul) se muestra unido al ADN (b). Cuando
el represor lac está unido al operador, CAP no puede activar la transcripción.
célula, -galactosidasa convierte la lactosa en alolactosa, el inductor de sido descrito. Esto se debe a que el operón lac está regulado por
el operón (figura 12.2). Esto ocurre porque, como se señaló anteriormente, una segunda proteína reguladora llamada CAP. CAP funciona en un
siempre hay un bajo nivel de síntesis de permeasa y -galactosidasa. La red reguladora global que permite que E. coli use glucosa
alolactosa se une al represor lac y hace que el represor cambie a una forma preferentemente sobre todas las demás fuentes de carbono y energía por un
inactiva que no puede unirse a ningún mecanismo llamado represión catabólica. El uso de dos proteínas
sitios del operador. El represor inactivado abandona el ADN y se produce reguladoras diferentes para controlar la síntesis de un operón ilustra un
la transcripción (figura 12.7b). punto que es importante en la discusión de la
Un examen detallado de las figuras 12.4 y 12.6 muestra claramente regulación de la expresión génica: a menudo hay capas de regulación de
que la regulación del operón lac no es tan sencilla como acaba de cualquier operón. Como se describe en la sección 12.5, el uso de dos
laca operón lac operón trp

regulador atenuador
gene Promotor Operador trpR
secuencia
lacI lacP lacO lacZ de encaje laca
correos trpL trpE trpD trpC trpB trpA
ARNm Transcripción
ARN polimerasa
El represor lac se
Inactivo
une al operador e
inhibe la transcripción. represor trp
(a) Niveles bajos de triptófano, se produce la transcripción de todo el operón trp

represor lac (activo)
(a) Sin lactosa en el medio ambiente

trpR po trpL trpE trpD trpC trpB trpA
ARN polimerasa
lacI lacP lacO lacZ de encaje laca
Transcripción Correpresor-represor
vincular al operador y
policistrónico triptófano
ARNm Bloquear la transcripción.
ARNm
ÿ-galactosidasa Lactosa galactósido

permeasa transacetilasa Correpresor-represor
formar complejo activo.
alolactosa La unión de alolactosa evita que el

(b) Altos niveles de triptófano, se produce represión.
represor lac se una al sitio del operador.
Figura 12.8 Regulación del operón trp por triptófano

y el Represor trp. El represor trp está inactivo cuando se
sintetizado y, por lo tanto, no puede vincular al operador. Está
(b) Lactosa presente activado por la unión de triptófano, que sirve como presor central. (a) Cuando
los niveles de triptófano son bajos, el represor es
Figura 12.7 Regulación del operón lac por el lac inactiva y se produce la transcripción. Las enzimas codificadas por el
represor (a) El represor lac está activo y puede unirse al El operón cataliza las reacciones necesarias para la biosíntesis del triptófano.
operador siempre que el inductor del operón, la alolactosa, no esté (b) Cuando los niveles de triptófano son lo suficientemente altos, se une al
regalo. La unión del represor al operador inhibe la transcripción del operón por la represor El complejo represor-correpresor une al operador
ARN polimerasa. (b) Cuando la lactosa es y se inhibe la transcripción del operón.
disponible, parte de ella se convierte en alolactosa por -galactosidasa.
Cuando hay cantidades suficientes de alolactosa, se une y
inactiva el represor lac. El represor deja al operador y
El operón triptófano: transcripcional negativo
La ARN polimerasa es libre para iniciar la transcripción.
Control de genes reprimibles
El operón triptófano (trp) de E. coli consta de cinco estructuras
genes que codifican las enzimas necesarias para la síntesis del amino
proteínas reguladoras genera un continuo de niveles de expresión. triptófano ácido (figura 12.8). Está regulado por el represor trp ,
Los niveles más altos de transcripción ocurren cuando la lactosa está que está codificado por el gen trpR . porque las enzimas codifican
disponible y la glucosa no; los niveles más bajos ocurren cuando la lactosa es por la función del operón trp en una ruta biosintética, es un desperdicio
no está disponible y la glucosa sí. producir las enzimas necesarias para la síntesis de triptófano cuando
el triptófano está fácilmente disponible. Por lo tanto, el operón funciona araO2

solo cuando el triptófano no está presente y debe hacerse de novo
araC
de moléculas precursoras (figura 12.5). Para lograr este objetivo regulatorio, el
represor trp se sintetiza en una forma inactiva .
que no puede vincular el operador trp siempre que los niveles de triptófano sean Proteína AraC
baja (figura 12.8a). Cuando los niveles de triptófano aumentan, el triptófano
actúa como correpresor, uniendo al represor y activándolo. los
Dominio de unión arabinosa
complejo represor-correpresor luego se une al operador, bloqueando
C
PAGS
Región del enlazador
iniciación de la transcripción (figura 12.8b).
Dominio de unión al ADN
Al igual que el operón lac , el operón trp está sujeto a otra capa
sitio de la PAC PBAD árabe araA araD
de regulación. Además de estar controlado al nivel de iniciación de la transcripción
araO1
por el represor trp , la expresión del trp araI
el operón también se controla a nivel de elongación de la transcripción
(a) Operón inhibido en ausencia de arabinosa
por un proceso llamado atenuación. Este modo de regulación se analiza en la
sección 12.3.
El operón de arabinosa: control transcripcional por un bucle roto

Proteína que actúa tanto positiva como negativamente
Muchas proteínas reguladoras son versátiles y pueden funcionar como represoras
de un operón y activadoras de otros. La regulación de la
arabinosa
El operón arabinosa (ara) de E. coli ilustra cómo la misma proteína puede
funcionan positiva o negativamente dependiendo de las condiciones ambientales. El
araO2
operón ara codifica las enzimas necesarias para acampar
PBAD
el catabolismo de la arabinosa a xilulosa 5-fosfato, un intermediario de la ruta de las
pentosas fosfato. El operón ara está regulado por AraC, que puede unir tres GORRA
reguladores diferentes. C
PAGS
sitio de la PAC araI

secuencias: araO2, araO1 y araI (figura 12.9). cuando arabinosa
ARN
no está presente, una molécula de AraC se une a araI y otra se une araO1
polimerasa
araO2. Las dos proteínas AraC interactúan, lo que hace que el ADN se doble.
(b) Operón activado en presencia de arabinosa
Esto evita que la ARN polimerasa se una al promotor de
el operón ara , bloqueando así la transcripción. En estas condiciones, AraC actúa
Figura 12.9 Regulación del operón ara por el AraC
como represor (figura 12.9a). Sin embargo, cuando la arabinosa está presente, se
Proteína. La proteína AraC puede actuar tanto como represor como
une a AraC y evita que las moléculas de AraC
activador, dependiendo de la presencia o ausencia de arabinosa.
de interactuar. Esto rompe el bucle de ADN. Además, la unión de dos complejos
(a) Cuando no se dispone de arabinosa, la proteína actúa como represor.
AraC-arabinosa al sitio araI promueve
Dos proteínas AraC están involucradas. Uno une el sitio araI y el
transcripción. Así, cuando está presente la arabinosa, el AraC actúa como activador
otro se une al sitio araO2 . Las dos proteínas interactúan de tal manera
(figura 12.9b). El operón ara , como el operón lac , también es
que el ADN entre los dos sitios del operador está doblado, haciéndolo
sujeto a represión catabólica (ver sección 12.5). El desglose
inaccesible a la ARN polimerasa. (b) Cuando hay arabinosa presente,
de glucosa a piruvato: la vía de las pentosas fosfato (sección 9.3)
se une a AraC, interrumpiendo la interacción entre los dos AraC
proteinas Posteriormente, dos proteínas AraC, cada una unida a
Sistemas de regulación de dos arabinosa, forman un dímero, que se une al sitio araI. La AraC
componentes y sistemas de fosforescencia el dímero funciona como activador y se produce la transcripción.
Los niveles de actividad del represor lac , el represor trp y AraC

Las proteínas están controladas por metabolitos de esas vías. Sin embargo, muchas
condiciones ambientales no producen un metabolito que pueda interactuar eucariotas tricelulares. Sin embargo, la transducción de señales importante
directamente con una proteína reguladora. Estas Se han identificado sistemas en procariotas. Sirven como modelos para comprender
incluyen la temperatura, la osmolaridad y los niveles de oxígeno. ¿Cómo perciben y los sistemas más complejos de eucariotas como
responden los organismos a tales estímulos? Muchos genes y así como los mecanismos por los cuales muchos patógenos regulan los genes
los operones se activan o desactivan en respuesta a estos tipos codifican factores de virulencia. Algunas de estas señales procarióticas
de señales por proteínas reguladoras que forman parte de un bicomponente Los sistemas de transducción son el foco de nuestra discusión aquí.
sistema de transducción de señales. Estos sistemas vinculan los eventos que Los sistemas de transducción de señales de dos componentes se encuentran en
ocurren fuera de la célula con la regulación de la expresión génica. Algunos tanto las Archaea como las Bacterias y llevan el nombre de las dos
de los sistemas de transducción de señales mejor estudiados se encuentran en mul Proteínas que gobiernan la vía reguladora. El primero es un sensor.
Exterior OmpC OmpF

membrana
periplasma
peptidoglicano
Plasma
membrana
EnvZ atp
Su ~ P
ADP Asp~P
Dominio de unión al ADN
Dominio del receptor OmpR
NH3 COOH
OmpR OmpR
activación represión
ompC ompF
Promotor Promotor
Figura 12.10 Sistema de transducción de señales de dos componentes y regulación de proteínas de porina. En este sistema, el sensor
La proteína cinasa EnvZ se desplaza a través de la membrana citoplasmática de modo que tanto su extremo C como su extremo N se encuentran en el citoplasma. Cuando EnvZ detecta un
aumento de la osmolaridad, autofosforila un residuo de histidina en su extremo C-terminal. EnvZ luego pasa el grupo fosforilo a la respuesta
regulador OmpR, que lo acepta en un residuo de ácido aspártico ubicado en su N-terminal. Esto activa OmpR para que pueda unirse al ADN.
y reprime la expresión de ompF y potencia la de ompC.
proteína quinasa que atraviesa la membrana citoplasmática de modo que parte la célula debe tener una forma de detectar aumentos en la osmolaridad para que
de ella está expuesta al medio extracelular (periplasma, en Se reprime la expresión de ompF y se mejora la transcripción de ompC.
bacterias gramnegativas) mientras que otra parte está expuesta al citoplasma La quinasa sensora en el sistema regulador de dos componentes OmpF:OmpC
(figura 12.10). De esta manera, puede detectar cambios específicos es la proteína EnvZ (env para envoltura celular). Es un
en el medio ambiente y comunican información al interior de la célula. El segundo proteína de membrana integral anclada a la membrana por dos
componente es la proteína reguladora de la respuesta, dominios transmembrana. EnvZ se enlaza a través de la membrana de manera
Proteína de unión al ADN que, cuando es activada por la cinasa sensora, que un dominio central sobresale en el periplasma,
promueve la transcripción de genes u operones cuya expresión es mientras que los extremos amino y carboxilo están expuestos al citoplasma. El
necesaria para la adaptación al estímulo ambiental detectado. segundo componente, OmpR, es el regulador de respuesta
La proteína reguladora de la respuesta también puede inhibir la transcripción de proteína. Es una proteína citoplasmática soluble que regula la transcripción de los
genes u operones que no son necesarios en las condiciones ambientales actuales. genes estructurales ompF y ompC . El terminal N
El final de OmpR se llama el dominio del receptor porque posee
La regulación de la proporción de proteínas de porina OmpF:OmpC en un residuo de ácido aspártico específico que acepta la señal (un grupo fosforilo)
E. coli es uno de los sistemas de transducción de señales de dos componentes de la quinasa sensora. Al recibir la señal,
mejor conocidos (figura 12.10). Recuerde que la membrana externa de El extremo C-terminal de OmpR es capaz de regular la transcripción por
Las bacterias gramnegativas contienen canales hechos de proteínas de porina. ADN de unión. A baja osmolaridad, EnvZ está inactivo, pero cuando
Las dos porinas más importantes en E. coli son OmpF y OmpC EnvZ detecta que la osmolaridad ha aumentado, EnvZ fosforila
(Omp para proteína de membrana externa ). Los poros de OmpC son ligeramente sí mismo (autofosforilación) en un residuo de histidina específico. Esta
más pequeños y se hacen cuando la bacteria crece a alta osmótica El grupo fosforilo se transfiere rápidamente al extremo N de
presiones Es la porina dominante cuando E. coli está en el intestino . OmpR. Una vez que OmpR se fosforila, es capaz de regular la transcripción de los
tracto. Los poros OmpF más grandes se ven favorecidos cuando E. coli crece en un genes de porina para que se reprima la transcripción de ompF y se active la
ambiente diluido; OmpF permite que los solutos se difundan en la célula transcripción de ompC .
más fácilmente. La célula debe mantener un nivel constante de proteína porina en Los sistemas de transducción de señales de dos componentes tienen un
la membrana, pero los niveles relativos de las dos porinas diseño simple: la señal reconocida por la quinasa sensora se transduce (envía)
cambiar para corresponder con la osmolaridad del medio. Claramente, directamente al regulador de respuesta que media la respuesta requerida.
cambios en la expresión génica; en muchos casos numerosos genes y vating la proteína represora. Aunque el operón está regulado
los operones pueden estar regulados por el mismo regulador de respuesta. Por lo tanto principalmente por la represión, la continuación de la transcripción también es
los sistemas de dos componentes a menudo funcionan en redes reguladoras globales. revisado. Es decir, hay dos puntos de decisión involucrados en el control transcripcional,
La eficacia de los sistemas de dos componentes se ilustra el inicio de la transcripción y la continuación de la transcripción más allá de la región
por su abundancia: la mayoría de las células procariotas utilizan una variedad de líder.
sistemas de transducción de señales de dos componentes para responder a una serie de Este nivel adicional de control sirve para ajustar los niveles de transcripción de una
tensiones ambientales. Por ejemplo, ¡el género Streptomyces , morfológicamente forma más sutil. Cuando el represor no está activo, la ARN polimerasa comienza la
complejo, tiene más de 50 sistemas de este tipo! transcripción de la región líder.
Los sistemas de transducción de señales de dos componentes involucran un simple pero a menudo no progresa al primer gen estructural en el
fosforilación donde la quinasa sensora transfiere su fosforilo operón En su lugar, la transcripción finaliza dentro de la región líder; esto se llama
grupo directamente a la proteína reguladora de la respuesta. Sin embargo, hay atenuación. La capacidad de atenuar la transcripción se basa en las secuencias de
son casos en los que más proteínas participan en la transferencia de nucleótidos en la región líder.
grupos fosforilo. Estas vías más largas se denominan sistemas de retransmisión de y en el hecho de que en procariotas, la transcripción está acoplada con
fósforo. Un importante y bien estudiado sistema de fosforescencia funciona durante la traducción (ver figura 11.39). El líder del ARNm del operón trp
esporulación en Bacillus subtilis y es es inusual en que se traduce. El producto, que nunca ha
descrito en la sección 12.5. Cabe señalar que algunos sistemas de transmisión de aislado, se denomina péptido líder. Además de codificar
fósforo controlan la actividad de las proteínas en lugar de la transcripción de genes. Un el péptido líder, el líder contiene secuencias atenuadoras
ejemplo de este tipo de sistema es la quimiotaxis en E. coli, (figura 12.11). Cuando se transcriben, estas secuencias forman estructuras secundarias
que se describe en el capítulo 8. de bucle de tallo en el ARNm recién formado. Definimos
estas secuencias numéricamente (regiones 1, 2, 3 y 4). Cuando las regiones 1 y 2 se
1. Muchos genes y operones están regulados al nivel del inicio de la transcripción emparejan (1:2; figura 12.11a), forman
ción. ¿Por qué crees que este es el caso? una estructura secundaria llamada bucle de pausa, que hace que el ARN
2. ¿Qué son la inducción y la represión? ¿Cómo las usan las bacterias para responder a polimerasa para reducir la velocidad. El bucle de pausa se forma justo antes de la
cambiando los suministros de nutrientes? formación de una segunda estructura llamada bucle terminador, que
3. Definir control negativo y control positivo del inicio de la transcripción. Delaware se forma cuando las regiones 3 y 4 forman pares de bases (3:4; figura 12.11a). A
Escriba cómo funcionan las proteínas reguladoras en estos mecanismos reguladores. La secuencia poli(U) sigue el bucle terminador 3:4, tal como lo hace
Definir proteína represora, proteína activadora, operador, sitio de unión al activador, en otros terminadores transcripcionales independientes de rho (ver figura
inductor, correpresor, gen estructural y operón. 11.31). Sin embargo, en este caso, el terminador está en el líder en lugar de
4. Utilizando la figura 12.5 como guía, trace la ruta de "toma de decisiones" de una E. coli que al final del gen. Otra estructura de bucle de tallo puede ser
célula que crece en un medio que contiene arabinosa pero carece de triptófano. formada en la región líder por el emparejamiento de las regiones 2 y 3 (2:3,
5. Describa un sistema de transducción de señales de dos componentes. ¿Cómo difiere figura 12.11b). La formación de este bucle antiterminador evita
de un sistema de fosforescencia? ¿Cómo son el represor lac, el trprepresor, la generación de la pausa 1:2 y los bucles de terminación 3:4.
y la proteína AraC similar a los reguladores de respuesta de dos ¿Cómo controlan estos diversos bucles la terminación de la transcripción?
componentes y sistemas de fosforescencia? ¿En qué se diferencian? Tres escenarios describen el proceso. En el primero, la traducción no es
acoplado a la transcripción porque no se produce la síntesis de proteínas.
En otras palabras, ningún ribosoma está asociado con el ARNm. En esto
escenario, se forman los bucles de pausa y terminación, deteniendo la transcripción
12.3 REGLAMENTO DE TRANSCRIPCIÓN
antes de que la ARN polimerasa alcance el gen trpE (figura 12.11a).
ALARGAMIENTO
En los siguientes dos escenarios, la traducción y la transcripción son
Los organismos también pueden regular la transcripción controlando la terminación de acoplado; es decir, un ribosoma se asocia con el ARNm líder como
la transcripción. En este tipo de regulación, la transcripción es el resto del mRNA está siendo sintetizado. La interacción entre la ARN polimerasa y el
iniciado pero detenido prematuramente dependiendo del entorno ribosoma más cercano determina
condiciones y necesidades del organismo. la primera demostración que se forman las estructuras de tallo-bucle. Como un ribosoma se traduce
de este nivel de regulación, llamado atenuación, ocurrió en la década de 1970 el ARNm, seguirá a la ARN polimerasa. Entre los primeros
en estudios del operón trp . Más recientemente, los riboswitches han sido varios nucleótidos de la región 1 son dos codones de triptófano (trp);
descubierto. Estas secuencias reguladoras en el líder de un ARNm esto es inusual porque normalmente solo hay un trp por 100 amino
ambos detectan y responden a las condiciones ambientales ya sea terminando ácidos en las proteínas de E. coli . Si los niveles de triptófano son bajos, el ribalgo se
prematuramente la transcripción o bloqueando la traducción. Tanto la atenuación como detendrá cuando encuentre los dos codones trp. Se detiene porque la escasez de
los riboswitches se describen en esta sección. moléculas de tRNAtrp cargadas retrasa el llenado
del sitio A del ribosoma (figura 12.11b). Mientras tanto, el ARN
polimerasa continúa transcribiendo ARNm, alejándose de
Atenuación el ribosoma estancado. La presencia del ribosoma en la región 1
Como se señaló anteriormente, el operón triptófano (trp) de E. coli está bajo evitará que se aparee con la región 2. A medida que continúa la ARN polimerasa, la
el control de una proteína represora, y el exceso de triptófano inhibe región 3 se transcribe, lo que permite la formación
transcripción de genes de operón actuando como correpresor y acti del bucle antiterminador 2:3. Esto evita la formación de la
Regulación de la elongación de la transcripción 303
rico en U ARN
Bucle de pausa Bucle terminador atenuador polimerasa
de transcripción
1 23 4
ARN
5ÿ 3ÿ
trpe ADN
trpL
(a) No se produce ninguna traducción
péptido líder
Anti-terminador
codón trp
2
Puestos de ribosomas 3
1 4
5ÿ
ARNm
para trpE
trpL
ADN
trpe
(b) Traducción en curso, bajos niveles de

triptófano, formas 2:3
la transcripción continúa
codón de Bucle de
terminación de terminación de
la traducción transcripción
34
21
5ÿ 3ÿ
trpe ADN
trpL
(c) Se produce la traducción, altos niveles de

triptófano, se termina
3:4la transcripción de formas
Figura 12.11 Atenuación del operón trp. (a) Cuando la síntesis de proteínas se ha vuelto más lenta, la transcripción y la traducción no están estrechamente acopladas.
En estas condiciones, la forma más estable del ARNm se produce cuando el hidrógeno de la región 1 se une a la región 2 (bucle de pausa de la polimerasa de ARN) y el
hidrógeno de la región 3 se une a la región 4 (terminador de la transcripción o bucle atenuador). La formación del terminador de la transcripción provoca la transcripción. para
detenerse justo más allá de trpL (líder trp). (b) Cuando se produce la síntesis de proteínas, se acoplan la transcripción y la traducción, y el comportamiento del ribosoma en
trpL influye en la transcripción. Si los niveles de triptófano son bajos, el ribosoma se detiene en los codones trp en trpL debido a las cantidades insuficientes de tRNAtrp cargado.
Esto bloquea la región 1 del mRNA, por lo que la región 2 solo puede formar enlaces de hidrógeno con la región 3. Debido a que la región 3 ya tiene enlaces de hidrógeno a la
región 2, no se puede formar el bucle terminador 3:4. Continúa la transcripción y se producen las enzimas biosintéticas trp. (c) Si los niveles de triptófano son altos, la traducción
de trpL avanza al codón de parada, bloqueando la región 2. Las regiones 3 y 4 pueden enlace de hidrógeno y termina la transcripción.
Bucle terminador 3:4. Como no se forma el bucle terminador, organización. Por ejemplo, la secuencia peptídica líder del operón histidina
La ARN polimerasa no se expulsa del ADN y la transcripción. codifica siete histidinas seguidas y se sigue
continúa en los genes biosintéticos trp . Si, por el contrario, por un atenuador que es una secuencia terminadora.
hay mucho triptófano en la célula, habrá una gran cantidad de tRNAtrp cargado
y el ribosoma los traducirá
dos codones trp en la secuencia del péptido líder sin dudarlo. Así, el ribosoma riboconmutadores
permanece cerca de la ARN polimerasa. La regulación por riboconmutadores, o ARN sensoriales, es un
A medida que la ARN polimerasa y el ribosoma continúan a través de la forma de atenuación de la transcripción que no involucra al ribosoma
región líder, las regiones 1 y 2 se transcriben y forman fácilmente conducta. En este caso, la región líder del ARNm puede plegarse
un bucle de pausa. Luego se transcriben las regiones 3 y 4, se forma el bucle diferentes caminos. Si se dobla de una manera, la transcripción continúa; si
terminador y la ARN polimerasa se expulsa del plegado otro, se termina la transcripción. Esta región líder es
plantilla de ADN. Finalmente, la presencia de un codón de terminación UGA llamado riboswitch porque activa o desactiva la transcripción. Qué
entre las regiones 1 y 2 provocará la terminación temprana de la traducción hace que los riboswitches sean únicos y emocionantes es que alteran su
(figura 12.11c). Aunque el péptido líder será patrón de plegado en respuesta directa a la unión de un efector
sintetizado, parece degradarse rápidamente. El código genético molécula: una capacidad que antes se pensaba que estaba asociada solo
(sección 11.7) con proteinas
La utilidad de la atenuación es evidente. Si la bacteria es deficiente en un Uno de los primeros descubrimientos de este tipo de regulación fue la
aminoácido que no sea triptófano, la síntesis de proteínas operón biosintético de riboflavina (rib) de B. subtilis. La síntesis
se ralentizará y se acumulará triptofanil-tRNA. Transcripción de enzimas biosintéticas de riboflavina es reprimida por flavina
del operón triptófano será inhibido por atenuación. Cuándo mononucleótido (FMN), que se deriva de la riboflavina. Cuándo
la bacteria comienza a sintetizar proteínas rápidamente, triptófano comienza la transcripción del operón rib , las secuencias en la región líder del
puede ser escaso y la concentración de triptofanil-tRNA puede ARNm se pliegan en una estructura llamada elemento RFN.
debajo. Esto reduciría la actividad de atenuación y estimularía Este elemento se une a FMN, y al hacerlo altera el plegamiento de
transcripción del operón, lo que resulta en mayores cantidades de enzimas la región líder, creando un terminador que detiene la transcripción
biosintéticas de triptófano. Actuando juntas, la represión y la atenuación pueden (figura 12.12).
coordinar la tasa de síntesis de aminoácidos. Ahora parece que controlar la atenuación de la transcripción con
enzimas biosintéticas con la disponibilidad de aminoácido final Los ARN sensoriales son un método importante que utilizan las bacterias grampositivas
productos y con la tasa global de síntesis de proteínas. Cuando el triptófano para regular los genes relacionados con los aminoácidos. Como en el caso de la costilla
está presente en altas concentraciones, cualquier ARN polimerasa operón, las regiones líder de estos ARNm contienen un elemento regulador.
no bloqueada por la proteína represora activada probablemente no En este caso, la región se llama caja T. Secuencias de caja T
pasar la secuencia del atenuador. La represión disminuye la transcripción unas dan lugar a ciclos terminadores y antiterminadores que compiten entre sí. los
setenta veces y la atenuación la ralentiza entre ocho y ocho veces más. el desarrollo de un terminador o un antiterminador está determinado por la
décuplo; cuando ambos mecanismos operan juntos, la transcripción unión del ARNt no cargado correspondiente al aminoácido relevante (es decir,
se puede ralentizar unas 600 veces. el ARNt que no lleva su aminoácido afín).
La atenuación es importante en la regulación de al menos otras cinco ácido). Por ejemplo, la expresión de un gen de tirosil-tRNA sintetasa
operaciones que incluyen enzimas biosintéticas de aminoácidos. En todos los casos, (es decir, un gen que codifica la enzima que une la tirosina a un tRNA
las secuencias peptídicas líder se asemejan al sistema triptófano en molécula) se rige por la presencia de tRNATyr. cuando el nivel
expresión génica en expresión génica desactivada
Riboflavina FMN (metabolito)
caja de radiofrecuencia
caja de radiofrecuencia
Terminación
antiterminación
UUUU 3ÿ
ARNm 5ÿ UUUU 3ÿ
Transcripción 5ÿ Transcripción
costilla
continúa se detiene
Figura 12.12 Control Riboswitch del operón de riboflavina (costilla) de Bacillus subtilis. El operón rib produce las enzimas necesarias para
la síntesis de riboflavina, un componente del mononucleótido de flavina (FMN). Unión de FMN a la caja de rfn (rifampicina) en el líder del ARNm de costilla
provoca un cambio en el plegamiento del ARNm, lo que da como resultado la formación de un terminador de la transcripción y el cese de la transcripción.
Regulación a Nivel de Traducción 305
Tabla 12.1 Regulación de la expresión génica por riboconmutadores
Sistema Microbio(s) Los genes diana codifican: Efector y respuesta regulatoria
caja T Muchas bacterias Enzimas biosintéticas de aminoácidos ARNt sin carga; pares de bases de anticodón al extremo
grampositivas 5 'del ARNm, lo que evita la formación de un
terminador transcripcional
Elemento E. coli Enzimas biosintéticas de cobalamina La adenosilcobalamina (AdoCbl) se une a btuB
vitamina B12 ARNm y bloquea la traducción
THI caja Rhizobium etli Proteínas biosintéticas y de transporte de El pirofosfato de tiamina (TPP) provoca una
E. coli tiamina (vitamina B1) terminación transcripcional prematura (R. etli, B.
B. subtilis subtilis) o bloquea la unión al ribosoma (E. coli)
elemento RFN B. subtilis Enzimas biosintéticas de riboflavina Casos de mononucleótido de flavina (FMN) terminación
prematura de la transcripción
caja S Bacterias grampositivas Enzimas biosintéticas de metionina La S-adenosilmetionina (SAM) provoca una terminación
de bajo GC transcripcional prematura
de ARNt cargado cae Tyr, el anticodón de un ARNt no cargado La incorporación de pirofosfato de tiamina al elemento THI provoca un cambio
se une directamente al codón de "secuencia especificadora" en el líder de conformacional en la región líder que secuestra la secuencia de Shine Dalgarno y
el ARNm Al mismo tiempo, el bucle antiterminador se estabiliza bloquea el inicio de la traducción.
por emparejamiento de bases entre secuencias en el bucle y el aceptor
extremo del ARNt, que normalmente se une al aminoácido. Esto previene la
Regulación de la traducción por pequeñas moléculas de ARN
formación de la estructura terminadora y la transcripción de
continúa el gen de la tirosil-tRNA sintetasa. Análisis genómico Se ha descubierto un gran número de moléculas de ARN que no
ahora sugiere que el mecanismo de la caja T puede estar involucrado en la no funcionan como mRNA, tRNA o rRNA. Los microbiólogos de diez se refieren a
regulación de más de 300 genes y/u operones; algunos otros genes que ellos como ARN pequeños (ARNs) o como ARN no codificantes .
tienen ARN sensorial en sus regiones líder se enumeran en la tabla 12.1. (ncRNA). En E. coli, hay más de 40 sRNA, que van desde
Se ha demostrado que otros ribointerruptores funcionan al nivel de tamaño de alrededor de 40 a 400 nucleótidos. Se cree que las eucary otas pueden
traducción. Se describen en la siguiente sección. tener cientos a miles de sRNA con longitudes
de 21 a más de 10.000 nucleótidos. Aunque algunos sRNA tienen
sido implicado en la regulación de la replicación y transcripción del ADN, muchos
12.4 REGULACIÓN A NIVEL DE TRADUCCIÓN funcionan al nivel de la traducción.
En E. coli, la mayoría de los sRNA regulan la traducción por emparejamiento de bases a
Parece que, en general, los ribointerruptores que se encuentran en bacterias grampositivas
la región líder de un ARNm diana. Por tanto, son complementarios al mRNA y se
Las bacterias funcionan por terminación transcripcional, mientras que los
denominan RNA antisentido. Parece intuitivo que al unirse al líder, los ARN
ribointerruptores descubiertos en las bacterias gramnegativas regulan la
antisentido bloquearían
traducción de ARNm. La traducción suele regularse bloqueando su iniciación. Como
unión al ribosoma e inhibe la traducción. De hecho, muchas tonterías
se señaló anteriormente, algunos riboswitches funcionan en
Los ARN funcionan de esta manera. Sin embargo, algunos ARN antisentido en
este nivel. Además, algunas pequeñas moléculas de ARN pueden controlar
iniciación de la traducción. Ambos se describen en esta sección. realidad promueven la traducción al unirse al ARNm. Si
inhibidores o activadores, la mayoría de los ARN antisentido de E. coli funcionan con
una proteína llamada Hfq para regular sus ARN diana. La proteína Hfq es una
Regulación de la Traducción por Riboswitches chaperona del ARN , es decir, interactúa con el ARN para promover cambios en su
Al igual que los riboconmutadores descritos anteriormente, los riboconmutadores que estructura. Además, la proteína Hfq puede
a nivel de traducción contienen elementos de unión a efectores en el extremo 5ÿ del promover interacciones ARN-ARN.
ARNm. La unión de la molécula efectora altera el patrón de plegamiento de la región La regulación de la síntesis de proteínas de porina OmpF y OmpC
líder del ARNm, proporciona un ejemplo de control de traducción por un ARN antisentido.
que a menudo resulta en la oclusión de la secuencia Shine-Dalgarno Además de la regulación por la proteína OmpR descrita anteriormente (figura 12.10),
y otros elementos del sitio de unión al ribosoma. Esto inhibe la unión al ribosoma y la expresión del gen ompF está regulada por
el inicio de la traducción (figura 12.13). Un un ARN antisentido llamado ARN MicF, que es el producto de la
ejemplo de este tipo de regulación se observa para la tiamina Gen micF (mic para ARN complementario de interferencia de ARNm). los
operones biosintéticos de numerosas bacterias y algunas arqueas. MicF RNA es complementario a ompF en el inicio de la traducción
Las regiones líder de los operones de tiamina contienen una estructura llamada sitio (figura 12.14). Forma pares de bases con el ARNm de ompF y reprime
el elemento THI, que puede unirse al pirofosfato de tiamina. Unir traducción. MicF RNA se produce en condiciones tales como alta
presión osmótica o la presencia de algún material tóxico, tanto de

que favorecen la expresión de ompC . La producción de ARN MicF ayuda a garantizar
que la proteína OmpF no se produzca en niveles altos al mismo tiempo.
tiempo como proteína OmpC. Algunos otros ARN antisentido se enumeran en
tabla 12.2.
Ribosoma 1. Defina atenuación. ¿Cuáles son las funciones de la región líder y ribo some en la
atenuación?
AGO
Dakota del Sur
2. ¿Qué importancia práctica tiene la atenuación en la coordinación de la síntesis de

aminoácidos y proteínas? Describir cómo variaría la actividad de atenuación
cuando la síntesis de proteínas se acelera repentinamente, luego se desacelera rápidamente.
ligando 3. ¿Qué son los riboconmutadores? ¿En qué se parecen a la atenuación descrita?
para el trpoperon? ¿Cómo se diferencian?
Ribosoma
Estructura de bucle de tallo
ARN antisentido
desde micrófono gene
3ÿ 5ÿ
Figura 12.13 Regulación de la traducción por un Riboswitch.
En ausencia de un metabolito relevante, un sitio de unión efector es

ompF ARNm
formado en el líder del mRNA (rojo) cuando complementario
5ÿ 3ÿ
secuencias (caja naranja y caja verde) enlace de hidrógeno. Este plegamiento
el patrón expone secuencias importantes en el sitio de unión al ribosoma
(p. ej., la secuencia Shine-Dalgarno; cuadro azul) y se produce la traducción. Figura 12.14 Regulación de la traducción por ARN antisentido.
Cuando la molécula efectora apropiada está presente, se une a la El ARNm de ompF codifica la porina OmpF. Traducción de esto
líder, rompiendo la estructura existente y creando una nueva estructura El mensaje está regulado por el ARN antisentido MicF, el producto de
con las secuencias del sitio de unión al ribosoma. Por lo tanto, el sitio de unión el gen micF. MicF es complementario al ARNm de ompF y,
al ribosoma se vuelve inaccesible y se bloquea la traducción. cuando está vinculado a él, evita que se produzca la traducción.
Cuadro 12.2 Regulación de la expresión génica por pequeños ARN reguladores
ARN pequeño Tamaño Bacteria Función
RhyB 90 nt1 E. coli Reprime la traducción de proteínas que contienen hierro (p. ej., sodB) cuando la disponibilidad de hierro es baja
Punto 42 109 nt E. coli Inhibe la traducción de galK (codifica galactoquinasa)

RprA 105 nt E. coli Promueve la traducción del ARNm de rpoS ; represor antisentido de H-NS regular negativo global
(involucrado en las respuestas al estrés)
micrófono 109 nt E. coli Inhibe la traducción del ARNm de ompF
s
OxyS 109 nt E. coli Inhibe la traducción del ARNm fhlA del regulador transcripcional y el ARNm rpoS (codifica ,
un factor sigma de fase estacionaria)
DsrA 85 nt E. coli Aumenta la traducción del ARNm de rpoS
CsrB 366 nt E. coli Inhibe CsrA, una proteína reguladora de la traducción que regula positivamente los flagelos
síntesis, metabolismo del acetato y glucólisis
ARNIII 512 nt Estafilococo Activa genes que codifican proteínas secretadas (p. ej., hemolisina)
aureus
Reprime genes que codifican proteínas de superficie

ARN 650 nt Vibrio anguillarum Disminución de la expresión de Fat, una proteína de captación
RsmBÿ 259 nt Erwinia carotovora de hierro Estabiliza el ARNm de las proteínas de virulencia (p. ej., celulasas, proteasas, pectinolíticas
subesp. carotovora enzimas)
1 nt: nucleótidos
Sistemas regulatorios globales 307
12.5 SISTEMAS REGULADORES GLOBALES Mecanismos utilizados para la regulación global

La regulación global es compleja y, a menudo, involucra a más de un
Hasta ahora, hemos estado considerando la función de operaciones aisladas. Sin
mecanismo regulador. La mayoría de las redes reguladoras mundiales están
embargo, los organismos deben responder rápidamente a una amplia variedad
controlada por una o más proteínas reguladoras. bicomponente
de las condiciones ambientales cambiantes y ser capaz de hacer frente a
Los sistemas reguladores y los sistemas de fosforescencia también juegan un
factores estresantes como la privación de nutrientes, la desecación y las grandes
papel importante en el control global. En Bacteria, muchos reguladores globales
fluctuaciones de temperatura. También tienen que competir con éxito.
Las redes hacen uso de factores sigma alternativos, que pueden cambiar
con otros organismos por los escasos nutrientes y utilizar estos nutrientes
inmediatamente la expresión de muchos genes a medida que dirigen
eficientemente. Estos desafíos requieren un sistema regulatorio que pueda
ARN polimerasa a subconjuntos específicos del genoma de una bacteria.
controlar rápidamente muchos operones al mismo tiempo. Los sistemas
Esto es posible porque la enzima central de la ARN polimerasa necesita
reguladores que afectan a muchos genes y vías simultáneamente son
la asistencia de un factor sigma para unir un promotor e iniciar
llamados sistemas regulatorios globales.
transcripción. Cada factor sigma reconoce promotores que difieren en secuencia,
Aunque normalmente es posible regular todos los genes de un
especialmente en las posiciones 10 y 35. los
vía metabólica en un solo operón, hay buenas razones para
secuencias específicas reconocidas por un factor sigma dado son
sistemas globales más complejos. Algunos procesos implican demasiadas
llamadas sus secuencias consenso. Cuando un proceso complejo requiere un
genes para ser acomodados en un solo operón. por ejemplo, el
cambio radical en la transcripción o una secuencia de transcripción cronometrada
maquinaria necesaria para la síntesis de proteínas se compone de 150 o
con precisión, puede estar regulado por una serie de
más productos génicos, y la coordinación requiere una red reguladora que controle
factores sigma. Transcripción (sección 11.6)
muchos operones separados. A veces dos niveles
E. coli sintetiza varios factores sigma (tabla 12.3). Bajo
de regulación son necesarios porque los operones individuales deben ser 70
condiciones normales, un factor sigma llamado dirige la actividad de la ARN
controlado de forma independiente y también cooperar con otros operones.
polimerasa. (El número o letra en superíndice indica el
La regulación del catabolismo del azúcar en E. coli es un buen ejemplo. MI.
tamaño o función del factor sigma; 70 significa 70,000 Da.)
coli usa glucosa cuando está disponible; en tal caso, los operones para
Cuando se necesitan flagelos y proteínas quimiotácticas, E. coli pro F (28). F
se reprimen otras vías catabólicas. Si la glucosa no está disponible
genes cuyos
duces
productos
luego se
sonune
necesarios
a sus secuencias
para los flagelos.
de consenso en promotores de
y otro nutriente está presente, se activa el operón apropiado.
Los sistemas regulatorios globales son tan complejos que un especialista
biosíntesis y quimiotaxis. Si la temperatura sube demasiado,
la nomenclatura se utiliza para describir los diversos tipos. Quizás lo más
el tipo basico es el regulon. Un regulón es una colección de genes u operaciones Se produce H (32) y estimula la formación de alrededor de 17
Proteínas de choque térmico que protegen a la célula de la destrucción térmica.
que está controlada por una proteína reguladora común. Por lo general, el
Es importante destacar que cada factor sigma tiene su propio conjunto de promotores
Los operones están asociados con una sola vía o función (p. ej., el
a la que se une.
producción de proteínas de choque térmico o el catabolismo del glicerol). A
En las discusiones que siguen, describimos tres redes regulatorias globales.
situación algo más compleja se ve con un módulo. Esto es un
El primer ejemplo relativamente simple es el catabolito
red de operones bajo el control de un regulador global común
módulo de represión, que implica la regulación de la transcripción por
proteína, pero cuyos operones constituyentes también se controlan por separado
tanto represores como activadores. La segunda es la detección de quórum,
por sus propios reguladores. Un buen ejemplo de un modulon es catabolite
que se introdujo en el capítulo 6. Aunque el ejemplo que discutimos regula un solo
represión, que se analiza en la página 308. La más compleja
operón, muchos sistemas de detección de quórum regulan la transcripción de
Los sistemas globales se conocen como estímulos. Un estímulo es un regulador
conjuntos de genes y operones. Finalmente nosotros
sistema en el que todos los operones responden juntos de forma coordinada
examinar un proceso más complejo, el de la esporulación en la bacteria gram
a un estímulo ambiental. Puede contener varios regulones y
positiva B. subtilis. Regulación de la formación de endosporas
módulos, y algunos de estos pueden no compartir proteínas reguladoras. Para
involucra numerosos mecanismos de control, incluyendo fosforescencia
ejemplo, los genes involucrados en una respuesta a la limitación de fosfato son
y uso secuencial de factores sigma.
dispersos entre varios regulones y son parte de un estímulo.
Tabla 12.3 Factores Sigma de E. coli
factor sigma genes transcritos
70
Genes necesarios durante el crecimiento exponencial
S
Genes necesarios durante la respuesta general al estrés y durante la fase estacionaria
mi
Genes necesarios para restaurar la integridad de la membrana y el plegamiento adecuado de las proteínas de la membrana
H (32) Genes necesarios para proteger contra el choque térmico y otros estreses, incluidas las chaperonas que ayudan a mantener o restaurar el plegamiento
adecuado de las proteínas citoplasmáticas y las proteasas que degradan las proteínas dañadas.
factor sigma fecI Genes que codifican la maquinaria de transporte de citrato de hierro en respuesta a la falta de hierro y la disponibilidad de citrato de hierro
F (28) Genes involucrados en el ensamblaje de flagelos

60
Genes implicados en el metabolismo del nitrógeno
Represión catabólica Si E. Todos los operones de catabolitos contienen un sitio de unión a
coli crece en un medio que contiene tanto glucosa como lactosa, utiliza CAP, y CAP debe unirse a este sitio antes de que la ARN polimerasa
preferentemente la glucosa hasta que se agota el azúcar. Luego, pueda unirse al promotor y comenzar la transcripción. Al unirse, CAP
después de un breve retraso, el crecimiento se reanuda con la lactosa dobla el ADN en dos vueltas helicoidales (figura 12.6b y figura 12.17).
como fuente de carbono (figura 12.15). Este patrón o respuesta de La interacción de CAP con la ARN polimerasa estimula la transcripción.
crecimiento bifásico se denomina crecimiento diáuxico. La causa del Por tanto, todos los operones catabólicos están controlados por dos
crecimiento diauxico o diauxie es compleja y no se comprende por proteínas reguladoras: la proteína reguladora específica de cada operón
completo, pero la represión catabólica desempeña un papel. Las (p. ej., el represor lac y la proteína AraC) y CAP. En el caso del operón
enzimas del catabolismo de la glucosa son constitutivas. Sin embargo, lac , si la glucosa está ausente y la lactosa está presente, el inductor al-
los operones que codifican enzimas requeridas para el catabolismo de lolactosa se unirá e inactivará la proteína represora lac , CAP estará en
fuentes de carbono que primero deben modificarse antes de entrar en la la forma activa (con cAMP unido) y procederá la transcripción (figura
glucólisis (p. ej., el operón lac ) están regulados por represión catabólica. 12.18a). Sin embargo, si tanto la glucosa como la lactosa escasean,
Estos incluyen los operones ara, mal (maltosa) y gal (galactosa), así aunque CAP se una al promotor lac , la transcripción se inhibirá por la
como el operón lac . Colectivamente, estos pueden llamarse operones presencia de la proteína represora, que permanece unida al operador en
catabolitos, y su expresión se reprime coordinadamente (o globalmente) ausencia del inductor (figura 12.18c). . El control dual asegura que el
cuando la glucosa es abundante y se activa cuando no lo es. operón lac se exprese solo cuando se necesitan genes catabólicos de
La regulación coordinada de los operones de catabolitos es lactosa.
provocada por la proteína activadora de catabolitos (CAP), que Hemos visto cómo CAP controla los operones catabólicos; ahora
también se denomina proteína receptora de AMP cíclico (CRP). CAP dirijamos nuestra atención a la regulación de los niveles de cAMP. La
existe en dos estados: está activo cuando el pequeño nucleótido cíclico disminución de los niveles de AMPc que se produce en presencia de
3', 5'-monofosfato de adenosina cíclico (AMPc; figura 12.16) está glucosa se debe al efecto del sistema fosfoenolpiruvato:fosfotransferasa
unido, y está inactivo cuando está libre de AMPc. Los niveles de AMPc (PTS) sobre la actividad de la adenilciclasa. Recordar del cap.
están controlados por la enzima adenil ciclasa, que convierte el ATP en

AMPc y PPi . La adenil ciclasa está activa solo cuando hay poca o NH2
ninguna glucosa disponible. Por lo tanto, el nivel de AMPc varía norte
inversamente con el de la glucosa: cuando la glucosa no está disponible norte
y puede ser necesario el catabolismo de otro azúcar, la cantidad de

AMPc en la célula aumenta, lo que permite que el AMPc se una a CAP y lo active. norte norte
O O O
P-O OPO PAGS O CH 2

O
O– O– O–
lactosa utilizada
atp OH OH
Adenil ciclasa
PPi
Glucosa
NH2
utilizada
norte
norte
norte norte
5ÿ
CH2 O
O
3ÿ
0246 8 10 OP oh oh
Tiempo (horas) OH
acampar
Figura 12.15 Crecimiento diauxico. La curva de crecimiento diáuxico de

E. coli cultivada con una mezcla de glucosa y lactosa. Primero se usa Figura 12.16 Monofosfato de adenosina cíclico (cAMP).
glucosa, luego lactosa. Hay un breve retraso en el crecimiento mientras las El grupo fosfato se extiende entre los hidroxilos 3ÿ y 5ÿ del azúcar ribosa.
bacterias sintetizan las enzimas necesarias para el uso de la lactosa. La enzima adenil ciclasa forma AMPc a partir de ATP.
5ÿ 3ÿ ter 5 que en el PTS, un grupo fosforilo es transferido por una serie de

proteínas del fosfoenolpiruvato (PEP) a la glucosa, que luego ingresa a la
célula como glucosa 6-fosfato. Cuando hay glucosa presente, la enzima IIA
A T transfiere el grupo fosforilo a la enzima IIB, que fosforila la glucosa. Debido
A T a que la enzima IIA transfiere rápidamente grupos fosforilo, existe en gran
T A parte en un estado no fosforilado. La enzima no fosforilada IIA inhibe las
T A permeasas de muchos azúcares y, al hacerlo, inhibe la absorción de azúcar.
F
mi Sin embargo, cuando no hay glucosa, los grupos fosforilo de la PEP se
Hélices de transfieren a la enzima IIA, pero no a la enzima IIB.
GRAMO
C “reconocimiento”
T A
D
GRAMO
C La forma fosforilada de la enzima IIA se acumula. Esta forma de la enzima activa la adenil ciclasa,
estimulando la producción de AMPc. Absorción de nutrientes por la célula: Translocación de grupo

A (sección 5.6)
A T La represión por catabolitos es una ventaja considerable para la
T T bacteria. Utilizará primero el azúcar (glucosa) que se cataboliza más
C A fácilmente en lugar de sintetizar las enzimas necesarias para el catabolismo
D
de otra fuente de carbono y energía. Estos mecanismos de control están
mi presentes en una variedad de bacterias y vías metabólicas.
C F
GRAMO
A
T
C Detección de quórum
GRAMO
La comunicación de célula a célula entre procariotas se produce mediante

el intercambio de pequeñas moléculas, a menudo denominadas señales o
GRAMO
C moléculas de señalización. El intercambio de moléculas de señalización es

T
esencial en la coordinación de la expresión génica en las poblaciones
A
A microbianas. Esto se reconoció por primera vez en la bacteria bioluminiscente
T marina Vib rio fischeri, que produce luz solo si las células tienen una alta densidad.
5ÿ
Desde entonces se ha descubierto que la comunicación intercelular
3ÿ
desempeña un papel esencial en la regulación de genes cuyos productos
(a)
son necesarios para el establecimiento de la virulencia, la simbiosis, la
producción de biopelículas, la transferencia de plásmidos y la diferenciación
morfológica en una amplia gama de microorganismos. Aquí describimos
cómo las señales secretadas por un grupo de células pueden regular la
expresión genética de otro. Nuestro enfoque está en la regulación de un
solo operón. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que la detección de
quórum puede regular múltiples genes y operones. Crecimiento microbiano
en ambientes naturales: Comunicación célula-célula dentro de poblaciones microbiana
La detección de quórum en V. fischeri y muchas otras bacterias
gramnegativas utiliza una señal de N-acil homoserina lactona (AHL)
(figura 12.19). La síntesis de esta pequeña molécula es catalizada por una
enzima llamada AHL sintasa, el producto del gen luxI . El gen luxI está sujeto
a autorregulación positiva. Es decir, la transcripción de luxI aumenta a
medida que se acumula AHL en la célula. Esto se logra a través de un
activador transcripcional, LuxR, que está activo solo cuando se une a AHL
(figura 12.19). Por lo tanto, se crea un ciclo de retroalimentación simple. Sin
LuxR activado por AHL, el gen luxI se transcribirá solo a niveles basales.
(B) AHL se difunde libremente fuera de la célula y se acumula en el medio
ambiente. A medida que aumenta la densidad celular, la concentración de
Figura 12.17 Estructura CAP y unión al ADN. ( a ) El dímero CAP que se AHL fuera de la célula eventualmente excede la del interior de la célula y el
une al ADN en el promotor del operón lac. Las hélices de reconocimiento gradiente de concentración se invierte. A medida que AHL fluye de regreso
encajan en dos ranuras principales adyacentes en la doble hélice. ( b ) Un a la célula, se une y activa LuxR. LuxR ahora puede activar la transcripción
modelo del complejo E. coli CAP-DNA derivado de estudios de estructura de alto nivel de luxI y los genes cuyos productos son necesarios para la
cristalina. El dominio de unión a cAMP está en azul y el dominio de unión a bioluminiscencia (luxCDABEG). La detección de quórum a menudo se
ADN, en púrpura. Las moléculas de AMPc unidas a CAP están en rojo. Tenga denomina autoinducción y la señal AHL se denomina autoinductor para
en cuenta que el ADN se dobla cuando forma complejo con CAP. reflejar la naturaleza autorreguladora de este sistema.
Figura 12.18 Regulación del operón lac por el represor lac y sitio de la PAC Operador Promotor
CAP. La acción de CAP, una proteína activadora y el represor lac
alolactosa
provoca un continuo de síntesis de ARNm de lac. (a) Cuando la lactosa GORRA
Se produce la transcripción
está disponible y la glucosa no, el represor se inactiva y los niveles de
AMPc aumentan. El AMP cíclico se une a CAP y lo activa. CAP se une acampar
CAP mejora la unión de la ARN
al sitio de unión de CAP cerca del promotor lac y facilita la unión de la polimerasa al promotor.
ARN polimerasa. En estas condiciones, la transcripción se produce a Represor
(inactivo)
niveles máximos. (b) Cuando tanto la lactosa como la glucosa están
disponibles, tanto CAP como el represor lac están inactivos. Debido a (a) Lactosa pero no glucosa
que la ARN polimerasa no puede unirse al promotor de manera
eficiente sin la ayuda de CAP, los niveles de transcripción son bajos.
(c) Cuando no hay glucosa ni lactosa disponibles, tanto CAP como el Sitio CAP Promotor Operador
represor lac están activos. En esta situación, ambas proteínas están alolactosa
unidas a sus sitios reguladores. La unión a CAP mejora la unión de la La transcripción

ARN polimerasa al promotor. Sin embargo, el represor bloquea la se inhibe por la
falta de CAP.
transcripción. Los niveles de transcripción son bajos. (d) Cuando la GORRA
glucosa está disponible y la lactosa no, la CAP está inactiva y el

Represor
represor lac está activo. Por lo tanto, la ARN polimerasa se une de (inactivo) (Inactivo)
manera ineficiente y el represor bloquea las moléculas de polimerasa
(b) Lactosa y glucosa
que se unen. Esta condición da como resultado los niveles más bajos
de transcripción observados para el operón lac.
Sitio CAP Promotor Operador
GORRA represor
acampar
La transcripción
está bloqueada
por el represor.
(c) Ni lactosa ni glucosa
Sitio CAP Promotor Operador
GORRA
La transcripción se inhibe por la

(Inactivo) falta de CAP y la presencia del
represor.
(d) Glucosa pero no lactosa
Otro tipo de detección de quórum depende de un elaborado sistema LuxPQ se autofosforila y converge en una sola proteína fosfo transferasa
de transducción de señales de dos componentes. Se encuentra tanto en llamada LuxU. LuxU acepta fosfatos de cada sensor quinasa y luego
bacterias gramnegativas como grampositivas, incluidas (pero no limitadas a) fosforila el regulador de respuesta LuxO. LuxO fosforilado, a su vez, activa
Staphylococcus aureus, Ralstonia solanacearum, Salmonella en térica, la transcripción de genes que codifican varios ARN pequeños que
Vibrio cholerae y E. coli. Se ha estudiado mejor en la bacteria desestabilizan el ARNm de luxR . Debido a que LuxR es un activador
bioluminiscente Vibrio harveyi. A diferencia de V. fischeri, V. har veyi transcripcional del operón luxCDABE, que codifica las proteínas necesarias
responde a dos moléculas autoinductoras: AI-1 y AI-2. AI-1 es una para la bioluminiscencia, las células no producen luz a baja densidad
homoserina lactona y su síntesis depende del gen luxM . celular. Sucede algo interesante a medida que aumentan las densidades
AI-2 es furanosilborato, una pequeña molécula que contiene un átomo de de células y autoinductores: Lux N se une a AI-1 y LuxPQ se une a AI-2, y
boro, un componente bastante inusual en una molécula orgánica. Su las proteínas pasan de funcionar como quinasas a fosfatasas, proteínas
síntesis se basa en el producto del gen luxS . Como se muestra en la que desfosforilan en lugar de fosforilar sus sustratos. El flujo de fosfatos
figura 12.20, AI-1 y AI-2 son secretados por la célula, que luego usa ahora se invierte; LuxO se inactiva por desfosforilación y se traduce el
proteínas separadas llamadas LuxN y LuxPQ para detectar su presencia. ARNm de luxR . LuxR ahora se activa
A baja densidad celular en ausencia de AI-1 o AI-2, LuxN y
Síntesis de autoinductores Densidades celulares bajas: Altas densidades celulares:

lleva a una expresión de alto nivel Nivel basal concentración de IA
del operón lux
transcripción del se levanta; operón lux
operón lux la transcripción aumenta
La IA puede difundirse en
y fuera de las celdas
ARN polimerasa
LuxR-AI
se une al promotor Transcripción y traducción
luxR luxC D A B mi GRAMO
LuxI
SAM
Acil-ACP O O H
O
LuxR norte
(inactivo) H
IA (autoinductor) O
AI
Figura 12.19 Detección de quórum en V. fischeri. La molécula de señalización AHL se difunde fuera de la célula; cuando la densidad celular es alta, la
La concentración de AHL se difunde de regreso a la célula donde se une y activa el regulador transcripcional LuxR. Acto seguido, Active LuxR estimula la transcripción del gen
que codifica la AHL sintasa (luxl), así como los genes que codifican las proteínas necesarias para la producción de luz.
comunidad bacteriana que consta de varias bacterias productoras de AI-2
LuxS especies, las moléculas de AI-2 en el medio ambiente se interconvierten. Esta

AI-2
significa que las células individuales pueden estar respondiendo a su propia señal
LuxQ
LuxP LuxU LuxO y la producida por otras especies. Las bacterias productoras de LuxS pueden
también interfieren con la comunicación de los demás. Esto ha sido
AI-1 mostrado experimentalmente. Cuando V. harveyi y E. coli se cultivan juntos, E. coli

LuxR
LuxN
consume AI-2 producido por V. harveyi, lo que inhibe la producción de luz y promueve la
Luciferasa tipo III producción de TTSS a altas temperaturas.
LuxM secreción
densidad celular. E. coli también puede limitar la expresión génica regulada por AI-2 en
V. cholerae al consumir el vibroide AI-2. Así, aunque la regulación de la expresión génica
se considera generalmente en el contexto de
Figura 12.20 Detección de quórum en V. harveyi. Se producen dos señales de
una sola célula, o al menos una sola especie, parece que, en la naturaleza, lo más
autoinducción, AI-1 y AI-2. A baja densidad celular, la
probable es que los microbios respondan no solo directamente al medio ambiente, sino
sistema de transducción de señales de dos componentes que consta de
también entre ellos.
las quinasas de señal LuxPQ y LuxN inician un fosforescencia que da como resultado
en la inhibición del regulador transcripcional LuxR. Sin LuxR,
los genes de bioluminiscencia están reprimidos pero los genes para un tipo III Esporulación en Bacillus subtilis
sistema de secreción (TTSS) se transcriben. A alta densidad celular, LuxPQ Como se discutió en el capítulo 3, la formación de endosporas es un proceso complejo.
y LuxN funcionan como fosfatasas, invirtiendo el flujo de fosfatos. Esto da como proceso que implica la división asimétrica del citoplasma para
resultado la activación de LuxR, activación transcripcional producir una célula madre grande y una forespora más pequeña, absorción de
del operón de bioluminiscencia y la represión de los genes TTSS. la forespora por la célula madre, y la construcción de adicional
capas de cubiertas de esporas (figura 12.21a y figura 3.49). La esporulación tarda
se produce la transcripción de luxCDABE y luz. Una inspección cuidadosa de la figura aproximadamente 8 horas. Está controlado por fosforilación, modificación postraduccional
12.20 revela que otro conjunto de genes está controlado de proteínas, numerosos
por el sistema AI-1, AI-2 de V. harveyi. En este microbio, los genes para un proteínas reguladoras del inicio de la transcripción y sigma alternativo
el sistema de secreción de proteínas de tipo III (TTSS) se controlan de forma opuesta a factores Estos últimos son particularmente importantes. Cuando se cultivan vegetales
de
los de la bioluminiscencia. manera esperada, la ARN polimerasa de B. subtilis utiliza factores sigma y
H
Los autoinductores de tipo LuxS se encuentran en varias bacterias, pero para reconocer genes para la supervivencia normal. Sin embargo, cuando las células
la estructura precisa de AI-2 es específica para cada especie. Sin embargo, detecta una señal de inanición, se inicia una cascada de eventos que da como resultado
Las bacterias de diferentes especies pueden "hablar" entre sí porque el la producción de otros factores sigma que se expresan diferencialmente en la endospora
los productos de las enzimas LuxS se reorganizan espontáneamente. Así en un en desarrollo y la célula madre.
Pariente A
Pariente B
Spo0F Spo0F – P
Célula madre Spo0B-P Spo0B

espora
ÿA ÿH ÿE ÿF Spo0A Spo0A – PAGS
esporulación temprana
Pulpa ÿF activo
transcripción de genes
ÿK ÿG
ÿG activo esporulación tardía
transcripción de genes
(a) (B)
Figura 12.21 Regulación genética de la esporulación en Bacillus subtilis. (a) El inicio de la esporulación se rige en parte por la
F mi
actividades de dos factores sigma espacialmente separados. está confinado

se encuentra enalalapreespora,
célula madre. Estos
mientras que factores sigma
k
dirigir el inicio de la transcripción de genes cuyos productos son necesarios para los primeros eventos de la esporulación. Posteriormente,
GRAMO
se localizan en el
y en desarrollo de endospora y célula madre, respectivamente. Controlan la expresión de genes cuyos productos están involucrados en los pasos posteriores de
F
esporulación (b) La activación de la se logra a través de un sistema de fosforescencia que se desencadena por la activación de la quinasa sensora
proteína KinA. Cuando KinA detecta la inanición, autofosforila un residuo de histidina específico. El grupo fosforilo luego pasa en relevo
moda de Spo0F a Spo0B y finalmente a Spo0A. Ver texto para más detalles.
F y mi
El inicio de la esporulación está controlado por la proteína Spo0A, una Los dos factores sigma, se unen ,
a los promotores de genes
proteína reguladora de la respuesta que forma parte de un sistema de fosforescencia. necesarios en la espora y la célula madre, respectivamente. Ellos allí
Las quinasas de sensores asociadas con este sistema detectan dirigir la expresión de genes cuyos productos son necesarios para la
F
estímulos que desencadenan la esporulación. Uno de los sensores más importantes. primeros pasos de la formación de endosporas. Uno de los muchos
quinasas es KinA, que detecta la falta de nutrientes. Cuando B. subtilis genes que regula es un gen que codifica otro factor sigma, G, que
F mi dirige
encuentra que sus nutrientes están agotados, KinA autofosforila un reemplazará en la endospora en desarrollo. Asimismo, la
residuo de histidina. Luego, el grupo fosforilo se transfiere a un residuo de transcripción de un factor sigma específico de la célula madre, K. Like
ácido aspártico en Spo0F. Sin embargo, Spo0F no puede regular mi
, k se produce primero en una forma inactiva, pro-K. Tras la activación
k
directamente la expresión génica; en cambio, Spo0F dona el fosforilo de pro-K por proteólisis, asegura que los genes que codifican
grupo a una histidina en Spo0B. Spo0B, a su vez, transmite el grupo se transcriben los productos de esporulación en etapa tardía. En general, temporal
F y mi
fosforilo a Spo0A. Spo0A fosforilado controla positivamente la regulación se logra porque la transcripción directa de
k
genes necesarios para la esporulación y controla negativamente los genes que son Los genes G se necesitan al principio del proceso de esporulación,
innecesario. En respuesta a Spo0A, la expresión de más de 500 genes mientras que y se necesitan para la transcripción de genes cuyos productos son
está alterado. Entre los genes cuya expresión es estimulada por necesario más tarde. Además, se logra el control espacial de la expresión
F F
génica porque se localizan yensela preespora y
mi
Spo0A es sigF, el gen que codifica el factor sigma (figura 12.21b), GRAMO
k
y spoIIGB, el gen que codifica una forma inactiva de E (pro-E ). encuentran sólo en la célula madre.
Cuando comienza la esporulación, el cromosoma se ha replicado, con
quedando una copia en la célula madre y otra para ser repartida en la 1. ¿Qué son los sistemas regulatorios globales y por qué son necesarios? Brevemente
preespora. Poco después de la formación de la espora Describir regulones, módulos y estímulos.
F
tabique, se encuentra en la preespora, y pro-E se localiza en la 2. ¿Qué es el crecimiento diáuxico? Explicar cómo la represión por catabolitos causa diáuxico.
célula madre. Pro-E es escindido por una proteasa para formar activos
mi . crecimiento.
Regulación de la Expresión Génica en Eucarya y Archaea 313
3. Describe los eventos que ocurren en cada una de las siguientes condiciones de crecimiento:E.
factores de inscripción actúan indirectamente para aumentar o disminuir la tasa de
coli en un medio que contiene glucosa, pero no lactosa; en un medio que contiene transcripción. Muchos factores de transcripción reguladores controlan el inicio de la
ambos azúcares; en un medio que contiene lactosa pero no glucosa; y en un transcripción al interactuar con factores de transcripción generales, en particular TFIID (figura
medio que no contiene azúcar. 12.22a) y una multisubunidad .

complejo proteico llamado mediador (figura 12.22b). Otros reclutan
4. ¿Cuál sería el fenotipo de una cepa mutante de V. fischeri que no pudiera
enzimas remodeladoras de la cromatina a un promotor. Estas enzimas
regular luxI, para que estuviera constantemente produciendo autoinductor?
cambiar el grado de compactación del ADN, haciendo que el promotor sea más o menos
5. ¿Por qué crees que las bacterias usan la detección de quórum para regular los genes necesarios para
¿virulencia? ¿Cómo se podría relacionar esta razón con la justificación detrás del uso de
accesible a la ARN polimerasa.
Otro mecanismo regulador común a las bacterias y
quórum sensing para establecer una relación simbiótica?
eucariotas es el uso de moléculas de sRNA para controlar la expresión génica. Este enfoque
6. Describa brevemente cómo se utilizan un sistema de fosforescencia y factores sigma
para controlar la esporulación en B. subtilis. Dé un ejemplo de postraduccional parece prevalecer ampliamente en eucariotas.
modificación como un medio para regular este proceso. Muchos sRNA actúan como RNA antisentido y funcionan a nivel de
traducción, como se ha descrito anteriormente. Algo de antisentido eucariótico
Los ARN son mucho más pequeños que los ARN antisentido bacterianos típicos.
y se denominan microARN (miARN). Algunas moléculas de ARNs
12.6 REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA EN
son componentes importantes del spliceosoma. Estos reguladores
EUCARIA Y ARCHAEA
Los ARN pueden contribuir a la selección de sitios de empalme utilizados durante
Como es el caso de Bacteria, la regulación de la expresión génica en Procesamiento de ARNm para eliminar intrones. Al hacerlo, se pueden producir diferentes
Eucarya y Archaea pueden ocurrir en transcripcional, traduccional, proteínas en ciertos momentos del ciclo de vida del organismo mediante la combinación de
y niveles postraduccionales. Sin embargo, debido a la cromatina diferentes secuencias de codificación de proteínas.
estructura y los pasos adicionales necesarios para producir un funcional La regulación de la expresión génica en Archaea ha suscitado un gran interés. Esto se
proteína, la regulación de la expresión génica eucariótica es aún más debe a que la maquinaria de transcripción y traducción de las arqueas es muy similar a la de
complejo que lo que ya se ha discutido. Mucho de los
el trabajo sobre la regulación génica en Eucarya se ha centrado en la transcripción Eucarya, sin embargo, funciona en células con un genoma típico similar al de una bacteria
iniciación. Más recientemente, la regulación por pequeñas moléculas de ARN organización. La pregunta que se plantea es si la regulación arqueológica de la expresión
ha llamado mucho la atención. Nuestra comprensión de la génica es más parecida a la regulación bacteriana o más
lamentablemente, la regulación de la expresión génica de las arqueas va considerablemente como la regulación eucariótica. Hasta ahora, la respuesta es mixta. La mayoría de
por detrás de lo que sabemos para Eucarya y Bacteria. Sin embargo, aquí se presentan Las proteínas reguladoras de las arqueas funcionan de manera muy similar a los activadores
brevemente algunos descubrimientos intrigantes. y represores bacterianos, es decir, se unen a sitios de ADN cercanos al promotor y mejoran o
Como se señaló en el capítulo 11, el inicio de la transcripción en Eucarya involucra bloquean la unión de la ARN polimerasa.
numerosos factores de transcripción (ver figura 11.33). Muchos respectivamente. Sin embargo, algunos parecen funcionar más como factores de transcripción
factores de transcripción, como TFIID, son transcripción general reguladores eucarióticos en el sentido de que provocan su
factores que son parte de la maquinaria común a la transcripción efectos al interactuar con un factor de transcripción general, como
iniciación de todos los genes eucarióticos. Por otra parte, la normativa la proteína de unión a TATA. Pequeñas moléculas de ARN también han sido
los factores de transcripción son específicos de uno o más genes y alteran la tasa de identificado en algunas arqueas; su papel en la regulación todavía está siendo
transcripción. Los factores de transcripción reguladores son aclarado Introducción a las Archaea: Genética y biología molecular
en cierto modo análogas a las proteínas reguladoras bacterianas. Tan solo (sección 20.1)
mencionado, ellos también alteran la tasa de transcripción de su objetivo
genes mediante la unión de secuencias de ADN específicas que normalmente se encuentran
1. Haz una lista de las diferencias entre Bacteria, Archaea y Eucarya que afectan
cerca del promotor. En los eucariotas, los factores de transcripción que
la forma en que cada uno regula la expresión génica. ¿Qué dominio tiene la mayor cantidad
funcionan como activadores que se unen a sitios reguladores llamados potenciadores,
de niveles en los que se puede regular la expresión génica? ¿Por qué?
mientras que los que funcionan como represores se unen a sitios llamados silenciadores
2. ¿Cómo son las proteínas reguladoras bacterianas y la transcripción reguladora eucariótica?
(figura 12.22). Sin embargo, la forma en que los factores reguladores de la transcripción
factores similares? ¿Cómo se diferencian?
controlan la tasa de transcripción no está clara.
3. ¿Qué secuencias reguladoras en los genomas bacterianos son análogas a las
el mismo mecanismo que utilizan las proteínas reguladoras bacterianas. Después de enlazar
potenciadores y silenciadores observados en los genomas eucarióticos?
un potenciador o silenciador, regulador tran
transcripcional transcripcional TFIID

activador represor
TFIID Secuencia de codificación Secuencia de codificación
Silenciador potenciador Silenciador potenciador

Promotor principal Promotor principal
El activador transcripcional recluta TFIID al promotor central y/o activa su función. Se El represor transcripcional inhibe la unión de TFIID o inhibe su función. Se
activará la transcripción. reprime la transcripción.
(a) Factores de transcripción reguladores y TFIID
Centro Centro
promotor Mediador promotor Mediador
ARN polimerasa y ARN polimerasa y
general general
TFIID factores de transcripción TFIID factores de
transcripción
Secuencia de codificación Secuencia de codificación
transcripcional
activador
Silenciador
transcripcional
potenciador potenciador Silenciador represor
El activador transcripcional interactúa con el mediador. Esto permite que la El represor transcripcional interactúa con el mediador de
ARN polimerasa forme un complejo de preiniciación que puede pasar a la fase de modo que se reprime la transcripción.
elongación de la transcripción.
(b) Factores de transcripción reguladores y mediador
Figura 12.22 La actividad de los factores reguladores de la transcripción eucarióticos. Los factores de transcripción reguladores no ejercen su
Efectos directos sobre la ARN polimerasa. En cambio, actúan a través de otras proteínas, más comúnmente el factor de transcripción general TFIID y una proteína
llamado mediador. El papel del mediador en la transcripción es ayudar a la ARN polimerasa a pasar de la etapa de iniciación de la transcripción a la etapa
de elongación. (a) Una proteína reguladora que actúa a través de TFIID. Los activadores podrían influir en el reclutamiento de ARN TFIID que mejora la transcripción
polimerasa al promotor. Los represores inhibirían esta capacidad. (b) Una proteína reguladora que actúa a través de la proteína mediadora. un activador
estimularía la actividad mediadora; un represor disminuiría la actividad mediadora.
Resumen
12.1 Niveles de Regulación de la Expresión Génica 12.2 Reglamento de Inicio de la Transcripción
un. La regulación de la expresión génica se puede controlar en muchos niveles, incluidos un. La inducción y la represión de la actividad enzimática son dos fenómenos reguladores
iniciación de la transcripción, elongación de la transcripción, traducción y postraducción (figura importantes. Por lo general, ocurren debido a la actividad de las proteínas reguladoras.
12.1). B. Las proteínas reguladoras pueden inhibir la transcripción (control negativo) o promover la
B. Los tres dominios de la vida difieren en términos de su estructura genómica y la transcripción (control positivo). Su actividad está modulada por pequeñas moléculas efectoras
pasos necesarios para completar la expresión génica. Estas diferencias afectan los mecanismos llamadas inductoras, correpresoras e inhibidoras (figura 12.3).
de regulación que utilizan.
Términos clave 315
C. Los represores son responsables del control negativo. Bloquean la transcripción uniéndose a 12.4 Regulación a Nivel de Traducción
un operador e interfiriendo con la unión de la ARN polimerasa a su promotor. También
un. Algunos ribointerruptores regulan la expresión génica al nivel de la traducción. Para estos
pueden bloquear la transcripción al bloquear el movimiento de la ARN polimerasa después
ribointerruptores, la unión de una molécula pequeña a secuencias específicas en la región
de que se une al ADN. D. Las proteínas activadoras son responsables del control positivo.
líder del ARNm altera la estructura líder e impide la unión al ribosoma (figura 12.13).
Se unen a secuencias de ADN denominadas sitios de unión al activador y, al hacerlo, promueven
la unión de la ARN polimerasa a su promotor. mi. El operón lac de E. coli es un ejemplo de
B. La traducción también puede ser controlada por ARN antisentido. Estas pequeñas moléculas
operón inducible controlado negativamente. Cuando no hay lactosa en el entorno, el represor
de ARN no codifican. Forman pares de bases con el ARNm y normalmente inhiben la
lac está activo y se bloquea la transcripción. Cuando la lactosa está disponible, se convierte en traducción (figura 12.14).
alolactosa por la enzima -galactosidasa. La alolactosa actúa como inductor del operón lac
uniéndose al represor e inactivándolo. El represor inactivo no puede unirse al operador y se
12.5 Sistemas regulatorios globales
produce la transcripción (figura 12.7). F. El operón trp de E. coli es un ejemplo de un operón
un. Los sistemas regulatorios globales pueden controlar muchos operones simultáneamente y
reprimible controlado negativamente. Cuando no hay triptófano disponible, el represor trp
ayudar a los microbios a responder rápidamente a una amplia variedad de desafíos
está inactivo y se produce la transcripción. Cuando los niveles de triptófano son altos, el
ambientales. B. Los sistemas regulatorios globales a menudo involucran muchas capas de
triptófano actúa como un correpresor y se une al represor trp , activándolo. El represor trp se une
regulación. A menudo se utilizan mecanismos reguladores como proteínas reguladoras,
al operador y bloquea la transcripción (figura 12.8).
factores sigma alternativos, sistemas de transducción de señales de dos componentes y
sistemas de fosforescencia.
C. El crecimiento diáuxico se observa cuando se cultiva E. coli en presencia de glucosa y otro

azúcar como la lactosa (figura 12.15). Este patrón de crecimiento es el resultado de la
gramo. El operón ara de E. coli es un ejemplo de operón inducible que está regulado por una
represión catabólica, donde la glucosa se usa preferentemente sobre otros azúcares. Los
proteína reguladora de doble función, la proteína AraC. AraC funciona como represor cuando
operones que forman parte del sistema de represión catabólica están regulados por la
no se dispone de arabinosa. Funciona como activador cuando se dispone de arabinosa, el
proteína activadora CAP. La actividad de CAP está modulada por cAMP, que se produce
inductor (figura 12.9).
solo cuando no hay glucosa disponible. Así, cuando no hay glucosa, CAP está activa y
H. Algunas proteínas reguladoras son miembros de sistemas de transducción de señales de dos
promueve la transcripción de operones necesarios para el catabolismo de otros azúcares
componentes y sistemas de fosforescencia. Estos sistemas tienen una quinasa sensora que
(figura 12.18). D. La detección de quórum es un tipo de comunicación célula-célula mediada
detecta un cambio ambiental. La cinasa sensora transduce la señal ambiental a la proteína
por pequeñas moléculas de señalización como la N-acil-homoserina lactona (AHL). La detección
reguladora de la respuesta, ya sea directamente (sistema de dos componentes) o
de quórum acopla la densidad celular a la regulación de la transcripción. Los sistemas de
indirectamente (transferencia fosforescente), transfiriéndole un grupo fosforilo.
detección de quórum bien estudiados incluyen la regulación de la bioluminiscencia en Vibrio
El regulador de respuesta luego activa los genes necesarios para adaptarse a las nuevas
spp. (figuras 12.19 y 12.20). Otros sistemas regulan los genes de virulencia y la formación
condiciones ambientales e inhibe la expresión de aquellos genes que no son necesarios
de biopelículas. mi. La formación de endosporas en B. subtilis es otro ejemplo de un sistema
(figura 12.10).
regulador global. Dos importantes mecanismos reguladores utilizados durante la esporulación son
un sistema de fosforescencia que es importante en el inicio de la esporulación y el uso de
12.3 Regulación de la elongación de la transcripción
factores sigma alternativos (figura 12.21).
un. En el operón triptófano, una región líder se encuentra entre el operador y el primer gen
estructural (figura 12.11). Codifica la síntesis de un péptido líder y contiene un atenuador,
un sitio de terminación independiente de rho. B. La síntesis del péptido líder por un ribosoma
12.6 Regulación de la expresión génica en Eucarya y Archaea
mientras la ARN polimerasa transcribe la región líder regula la transcripción: por lo tanto, el operón
un. Eucarya utiliza factores de transcripción reguladores para controlar el inicio de la transcripción.
triptófano se expresa solo cuando no hay suficiente triptófano disponible. Este mecanismo
Pueden ejercer control positivo o negativo (figura 12.22).
de control de la transcripción se denomina atenuación. C. Las regiones líder de algunas
moléculas de ARNm pueden unirse a metabolitos que actúan como moléculas efectoras. La B. Eucarya utiliza ARN antisentido para regular la traducción. C. Los
unión del metabolito al ARNm provoca un cambio en la estructura líder, lo que puede terminar microbiólogos saben relativamente poco sobre la regulación arqueológica de la expresión génica.
con la transcripción. Este mecanismo regulador se denomina riboconmutador (figura 12.12). Algunas arqueas utilizan proteínas reguladoras que son similares a los sistemas reguladores
bacterianos para controlar el inicio de la transcripción.
Términos clave
proteína activadora 295 gen constitutivo 293 gen inducible 294 proteína represora 295
sitio de unión al activador 295 correpresor 295 3ÿ, 5ÿ- N-acil homoserina lactona (AHL) 309 control proteína reguladora de la respuesta
factores sigma alternativos 307 monofosfato de adenosina transcripcional negativo 294 operador 295 301 riboswitch 304
ARN antisentido 305 cíclico (cAMP) 308 proteína operón 295 sistema de fosforescencia 302 sensor proteína quinasa 300
aporepresor 295 receptora de AMP cíclico (CRP) 308 control transcripcional positivo 295 detección silenciador 313
atenuación 302 potenciador del crecimiento diáuxico 308 313 de quórum 309 factor de transcripción regulador ARN pequeños (ARNs) 305
atenuador 302 313 regulón 307 enzima reprimible 294 gen estructural 295 sistema de
autoinductor 309 sistemas regulatorios globales 307 transducción de señales de dos
autoinducción 309 gen de limpieza 293 inductor 294 componentes 300
proteína activadora de catabolitos (CAP) 308

represión de catabolitos 308 enzima inducible 294

1. La atenuación afecta las vías anabólicas, mientras que la represión puede afectar ya sea un 3. ¿Cuál sería el fenotipo de una cepa de E. coli en la que el trp en tándem
vías abólicas o catabólicas. Proporcione una explicación para esto. ¿Los codones en la región líder fueron mutados para que codificaran serina en su lugar?
2. Describa el fenotipo de las siguientes cepas de mutantes de E. coli cuando se cultivan 4. ¿Cuál sería el fenotipo de una cepa de B. subtilis cuyo gen para
GRAMO
ha sido
en dos medios diferentes: solo glucosa y solo lactosa. Explique el razonamiento borrado? Considere la capacidad del mutante para sobrevivir en ambientes ricos en nutrientes versus
detrás de tu respuesta. condiciones de agotamiento de nutrientes.
un. Una cepa con una mutación en el gen que codifica el represor lac tal que 5. Proponga un mecanismo por el cual una célula podría sentir y responder a los niveles de Na
no puede unirse a la alolactosa. en su entorno.
B. Una cepa con una mutación en el gen que codifica CAP tal que no
arrendar campamento.
C. Una cepa en la que la secuencia Shine-Dalgarno se ha eliminado de la

gen que codifica la adenil ciclasa.
Aprende más
Bell, SD 2005. Regulación transcripcional de Archaeal: variación en una bacteria Johansson, J. 2005. Moléculas de ARN: más que meros intermediarios de información.
¿tema? Tendencias Microbiol. 13(6):262–65. Noticias de ASM 71 (11): 515–20.
Brantl, S. 2004. Regulación de genes bacterianos: desde la atenuación de la transcripción hasta Llamas, I.; Quesada, E.; Martínez-Cánovas, MJ; Gronquist, M.; Eberhard, A.; y
ribointerruptores y ribozimas. Tendencias Microbiol. 12(11):473–75. González, JW 2005. Quorum sensing in halophilic bacteria: Detection of N-acyl
lactonas de homoserina en las especies productoras de exopolisacáridos de
Brooker, RJ 2005. Genética: Análisis y principios, 2d ed. Boston: McGraw-Hill.
Halomonas. Extremófilos 9:333–41.
Feng, X.; Oropeza, R.; Walters, D.; y Kenney, LJ 2003. Fosforilación de OmpR y su función en la
Storz, G.; Altuvia, S.; y Wassarman, KM 2005. Una abundancia de RNA regula
señalización y la patogénesis. Noticias de ASM 69 (3): 390–95.
tores Annu Rev. Bioquímica. 74:199–217.
Galperin, MY y Gomelsky, M. 2005. Módulos de transducción de señales bacterianas:
Warner, JB y Lolkema, JS 2003. Represión de catabolitos de carbono dependientes de CcpA en bacterias.
De la genómica a la biología. Noticias de ASM 71: 326–33.
Microbiol. mol. Biol. 67(4):475–90 .
Gruber, TM y Gross, CA 2003. Múltiples subunidades sigma y la partición
Xavier, K. y Bassler, BL 2005. Interferencia con células bacterianas mediadas por AI-2
del espacio de transcripción bacteriano. año Rev. Microbiol. 57:441–66.
comunicación celular. Naturaleza 437:750–53.
Hilbert, DW y Piggot, PJ 2004. Compartimentación de la expresión génica
Yanofsky, C. 2004. Las diferentes funciones del ARN de transferencia de triptófano en la regulación de trp
durante la formación de esporas de Bacillus subtilis . Microbiol. mol. Biol. Rvdo.
expresión del operón en E. coli frente a B. subtilis. Tendencias Microbiol. 20(8):367–74.
68(2):234–62.

13Genética microbiana:
Mecanismos de
Variación genética
La micrografía electrónica de barrido muestra Streptococcus pneumoniae, el

bacteria utilizada por primera vez para estudiar la transformación y obtener evidencia de que el ADN es
el material genético de los organismos.
AVANCE
• Las mutaciones son alteraciones estables y hereditarias en la secuencia del ADN. En es esencial que la secuencia de nucleótidos de los genes no se altere en gran
procariotas, suelen producir cambios fenotípicos y pueden ocurrir medida. Sin embargo, los cambios de secuencia ocurren
espontáneamente o son inducidos por mutágenos químicos o radiación. y puede resultar en fenotipos alterados. Estos cambios pueden ser
• Los microorganismos tienen varios mecanismos de reparación diseñados para detectar perjudiciales, pero las que no lo son son importantes para generar nuevas
alteraciones en su material genético y restaurarlo a su estado original. variabilidad en las poblaciones y en contribuir al proceso de
estado. A pesar de estos sistemas de reparación, algunas alteraciones permanecen evolución.
sin corregir y brindan material y oportunidad para la evolución. En este capítulo nos enfocamos en los procesos que contribuyen a la
cambiar.
variación genética en las poblaciones de microbios. Empezamos con un
• La recombinación es el proceso en el que uno o más ácidos nucleicos descripción general de la naturaleza química de las mutaciones y los efectos de
las moléculas se reordenan o combinan para producir nuevas combinaciones de genes mutaciones tanto a nivel molecular como de organismo. Porque
o una nueva secuencia de nucleótidos.
mutantes se han puesto a usos importantes en el laboratorio y en
• La transferencia de genes es un proceso unidireccional en los procariotas: una pieza de industria, la generación y el aislamiento de organismos mutantes son
material genético (el exogenote) se dona al cromosoma de un considerado. El capítulo continúa con una discusión sobre los mecanismos de
célula receptora (el endógeno) y se integra en ella.
reparación del ADN. Aunque estos mecanismos de reparación evolucionaron para
• La transferencia de material genético entre procariotas se llama transferencia horizontal prevenir la ocurrencia de mutaciones, como se verá, algunos intentos celulares
de genes. Tiene lugar en una de tres formas: conjugación, transformación o para corregir el daño del ADN en realidad generan mutaciones.
transducción.
Finalmente, examinamos la recombinación microbiana y la transferencia de genes.
• Los elementos transponibles y los plásmidos pueden mover material genético en bacterias. Estos procesos tienen implicaciones prácticas en términos
entre los cromosomas y dentro de los cromosomas para causar una rápida de resistencia a antibióticos y fármacos. Además, la recombinación y
cambios en los genomas y alteran drásticamente los fenotipos.
Los mecanismos de transferencia de genes observados en bacterias y virus han
• Los cromosomas bacterianos han sido mapeados con gran precisión, sido útil para mapear genomas microbianos, y estas técnicas también se discuten.
usando conjugación Hfr en combinación con transformacional y
técnicas de mapeo transduccional.
• La recombinación de genomas de virus ocurre cuando dos virus con cromosomas

homólogos infectan una célula huésped al mismo tiempo.
13.1 MUTACIONES Y SU BASE QUÍMICA

Las mutaciones [del latín mutare, cambiar] se caracterizaron inicialmente como
genética lar: la forma en que se organiza la información genética, fenotipos alterados, pero ahora se entienden a nivel molecular
Los capítulos 11 y 12 introducen
almacenada, replicada ylos fundamentos
expresada. de se
Como moecu
demuestra en nivel. Existen varios tipos de mutaciones. Algunas mutaciones surgen de
En estos capítulos, se incluye una cantidad considerable de información en el la alteración de pares únicos de nucleótidos y de la adición o
orden preciso de los nucleótidos en el ADN. Para que la vida exista con estabilidad, deleción de uno o dos pares de nucleótidos en las regiones codificantes de un
En lo profundo de la caverna del pecho del bebé

La naturaleza del padre acecha y vive de nuevo.
—Horacio, Odas
318 Capítulo 13 Genética microbiana: mecanismos de variación genética
gene. Estos pequeños cambios en el ADN a veces se denominan microlesiones, Mutaciones espontáneas Las
y las más pequeñas de ellas se denominan mutaciones puntuales porque
mutaciones espontáneas surgen sin exposición a agentes externos.
afectan solo a un par de bases en un lugar determinado. También se reconocen
Esta clase de mutaciones puede resultar de errores en la replicación del ADN o
mutaciones más grandes (macrolesiones) , pero son menos comunes. Estos
de la acción de elementos genéticos móviles como los transposones.
incluyen grandes inserciones, deleciones, inversiones, duplicaciones y
A continuación se describen algunos de los mecanismos más prevalentes.
translocaciones de secuencias de nucleótidos.
Los errores de replicación pueden ocurrir cuando la base nitrogenada de
Las mutaciones ocurren en una de dos formas: (1) Las mutaciones
un nucleótido molde adopta una forma tautomérica rara. El tautomerismo es la
espontáneas surgen ocasionalmente en todas las células y ocurren en ausencia
relación entre dos isómeros estructurales que están en equilibrio químico y se
de cualquier agente agregado. (2) Las mutaciones inducidas, por otro lado,
transforman fácilmente entre sí. Las bases normalmente existen en forma de
son el resultado de la exposición a un mutágeno, que puede ser un agente
ceto . Sin embargo, a veces pueden adoptar la forma imino o enol ( figura
físico o químico. Las mutaciones se pueden caracterizar según el tipo de cambio
13.1a). Estos desplazamientos tautoméricos modifican las características de los
genotípico que ha ocurrido o sus consecuencias fenotípicas. En esta sección,
enlaces de hidrógeno de las bases, lo que permite sustituciones de purina por
primero se considera la base molecular de las mutaciones y la mutagénesis.
purina o de pirimidina por pirimidina que eventualmente pueden conducir a una
Luego se discuten los efectos fenotípicos de las mutaciones.
alteración estable de la secuencia de nucleótidos (figura 13.1b). Tales
sustituciones se conocen como
Figura 13.1 Mutaciones de transición y tautomerización. H H3C

Errores en la replicación por tautomerización de bases. O
norte
H
(a) Normalmente, los pares AT y GC se forman cuando H H
O
norte
los grupos ceto participan en enlaces de hidrógeno. Por norte norte

norte norte
H
H norte
el contrario, los tautómeros de enol producen pares de norte norte
O
norte O
bases AC y GT. (b) Mutación como consecuencia de la H
Forma imino rara Forma enólica norte norte
norte
tautomerización durante la replicación del ADN. La norte

norte
de citosina (C*) rara de timina (T*)

enolización temporal de guanina conduce a la formación H guanina
adenina
de un par de bases AT en el mutante y se produce una
mutación de transición de GC a AT. El proceso requiere
dos ciclos de replicación. La mutación solo ocurre si los
mecanismos de reparación pasan por alto el par de bases H CH3
GT anormal de primera generación. O
norte
H
H H
O
norte
norte norte
norte norte
H
H norte
norte
norte
O
norte
O
H
timina norte norte
norte
Citosina norte
norte
H
Forma imino rara Forma enólica
de adenina (A *) rara de guanina (G*)
(a)
Forma tautomérica enol ACGTC

• • •• • •• •• •
•• Tipo salvaje
rara y temporal de guanina •TGCAG
ACGTC
TGTAG
CGC
• •• • • ACATC
• • • • • • •• • •
• •ETIQUETA
•
mutante
replicación del ADN • •TGTAG
ACGTC
• • •• • •• •• ••• •C.A.
•
•TGCAG T G• • •
replicación del ADN
••
C T
GRAMO
•• ACGTC
• • •• • •• •• • •
ADN de los padres A• • •C• • •TGCAG
Tipo salvaje
GRAMO
ACGTC
• • •• • •• •• • •
• •TGCAG
ACGTC •
• • •• • •• • • • • Tipo salvaje
Progenie de primera •TGCAG
generación
Progenie de segunda
generación
(B)
Mutaciones y su base química 319
mutaciones de transición y son relativamente comunes. Por otro lado, las idos producidos durante el metabolismo aeróbico. Estos pueden alterar las bases
mutaciones de transversión, mutaciones en las que se sustituye una purina por del ADN y causar mutaciones. Por ejemplo, la guanina se puede convertir en 8-
una pirimidina o una pirimidina por una purina, son más raras debido a los oxo-7,8-dihidrodesoxiguanina, que a menudo se empareja con adenina en lugar
problemas estéricos de emparejar purinas con purinas y pirimidinas con pirimidinas. de con citosina durante la replicación.
Finalmente, las mutaciones espontáneas pueden resultar de la inserción de
Los errores de replicación también pueden resultar en la adición y eliminación segmentos de ADN en los genes. Las inserciones generalmente inactivan los genes.
de nucleótidos. Estas mutaciones generalmente ocurren donde hay un tramo corto Son causados por el movimiento de secuencias de inserción y transposones. Las
del mismo nucleótido. En tal ubicación, el emparejamiento de la plantilla y la nueva mutaciones de inserción son muy frecuentes en Escherichia coli y en muchas otras
hebra puede ser desplazado por la distancia de la secuencia repetida, lo que lleva bacterias. Estos elementos genéticos se describen con más detalle en la sección
a adiciones o eliminaciones de bases en la nueva hebra (figura 13.2). 13.5.
Aunque la mayoría de los genetistas creen que las mutaciones espontáneas
Las mutaciones espontáneas también pueden originarse por lesiones en el ocurren al azar en ausencia de un agente externo y luego se seleccionan, las
ADN, así como por errores de replicación. Por ejemplo, es posible que los observaciones de algunos microbiólogos han llevado a una hipótesis alternativa y
nucleótidos de purina se despurinen, es decir, pierdan su base. Esto da como controvertida. La controversia comenzó cuando John Cairns y sus colaboradores
resultado la formación de un sitio apurínico, que no forma pares de bases informaron que una cepa mutante de E. coli , incapaz de utilizar la lactosa como
normalmente y puede causar una mutación de tipo de transición después de la fuente de carbono y energía, podía recuperar la capacidad de hacerlo más
siguiente ronda de replicación. Asimismo, se pueden perder pirimidinas, formando rápidamente cuando se añadía lactosa al medio de cultivo como única fuente de
un sitio apirimidínico. Otras lesiones son causadas por formas reactivas de carbono. fuente. La lactosa pareció inducir mutaciones que permitieron que E. coli
oxígeno como los radicales libres de oxígeno y perox usara el azúcar nuevamente. Una interpretación de estas observaciones es que
las mutaciones son ejemplos de mutación dirigida o adaptativa , es decir, algunas
bacterias parecen capaces de seleccionar qué mutaciones ocurren para poder
adaptarse mejor a su entorno.
Deslizamiento que lleva a una adición Deslizamiento que conduce a una eliminación
Se han ofrecido muchas explicaciones para dar cuenta de este fenómeno

5ÿ CGTTTT 5ÿ CGTTT
sin depender de la inducción de mutaciones particulares.
3ÿ GCAAAAACGTA C... 3ÿ GCAAAAACGTA C... Una es la propuesta de que la hipermutación puede producir tales resultados.
Algunas bacterias hambrientas pueden generar rápidamente múltiples mutaciones
a través de la activación de genes mutadores especiales. Esto produciría muchas
Deslizamiento Deslizamiento
en hilo nuevo en la hebra parental células bacterianas mutantes. En tal proceso aleatorio, la tasa de producción de
mutantes favorables aumentaría, y muchos de estos mutantes sobrevivirían para
ser contados. Parecería haber una mutación dirigida o adaptativa porque solo
GT sobrevivirían los mutantes con las mutaciones favorables. Hay apoyo para esta
5ÿ CTTT 5ÿ CGTTT hipótesis. Se han descubierto genes mutantes y se ha demostrado que causan
3ÿ GCAAAAACGTA C... 3ÿ GCAAACGTA C... hipermutación bajo estrés nutricional. Incluso si la hipótesis de la mutación dirigida

es incorrecta, ha estimulado muchas investigaciones valiosas y ha llevado al
descubrimiento de nuevos fenómenos.
Mutaciones Inducidas
GT
Prácticamente cualquier agente que dañe directamente el ADN, altere su química
5ÿ C TTTT T GCATG 5ÿ CGTTTGCATG
o interfiera de algún modo con su funcionamiento inducirá mutaciones. Los
3ÿ GCAAAAACGTA C... 3ÿ GCAAACGTA C... mutágenos se pueden clasificar convenientemente según su modo de acción. Tres
Automóvil club británico tipos comunes de mutágenos químicos son los análogos de bases, los agentes
modificadores del ADN y los agentes intercalantes. Varios agentes físicos (p. ej.,
(a) (B)
la radiación) dañan el ADN y también son mutágenos.
Figura 13.2 Adiciones y Eliminaciones. Un mecanismo hipotético para la
generación de adiciones y eliminaciones durante la replicación. La dirección de Los análogos de bases son estructuralmente similares a las bases
la replicación está indicada por la flecha azul. En cada caso, hay un deslizamiento nitrogenadas normales y se pueden incorporar a la cadena de polinucleótidos en
de la cadena que da como resultado la formación de un pequeño bucle que se crecimiento durante la replicación (tabla 13.1). Una vez en su lugar, estos
estabiliza mediante el enlace de hidrógeno en la secuencia repetitiva, el tramo compuestos suelen exhibir propiedades de emparejamiento de bases diferentes
AT en este ejemplo. (a) Si la nueva hebra se desliza, resulta una adición de una de las bases que reemplazan y eventualmente pueden causar una mutación
T. (b) El deslizamiento de la cadena parental produce una deleción (en este caso, estable. Un análogo de base ampliamente utilizado es el 5-bromouracilo (5-BU), un
una pérdida de dos T). análogo de la timina. Sufre un cambio tautomérico de la forma cetogénica normal
a un enol con mucha más frecuencia que una base normal.
establecido. Si un ciclo completo de replicación del ADN tiene lugar antes

Tabla 13.1 Ejemplos de mutágenos
la lesión inicial se repara, la mutación frecuentemente se estabiliza
Mutageno Efecto(s) sobre la estructura del ADN y heredable. Los mecanismos de reparación se discuten en la sección 13.3.
Químico
5-bromouracilo Base analógica Efectos de las mutaciones

2-aminopurina Base analógica Los efectos de una mutación se pueden describir a nivel de proteína y
metanosulfonato de etilo agente alquilante en términos de rasgos u otros fenotipos fácilmente observables. En todos los casos,
Hidroxilamina Hidroxila citosina el impacto se nota rápidamente solo si produce un cambio en el fenotipo. En general,
mostaza nitrogenada agente alquilante la forma más prevalente de un gen y su fenotipo asociado se denomina tipo salvaje.
Óxido nitroso Bases desaminadas Una mutación de salvaje
proflavina tipo a una forma mutante se denomina mutación directa (tabla 13.2).
agente intercalante
Una mutación directa puede revertirse mediante una segunda mutación que restablece
naranja de acridina agente intercalante
el fenotipo de tipo salvaje. Cuando la segunda mutación está en el
Físico mismo sitio que la mutación original, se llama mutación de reversión. Una verdadera
luz ultravioleta Promueve la formación de dímeros reversión convierte la secuencia de nucleótidos mutante
de pirimidina
de vuelta a la secuencia de tipo salvaje. Si la segunda mutación se encuentra en un
rayos X Provoca deleciones de base, únicas sitio diferente al de la mutación original, se denomina mutación supresora. Las
mellas en hebras, entrecruzamiento y mutaciones supresoras pueden estar dentro del mismo gen
roturas cromosómicas
(mutación supresora intragénica) o en un gen diferente (mutación extragénica
mutación supresora). Debido a que las mutaciones puntuales son los tipos de
mutaciones más comunes, sus efectos serán el centro de atención aquí.
El tautómero enol forma enlaces de hidrógeno como la citosina y dirige

la incorporación de guanina en lugar de adenina (figura 13.3). Mutaciones en genes codificadores de proteínas
El mecanismo de acción de otros análogos de bases es similar al de Las mutaciones puntuales en los genes que codifican proteínas pueden afectar la
5-bromouracilo. estructura de las proteínas de diversas formas (tabla 13.2). Las mutaciones puntuales se nombran
Los agentes modificadores del ADN cambian la estructura de una base y según si y cómo cambian la proteína codificada. los
por lo tanto altera sus características de apareamiento de bases. Algunos mutágenos Los tipos más comunes de mutaciones puntuales son las mutaciones silenciosas, las
en esta categoría son bastante selectivos; reaccionan preferentemente mutaciones de sentido erróneo, las mutaciones sin sentido y las mutaciones de cambio de marco.
con algunas bases y producir un tipo específico de daño en el ADN. Estos estan descritos en mas detalle abajo.
Un ejemplo de este tipo de mutágeno es la metil-nitrosoguanidina, Las mutaciones silenciosas cambian la secuencia de nucleótidos de un codón,
un agente alquilante que agrega grupos metilo a la guanina, causando pero no cambie el aminoácido codificado por ese codón. Esto es
emparejarse mal con la timina (figura 13.4). Una ronda posterior de posible debido a la degeneración del código genético. Por lo tanto, cuando hay más
la replicación podría resultar en una transición GC-AT. La hidroxilamina es otro ejemplo de un codón para un aminoácido dado,
de un agente modificador del ADN. Hidroxila el nitrógeno C-4 de la citosina, haciendo una sola sustitución de base puede resultar en la formación de una nueva
que se forme un par de bases. codón para el mismo aminoácido. Por ejemplo, si el codón CGU
como timina. Hay muchos otros agentes modificadores del ADN que se cambiaron a CGC, todavía codificaría para arginina incluso
puede causar un mal emparejamiento. aunque se había producido una mutación. La mutación solo puede detectarse a nivel
Los agentes intercalantes distorsionan el ADN para inducir un solo nucleótido. del ADN o del ARNm. Cuando no hay cambio
inserciones y eliminaciones de pares. Estos mutágenos son planos y se insertan en la proteína, no hay cambio en el fenotipo del organismo. El código genético (sección
(intercalan) entre las bases apiladas de la hélice. Esto resulta en una mutación, 11.7)
posiblemente a través de la formación de Las mutaciones de sentido erróneo involucran una sola sustitución de base que
un bucle en el ADN. Los agentes intercalantes incluyen acridinas tales como cambia un codón de un aminoácido en un codón de otro.
proflavina y naranja de acridina. Por ejemplo, el codón GAG, que especifica el ácido glutámico,
Muchos mutágenos y, de hecho, muchos carcinógenos, dañan directamente las podría cambiarse a GUG, que codifica para valina. Los efectos
bases de forma tan grave que los enlaces de hidrógeno entre los pares de bases de mutaciones sin sentido varían. Alteran la estructura de las proteínas, pero la
está deteriorada o prevenida y el ADN dañado ya no puede actuar efecto de este cambio puede ir desde la pérdida completa de actividad
como plantilla para la replicación. Por ejemplo, la radiación ultravioleta genera a ningún cambio en absoluto. Esto se debe a que el efecto de las mutaciones de
dímeros de tipo ciclobutano, generalmente dímeros de timina, entre pirimidinas sentido erróneo en la función de la proteína depende del tipo y la ubicación de
adyacentes (figura 13.5). Otros ejemplos son la radiación ionizante y los carcinógenos la sustitución de aminoácidos. Por ejemplo, la sustitución de un
como la toxina fúngica aflatoxina B1 y aminoácido no polar en el interior de la proteína con un aminoácido polar
otros derivados de benzo(a)pireno. El ácido puede alterar drásticamente la estructura tridimensional de la proteína y por
La retención del apareamiento de bases apropiado es esencial en la prevención de lo tanto su función. Del mismo modo, la sustitución de un
mutaciones Las células han desarrollado amplios mecanismos de reparación. A menudo, aminoácido crítico en el sitio activo de una enzima a menudo destruye su actividad.
el daño se puede reparar antes de que una mutación se estropee de forma permanente. Sin embargo, el reemplazo de un amino polar
H norte
H
O
NUEVA HAMPSHIRE
hermano O H norte
Se
empareja norte
guanina
H H norte
norte
normalmente
NUEVA HAMPSHIRE norte
Azúcar con la citosina. norte
norte norte
hn
O H
Azúcar
H
5-bromouracilo (forma adenina
ceto)
NUEVA HAMPSHIRE
hermano O H O
CH3
EN norte H
H norte
NUEVA HAMPSHIRE norte
CN
Azúcar
norte norte
O NO2
H norte
NUEVA HAMPSHIRE
Azúcar
H
N-metil-Nÿ -nitro-N-nitrosoguanidina
5-bromouracilo (forma guanina
enol)
(a) Emparejamiento de bases de 5-BU con adenina o guanina
CH3
5ÿ 3ÿ
norte
O
H
EN
5ÿ 3ÿ
5ÿ 3ÿ A veces se
norte
O6- metilguanina
norte
combina con timina

replicación del ADN 3ÿ 5ÿ norte
GRAMO C
A 5-BU
5ÿ 3ÿ hn
3ÿ 5ÿ H
3ÿ 5ÿ replicación del ADN
GRAMO 5-BU
5ÿ 3ÿ
Figura 13.4 Mutagénesis de metil-nitrosoguanidina.

3ÿ 5ÿ
GoA 5-BU Mutagénesis por metil-nitrosoguanidina debida a la metilación de guanina.
3ÿ 5ÿ
(b) Cómo 5-BU causa una mutación en un par de bases durante la replicación del ADN O
CH3
Figura 13.3 Mutagénesis por el análogo base 5-bromouracilo. (a) El

NUEVA HAMPSHIRE
emparejamiento de bases de la forma cetogénica normal de 5-BU se muestra en la

ilustración superior. La forma enólica de 5-BU (ilustración inferior) se empareja con
O norte
guanina en lugar de con adenina, como cabría esperar de un análogo de timina.( b) O

Si se incorpora la forma ceto de 5-BU en lugar de la timina, su tautomerización CH3 O
ocasional a la forma enol (BUe) producirá una mutación de transición AT a GC.
NUEVA HAMPSHIRE
O
norte
ácido con otro en la superficie de la proteína puede tener poco o ningún

efecto. Las mutaciones sin sentido en realidad juegan un papel muy
importante al proporcionar una nueva variabilidad para impulsar la evolución Figura 13.5 Dímero de timina. Los dímeros de timina se forman por
porque a menudo no son letales y, por lo tanto, permanecen en el acervo radiación ultravioleta.
genético. Proteínas (anexo I)
Las mutaciones sin sentido provocan la terminación temprana de la
traducción y, por lo tanto, dan como resultado un polipéptido acortado. Se fectado La mayoría de las proteínas conservan alguna función si se acortan
denominan mutaciones sin sentido porque convierten un codón con sentido en uno o dos aminoácidos; Es casi seguro que se producirá una pérdida
en un codón sin sentido o de terminación. Dependiendo de la ubicación completa de la función normal si la mutación se produce más cerca del
relativa de la mutación, el fenotipo puede estar más o menos gravemente afectado. principio o de la mitad del gen.
supresor
extragénico Cambio
de
marco
opuesto Mutaciones
supresoras Reversión
equivalente Reversión
verdadera Cambio
de
cuadro Disparates sin
sentido Ninguna Tipo
de
mutación
Mutaciones
inversas Silencio Mutaciones
hacia
adelante
Cuadro
13.2
Tipos
de
mutaciones
puntuales
supresor
fisiológico supresor
de
tonterías
signo
(supresor
intragénico)
Adición/
eliminación Sustitución
de
base Sustitución
de
base Sustitución
de
base Adición/
eliminación Sustitución
de
base Sustitución
de
base Ninguna Cambio
en
el
ADN
El
gen
(p.
ej.,
para
el
ARNt
de
tirosina)
sufre
un
evento
mutacional
en
su
región
de
anticodón
que
le
permite
reconocer
yalinear
Un
defecto
en
una
vía
química
es
eludido
por
otra
mutación,
por
ejemplo,
una
que
abre
otra
vía
química
5ÿ-
ATGACCCCGCCGAAAGGG-3ÿ 5ÿ-
ATGACCTCC
GCCGAAGGG-3ÿ 5ÿ-
ATGACCTCCCCGAAAGGG-3ÿ 5ÿ-
ATGACCTCC 5ÿ-
ATGACCTCC 5ÿ-
ATGACCTCC 5ÿ-
ATGACCTCC
GCCGAAGGG-3ÿ 5ÿ-
ATGACCTCCCCG
TAAGGG-3ÿ 5ÿ-
ATGACCT
GCCCGAAAGGG-3ÿ 5ÿ-
ATGAC
ATCCCCGAAAGGG-3ÿ 5ÿ-
ATGACCTCCCCGAAAGGG-3ÿ Ejemplo
camino
hacia
el
mismo
producto,
o
uno
que
permita
una
absorción
más
eficiente
de
un
compuesto
producido
en
pequeñas
cantidades
debido
a
la
mutación
original. con
un
codón
mutante
sin
sentido
(p.
ej.,
UAG)
para
insertar
un
aminoácido
(tirosina)
ypermitir
la
finalización
de
la
traducción.
Met
-Thr
Ser Met
-Thr
Ser Met
-Thr
Ser
Met
-Thr
Pro
-Pro
-Lys
-Gly Met
-Thr
Ser
-Ala
Glu
-Arg Met
-Thr
Ser
-Pro
-Lys
-Gly Met
-Thr
Ser
-Ala
Glu
-Arg Met
-Thr
Ser
-Pro
-¡ALTO! Met
-Thr
Cys
-Pro
-Lys
-Gly Met
-Thr
Ser
-Pro
-Lys
-Gly Met
-Thr
Ser
-Pro
-Lys
-Gly
(aminoácido
polar)
ÿÿÿ ÿÿÿ
ÿÿÿ
ATG
CCCTCC ÿÿÿ
ATGACCTGC ÿÿÿ
ATG
CCCTCC
hacia
adelante hacia
adelante hacia
adelante
Mutación
supresora
(deleción) mutación Hacia
adelante
(aminoácido
no
polar)
Met
-Pro
-Ser Met
-Thr
Cis Met
-Pro
-Ser
ÿÿÿ
ATGCTCTCC ÿÿÿ
ATGACCTCC
ÿÿÿ
ATGACCAGC
contrarrestar contrarrestar
contrarrestar
Met-
Leu
-Ser Met
-Thr
Ser Met
-Thr
Ser
(aminoácido
polar)
pseudo-
tipo
salvaje
Capítulo 13 Genética microbiana: mecanismos de variación genética 322
Cepa mutante Las mutaciones bioquímicas son aquellas que provocan un cambio en la bioquímica
Tipo salvaje (además de GC) de la célula. Dado que estas mutaciones a menudo inactivan una ruta biosintética, con
frecuencia eliminan la capacidad del mutante para producir una macromolécula esencial,
Hilo de plantilla
como un aminoácido o un nucleótido. Una cepa que lleva tal mutación tiene un fenotipo
ADN TACGGTATGACC TACGGTCATGACC condicional: no puede crecer en un medio que carece de esa molécula, pero crece
ATGCCATACTGG ATGCCAGTACTGG
cuando se le proporciona la molécula.
Estos mutantes se denominan auxótrofos y se dice que son auxótrofos por la molécula
que no pueden sintetizar. Si la cepa de tipo salvaje de la que surgió el mutante es un
quimioorganotrofo capaz de crecer en un medio mínimo que contiene solo sales (para
ARNm de suministrar los elementos necesarios como nitrógeno y fósforo) y una fuente de carbono,
codones AUGCCAUACUG AUGCCAGUACUGG
se denomina protótrofo. Otro tipo de mutante bioquímico es el mutante de resistencia.
Estos mutantes han adquirido resistencia a algún patógeno, químico o antibiótico. Los
mutantes auxotróficos y de resistencia son muy importantes en la genética microbiana
debido a la facilidad de su selección y su relativa abundancia.
péptido Met Pro Tyr Trip Met Pro Val Leu
Figura 13.6 Mutación de cambio de marco. Una mutación de cambio de marco

resultante de la inserción de un par de bases GC. El cambio de marco de lectura
Mutaciones en secuencias reguladoras Algunas
produce un péptido diferente después de la adición.
de las mutaciones más interesantes e informativas estudiadas por los genetistas
microbianos son las que ocurren en las secuencias reguladoras responsables de
Las mutaciones de cambio de marco surgen de la inserción o eliminación de uno o dos controlar la expresión génica. Los mutantes del operón de lactosa constitutivos en E.
pares de bases dentro de la región codificante del gen. Dado que el código consta de coli son ejemplos excelentes. Muchas de estas mutaciones se mapean en el sitio del
una secuencia precisa de tripletes de codones, la adición o eliminación de menos de operador y producen secuencias de operador alteradas que no son reconocidas por la
tres pares de bases hará que el marco de lectura se desplace para todos los codones proteína represora. Por lo tanto, el operón se transcribe continuamente y siempre se
aguas abajo. La figura 13.6 muestra el efecto de una mutación de cambio de marco en sintetiza -galactosidasa. También se han identificado mutaciones en los promotores. Si
una sección corta de ARNm y la secuencia de aminoácidos que codifica. la mutación hace que la secuencia promotora no sea funcional, el mutante no podrá
sintetizar el producto aunque la región codificante del gen estructural sea completamente
Las mutaciones de cambio de marco suelen ser muy perjudiciales y producen normal. Sin un promotor completamente funcional, la ARN polimerasa rara vez transcribe
fenotipos mutantes resultantes de la síntesis de proteínas no funcionales. Además, las un gen tan bien como el tipo salvaje. Regulación del inicio de la transcripción (sección
mutaciones de cambio de marco a menudo producen un codón sin sentido o de 12.2)
terminación, de modo que el producto peptídico es más corto y diferente en la secuencia.

Por supuesto, si el cambio de marco ocurrió cerca del final del gen, o si hubo un segundo
cambio de marco poco después del primero que restauró el marco de lectura, el efecto
Mutaciones en los genes tRNA y rRNA Las
fenotípico podría no ser tan drástico. Un segundo cambio de marco cercano que restaura
el marco de lectura adecuado es un buen ejemplo de una mutación supresora intragénica mutaciones en los genes rRNA y tRNA alteran el fenotipo de un organismo a través de
(tabla 13.2). la interrupción de la síntesis de proteínas. De hecho, estos mutantes de diez se

identifican inicialmente por su lento crecimiento. Por otro lado, una mutación supresora
Como se señaló anteriormente, los cambios en la estructura de las proteínas que involucre tRNA restablecerá las tasas de crecimiento normales (o casi normales).
pueden conducir a cambios en la función de las proteínas, lo que a su vez puede alterar Aquí, una sustitución de bases en la región del anticodón de un ARNt permite la inserción
el fenotipo de un organismo. El fenotipo de un microorganismo puede verse afectado de del aminoácido correcto en un codón mutante (tabla 13.2).
varias maneras diferentes. Las mutaciones morfológicas modifican la morfología colonial

o celular del microorganismo.
Las mutaciones letales, cuando se expresan, dan como resultado la muerte del 1. Defina o describa lo siguiente: mutación, mutación condicional, aux
microorganismo. Debido a que un microbio debe poder crecer para ser aislado y otrofo y protótrofo, mutaciones espontáneas e inducidas, mutágeno,
estudiado, las mutaciones letales se recuperan solo si son recesivas en organismos mutaciones de transición y transversión, sitios apurínicos y apirimidínicos,
diploides o son mutaciones condicionales en organismos haploides. Las mutaciones análogo de base, agente modificador de ADN, agente intercalante, dímero
condicionales son aquellas que se expresan solo bajo ciertas condiciones ambientales. de timina, tipo salvaje, mutaciones directas e inversas, mutación supresora,
mutación puntual, silenciosa mutación, mutaciones sin sentido y sin sentido,
Por ejemplo, una mutación letal condicional en E. coli podría no expresarse en mutación dirigida o adaptativa y mutación de cambio de marco.
2. Enumera cuatro formas en las que pueden surgir mutaciones espontáneas.
condiciones permisivas, como baja temperatura, pero sí en condiciones restrictivas,
como alta temperatura. Así, el hipotético mutante crecería normalmente a la temperatura 3. ¿Cómo inducen mutaciones los mutágenos 5-bromouracilo, metil-
nitrosoguanidina, proflavina y la radiación UV?
permisiva pero moriría a altas temperaturas.
4. Dé ejemplos de mutaciones supresoras intragénicas y extragénicas.
5. A veces, una mutación puntual no cambia el fenotipo. Enumere todas las razones
por las que esto es así.
6. ¿Por qué una mutación sin sentido en la superficie de una proteína podría no afectar el
fenotipo de un organismo, mientras que la sustitución de un aminoácido interno sí lo hace?

Tratamiento de células de E.coli
con un mutágeno, como la
Réplica
nitrosoguanidina cuadra
13.2 DETECCIÓN Y AISLAMIENTO DE MUTANTES superficie de terciopelo
(esterilizado)
Para estudiar mutantes microbianos, uno debe ser capaz de detectar
fácilmente, incluso cuando son raros, y luego aislarlos eficientemente Placa maestra
ellos de organismos de tipo salvaje y otros mutantes que no son de (medio completo)
interesar. Los genetistas microbianos generalmente aumentan la probabilidad de

obtención de mutantes mediante el uso de mutágenos para aumentar la tasa de mutación
del habitual mutante por 107 a 1011 células a aproximadamente uno inocular una placa
por 103 a 106 células. Incluso a este ritmo, las mutaciones son raras y los medios que contiene un crecimiento completo
medio e incubar. Ambas cosas
cuidadosamente diseñados para detectar o seleccionar una mutación deseada
de tipo salvaje y mutante
debe ser usado. Esta sección describe algunas técnicas utilizadas en la detección, selección los supervivientes
forman colonias.
y aislamiento de mutantes.
Detección de mutantes
Al recolectar mutantes de un organismo en particular, uno debe saber
las características normales o de tipo salvaje para reconocer una alteración
fenotipo. Un sistema de detección adecuado para el fenotipo mutante
también se necesita. Sistemas de detección en procariotas y otros haploides
Placa réplica Placa réplica
organismos son sencillos porque cualquier mutación debe ser
(medio completo) (medio menos lisina)
visto de inmediato, incluso si es una mutación recesiva. A veces, la detección de mutantes
es directa. Por ejemplo, si se estudian mutantes albinos de una bacteria con pigmentación Incubación
normal, la detección simplemente

requiere la observación visual del color de la colonia. Otra detección directa
Los sistemas son más complejos. Por ejemplo, la técnica de placas de réplica se utiliza
para detectar mutantes auxotróficos. Distingue entre mutantes y la cepa de tipo salvaje en Todas las cepas crecen auxótrofos de lisina
no crezcas
función de su capacidad para
crecer en ausencia de un producto final biosintético particular (figura 13.7). Un auxótrofo
de lisina, por ejemplo, crecerá en medios suplementados con lisina, pero no en un medio
que carezca de la cantidad adecuada de lisina.
cultivo lisina
suministro de lisina porque no puede sintetizar este aminoácido.
auxótrofo (Lys_ )
Una vez que se establece un método de detección, se recolectan los mutantes.
Sin embargo, la colección de mutantes puede presentar problemas prácticos. Considere
una búsqueda de los mutantes albinos mencionados anteriormente. Si el
la tasa de mutación era de alrededor de uno en un millón, en promedio un millón o más de
organismos tendrían que ser probados para encontrar un albino Figura 13.7 Recubrimiento de réplicas. El uso de placas de réplica en
mutante Esto probablemente requeriría varios miles de placas. los aislar un auxótrofo de lisina. Los mutantes se generan al tratar un
tarea de aislar mutantes auxotróficos de esta manera sería incluso cultivo con un mutágeno. El cultivo que contiene tipo salvaje y
más exigente con el trabajo adicional de la reproducción de placas. Por lo tanto, si es auxótrofos se sembra en medio completo. Después de que las colonias hayan
posible, es más eficiente utilizar un sistema de selección que emplee algunos desarrollado, se presiona un trozo de terciopelo estéril sobre la superficie de la placa
factor ambiental para separar los mutantes de los microorganismos de tipo salvaje. A para recoger bacterias de cada colonia. Luego se presiona el terciopelo para
continuación se describen ejemplos de sistemas de selección. la superficie de otras placas y organismos se transfieren a la misma
posición como en la placa maestra. Después de determinar la ubicación de
Colonias de Lys creciendo en la réplica con medio completo, la
Selección mutante
los auxótrofos se pueden aislar y cultivar.
Una técnica de selección efectiva usa condiciones de incubación bajo
que crece el mutante, debido a las propiedades que le da la mutación, mientras que el tipo
salvaje no lo hace. Los métodos de selección a menudo involucran mutaciones de reversión
o el desarrollo de resistencia a un
Detección y Aislamiento de Mutantes 325
Las mutaciones de utilización de sustrato también se emplean en la selección

bacteriana. Muchas bacterias usan solo unas pocas fuentes primarias de carbono. Con
tales bacterias, es posible seleccionar mutantes sembrando un cultivo en
Tratamiento de auxótrofos de lisina (Lys– )
con un mutágeno como la nitrosoguanidina medio que contiene una fuente de carbono alternativa. Cualquier colonia que
o radiación ultravioleta para producir revertientes aparezca puede usar el sustrato y probablemente sea mutante.
Los métodos de detección y selección de mutantes se utilizan con fines
además de entender más sobre la naturaleza de los genes o la
bioquímica de un microorganismo en particular. uno muy importante
El papel de las técnicas de selección y detección de mutantes está en el estudio.
Mezcla de placa en mínimo de carcinógenos. La siguiente sección describe brevemente uno de los primeros
medio (que carece de lisina) y quizás el más conocido de los sistemas de prueba de carcinógenos.
Pruebas de carcinogenicidad
Una mayor comprensión de los mecanismos de mutación y
la inducción del cáncer ha estimulado los esfuerzos para identificar
carcinógenos La observación de que muchos agentes cancerígenos también
son mutagénicos es la base para detectar carcinógenos potenciales mediante
Incubar
pruebas de mutagenicidad mientras se aprovechan las técnicas de selección
bacteriana y los cortos tiempos de generación. La prueba de Ames, desarrollada
por Bruce Ames en la década de 1970, ha sido ampliamente utilizada para probar
para carcinógenos. La prueba de Ames es un ensayo de reversión mutacional
Solo prototrofos empleando varias cepas especiales de Salmonella enterica serovar
capaz de sintetizar lisina Typhimurium, cada uno de los cuales tiene una mutación diferente en el operón de
crecerá
biosíntesis de histidina; es decir, son histidina aux otrophs. Las bacterias también
tienen alteraciones mutacionales de su célula.
Figura 13.8 Selección de mutantes. La producción y directo
paredes que las hacen más permeables a las sustancias de ensayo. Para aumentar
selección de revertientes auxótrofos. En este ejemplo, los revertientes de lisina
aún más la sensibilidad del ensayo, las cepas son defectuosas en la capacidad de
se seleccionan después del tratamiento de un cultivo auxótrofo de lisina porque
reparar el ADN correctamente.
el agar contiene medio mínimo que no soporta
En la prueba de Ames, estas cepas de prueba especiales de Salmonella se
crecimiento auxótrofo.
se sembraron con la sustancia que se estaba probando y siguió la aparición de
colonias visibles (figura 13.9). Para garantizar que la replicación del ADN pueda
estrés ambiental. Por ejemplo, si la intención es aislar reverentes de un auxótrofo de tener lugar en presencia del mutágeno potencial, el
lisina (Lys), el enfoque es bastante sencillo. A Las bacterias y la sustancia de ensayo se mezclan en agar de superficie fundida diluido para
una gran población de auxótrofos de lisina se sembra en placa en un mínimo al que se ha añadido una traza de histidina. Esta mezcla fundida es entonces
medio sin lisina, incubado y examinado para la formación de colonias. Solo las se vierte sobre placas de agar mínimas y se incuba durante 2 a 3 días
células que han mutado para restaurar la capacidad de fabricar lisina crecerán en un a 37°C. Todos los auxótrofos de histidina crecen durante los primeros
medio mínimo (figura 13.8). horas en presencia del compuesto de prueba hasta que la histidina se
Se pueden sembrar varios millones de células en una sola placa de Petri, pero solo agotado Esto es necesario porque, como se ha comentado anteriormente,
las raras células revertidas crecerán. Por lo tanto, muchas células pueden ser analizadas para se requiere replicación para el desarrollo de una mutación (figura
mutaciones escaneando algunas placas de petri para el crecimiento. Este método 13.3). Una vez que se agota el suministro de histidina, sólo los revertientes que
ha demostrado ser muy útil para determinar la mutagenicidad relativa de han recuperado mutacionalmente la capacidad de sintetizar histidina continúan
muchas sustancias creciendo y produciendo colonias visibles. Estas colonias necesitan
Los métodos para seleccionar mutantes resistentes a un estrés ambiental contarse y compararse con los controles para estimar la
particular siguen un enfoque similar. A menudo células de tipo salvaje mutagenicidad relativa del compuesto: cuantas más colonias, más
son susceptibles al ataque del virus o al tratamiento con antibióticos, por lo que es mayor es la mutagenicidad.
posible hacer crecer la bacteria en presencia del agente y buscar Un extracto de hígado de mamífero también se agrega a menudo a la parte superior fundida.
para los organismos sobrevivientes. Considere el ejemplo de una bacteria de tipo agar antes de sembrar. El extracto convierte carcinógenos potenciales
salvaje sensible a los fagos. Cuando el organismo se cultiva en en derivados electrofílicos que reaccionan fácilmente con el ADN. Esta
medio sin el virus y luego sembrado en medio selectivo El proceso ocurre naturalmente cuando se metabolizan sustancias extrañas.
que contienen virus, cualquier colonia que se forme es resistente al virus en el hígado Debido a que las bacterias no tienen este sistema de activación, la
ataque y muy probablemente sean mutantes en este sentido. Este tipo de selección adición del extracto de hígado promueve el mismo tipo de actividad enzimática.
se puede utilizar para prácticamente cualquier parámetro ambiental; transformaciones que ocurren en los mamíferos. Muchos carcinógenos potenciales,
resistencia a bacteriófagos (virus bacterianos), antibióticos o como las aflatoxinas, no son realmente carcinogénicos hasta que
temperatura son los más comúnmente empleados. se modifican en el hígado. La adición de extracto muestra qué
Reparación por escisión
La reparación por escisión corrige el daño que causa distorsiones en la doble hélice. Se han
Cultura de
Salmonela descrito dos tipos de sistemas de reparación por escisión: reparación por escisión de nucleótidos
auxótrofos y reparación por escisión de bases. Se distinguen por las enzimas utilizadas para corregir el
de histidina daño del ADN.
Sin embargo, ambos utilizan el mismo enfoque para la reparación: eliminan la parte dañada de
una cadena de ADN y utilizan la cadena complementaria intacta como plantilla para la síntesis
de nuevo ADN.
Medio mínimo más placa Medio mínimo con En la reparación por escisión de nucleótidos, una enzima reparadora llamada
de cultivo
una pequeña cantidad mutágeno de prueba y una endonucleasa UvrABC elimina las bases dañadas y algunas bases a ambos lados de la lesión.
de histidina pequeña cantidad de histidina
El hueco resultante de una sola hebra, de unos 12 nucleótidos de largo, se llena con la ADN
polimerasa I y la ADN ligasa se une a los fragmentos. La Figura 13.10 presenta el proceso en
detalle. Este sistema puede eliminar los dímeros de timina (figura 13.5) y reparar casi cualquier
otra lesión que produzca una distorsión detectable en el ADN.
Incubar a 37 C
La reparación por escisión de bases emplea glicosilasas de ADN para eliminar bases
dañadas o no naturales que producen sitios apurínicos o apirimidínicos (AP). Las endonucleasas
especiales llamadas endonucleasas AP reconocen el ADN dañado y cortan la columna vertebral
en el sitio AP (figura 13.11). La ADN polimerasa I elimina la región dañada, utilizando su
Revertientes Revertientes inducidos actividad de exonucleasa de 5 'a 3'. Luego llena el espacio y la ADN ligasa se une a los
espontáneos por el mutágeno
fragmentos de ADN.
Figura 13.9 Prueba de Ames para mutagenicidad. Ver texto para

más detalles.
Reparación directa
Los dímeros de timina y las bases alquiladas a menudo se corrigen mediante reparación
compuestos tienen mutagenicidad intrínseca y que necesitan activación después de la absorción. directa. La fotorreactivación es la reparación de los dímeros de timina dividiéndolos en timinas
A pesar del uso de extractos de hígado, la prueba de Ames detecta solo alrededor de la mitad separadas con la ayuda de luz visible en una reacción fotoquímica catalizada por la enzima
de los carcinógenos animales potenciales. fotoliasa (figura 13.12a). Los metilos y algunos otros grupos alquilo que se han agregado a la
posición O6 de la guanina se pueden eliminar con la ayuda de una enzima conocida como
alquiltransferasa o metilguanina metiltransferasa (figura 13.12b). Por lo tanto, el daño a la
1. Describa cómo se usa el revestimiento de réplicas para detectar y aislar auxotróficos
guanina por mutágenos como la metil-nitrosoguanidina (figura 13.4) puede repararse directamente.
mutantes
2. ¿Por qué las técnicas de selección de mutantes son generalmente preferibles a la

detección directa y el aislamiento de mutantes?
3. Discuta brevemente cómo las mutaciones de reversión, la resistencia a un factor ambiental
y la capacidad de usar un nutriente en particular pueden emplearse en la selección de

mutantes. Reparación de desajustes A
4. Describe cómo aislarías un mutante que necesitara histidina para crecer y fuera pesar de la precisión de la ADN polimerasa y la revisión continua, todavía se cometen errores
resistente a la penicilina. durante la replicación del ADN. El sistema de reparación de desajustes de E. coli suele
5. ¿Qué es la prueba de Ames y cómo se realiza? ¿En qué suposición sobre detectar y reparar las bases que no coinciden (figura 13.13). La enzima de corrección de errores
mutagenicidad y carcinogenicidad se basa? de emparejamiento MutS escanea el ADN recién replicado en busca de pares no coincidentes.
Otra enzima, MutH, elimina un tramo de ADN recién sintetizado alrededor del desajuste. Luego,
una polimerasa de ADN reemplaza los nucleótidos extirpados y la muesca resultante se sella
con un gas licuado. En este sentido, la reparación por desajuste es similar a la reparación por
escisión.
13.3 REPARACIÓN DEL ADN
Debido a que los errores de replicación y una variedad de mutágenos pueden alterar la secuencia La reparación exitosa del desajuste depende de la capacidad de las enzimas para distinguir
de nucleótidos, un microorganismo debe poder reparar cambios en la secuencia que podrían ser entre las hebras de ADN viejas y las recién replicadas. Esta distinción es posible porque las
letales. El ADN es reparado por varios mecanismos diferentes además de la revisión por cadenas de ADN recién replicadas carecen de grupos metilo en sus bases, mientras que el ADN
enzimas de replicación (las ADN polimerasas pueden eliminar un nucleótido incorrecto más antiguo tiene grupos metilo en las bases de ambas cadenas. La metilación del ADN es
inmediatamente después de su adición al extremo de crecimiento de la cadena). La reparación catalizada por ADN metiltransferasas y da como resultado tres productos diferentes: N6-
en E. coli se entiende mejor y se describe brevemente en esta sección. Replicación del ADN metiladenina, 5-metilcitosina y N4-metilcitosina. Después de la síntesis de la hebra, la ADN
(sección 11.4) adenina metiltransferasa de E. coli

Reparación de ADN 327
dímero de timina 5ÿ 3ÿ
5ÿ 3ÿ
C T C C C C C T
GRAMO A A GRAMO A GRAMO A
A A TT GRAMO A GRAMO GRAMO GRAMO GRAMO GRAMO A
C T tu C T C T
3ÿ B 5ÿ
3ÿ 5ÿ
El complejo UvrAB rastrea el ADN en busca de La ADN glicosilasa reconoce una base anormal y rompe
tu el enlace entre la base y el azúcar.
ADN dañado.
5ÿ 3ÿ
5ÿ 3ÿ
ATTA
C T C C C C C T
3ÿ 5ÿ A A A A
B GRAMO GRAMO GRAMO
GRAMO A GRAMO GRAMO GRAMO GRAMO GRAMO A

C T C T C T
3ÿ 5ÿ
Una vez detectado el daño, se libera UvrA
y se une UvrC.
Nucleótido La endonucleasa AP reconoce una base faltante y
apirimidínico escinde la columna vertebral del ADN en
5ÿ 3ÿ
el lado 5ÿ de la base faltante.
TT
5ÿ 3ÿ
3ÿ B 5ÿ
C T C C C C C T
UvrC GRAMO A A GRAMO A GRAMO A
C T C T C T
UvrC hace cortes en ambos lados
3ÿ 5ÿ
del dímero de timina.
Mella La ADN polimerasa usa su actividad de exonucleasa 5' 3'

Corte Corte
para eliminar la región dañada y luego rellena la región con
ADN normal.
5ÿ 3ÿ
La ligasa de ADN sella la región.
TT 5ÿ 3ÿ
3ÿ B 5ÿ
C T C C C C C T
A A A A
UvrC
GRAMO GRAMO GRAMO

C T T C T C T
UvrD es una helicasa que elimina la región
3ÿ 5ÿ
dañada. También se lanzan UvrB y UvrC.
Figura 13.11 Reparación por escisión de la base.

5ÿ 3ÿ
3ÿ 5ÿ trozo de ADN molde de una molécula hermana y lo coloca en el hueco o lo usa

para reemplazar una hebra dañada (figura 13.14). Aunque los procariotas son
La ADN polimerasa llena el espacio y la
ADN ligasa sella el espacio. haploides, a menudo se dispone de otra copia del segmento dañado porque se ha
replicado recientemente o porque la célula está creciendo rápidamente y tiene
Sin dímero de timina más de una copia de su cromosoma. Una vez que la plantilla está en su lugar, el
5ÿ 3ÿ
daño restante puede corregirse con otro sistema de reparación.
3ÿ 5ÿ
La respuesta SOS A pesar

Figura 13.10 Reparación por escisión de nucleótidos en E. coli.
de tener múltiples sistemas de reparación, a veces el daño al ADN de un
organismo es tan grande que los mecanismos de reparación normales que
(DAM) metila las bases de adenina en las secuencias GATC para formar N6-
acabamos de describir no pueden reparar todo el daño. Como resultado, la síntesis
metiladenina. Durante un breve período de tiempo después de que ha pasado la
de ADN se detiene por completo. En tales situaciones, se activa una red de control
horquilla de replicación, la nueva hebra carece de grupos metilo mientras que la
global llamada respuesta SOS . La respuesta SOS, como la reparación
hebra molde está metilada. En otras palabras, el ADN está temporalmente
recombinante, depende de la actividad de la proteína RecA. RecA se une a roturas
hemimetilado. El sistema de reparación elimina el desajuste de la hebra no
y lagunas de ADN de cadena simple o doble generadas por el cese de la síntesis
metilada.
de ADN.
La unión de RecA inicia la reparación recombinacional. Simultáneamente, RecA
Reparación recombinante La asume una función proteolítica que destruye una proteína represora llamada LexA.
reparación recombinante corrige el ADN dañado en el que faltan o están dañadas LexA regula negativamente la función de muchos genes implicados en la reparación
ambas bases de un par, o donde hay un espacio frente a una lesión. En este tipo y síntesis del ADN. La destrucción de LexA aumenta la transcripción de genes
de reparación, la proteína RecA corta un para la reparación por escisión y
dímero de timina La proteína MutS encuentra un desajuste. El complejo MutS/MutL se une a MutH, que
ya está unido a una secuencia hemimetilada.
O O
H CH3 H3C H
norte norte
metro
O H H O A T C
GRAMO
norte norte
hebra C T A GRAMO
parental
MutH
Hilo MutL
columna La fotoliasa de ADN escinde los recién
vertebral del ADN dos enlaces entre el dímero de hecho MutS
timina.
T
GRAMO
O O
H H
norte
CH3 H3C base MutH hace un corte en la hebra
norte
incorrecta no metilada. Una exonucleasa

comienza en este sitio de escisión
O H H O
norte norte y luego digiere la hebra no metilada
justo más allá del desajuste de bases.
metro
CT
Georgia
Se restablece la estructura normal de las dos timinas.
(a) Reparación directa de un dímero de timina

Sitio de escisión de MutH
CH3 SH
O GRAMO
O6-metilguanina
CH2
norte
norte
La ADN polimerasa llena la

norte
norte
NH2
alquiltransferasa región vacante. La ADN ligasa
sella los extremos.
metro
columna
La alquiltransferasa cataliza la A T C
GRAMO
vertebral del ADN

eliminación del grupo metilo sobre C T A GRAMO
sí misma.
CH3
guanina O
S El desajuste se ha reparado
H
norte correctamente.
norte
CH2
H C
GRAMO
norte
norte
NH2
Figura 13.13 Reparación de desajustes dirigida por metilo en E. coli.

MutS se desliza a lo largo del ADN y reconoce los desajustes de bases en la
doble hélice. MutL se une a MutS y actúa como un enlace entre MutS y MutH.
Se restablece la estructura normal de la guanina.
El ADN debe hacer un bucle para que se produzca esta interacción.
(b) Reparación directa de una base metilada El papel de MutH es identificar la hebra metilada de ADN, que es la
hebra parental no mutada. La adenina metilada se designa con una m.
Figura 13.12 Reparación directa. (a) La reparación de dímeros de timina
por fotoliasa. (b) La reparación de la metilguanina mediante la transferencia
del grupo metilo a la alquiltransferasa.
Creando Variabilidad Genética 329
A reparación recombinacional, en particular. Los primeros genes que se transcriben son los que
B codifican las proteínas Uvr necesarias para la reparación por escisión de nucleótidos (figura
13.10). Luego, los genes involucrados en la reparación recombinante se regulan aún más.
Para que la célula tenga tiempo de reparar su ADN, se produce la proteína SfiA; SfiA bloquea
la división celular. Finalmente, si el ADN no se ha reparado por completo después de unos 40
minutos, se desencadena un proceso llamado síntesis de ADN de translesión . En este
proceso, las ADN polimerasas IV (también conocidas como DinB) y V (UmuCD) sintetizan ADN
a través de brechas y otras lesiones (p. ej., dímeros de timina) que habían detenido la ADN
polimerasa III. Sin embargo, debido a que no existe una plantilla intacta, estas polimerasas de
respuesta SOS a menudo insertan bases incorrectas. Además, carecen de actividad de
Brecha revisión. Por lo tanto, aunque la síntesis de ADN continúa, es muy propensa a errores y da
como resultado la generación de numerosas mutaciones. La respuesta SOS se llama así
TT dímero de timina
porque es una respuesta dada en una situación de vida o muerte.
Por recombinación, una

región de la cadena A se La respuesta aumenta la probabilidad de que algunas células sobrevivan al permitir que
C
cambia por la misma región continúe la síntesis de ADN. Para la célula, el riesgo de morir por no poder replicar el ADN es
D
de la cadena C.
mayor que el riesgo que representan las mutaciones generadas por este proceso propenso a
errores.
1. Defina lo siguiente: revisión, reparación por escisión, fotorreactivación, metilguanina

Región intercambiada metiltransferasa, reparación de errores de emparejamiento, reparación directa,
metilación del ADN, reparación recombinacional, proteína RecA, respuesta SOS
y represor LexA.
2. Describir en términos generales los mecanismos de los siguientes procesos de reparación:
reparación por escisión, reparación por recombinación, reparación directa y respuesta SOS.
3. Explique cómo se corregirían las siguientes alteraciones del ADN y errores de

replicación (puede haber más de una forma): errores de adición de bases por parte
Región intercambiada de la ADN polimerasa III durante la replicación, dímeros de timina, sitios AP,
TT
guaninas metiladas y brechas producidas durante la replicación.
La brecha que ahora está

en la cadena A se llena 13.4 CREANDO VARIABILIDAD GENÉTICA
con la ADN polimerasa y la
Como se discutió anteriormente, las consecuencias de las mutaciones pueden variar desde
ADN ligasa, utilizando la
cadena B como plantilla. ningún efecto hasta ser letales, dependiendo no solo de la naturaleza de la mutación sino
también del entorno en el que vive el organismo. Por lo tanto, todas las mutaciones están
sujetas a presión selectiva y esto determina si una mutación sobrevivirá en una población.
Cada forma mutante que sobrevive se denomina alelo, una forma alternativa del gen.
Los alelos mutantes, así como el alelo de tipo salvaje, se pueden combinar con otros genes, lo
Brecha reparada
que lleva a un aumento de la variabilidad genética dentro de una población. Cada genotipo en
una población puede ser seleccionado a favor o en contra. Los organismos con genotipos, y
por lo tanto fenotipos, que se adaptan mejor al medio ambiente sobreviven y pueden transmitir
sus genes. Los cambios en las presiones ambientales pueden provocar cambios en la población
y, en última instancia, dar como resultado la evolución de nuevas especies. Los mecanismos
por los cuales se generan nuevas combinaciones de genes son el tema de esta sección. Todos
TT implican recombinación, el proceso en el que una o más moléculas de ácido nucleico se
reorganizan o combinan para producir una nueva secuencia de nucleótidos. Esto normalmente
va acompañado de un cambio fenotípico.
La brecha ha sido reparada, pero
permanece el dímero de timina. Será eliminado
por otro sistema de reparación.
Los genetistas se refieren a los organismos producidos después de un evento de recombinación
como organismos recombinantes o simplemente recombinantes.
Figura 13.14 Reparación recombinacional.

Recombinación en eucariotas HGT todavía está dando forma a los genomas. Por ejemplo, se ha demostrado que
los procariotas que comparten un nicho ecológico pueden intercambiar
Los procesos que crean la variabilidad genética en los eucariotas difieren de los de
genes y esto altera la naturaleza de la comunidad microbiana en un
los procariotas. Los genotipos recombinantes pueden
habitat. Otro ejemplo importante es la evolución y difusión
surgen de la integración de virus en los cromosomas del huésped
de genes de resistencia a antibióticos entre bacterias patógenas. Evolución
y movimiento de elementos genéticos móviles. Sin embargo, lo más
microbiana (sección 19.1)
importantes eventos de recombinación ocurren durante el ciclo sexual,
Durante la HGT, una parte del ADN del donante, el exogenote, debe ingresar
incluida la meiosis, de aquellos eucariotas capaces de reproducción sexual. Durante
y convertirse en una parte estable de la célula receptora. Esto se puede lograr de
la meiosis, el entrecruzamiento entre homólogos
dos maneras, dependiendo de la naturaleza del exógeno.
cromosomas: cromosomas que contienen secuencias idénticas
Si el exogenote es un fragmento de ADN que es incapaz de replicarse
de genes (figura 13.15): genera nuevas combinaciones de alelos. A esto le sigue la
mismo y es susceptible a la degradación por nucleasas presentes en el
segregación de cromosomas en gametos y luego la formación de cigotos, que
receptor (p. ej., una pequeña pieza lineal del cromosoma del donante),
aumenta aún más
luego, el exogenote debe integrarse en el cromosoma de la célula receptora
variabilidad genética. Esta transferencia de genes de los padres a la descendencia
(endogenote), reemplazando una porción del material genético de la célula
a veces se denomina transferencia vertical de genes.
receptora. Mientras esto ocurre, el destinatario se vuelve temporalmente
diploide para una parte de su genoma y se denomina merocigoto (figura 13.16).
Transferencia horizontal de genes en procariotas Sin embargo, si el exógeno es capaz de autorreplicarse
A diferencia de los eucariotas, los procariotas no se reproducen sexualmente ni y es resistente al ataque de las nucleasas de la célula receptora (p. ej., una
sufren meiosis. Esto sugeriría que la variación genética plásmido), entonces no necesita integrarse en el cromosoma de la célula receptora.
en poblaciones de procariotas sería relativamente limitado, sólo En cambio, se mantiene independiente del endógeno.
ocurriendo con el advenimiento de una nueva mutación o por la integración La transferencia horizontal de genes puede tener lugar de tres maneras: directa
de virus y elementos genéticos móviles en el cromosoma. transferencia entre dos bacterias temporalmente en contacto físico
Sin embargo, éste no es el caso. Los procariotas han desarrollado tres mecanismos (conjugación), transferencia de un fragmento desnudo de ADN (transformación) y
diferentes para crear recombinantes. Estos mecanismos transporte de ADN bacteriano por virus bacterianos (transducción). Cualquiera que
se denominan colectivamente transferencia génica horizontal (o lateral) (HGT). La sea el modo de transferencia, el exógeno sólo tiene
HGT se distingue de la transferencia vertical de genes porque los genes de un cuatro destinos posibles en el receptor (figura 13.16). Primero, cuando el
organismo maduro e independiente se el exógeno tiene una secuencia homóloga a la del endógeno,
transferido a otro, a menudo creando un recombinante estable que tiene puede ocurrir la integración; es decir, puede emparejarse con el ADN del receptor
Características tanto del donante como del receptor. e incorporarse para producir un genoma recombinante. En segundo lugar, el
Alguna vez se pensó que la HGT ocurría principalmente entre El ADN extraño a veces persiste fuera del endógeno y
miembros de la misma especie. Sin embargo, cada vez es más claro se replica para producir un clon de células parcialmente diploides. Tercero, el
que HGT ha sido importante en la evolución de muchas especies, el exógeno puede sobrevivir, pero no replicarse, de modo que sólo una célula es
y que sigue siendo un lugar común en muchos entornos. Además, hay ejemplos un diploide parcial. Finalmente, las nucleasas de la célula huésped pueden degradar
claros de ADN de una especie siendo el exonote, un proceso llamado restricción del huésped.
transferidos a especies lejanamente emparentadas. La importancia de la HGT
no puede ser exagerado. Su reconocimiento como fuerza evolutiva ha
hizo que los biólogos evolutivos reconsideraran el árbol universal de Recombinación a nivel molecular
vida propuesta por primera vez por Carl Woese en la década de 1970. algunos lo sienten Aunque se utilizan diferentes procesos en eucariotas y procariotas para crear
que las relaciones filogenéticas están mejor representadas por una red o organismos recombinantes, los mecanismos de
red de relaciones en lugar de un árbol (ver figura 19.15). recombinación a nivel molecular son notablemente similares.
un aa un un aa un a A dos con
Se
los padres
Se produce un cruce completa la meiosis genotipo
entre homólogos para producir 4
B B
cromátidas. células haploides.
a A
B Bb B B bB b Dos con
recombinante
B B genotipo
Recombinación homóloga
Figura 13.15 Recombinación durante la meiosis. Durante la meiosis, pueden ocurrir pares de cromosomas homólogos y entrecruzamiento. los
los genotipos recombinantes formados son heredados por los organismos de la progenie, donde pueden dar como resultado fenotipos recombinantes. cruce
que involucra secuencias de ADN similares se llama recombinación homóloga.
Creando Variabilidad Genética 331
Se observan tres tipos de recombinación: recombinación homóloga, recombinación ecules. Las dos moléculas de ADN parental ahora están unidas entre sí por dos
específica de sitio y transposición. estructuras llamadas uniones de Holliday. Estas estructuras se mueven a lo largo
La recombinación homóloga, la forma más común de recombinación, de la molécula de ADN durante la migración de ramas.
generalmente implica un intercambio recíproco entre un hasta que finalmente se cortan y se separan las dos moléculas de ADN.
par de moléculas de ADN con la misma secuencia de nucleótidos. Eso Dependiendo de cómo ocurra esto, las moléculas de ADN resultantes serán
puede ocurrir en cualquier parte del cromosoma, y es el resultado de recombinantes o no recombinantes. En algunos
Rotura y reunión de la cadena de ADN que conduce al entrecruzamiento. La casos, se produce una forma no recíproca de recombinación homóloga (figura
recombinación homóloga se lleva a cabo por los productos de la rec 13.18). En la recombinación homóloga no recíproca, se inserta una pieza de
genes, incluida la proteína RecA, que también es importante para material genético en el cromosoma
Reparación del ADN (tabla 13.3). El modelo más aceptado de a través de la incorporación de una sola hebra para formar un tramo de
la recombinación homóloga es el modelo de ruptura de doble cadena ADN heterodúplex. El segundo tipo de recombinación, la recombinación
(figura 13.17). Propone que el ADN dúplex con una rotura de doble cadena se específica del sitio, es particularmente importante en la integración de los
procesa para crear ADN con una cadena sencilla. genomas del virus en los cromosomas del huésped. En sitio específico
termina RecA promueve la inserción de un extremo monocatenario recombinación, el material genético tiene sólo una pequeña región de
en una pieza intacta homóloga de ADN. Esto se llama hebra homología con el cromosoma al que se une. Las enzimas responsables de este
invasión. Como puede verse en la figura 13.17, la invasión de hebras da como resultado evento a menudo son específicas para secuencias dentro del virus en particular y
en la formación de dos lagunas en las dos moléculas de ADN originales. su huésped. El tercer tipo de recombinación es
Los huecos se llenan, dando una estructura con heterodúplex transposición, que tampoco depende de la homología de secuencia. Puede ocurrir
ADN; es decir, contiene hebras derivadas de ambos padres mol en muchos sitios del genoma y se discutirá con más detalle en la sección 13.5.
Hasta alrededor de 1945, el enfoque principal en el análisis genético era

sobre la recombinación de genes en plantas y animales. el temprano
El trabajo sobre la recombinación en eucariotas superiores condujo a la base de la
Integrado genética clásica, pero fue el desarrollo de la genética de bacterias y fagos entre
exógeno 1945 y 1965 lo que realmente
estimuló un rápido avance en nuestra comprensión de las moléculas
genética. Por lo tanto, la recombinación en bacterias y virus es
exogenote
merocigoto diploide parcial el enfoque principal de la siguiente discusión de la recombinación.
Conjugación
Transformación clon Comenzamos con una consideración de transposones y plásmidos:
Transducción elementos genéticos que pueden estar involucrados en eventos de recombinación—
y luego pasar a los mecanismos de transferencia horizontal de genes en
bacterias
diploide parcial
célula
endógeno
1. Defina los siguientes términos: recombinación, entrecruzamiento, recombinación
homóloga, recombinación específica de sitio, transposición, exógeno,
Anfitrión endógeno, transferencia génica horizontal (lateral), merocigoto y huésped

restricción restricción.
2. Distinguir entre las tres formas de recombinación mencionadas en este

sección.
3. ¿Qué cuatro destinos puede tener el ADN después de entrar en una bacteria?
Figura 13.16 Producción y destino de los merocigotos.
Ver texto para discusión.
Tabla 13.3 Proteínas de recombinación homólogas de E. coli
Proteína Descripción
Rec BCD Reconoce rupturas de doble cadena y luego genera regiones de cadena sencilla en el sitio de ruptura que son
involucrado en la invasión de hebras
Proteína de unión de cadena sencilla Previene la degradación excesiva del hilo por RecBCD
RecA Promueve la invasión de hebras y el desplazamiento de la hebra complementaria para generar el bucle D
RecG Ayuda a formar cruces Holliday y promueve la migración de sucursales
RuvABC Endonucleasa que se une a las uniones de Holliday, promueve la migración de ramas y corta hebras en Holliday.
unión para separar los cromosomas
Figura 13.17 El modelo de rotura de doble Ruptura de doble

cadena de la recombinación homóloga. cadena
A Z
5ÿ 3ÿ
3ÿ 5ÿ
3ÿ 5ÿ
5ÿ 3ÿ
a z
La degradación de la hebra a través de
RecBCD se produce en el sitio de ruptura de la
doble hebra para producir extremos monocatenarios.
A Z
a z
RecA promueve la invasión de hebras

y la formación de bucles D.
A bucle D Z
a z
La síntesis de reparación de brechas

llena la región vacante.
A Z
a z
La migración y resolución de ramas

puede producir cromosomas
recombinantes o no recombinantes.
A Z A z
Cromosomas no Cromosomas
recombinantes recombinantes
a z a Z
sitio cruzado
entre el transposón y su sitio de destino. Los transposones fueron

13.5 ELEMENTOS TRANSPONIBLES
descubiertos por primera vez en la década de 1940 por Barbara McClintock
Los cromosomas de procariotas, virus y células eucariotas contienen durante sus estudios sobre la genética del maíz (un descubrimiento por el
fragmentos de ADN que pueden moverse e integrarse en diferentes sitios que recibió el premio Nobel en 1983). Se han estudiado más intensamente
de los cromosomas. Este movimiento se llama transposición y juega un en bacterias.
papel importante en la generación de nuevas combinaciones de genes. Los elementos transponibles más simples son las secuencias de
Los segmentos de ADN que portan los genes necesarios para la inserción o elementos IS (figura 13.19a). Un elemento IS es una
transposición son elementos transponibles o transposones, a veces secuencia corta de ADN (alrededor de 750 a 1600 pares de bases [pb] de
llamados “genes saltadores”. A diferencia de otros procesos que longitud) que contiene solo los genes de las enzimas necesarias para su
reorganizan el ADN, la transposición no requiere extensas áreas de homología. transposición y está limitada en ambos extremos por secuencias idénticas o muy similares.
Elementos transponibles 333
de nucleótidos en orientación inversa conocida como repeticiones invertidas. repeticiones cortas invertidas, y la región codificante contiene tanto los genes de
Las repeticiones invertidas suelen tener entre 15 y 25 pares de bases de largo y varían transposición como los genes adicionales. Se cree que los transposones compuestos
entre los elementos IS de manera que cada tipo de IS tiene sus propias repeticiones se forman cuando dos elementos IS se asocian con un elemento central.
invertidas características. Entre las repeticiones invertidas hay un gen que segmento que contiene uno o más genes. Esta asociación podría surgir
codifica para una enzima llamada transposasa. Esta enzima es necesaria si un elemento IS se replica y mueve solo un gen o dos por el
para la transposición y reconoce con precisión los extremos del IS. Cada cromosoma. Los nombres de transposones compuestos comienzan con el prefijo
tipo de elemento se nombra dándole el prefijo IS seguido de un Tennesse. Algunas propiedades de compuestos seleccionados se dan en la tabla 13.5.
número. En E. coli , varias copias de diferentes elementos IS tienen
sido observado; algunas de sus propiedades se dan en la tabla 13.4.
Los elementos transponibles también pueden contener genes distintos a los Secuencia de inserción
necesarios para la transposición (por ejemplo, resistencia a los antibióticos o
genes de toxinas). Estos elementos a menudo se denominan transposones
cromosoma o
compuestos. Los transposones compuestos a menudo consisten en una región central
RD IR transposasa DRIR ADN plásmido
que contienen los genes adicionales, flanqueados en ambos lados por elementos IS que gene
son idénticos o muy similares en secuencia (figura 13.19b). Muchos transposones (a)
compuestos tienen una organización más simple. están delimitados por (a)
transposón compuesto
A B
Asociación de
Donante
segmentos homólogos
Anfitrión
RD IR transposasa infrarrojos Resistencia infrarrojos DR IR
a B gene antibiótica
gene
Separación de hebras (B)
y emparejamiento (B)
Muesca de endonucleasa a B
transposón replicativo
en la flecha de la hebra
donante
muescas de endonucleasa B
a
hebra huésped
RD IR transposasa resolvasa DRIR
gene gene
a B
(C)
Se llenan los huecos en la hebra
y ligado
Figura 13.19 Elementos transponibles. Todo transponible
a B
elementos contienen elementos comunes. Estos incluyen repeticiones invertidas
(IR) en los extremos del elemento y un gen de transposasa. (a) Inserción
ADN heterodúplex las secuencias consisten solo en IR a ambos lados del gen de la transposasa.
(b) Los transposones compuestos y (c) los transposones replicativos contienen
Figura 13.18 Recombinación homóloga no recíproca. genes adicionales. Secuencias de inserción y transposones compuestos
El modelo de Fox para la recombinación homóloga no recíproca. Esta mover por simple transposición (cortar y pegar). Los transposones replicativos se
Se ha propuesto un mecanismo para la recombinación que ocurre mueven por transposición replicativa. DRs, repeticiones directas en host
durante la transformación en algunas bacterias. El ADN, flanquea un elemento transponible.
Tabla 13.4 Las propiedades de las secuencias de inserción seleccionadas
Repetición invertida Sitio de destino Número de copias en

Secuencia de inserción Longitud (pb) (Longitud en pb) (Longitud en pb) Cromosoma de E. coli
IS1 768 23 9u8 6–10
IS2 1.327 41 5 4–13(1)a

IS3 1.400 38 3–4 5–6(2)
IS4 1.428 18 11 o 12 1–2
IS5 1.195 dieciséis 4 10–11
a
El valor entre paréntesis indica el número de elementos IS en el plásmido del factor F.
Tabla 13.5 Las propiedades de transposones compuestos seleccionados
transposón Longitud (pb) Longitud de repetición de terminal Módulo de terminales Marcadores genéticos
Tn3 4.957 38 resistencia a la ampicilina

Tn501 8.200 38 Resistencia al mercurio
Tn951 16.500 Desconocido utilización de lactosa
Tn5 5.700 IS50 Resistencia a la kanamicina

Tn9 2.500 IS1 Resistencia al cloranfenicol
Tn10 9.300 IS10 Resistencia a la tetraciclina
Tn903 3.100 IS903 Resistencia a la kanamicina
Tn1681 2.061 IS1 Enterotoxina termoestable
Tn2901 11.000 IS1 Biosíntesis de arginina
El proceso de transposición en procariotas puede ocurrir por dos genes de resistencia. Así, a medida que pasan de un plásmido a otro,
mecanismos básicos. La transposición simple, también llamada transposición de genes de resistencia se introducen en el plásmido objetivo, creando un
cortar y pegar, implica la escisión catalizada por transposasa de plásmido de resistencia (R). Múltiples plásmidos de resistencia a fármacos pueden
el transposón, seguido de la escisión de un nuevo sitio objetivo y la ligadura del surgen de la acumulación de transposones en un plásmido (figura
transposón en este sitio (figura 13.20). Los sitios objetivo son 13.22). Muchos plásmidos R pueden moverse de una célula a otra durante la
secuencias específicas de aproximadamente cinco a nueve pares de bases de largo. Cuando una conjugación, lo que propaga los genes de resistencia.
el transposón se inserta en un sitio objetivo, la secuencia objetivo se duplica de modo en toda una población. Finalmente, debido a que los transposones también se mueven
que las repeticiones cortas de secuencia directa flanquean el transposón. entre plásmidos y cromosomas, los genes de resistencia a los medicamentos pueden
repeticiones terminales invertidas. intercambio entre estas dos moléculas, lo que resulta en una mayor
El segundo mecanismo de transposición es la posición trans replicativa. En propagación de la resistencia a los antibióticos.
este mecanismo, el transposón original permanece en Algunos transposones portan genes de transferencia y pueden moverse entre
el sitio parental en el cromosoma y se inserta una réplica bacterias a través del proceso de conjugación, como se discutió en la sección 13.7.
en el sitio de ADN diana (figura 13.21). La transposición del Un ejemplo bien estudiado de un transposón conjugativo
El transposón Tn3 es un ejemplo bien estudiado de posición trans replicativa. En la es Tn916 de Enterococcus faecalis. Aunque Tn916 no puede
primera etapa, el ADN que contiene Tn3 se fusiona con el replicarse autónomamente, puede transferirse de E. faecalis a un
ADN diana para formar una molécula cointegrada (figura 13.21, paso variedad de receptores e integrarse en sus cromosomas. Debido a que porta un gen
1). Este proceso requiere la enzima transposasa Tn3 codificada para de resistencia a la tetraciclina, este conjugativo
por el gen tnpA (figura 13.22). Tenga en cuenta que la cointegrada tiene el transposón también propaga la resistencia a los medicamentos.
dos copias del transposón Tn3. En la segunda etapa, el integrado de la moneda se

resuelve para producir dos moléculas de ADN, cada una con una
13.6 PLÁSMIDOS BACTERIANOS
copia del transposón (figura 13.21, paso 3). La resolución implica un cruce y es
catalizada por una enzima resolvasa Conjugación, la transferencia de ADN entre bacterias que involucra
codificado por el gen tnpR (figura 13.22). contacto, depende de la presencia de una pieza "extra" de ADN conocida
Los elementos transponibles producen una variedad de efectos importantes. como un plásmido. Los plásmidos juegan muchos papeles importantes en la vida de
Pueden insertarse dentro de un gen para causar una mutación o estimular los procariotas. También han resultado invaluables para los microbiólogos y
Reordenamiento del ADN, que conduce a deleciones del material genético. Debido a genetistas moleculares en la construcción y transferencia de nuevos
que algunos transposones llevan codones de parada o secuencias de terminación, combinaciones y en la clonación de genes como se describe en el capítulo 14.
cuando se transponen a los genes pueden bloquear la traducción. Recuerde del capítulo 3 que los plásmidos son pequeñas moléculas de ADN
o transcripción, respectivamente. Asimismo, otros transposones llevan de doble cadena que pueden existir independientemente del huésped .
promotores y pueden activar genes cerca del punto de inserción. Por lo tanto cromosomas Tienen sus propios orígenes de replicación y se replican de forma
los transposones pueden activar o desactivar los genes. Los transposones también se encuentran autónoma y se heredan de forma estable. Algunos plásmidos
en plásmidos y participar en procesos como la fusión de plásmidos, son episomas, plásmidos que pueden existir integrados o no en los cromosomas del
inserción de plásmidos en cromosomas y evolución de plásmidos. huésped. Aunque hay una variedad de tipos de plásmidos, nuestra preocupación
El papel de los transposones en la evolución de plásmidos es de particular aquí es con conjugative
Nota. Los plásmidos pueden contener varios transposones-objetivo diferentes plásmidos. Estos plásmidos pueden transferir copias de sí mismos a
sitios Por lo tanto, los transposones se mueven frecuentemente entre plásmidos. otras bacterias durante el proceso de conjugación, que se analiza en la sección 13.7.
Es preocupante el hecho de que muchos transposones contienen antibióticos
plásmidos bacterianos 335
TE: de unos pocos cientos a varios

mil pares de bases de longitud
5ÿ 3ÿ
elemento transponible
+
3ÿ 5ÿ
Secuencia objetivo
infrarrojos infrarrojos
Transposase reconoce las repeticiones

invertidas y escinde en ambos
extremos del elemento transponible, liberándolo de Objetivo
ADN
su sitio original.
5ÿ 3ÿ
1 Transposase hace cortes en las flechas y el
Las hebras se intercambian y se ligan entre sí, formando
un cointegrado.
3ÿ 5ÿ
transposasa
TE
La transposasa lleva el TE a un nuevo sitio

y escinde el ADN objetivo en sitios
escalonados.
5ÿ 3ÿ 2 Los huecos se rellenan con ADN polimerasa y se sellan
por la ADN ligasa.
CT T Objetivo
A GRAMO
AG A ADN
T C
3ÿ 5ÿ
El elemento transponible se inserta

en el sitio de destino.
5ÿ 3ÿ
CT T
A GRAMO
AG A
T C
3ÿ 5ÿ
3 Resolvase cataliza la recombinación entre los dos elementos.

Esto los resuelve en dos estructuras separadas, cada una con

una copia del elemento transponible.
transponible
elemento
brecha de ADN
síntesis de reparación
5ÿ 3ÿ
CT T CT T
A GRAMO A GRAMO
AG A AG A
T C T C
3ÿ 5ÿ
+
transponible
elemento
Directo
repite
Figura 13.20 Transposición simple. TE, transponible

Figura 13.21 Transposición replicativa.
elemento; IR, repetición invertida.
Figura 13.22 El transposón compuesto RTF
Tn3 dentro de un plásmido R. Tn3 es un

transposón replicativo que contiene el gen de
la -lactamasa (bla), una enzima que confiere
resistencia al antibiótico ampicilina (Amp). Las
flechas debajo de los genes Tn3 indican la
dirección de la transcripción. Tn3 se puede
encontrar en el plásmido de resistencia R1,
donde se inserta en otro elemento transponible,
Tn4. Tn4 porta genes que proporcionan
resistencia a la estreptomicina (Sm) y la
sulfonamida (Su). El plásmido también porta IS1
genes de resistencia a la kanamicina (Km) y al IS1

Cm
cloranfenicol (Cm). La región RTF de R1 codifica
kilómetros
las proteínas necesarias para la replicación y sm, su

transferencia de plásmidos. Amperio
Tn4
Tn3
Repetición invertida Repetición invertida
de 38 pares de bases de 38 pares de bases
Repetición que Repetición que
flanquea el sitio tnpA tnpR bla flanquea el sitio
de destino de destino
transposasa resolvasa ÿ-lactamasa

(MW 120 K) (MW 21 K) (MW 20 K)
Quizás el plásmido conjugativo mejor estudiado es el factor F. Desempeña un papel

1. Defina lo siguiente: episoma, plásmido conjugativo, transposición, trans
importante en la conjugación en E. coli y fue el primer plásmido conjugativo que se describió
posasa y transposón conjugativo.
(figura 13.23). El factor F tiene una longitud de unas 100 kilobases y contiene genes responsables
2. Comparar y contrastar plásmidos y elementos transponibles. Comparar y contrastar
de la unión celular y la transferencia de plásmidos entre cepas bacterianas específicas durante la
secuencias de inserción, transposones compuestos y transposones replicativos.
conjugación. La mayor parte de la información necesaria para la transferencia de plásmidos se
encuentra en el operón tra , que contiene al menos 28 genes. Muchos de estos dirigen la
3. ¿Cómo se podría demostrar la presencia de un plásmido en una célula huésped?
formación de pili sexuales que unen la célula F (la célula donante que contiene un plásmido F) a
4. ¿Qué es la transposición simple (cortar y pegar)? ¿Qué es la transposición replicativa?
una célula F (figura 13.24). Otros productos génicos ayudan a la transferencia de ADN. Además,
¿Cómo difieren los dos mecanismos de transposición? ¿Qué sucede con el sitio de
el factor F tiene varios segmentos denominados secuencias de inserción que ayudan a la
destino durante la transposición?
integración del plásmido en el cromosoma de la célula huésped.
5. ¿Qué efecto esperaría que tuviera la existencia de elementos transponibles y
plásmidos en la tasa de evolución microbiana? Da tu razonamiento.
Así, el factor F es un episoma que puede existir fuera del cromosoma bacteriano o puede estar
6. ¿Cómo surgen a menudo los plásmidos resistentes a múltiples fármacos?
integrado en él (figura 13.25).
Conjugación bacteriana 337
factor F
oT
Región del factor F con genes

necesarios para la conjugación
trbGtraV trbD
oriT traMtraJtraYtraAtraLtraEtraK traB traP trbC TRA TRATO TRAD trbH traI TraX
traR traC trawtrau tra n trbe traf trba traq trbb trbj trbf trah tragtrbi
Codifica la Codifican proteínas que Codifica la Codifica la

proteína son componentes del proteína de relaxasa
pilina sistema de secreción tipo acoplamiento
IV
Figura 13.23 El plásmido F. Se muestran los genes que juegan un papel en la conjugación y se indican algunas de sus funciones. El plásmido también
contiene tres secuencias de inserción y un transposón. El sitio para el inicio de la replicación en círculo rodante y la transferencia de genes durante la
conjugación es oriT.
varias horas en medio nutritivo y luego se sembró en medio mínimo. Para

reducir la posibilidad de que sus resultados se debieran a una reversión
simple, utilizaron auxótrofos dobles y triples asumiendo que dos o tres
reversiones simultáneas serían extremadamente raras. Por ejemplo, una
cepa requería biotina (Bio), fenilalanina (Phe) y cisteína (Cys) para crecer,
y otra treonina (Thr), leucina (Leu) y tiamina (Thi). Colonias prototróficas
recombinantes aparecieron en el medio mínimo después de la incubación
(figura 13.26). Así, los cromosomas de los dos auxótrofos pudieron
asociarse y experimentar una recombinación.
Lederberg y Tatum no probaron directamente que el contacto físico

de las células fuera necesario para la transferencia de genes. Esta
evidencia fue proporcionada por Bernard Davis (1950), quien construyó un
tubo en U que consiste en dos piezas de tubo de vidrio curvo fusionadas
Figura 13.24 Conjugación bacteriana. Un micrográfico electrónico en la base para formar una forma de U con un filtro de vidrio fritado entre las mitade
de dos células de E. coli en una etapa temprana de conjugación. La El filtro permitió el paso de medios pero no de bacterias. El tubo en U se
celda F+ a la derecha está cubierta con pequeños pili o fimbrias, y un llenó con medio nutritivo y cada lado se inoculó con una cepa auxotrófica
pilus sexual conecta las dos celdas. diferente de E. coli (figura 13.27). Durante la incubación, el medio se
bombeó de un lado a otro a través del filtro para asegurar el intercambio
de medio entre las mitades. Después de una incubación de 4 horas, las
bacterias se sembraron en medio mínimo.
Davis descubrió que cuando las dos cepas auxotróficas se separaban
13.7 CONJUGACIÓN BACTERIANA
mediante el filtro fino, la transferencia de genes no podía tener lugar. Por
La evidencia inicial de la conjugación bacteriana, la transferencia de ADN lo tanto, se requería contacto directo para la recombinación que habían
por contacto directo de célula a célula, provino de un elegante experimento observado Lederberg y Tatum. La conjugación mediada por el factor F es
realizado por Joshua Lederberg y Edward Tatum en 1946. uno de los sistemas de conjugación mejor estudiados. Es el foco de esta
Mezclaron dos cepas auxotróficas, incubaron el cultivo durante sección.
factor F
1 2
ES
A B
cromosoma bacteriano
ES
1 2
A B
A ES 2 O 1 ES B
Factor F integrado
Figura 13.25 Integración del plásmido F. La integración reversible de un plásmido o factor F en un cromosoma bacteriano huésped. los
El proceso comienza con la asociación entre las secuencias de inserción del plásmido y la bacteria. La punta de flecha O (blanca) indica el sitio en el que
Comienza la transferencia orientada del cromosoma a la célula receptora. A, B, 1 y 2 representan marcadores genéticos.
F Apareamiento F corta una hebra del factor F en un sitio llamado oriT (por el origen del
En 1952 , William Hayes demostró que la transferencia de genes observada por transferir). Relaxasa, una enzima asociada con el relaxosoma,
Lederberg y Tatum era polar. Es decir, había cepas donantes definidas (F, o permanece unido al extremo 5' de la hebra mellada. Como factor F es
fértiles) y receptoras (F, o no fértiles), replicada, la hebra desplazada y la enzima relaxasa unida
y la transferencia de genes no fue recíproca. También descubrió que en el moverse a través del sistema de secreción tipo IV hacia la célula receptora.
apareamiento FF, la progenie rara vez cambiaba con respecto a Debido a que el pilus está incrustado en el aparato de secreción, tiene
auxotrofia (es decir, los genes cromosómicos no se transfirieron con frecuencia), Se ha sugerido que el ADN se mueve a través de un lumen en el pilus.
pero las cepas F con frecuencia se convirtieron en F . Sin embargo, los estudios de un sistema de conjugación relacionado, el de la planta
Estos resultados se explican fácilmente en términos del factor F patógeno Agrobacterium tumefaciens, proporcionan pruebas sólidas
descrito anteriormente (figura 13.23). La cepa F contiene un factor F que el ADN no se mueve a través del pilus sexual. De todos modos, eso
extracromosómico que lleva los genes para la formación de pilus sexuales y la cabe señalar que aunque el sistema del factor F y el
transferencia de plásmidos. El sexo pilus se utiliza para establecer Los sistemas Agrobacterium están relacionados, hay una diferencia importante
contacto entre las células F y F (figura 13.28a). Una vez que se establece el entre los dos. El sistema del factor F se utiliza para transferir
contacto, el pilus se retrae, poniendo las células en estrecho contacto físico. La ADN de una bacteria a otra, mientras que Agrobacterium
célula F luego se prepara para la transferencia de ADN por El sistema mueve el ADN de la bacteria a su huésped vegetal. Cualquiera que sea
ensamblar un aparato de secreción de tipo IV, utilizando muchos de los mismos la ruta de transferencia, a medida que se transfiere el plásmido, la hebra entrante
genes utilizados para la biogénesis del pilus sexual; el sexo pilus está incrustado en se copia para producir ADN de doble hebra. los
la estructura de secreción (figura 13.29). El factor F luego se replica La frecuencia de recombinación es baja porque los genes cromosómicos son
por un mecanismo de círculo rodante (ver figura 11.12). La replicación es rara vez se transfiere con el factor F independiente. Asociaciones de
iniciada por un complejo de proteínas llamado relaxosoma, que microorganismos con plantas vasculares: Agrobacterium (sección 29.5)
no se conocía la conjugación, eventualmente se determinó que Hfr

Bio- Phe- Cys- Thr+ Leu+ Thi+ Bio+ Phe+ Cys+ Thr- Leu- Thi
cepas contienen el factor F integrado en su cromosoma,
en lugar de libre en el citoplasma (figura 13.28b). Cuando se integra, el operón tra
del plásmido F sigue siendo funcional; el plásmido
puede dirigir la síntesis de pili, llevar a cabo la replicación en círculo rodante,
Mezcla
y transferir material genético a una célula receptora F. Sin embargo,
en lugar de transferirse a sí mismo, el factor F dirige la transferencia de
cromosoma huésped. La transferencia de ADN comienza cuando el factor F
integrado se corta en su sitio de origen de la transferencia. A medida que se replica, el
el cromosoma se mueve hacia el receptor (figura 13.28c). porque solo
parte del factor F se transfiere, el receptor F no se convierte en
F a menos que se transfiera todo el cromosoma. Transferencia de la
cromosoma completo con el factor F integrado requiere alrededor de 100
minutos en E. coli, y la conexión entre las células generalmente
se rompe antes de que finalice este proceso. Por lo tanto, un factor F completo
por lo general no se transfiere, y el destinatario sigue siendo F.
Como se mencionó anteriormente, cuando una cepa Hfr participa en la
conjugación, los genes bacterianos se transfieren con frecuencia al receptor.
La transferencia de genes puede realizarse en sentido horario o antihorario
alrededor del cromosoma circular, según la orientación del factor F integrado.

Medio mínimo sin suplementos Después del donante replicado
Bio+ Phe+ Cys+ Thr+ Leu+ Thi+ cromosoma entra en la célula receptora, puede degradarse o incorporarse al
Colonias prototróficas genoma F por recombinación.
Figura 13.26 Evidencia de conjugación bacteriana. Conjugación Fÿ

La demostración de Lederberg y Tatum de la recombinación genética
Debido a que el plásmido F es un episoma, puede dejar la bacteria
utilizando auxótrofos triples. Ver texto para más detalles. cromosoma y reanudar el estado como un factor F autónomo. Algunas veces
durante este proceso el plásmido comete un error en la escisión

y recoge una porción del cromosoma. Debido a que ahora es geno típicamente
Presión o succión distinto del factor F original, se le llama plásmido Fÿ (figura 13.30a) . No es raro
observar la inclusión de
uno o más genes cromosómicos en plásmidos F extirpados. Una célula que contiene
un plásmido F' retiene todos sus genes, aunque algunos de ellos
ellos están en el plásmido. Solo se empareja con un destinatario F. La conjugación
Fÿ F es similar al apareamiento FF. Una vez más, el plásmido se transfiere a medida
que se copia mediante la replicación en círculo rodante. Sin embargo, los genes
Reunió- Thr+ Leu+Ti+ Reunió + Thr– Leu–Thi – bacterianos en el cromosoma por lo general no son
transferido (figura 13.30b). Los genes bacterianos adquiridos durante la escisión del
plásmido F' se transfieren con él y no necesitan incorporarse al cromosoma receptor
para expresarse. los
Filtro de vidrio fritado
receptor se convierte en F' y es un merocigoto parcialmente diploide porque
también se encuentran los mismos genes bacterianos presentes en el plásmido Fÿ
Figura 13.27 El experimento del tubo en U. El experimento del tubo en U
en el cromosoma del receptor. De esta manera genes bacterianos específicos
utilizado para mostrar que la recombinación genética por conjugación
puede propagarse rápidamente a través de una población bacteriana.
Requiere contacto físico directo entre bacterias. Ver texto para más detalles.
La conjugación F' es muy importante para el genetista microbiano. A
El comportamiento del diploide parcial muestra si el alelo portado por un
El plásmido F' es dominante o recesivo al gen cromosómico.
Conjugación Hfr
La formación de plásmidos F' también es útil para mapear el cromosoma porque si
No mucho después del descubrimiento del apareamiento FF, un segundo tipo
dos genes son captados por un factor F,
Se descubrió la conjugación mediada por el factor F. en este tipo de
deben ser vecinos.
conjugación, el donante transfiere genes cromosómicos con gran
eficiencia, pero no convierte las bacterias receptoras en células F. Debido a la alta
frecuencia de recombinantes producidos Otros ejemplos de conjugación bacteriana
por este apareamiento, se denomina conjugación Hfr y el donante Aunque la mayor parte de la investigación sobre plásmidos y conjugación se ha realizado
se llama cepa Hfr. Aunque inicialmente el mecanismo de Hfr utilizando E. coli y otras bacterias gramnegativas, autotransmisibles
factor F cromosoma bacteriano
Acoplamiento
factor Origen de
Célula F+ transferir
Tipo IV
secreción
sistema
Recipiente
sexo pilus hace contacto
celda (F–)
con célula receptora F.
Relaxosoma hace un
corte en el origen de la transferencia
Relaxosoma y comienza a separar una hebra de
ADN. el intacto
hebra es replicada por el
destinatario F mecanismo de círculo rodante.
Contratos sexuales pilus

uniendo las células.
Proteínas accesorias de la
se liberan relaxosomas.
El complejo ADN/relasasa es
reconocido por el factor de acoplamiento
y transferido al sistema de secreción.
Relaxasa
Acoplamiento
factor
Secreción
sistema
El sistema de secreción
Sistema de secreción tipo IV bombea el complejo ADN/relaxasa
se construye y se une hacia la célula receptora.
dos celdas
(a) conjugación FF
(a) Conjugación F+ x F-
A medida que el ADN entra, el

F+ célula celula hfr El ADN del factor F se replica
convertirse en doble cadena.
Bacteriano Célula F+
cromosoma
pro+
lac+ Integración de pro+
factor F en el
cromosoma lac+
Célula F+
Origen de Origen de
transferir transferir
factor F
(b) Inserción del factor F en el cromosoma

Nueva hebra sintetizada por

replicación en círculo rodante
celula hfr Célula F
Sex pilus hace contacto con

la célula F– y se contrae para
juntar Hfr y la célula F– . El
sistema de secreción tipo IV
conecta las células. Pro- Pro-
pro+ pro+
Transferencia del
laca- laca-
lac+ cromosoma Hfr lac+
lac+
pro+
Origen de
transferir Conjugación para
(hacia lac+) tiempos más largos
celula hfr F– destinatario celula hfr F– destinatario

Conjugación de
poco tiempo
Pro- Pro-
pro+ pro+
laca- laca-
lac+ lac+
pro+
lac+ lac+
Recombinación Recombinación
entre exógeno y entre exógeno y
endógeno endógeno
pro+ Pro- pro+ pro+
lac+ lac+ lac+ lac+
(c) conjugación Hfr F
Figura 13.28 Conjugación mediada por el factor F. El factor F codifica proteínas para construir el pilus sexual y las proteínas necesarias para construir
el sistema de secreción tipo IV que transferirá el ADN del donante al receptor F. Se cree que una proteína, el factor de acoplamiento, guía el ADN hacia
el sistema de secreción. (a) Durante la conjugación de FF, solo se transfiere el factor Fen
convierte porque
F . (b)elLa
plásmido es extracromosómico.
integración La celda receptora
del factor F en el cromosoma crea unasecélula
Hfr. (c) Durante la conjugación Hfr F, algunos genes plasmídicos y algunos
parte del factor F segenes
muevecromosómicos se transfieren
hacia el receptor. al receptor.
Debido a que Tenga en
no se transfiere elcuenta quecompleto,
plásmido solo una el
receptor sigue siendo F. Además, el ADN entrante debe recombinarse en el cromosoma del receptor para que se mantenga estable.
hfr F
Propina
TraA
A
(pilín)
Pilo sexual
A Desintegración
incluyendo parte de
LPS cromosoma
OM bacteriano
L PG PAGS
desacoplamiento
(a)
TraQ, X
C PM
Células conectadas por tipo IV
sistema de secreción
ATP ADP+P F F
ATP ADP+P
Figura 13.29 El sistema de secreción tipo IV codificado por el factor F. El sistema de

secreción de tipo IV codificado por el factor F es
compuesto por numerosas proteínas Tra, incluidas las proteínas TraA, a

que forman el sex pilus, y TraD, que es el factor de acoplamiento.
Algunas proteínas Tra se encuentran en la membrana plasmática (PM),
otros se extienden hacia el periplasma (P) y pasan a través de la capa de
pepti doglycan (PG) hacia la membrana externa (OM) y su
El plásmido F comienza
capa de lipopolisacárido (LPS). la replicación y la transferencia
A
Los plásmidos están presentes en géneros de bacterias grampositivas como
Bacillus, Streptococcus, Enterococcus, Staphylococcus y Streptomyces. Se sabe mucho menos
acerca de estos sistemas. Parece que
menos genes de transferencia están involucrados, posiblemente porque un pilus sexual puede a
no ser necesario para la transferencia de plásmidos. Por ejemplo, Enterococcus
Las células receptoras de faecalis liberan señales químicas peptídicas cortas que
activar los genes de transferencia en las células del donante que contienen el plásmido adecuado.
Las células del donante y del receptor se adhieren directamente entre sí a través de
Plásmido F replicado y
proteínas especiales codificadas por plásmidos liberadas por el donante activado transferido
célula. Entonces se produce la transferencia de plásmidos. F F
A A
1. ¿Qué es la conjugación bacteriana y cómo se descubrió?
2. Distinguir entre las cepas F , Hfr y F de E. coli con respecto a su
naturaleza física y papel en la conjugación.

3. Describa con cierto detalle cómo F Proceden los procesos de conjugación F y a
Hfr, y se distinguen entre los dos en términos de mecanismo y el final.
resultados
4. ¿Qué es la conjugación Fÿ y por qué es tan útil para el genetista microbiano?
¿En qué se diferencia el plásmido Fÿ de un plásmido F normal?

(B)
Figura 13.30 Conjugación F'. (a) Debido a un error en la escisión,

el gen A de una célula Hfr es captado por el factor F. (b) El gen A es
13.8 TRANSFORMACIÓN DEL ADN
luego se transfiere a un receptor durante la conjugación. Consulte el texto para obtener una
La segunda forma en que el ADN puede moverse entre las bacterias es a través de explicación.
transformación, descubierta por Fred Griffith en 1928. La transformación es la absorción por
una célula de una molécula o fragmento de ADN desnudo del medio y la incorporación de esta transformación el ADN proviene de una bacteria donante. los
molécula El proceso es aleatorio y cualquier porción de un genoma puede transferirse entre bacterias. El
en el cromosoma receptor en una forma hereditaria. en natural ADN como material genético (sección 11.1)
Transformación de ADN 343
Cuando las bacterias se lisan, liberan cantidades considerables de

ADN en el entorno circundante. Estos fragmentos pueden ser
relativamente grandes y contienen varios genes. Si un fragmento entra en contacto con un fragmentos de ADN
célula competente, una célula que es capaz de tomar ADN y transformarse, el
ADN puede unirse a la célula y llevarse al interior (figura
13.31a). La frecuencia de transformación de células muy competentes es
alrededor de 103 para la mayoría de los géneros cuando se usa un exceso de ADN. Que
Bacteriano
es, aproximadamente una célula de cada mil tomará e integrará el cromosoma
gene. La competencia es un fenómeno complejo y depende de
varias condiciones. Las bacterias necesitan estar en cierta etapa de crecimiento;
por ejemplo, Streptococcus pneumoniae se vuelve competente durante la fase
exponencial cuando la población alcanza alrededor de 107 Captación
a 108 células por ml. Cuando una población se vuelve competente, las bacterias de ADN
como S. pneumoniae secretan una pequeña proteína llamada factor de competencia

que estimula la producción de 8 a 10 nuevos
proteínas necesarias para la transformación. La transformación natural ha
descubierto hasta ahora sólo en ciertos géneros, incluidos Strepto coccus, Bacillus,
Thermoactinomyces, Haemophilus, Neisseria,
Moraxella, Acinetobacter, Azotobacter, Helicobacter y
O
Pseudomonas. La transferencia de genes por este proceso ocurre en el suelo y Integración por
no recíproco
ecosistemas acuáticos y puede ser una vía importante de intercambio genético en recombinación Degradación
biopelículas y otras comunidades microbianas.
El mecanismo de transformación ha sido intensamente estudiado en S.
pneumoniae (figura 13.32). Una célula competente se une a un
fragmento de ADN de doble cadena si el fragmento es moderadamente
grande; el proceso es aleatorio y los fragmentos donantes compiten con
Transformación estable Transformación fallida
El uno al otro. Luego, el ADN se escinde mediante endonucleasas en fragmentos
de doble cadena de aproximadamente 5 a 15 kilobases de tamaño. captación de ADN (a) Transformación con fragmentos de ADN
requiere gasto energético. Una hebra es hidrolizada por un
exonucleasa asociada a la envoltura durante la captación; la otra hebra
se asocia con pequeñas proteínas y se mueve a través del plasma
plásmido de ADN
membrana. El fragmento monocatenario puede entonces alinearse con un
región homóloga del genoma y ser integrada, probablemente por
un mecanismo similar al representado en la figura 13.18. Bacteriano
cromosoma
Transformación en Haemophilus influenzae, un gramnegativo
bacteria, difiere de la de S. pneumoniae en varios aspectos. h
influenzae no produce un factor de competencia para estimular el desarrollo de la
competencia, y toma ADN sólo de cerca
especies relacionadas (S. pneumoniae es menos particular acerca de la fuente de
Captación
su ADN). Se toma ADN de doble cadena, complejado con proteínas. de plásmido
por vesículas de membrana. La especificidad de la transformación de H. influenzae
se debe a una secuencia especial de 11 pares de bases (5'AAGTGCG GTCA3')
que se repite más de 1400 veces en el ADN de H. influenzae .
El ADN debe tener esta secuencia para ser unido por una célula competente.
Los complejos proteicos que captan el ADN libre deben ser capaces de
moverlo a través de paredes gramnegativas y grampositivas, que Transformación estable
puede ser a la vez gruesa y compleja. Como era de esperar, la maquinaria está
bastante grande y complicado y parece estar relacionado con los sistemas de (b) Transformación con un plásmido
secreción de proteínas. La figura 13.33a muestra un diagrama esquemático del

Figura 13.31 Transformación bacteriana. Transformación
complejo utilizado por la bacteria gramnegativa Neisseria gonor rhoeae. PilQ ayuda
con (a) fragmentos de ADN y (b) plásmidos. Transformación con un
en el movimiento a través de la membrana exterior,
plásmido a menudo se induce artificialmente en el laboratorio. El ADN trans
y el complejo de pilina PilE mueve el ADN a través del
formador está en púrpura y la integración está en un homólogo
periplasma y peptidoglicano. ComE es una proteína de unión al ADN; norte
región del genoma.
es la nucleasa que degrada una hebra antes de que entre el ADN
el citoplasma a través del canal transmembrana formado por
Receptor lac+
laca_
El fragmento de
ADN se une a un
receptor de superficie celular. pilq pilq
Membrana externa
Una endonucleasa
Pila
extracelular corta
Venir
el ADN en
lac+ peptidoglicano
fragmentos más pequeños.
norte
Membrana
laca_ ComA ComA de plasma
(a)
Una hebra se
degrada y una sola
hebra se transporta ComGC
al interior de la
Sistema célula.
de captación
lac+ Ven a
laca_ peptidoglicano
norte
La hebra de ADN
Membrana
se alinea con una
ComEC ComEC de plasma
región homóloga en el
cromosoma bacteriano.
ComFA
lac+
laca_ (B)
La hebra de ADN
se incorpora al Figura 13.33 Sistemas de captación de ADN. ( a ) Maquinaria de
cromosoma
captación de ADN en N. gonorrhoeae. (b) Maquinaria de captación en B.subtilis.
bacteriano
Ver texto para más detalles.
mediante
recombinación homóloga.
plasma. Aún no se ha identificado un equivalente gramnegativo de ComFA en N.
heterodúplex
gonorrhoeae.
Los genetistas microbianos explotan la transformación para mover el ADN
(generalmente ADN recombinante) a las células. Sin embargo, como ya se ha señalado,
El heterodúplex
El ADN se repara de muchas especies, incluida E. coli, no son competentes para la transformación de forma
una manera que natural. Afortunadamente, estas bacterias pueden volverse artificialmente competentes
cambia la hebra lac_
mediante ciertos tratamientos. Dos técnicas comunes son las descargas eléctricas y la
para crear
un gen lac+ . exposición al cloruro de calcio. Ambos enfoques hacen que la membrana celular sea más
lac+
Célula permeable al ADN y ambos se han utilizado para producir células de E. coli artificialmente
transformada competentes.
Para aumentar la frecuencia de transformación con E. coli, se utilizan cepas que carecen
de una o más nucleasas. Estas cepas son especialmente importantes a la hora de
transformar las células con ADN lineal, que es vulnerable al ataque de las nucleasas. Es
Figura 13.32 Transformación bacteriana vista en S. pneumoniae. más fácil transformar bacterias con ADN plasmídico ya que los plásmidos no se degradan
tan fácilmente como los fragmentos lineales y pueden replicarse dentro del huésped
(figura 13.31b).
Coma. La maquinaria de la bacteria grampositiva Bacillus sub tilis se representa en la

1. Definir transformación y competencia.
figura 13.33b. Se localiza en los polos de la célula y, como puede verse, muchos de los
2. Describa cómo ocurre la transformación en S. pneumoniae. ¿Cómo difiere el
componentes son similares a los de N. gonorrhoeae: el complejo de pilina (ComGC), la
proceso en H. influenzae?
proteína de unión al ADN (ComEA), la nucleasa (N) y proteína de canal (ComEC).
3. Discuta dos formas en que la transformación artificial se puede usar para colocar
genes funcionales dentro de las células bacterianas.
ComFA es una translocasa de ADN que mueve el ADN al cito
Transducción 345
diación Cuando esto ocurre, el profago se escinde del genoma bacteriano y

13.9 TRANSDUCCIÓN
continúa el ciclo lítico.
El tercer modo de transferencia de genes bacterianos es la transducción. Es un La transducción es la transferencia de genes bacterianos por virus.
modo frecuente de transferencia horizontal de genes en la naturaleza y está Los genes bacterianos se incorporan a la cápside de un fago debido a errores
mediado por virus. La morfología y el ciclo de vida de los virus bacterianos o cometidos durante el ciclo de vida del virus. El virus que contiene estos genes
bacteriófagos no se discuten en detalle hasta el capítulo 17. Sin embargo, es luego los inyecta en otra bacteria, completando la transferencia. Hay dos tipos
necesario describir brevemente el ciclo de vida aquí como base para considerar diferentes de transducción: generalizada y especializada.
su papel en la transferencia de genes.
Los virus son estructuralmente simples, a menudo compuestos de solo un
genoma de ácido nucleico protegido por una cubierta de proteína llamada cápside.
Son incapaces de replicarse de forma autónoma. En cambio, infectan y toman el Transducción Generalizada
control de una célula huésped, lo que obliga al huésped a hacer muchas copias La transducción generalizada ocurre durante el ciclo lítico de los fagos
del virus. Los virus que infectan bacterias se denominan bacte riophages, o fagos virulentos y algunos templados y puede transferir cualquier parte del genoma
para abreviar. Algunos fagos son replicados por su huésped bacteriano bacteriano (figura 13.35). Durante la etapa de ensamblaje, cuando los
inmediatamente después de la entrada. Una vez que el número de fagos cromosomas virales se empaquetan en cápsides de proteínas, también se pueden
replicados alcanza un cierto número, provocan la lisis del huésped, de modo que empaquetar por error fragmentos aleatorios del cromo bacteriano parcialmente
pueden liberarse e infectar nuevas células huésped (figura 13.34). degradado. Debido a que la cápside puede contener solo una cantidad limitada
Estos fagos se denominan bacteriófagos virulentos y el proceso se denomina de ADN, el ADN viral se queda atrás. La cantidad de ADN bacteriano transportado
ciclo lítico. Otros bacteriófagos no matan inmediatamente a su huésped. Muchos depende principalmente del tamaño de la cápside. El fago P22 de Salmonella
de estos virus ingresan a la bacteria huésped y, en lugar de replicarse, insertan enterica serovar Typhimurium por lo general lleva alrededor del 1% del genoma
sus genomas en el cromosoma bacteriano. Una vez insertado, el genoma viral se bacteriano; el fago P1 de E. coli y una variedad de bacterias gramnegativas
denomina profago. transporta alrededor del 2,0 al 2,5% del genoma. La partícula de virus resultante
Esto no daña a la bacteria huésped y el genoma del fago se replica pasivamente a menudo inyecta el ADN en otra célula bacteriana pero no puede iniciar un ciclo
a medida que se replica el genoma de la célula huésped. Estos bacteriófagos se lítico. Este fago se conoce como partícula transductora generalizada o fago y
denominan bacteriófagos templados y la relación entre estos virus y su huésped es simplemente un portador de información genética de la bacteria original a otra
se denomina lisogenia (figura 13.34). Las bacterias que han sido lisogenizadas célula. Al igual que en la transformación, una vez que se ha inyectado el ADN,
se llaman lisógenos. Los fagos templados pueden permanecer inactivos en sus debe incorporarse al cromosoma de la célula receptora para preservar los genes
huéspedes durante muchas generaciones. Sin embargo, pueden ser inducidos a transferidos. El ADN permanece bicatenario durante
cambiar a un ciclo lítico de crecimiento bajo ciertas condiciones, incluyendo UV
irra
ADN del fago cromosoma

bacteriano
El fago inyecta La exposición

Los nuevos fagos su ADN en el al estrés, como la
pueden unirse a las citoplasma. luz ultravioleta,
células bacterianas. desencadena la escisión
del cromosoma huésped.
ciclo lítico Ciclo lisogénico
El ADN del
La célula se fago se integra
lisa y libera los en el cromosoma
nuevos fagos. del huésped.
El ADN del El ADN del profago
fago dirige la se copia cuando la
síntesis de célula se divide.
muchos fagos
nuevos. Profago
Figura 13.34 Ciclos lítico y lisogénico de fagos templados. Los fagos virulentos solo pasan por el ciclo lítico. Los fagos templados tienen dos fases en sus ciclos de
vida. El ciclo lisogénico permite que el genoma del virus se replique de forma pasiva a medida que se replica el genoma de la célula huésped. Ciertos factores ambientales,
como la luz ultravioleta, pueden provocar un cambio del ciclo lisogénico al ciclo lítico. En el ciclo lítico, se producen y liberan nuevas partículas de virus cuando la célula
huésped se lisa. Los fagos virulentos se limitan solo al ciclo lítico.
ADN del fago y de hecho lo era, pero su conclusión inicial de que la transferencia resultaba
de la conjugación no fue confirmada. Cuando estos investigadores realizaron
su+ lys+ El fago infecta el experimento del tubo en U (figura 13.27) con Salmonella, aun así
célula bacteriana.
recuperaron protótrofos. El filtro en el tubo en U tenía poros que eran lo
suficientemente pequeños para bloquear el movimiento de bacterias entre los
dos lados pero permitían el paso del fago P22.
El ADN del huésped se
hidroliza en pedazos y se Lederberg y Zinder tenían la intención de confirmar que la conjugación estaba
fabrican proteínas y ADN del presente en otra especie bacteriana, pero en cambio descubrieron un
fago.
mecanismo completamente nuevo de transferencia de genes bacterianos.
su+ Esta investigación aparentemente rutinaria condujo a resultados sorprendentes
lys+
e importantes. Un científico siempre debe tener la mente abierta acerca de
los resultados y estar preparado para lo inesperado.
Los fagos se
ensamblan; ocasionalmente, Transducción especializada En la
un fago lleva una parte del
cromosoma de la célula huésped. transducción especializada, la partícula transductora transporta solo
porciones específicas del genoma bacteriano. La transducción especializada
lys+
es posible gracias a un error en el ciclo de vida lisogénico de los fagos que
insertan sus genomas en un sitio específico en el cromosoma huésped.
Transducción Cuando se induce a un profago a abandonar el cromosoma huésped, a veces
su+
de fagos con la escisión se lleva a cabo de forma incorrecta. El genoma del fago resultante
ADN huésped
El fago transductor contiene porciones del cromosoma bacteriano (alrededor del 5 al 10 % del
inyecta su ADN en una
ADN bacteriano) junto al sitio de integración, muy similar a la situación con
nueva célula receptora.
los plásmidos F' (figura 13.36). Un genoma de fago transductor suele ser
su+ defectuoso y carece de alguna parte de su sitio de unión. La partícula
cruzando transductora inyectará genes bacterianos en otra bacteria, aunque el fago
Celda receptora su_ lys_ defectuoso no pueda reproducirse sin ayuda. Los genes bacterianos pueden
(his_ lys_ )
incorporarse de forma estable en las circunstancias adecuadas.
El ADN transducido se
recombina en el cromosoma El ejemplo mejor estudiado de transducción especializada lo lleva a
de la célula receptora.
cabo el fago lambda de E. coli . El genoma lambda se inserta en el cromosoma
huésped en lugares específicos conocidos como sitios de unión o att (figura
su+ lys_ 13.37, véanse también las figuras 17.19 y 17.22).
bacteria
recombinante Los sitios att del fago y los sitios att bacterianos son similares y pueden
formar complejos entre sí. El sitio att para lambda está al lado de los genes
gal y bio en el cromosoma de E. coli ; en consecuencia, los fagos lambda
transductores especializados suelen portar estos genes bacterianos. El lisado,
La bacteria recombinante tiene un genotipo (his+lys_ ) que es
o producto de la lisis celular, resultante de la inducción de E. coli lisogenizada
diferente al de la célula bacteriana receptora (his_ lys_ ).
contiene fagos normales y unas pocas partículas transductoras defectuosas.
Estas partículas se llaman lambda dgal porque llevan los genes de utilización
Figura 13.35 Transducción generalizada en bacterias.
de galactosa o lambda dbio porque llevan el bio desde el otro lado del sitio att
(figura 13.37). Debido a que estos lisados contienen solo unas pocas partículas
transferencia, y ambas hebras se integran en el genoma del endógeno. transductoras, a menudo se denominan lisados de transducción de baja
Alrededor del 70 al 90% del ADN transferido no se integra, pero a menudo frecuencia (lisados LFT). Mientras que el fago normal tiene un sitio att
puede sobrevivir temporalmente y expresarse. completo , las partículas transductoras defectuosas tienen un sitio de
Los transductores abortivos son bacterias que contienen este ADN integración híbrido no funcional que es en parte bacteriano y en parte de
transducido no integrado y son diploides parciales. origen fago. La integración del cromosoma del fago defectuoso no tiene lugar
La transducción generalizada fue descubierta en 1951 por Joshua fácilmente. Los fagos transductores también pueden haber perdido algunos
Lederberg y Norton Zinder durante un intento de demostrar que la conjugación, genes esenciales para la reproducción. Los transductores estables pueden
descubierta varios años antes en E. coli, podía ocurrir en otras especies surgir solo si hay un evento de cruce doble en cada lado del sitio gal (figura
bacterianas. Lederberg y Zinder estaban repitiendo los experimentos anteriores 13.37). Bacteriófagos templados y lisogenia (sección 17.5)
con S. enterica serovar Typhimurium.
Descubrieron que la incubación de una mezcla de dos cepas auxótrofas Los fagos lambda defectuosos que portan los genes gal o bio pueden
múltiples producía protótrofos al nivel de aproximadamente uno en 105 . Esto integrarse si hay un fago lambda normal en la misma célula. Continuaremos
parecía una buena evidencia de la recombinación bacteriana, nuestra discusión de esto con un fago que porta el gen gal .
Transducción 347
Profago
Célula lisogenizada
con profago
Inducción
Desintegración rara que

incluye algunos genes
bacterianos
Replicación de ADN de virus

defectuoso con genes huésped
incorporados
Ensamblaje y liberación de
partículas de fagos transductores.
Infección de la célula receptora
Cruce para integrar genes

bacterianos
Integración como profago
Cromosoma bacteriano que

contiene ADN del virus y del Cromosoma
donante bacteriano que
contiene solo ADN
del donante
Figura 13.36 Transducción especializada por un bacteriófago templado. La recombinación puede producir dos tipos de transductores.
2
3 1
ÿ
att sitios
chica+
Integración a
forma profago
1 2 3
chica+ biografía+
Escisión normal Error en la escisión
2 1
3 1
chica+
2
3
chica+
2 1
3 1 ÿ
ÿdgal
2 chica+
chica+
3
1
1
chica+
2
chica+
1 2
galón- 3
galón-
ÿdgal
ÿ
1 2 1
chica+ 2
3
galón-
chica+
transductor inestable transductor estable
Figura 13.37 El mecanismo de transducción del fago lambda y E. coli. El fago lambda integrado se encuentra entre gal y
bio genes. Cuando se extirpa normalmente (arriba a la izquierda), el nuevo fago está completo y no contiene genes bacterianos. Rara vez la escisión ocurre asimétricamente
(arriba a la derecha), y se recogen los genes gal o bio y se pierden algunos genes del fago (solo es posible la escisión aberrante que involucra a los genes gal).
El resultado es un fago lambda defectuoso que porta genes bacterianos y puede transferirlos a un nuevo receptor.
El fago normal se integra, produciendo dos híbridos bacteria/fago. Estos transductores son inestables porque los profagos pueden ser inducidos
att sitios donde el fago lambda dgal defectuoso puede insertarse (figura a extirparse por agentes tales como la radiación UV. La escisión, sin embargo,
13.37). También suministra los genes que faltan en el fago defectuoso. produce un lisado que contiene una mezcla bastante igual de defectuosos
El fago normal en este caso se denomina fago auxiliar porque ayuda a la fago lambda dgal y fago auxiliar normal. Debido a que es muy efectivo en la
integración y reproducción del fago defectuoso. transducción, el lisado se denomina transductor de alta frecuencia .
Mapeo del genoma 349
lisado de producción (lisado HFT). Reinfección de bacterias con este El enlace de genes, o la proximidad de dos genes en un cromosoma, se puede
la mezcla dará como resultado la generación de considerablemente más transductores. determinar a partir de la transformación midiendo la
Los lisados LFT y los producidos por transducción generalizada tienen una partícula frecuencia con la que dos o más genes transforman simultáneamente una célula
transductora en 105 o 106 fagos; Lisados HFT receptora. Considere el caso de la cotransformación por
contienen partículas transductoras con una frecuencia de aproximadamente 0,1 a 0,5. dos genes En teoría, una bacteria podría recibir simultáneamente
dos genes, cada uno transportado en un fragmento de ADN separado. Sin embargo,
1. Describa brevemente los ciclos reproductivos virales líticos y lisogénicos. Definir es mucho más probable que los genes que residen en el mismo fragmento
lisogenia, lisógeno, fago templado, profago y transducción. serán transferidos simultáneamente. Si dos genes están estrechamente ligados
2. Describa la transducción generalizada, cómo ocurre y la forma en que en el cromosoma, entonces deberían poder cotransformarse. los
fue descubierto. ¿Qué es un transductor abortivo? cuanto más juntos estén los genes, más a menudo serán transportados
3. ¿Qué es la transducción especializada y cómo se produce? Distinguir en el mismo fragmento y mayor será la frecuencia de cotransformación. Si los genes
entre lisados LFT y HFT y describir cómo se forman. están separados por una gran distancia,
4. ¿Cómo se podría saber si la transferencia horizontal de genes estuvo mediada por una será transportado en fragmentos de ADN separados y la frecuencia de
transducción generalizada o especializada? los transformantes dobles serán iguales al producto del individuo
5. ¿Por qué una célula no se lisa después de una transducción exitosa con un fago moderado? frecuencias de transformación.
6. Describe en qué se parecen la conjugación, la transformación y la transducción. La transducción generalizada se puede usar para obtener información de ligamiento
¿En qué se diferencian? de la misma manera que la transformación. Los enlaces generalmente se expresan como
frecuencias de cotransducción , usando el
argumento de que cuanto más cerca están dos genes entre sí, más
probablemente ambos residirán en el fragmento de ADN incorporado
13.10 MAPEO DEL GENOMA en una sola cápside de fago. El fago P1 de E. coli se usa a menudo en
Antes del advenimiento de la secuenciación del genoma, los genetistas microbianos tal mapeo porque puede transducir aleatoriamente hasta 1 a 2% de
sólo tenía un enfoque general para dilucidar la organización de el genoma (figura 13.39).
genes en un cromosoma bacteriano—para llevar a cabo un análisis de ligamiento. La transducción especializada se usa para encontrar qué sitio de unión del fago
Dichos análisis producen un mapa genético que muestra la posición de los genes. está cerca de un gen específico. Las ubicaciones relativas de los sitios att de fagos
en relación unos con otros. El mapeo genético usando análisis de ligamiento es específicos se conocen a partir del mapeo conjugacional, y
una tarea muy compleja. Esta sección examina los enfoques para mapear los genes vinculados a cada sitio att se pueden determinar por medio de
el genoma bacteriano, usando E. coli como ejemplo. Los tres modos transducción especializada. Estos datos permiten la colocación precisa de
de transferencia y recombinación de genes se han utilizado en el mapeo. genes en el cromosoma.
La conjugación Hfr se usa con frecuencia para mapear la ubicación relativa En la figura 13.40 se proporciona un mapa genético simplificado de E. coli K12 .
de genes bacterianos. Esta técnica se basa en la observación de que durante la Porque los datos de conjugación no son de alta resolución y no se pueden usar
conjugación, el cromosoma se mueve del donante al receptor en Para posicionar genes que están muy juntos, el mapa se desarrolló usando varias
una tasa constante. En un experimento de apareamiento interrumpido, el puente de técnicas de mapeo. Datos de apareamiento interrumpidos
conjugación se rompe y el apareamiento Hfr F se detiene en varios se combinaron con los de los estudios de cotransducción y cotransformación.
intervalos después del inicio de la conjugación mezclando vigorosamente el cultivo en También se utilizaron datos de estudios de recombinación. Nuevo
una licuadora (figura 13.38a). El orden y el momento del gen. Los marcadores genéticos en el genoma de E. coli se ubicaron dentro de una región
la transferencia se puede determinar porque son un reflejo directo de relativamente pequeña del genoma (de 10 a 15 minutos de duración) usando un
el orden de los genes en el cromosoma bacteriano (figura 13.38b). serie de cepas Hfr con sitios de integración del factor F dispersos por todo el genoma.
Por ejemplo, la extrapolación de las curvas de la figura 13.38b a Una vez localizado el marcador genético con respecto
el eje x da el momento en que cada gen acaba de empezar a entrar en el a varios genes en la misma región, su posición en relación con las cercanas
recipiente. El resultado es un mapa cromosómico circular con distancias los vecinos se determinaron con mayor precisión mediante la transformación
expresado en términos de los minutos transcurridos hasta que se transfiere un gen. Esta y estudios de transducción. Dichos análisis ya no se realizan en
técnica puede localizar genes con bastante precisión 3 minutos E. coli y otros microbios para los que se ha secuenciado el genoma
o más separados. Las alturas de las mesetas en la figura 13.38b son publicado.
menor para los genes que están más distantes del factor F (el origen Usando estas técnicas, los investigadores mapearon alrededor de 2,200
de transferencia) porque existe una posibilidad cada vez mayor de que el puente de genes de E. coli K12 y comparó esto con el nucleótido real
conjugación se rompa espontáneamente antes de que estos genes se secuencia del genoma (es decir, un mapa físico del genoma).
transferido Debido al tamaño relativamente grande de E. coli La secuenciación del genoma ha revelado unos 4.300 genes posibles.
genoma, no es posible generar un mapa a partir de una cepa Hfr. Así, el análisis genético definió más de la mitad de los genes potenciales.
Por lo tanto, se deben usar varias cepas de Hfr con el plásmido F integrado en diferentes El mapa genético se aproxima al mapa físico, pero no
lugares y sus mapas superpuestos en uno. corresponden perfectamente. Esto se debe a que el mapa genético se deriva
otro. El mapa general se ajusta a 100 minutos, aunque la transferencia completa puede de frecuencias de ligamiento genético que no se correlacionan exactamente
requerir algo más de 100 minutos. en un con el número de nucleótidos que separan dos genes. Aproximadamente
sentido, los minutos son una indicación de la distancia del mapa y no estrictamente una hablando, un minuto del mapa genético de E. coli corresponde a 40
medida del tiempo. El tiempo cero se establece en el lugar geométrico de la treonina (thr) . kilobases de la secuencia de ADN.
F– hfr
tsx gal trp

laca
argumento
tsx chica trp trp argumento
laca argumento
gal tsx chica trp
laca
tsx
laca
(a)
100
laca
tsx
80
recombinantes
entre
(%)
60
Frecuencia
caracteres
genéticos
Hfr
de
galón
40
trp
20
0
100 3020 40 50 60
Tiempo (minutos)
(B)
Figura 13.38 Un experimento de apareamiento interrumpido. Un experimento de apareamiento interrumpido usando la conjugación Hfr F. (a) El lineal
la transferencia de genes se detiene rompiendo el puente de conjugación para estudiar la secuencia de entrada del gen en la célula receptora. (b) Un ejemplo
de los resultados obtenidos por un experimento de apareamiento interrumpido. El orden de los genes es lac-tsx-gal-trp.
La progenie de fagos en el lisado resultante puede verificarse en busca de alternativas

13.11 RECOMBINACIÓN Y MAPEO DEL GENOMA
combinaciones de los genotipos parentales iniciales.
EN VIRUS
Alfred Hershey demostró inicialmente la recombinación en el
Los genomas de bacteriófagos también se recombinan, aunque fago T2, utilizando dos cepas con diferentes fenotipos. Dos de
el proceso es diferente al de las bacterias. Debido a que los fagos se las cepas parentales en los cruces de Hershey fueron hr y hr (figura 13.41).
reproducen dentro de las células y no pueden recombinarse directamente, El gen h influye en el rango de huéspedes; cuando el gen h
el entrecruzamiento debe ocurrir dentro de una célula huésped. En principio, un viruscambios, T2 infecta diferentes cepas de E. coli. El gen r de
experimento de recombinación es fácil de llevar a cabo. Si las bacterias son el fago T2 afecta la morfología de la placa. Las placas son manifestaciones
mezclado con suficientes fagos para que, en promedio, al menos dos virus visibles del ciclo lítico del fago, cuando el huésped se cultiva en
infectará cada célula, se debe observar la recombinación genética. un medio de crecimiento sólido (figura 13.42a). Fagos con el gen r
argumento+
conocí+
P1
calles
Célula donante
Infección, producción de nuevos

fagos y lisis.
un ocasional
lisado P1 el fago contendrá
una parte del
cromosoma
bacteriano.
Mezcle el lisado P1
con las células
receptoras que son
arg– , conoció– , strr .
Nuevo frasco que contiene

millones de recipientes
células Ocasionalmente, una
célula receptora recibirá
argumento-
met+ y/o arg+ de un fago
reunió- P1.
strr
Celda receptora
Placa sobre placas
mínimas con arginina +

estreptomicina pero sin metionina.
50 colonias
Escoja cada una de las 50

colonias y vuelva a sembrar (solo
se muestra el restablecimiento
Crecimiento de
de cinco colonias).
células bacterianas
Placas minimal sin

arginina
Genotipo de células arg+ arg– arg+ arg– arg–

en cada conocí+ conocí+ conocí+ conocí+ conocí+
colonia
Resultados
Gen Gen no seleccionado Número de colonias que Frecuencia de
seleccionado crecieron con mínimo – cotransducción
mínimo + arginina
arginina 50
conocí+ argumento+
21 0.42
Figura 13.39 Un experimento de cotransducción. En este experimento, el donante puede sintetizar los aminoácidos arginina y metionina (arg y met),
pero el antibiótico estreptomicina (strs ) lo elimina. El receptor no puede sintetizar arginina y metionina, pero es resistente a la estreptomicina (strr ). El
lisado de fago producido al infectar la bacteria donante se mezcla con la bacteria receptora. Luego, la mezcla se sembra en placa en un medio que contiene
estreptomicina pero que carece de metionina. Por lo tanto, las únicas células que pueden crecer son las células receptoras que han recibido la metionina
funcional. gen del donante. Las colonias que crecen se analizan para ver si también recibieron el gen para la biosíntesis de arginina del donante. Esto se
determina colocando las células en placas en un medio mínimo que carece de arginina. Solo crecen aquellas células que pueden sintetizar arginina.
Figura 13.40 Mapa genético de

E. coli. Un mapa genético circular
de E. coli K12 con la ubicación de
los genes seleccionados. El círculo ADNB
interior muestra el origen y la
dirección de transferencia de varias
cepas de Hfr. El mapa se divide en 100/0
95 5
100 minutos, el tiempo necesario
para transferir el cromosoma de una 90 10
ilvG,E,D,A,C
célula Hfr a F a 37 °C. galK, T, E att
adn
biografía,A,B,F,C,D
orico 85 15
pira uvrB
serC
xilo 80 20 PirD
pirc
PK3
75 25 purB
mala
att80
70 B7 30 trpA,B,C,D,E
argR
argG
sesenta y cinco
35
60 40 hombre tyrS
MetC
55 45 pheS
50
RecA
año
alA(gyrA) norte
Figura 13.41 Recombinación genética en T2 h T2 h+r +
bacteriófagos. Un resumen de un experimento

de recombinación genética con las cepas hr y hr
del fago T2. El cromosoma hr es rojo; el cromosoma
Cruce entre dos
hr es azul. cromosomas diferentes
+
h h h
+
h
+
+r r
+r r
h+r + hora h+ h+r

Recombinación y mapeo del genoma en virus 353
Césped bacteriano Células bacterianas

en placa de Petri
cápside
del fago
fago
ADN
Infectado
célula
Cada célula
infectada se lisa y
libera fagos que
infectan las células
cercanas.
fagos
(B)
Las células cercanas se

lisan, infectando más células.
La lisis de células infectadas y la liberación

de nuevos fagos que infectan las células cercanas.
Placa
El proceso
continúa.
(C)
Figura 13.42 Formación de placas de fagos. (a) Cuando los fagos y las
células bacterianas del huésped se mezclan en una proporción adecuada,
solo una parte de las células se infectará inicialmente. Cuando esta mezcla
se coloca en placas, las células infectadas se separarán unas de otras. Las
células infectadas eventualmente se lisan, liberando progenie de fagos.
Infectan las células cercanas, que finalmente se lisan y liberan más
(un)
(un) fagos. Esto continúa y finalmente da lugar a un área despejada dentro
de un césped de bacterias. El área clara es una placa. (b) Los tipos de
placas producidas por un experimento de recombinación entre T2 h y T2 h
en un césped de células de E. coli. (c) Un primer plano de los cuatro tipos
de placa.
tienen morfología de placa de tipo salvaje, mientras que T2 con el genotipo r tiene un fenotipo Varias otras técnicas directas se utilizan para generar física
de lisis rápida y produce más de lo normal mapas de genomas virales o partes de ellos. Ciertas enzimas llamadas
placas con bordes afilados (figuras 13.42b y 13.42c). En un experimento, Hershey infectó E. Las endonucleasas de restricción se pueden usar para cortar el ADN viral en puntos específicos.
coli con grandes cantidades de las cepas hr y hr T2 (figura 13.41). Luego emplató el sitios Los fragmentos de ADN se pueden separar unos de otros.
basado en el tamaño por electroforesis en gel, un proceso en el que las moléculas se mueven
lisados con una mezcla de dos cepas huésped diferentes y fue capaz en un campo eléctrico (véanse las figuras 14.3 y 14.11). Por
para detectar cantidades significativas de hr y hr recombinantes, como comparando genomas de diferentes cepas de virus, se pueden localizar deleciones,
así como placas de tipo parental. Siempre que sean detectables inserciones y otras mutaciones. Los genomas de fagos también
fenotipos y métodos para realizar los cruces, es posible mapear genes de fagos de esta pueden secuenciarse directamente para localizar mutaciones particulares y analizar los
manera. cambios que han tenido lugar.
Los genomas de fagos son tan pequeños que a menudo es conveniente mapearlos
sin determinar las frecuencias de recombinación. Algunas técnicas en realidad generan 1. Describa cómo se puede mapear el genoma bacteriano utilizando el conjugado Hfr
mapas físicos, que a menudo son más útiles ción, transformación, transducción generalizada y transducción especializada.
en ingeniería genética. Varios de estos métodos requieren la manipulación del ADN con el Incluya una descripción de cada técnica y cualquier suposición.
examen subsiguiente en el microscopio electrónico. Por ejemplo, el mapeo heterodúplex subyacente a su uso.
involucra 2. ¿Por qué es necesario utilizar varias técnicas diferentes en el mapeo del genoma?
comparación de cromosomas virales de tipo salvaje y mutantes. Los dos ¿Cómo se hace esto en la práctica?
Los cromosomas se desnaturalizan, se mezclan y se dejan recocer debido a 3. Describa cómo localizaría con precisión el gen recA y mostraría que fue
emparejamiento de bases. Cuando se hibridan, las regiones homólogas de las diferentes entre 58 y 58,5 minutos en el cromosoma de E. coli.
moléculas de ADN forman una doble hélice regular. En lugares donde 4. ¿En qué se diferencia la recombinación de los virus de la de las bacterias? como ella
las bases no se emparejan debido a la presencia de una mutación como una deleción o shey demostrar primero la recombinación de virus?
inserción, las burbujas son visibles en el microscopio electrónico. 5. Describa el mapeo heterodúplex.
Resumen
13.1 Mutaciones y sus bases químicas 13.3 Reparación del ADN
un. Una mutación es un cambio estable y hereditario en la secuencia de nucleótidos del ge un. Las células tienen múltiples mecanismos para corregir el ADN mal emparejado y dañado.
material nético.
B. Los sistemas de reparación por escisión eliminan las partes dañadas de una sola hebra de
B. Las mutaciones espontáneas pueden surgir de errores de replicación (transición, transversión y adición y ADN (p. ej., dímeros de timina) y use la otra hebra como plantilla para rellenar
eliminación de nucleótidos), de lesiones en el ADN en el hueco (figuras 13.10 y 13.11).
(sitios apurínicos, sitios apirimidínicos, oxidación del ADN), y de inserciones C. Los sistemas de reparación directa corrigen el ADN dañado sin eliminar las regiones dañadas. Por
(figuras 13.1 y 13.2). ejemplo, durante la fotorreactivación, los dímeros de timina son reparados por
C. Las mutaciones inducidas son causadas por mutágenos. Las mutaciones pueden ser el resultado de la separando las dos timinas. Esto es catalizado en presencia de luz por
incorporación de análogos de bases, emparejamientos erróneos específicos debido a alteraciones de una base. la enzima fotoliasa (figura 13.12).
causados por agentes modificadores del ADN, la presencia de agentes intercalantes y D. La reparación de desajustes es similar a la reparación por escisión, excepto que reemplaza los pares
daño severo al ADN causado por la exposición a la radiación. basados en desajustes (figura 13.13).
D. Las mutaciones generalmente se reconocen cuando causan un cambio de lo más mi. La reparación recombinante elimina el ADN dañado mediante la recombinación del
fenotipo predominante de tipo salvaje. Un fenotipo mutante se puede restaurar a salvaje ADN dañado con una hebra de ADN normal en otra parte de la célula (figura 13.14).
tipo por reversiones o mutaciones supresoras (tabla 13.2).
F. Cuando el daño del ADN es severo, la replicación del ADN se detiene. Esto desencadena la
mi. Hay cuatro tipos importantes de mutaciones puntuales: mutaciones silenciosas, mutaciones sin sentido Respuesta S.O.S. Durante la respuesta SOS, los genes de los sistemas de reparación se transcriben
mutaciones, mutaciones sin sentido y mutaciones de cambio de marco (tabla 13.2). a un ritmo mayor. Además, se producen ADN polimerasas especiales.
F. Las mutaciones pueden afectar el fenotipo de muchas maneras. Algunos tipos principales de mutaciones Estos son capaces de replicar el ADN dañado. Sin embargo, lo hacen sin
clasificadas en función de sus efectos sobre el fenotipo son morfológicos, plantilla adecuada y por lo tanto crear mutaciones.
mutaciones letales, condicionales, bioquímicas y de resistencia.
13.4 Creación de variabilidad genética

13.2 Detección y aislamiento de mutantes un. En la recombinación, se combina material genético de dos moléculas de ADN diferentes.
un. Se necesita un método de detección sensible y específico para detectar y aislar mutantes. Un ejemplo se unen para formar una nueva molécula híbrida.
es el revestimiento de réplicas para la detección de auxótrofos (figura 13.7). B. En eucariotas capaces de reproducción sexual, el entrecruzamiento durante la meiosis es
B. Una de las técnicas de aislamiento de mutantes más efectivas es la selección de un determinado importante en la creación de variación genética (figura 13.15).
mutación ajustando las condiciones ambientales para que el mutante crezca C. La transferencia horizontal de genes es un mecanismo importante para crear diversidad genética en
mientras que el tipo salvaje no lo hace. procariotas. Es un proceso unidireccional en el que el exógeno se transfiere
C. Debido a que muchos carcinógenos también son mutagénicos, se puede realizar una prueba de mutagenicidad del donante a un receptor e integrado en el endogenote (figura 13.16).
con la prueba de Ames y utilice los resultados como una indicación indirecta de carcinogenicidad D. Hay tres tipos de recombinación: recombinación homóloga, sitio
(figura 13.9). recombinación específica y transposición.
Términos clave 355
13.5 Elementos transponibles 13.8 Transformación de ADN
un. Los transposones o elementos transponibles son segmentos de ADN que se mueven un. La transformación es la captación de ADN desnudo por una célula competente y su
genoma en un proceso conocido como transposición. corporación en el genoma (figura 13.31 y 13.32).
B. Hay tres tipos de elementos transponibles: secuencias de inserción, transposones compuestos y

transposones replicativos (figura 13.19). 13.9 Transducción
C. La transposición simple (cortar y pegar) y la transposición replicativa son dos mecanismos distintos de un. Los virus bacterianos o bacteriófagos pueden reproducirse y destruir la célula huésped (ciclo lítico) o
transposición (figuras 13.20 y 13.21). D. Los elementos transponibles pueden causar mutaciones, convertirse en un profago latente que permanece dentro del huésped (ciclo lisogénico) (figura 13.34).
activar y desactivar genes, ayudar a F plas

a mitad de la inserción y portan genes de resistencia a los antibióticos. B. La transducción es la transferencia de genes bacterianos por virus. C. En la
transducción generalizada, cualquier fragmento de ADN del huésped puede empaquetarse en un virus.
13.6 Plásmidos bacterianos cápside y transferida a un receptor (figura 13.35).
un. Los plásmidos son pequeñas moléculas de ADN que se replican de forma autónoma y que pueden D. Ciertos fagos templados llevan a cabo una transducción especializada incorporando genes bacterianos
existir fuera del cromosoma huésped. B. Los episomas son plásmidos que pueden integrarse de durante la inducción del profago y luego donando esos genes a otra bacteria (figura 13.37).
forma reversible con el huésped.

cromosoma.
C. El factor F es un tipo de plásmido conjugativo; es decir, es capaz de transferirlo 13.10 Mapeo del genoma
mismo de una bacteria a otra (figura 13.23). un. El genoma bacteriano se puede mapear siguiendo el orden de transferencia de genes durante la
conjugación de Hfr (figura 13.38); También se pueden usar técnicas de mapeo transformacional y
13.7 Conjugación bacteriana transduccional (figura 13.39).
un. La conjugación es la transferencia de genes entre bacterias que depende del contacto directo célula-
célula. La conjugación del factor F está mediada por un pilus sexual y un sistema de secreción de 13.11 Recombinación y mapeo del genoma en virus
tipo IV. un. Cuando dos virus entran simultáneamente en una célula bacteriana, sus cromosomas
B. En el apareamiento FF, el factor F permanece independiente del cromosoma y se transfiere una copia al pueden sufrir recombinación (figura 13.41).
receptor F; los genes del donante no suelen transferirse (figura 13.28a). B. Los genomas de virus se mapean por recombinación (mapeo genético). Los mapas físicos se pueden
crear mediante mapeo heterodúplex y otras técnicas.
C. Las cepas Hfr transfieren genes bacterianos a los receptores porque el factor F está integrado en el
cromosoma del huésped. A menudo no se transfiere una copia completa del factor F (figura 13.28b,
c).
D. Cuando el factor F sale de un cromosoma Hfr, ocasionalmente toma algunos genes bacterianos para
convertirse en un plásmido Fÿ, que fácilmente transfiere estos genes a otras bacterias (figura 13.30).
Términos clave
transductores abortivos 346 exógeno 330 lisógeno 345 mutación de reversión 320
mutación adaptativa (dirigida) 319 alelo 329 factor F 336 lisogenia 345 sexo pilus 338
F' plásmido 339 ciclo lítico 345 mutación silenciosa 320
Prueba de Ames 325 mutación hacia adelante 320 merocigoto 330 transposición simple (cortar
sitio apurínico 319 mutación de cambio de marco 323 sistema de reparación de desajustes y pegar) 334
sitio apirimidínico 319 partícula de transducción generalizada 345 326 mutación missense 320 recombinación específica del sitio 331
auxótrofo 323 análogo de transducción generalizada 345 fago auxiliar 348 mutágeno 318 Respuesta SOS 327
base 319 reparación de ADN heterodúplex 331 mutación 317 transducción especializada 346
escisión de base 326 célula recombinación homóloga no mutaciones espontáneas 318
competente 343 transposón Hfr conjugación 339 recíproca 331 mutación supresora 320 bacteriófago
compuesto 333 mutación Hfr cepa 339 mutación sin sentido 321 templado 345 transducción 345
condicional 323 lisados de transducción de alta frecuencia reparación por escisión de nucleótidos
conjugación 337 (lisados HFT) 348 326 fotorreactivación 326 plásmido 334 transformación 342
plásmido conjugativo 334 recombinación homóloga 331 transferencia mutación puntual 318 revisión 326 mutación de transición 319
transposón conjugativo 334 génica horizontal (lateral) profago 345 protótrofo 323 síntesis de ADN de translesión 329
entrecruzamiento 330 mutación (HGT) 330 elemento transponible 332 transposasa

restricción de host 330 333 transposición 331 transposón 332
dirigida (adaptativa) 319 reparación directa
mutaciones inducidas 318 mutación de transversión 319
326
metilación del ADN 326 secuencia de inserción 332 Proteína RecA 327
Agente modificador de ADN 320 agente intercalante 320 recombinantes 329
rotura de doble cadena modelo 331 experimento de apareamiento interrumpido recombinación 329 bacteriófago virulento 345 tipo
endógeno 330 349 transferencia génica lateral (horizontal) 330 Reparación recombinacional 327 salvaje 320
episoma 334 lisado de transducción de baja frecuencia Recubrimiento de placas 324

(lisados LFT) 346 Transposición replicativa 334
reparación por escisión 326

1. Las mutaciones a menudo se consideran dañinas. Dé un ejemplo de una mutación que ¿Qué características de reconocimiento y capacidades catalíticas necesitaría poseer la
sería beneficioso para un microorganismo. ¿Qué gen soportaría la mutación? maquinaria de recombinación?
¿Cómo alteraría la mutación la función del gen en la célula y qué condiciones
5. Suponga que la transducción tuvo lugar cuando se realizó un experimento de tubo en U. ¿Cómo
seleccionaría para este alelo mutante?
confirmaría que se transmitió algo como un virus?
2. Los errores cometidos durante la transcripción afectan a la célula, pero no se consideran “mu a través del filtro y transducido al receptor?
estaciones.” ¿Por qué no?
6. Suponga que realizó un experimento de tubo en U con dos auxótrofos y descubrió que el filtro no
3. Dado lo que sabes sobre las diferencias entre bacterias y eucariotas bloqueaba la recombinación, sino que la detenía
da dos razones por las que la prueba de Ames detecta sólo alrededor de la mitad de las células tratamiento con desoxirribonucleasa. ¿Qué proceso de transferencia de genes es responsable?
carcinógenos, incluso cuando se utilizan extractos de hígado. ¿Por qué sería mejor usar auxótrofos dobles o triples en este experimento?
4. Diagrama un evento de cruce doble y un evento de cruce simple. Cual es más 7. ¿Cuál sería la ventaja evolutiva de tener un período de “competencia” natural en un ciclo de vida
poco frecuente y por qué? Sugiera experimentos en los que usaría uno o los bacteriano? ¿Cuáles serían las posibles desventajas?
otro evento y qué tipos de marcadores genéticos emplearía. Que tipo
Aprende más
Barkay, T. y Smets, BF 2005. Flujo génico horizontal en comunidades microbianas. Lawley, TD; Klimke, WA, Gubbins, MJ; y Frost, LS 2003. La conjugación del factor F es un verdadero
Noticias de ASM 71 (9): 412–19. sistema de secreción de tipo IV. FEMS Microbiol. Letón. 224:1–15.
Brock, TD 1990. El surgimiento de la genética bacteriana. Cold Spring Harbor, Nueva York: Roth, JR y Andersson, DI 2004. Mutación adaptativa: cómo el crecimiento bajo selección estimula la
Prensa de laboratorio de Cold Spring Harbor. reversión de lac al aumentar el número de copias objetivo. J. Bacteriol. 186(15):4855–60.
Brooker, RJ 2005. Genética: Análisis y principios, 2d ed. Boston: McGraw-Hill.

Schröder, G. y Lanka, E. 2005. El sistema de formación de parejas de apareamiento de
Foster, PL 2004. Mutación adaptativa en Escherichia coli. J. Bacteriol. 186(15):
4846–52. plásmidos: una maquinaria de secreción versátil para la transferencia de proteínas y ADN.
Plásmido 54: 1–25.
Gogarten, JP y Townsend, JP 2005. Transferencia horizontal de genes, genoma inno
vación y evolución. Nature Rev. Microbiol. 3:679–87. Sutton, MD; Smith, BT; Godoy, VG; y Walker, GC 2000. The SOS re sponse: Recent insights into
umuDC-dependent mutagenesis and DNA Damage
Grohmann, E.; Muth, G.; y Espinosa, M. 2003. Conjugative plasmid transfer in tolerancia. año Rev. Genet. 34:479–97.
bacterias grampositivas. Microbiol. Molec. Biol. Rev. 67(2):277–301.
Hahn, J.; Maier, B.; Haijema, BJ; Sheetz, M.; y Dubnau, D. 2005. Las proteínas de transformación y la
captación de ADN se localizan en los polos celulares en Bacillus subtilis. Célula
122:59–71.

14ADN recombinante
Tecnología
Un científico examina el ADN después de la electroforesis en gel de agarosa. cada brillante

banda es un fragmento de ADN teñido con bromuro de etidio, de modo que al
iluminación con luz ultravioleta, el ADN emite fluorescencia.
AVANCE
• La ingeniería genética hace uso de la tecnología del ADN recombinante un gen u otro elemento de ADN se describen en la figura 14.1. Primero,
para fusionar genes con vectores y luego clonarlos en células huésped. En esto se identifica el ADN responsable de un fenotipo particular y
forma en que los genes aislados se pueden replicar en gran número de copias y se aislado (figura 14.1, pasos 1 y 2). Una vez purificado, el gen o
pueden sintetizar grandes cantidades de sus productos. los genes se fusionan con otra pieza de ADN llamada vector de clonación para
• El aislamiento de genes individuales o fragmentos de ADN depende de la formar moléculas de ADN recombinante (paso 3). Estos son
capacidad de las endonucleasas de restricción para escindir el ADN en sitios específicos. propagada por inserción en un organismo que puede no estar en
• Plásmidos, bacteriófagos y otros virus, cósmidos y artificiales el mismo dominio que el donante del gen original (paso 4). La tecnología del
Los cromosomas se utilizan como vectores de clonación. pueden replicar ADN recombinante abre áreas totalmente nuevas de investigación y
dentro de una célula huésped mientras transporta ADN extraño. Estos vectores llevan biología aplicada. Es una parte esencial de la biotecnología, que
genes que confieren rasgos fenotípicos que permiten su detección está experimentando un crecimiento y un desarrollo excepcionalmente rápidos.
y mantenido por la célula huésped.
Aunque el término tiene varias definiciones, aquí biotecnología
• La ingeniería genética contribuye sustancialmente a la investigación biológica, la medicina, se refiere a aquellos procesos en los que los organismos vivos son manipulados,
la industria y la agricultura. Los beneficios de esta tecnología seguirán creciendo. en particular a nivel genético molecular, para formar útiles
productos La promesa para la medicina, la agricultura y la industria es
• La ingeniería genética también está acompañada de desafíos en áreas como la seguridad, estupendo; pero no sin controversia. Microbiología aplicada e industrial (capítulo
la ética de su uso con seres humanos, el impacto ambiental y la guerra biológica. 41)
La tecnología del ADN recombinante es en gran medida el resultado de
varios descubrimientos clave en la genética microbiana. Sección 14.1 brevemente
revisa algunos hitos en el desarrollo de recombinantes
tecnología (tabla 14.1).
genética biológica. En este capítulo nos centramos en la aplicación práctica
Los capítulos 11 a 13 introducen
aplicaciones los elementos
de la genética microbianaesenciales de micro
y las tecnologías
derivados de ella.
Aunque los seres humanos han ido alterando la genética
composición de organismos durante siglos por cría selectiva, sólo
14.1 PERSPECTIVAS HISTÓRICAS
recientemente ha sido posible la manipulación directa del ADN. los
modificación deliberada de la información genética de un organismo por El ADN recombinante es ADN con una nueva secuencia formada al unir
cambiar directamente la secuencia de ácidos nucleicos en su genoma es fragmentos de dos o más fuentes diferentes. Uno de los primeros
llamada ingeniería genética y se logra mediante una colección grandes avances que condujeron a la tecnología del ADN recombinante fue el
de métodos conocidos como tecnología de ADN recombinante. La generación descubrimiento a fines de la década de 1960 por Werner Arber y Hamilton Smith
de un gran número de moléculas de ADN genéticamente idénticas se denomina de enzimas bacterianas que hacen cortes en el ADN de doble cadena.
clonación. Los pasos más utilizados para clonar Estas enzimas, conocidas como enzimas de restricción o enzimas de restricción
El avance del ADN recombinante nos ha brindado un enfoque nuevo y poderoso para las
preguntas que han intrigado y atormentado al hombre durante siglos.
—Paul Berg
358 Capítulo 14 Tecnología del ADN recombinante
lel, esta secuencia se invierte en hebras opuestas de ADN. Cuándo

EcoRI divide entre los residuos G y A, el 5'-AATTC-3' no apareado restante permanece
al final de cada hebra. Las bases complementarias en dos fragmentos cortados con
EcoRI pueden hidrógeno
se unen, por lo que EcoRI y otras endonucleasas similares generan extremos
1 Aislar el ADN para
cohesivos o pegajosos. Por el contrario, la escisión por enzimas de restricción
ser clonado.
como AluI y HaeIII dejan extremos romos. Algunas enzimas de restricción
y sus sitios de reconocimiento se enumeran en la tabla 14.2. Tenga en cuenta que cada
La enzima lleva el nombre de la bacteria de la que se purifica.
Muy temprano en el desarrollo de la tecnología del ADN recombinante, era
2 Usar una restricción evidente que la clonación de ADN eucariota en ADN procariota
enzima o PCR para
los anfitriones serían deseables pero problemáticos. Esto se debe a que el pre-ARNm
generar fragmentos
de ADN eucariótico debe procesarse (p. ej., los intrones se separan),
y los procariotas carecen de la maquinaria molecular para realizar esto
tarea. En 1970, Howard Temin y David Baltimore de forma independiente
descubrió la enzima que resolvió este dilema. ellos aislaron
la enzima transcriptasa inversa (RT) de los retrovirus. Estas
Los virus tienen un genoma de ARN que se copia en el ADN antes de
3 Generar un recombinante
replicación. El mecanismo por el cual la transcriptasa inversa ac logra esto se describe
vector lineal molécula insertando
en la figura 14.4. Mediante el uso de procesados
fragmentos de ADN en un
Vector vector de clonación ARNm como molde para la síntesis de ADN complementario (ADNc) , no se requiere
procesamiento de ARN cuando se expresa ADNc clonado. Reproducción de virus de
vertebrados: replicación del genoma, transcripción,
y síntesis de proteínas en virus de ARN (sección 18.2)
4 Introducir recombinante
El siguiente avance se produjo en 1972, cuando David Jackson, Robert
molécula en un nuevo huésped.
Nuevo anfitrión
Symons y Paul Berg informaron que habían generado con éxito moléculas de ADN
recombinante. Permitieron los extremos pegajosos
de fragmentos para recocer, es decir, formar pares de bases entre sí,
y luego unió covalentemente los fragmentos con la enzima ADN
ligasa. Dentro de un año, los vectores plásmidos que transportan ADN extraño
fragmentos durante la clonación de genes habían sido desarrollados y combinados
con ADN extraño (figura 14.5). El primer plásmido recombinante capaz de replicarse
Figura 14.1 Pasos en la clonación de un gen. Cada paso que se muestra en
dentro de un huésped bacteriano fue el
esta descripción general se trata con más detalle en este capítulo.
plásmido pSC101 construido por Stanley Cohen y Herbert
Boyer en 1973 (SC en el nombre del plásmido significa Stanley Cohen).
Una vez que los genes pudieron recombinarse en vectores de clonación, los
biólogos buscaron clonar genes específicos de varios organismos. Pero
endonucleasas, reconocen y escinden secuencias específicas alrededor de 4 a ¿Cómo se podría distinguir el fragmento de ADN que posee el
8 pares de bases de largo (figura 14.2). Normalmente protegen a la célula huésped. gen de interés de los numerosos fragmentos cromosómicos producidos por la digestión
destruyendo el ADN del fago después de su entrada. Las células protegen su con enzimas de restricción? En 1975, Edwin Southern
propio ADN de las enzimas de restricción mediante la metilación de nucleótidos resolvió este problema con su procedimiento de transferencia Southern. Esta
específicos. El ADN extraño entrante que no está metilado en el técnica permite la detección de fragmentos de ADN específicos de
Las enzimas de restricción del huésped pueden escindir el mismo patrón que el una mezcla de moléculas de ADN (figura 14.6).
huésped. Las enzimas de restricción reconocen secuencias específicas de ADN En el procedimiento de transferencia Southern, los fragmentos de ADN se separan
llamados sitios de reconocimiento. Cada enzima de restricción tiene su propia primero por tamaño con electroforesis en gel de agarosa (consulte la sección 14.4). los
sitio de reconocimiento Cientos de diferentes enzimas de restricción han Luego, los fragmentos se desnaturalizan (se vuelven monocatenarios) y se transfieren
han sido purificados y están disponibles comercialmente (tabla 14.2). Tipo i a una membrana de nailon y se tratan para que cada fragmento se
y las endonucleasas tipo III identifican sus sitios de reconocimiento únicos firmemente unido al filtro en la misma posición que en el gel. los
y luego escindir el ADN a una distancia definida de él. Las endonucleasas tipo II más la transferencia se produce cuando el tampón fluye a través del gel y la membrana
comunes cortan el ADN directamente en su reconocimiento como se muestra en la figura 14.6. Alternativamente, el ADN cargado negativamente
sitios Estas enzimas se pueden usar para preparar fragmentos de ADN que contienen los fragmentos se pueden someter a electroforesis del gel en la transferencia
genes específicos o porciones de genes. Por ejemplo, la enzima de restricción EcoRI, membrana. El filtro se baña con una solución que contiene una sonda radiactiva, que
aislada por Herbert Boyer en 1969 a partir de es un fragmento de ácido nucleico monocatenario marcado.
Escherichia coli escinde el ADN entre G y A en la secuencia de bases 5ÿ-GAATTC-3ÿ ácido que es complementario al ADN de interés. esos fragmentos
(figura 14.3). Porque el ADN es antiparal a la que los enlaces de hidrógeno de la sonda se vuelven radiactivos y son
Perspectivas Históricas 359
Tabla 14.1 Algunos hitos en biotecnología y tecnología de ADN recombinante
1958 ADN polimerasa purificada

1970 Un gen completo sintetizado in vitro
Descubrimiento de la primera endonucleasa de restricción específica de secuencia y la enzima transcriptasa inversa
1972 Primeras moléculas de ADN recombinante generadas
1973 Uso de vectores de plásmidos para la clonación de genes.
1975 Técnica de transferencia Southern para detectar secuencias de ADN específicas

1976 Primer diagnóstico prenatal utilizando una sonda específica de genes
1977 Métodos para la secuenciación rápida de ADN
Descubrimiento de "genes divididos" y somatostatina sintetizada usando ADN recombinante
1978 Biblioteca genómica humana construida
1979 Insulina sintetizada usando ADN recombinante
Primer antígeno viral humano (hepatitis B) clonado
1981 Antígeno viral de la fiebre aftosa clonado
Primer kit de diagnóstico basado en anticuerpos monoclonales aprobado para su uso
mil novecientos ochenta y dos
Producción comercial por E. coli de insulina humana modificada genéticamente
Aislamiento, clonación y caracterización de un gen de cáncer humano
Transferencia del gen de la hormona del crecimiento de rata a óvulos de ratón fertilizados
1983 Plásmidos Ti diseñados para transformar plantas
1985 Plantas de tabaco resistentes al herbicida glifosato mediante la inserción de un gen clonado de Salmonella Desarrollo de la técnica de reacción en
cadena de la polimerasa
1987 La inserción de un gen funcional en un óvulo de ratón fertilizado cura la enfermedad de mutación del escalofrío de los ratones, una enfermedad genética normalmente fatal.
1988 La primera producción exitosa de un cultivo básico modificado genéticamente (soja)
Desarrollo de la pistola genética
1989 Primera prueba de campo de un virus modificado genéticamente (un baculovirus que mata a las orugas de la lanzadera de la col)
1990 Producción del primer maíz fértil transformado con un gen foráneo (un gen de resistencia al herbicida bialaphos)
1991 Desarrollo de cerdos y cabras transgénicos capaces de fabricar proteínas como la hemoglobina humana
Primera prueba de terapia génica en pacientes humanos con cáncer
1994 Se presenta el tomate Flavr Savr, el primer alimento integral modificado genéticamente aprobado para la venta
Anticuerpos monoclonales totalmente humanos producidos en ratones modificados genéticamente
1995 Genoma de Haemophilus influenzae secuenciado
1996 Genomas de Methanocaldococcus jannaschii y Saccharomyces cerevisiae secuenciados
1997 Se iniciaron los ensayos clínicos en humanos de medicamentos antisentido y vacunas de ADN; Genoma de E. coli secuenciado
1998 Primer mamífero clonado (la oveja Dolly)
2002 Genoma de Plasmodium falciparum secuenciado
2003 Finalización del borrador del genoma humano
2005 Reconstrucción del virus de la influenza de 1918
detecta fácilmente por autorradiografía. En esta técnica una hoja de las innovaciones que siguieron se enumeran en la tabla 14.1; secciones 14.2
la película fotográfica se coloca sobre el filtro. Cuando se desarrollan, las bandas hasta 14.8 discutir cómo estas y otras técnicas son actualmente
Aparecen dondequiera que se encuentre un fragmento radiactivo porque la energía utilizado en el importante campo de la ingeniería genética.
liberada por el isótopo provoca la formación de plata oscura.
granos Las sondas no radiactivas también se pueden usar para detectar
ADN. Son más rápidos y más seguros que el uso de radioisótopos.
1. Describa las enzimas de restricción, los extremos pegajosos y los extremos romos. Puedes pensar
A fines de la década de 1970, las técnicas de clonación de ADN se aprovecharon
de una situación de clonación donde el ADN de extremos romos podría ser más útil que
para producir insulina humana recombinante y, para 1982, la producción comercial de
¿ADN con extremos pegajosos?
insulina a partir de E. coli modificada genéticamente.
2. ¿Qué es el ADNc? ¿En qué se diferencia del ADN aislado de un procariota?
comenzó. Este fue un desarrollo importante por varias razones: primero,
3. ¿Cuál es el propósito de la transferencia de Southern? ¿Cómo se selecciona una sonda? Por qué
diabéticos ya no tenían que depender de la insulina de los cerdos o
¿Crees que la técnica de transferencia Southern fue un avance
otros animales; en segundo lugar, demostró la viabilidad comercial de
importante cuando se introdujo por primera vez?
usando ADN recombinante para hacer un mejor producto. Otros importantes
Figura 14.2 Endonucleasa de restricción

Unión al ADN. La estructura de BamHI
unión al ADN visto a lo largo del eje del ADN.
Las dos subunidades de la enzima se encuentran a
cada lado de la doble hélice del ADN. Las -hélices están en
verde, las conformaciones en violeta y el ADN

esta en naranja
Cuadro 14.2 Algunas endonucleasas de restricción de tipo II y sus secuencias de reconocimiento
Enzima Fuente microbiana Secuencia de reconocimientoa Terminar producido
ÿ
aluminio Arthrobacter lúteo 5ÿ AGCT 3ÿ 5ÿ AG CT 3ÿ
3ÿ TCGA 5ÿ ÿ 3ÿ TC AG 5ÿ
ÿ
BamHI Bacilo amyloliquefaciens H 5ÿ GGATCC 3ÿ 5ÿ G GATCC 3ÿ
3ÿ CCTAGG5ÿ ÿ CCTAG 3ÿ Sol 5ÿ
ÿ
EcoRI Escherichia coli 5ÿ GAATTC 3ÿ 5ÿ G AATTC 3ÿ
3ÿ CTTAAG 5ÿ ÿ 3ÿ CTAA Sol 5ÿ
ÿ
HaeIII Haemophilus aegyptius 5ÿ GGCC 3ÿ 5ÿ GG CC 3ÿ
3ÿ CCGG 5ÿ ÿ 3ÿ CC GG 5ÿ
ÿ
HindIII Haemophilus influenzae d 5ÿ AGCTT 3ÿ 5ÿ A AGCTT 3ÿ
3ÿ TTCGAA 5ÿ ÿ 3ÿ TTCGA Un 5ÿ
ÿ
yo no Nocardia otitidis-caviarum 5ÿ GCGGCCGC 3ÿ GC 5ÿ GGCCGC 3ÿ
3ÿ CGCCGGCG 5ÿ ÿ 3ÿ CGCCGG CC 5ÿ
ÿ
PstI providencia stuartii 5ÿ CTGCAG 3ÿ 5ÿ CTGCA G3ÿ
3ÿ GACGTC 5ÿ ÿ 3ÿ G ACGTC 5ÿ
ÿ
SalI Streptomyces albus 5ÿ GTCGAC 3ÿ 5ÿ G TCGAC 3ÿ
3ÿ CAGCTG 5ÿ ÿ 3ÿ CAGCT Sol 5ÿ
a
Las flechas indican los sitios de escisión en cada hebra.
360
ADN sintético 361
Corte Corte AAAAAA
3ÿ
5ÿ 3ÿ
ARNm 5ÿ
A A T T C
GRAMO A A T T C
GRAMO
C T T A A GRAMO
C T T A A GRAMO
3ÿ 5ÿ Agregue una imprimación poli-dT.
Corte Corte 3ÿ 5ÿ
T T T T T T
A A A A A A
5ÿ 3ÿ
Agregue transcriptasa inversa +

5ÿ 3ÿ dNTP para sintetizar una hebra
de ADN complementaria.
GRAMO TTAA C GRAMO TTAA C
C TT Automóvil club británico
GRAMO C TT Automóvil club británico
GRAMO
3ÿ 5ÿ 3ÿ 5ÿ
T T T T T T
A A A A A A
Figura 14.3 Acción de la endonucleasa de restricción. La escisión es
catalizada por la endonucleasa de restricción EcoRI. La enzima realiza cortes 5ÿ 3ÿ
escalonados en las dos cadenas de ADN para formar extremos cohesivos. Agregue RNaseH
para cortar el ARN y
generar cebadores
de ARN.
14.2 ADN SINTÉTICO 5ÿ
3ÿ
Hasta el momento, se ha revisado la manipulación del ADN purificado de TTTTTT

células vivas. Sin embargo, la capacidad de sintetizar fragmentos cortos de
ADN llamados oligonucleótidos [del griego oligo, pocos o escasos] fue otro
avance importante. Los oligonucleótidos tienen generalmente entre 15 y 30
nucleótidos de largo y pueden ser ARN o ADN. Se utilizan en una variedad de Agregue ADN polimerasa y ADN
ligasa para sintetizar la segunda
técnicas moleculares, como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) cadena de ADN.
discutida en la sección 14.3. Estructura del ácido nucleico (sección 11.3)
3ÿ 5ÿ
Los oligonucleótidos de ADN se sintetizan mediante un proceso gradual T T T T T T
en el que se agregan nucleótidos individuales al final de la cadena en A A A A A A
crecimiento (figura 14.7). El extremo 3' de la cadena está unido a un soporte
5ÿ 3ÿ
sólido, como una partícula de gel de sílice. Un sintetizador de ADN o “máquina
ADNc de doble cadena
de genes” lleva a cabo la síntesis en fase sólida. Un derivado de nucleótido
especialmente activado se agrega al extremo 5' de la cadena en una serie de
Figura 14.4 Síntesis de ADNc. Un cebador poli-dT se hibrida con el extremo
pasos. Al final de un ciclo de adición, la cadena en crecimiento se separa de la
3 'de los ARNm. La transcriptasa inversa luego cataliza la síntesis de una
mezcla de reacción por filtración o centrifugación. Luego se repite el proceso
cadena de ADN complementaria (ADNc). La RNasaH digiere el ARNm en
para unir otro nucleótido. En un tiempo relativamente corto, se pueden sintetizar
fragmentos cortos que la ADN polimerasa utiliza como cebadores para
cadenas de 50 a 100 nucleótidos de longitud.
sintetizar la segunda hebra de ADN. ningún cebador aguas arriba de este
Los avances en las técnicas de síntesis de ADN han acelerado el progreso
sitio). Este cebador de ARN se puede eliminar mediante la adición posterior
en el estudio de la función de las proteínas. Una de las formas más efectivas
de otra RNasa. Una vez elaborado el ADNc de doble cadena, se puede
de estudiar la relación de la estructura de la proteína con la función es alterando
insertar en vectores como se describe en la figura 14.13.
una parte específica de la proteína y observando los cambios funcionales. En
el pasado, esto se lograba mediante la modificación química de aminoácidos
individuales o mediante la inducción de mutaciones aleatorias en el gen que
codifica la proteína en estudio. Hay problemas con estos dos enfoques. La
modificación química de una proteína no siempre es específica; se pueden
alterar varios aminoácidos, no solo el deseado. No siempre es posible producir
el
Endonucleasa de restricción reacción en cadena (PCR), inventada por Kary Mullis a principios
hace un corte escalonado 1980, explotó en el panorama de la biotecnología. ha tenido
en el sitio de reconocimiento
un impacto tan profundo en la biología, la bioquímica y la medicina
que Mullis y Michael Smith, quienes desarrollaron la técnica de
mutagénesis dirigida al sitio, compartió un Premio Nobel en 1993. ¿Por qué es
sitio de corte PCR tan importante? Sencillamente, permite la síntesis rápida
de muchas, muchas copias de un fragmento de ADN específico de una mezcla
CTAG
compleja de ADN. Los investigadores pueden así obtener grandes cantidades de
ATC
GRAMO
fragmentos específicos de ADN con fines experimentales y de diagnóstico.
CTAG propósitos
ÿ La figura 14.9 describe cómo funciona la técnica de PCR. Suponer
ÿ
AGTC que uno desea hacer grandes cantidades de una secuencia particular de ADN, un
proceso conocido como ADN o amplificación de genes. El primero
ÿ Extremos pegajosos
paso es sintetizar fragmentos de ADN con secuencias idénticas a
(a)
(a) aquellos que flanquean la secuencia objetivo. Esto se logra con
un sintetizador de ADN. Estos oligonucleótidos sintéticos suelen ser
ADN
AT
GRAMO
GRAMO
Organismo AT C alrededor de 20 nucleótidos de largo y sirven como cebadores de ADN para el ADN
1 C CT GRAMO
C síntesis. Los cebadores son un componente de la mezcla de reacción, que también
TA TC AT T
A A
AT
GRAMO
GRAMO
A
contiene el ADN objetivo (a menudo copias de un genoma completo), una ADN
polimerasa termoestable y cada uno de los
cuatro desoxirribonucleósidos trifosfatos (dNTP). PCR requiere un
vector de ADN
Organismo serie de reacciones repetidas, llamadas ciclos. Cada ciclo tiene tres
2 pasos que se ejecutan con precisión en una máquina llamada termociclador. En
el primer paso, el ADN diana que contiene la secuencia
a amplificar se desnaturaliza con calor para convertirlo en monocatenario. Próximo,
(B)
la temperatura se baja para que los cebadores puedan formar puentes de hidrógeno
Figura 14.5 Construcción de plásmidos recombinantes. (a) Un

o hibridar con el ADN en ambos lados de la secuencia diana. Debido a que los
la endonucleasa de restricción reconoce y escinde el ADN en su

cebadores son muy pequeños y están presentes en exceso, las hebras de ADN
sitio de reconocimiento específico. El escote produce extremos pegajosos que

objetivo se hibridan con los cebadores en lugar de entre sí.
aceptar colas complementarias para el empalme de genes. (b) Los extremos cohesivos
Finalmente, la ADN polimerasa extiende los cebadores y sintetiza
se puede usar para unir ADN de diferentes organismos cortándolo

copias de la secuencia de ADN diana utilizando dNTP. Sólo las polimerasas
con la misma enzima de restricción, asegurando que todos los fragmentos tengan
capaces de funcionar a las altas temperaturas empleadas en el
fines complementarios.
Se puede utilizar la técnica de PCR. Dos enzimas populares son la Taq
polimerasa de la bacteria termófila Thermus aquaticus
y la polimerasa Vent de Thermococcus litoralis. Al final
mutación adecuada en la ubicación deseada del gen. Estas dificultades pueden de un ciclo, las secuencias objetivo en ambas cadenas han sido
superar con una técnica llamada mutagénesis dirigida al sitio. copiado. Cuando se repite el ciclo de tres pasos (figura 14.9), el
En la mutagénesis dirigida al sitio, un oligonucleótido de aproximadamente 20 se copian dos hilos del primer ciclo para producir cuatro fragmentos. Estos se
se sintetizan los nucleótidos que contienen el cambio de secuencia deseado. Se amplifican en el tercer ciclo para producir ocho productos de doble cadena. Así,
permite que el oligonucleótido alterado con su secuencia mutada artificialmente se cada ciclo aumenta el número de
una a una copia monocatenaria del moléculas de ADN diana exponencialmente. Dependiendo de la inicial
gen completo (figura 14.8). Se agrega ADN polimerasa al concentración de la plantilla de ADN y otros parámetros tales como
complejo gen-cebador. La polimerasa extiende el cebador y la composición de GC del ADN que se va a amplificar, es teóricamente posible
replica el resto del gen objetivo para producir un nuevo gen producir alrededor de un millón de copias de
copia con la mutación deseada. A continuación, el ADN se clona utilizando el secuencia de ADN después de 20 ciclos, y hasta mil millones después
técnicas descritas en las secciones 14.5 y 14.6. Esto produce grandes 30 ciclos. Piezas que varían en tamaño desde menos de 100 pares de bases hasta
cantidades de la proteína mutante para el estudio. pueden amplificarse varios miles de pares de bases de longitud, y sólo
Se requieren de 10 a 100 picomoles de imprimación. la concentracion de
El ADN objetivo puede ser tan bajo como 1020 a 1015 M (o 1 a 105 ADN
ejemplares por 100 l). La mezcla de reacción total es a menudo de 50 l o
14.3 LA REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA
menos en volumen. Replicación del ADN (sección 11.4)
La síntesis de oligonucleótidos es un proceso que evolucionó a lo largo La PCR se usa con mayor frecuencia en una de dos formas. si uno quiere
varios años (el primer informe de sintetizado químicamente para generar grandes cantidades de una secuencia específica, la reacción
El ADN se publicó en 1955, solo 2 años después de Watson y Crick. los productos se recolectan y purifican al final de un período designado
resolvió la estructura del ADN). Por el contrario, la polimerasa número de ciclos. El número final de fragmentos de ADN amplificados
La reacción en cadena de la polimerasa 363
123
1 Las muestras de ADN se
cortan con enzimas de restricción y
se cargan en gel de agarosa para electroforesis.
Carril 1: Marcadores de tamaño etiquetados

Carril 2: corte de ADN con enzima de restricción A
Carril 3: ADN con enzima de restricción B
Electroforesis en gel
123
Peso
El ADN se desnaturaliza,
Toallas de papel
el gel se coloca en una
mecha de esponja. filtro de unión al ADN
Gel
mecha (esponja)
Buffer
2 El ADN se separa por

electroforesis y se visualiza mediante
tinción, fotografía en luz ultravioleta. 3 El filtro de unión al ADN, las toallas de papel
(Cuando las endonucleasas de y el peso se colocan sobre el gel. El tampón
restricción cortan moléculas grandes pasa hacia arriba por acción capilar,
de ADN, se ve una mancha en lugar de bandas distintas). transfiriendo fragmentos de ADN al filtro.
4 Filtro colocado en bolsa termosellada

con solución que contiene sonda radiactiva
123
Filtro superpuesto Película de rayos X revelada

con película de rayos X con bandas de ADN
5 El filtro se lava para eliminar el exceso de sonda; El filtro
se coloca en una película de rayos X para producir una
imagen de las bandas de ADN.
Figura 14.6 Técnica del Southern Blot.
no es cuantitativo, lo que significa que la cantidad de producto final señal cuantitativamente durante la fase exponencial de la reacción.
no siempre refleja la cantidad de ADN molde presente antes de la La fluorescencia aumenta a medida que se acumulan los productos de PCR
amplificación. Por el contrario, la PCR en tiempo real (RT-PCR) durante los ciclos iniciales. Esto es cuando la tasa de amplificación del ADN es
es cuantitativa. Es decir, permite preguntar cuánto molde de ADN logarítmica. Sin embargo, a medida que continúan los ciclos de PCR, los
o ARN (que se convierte en ADN con transcriptasa inversa) está sustratos se consumen y la eficiencia de la polimerasa disminuye. Entonces,
presente en una muestra dada. Esto se logra agregando una sonda aunque la cantidad de producto aumenta, su tasa de síntesis ya no es
marcada fluorescentemente a la mezcla de reacción y midiendo su exponencial (es por eso que la recolección de productos de PCR en el punto final no es n
T Gen diana
A A CT
GRAMO
GRAMO
Apoyo
genoma del fago M13
(ADN monocatenario)
Adjunto de
GRAMO
3' nucleótido a
partícula de apoyo
TCTGCGA
Oligonucleótido sintético
GRAMO
con una base alterada
GRAMO
5ÿ
T C A
TC AT CT
GRAMO
A
GRAMO
GRAMO
GT
ADN polimerasa
dATP, dGTP, dCTP, dTTP
GRAMO
Gen alterado
T C
TC T A
GRAMO
A A CT
GRAMO GRAMO
Gen diana
GTA
T C
A A CT TCT A
GRAMO
GRAMO
C GRAMO
GRAMO
GTAC
Tipo salvaje gen mutado
Eliminación del
soporte
GTAC Transformación
y clonación
Figura 14.8 Mutagénesis dirigida al sitio. Un sintético

Figura 14.7 La síntesis de un oligonucleótido de ADN.
El oligonucleótido se usa para agregar una mutación específica a un gen. Ver
Durante cada ciclo, el sintetizador de ADN agrega un nucleótido activado
texto para más detalles.
(A, T, G o C) hasta el extremo creciente de la cadena. Al final de
proceso, el oligonucleótido se retira de su soporte.
cuantitativo). Termocicladores diseñados específicamente para tiempo real El procedimiento supervisa el nivel de transcripción génica del gen objetivo
Se utilizan PCR que registran la cantidad de producto de PCR generado como de los cebadores. Esto a veces se llama RT-RT-PCR.
Sucede; de ahí el término PCR en tiempo real. Estudios de expresión génica La técnica de PCR es una herramienta esencial en muchas áreas de la
a menudo dependen de la PCR en tiempo real, porque las transcripciones de ARNm se pueden biología molecular, la medicina y la biotecnología. Como se muestra en la
copiado y amplificado por transcriptasa inversa (RT). Por lo tanto, los figura 14.10, cuando se utiliza PCR para obtener ADN para la clonación,
La reacción en cadena de la polimerasa 365
Región que será amplificada

Primer
A sitio de
recocido
B
5ÿ 3ÿ
Plantilla de ADN presente Durante cada ciclo, las hebras de
en cantidades bajas, Ciclo 1 ADN se separan mediante calentamiento. T C C C C T C C CT
GRAMO A A AG GRAMO A
además de dNTP, polimerasa Luego se baja la temperatura para A GRAMO GRAMO GRAMO GRAMO A GRAMO GRAMO AG
permitir que los cebadores se unan y C T CT T C T
Taq y dos cebadores presentes
en cantidades altas. se forma una hebra complementaria. 3ÿ 5ÿ
A Cebador
1B
+
1A
B
Ciclo 2
A
2B-1
+
2A-1
1B
+
1A
2B-2
+
2A-2
Ciclo 3
A
3B-1
+
3A-1
2B-1
+
3A-2
1B
+ Con cada ciclo sucesivo,
2A-1 la cantidad relativa de este
fragmento de ADN aumenta.
3B-2
+ Por lo tanto, después de muchos
3A-3 ciclos, la gran mayoría de los
fragmentos de ADN contienen solo la
2B-2 región flanqueada por los dos
+ cebadores.
1A
3B-3
+
2A-2
3B-4
+
3A-4
B
Figura 14.9 Técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Durante cada ciclo, los oligonucleótidos que son complementarios a los extremos
de la secuencia de ADN objetivo se unen al ADN y actúan como cebadores para la síntesis de esta región de ADN. Los cebadores utilizados en los
experimentos de PCR reales suelen tener una longitud de 15 a 20 nucleótidos. La región entre los dos cebadores suele tener una longitud de cientos de
nucleótidos, no solo varios nucleótidos como se muestra aquí. El resultado neto de la PCR es la síntesis de muchas copias de ADN en la región
flanqueada por los dos cebadores.
genoma celular digamos, cuanto más pequeño es un fragmento, más rápido se mueve a través del gel.
Amplificación por PCR
La velocidad de migración también es una función de la densidad del gel. En la práctica,
del fragmento de ADN
deseado
Tratamiento con enzimas de restricción esto significa que concentraciones más altas de material de gel (agarosa o acrilamida)
proporcionan una mejor resolución de fragmentos pequeños y viceversa. El ADN que
Mezcla de fragmentos de ADN no se ha digerido con enzimas de restricción suele estar superenrollado. Por esta y
otras razones, el ADN suele cortarse con endonucleasas de restricción antes de la
Electroforesis en gel de agarosa
electroforesis. Las moléculas pequeñas de ADN generalmente producen solo unas
transferencia del sur
pocas bandas porque hay pocos sitios de reconocimiento de enzimas de restricción. Si
Banda que contiene el fragmento deseado el fragmento de ADN es grande o se digiere un cromosoma completo, muchos de estos
Extracción de ADN sitios están presentes y el ADN se corta en numerosos lugares. Cuando dicho ADN se
somete a electroforesis, produce un frotis que representa muchos miles de fragmentos
Electroforesis en un gel diferente
de ADN de tamaños similares que no se pueden resolver individualmente. A
Fragmento de ADN aislado continuación, se debe localizar la región del gel que contiene el fragmento de ADN
deseado mediante la técnica de Southern blot (figura 14.6). El ADN de esta región
Recocido con vector de plásmido o fago
puede aislarse del material del gel y someterse a electroforesis nuevamente en un gel
tratamiento con ADN ligasa
de otra concentración de agarosa o acrilamida para que las bandas individuales puedan
vector recombinante detectarse.
Transformar huésped bacteriano
cultivo de bacterias
Clon recombinante aislado

14.5 CLONACIÓN DE VECTORES Y CREACIÓN
ADN RECOMBINANTE
Figura 14.10 Clonación de fragmentos de ADN celular. La
preparación de un clon recombinante a partir de fragmentos de ADN La tecnología del ADN recombinante depende de la propagación de muchas copias de
aislados o ADN generado por PCR. la secuencia de nucleótidos elegida. Para lograr esto, los genes u otros elementos
genéticos se insertan (es decir, se clonan) en vectores de ADN que se replican en un
organismo huésped. Hay cuatro tipos principales de vectores: plásmidos, bacteriófagos
y otros virus, cósmidos y cromosomas artificiales (tabla 14.3). Cada tipo tiene sus
ya no se requiere el número de pasos empleados tradicionalmente. propias ventajas, por lo que la selección del vector de clonación adecuado es
La PCR también se utiliza para generar ADN para la secuenciación de nucleótidos. fundamental para el éxito de cualquier experimento de clonación. Todos los vectores
Debido a que la PCR amplifica el ADN incluso si está presente en cantidades iniciales diseñados comparten tres características: un origen de replicación; una región de ADN
muy pequeñas, se usa en una serie de pruebas de diagnóstico, incluidas las del SIDA, que tiene sitios de restricción únicos, llamada sitio de clonación múltiple o policonector;
la enfermedad de Lyme, la clamidia, la tuberculosis, la hepatitis, el virus del papiloma y un marcador seleccionable. Estos elementos se describen en la discusión de los
humano y otros agentes infecciosos. y enfermedades Las pruebas son rápidas, plásmidos, los vectores de clonación utilizados con mayor frecuencia.
sensibles y específicas. La PCR es particularmente valiosa en la detección de
enfermedades genéticas como la anemia de células falciformes, la fenilcetonuria y la
distrofia muscular.
La técnica también se emplea en la ciencia forense, donde se utiliza en casos penales
como parte de la tecnología de toma de huellas dactilares de ADN. Es posible excluir plásmidos
o incriminar a los sospechosos utilizando muestras extremadamente pequeñas de Los plásmidos son excelentes vectores de clonación porque se replican de forma
material biológico descubierto en la escena del crimen. autónoma y son fáciles de purificar. Pueden introducirse en microbios por conjugación
y/o transformación. En biotecnología se utilizan muchos plásmidos diferentes, todos
derivados de plásmidos naturales que han sido manipulados genéticamente (figura
14.12). plásmidos bacterianos (sección 3.6); Conjugación bacteriana (sección 13.7);
Transformación (sección 13.8)
14.4 ELECTROFORESIS EN GEL
Los geles de agarosa o poliacrilamida generalmente se usan para separar fragmentos
de ADN electroforéticamente. En la electroforesis en gel, las moléculas cargadas se Origen de la replicación El
colocan en un campo eléctrico y se les permite migrar hacia los polos positivo y origen de la replicación (ori) permite que el plásmido se replique en el huésped
negativo. Las moléculas se separan porque se mueven a diferentes velocidades debido microbiano independientemente del cromosoma. Se dice que pUC19, un plásmido de
a sus diferencias de carga y tamaño. Como el ADN tiene carga negativa, se carga en E. coli , tiene un alto número de copias porque se replica unas 100 veces en el
los pocillos del polo negativo del gel y migra hacia el polo positivo (figura 14.11). La transcurso de una generación. Es decir, una célula de E. coli con un cromosoma puede
tasa de migración de cada fragmento es inversamente proporcional al logaritmo de su tener hasta 100 copias del plásmido. Un alto número de copias suele ser importante
peso molecular. Eso es para porque facilita la purificación del plásmido y puede
Clonación de vectores y creación de ADN recombinante 367
Resultado, siguiendo el desarrollo
ADN para la muestra 3

Muestra Muestra Muestra Muestra Conocido ADN marcadores
tamaño
los
de
Las endonucleasas de restricción

escinden selectivamente sitios de ADN
bien 1 2 345
No. de pares de
bases en la banda
5160
5035 más grande
4910
Fragmentos de restricción
3160
Marcadores de tamaño
12345 2910
2760
() 2260
pozos
1510
1260
1010
750 Menor
Gel de agarosa
()
El ADN migra
hacia el
electrodo positivo.
(a) (B)
Figura 14.11 Electroforesis en gel de ADN. (a) Después de la escisión en fragmentos, el ADN se carga en pocillos en un extremo de un gel de agarosa.
Cuando una corriente eléctrica pasa a través del gel (del polo negativo al polo positivo), el ADN, al estar cargado negativamente, migra hacia el polo positivo. Los
fragmentos más grandes, medidos en número de pares de bases, migran más lentamente y permanecen más cerca de los pocillos que los fragmentos más pequeños
(más cortos). (b) Un gel real desarrollado y teñido revela un patrón de separación de los fragmentos de ADN.
El tamaño de una banda de ADN dada se puede determinar comparándola con un conjunto conocido de marcadores de peso molecular (carril 5) llamado escalera.
aumentar icamente la cantidad de producto génico clonado producido por Sitio de clonación múltiple (MCS) o
la célula. Algunos plásmidos tienen dos orígenes de replicación, cada uno Polylinker Una región de sitios de escisión de enzimas de restricción que
reconocido por diferentes organismos huéspedes. Estos plásmidos se se encuentran solo una vez en el plásmido es esencial para la inserción de
denominan vectores lanzadera porque pueden moverse o "transportarse" ADN extraño. La escisión en un sitio de restricción único genera un
de un huésped a otro. YEp24 es un vector lanzadera que puede replicarse plásmido lineal. La escisión del gen que se va a clonar con la misma
en levadura (Saccharomyces cerevisiae) y en E. coli porque tiene el enzima de restricción da como resultado extremos cohesivos compatibles,
elemento de replicación de levadura de 2 círculos y el origen de replicación de modo que se puede insertar (ligar) en el sitio de clonación múltiple
de E. coli, ori ( figura 14.12). (MCS). Alternativamente, se pueden escindir dos sitios diferentes y únicos
dentro del MCS y la secuencia de ADN entre los dos sitios se puede
Marcador reemplazar con ADN clonado (figura 14.13). En cualquier caso, el plásmido
seleccionable Después de la captación del vector por las células huésped, y el ADN que se va a insertar se incuban en presencia de la enzima ADN
uno debe ser capaz de discriminar entre aquellas células que obtuvieron ligasa de modo que cuando los extremos cohesivos compatibles se unen
con éxito el vector de aquellas que no lo hicieron. Además, uno debe poder por puente de hidrógeno, se pueden generar enlaces covalentes fosfodiéster
continuar seleccionando la presencia del plásmido, de lo contrario, la célula entre el fragmento de ADN clonado y el vector. Esto requiere el aporte de
huésped puede dejar de replicarlo. Esto se logra mediante la presencia de energía, por lo que se agrega ATP a esta reacción de ligadura in vitro (consulte la fig
un gen que codifica una proteína necesaria para que la célula sobreviva en pUC19 tiene varios sitios de restricción únicos en su MCS (figura
determinadas condiciones selectivas. Tal gen se llama marcador 14.12); esto proporciona una serie de opciones de escisión, lo que facilita
seleccionable. En el caso de pUC19, el marcador seleccionable codifica la obtención de extremos cohesivos iguales o compatibles tanto en el
el factor de resistencia a la ampicilina (ampR, a veces llamado bla, por b- vector como en el ADN que se va a insertar. En pUC19, el MCS se
lactamasa). El vector lanzadera YEp24 lleva tanto el gen ampR para la encuentra dentro del extremo 5 'del gen lacZ , que codifica -galactosidasa
selección en E. coli como URA3, que codifica una proteína esencial para la (-Gal). Esta enzima corta el disacárido lactosa en galactosa y glucosa.
biosíntesis de uracilo en la levadura. Por lo tanto, cuando está en S. Cuando el ADN se ha clonado en el MCS, el gen lacZ ya no está intacto,
cerevisiae, este plásmido debe mantenerse en auxótrofos de uracilo. por lo que no se produce una enzima funcional.
Tabla 14.3 Vectores de clonación de ADN recombinante
Tamaño de
Vector inserción (kb, 1 kb 1000 pb) Ejemplo Características
plásmido 20 KB pBR322, pUC19 Se replica independientemente del cromosoma microbiano, por lo

que se pueden mantener muchas copias en una sola célula.
bacteriófago 9–25 KB 1059, gt11, Empaquetado en partículas de fago lambda; monocatenario
M13mp18, Los virus de ADN como el M13 han sido modificados
EMBL3 (p. ej., M13mp18) para generar ADN de cadena doble o sencilla
en el huésped
cósmidos 30–47 KB pJC720, pSupercos Puede empaquetarse en partículas de fago lambda para una introducción
eficiente en bacterias, luego se replica como un plásmido
PAC (cromosomas 75–100 KB pPAC Basado en el mecanismo de empaquetamiento del bacteriófago P1
artificiales P1)
BAC (cromosomas artificiales 75–300 KB pBAC108L Plásmido F modificado que puede transportar grandes insertos de ADN;
bacterianos) muy estable dentro de la célula
YAC (cromosomas 100–1000 KB pYAC Puede transportar inserciones de ADN más grandes, se replica en Saccharomyces
artificiales de levadura) cerevisias
BCLI
Aat-ZraI
MfeI
EcoRI R
pags
yo
aC SACI A
metro
2 XbaI
Z MCS
KpnI rI
A
R
pUC19
(2686 pb)
pequeño
BamHI
XbaI
SalI
I r
YEp24
(7.769 pb)
mi
D
A
SnaBI
PstI Pvu II HpaI

SphI
HindIII
tuR
A
BspEI
orI Tmit R
EagI
pequeño
SphI
BamHI
Figura 14.12 Los vectores de clonación pUC19 y YEp24. Se muestran los sitios de restricción que están presentes solo una vez en cada vector.
pUC19 se replica solo en E. coli, mientras que YEp24 se replica tanto en E. coli como en S. cerevisiae.
Esto se puede detectar por el color de las colonias: las células se vuelven azules cuando se pueden diferenciar aquellos con vector con inserto; la selección de
-Gal divide el sustrato alternativo, X-Gal (5-bromo-4-cloro-3- colonias azules versus blancas es un enfoque común.
indolil--D-galactopiranósido), que se incluye en el medio
(figura 14.13). Esto es importante porque la ligadura de
El ADN en un vector nunca es 100% eficiente. Así, cuando la ligadura Vectores de fagos
mezcla se introduce en las células huésped, uno debe ser capaz de distinguir las Los vectores de fagos son genomas de fagos modificados genéticamente para
células que portan solo plásmido de aquellas que portan plásmido incluir sitios de reconocimiento de enzimas de restricción útiles para la inserción de
en el que se insertó con éxito el ADN. En el caso de pUC19, ADN extraño. Una vez que el ADN ha sido
todas las células de E. coli que captan el plásmido (con o sin inserto) se seleccionan insertado, el genoma del fago recombinante se empaqueta en virus
por su resistencia a la ampicilina (AmpR). Entre estos, cápsides y se utiliza para infectar las células huésped. El lisado de fago resultante
Las colonias con plásmido que carecen de inserto de ADN serán azules (debido a la consiste en miles de partículas de fago que transportan ADN clonado como
presencia del gen lacZ funcional ), mientras que los que tienen pUC19 así como los genes necesarios para la lisis del huésped. Dos vectores de uso
en el que se clonó con éxito el ADN será blanco. Hay común se derivan de los bacteriófagos T7 y lambda ( ), ambos
una serie de otras formas inteligentes en las que las celdas con vector versus de los cuales tienen genomas de ADN de doble cadena. Aunque estos
vector de plásmido ADN donante
GRAMO
A
C
GAATTC GAATTC GAATTC
T A
T
A T gen lacZ CTTAAG CTTAAG CTTAAG
A
GRAMO T
C ADN donante
cortado con EcoRI
Corte de
plásmido con AATTC GRAMO AATTC GRAMO
EcoRI
GRAMO C TTAA GC TTAA
GRAMO
Fragmentos de ADN del donante

C
TT
A
A
A
A
GRAMO
T
T
C
AmpR
(a)
A
A
GRAMO T
T
C C
T Transformantes de pantalla
T GRAMO
A
A
C
T
T
GRAMO
GRAMO
AmpR
A
C A
TT
Emparejamiento de bases Seleccionar

complementarias seguido de colonias AmpR
ligadura
Transformar
E.coli AA
GRAMO
Las colonias colonias blancas
azules solo tienen vector tener vector con
C inserto de ADN clonado
T T
T
A T (C)
A
C
GRAMO
C
T
GRAMO
A A T
AmpR GRAMO
A
C A
TT
(B) Molécula de ADN recombinante
Figura 14.13 Construcción y clonación de plásmidos recombinantes. La construcción y clonación de un vector de plásmido recombinante utilizando un
gen de resistencia a antibióticos para seleccionar la presencia del plásmido. La interrupción del gen lacZ por el ADN clonado se utiliza para seleccionar
vectores con inserto. La escala de los extremos cohesivos de los fragmentos y el plásmido se ha ampliado para ilustrar el apareamiento de bases complementarias.
(a) La micrografía electrónica muestra un plásmido que ha sido cortado por una enzima de restricción y un fragmento de ADN donante. (b) La micrografía muestra
un plásmido recombinante. (c) Después de la transformación, las células de E. coli se cultivan en placas en un medio que contiene ampicilina y X-Gal para que
solo crezcan los transformantes resistentes a la ampicilina; X-Gal permite la visualización de colonias que se transformaron con vector recombinante (vector
inserto, colonias blancas).
369
los fagos infectan E. coli, los vectores de fagos se han diseñado para un 3. ¿Qué es la electroforesis? ¿Cómo se usa en el Southern Blot?
número de diferentes especies de hospedadores bacterianos. Virus de bacterias y 4. ¿En qué se diferencian los plásmidos, los cósmidos y los cromosomas artificiales? Qué son
Archaea (capítulo 17) algunos de los diferentes propósitos servidos por cada uno?
5. Explique la selección por resistencia a los antibióticos seguida de azul versus blanco
cósmidos selección de colonias que contienen plásmidos recombinantes. ¿Por qué ambos deben
Los cósmidos se desarrollaron cuando quedó claro que se necesitaban vectores de ¿Se utilizará la selección de antibióticos y la detección de colores? ¿Qué
clonación que pudieran tolerar fragmentos más grandes de clones. concluiría si, después de transformar una mezcla de ligadura en E. coli, solo azul
se obtuvieron colonias?
ADN (tabla 14.3). A diferencia de los fagos y los plásmidos, los cósmidos no
existen en la naturaleza. En su lugar, estos vectores diseñados han sido construidos para
contener características de ambos. Los cósmidos tienen una selección
marcador y MCS de plásmidos, y un sitio cos de fago. En 14.6 CONSTRUCCIÓN DE BIBLIOTECAS GENÓMICAS
fago, el sitio cos es donde múltiples copias del genoma del fago
Hay varias formas en las que se puede obtener el ADN a clonar. Puede sintetizarse por PCR
están vinculados antes del envasado. La escisión en los sitios cos produce genomas únicos
o puede localizarse en el
que tienen el tamaño adecuado para el empaquetado. Los cósmidos toman
cromosoma por transferencia de Southern. Sin embargo, la amplificación por PCR
ventaja del hecho de que el único requisito para las cabezas de fago
de un gen requiere el conocimiento previo de su secuencia de nucleótidos (o
para empaquetar el ADN son dos sitios cos en una molécula de ADN lineal o un
al menos las secuencias que flanquean el gen), y una sonda adecuada debe
sitio cos único en uno circular. Mientras el cósmido con su
obtenerse para la transferencia de Southern. En ambos casos, una vez que el ADN
El ADN clonado tiene el tamaño apropiado (alrededor de 37 a 52 kb), será
se purifica el fragmento, se clona utilizando un procedimiento como el descrito para los
empaquetado. Luego, el fago se usa para introducir el recombinante
plásmidos recombinantes y que se muestra en la figura 14.13.
ADN en E. coli, donde se replica como un plásmido. Bacteriófagos templados y lisogenia
Sin embargo, ¿qué pasaría si los investigadores quisieran clonar un gen pero tuvieran
(sección 17.5)
¿No tienes idea de cuál podría ser su secuencia de ADN? Una biblioteca genómica debe
luego ser construido y proyectado.
Cromosomas artificiales
El objetivo de la construcción de una biblioteca genómica es clonar el genoma de un
Los cromosomas artificiales son vectores de clonación especiales que se utilizan cuando
organismo como pequeños fragmentos en vectores separados. Idealmente, se representa
fragmentos particularmente grandes de ADN deben ser clonados, como cuando
todo el genoma; es decir, la suma de los
construir una biblioteca genómica o al secuenciar un organismo
diferentes fragmentos es igual a todo el genoma. De esta forma concreta
genoma completo. De hecho, los cromosomas artificiales bacterianos (BAC)
se pueden analizar y aislar grupos de genes. La construcción de
fueron cruciales para la finalización oportuna del proyecto del genoma humano. Al igual que
una biblioteca genómica comienza con la división del genoma en pequeños
los cromosomas naturales, los cromosomas artificiales se replican
piezas por una endonucleasa de restricción (figura 14.15). estos genómicos
una sola vez por ciclo celular. Cromosomas artificiales de levadura (YAC)
se desarrollaron primero y consisten en un telómero de levadura en cada extremo
BsaH I
(TEL), una secuencia de centrómero (CEN), un origen de replicación de levadura
BstE I ApaL I BamH I
(ARS, secuencia de replicación autónoma ), un marcador seleccionable
hpa yo Esf I Hind III
como URA3, y un MCS para facilitar la inserción de extranjeros pci yo
Sfi yo
aCZ
yo
Cos
ADN (figura 14.14). Los YAC se utilizan cuando son extraordinariamente grandes Ah, yo
Esca yo
Se clonarán piezas de ADN (hasta 1.000 kb; tabla 14.3). BAC
R
fueron desarrollados, en parte, porque los YAC tienden a ser inestables y
puede recombinarse con los cromosomas del huésped, reorganizando así el
ADN clonado. Aunque los BAC aceptan insertos de ADN más pequeños que pBeloBAC II
YAC (hasta 300 kb), generalmente son más estables. Los BAC son
basado en el factor de fertilidad F de E. coli. El ejemplo que se muestra en
La figura 14.14 es típica porque incluye genes que aseguran que se formará un complejo de
B (7507 pb)
mi
I 2r
pags
replicación (repE), así como la partición adecuada de un BAC recién replicado en cada célula so rmi
hija (sopA,
A
pags
sopB y sopC). También incluye características comunes a muchos plásmidos, como un MCS
dentro del gen lacZ para la colonia azul/blanca. (a) Cromosoma artificial bacteriano (BAC)
tamizaje, y un marcador seleccionable, en este caso para resistencia a

el antibiótico cloranfenicol (CmR).
TELÉFONO TRP1 ARS CEN MCS URA3 TELÉFONO

1. ¿Cómo se sintetizan los oligonucleótidos? ¿Qué es el mutágeno dirigido al sitio?
hermana? ¿Cómo podría usarse la mutagénesis dirigida al sitio para encontrar los nucleótidos?
(b) Cromosoma artificial de levadura (YAC)
que codifican el sitio activo de una enzima?
2. Describa brevemente la reacción en cadena de la polimerasa. Explique las diferencias ser
Figura 14.14 Los cromosomas artificiales se pueden usar como
tween reacciones en las que los productos se recogen después de un número definido
Vectores de clonación. (a) El cromosoma artificial bacteriano
de ciclos y PCR en tiempo real. Sugiera una aplicación de cada enfoque.
pBelaBACIII y (b) un cromosoma artificial de levadura. Ver texto para más detalles.
Expresión de genes extraños en células huésped 371
Luego, los fragmentos se clonan en vectores y se introducen en un será degradado y/o recombinado con el cromosoma huésped.
microbio o empaquetado en partículas de fago que se utilizan para infectar el Hay varias formas de introducir ADN recombinante en un huésped.
anfitrión (figura 14.16). En cualquier caso, muchos miles de diferentes microbio. La transformación y la electroporación son dos comúnmente
se crean clones, cada uno con un inserto de ADN genómico diferente. técnicas empleadas. A menudo, el microbio huésped no tiene la
Para seleccionar el clon deseado de la biblioteca, es necesario saber capacidad de transformarse naturalmente. Este es el caso de E. coli
algo sobre la función del gen objetivo o elemento genético. y la mayoría de las bacterias gramnegativas, así como muchas grampositivas
Si la biblioteca genómica se ha insertado en un microbio que expresa el gen extraño, bacterias En estos casos, las células huésped pueden volverse competentes
puede ser posible analizar cada clon para por tratamiento con cationes divalentes y transformados artificialmente por
una proteína o fenotipo específico. Por ejemplo, si uno está estudiando un golpe de calor a las células. Transformación de ADN (sección 13.8)
bacteria del suelo recién aislada y quiere encontrar el gen que codifica una enzima La electroporación es una técnica que ha ganado popularidad debido a su
necesaria para la biosíntesis del aminoácido ala nueve, la biblioteca podría expresarse simplicidad y amplia aplicación a una serie de host
en una E. coli o Bacillus subtilis organismos, incluidas las células vegetales y animales. En este procedimiento,
auxótrofo de alanina (figura 14.15). Recuerde que un auxótrofo de alanina las células se mezclan con el ADN recombinante y se exponen a un breve
requiere la adición de este aminoácido al medio. Siguiente pulso de electricidad de alto voltaje. La membrana plasmática se vuelve
introducción del vector de la biblioteca genómica en las células huésped, aquellas que temporalmente permeable y las moléculas de ADN son absorbidas por algunos
ahora crecer sin alanina serían buenos candidatos para el fragmento de la biblioteca de las células Luego, las células se cultivan en medios que seleccionan el
genómica que posee el gen biosintético de alanina presencia del vector de clonación como se ha descrito previamente.
o grupo de genes. El éxito con este enfoque depende de la suposición de que la función Con la excepción de la levadura, la inserción de ADN en las células eucariotas
del producto del gen clonado es similar en ambos es a menudo más difícil y menos eficiente. El enfoque más directo
organismos Si este no es el caso, el huésped debe ser de la misma especie. es la microinyección, en la que el material genético se micropipeta en
a partir de la cual se preparó la biblioteca. En este ejemplo, un mutante bacteriano del la célula huésped. Luego, el ADN es absorbido por el núcleo y estable
suelo que carece del gen en cuestión (p. ej., un auxótrofo de alanina) incorporado al genoma del huésped. Cuando esto se hace en un fertilizado
se utiliza como huésped de la biblioteca genómica. La complementación genética óvulo de mamífero, el óvulo se trasplanta al útero de la
de una deficiencia en la célula huésped a veces se denomina rescate fenotípico. animal huésped donde se desarrollará en un animal transgénico. Los ratones
Detección y aislamiento de mutantes (sección 13.2; ver también figura 13.7) transgénicos se han convertido en una herramienta fundamental para la investigación biomédica.
Alternativamente, la biblioteca se puede clonar en un vector de fago (figura 14.16). Una de las técnicas más efectivas para insertar ADN en células eucarióticas es
Las placas resultantes luego contienen partículas de fago. disparar microproyectiles recubiertos con ADN en
cuyos genomas incluyen los fragmentos de ADN clonados. las placas células vegetales y animales. La pistola genética, desarrollada por primera vez en Cornell
se analizan mediante una técnica basada en la hibridación de una sonda de University, funciona un poco como una escopeta. Una ráfaga de gas comprimido lanza
oligonucleótidos con el ADN diana, muy similar a la transferencia Southern. una rociada de mosaicos de microproyectos metálicos recubiertos de ADN dentro de las
Sin embargo, en este caso, el ADN se transfiere directamente desde el Petri células. El dispositivo se ha utilizado para transformar el maíz
placa al filtro, que luego se incuba con la sonda marcada. Si el y producir plantas de maíz fértiles con genes extraños. Otras armas
Si se conoce la secuencia de ácido nucleico del ADN que se va a clonar, este enfoque utilizar descargas eléctricas para impulsar los proyectiles recubiertos de ADN.
también se puede usar para rastrear colonias transformadas. Estas armas a veces se denominan dispositivos biolísticos, un nombre derivado de
Si se prepara una biblioteca genómica a partir de un eucariota en un esfuerzo biológico y balístico. Se han utilizado para transformar microorganismos (levadura, el
para aislar un gen estructural, normalmente se construye una biblioteca de ADNc. moho Aspergillus y el protista
De esta forma, los intrones no están presentes en la biblioteca genómica. En lugar de Chlamydomonas), células de mamíferos y una variedad de células vegetales
solo se clonan las regiones codificantes de proteínas del genoma. ADNc (maíz, algodón, tabaco, cebolla y chopo).
se prepara (figura 14.4) y se clona en un vector adecuado. Después Las células vegetales también se pueden transformar con vectores derivados de
la biblioteca se introduce en el microbio huésped, se puede examinar la bacteria Agrobacterium (pág. 378). Los virus son cada vez más
por rescate fenotípico o por hibridación con un oligonucleótido se utiliza para insertar los genes deseados en las células eucariotas. Por ejemplo,
como se describió anteriormente. En algunos casos, ni el rescate fenotípico ni los genes pueden colocarse en un retrovirus, que luego infecta al objetivo
es posible la hibridación con una sonda. En tales casos, el investigador debe desarrollar célula e integra una copia de ADN de su genoma de ARN en el huésped
una forma novedosa que se adapte al conjunto particular de cromosoma. Los adenovirus también pueden transferir genes a células animales.
circunstancias para examinar la biblioteca genómica. Los baculovirus recombinantes infectarán las células de insectos y promoverán la
producción de muchas proteínas. Virus eucarióticos y otros agentes infecciosos
acelulares (capítulo 18)
14.7 INSERCIÓN DE RECOMBINANTE
ADN EN LAS CÉLULAS HUÉSPEDES

14.8 EXPRESIÓN DE GENES EXTRAÑOS
En los procedimientos de clonación, la selección de un organismo huésped es tan
EN LAS CÉLULAS HUÉSPEDES
importante como la elección del vector de clonación. E. coli es la más frecuente
huésped procariótico y S. cerevisiae es el más popular entre los eu cariotas. Los Cuando un gen de un organismo se clona en otro, se dice
microbios huéspedes que han sido diseñados para carecer de enzimas de restricción y ser un gen heterólogo. Los genes heterólogos no siempre son
la enzima de recombinación RecA hacen expresada en la célula huésped sin modificación adicional del vector recombinante.
mejores anfitriones porque es menos probable que el ADN recién adquirido Para ser transcrito, el gen recombinante debe
plásmido
ADN extraño
Escisión de
AmpR Escisión de
enzimas de restricción
enzimas de restricción
Fragmentos a B
AmpR
plásmidos
recombinantes a B
AmpR AmpR
Transformar auxótrofo con plásmidos
a B
Placa de bacterias y crecimiento de clones separados
Seleccionar transformantes Placa maestra

en medio que contiene
ampicilina
Réplica de placa en medio sin alanina pero

con ampicilina
Criba los transformantes de la Sólo crecen los transformantes que

biblioteca genómica para clonar contienen el gen biosintético de alanina
con el gen biosintético de alanina. clonado.
Figura 14.15 Construcción de una biblioteca genómica y detección mediante rescate fenotípico. Una biblioteca genómica se crea mediante la
clonación de fragmentos del genoma completo de un organismo en un vector. Por simplicidad, solo se muestran dos posibles vectores recombinantes. En
realidad, se genera una gran mezcla de clones. Esta mezcla de clones se introduce luego en un huésped adecuado. El rescate fenotípico es una forma de
seleccionar los clones para el gen de interés. Se trata de utilizar un huésped con un defecto genético que puede ser complementado o “rescatado” por la
expresión de un gen específico que ha sido clonado.
tienen un promotor que es reconocido por la ARN polimerasa del huésped. Los problemas de expresión de genes recombinantes en células
La traducción de su ARNm depende de la presencia de secuencias líder y huésped se superan en gran medida con la ayuda de vectores de clonación
modificaciones de ARNm que permitan la unión adecuada al ribosoma. especiales llamados vectores de expresión. Estos vectores contienen las
Estos son bastante diferentes en eucariotas y procariotas. señales de inicio de transcripción y traducción necesarias además de los
Por ejemplo, si el huésped es un procariota y el gen se ha clonado a partir sitios policonectores convenientes. Algunos vectores de expresión contienen
de un eucariota, se debe proporcionar un líder procariota y eliminar los regiones reguladoras del operón lac para que la expresión de los genes
intrones. clonados pueda controlarse de la misma manera que el operón.
Expresión de genes extraños en células huésped 373
ADN celular Clon

bacteriófago
ADN deseado
Escindir el ADN Separar con

con restricción restricción
enzima enzima
Ubique el clon
deseado de
Fragmentos posición de
radioactividad
Ligar en filtro
Película
ADN recombinante
ADN ligado
empaquetado in vitro
Mezcla de fagos híbridos
Filtrar Auto
radiografía
Placa de fagos recombinantes con
bacterias huésped para obtener placas
césped
clones de fagos
de bacterias
Añadir sonda
etiquetada e
incubar
Fago en placa
Aislamiento de clones de fagos clones para ser Membrana de nailon
Biblioteca de clones de fagos analizado con

bacterias huésped.
Después de la incubación,
superponer con
(a) filtrar. (B)
Figura 14.16 Uso del fago lambda como vector. (a) La preparación de una biblioteca genómica. Cada placa en el césped bacteriano
contiene un clon recombinante que lleva un fragmento de ADN diferente. (b) Detección y clonación del fago recombinante deseado.
Somatostatina, la hormona peptídica hipotalámica de 14 residuos se inserta en el vector aprovechando sus extremos cohesivos (figura
que ayuda a regular el crecimiento humano, proporciona un ejemplo de útil 14.17). Por último, un fragmento que contiene la parte inicial de la lac
clonación y producción de proteínas. El gen de la somatostatina fue operón (incluyendo el promotor, operador, sitio de unión al ribosoma,
sintetizado inicialmente por métodos químicos. Además de las 42 bases y gran parte del gen -galactosidasa) se insertó aguas arriba de,
codificando para la somatostatina, el polinucleótido contenía un codón o en el extremo 5' del gen de la somatostatina. El plásmido ahora contenía
para metionina en el extremo 5' (que corresponde al extremo N-terminal el gen de la somatostatina fusionado en la orientación adecuada al
del péptido) y dos codones de terminación en el extremo opuesto. porción restante del gen de -galactosidasa.
Para ayudar a la inserción en el vector plásmido, los extremos 5' del gen Después de la introducción de este plásmido recombinante en E. coli,
sintético se extendieron para formar extremos cohesivos complementarios a el gen de la somatostatina se transcribió con la -galactosidasa
los formados por las enzimas de restricción EcoRI y BamHI . A fragmento de gen para generar ARNm. Proteínas formadas por traducción
El vector de clonación del plásmido se cortó con EcoRI y BamHI para que consiste en el péptido hormonal unido a la -galactosidasa
eliminar una parte del ADN del plásmido. El gen sintético fue entonces fragmento por un residuo de metionina. El bromuro de cianógeno escinde
14.1 Visualización de proteínas con fluorescencia verde

¿Qué hace una medusa que vive en las frías aguas del norte tificado otras proteínas, como FtsA, MinC, MinD y MinE, que son
Pacífico tiene que ver con la biotecnología? Resulta que mucho. La medusa, Aequorea también se necesita para la citocinesis. Tales estudios han llevado al desarrollo
victoria, produce una proteína llamada proteína verde fluorescente (GFP) que los de modelos que predicen los eventos necesarios para la citocinesis. El ciclo celular
científicos han adoptado para visualizar procariótico (sección 6.1)
expresión génica y localización de proteínas en células vivas. GFP está codificado por un Un tipo especial de división celular que ocurre durante la formación de
solo gen que, cuando se traduce, sufre una modificación autocatalizada para generar una una endospora se ha estudiado intensamente en Bacillus subtilis. En esto
fuerte fluorescencia verde. caso, la formación del tabique no genera dos hijos de igual tamaño
Esto significa que es fácil de clonar y expresar en cualquier organismo. células. En cambio, la división asimétrica da lugar a dos descendientes diferentes: la
Y GFP ya no es solo verde; mutagénesis dirigida al sitio de la endospora y la célula madre. división celular asimétrica
El gen GFP ha generado una variedad de proteínas que brillan a lo largo significa que en lugar de ensamblar FtsZ en el centro de la celda, es
el espectro azul-verde-amarillo. polimeriza en el polo que da lugar a la endospora. Originalmente,
Una aplicación GFP ampliamente utilizada es marcar proteínas para que su colocación se planteó la hipótesis de que la célula logra esto al evitar FtsZ
celular, o localización, pueda verse con un microscopio óptico. ensamblaje del anillo en el medio de la celda mientras se activan simultáneamente los
Anteriormente, la microscopía electrónica (ME) era el único método por el cual sitios de polimerización de FtsZ cerca de los polos (ver la figura del recuadro).
se podía visualizar la ubicación de las proteínas. Preparación de muestras para La fusión del gen estructural ftsZ de B. subtilis con el gen que codifica GFP generó
EM implica un tratamiento severo con solventes y deshidratación celular— un resultado sorprendente: el despliegue de FtsZ en la célula
procedimientos que pueden dañar las estructuras celulares y producir artefactos. En polo es un proceso mucho más dinámico. Fotomicroscopía de lapso de tiempo
Por el contrario, cuando una proteína se marca con GFP, el momento de la producción de muestra que cuando la célula cambia de crecimiento vegetativo y binario
la proteína y su localización se pueden seguir en las células vivas. Para lograr esto, un gen fisión a la formación de endosporas, FtsZ forma un filamento en forma de espiral que
estructural se fusiona genéticamente con el gen GFP. se desplaza desde el centro de la célula hacia los polos. Un análisis cuidadoso revela que
para crear una proteína quimérica, una proteína que consta de dos partes: la muchas células parecen tener espirales FtsZ que son más abundantes en una
proteína estructural en estudio y GFP. Por supuesto, el cuidado debe ser la mitad de la celda. Esto sugiere que la acumulación de un nivel crítico de
tomado para asegurar que la fusión de proteínas todavía funciona como el original FtsZ en un polo antes que otro puede determinar la ubicación de las endosporas.
proteína. Una forma de hacer esto es probar el rescate fenotípico de un mutante que carece Seguramente las fusiones de GFP ayudarán a resolver esta y otras cuestiones relacionadas
del gen estructural de interés. con la localización de proteínas. Sistemas regulatorios globales: Esporulación en
La tecnología de fusión de proteínas GFP se ha utilizado para examinar algunos de Bacillus subtilis (sección 12.5)
las preguntas más básicas de la biología. Un ejemplo es la división celular, o
Ben-Yehuda, S. y Losick, R. 2002. La división celular asimétrica en B. subtilis
citocinesis. La evidencia genética muestra claramente que la proteína FtsZ similar a la implica un intermediario en forma de espiral de la proteína citocinética FtsZ. Célula. 109:
tubulina es clave para la formación de un nuevo tabique en la mayoría de las células procariotas. 257–66.
Del mismo modo, el aislamiento y análisis de mutantes de división celular ha iden
enlaces peptídicos en los residuos de metionina. El tratamiento de las proteínas de fusión con bromuro de
1. ¿Qué es una biblioteca genómica? Describa dos formas en que una biblioteca genómica
cianógeno rompió las cadenas peptídicas en la metionina y liberó la hormona (figura 14.18). Una vez libre,
podría ser examinado para el clon de interés.
el
2. ¿Qué es un animal transgénico? Describir cómo la electroporación y las pistolas de genes
los péptidos pudieron plegarse correctamente para volverse activos. Debido a que la producción de la
se utilizan para insertar genes extraños en células eucarióticas. ¿Qué otros enfoques
proteína de fusión estaba bajo el control del operón lac ,
¿puede ser usado? ¿Cómo se transforman las bacterias?
podría regularse fácilmente. Se han producido muchas proteínas.
3. ¿Cómo se puede evitar que el ADN recombinante experimente una recombinación en un
desde la síntesis de la somatostatina. Los ejemplos incluyen humanos
célula huésped bacteriana?
hormona del crecimiento, interferones y proteínas utilizadas en la producción de vacunas (tabla 14.4).
4. Enumere varias razones por las que un gen clonado podría no expresarse en un huésped
Además, la fusión de una proteína con otra tiene
célula. ¿Qué es un vector de expresión?
convertirse en una herramienta de investigación útil (Técnicas y Aplicaciones 14.1).
Aplicaciones de la Ingeniería Genética 375
(C)
(a)
Formación de tabiques asimétricos en

Bacillus subtilis. (a) La noción originalmente
hipotetizada de que FtsZ fue redirigido a los polos
de las celdas. ( b ) El análisis de fusión FtsZ-GFP (D)
revela que FtsZ forma estructuras en espiral que
migran a los polos. ( c ) Una fotomicrografía de
células B. subtilis que expresan la proteína de fusión
FtsZ-GFP mientras crecen vegetativamente, por lo
tanto, experimentan fisión binaria. (d) FtsZ-GFP está
deslocalizado y forma una espiral hacia los polos en
la celda en la mitad superior de la imagen, mientras
que la celda debajo ha formado una celda intermedia
pulpa. (e) La celda de la derecha ha formado un
tabique asimétrico en preparación para la
esporulación, mientras que la celda de la izquierda
ha formado una espiral FtsZ-GFP. Cada celda tiene
entre 3 y 5 m de longitud. (B) (mi)
14.9 APLICACIONES DE LA INGENIERÍA GENÉTICA (tabla 14.4). Esto es particularmente cierto en el caso de sustancias que
anteriormente solo podían obtenerse de tejidos humanos. Por ejemplo, en el
La ingeniería genética y la biotecnología seguirán contribuyendo en el futuro pasado, la hormona del crecimiento humano para el tratamiento del enanismo
a la medicina, la industria y la agricultura, así como a la investigación básica. pituitario se extraía de las glándulas pituitarias obtenidas durante las autopsias
En esta sección se discuten brevemente algunas aplicaciones prácticas. y solo estaba disponible en cantidades limitadas. Se han clonado la
interleucina-2 (una proteína que ayuda a regular la respuesta inmunitaria) y el
factor VIII de coagulación de la sangre, así como una serie de otros péptidos
Aplicaciones médicas y proteínas importantes. También es posible usar plantas modificadas
La producción de proteínas médicamente útiles como la somatostatina, la genéticamente para producir productos genéticos clonados, como vacunas
insulina, la hormona del crecimiento humano y algunos interferones (moléculas orales. Los ratones modificados genéticamente producen anticuerpos
de señalización del sistema inmunológico) es de gran importancia práctica. monoclonales humanos. Las vacunas sintéticas, por ejemplo, las vacunas contra la mala
EcoRI ahora se utiliza para examinar a las personas y el suministro de sangre en busca de
BamHI
agentes infecciosos como el SIDA y el virus del Nilo Occidental. Individuos
se puede examinar en busca de genes mutantes; esto es común en las pruebas de
abr
EcoRI BamHI los futuros padres, así como en las pruebas prenatales. Un área creciente de
tetra intervención médica es la terapia génica, que busca reemplazar
pBR322 SRA genes defectuosos con genes de tipo salvaje. Aquí lo normal
El gen se entrega más comúnmente en un virus que ha sido diseñado para ingresar
somatostatina
a las células huésped sin causar daño. La terapia génica ha
gene
recibió mucha atención en la prensa popular por varias razones.
EcoRI La terapia génica puede curar enfermedades genéticas debilitantes que actualmente
BamHI
no son curables, ofreciendo esperanza a los pacientes y sus seres queridos.
Pero algunos ensayos clínicos de terapia génica han fracasado y unos pocos han
EcoRI
BamHI provocó la muerte o lesiones graves a los pacientes voluntarios. También el
El uso potencial de la terapia génica en células de la línea germinal ha generado
S
METRO
mucha controversia. La terapia génica de línea germinal cambia la composición

abr
EcoRI EcoRI genética de los gametos o los óvulos fertilizados. Así la genética
tetra el cambio se transmitiría a las generaciones posteriores: la línea germinal

la terapia génica introduce cambios hereditarios. Uno puede imaginar dos
control lac + gen ÿ-gal aplicaciones de la terapia de línea germinal: (1) para corregir un defecto genético
de un embrión que si no se modifica daría lugar a una debilitante
o enfermedad letal (p. ej., la enfermedad de Tay Sachs, una enfermedad neurodegenerativa
EcoRI
condición con una tasa de mortalidad del 100% a los 5 años); o (2) para producir
un "bebé de diseño" que lleva algún fenotípico predeterminado
EcoRI rasgo. Los temores de esto último han llevado a muchos gobiernos a prohibir la
BamHI
terapia génica de línea germinal en humanos. Por el contrario, la célula somática
S
METRO
EcoRI
La terapia génica no es hereditaria y trata solo las células de la zona afectada.
M = codón de metionina
Organo. Por ejemplo, ensayos de terapia génica con fibrosis quística (FQ)
S = codón de parada
los pacientes han buscado entregar un gen funcional al tejido pulmonar.
tetra
Los pacientes con FQ producen grandes cantidades de secreciones respiratorias
y están plagados de infecciones recurrentes por Pseudomonas aeruginosa ; el
abr promedio de vida de un paciente con FQ es de unos 30 años. Desafortunadamente,
la terapia génica hasta ahora solo ha proporcionado resultados localizados y
alivio a corto plazo para estos pacientes.
Los desafíos de la terapia génica son muchos; sin embargo, los beneficios
Figura 14.17 Clonación del gen de la somatostatina. Un potenciales son tan grandes que los biotecnólogos médicos perseveran. Uno de los
descripción general del procedimiento utilizado para sintetizar un plásmido mayores obstáculos es el método de entrega del
recombinante que contiene el gen de la somatostatina. abr , Tetr , ampicilina y gen de tipo salvaje. Un enfoque consiste en eliminar las células del paciente,
genes de resistencia a la tetraciclina, respectivamente. modificarlos genéticamente y cultivarlos in vitro. Una vez suficiente
número de células modificadas genéticamente disponibles, estas células
siendo desarrollado con técnicas recombinantes. Un recombinante se devuelven al paciente. Estas células pueden ser células adultas diferenciadas o
La vacuna contra la hepatitis B está disponible comercialmente. Control de epidemias: células madre. Después de la manipulación genética, las células
Vacunas e inmunización (sección 36.8); Técnicas y Aplicaciones 32.2: puede introducirse directamente en el órgano enfermo o infundirse en
Tecnología de anticuerpos monoclonales la sangre del paciente, de la que deben migrar al afectado
La ganadería se ha vuelto importante en la biotecnología médica sitio. Actualmente, hay al menos 15 ensayos clínicos que prueban adultos
mediante el uso de un enfoque a veces llamado molecular terapia con células madre : terapia génica somática que usa células madre adultas.
Farmacia Por ejemplo, los embriones de cerdo inyectados con genes de hemoglobina Más controvertido es el uso de células madre embrionarias. Estas
humana se convierten en cerdos transgénicos que sintetizan las células se recolectan de embriones de 5 días de edad obtenidos de clínicas de
hemoglobina. Los planes actuales son purificar la hemoglobina y usar fertilidad. A diferencia de las células madre adultas, las células madre embrionarias son
como sustituto de la sangre. Un cerdo podría producir 20 unidades de sustituto de pluripotentes: pueden diferenciarse en cualquier tipo de célula (p. ej., cardiacas,
sangre al año. Técnicas algo similares han producido cabras transgénicas cuya musculares, sanguíneas). Los científicos creen que estas células son clave para
leche contiene hasta 3 gramos de tejido humano comprender el desarrollo embrionario y tal vez pueda producir
activador del plasminógeno (TPA) por litro. El TPA disuelve los coágulos de sangre nuevas terapias importantes.
y se utiliza para tratar pacientes cardíacos. Finalmente, es importante entender la diferencia entre
Sin embargo, la ingeniería genética tiene mucho más que ofrecer a la medicina clonación terapéutica y clonación reproductiva. Terapéutico
que la producción de productos recombinantes. Las sondas son la clonación es lo que se ha descrito: el uso de ingeniería genética
Aplicaciones de la Ingeniería Genética 377
sitio EcoRI codón met
AATTC ATG
ÿ-gal GCT
GGT
TGT
TTT
pBR322 mi
DN / A
sitio BamHI codones de parada
Expresión génica in vivo
H2N Met–Ala–Gly–Cys–Lys–Asn–Phe–Phe
SH TRP
SH Lys
HOOC–Cys–Ser–Thr–Phe–Thr
ÿ-gal
som
H2N
Met–Ala–Gly–Cys–Lys–Asn–Phe–Phe
S TRP
S Lys
HOOC–Cys–Ser–Thr–Phe–Thr
Escisión de bromuro de cianógeno
de enlace peptídico
Fragmentos de ÿ-Gal + NH2–Ala–Gly–Cys–Lys–Asn–Phe–Phe

S TRP
S Lys
HO–Cys–Ser–Thr–Phe–Thr
Somatostatina activa
Figura 14.18 Síntesis de somatostatina por E. coli recombinante. Escisión de bromuro de cianógeno en el residuo de metionina
libera la hormona activa del fragmento -galactosidasa. El gen y las secuencias asociadas están sombreados en color. codones de terminación, los
el codón especial de metionina y los sitios de enzimas de restricción están encerrados en recuadros.
ing para alterar el genotipo de una célula y devolver (o introducir) las células reemplazando el núcleo de un óvulo no fertilizado con un núcleo
modificadas a un paciente. Se espera que la clonación terapéutica pueda alguna vez de una célula somática. Este embrión se implanta en el interior de una hembra.
día proporcionar tratamientos (si no curas) para condiciones como la enfermedad útero con la intención de crear una nueva vida. La clonación reproductiva humana
de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer y las lesiones de la médula espinal. Esta está legalmente prohibida en la mayor parte del mundo.
difiere de la clonación reproductiva en la que se crea un embrión El gobierno de los Estados Unidos no financia la clonación terapéutica que utiliza
tecnología de células madre embrionarias, aunque algunos estados apoyan

Cuadro 14.4 Algunos péptidos y proteínas humanos
tal investigación.
Sintetizado por Ingeniería Genética
péptido o proteína Uso potencial

Aplicaciones Agrícolas
1-antitripsina Tratamiento del enfisema Los genes clonados se pueden insertar en células vegetales y animales. A
-, -, e -interferones Como agentes antivirales, forma popular de insertar genes en las plantas es con un Ti recombinante
antitumorales y antiinflamatorios. plásmido (plásmido inductor de tumores) obtenido de la bacteria
Factor VIII de coagulación de la sangre Tratamiento de la hemofilia Agrobacterium tumefaciens (Técnicas y Aplicaciones 14.2).
calcitonina Tratamiento de la osteomalacia También es posible donar genes formando protoplastos de células vegetales,
Factor de crecimiento epidérmico Tratamiento de heridas haciéndolos permeables al ADN y luego agregando el ADN recombinante deseado.
eritropoyetina Tratamiento de la anemia La pistola de genes también se utiliza en el
Hormona de crecimiento Promoción del crecimiento producción de plantas transgénicas. Asociaciones de microorganismos con plantas
Insulina tratamiento de la diabetes vasculares: Agrobacterium (sección 29.5)
Tratamiento de trastornos inmunológicos. La ingeniería genética ha hecho que las plantas sean resistentes al estrés
Interleucinas-1, 2 y 3
y tumores ambiental. Por ejemplo, los genes para la desintoxicación de glifosato
Tratamiento para el cáncer

herbicidas fueron aislados de Salmonella, clonados e introducidos
Factor estimulante de
en células de tabaco utilizando el plásmido Ti. Plantas regeneradas a partir de
colonias de macrófagos
las células recombinantes fueron resistentes al herbicida. Las variedades de algodón
relajante Ayuda al parto
resistentes a los herbicidas y el maíz transgénico fértil también tienen
Albúmina de suero Suplemento de plasma
sido desarrollado. Esto es de gran importancia porque muchos
somatostatina Tratamiento de la acromegalia
los cultivos sufren estrés cuando son tratados con herbicidas. plantas resistentes
estreptoquinasa Anticoagulante
no están estresados por los productos químicos que se utilizan para controlar las malas hierbas.
Activador tisular del plasminógeno Anticoagulante
Los agricultores estadounidenses cultivan cantidades sustanciales de cultivos
Factor de necrosis tumoral Tratamiento para el cáncer
genéticamente modificados (GM). Alrededor de un tercio del maíz, la mitad de la soja,
14.2 Tumores vegetales y el ingeniero genético de la naturaleza
Un plásmido de la bacteria patógena de plantas Agrobacterium tume faciens es responsable ción de células vegetales cultivadas resultó en la transferencia del gen de la levadura.
de gran parte del éxito en la ingeniería genética de Desde entonces, se han realizado muchas modificaciones del plásmido Ti para
plantas La infección de las células normales por la bacteria las transforma en mejorar sus características como vector. Por lo general, uno o más antibióticos
células tumorales y la enfermedad de la agalla de la corona se desarrolla en plantas dicotiledóneas se agregan genes de resistencia, y el T-DNA no esencial, que incluye
como uvas y plantas ornamentales. Normalmente, la vesícula biliar o el tumor se se eliminan los genes inductores de tumores. Los genes necesarios para la infección real
ubicado cerca de la unión de la raíz y el tallo de la planta. El tumor se forma de la célula vegetal por el plásmido se conservan. ADN-T
debido a la inserción de genes en el genoma de la célula vegetal, y sólo también se ha insertado en plásmidos de E. coli para producir vectores de clonación que
cepas de A. tumefaciens que poseen un gran plásmido conjugativo llamado pueden moverse entre bacterias y plantas (ver la figura del recuadro). los
el plásmido Ti son patógenos (ver sección 29.5 y figura 29.19). los gen o genes de interés se empalman en la región de T-DNA entre
El plásmido Ti porta genes para la virulencia y la síntesis de sustancias. las repeticiones directas. Luego, el plásmido se devuelve a A. tumefaciens,
involucrados en la regulación del crecimiento de las plantas. Los genes que inducen la las células de cultivo vegetal se infectan con la bacteria y los transformantes
formación de tumores residen entre dos secuencias de repetición directa de 23 pares de se seleccionan mediante la detección de resistencia a los antibióticos (u otro rasgo
bases. Esta región se conoce como T-DNA y es muy similar a un codificado por T-DNA). Finalmente, se regeneran plantas enteras a partir de la
transposón T-DNA contiene genes para la síntesis del crecimiento vegetal células transformadas. De esta manera, varias plantas se han vuelto resistentes a los
hormonas (una auxina y una citoquinina) y un derivado de aminoácido herbicidas. Microbios como productos: bioplaguicidas (sección 41.8)
llamado opine que sirve como fuente de nutrientes para las bacterias invasoras. Desafortunadamente, el plásmido Ti de A. tumefaciens no puede transferirse
En las células vegetales enfermas, el ADN-T se inserta en los cromosomas en naturalmente a plantas monocotiledóneas como maíz, trigo y
varios sitios y se mantiene estable en el núcleo celular. otros granos. Se ha utilizado únicamente para modificar plantas como la patata,
Cuando se reconoció la naturaleza molecular de la enfermedad de la agalla de la corona, tomate, apio, lechuga y alfalfa. Sin embargo, la modificación genética de
quedó claro que el plásmido Ti y su T-DNA tenían un gran potencial el plásmido Ti para que pueda ser transferido productivamente a plantas monocotiledóneas
como vector para la inserción de ADN recombinante en cromosomas vegetales. En uno de es un área activa de investigación. La creación de nuevos
los primeros experimentos, el gen de la alcohol deshidrogenasa de levadura Los procedimientos para insertar ADN en células vegetales bien pueden conducir al uso
se añadió a la región T-DNA del plásmido Ti. infección posterior de técnicas de ADN recombinante con muchas plantas de cultivo importantes.
y una fracción significativa de los cultivos de algodón son modificados genéticamente. El uso de fondos federales de EE.UU. para el establecimiento de cualquier
algodón y el maíz son resistentes a herbicidas e insectos. Los frijoles de soya tienen cultivos o líneas de células madre embrionarias. Sin embargo, en 2004, California aprobó
resistencia a herbicidas y grasas saturadas reducidas una iniciativa electoral que liberaba $3 mil millones para embriones
contenido. Otros ejemplos de comerciales modificados genéticamente estudio de células madre en ese estado, lo que subraya aún más la polémica
los cultivos son canola, papa, calabaza y tomate. El arroz dorado es un GM naturaleza de esta investigación. Otros países, sobre todo los Estados Unidos
cultivo que puede tener un impacto importante en el mundo en desarrollo. Unido, han buscado activamente la investigación con células madre embrionarias.
En comparación con el arroz no modificado, esta variedad almacena aproximadamente el doble de Otra área de considerable controversia implica el uso de organismos recombinantes
mucho hierro porque ha sido modificado genéticamente para sobreexpresar algunos de en la agricultura. Muchos ecologistas están preocupados
sus propios genes. Además, sirve como un buen que la liberación de plantas recombinantes sin una evaluación previa cuidadosa del riesgo
fuente de betacaroteno (precursor de la vitamina A) gracias a la introducción de genes de puede alterar gravemente el ecosistema. Otro comúnmente
petunia y bacterias. la preocupación citada son las reacciones alérgicas en humanos que consumen genéticamente
Se están explorando muchas aplicaciones agrícolas nuevas. Mucho alimentos modificados (GM), aunque no se han informado tales respuestas. Otros están
se está dedicando un esfuerzo a la defensa de las plantas contra las plagas sin ansiosos de que el ADN recombinante de GM
el uso de plaguicidas químicos. Una cepa de Pseudomonas fluo rescens portadora del las plantas podrían transferirse a plantas silvestres cercanas. Esto podría ocurrir
gen de la toxina Bacillus thuringiensis ha por el movimiento del polen por el viento y los insectos a los vecinos
sido desarrollado. Esta toxina destruye muchas plagas de insectos como el campos. Esto sería problemático por varias razones, entre ellas
la lanzadera de la col y el barrenador europeo del maíz. Una variedad de maíz la posibilidad de que los cultivos transgénicos con genes de resistencia a los herbicidas
con el gen de la toxina de B. thuringiensis . Desafortunadamente, algunos insectos polinizar malas hierbas, generando “súper malas hierbas” que requerirían la
parecen capaces de desarrollar resistencia a la toxina. aplicación de más (en lugar de menos) herbicida. Además, los agricultores
Existe un interés considerable por los virus que matan insectos y, en particular, por los cuyos cultivos son orgánicos certificados temen la contaminación genética; los cultivos
baculovirus. Se ha insertado un gen de la toxina del escorpión en el núcleo nuclear orgánicos se analizan para detectar la presencia de modificaciones genéticas,
multicápside de la autographa californica. que, de encontrarse, los excluye del mercado orgánico. Claramente, el
virus de la polihedrosis (AcMNPV). El AcMNPV diseñado mata tasa de desarrollo de los alimentos GM ha superado la consideración de
repollo más rápidamente que el virus normal y reduce contaminación genética. En Europa, los cultivos transgénicos no se producen comúnmente
daños a los cultivos de manera significativa. Por último, se están desarrollando cepas por los agricultores o comprados por los consumidores. Algunos grandes productores de alimentos
resistentes a virus de soja, patatas, calabaza, arroz y otras plantas. Microbios como de EE. UU. han respondido a la preocupación pública y han dejado de utilizar cultivos transgénicos.
productos: bioplaguicidas (sección 41.8) Como con cualquier tecnología, existe el potencial de abuso. un caso en
El punto es el uso de la ingeniería genética en la guerra biológica y el terrorismo. Aunque
1. Enumere varias aplicaciones importantes presentes o futuras de la ingeniería genética los acuerdos internacionales limitan la investigación en esta área
en medicina, industria y agricultura. a la defensa contra otras armas biológicas, los conocimientos obtenidos en
2. ¿Qué es el plásmido Ti y por qué es tan importante? dicha investigación puede usarse fácilmente en una guerra biológica ofensiva. Vacunas
efectivas construidas usando tecnología de ADN recombinante
puede proteger a las tropas del atacante y a la población civil. Es relativamente fácil y
14.10 IMPACTO SOCIAL DE LAS RECOMBINANTES económico preparar bacterias capaces de producir cantidades masivas de toxinas o de
desarrollar bacterias particularmente virulentas.
TECNOLOGÍA DE ADN
cepas de patógenos virales y bacterianos, por lo que incluso los países pequeños y
A pesar del impacto social positivo de la tecnología del ADN recombinante, el potencial las organizaciones terroristas pueden adquirir armas biológicas. Ya que
para alterar genéticamente un organismo plantea problemas serios. 11 de septiembre de 2001, los gobiernos de todo el mundo establecieron
cuestiones científicas y filosóficas. Estos temas son objeto de un intenso debate, como regulaciones más estrictas para controlar la disponibilidad de patógenos que podrían
se analiza brevemente aquí. utilizarse en un ataque de bioterrorismo. Preparación contra el bioterrorismo (sección 36.9)
En contraste con el uso de la biotecnología en la ciencia básica y aplicada, el uso La tecnología del ADN recombinante ha mejorado enormemente nuestra
de la terapia génica en seres humanos plantea cuestiones éticas y morales apremiantes. conocimiento de los genes y cómo funcionan, y promete
Estos problemas no son extremos mientras mejorar nuestras vidas de muchas maneras. Sin embargo, como esta breve discusión
ya que se utilizan células madre adultas. Sin embargo, como se atestigua en American espectáculos, quedan problemas e inquietudes por resolver. En ocasiones, los avances
discurso político y la legislación desde 2001, el uso de células madre embrionarias es científicos del pasado han tenido consecuencias imprevistas y desafortunadas, como la
problemático. ¿Es moralmente aceptable sacrificar contaminación ambiental y la energía nuclear.
un embrión para obtener estas células? Los defensores señalan que los adultos armas Con prudencia y previsión podemos ser capaces de
las células madre son raras y no son verdaderamente pluripotentes. También señalan que evitar errores pasados en el uso de tecnología de ADN recombinante.
estos embriones donados no son deseados y eventualmente serán destruidos por las
clínicas de fertilidad donde se congelan. Quienes se oponen a la investigación con células
1. Describa cuatro áreas principales de preocupación acerca de la aplicación de la
madre embrionarias creen con la misma firmeza que
ingeniería genética. En cada caso proporcione los argumentos a favor y en contra del uso
la vida humana no debe ser destruida, ni siquiera en lo más temprano
de ingeniería genética.
etapas En el verano de 2001, el presidente GW Bush prohibió la
Resumen 381
Resumen
14.1 Perspectivas históricas 14.6 Construcción de bibliotecas genómicas
un. La ingeniería genética se hizo posible tras el descubrimiento de las enzimas de restricción y la un. A veces es necesario encontrar un gen en un cromosoma sin conocer la secuencia de ADN del gen. Una
transcriptasa inversa, y el desarrollo de métodos esenciales en la química de los ácidos nucleicos, como biblioteca genómica se construye cortando el genoma de un organismo en muchos fragmentos, cada
la técnica de transferencia de Southern (tabla 14.1). uno de los cuales se clona en un vector para hacer un plásmido recombinante único. B. Las bibliotecas
genómicas pueden seleccionarse para el gen de interés mediante rescate fenotípico (complementación
14.2 ADN sintético genética) o hibridación de ADN con una sonda de oligonucleótidos. Sin embargo, hay casos en los que se
debe idear un enfoque novedoso para examinar la biblioteca en busca de un gen específico (figuras
un. Los oligonucleótidos de cualquier secuencia deseada pueden sintetizarse mediante una máquina
14.15 y 14.16).
sintetizadora de ADN. Esto hizo posible la mutagénesis dirigida al sitio y es importante para la síntesis
de cebadores y sondas de ADN utilizadas en PCR y transferencia Southern, respectivamente.
14.7 Inserción de ADN recombinante en células huésped
14.3 La reacción en cadena de la polimerasa un. Las bacterias y la levadura S. cerevisiae son las especies huésped más comunes. B. El ADN se
un. La reacción en cadena de la polimerasa permite aumentar miles de veces la concentración de pequeñas puede introducir en los microbios por transformación o electroporación. C. Se utiliza una variedad de técnicas
cantidades de secuencias específicas de ADN (figura 14.9). para introducir ADN en las células huésped eucarióticas, incluida la electroporación, la microinyección y el uso
de una pistola de genes. El plásmido Ti del patógeno bacteriano vegetal Agrobacterium tumefaciens ha
14.4 Electroforesis en gel sido diseñado para transferir ADN extraño a los genomas de las plantas.
un. La electroforesis en gel se utiliza para separar moléculas según su carga y tamaño. B. Los fragmentos de
ADN se separan en geles de agarosa y acrilamida. Debido a que el ADN es ácido, migra del extremo negativo
14.8 Expresión de genes extraños en células huésped
al positivo de un gel (figura 14.11).
un. El vector recombinante a menudo debe modificarse mediante la adición de promotores, líderes y otros
elementos. Los intrones de genes eucarióticos también deben eliminarse.
14.5 Clonación de vectores y creación de ADN recombinante
Un vector de expresión tiene las características necesarias para expresar cualquier gen recombinante
un. Hay cuatro tipos de vectores de clonación: plásmidos, fagos y virus, cósmidos y cromosomas artificiales.
que lleve.
Los vectores de clonación generalmente tienen al menos tres componentes: un origen de replicación, un
B. Muchos productos útiles, como la hormona somatostatina, se han sintetizado utilizando tecnología de ADN
marcador seleccionable y un sitio de clonación múltiple o policonector (tabla 14.3; figuras 14.12 y
recombinante (figuras 14.17 y 14.18).
14.14). B. El enfoque más común para la clonación es digerir tanto el vector como el ADN para insertarlos
con la misma enzima o enzimas de restricción, de modo que se generen extremos cohesivos compatibles. A
14.9 Aplicaciones de la ingeniería genética
continuación, el vector y el ADN a clonar se incuban in vitro en presencia de ADN ligasa, que cataliza la
inserción covalente del fragmento de ADN en el vector (figura 14.5). un. La tecnología del ADN recombinante proporcionará muchos beneficios en la medicina, la industria y la
agricultura.
C. Una vez que el plásmido recombinante se ha introducido en las células huésped, se deben seleccionar las 14.10 Impacto social de la tecnología de ADN recombinante
células portadoras del vector. A menudo, esto se logra permitiendo el crecimiento de células resistentes un. A pesar de la gran promesa de la ingeniería genética, también trae consigo desafíos potenciales en áreas
a los antibióticos solamente porque el vector lleva el gen de resistencia a los antibióticos. Las células de seguridad, experimentación humana, perturbaciones ecológicas potenciales y guerra biológica.
que tomaron el vector con ADN insertado se pueden distinguir de aquellas que contienen solo el vector
de varias maneras. A menudo se usa un fenotipo de colonia azul versus blanco; esto se basa en la
presencia o ausencia de un gen lacZ funcional , respectivamente (figura 14.13).
Términos clave
terapia con células madre adultas vector de expresión 372 origen de replicación (ori) 366 rescate vector de lanzadera 367
376 autorradiografía 359 cromosoma electroforesis en gel 366 pistola fenotípico 371 reacción en cadena de la mutagénesis dirigida al sitio 362
artificial bacteriano génica 371 terapia génica 376 polimerasa (PCR) 362 cebadores 362 sonda 358 Procedimiento de transferencia
(BAC) 370 ingeniería genética 357 PCR en tiempo real (RT PCR) 363 tecnología de Southern 358 extremos cohesivos 358
biotecnología 357 biblioteca genómica 370 proteína ADN recombinante 357 clonación reproductiva 377 clonación terapéutica 376 termociclador
clonación 357 ADN verde fluorescente (GFP) 374 enzimas de restricción 357 transcriptasa inversa 362
complementario (cDNA) 358 cósmido 370 gen heterólogo 371 microinyección 371 sitio de (RT) 358 marcador seleccionable 367 Ti plásmido 378
clonación múltiple (MCS) 367 oligonucleótidos vectores 358
ADN ligasa 367 361 cromosoma artificial de levadura

electroporación 371 (YAC) 370
células madre embrionarias 376

1. ¿Se podría aplicar la técnica de transferencia de Southern al ARN? ¿Cómo podría ser esto? tor produce menos riboflavina que la cepa de tipo salvaje. ¿Por qué podría ser este el
¿hecho? ¿caso?
2. Los intentos iniciales de realizar la PCR se llevaron a cabo utilizando la ADN polimerasa. 5. Suponga que inserta un plásmido simple (uno que contiene un gen de resistencia a los antibióticos y
de E.coli. ¿Cuál fue la mayor dificultad? un sitio de restricción separado) que lleva un gen de interferón humano
en E. coli, pero ninguna de las bacterias transformadas produjo interferón. Dar como
3. ¿Qué ventaja podría haber en crear una biblioteca genómica primero en lugar de
tantas razones plausibles como sea posible para este resultado.
aislando directamente el fragmento de ADN deseado?
6. ¿Cuál considera que es el mayor beneficio potencial de la ingeniería genética? ¿Discutir posibles
4. Ha clonado un gen estructural necesario para la síntesis de riboflavina en E. coli.
problemas éticos con esta posible aplicación?
Encuentra que un auxótrofo de riboflavina de E. coli que lleva el gen clonado en un vec
Aprende más
Ben-Ari, E. 2002. Bacillus thuringiensis como paradigma de organismos transgénicos. Murray, NE 2000. Restricción y modificación del ADN. En Enciclopedia de microbiología, 2ª ed., vol. 2, J.
Noticias de ASM 68 (12): 597–602. Lederberg, editor en jefe, 91–105. San Diego: Aca demic Press.
Cockerill, FR y Smith, TF 2002. PCR en tiempo real de ciclo rápido: una revolución para
microbiología clínica. Noticias de ASM 68 (2): 77–83. Rieger, MA; Lamond, M.; Preston, C.; Powles, SB; y Roush, RT 2002.
Movimiento de resistencia a herbicidas mediado por polen entre
Drlica, K. 2004. Comprensión del ADN y la clonación de genes: una guía para los curiosos, 4 .
campos de canola. Ciencia 296: 2386–88.
edición Nueva York: John Wiley & Sons.
Wolfenbarger, LL y Phifer, PR 2000. Los riesgos y beneficios ecológicos de las plantas modificadas
Falkow, S. 2001. Quiero el hígado picado por favor, o cómo aprendí a amar el
genéticamente. Ciencia 290:2088–93.
clon. Noticias de ASM 67 (11): 555–59.
Glick, BR y Pasternak, JJ 2003. Biotecnología molecular: Principios y aplicaciones de la recombinación

del ADN, 3d ed. Washington, DC: ASM Press.

15 Genómica Microbiana
Cada punto en la micromatriz que se muestra aquí consiste en un fragmento de oligonucleótido

de un solo gen unido a un portaobjetos de vidrio. La expresión génica de dos tipos de células (por
ejemplo, uno de tipo salvaje y uno mutante) se pueden comparar marcando el cDNA
de cada celda con una etiqueta fluorescente roja o verde y permitiendo que la
ADNc para unirse a secuencias homólogas unidas a la micromatriz. El color de
cada punto revela el nivel relativo de expresión de cada gen.
AVANCE
• La genómica es el estudio de la organización molecular de los genomas, A continuación, se describe brevemente el método de secuenciación de escopeta del genoma completo.
su contenido de información y los productos genéticos que codifican. Eso descrito. Función del genoma y análisis de las transcripciones
puede dividirse en una serie de subdisciplinas, incluidas la genómica estructural, la y luego se exploran las proteínas producidas por los microbios. Nos enfocamos
genómica funcional y la genómica comparativa. sobre anotación, micromatrices de ADN y el uso de dos dimensiones
• Las piezas individuales de ADN se pueden secuenciar usando el Sanger electroforesis en gel para estudiar la reserva celular de proteínas. los
método. La forma más sencilla de analizar genomas completos es mediante la El capítulo concluye con una discusión de ejemplos en los que el análisis
secuenciación aleatoria del genoma completo, en la que los fragmentos producidos al genómico ha ampliado nuestro conocimiento de la fisiología microbiana, la
azar se secuencian individualmente y luego se alinean para dar el resultado final. patogenicidad, la evolución y la ecología.
genoma completo.
• Los genomas recién secuenciados deben anotarse para determinar la

localización de genes y elementos genéticos tales como promotores y sitios de unión a
ribosomas.
• La bioinformática combina biología, matemáticas, estadística e informática en el análisis 15.1 INTRODUCCIÓN

de genomas y proteomas.
La genómica es el estudio de la organización molecular de los genomas,
• La tecnología de micromatrices permite el estudio de la expresión génica en el
su contenido de información y los productos genéticos que codifican. Está
nivel transcripcional. Por el contrario, la proteómica utiliza toda la colección de proteínas
una disciplina amplia, que puede dividirse en al menos tres áreas generales. La
producidas en un momento dado por un organismo para evaluar la expresión génica
genómica estructural es el estudio de la naturaleza física.
al nivel de la traducción.
de genomas. Su objetivo principal es determinar y analizar el ADN.
• Se han secuenciado y comparado muchos genomas microbianos.
secuencia del genoma. La genómica funcional se ocupa de
Los resultados nos dicen mucho sobre la estructura del genoma, la fisiología
la forma en que funciona el genoma. Es decir, examina la
microbiana, la filogenia microbiana y cómo los patógenos causan enfermedades.
Sin duda, ayudarán en la preparación de nuevas vacunas y medicamentos. transcripciones producidas por el genoma y la serie de proteínas que
para el tratamiento de enfermedades infecciosas. codificar. La tercera área de estudio es la genómica comparada, en
qué genomas de diferentes organismos se comparan para buscar
diferencias y similitudes significativas. Esto ayuda a identificar regiones
importantes y conservadas del genoma en un esfuerzo por discernir patrones
en función y regulación. Estos datos también proporcionan mucho
combinación, y el capítulo 14 describe el desarrollo información sobre la evolución microbiana, particularmente con respecto a
El capítulo
de13
la proporciona unaADN
tecnología del breve introducción En
recombinante. a laeste
re capítulo llevamos fenómenos como la transferencia horizontal de genes.
estos temas continúan con la discusión de la revolución en curso en la genómica. La genómica es un campo apasionante y en crecimiento que ha cambiado el
Comenzamos con una descripción general del tema, formas en que las preguntas clave en fisiología microbiana, genética,
seguido de una introducción a las técnicas de secuenciación de ADN. se persigue la ecología y la evolución. Antes del advenimiento de la genómica,
Un requisito previo para comprender la biología completa de un

organismo es la determinación de la secuencia completa de su genoma.
—J. Craig Venter, et al.
384 Capítulo 15 Genómica microbiana
El análisis de la expresión génica se limitó a la identificación de un longitud, por lo que los fragmentos más cortos migran más rápido que los fragmentos más grandes
pequeño subconjunto de transcritos y proteínas. Como veremos, la genómica (ver figura 14.11). Debido a que la síntesis procede con la adición
Las tecnologías permiten a los científicos estudiar la célula de una manera holística al de un nucleótido al 3ÿ-OH del cebador (es decir, en la dirección 5ÿ a 3ÿ) se asigna el
capturar una instantánea de los cambios en todo el grupo de transcritos de ARNm o ddNTP al final del fragmento más corto
proteínas. Por lo tanto, la célula puede verse como una red de circuitos interconectados, como el extremo 5 'de la secuencia de ADN, mientras que el fragmento más grande es
no como una serie de vías individuales. Más, el extremo 3ÿ. De esta manera, la secuencia de ADN se lee directamente de
la genómica proporciona una ventana a comunidades microbianas enteras: el gel desde el fragmento más pequeño hasta el más grande. replicación del ADN
Los ecólogos microbianos ya no necesitan limitar sus estudios al (sección 11.4); Electroforesis en gel (sección 14.4)
pequeña fracción de microorganismos que han sido cultivados. Finalmente, El ADN se prepara más a menudo para la secuenciación automática. Aquí
nuestra comprensión de la evolución de todos los organismos puede ser iluminada las cuatro mezclas de reacción se pueden combinar y cargar en un solo carril de un
por los conocimientos que adquirimos en la evolución procariota de la genómica gel porque cada ddNTP está etiquetado con un
enfoques. De esta manera, y más, la genómica realmente ha revolucionado la biología. tinte fluorescente coloreado (figura 15.2b). Estos fragmentos son entonces
se someten a electroforesis en un gel de poliacrilamida y un rayo láser determina el
orden en que salen del gel. Un cromatograma es
generado en el que la amplitud de cada pico representa la intensidad fluorescente de
15.2 DETERMINACIÓN DE SECUENCIAS DE ADN cada fragmento en particular (figura 15.2c). los
la secuencia de ADN correspondiente se enumera encima del cromatograma.
Las técnicas para secuenciar el ADN fueron desarrolladas en 1977 por dos
Los analizadores de ADN por electroforesis capilar completamente automatizados son
grupos: Alan Maxam y Walter Gilbert, y Frederick Sanger.
necesario para grandes proyectos. Estas máquinas secuenciadoras son muy
El método de Sanger es el más utilizado y se analiza aquí.
rápido y puede funcionar durante 24 horas sin la atención del operador. Como muchos
Este método implica la síntesis de una nueva hebra de ADN utilizando el ADN que se
ya que se pueden secuenciar 96 muestras simultáneamente, lo que hace posible
va a secuenciar como plantilla. La reacción comienza
secuenciar hasta 1 millón de bases por día, por secuenciador.
cuando se mezclan cadenas sencillas de ADN molde con un cebador (un
Este nivel de automatización, que involucra muchos secuenciadores que se ejecutan a
trozo corto de ADN complementario al extremo 5' de la región para
al mismo tiempo, es necesario para la finalización de todo el genoma se
ser secuenciado), ADN polimerasa, los cuatro desoxinucleósidos
secuencias
trifosfatos (dNTP) y didesoxinucleósido trifosfatos
(ddNTP). Los ddNTP se diferencian de los dNTP en que el carbono 3ÿ carece
un grupo hidroxilo (figura 15.1). En tal mezcla de reacción, el ADN
15.3 SECUENCIACIÓN SHOTGUN DEL GENOMA COMPLETO
la síntesis continuará hasta que se agregue un ddNTP, en lugar de un dNTP
a la cadena creciente. Sin un grupo 3ÿ-OH para atacar el 5ÿ-PO4 Aunque los métodos para secuenciar regiones relativamente cortas de ADN
del próximo dNTP a incorporar, la síntesis se detiene (ver figura han estado en uso durante algún tiempo, métodos eficientes para secuenciar
11.14). De hecho, la técnica de Sanger se conoce con frecuencia como la Los genomas completos no estuvieron disponibles hasta 1995, cuando J. Craig
método de secuenciación de ADN de terminación de cadena. Para obtener Venter, Hamilton Smith y sus colaboradores desarrollaron la secuenciación aleatoria
información de secuencia, cuatro reacciones de síntesis separadas deben ser del genoma completo y el software de computadora necesario.
preparados, uno para cada ddNTP (figura 15.2). Cuando cada ADN ensamblar secuencias de datos en un genoma completo. Ellos usaron su
se detiene la reacción de síntesis, una colección de fragmentos de ADN de nuevo método para secuenciar los genomas de la bacteria Haemophilus
se han generado diferentes longitudes. La reacción preparada con influenzae y Mycoplasma genitalium. Este fue un logro significativo porque antes de
ddATP produce fragmentos que terminan en A, aquellos con ddTTP esto solo se habían desarrollado unos pocos genomas virales.
producir fragmentos con T terminales, y así sucesivamente. Si el ADN es para sido completamente secuenciado. Estos son mucho más pequeños que el genoma de
secuenciarse manualmente, se usan dNTP radiactivos y cada reacción se somete a H. influenzae, que contiene alrededor de 1.743 genes y 1.830.137 bases
electroforesis en un carril separado en una poliacrilamida pares, o alrededor de 1,8 Mb (millones de pares de bases). La contribución de Venter
gel. El peso molecular de cada fragmento está determinado por su y Smith a la biología ha dado paso a lo que se ha llamado la era genómica. Dentro de
10 años el número de genomas completos
publicado creció de 2 a 249 con más de 500 proyectos de secuenciación del genoma
NH3 en curso. La tabla 15.1 enumera solo algunos genomas microbianos.
norte
El proceso de secuenciación de escopeta del genoma completo es bastante
norte
complejo cuando se considera en detalle, y hay muchos procedimientos

OOO para asegurar la precisión de los resultados, pero el siguiente resumen
norte norte
– OPOPOPO CH2 O da una idea general del procedimiento. Por simplicidad, este enfoque
puede dividirse en cuatro etapas: construcción de bibliotecas, secuenciación aleatoria,
O– O– O–
alineación de fragmentos y cierre de brechas, y edición.
3ÿ 2ÿ
H H 1. Construcción de bibliotecas. Las moléculas de ADN se rompen al azar en
fragmentos bastante pequeños usando ondas ultrasónicas; los
Figura 15.1 Trifosfato de didesoxiadenosina (ddATP). luego se purifican los fragmentos (figura 15.3). Estos fragmentos son
Tenga en cuenta la falta de un grupo hidroxilo en el carbono 3 ', lo que impide luego unido a plásmidos o vectores cósmidos y plásmidos o
mayor elongación de la cadena por la ADN polimerasa. se aíslan los cósmidos con un solo inserto. Escherichia especial
1 Fragmento de ADN desconocido aislado 6 Vista esquemática de cómo todo lo posible

5 3 las posiciones en el fragmento están ocupadas
C A C T T A GRAMO C C T C C
GRAMO A por un nucleótido marcado
T
GRAMO A A T GRAMO C GRAMO GRAMO C T A GRAMO GRAMO
5 3
3 5
AGCCGATCC
ADN original a ser secuenciado
AGCCGATC
AGCCGAT
2 El ADN se desnaturaliza para producir una sola plantilla. AGCCGA
hebra.
AGCCG
AGCC
GRAMO TGAATC GGCT A GRAMO GRAMO
3 5 CAG
AG
3 La molécula de cebador específica marcada se hibrida con la cadena de ADN A
Cebador
CA TTC
3 TGAATC
GRAMO GGCT A GRAMO GRAMO
4 ADN polimerasa y mezcla de nucleótidos regulares +G +C +A +T

(dATP, dCTP, dGTP y dTTP); ddG, ddA, ddC y
ddT se colocan en tubos de reacción separados con el regular
nucleótidos. Los nucleótidos dd están marcados con algún tipo
de trazador, lo que permite su visualización. ADN
más grande
– Secuencia
+G +C +A +T
GCAT 3
C
Incubar
C
T
5 Las hebras recién replicadas terminan en el A
punto de adición de un nucleótido dd. GRAMO
C
CA TTC A
C
3 TGAATC
GRAMO GGCT A GRAMO GRAMO
5 GRAMO
A 5
CA TT CA GRAMO
+
Pequeñísimo
TGAATC GGCT A
3 5
GRAMO GRAMO GRAMO
7 Corriendo los tubos de reacción en cuatro

CA TT GAC C carriles de gel separados los separa por
TGAATC GGCT A tamaño y tipo de nucleótido. leyendo de
3 5
GRAMO GRAMO GRAMO
de abajo hacia arriba, una base a la vez,

proporciona la secuencia de ADN correcta.
CA TT CGAC C
TGAATC GGCT A
3 5
GRAMO GRAMO GRAMO
(a)
GCGACAT
+ddA +ddG +ddC +ddT
GCGAC A GCC GCGA C GCGACA T

GCG A GRAMO GC _
Mezcla y electroforesis
Figura 15.2 El método de Sanger para la secuenciación del ADN.

T
(a) Los pasos 1 a 6 se utilizan tanto para el manual como para el automatizado.
A
C secuenciación El paso (7) muestra la preparación de un gel para manual
A secuenciación en la que se utilizan ddNTP radiomarcados. (b) Parte de un

GRAMO
corrida automatizada de secuenciación de ADN. Aquí los ddNTP están etiquetados con
C
colorantes fluorescentes. (c) Datos generados durante un ADN automatizado
GRAMO
(B) corrida de secuenciación. Se muestran las bases 493 a 580.
(B)
GRAMOCGACAT CACT CC AGCT TG AA GCAG TT C TT CTCGTCT TCTG TTTT GT CT AA C TT GTC TT CC TT C TT C TC TT CC TG TT T AA G AA GAGA A

500 510 520 530 540 550 560 570 580
(C)
385
Tabla 15.1 Ejemplos de genomas microbianos completos publicados
Número de cepas
genoma Dominioa secuenciado Tamaño (Mb) % GC
Agrobacterium tumefaciens B 2 4.92 60
Aquifex aeolicus B 1 1.55 43
Archaeoglobus fulgidus A 1 2.18 48

Bacillus Anthracis B 4 5.09–5.23 36
Bacillus subtilis B 1 4.21 43
Borrelia burgdorferi B 1 1.44 28
Campylobacter jejuni B 1 1.64 31

Caulobacter crescentus B 1 4.02 62–67
clamidia neumonía B 2 1.23 40
Chlamydia trachomatis B 2 1.05–1.07 41
clorobio tibio B 1 2.15 57
Clostridium perfringens B 1 3.03 29
Corynebacterium glutamicum B 1 3.31 55–58

Deinococcus radiodurans B 1 3.06 67
Escherichia coli B 6 4–5.45 50
Geobacter sulfurreducens PCA B 1 3.81 61
Haemophilus influenzae Rd B 1 1.83 39
Halobacterium sp. NRC-1 Helicobacter A 1 2.01 68
pylori Listeria monocytogenes B 2 1,64–1,67 39
Methanobacterium thermoautotrophicum B 2 2.9 37–39
Methanocaldococcus jannaschii Mycobacterium A 1 1.75 49
leprae Mycobacterium tuberculosis Mycoplasma A 1 1.66 31
genitalium Mycoplasma pneumoniae B 1 3.27 58
Nanobacterium equitans Neisseria meningitidis B 2 4.40 sesenta y cinco
B 1 0.58 31
B 1 0.82 40
A 1 0.49 32
B 3 2.18–2.27 51
proclorococcus marinus B 3 1.66–2.41 31–51
Pseudomonas aeruginosa B 1 6.26 67
Pyrococcus abyssi Pyrococcus A 1 1.77 44
horiksohii Rhodopseudomonas A 1 1.74 42
palustris Rickettsia prowazekii B 1 5.46 sesenta y cinco
Saccharomyces cerevisiae B 1 1.11 29
Salmonella enterica serovar mi 1 12.14 38
Typhimurium Staphylococcus aureus Streptococcus B 1 4.86 50–53
mutans Streptococcus pneumoniae Streptococcus B 7 2,80–2,90 33
pyogenes Streptomyces coelicolor Sulfolobus B 1 2.03 37
tokodaii Synechocystis sp. B 2 2.16 40

B 6 1,84–1,90 39
B 1 8.67 72
A 1 2.69 33
B 1 3.57 47
Thermoplasma acidophilum A 1 1.56 46
Thermotoga maritima Treponema B 1 1.86 46
pallidum B 1 1.14 52
Vibrio cholerae B 1 4.03 48
Yersinia pestis B 3 4.60–4.65 48
Yersinia pseudotuberculosis B 1 4.74 48
a
Se utilizan las siguientes abreviaturas: A, Archaea; B, bacterias; E, Eucarya.
386
Secuenciación de escopeta del genoma completo 387
coli que carecen de enzimas de restricción se transforman con los plásmidos

para producir una biblioteca de clones de plásmidos.
cromosoma
microbiano Clonación de vectores y creación de ADN recombinante (sección 14.5)
2. Secuenciación aleatoria. Una vez que se preparan los clones y se purifica el

ADN, se secuencian miles de fragmentos de ADN con secuenciadores
sonicación automáticos, empleando cebadores especiales marcados con tinte. Se utilizan
miles de plantillas, normalmente con cebadores que reconocen las secuencias
de ADN plasmídico adyacentes al inserto de ADN. La naturaleza del proceso
es tal que casi todos los tramos del genoma se secuencian varias veces, y
fragmentos de ADN
esto aumenta la precisión de los resultados finales.
3. Alineación de fragmentos y cierre de huecos. Mediante el uso de programas

Electroforesis informáticos especiales, los datos de los fragmentos de ADN secuenciados
en gel de agarosa de
se agrupan y ensamblan en tramos más largos de secuencia comparando
fragmentos y marcadores de
tamaño de ADN las superposiciones de secuencias de nucleótidos entre los fragmentos. Dos
fragmentos se unen para formar un tramo más grande de ADN si las
secuencias en sus extremos se superponen y coinciden. Este proceso de
comparación de superposición da como resultado un conjunto de secuencias
de nucleótidos contiguas más grandes llamadas contigs.
Finalmente, los contigs se alinean en el orden correcto para formar la
Fragmento de purificación de
gel
secuencia del genoma completo. Si existen espacios entre dos contigs, a
veces se encuentran disponibles fragmentos con extremos en dos contigs
adyacentes. Estos fragmentos se analizan y los huecos se rellenan con sus
fragmentos de ADN
secuencias. Cuando este enfoque no es posible, se utiliza una variedad de
otras técnicas para alinear los contigs y llenar los espacios. Por ejemplo,
Preparación de bibliotecas clonales pueden construirse bibliotecas de fagos que contengan grandes fragmentos
de ADN. Los fragmentos grandes en estas bibliotecas se superponen a los
contigs previamente secuenciados.
Estos fragmentos luego se combinan con sondas de oligonucleótidos que
coinciden con los extremos de los contigs que se van a alinear. Si las sondas
se unen a un fragmento de la biblioteca, se puede usar para preparar un
tramo de ADN que represente la región de la brecha. Las superposiciones
en la secuencia de este nuevo fragmento con dos contigs permiten colocarlos
Secuenciar los insertos
uno al lado del otro y llenar el espacio entre ellos. Construcción de bibliotecas
clonales, particularmente las
secuencias finales. genómicas (sección 14.6)
4. Edición. Luego, la secuencia se revisa cuidadosamente para resolver cualquier
Montaje de un Contig ambigüedad en la secuencia. Además, la secuencia debe comprobarse en
Superposición busca de mutaciones de cambio de marco no deseadas y corregirse si es
B necesario.
Superposición
Clon A
Usando este enfoque, tomó menos de 4 meses secuenciar el genoma de M.
Clon C genitalium (alrededor de 500,000 pares de bases de tamaño). La técnica de
escopeta también ha sido utilizada con éxito por Celera Ge nomics en el Proyecto
Superposición
Genoma Humano y para secuenciar el genoma de Drosophila . Los investigadores
Construya contigs de
secuencia y alinee usando del Centro Wellcome Trust Sanger (Reino Unido) también han secuenciado (y
superposiciones; rellenar huecos. continúan secuenciando) los genomas de muchos patógenos microbianos
importantes, mientras que los EE. UU.
El Instituto Conjunto del Genoma del Departamento de Energía apoya la
secuenciación de muchas bacterias de relevancia ambiental. Una vez que se ha
secuenciado el genoma de un organismo, el nivel de investigación y
Figura 15.3 Secuenciación de escopeta del genoma completo.

el ritmo de la investigación es mucho mayor. Las siguientes secciones secuencias en el extremo 3ÿ. Solo si estos elementos genéticos están presentes
describir solo algunas de las formas en que se puede usar una secuencia genómica es un ORF considerado un gen putativo (figura 15.4). ORF que son
para aprender más sobre un organismo. que supuestamente codifican proteínas (a diferencia de tRNA o rRNA) son
llamadas secuencias de codificación (CDS). Los bioinformáticos han desarrollado
1. ¿Cuál es el objetivo de cada una de las tres áreas generales de la genómica? algoritmos para comparar la secuencia de CDS predicho con los
2. ¿Por qué la técnica de Sanger de secuenciación de ADN también se llama cadena en grandes bases de datos que contienen secuencias de nucleótidos y aminoácidos
método de terminación? de proteínas conocidas. Si un ORF coincide con uno en la base de datos, se asume que
3. ¿Cómo se reconocería una brecha en la secuencia del genoma después de codifica la misma proteína o tipo de proteína. Aunque tal
secuenciación de escopeta del genoma completo? las comparaciones no están exentas de errores, pueden proporcionar
asignaciones funcionales para alrededor del 40 al 80% del CDS en un determinado
genoma Los restantes se dividen en dos clases: (1) genes que tienen
15.4 BIOINFORMÁTICA coincidencias en la base de datos pero aún no se ha asignado ninguna función.
Se dice que estos codifican proteínas hipotéticas conservadas. (2) genes
El análisis de genomas completos genera no sólo un tremendo
cuyos productos traducidos son exclusivos de ese organismo. tales genes
cantidad de datos de secuencias de nucleótidos pero, como veremos, una rápida
se dice que codifican proteínas de función desconocida. Sin embargo, como más
volumen creciente de información sobre el contenido, la estructura y la disposición del
se publican los genomas, las comparaciones futuras pueden revelar una coincidencia en
genoma, así como datos que detallan la estructura de las proteínas
otro organismo. Es útil para organizar los genes identificados de acuerdo con la función
y función La única manera factible de organizar y analizar estos
del producto y/o la ubicación en la célula, como los ARN ribosomal y de transferencia, el
datos es a través del uso de computadoras. Esto ha llevado al desarrollo del campo de
metabolismo de los lípidos, el metabolismo energético, el metabolismo celular.
la bioinformática, que combina biología,
asociado a la pared, etc. (tabla 15.2). Claramente, la bioinformática es un campo
matemáticas, informática y estadística. Determinación de la
dinámico y su desarrollo continuo es crucial para futuras
La ubicación y la naturaleza de los genes o los presuntos genes en un genoma recién
avances en genómica estructural, funcional y comparativa.
secuenciado es un proceso complejo llamado anotación. Una vez
Una vez identificados los genes, los bioinformáticos pueden realizar análisis informáticos
o in silico para examinar más a fondo el genoma.
15.5 GENÓMICA FUNCIONAL
Anotación del genoma La genómica funcional busca explicar cómo funcionan los genes y los genomas. La
Obviamente, obtener la secuencia del genoma sin ningún conocimiento comparación base por base de dos o más secuencias de genes
de la ubicación y la naturaleza de los genes individuales sería un sinsentido se llama alineación. Alineación de genes en el mismo genoma (es decir,
ejercicio. El proceso de anotación del genoma busca identificar cada de un solo organismo) puede mostrar que las secuencias de nucleótidos
potencial (putativo) gen codificador de proteínas, así como cada rRNA- y son tan parecidos que muy probablemente surgieron a través de la duplicación de genes;
gen codificante de ARNt. Un gen que codifica una proteína generalmente se reconoce estos genes se denominan parálogos. Alineaciones de genes que se encuentran en
primero como un marco de lectura abierto (ORF); para encontrar todos los ORF, tanto dos o más organismos diferentes pueden revelar que son tan sorprendentemente
Las hebras de ADN deben ser analizadas. Un ORF procariótico es generalmente similares que se predice que tienen la misma función;
definida como una secuencia de al menos 100 codones con los siguientes estos genes se denominan ortólogos. Debido a que el código de ADN está degenerado,
tres características: (1) no está interrumpido por un codón de parada; (2) hay estos alineamientos generalmente se realizan después de que la secuencia de
un sitio de unión ribosómico aparente en el extremo 5'; y (3) terminador nucleótidos del gen se haya traducido a aminoácidos.
Dirección de lectura de la secuencia de la cadena superior de ADN
3 N-ile leu phe arg val ile arg pro thr arg asn phe thr arg-C
Leer 2 N- tyr phe ile ser ser asn ser thr leu asn ala lys leu his leu thr -C
marcos 1 N-leu phe tyr phe glu phe asp leu lys arg glu thr ser leu asn-C
5 TTATTTTATTTCGAGTAATTCGACCTTAAACGCGAAACTTCACTTAAC 3
ADN
3 AATAAAATAAAGCTCATTAAGCTGGAATTTGCGCTTTGAAGTGAATTG 5
3 C- lys ile glu leu leu glu val lys phe ala phe ser lys val -N
Leer 2 C-ile lys asn arg thr ile arg gly val arg phe lys val arg -N
marcos 1 C-asn lys ser thr asn ser arg leu arg ser val glu ser leu ser-N
Dirección de lectura para la secuencia de la cadena de ADN inferior
Figura 15.4 Búsqueda de posibles genes codificadores de proteínas. La anotación de la secuencia genómica requiere que ambas hebras de ADN se traduzcan
desde la dirección 5' a la 3' en cada uno de los tres marcos de lectura posibles. Los codones de parada se muestran en verde. Ver texto para más detalles.
Genómica Funcional 389
Tabla 15.2 Número estimado de genes involucrados en diversas funciones celularesa
Escherichia
K12
coli Bacillus
subtilis Treponema
pallidum prowazekii
Rickettsia trachomatis
Chlamydia Pyrococcus
abyssi
Mycoplasma
genitalium metanocaldocococo
jannaschii
micobacteriana
Tuberculosis
Función del gen
Número total aproximado de genesb 4,289 4,100 484 1,040 834 894 4,425 1,728 1,765
Procesos celularesc 190 374 6 77 40 46 132 26 64
Componentes de la envoltura celular 172 185 29 53 74 45 152 25 106
Proteínas de transporte y unión 315 400 33 59 49 58 168 56 140

Metabolismo del ADN 102 122 30 51 63 48 68 53 63
Transcripción 41 114 13 25 26 18 40 21 37
Síntesis de proteínas 122 161 90 99 104 133 110 118 108
Funciones regulatorias 176 293 5 22 26 12 165 19 66
Energía metabolizada 368 439 33 54 89 56 234 158 180
Metabolismo intermediario central 73 96 7 6 19 12 293 19 79
Biosíntesis de aminoácidos 114 143 0 7 13 18 91 64 76
Metabolismo de ácidos grasos y fosfolípidos 67 84 8 11 22 27 158 9 18
Purinas, pirimidinas, nucleósidos y nucleótidos 77 81 19 21 19 14 57 37 51
Biosíntesis de cofactores y grupos protésicos 100 113 5 15 24 27 109 50 53
a
Datos adaptados de las bases de datos TIGR (The Institute for Genomic Research).
B
El número de genes con funciones conocidas o hipotéticas.
C
Genes implicados en la división celular, quimiotaxis y motilidad, desintoxicación, transformación, producción y resistencia de toxinas, patogénesis, adaptaciones a condiciones atípicas, etc.
D
Genes involucrados en el catabolismo de aminoácidos y azúcares, degradación y biosíntesis de polisacáridos, transporte de electrones y fosforilación oxidativa, fermentación, glucólisis/gluconeogénesis, pentosa fosfato
vía, Entner-Doudoroff, piruvato deshidrogenasa, ciclo TCA, fotosíntesis, quimioautotrofia, etc.
Aminoazúcares, compuestos de fósforo, biosíntesis de poliaminas, metabolismo del azufre, fijación de nitrógeno, metabolismo del nitrógeno, etc.
mi
Los bioinformáticos también analizan la secuencia de aminoácidos traducida de dan información sobre las relaciones filogenéticas entre microbios (figura 15.6).
genes presuntos para obtener una comprensión del potencial Ejemplos de algunas de las ideas derivadas
estructura y función de las proteínas. A menudo, un patrón corto de amino de tales análisis se discuten en la sección 15.6.
Los ácidos, denominados motivos, representarán una unidad funcional dentro de
una proteína, como el sitio activo de una enzima. Por ejemplo, la figura 15.5
muestra el dominio C-terminal de la proteína de división celular MinD Evaluación de la expresión génica a nivel de ARN:
de una serie de microbios. Debido a que estos aminoácidos se encuentran Análisis de micromatrices
en una gama tan amplia de organismos, se dice que están filogenéticamente bien Una vez que la identidad y función de los genes que componen un
conservados. En este caso, se predice que la región conservada formará una espiral se establece el genoma, la pregunta clave sigue siendo, "¿Qué genes
necesaria para la localización adecuada de la proteína. se expresan en un momento dado? Antes de la era genómica, los investigadores
a la membrana. solo podían identificar un número limitado de genes cuya expresión se alteraba en
La comparación de secuencias con otros microbios también puede proporcionar circunstancias específicas. sin embargo, el
información sobre la estructura física del genoma, como El desarrollo de micromatrices de ADN (chips genéticos) ahora permite a los
la presencia de elementos transponibles, operones y elementos repetidos. La científicos observar el nivel de expresión de una vasta colección de genes.
fracción del genoma que ha sido adquirida de En seguida. Los microarreglos de ADN son soportes sólidos, generalmente de vidrio o
mediante este tipo de genómica comparativa se puede inferir otro organismo por silicio, sobre el cual se une el ADN en forma de rejilla organizada.
transferencia génica horizontal o lateral. Además, específico Cada punto de ADN, llamado sonda, representa un solo gen o
los aspectos de la fisiología de un organismo pueden deducirse por la presencia o ORF. La ubicación de cada gen en la cuadrícula se registra cuidadosamente
ausencia de genes específicos. El análisis genómico también puede pro de modo que al analizarla se conozca la identidad genética de cada mancha.
Región helicoidal de consenso
Escherichia coli PAGS F R F I mi kmi mi k GRAMO F L - - - k R L F GRAMO G 270

S. enterica serovariedad PAGS F R F I mi kmi mi k GRAMO F L - - - k R L F GRAMO G 270
Typhimurium Yersinia pestis PAGS F R F V mi mi mi k k GRAMO F L - - - k R L F GRAMO G 270
Gram-negativo Vibrio cholerae Pseudomonas mi F R F L T mi A k k GRAMO I F - - - k R L F GRAMO 276 _
bacterias
aeruginosa Neisseria PAGS H R F L D V q k k GRAMO F L - - - q R L F GRAMO R
GRAMO mi 271
gonorrhoeae Xylella fastidiosa mi METRO R F L mi A mi k S k F F - - - k R L F GRAMO G 271
Staphylococcus aureus Listeria PAGS METRO R F T T V mi k k GRAMO F F - - - S k L F GRAMO 269 _
monocytogenes Clostridium I A I mi mi T q T k k GRAMO F W - - - S R L F GRAMO G245 _
Gram positivas acetobutylicum PAGS L METRO S I mi T k A k GRAMO F F A R L k q L F S k 266

GRAMO
bacterias PAGS F mi k Y mi T q T - GRAMO F I A A I k k I F S K 263

Bacillus subtilis PAGS L q V L mi mi q k norte GRAMO A k
METRO METRO I k S F F V R S 268
GRAMO
L k R Y - mi k k L L - - - S R L L G 262
Hipertermofílico Aquifex aeolicus PAGS GRAMO GRAMO GRAMO
bacterias Thermotoga marítima L mi norte D F V T V S k GRAMO L I D T L k D F F S k L k R 271 GRAMO
Methanocaldococcus jannaschii mi D mi I k I I R k mi S F I D k I k R L F R 263 _

METRO
arqueas Archaeoglobus fulgidus PAGS A mi V k mi k k k mi GRAMO A L A k METRO L R I F R R $ 263

Pyrococcus furiosus T PAGS PAGS mi mi S
PAGS V k R PAGS I F - - - k A L F GRAMO k $ 264
GRAMO
Borrelia burgdorferi L D norte R k R R V I GRAMO GRAMO F I - - - L R F F V ES 295

GRAMO
espiroquetas
Treponema pallidum T miI A mi T L SGRAMO GRAMO GRAMO F I - - - R R I F R mi W mi 304
GRAMO
Mesostigma viride Y L V norte L mi T k GRAMO norte GRAMO L L k R V q q F L T S mi

GRAMO Nevada 286
cloroplastos
Nephroselmis olivacea PAGS S PAGS S D S A S R PAGS GRAMO W F A A I R R L W S ES 274
Supuesta secuencia
dirigida a la membrana
Figura 15.5 Análisis de regiones conservadas de proteínas filogenéticamente bien conservadas. Los residuos de aminoácidos C-terminales de MinD
de 20 organismos que representan los tres dominios de la vida están alineados para mostrar fuertes similitudes. Los residuos de aminoácidos idénticos a E. coli
están recuadrados en amarillo y las sustituciones conservativas (p. ej., un residuo hidrofóbico por otro) están recuadradas en naranja. El número del último
resto mostrado en relación con la secuencia de aminoácidos completa se muestra en el extremo derecho de cada línea.
De las diversas formas en que se pueden construir los microarreglos, Methanocaldococcus jannaschii
dos técnicas son las más comúnmente empleadas: Los arreglos de puntos
se preparan mediante la aplicación robótica de una sonda al chip. La sonda
puede ser un producto de PCR, ADNc o un fragmento corto de ADN dentro Aquifex aeolicus
del gen u ORF, denominado oligonucleótido. Cuando se van a analizar Deinococcus radiodurans
genomas eucarióticos, las sondas de oligonucleótidos se denominan Tuberculosis micobacteriana

Mycoplasma genitalium
etiquetas de secuencia expresada (EST) porque cada una se deriva de
Chlamydia trachomatis
cDNA, que a su vez es el producto de un gen expresado (ver figura 14.4). Treponema pallidum
Los genes que van a ser representados por el ADN en las matrices
Rickettsia prowazekii
manchadas se seleccionan cuidadosamente, por lo que esta tecnología se
Haemophilus influenzae
usa más comúnmente para micromatrices hechas a la medida.
Escherichia coli
Los microarreglos preparados comercialmente generalmente se
preparan mediante una técnica conocida como fotolitografía (figura 15.7).
Aquí, se coloca una máscara sobre el chip y se usa luz para controlar la Figura 15.6 Relaciones filogenéticas de algunos procariotas con
síntesis del oligonucleótido directamente en la superficie del chip. Cada genomas secuenciados. Estos procariotas se discuten en el texto.
agujero en la máscara contendrá eventualmente muchas copias de un Methanocaldococcus jannaschii está en el dominio Archaea, el resto son
miembros del dominio Bacteria. Se han secuenciado y comparado genomas
oligonucleótido diferente, y cada máscara puede controlar la síntesis de
varios cientos de miles de cuadrados. Por tanto, un solo microarreglo puede de una amplia diversidad de procariotas. Fuente: Proyecto de base de datos
contener cientos de miles de sondas diferentes, y cada sonda está presente ribosomal.
en millones de copias. Los microarreglos comerciales están disponibles con

sondas para cada gen u ORF expresado en los genomas de varios analizados, a menudo llamados objetivos, que pueden ser ARNm o ADNc
microbios (figura 15.8). Estos incluyen E. coli (alrededor de 4200 ORF), monocatenario (figura 15.9). Los nucleótidos objetivo se marcan con
patógenos como Helicobacter pylori (1590 ORF) y My cobacterium colorantes fluorescentes y se incuban con el chip en condiciones que
tuberculosis (4000 ORF), así como la levadura Sac charomyces cerevisiae garantizan la unión adecuada del ARNm objetivo (o ADNc) a su sonda
(aproximadamente 6600 ORF). complementaria. El objetivo no unido se lava y luego el chip se escanea
El análisis de la expresión génica mediante tecnología de micromatrices, con rayos láser. La fluorescencia en cada mancha o sonda indica que el
como muchas otras técnicas de genética molecular, se basa en la ARNm hibridó. El análisis del color y la intensidad de cada sonda muestra
hibridación entre la sonda de ADN y los ácidos nucleicos a ser qué genes se expresaron.
Genómica Comparada 391
grupo Se utilizan fluorocromos ored. Por ejemplo, el patógeno Heli cobacter pylori
1. protector habita en el estómago donde causa úlceras; su genoma ha sido secuenciado.
Uno podría querer saber qué genes de H. pylori son reprimidos o inducidos
aplicación de mascarilla
por la exposición a condiciones ácidas. Para determinar esto, se prepara el
ARNm celular total de bacterias cultivadas en condiciones neutras y se marca
Máscara
2. con un fluorocromo verde para que sirva como control o referencia, mientras
que el ARNm de células expuestas a pH ácido se marca con rojo. A
Irradiación continuación, las muestras de ARNm verde (referencia) y roja (experimental)
se mezclan y se hibridan con el mismo microarreglo. Después de lavar el
ARNm no adherido, se escanea el chip y se analiza la imagen por
3. computadora. Una mancha o sonda amarilla indica que se unieron números
aproximadamente iguales de moléculas de ARNm verdes y rojas (objetivos),
por lo que no hubo cambios en el nivel de expresión génica para ese gen. Si
un objetivo es rojo, había más ARNm de bacterias cultivadas en condiciones
ácidas experimentales cuando se mezclaron los dos ARNm, por lo que se
indujo este gen. Por el contrario, un objetivo verde indica que el gen fue
Una solución
reprimido tras la exposición al estrés ácido. Se utiliza un cuidadoso análisis
de imágenes para determinar la intensidad relativa de cada mancha, de modo
A A
4. que se pueda aproximar la magnitud de la inducción o represión de cada gen
Irradiación cuya expresión se altera.
Tal análisis conduce a la detección de genes cuya expresión cae en

5. patrones específicos. Para cualquier genoma microbiano dado, solo alrededor
A A
de la mitad a dos tercios de los ORF son genes conocidos, por lo que dichos
patrones pueden usarse para ayudar a asignar funciones tentativas a algunos
ORF desconocidos. Esto se debe a que los genes que se expresan en las
mismas condiciones pueden estar co-regulados, lo que sugiere que comparten
A A una función común o están involucrados en un proceso común. Sin embargo,
es importante tener en cuenta que los resultados de micromatrices representan
solución c solo los ARNm presentes en el momento de la preparación. Por lo tanto, si
un gen se expresa de forma transitoria, puede pasar desapercibido. Además,
C
si un producto génico se regula postraduccionalmente, por ejemplo mediante
C una c A
fosforilación, su ARNm estará presente pero la proteína puede no estar activa.
Figura 15.7 Construcción de un chip de ADN con secuencias de

oligonucleótidos adjuntas. Solo se muestran dos ciclos de síntesis. Los
15.6 GENÓMICA COMPARATIVA
pasos son los siguientes: (1) El soporte de vidrio se recubre con grupos
protectores sensibles a la luz que evitan la unión aleatoria de nucleósidos. Como hemos visto, un enfoque para aprender más sobre el genoma de
(2) La superficie se cubre con una máscara que tiene orificios cualquier microbio es compararlo con el de otros. Este es el dominio de la
correspondientes a los sitios para la unión de los nucleósidos deseados. genómica comparativa. La publicación de más de 200 genomas microbianos
(3) La luz láser que pasa a través de los orificios de la máscara elimina los publicados realmente ha cambiado nuestra comprensión de la biología
grupos protectores expuestos. (4) El chip se baña en una solución que microbiana. Una idea muy sorprendente es el hecho de que los genomas
contiene el primer nucleósido que se unirá. El nucleósido se acoplará microbianos no son tan estáticos como se pensaba. De hecho, los genomas
químicamente a los sitios activados por la luz. Cada nucleósido tiene un grupo microbianos son sorprendentemente fluidos y una parte sustancial del genoma
protector que se puede eliminar de la luz para evitar la adición de otro se transfiere entre células, no de padres a hijos. Como se discutió en el
nucleósido hasta el momento adecuado. (5) Los pasos 2 a 4 se repiten usando capítulo 13, esto se denomina transferencia de genes lateral u horizontal
una nueva máscara cada vez hasta que se hayan completado todas las (HGT). En términos generales, HGT es el intercambio de material genético
secuencias en el chip. entre organismos que no necesitan ser de linajes evolutivos similares. El
análisis del genoma ha revelado que la HGT con frecuencia está mediada por
El análisis de micromatrices de ADN se puede utilizar para determinar fagos y que la lisogenia puede ser la regla y no la excepción. De hecho,
qué genes se expresan durante la diferenciación celular o como resultado de algunos microbios portan múltiples profagos. Ha quedado claro que HGT es
una mutación. Una aplicación común de la tecnología de micromatrices en una fuerza evolutiva importante en la evolución microbiana a corto plazo y la
microbiología es determinar los genes cuya expresión cambia (regulada hacia especiación a largo plazo. Por ejemplo, se piensa que E. coli puede haber
arriba o hacia abajo) en respuesta a cambios ambientales (figura 15.9). En adquirido el operón lactosa (lac) de otro microbio y por lo tanto
este tipo de análisis, dos diferentes-col
Conjunto de sonda de chip genético Función de sonda híbrida
Monocatenario, fluorescente
diana de ADN marcada
24 metros
Sonda de oligonucleótidos
Cada sonda contiene millones

de copias de un determinado
sonda de oligonucleótidos.
1,28cm
Más de 200.000 sondas diferentes

complementario a la genética
informacion de interes
Imagen de matriz de sonda hibridada
Figura 15.8 Una micromatriz de ADN. El chip de ADN fabricado por Affymetrix, Inc. contiene sondas diseñadas para representar miles o
decenas de miles de genes.
llegó a ser capaz de colonizar el colon de los mamíferos, donde la leche y no en microbios neutrofílicos y alcalofílicos, los investigadores pueden
el azúcar es una fuente común de carbono. A mayor escala, la arqueona productora centrarse en posibles estrategias de adaptación (figura 15.10b).
de metano Methanosarcina mazei parece haber adquirido alrededor de un tercio de Otra área en la que la genómica comparativa ha sido recientemente
sus genes de otros procariotas. Eso aplicado es el desarrollo de vacunas. La promesa de nuevas vacunas como
parece que los microbios usan HGT para desarrollar rápidamente la capacidad de resultado directo de la secuenciación del genoma se trata ampliamente en el
colonizar nuevos nichos ecológicos. prensa popular. Sin embargo, encontrar buenos objetivos para el desarrollo
La genómica comparativa puede proporcionar información útil para tratar de de nuevas vacunas es complicado. Las moléculas (antígenos) que forman
discernir el origen y la prevalencia de rasgos fenotípicos particulares. Un la base de una vacuna eficaz debe cumplir muchos requisitos, entre ellos: (1) el
ejemplo lo proporciona la secuencia del genoma de Picrophilis torridus. Esta arquea antígeno debe ser expresado por el patógeno durante
crece de manera óptima a un pH de 0,7 y una temperatura de 65°C. Prospera en infección; (2) el antígeno debe ser secretado o encontrado en el
campos calientes, ácidos y sulfatáricos, un hábitat que superficie del patógeno; (3) debe encontrarse en todas las cepas del
comparte con otras arqueas extremófilas, como Thermoplasma, y patógeno; (4) debe provocar una respuesta inmunitaria del huésped; y (5) el antígeno
el Sulfolobus , relacionado más distantemente (figura 15.10a). Entender los debe ser esencial para la supervivencia del patógeno, al menos mientras
mecanismos por los cuales estos microbios sobreviven bajo estos está en el anfitrión. Teniendo en cuenta los miles de ORF que se revelan en cada
circunstancias no es puramente académico, ya que las proteínas diseñadas para genoma anotado, encontrar genes cuyos productos
resistir un trato duro tienen importancia industrial. En la mayoría cumplir con todos estos criterios puede parecer casi imposible. Sin embargo,
En algunos casos, los microbios que viven a pH bajo son capaces de mantener un utilizando la genómica comparativa, los investigadores pueden examinar los genomas
pH interno neutro, pero este no es el caso de P. torridus, cuyo pH intracelular es de de múltiples cepas de un patógeno dado para crear una "lista corta" de
alrededor de 4,6. Esto sugiere que ha desarrollado una estrategia única candidatos. Esto reduce el número de antígenos potenciales a un número manejable.
para prevenir daños macromoleculares irreversibles. Al comparar el Luego, estos antígenos se prueban en una variedad de ensayos para descubrir las
genes y sus productos que se encuentran solo en estos acidófilos mejores moléculas para el desarrollo de vacunas. Esta
proteómica 393
Prueba de ARN ARN de referencia Excitación

clones de ADN
Láser 1 Láser 2
Transcripción inversa
Etiqueta cDNA con

Emisión
tintes fluorescentes
purificación por
amplificación por PCR
Impresión
robótica
Hibridar cDNA a Análisis

microarray informático
Figura 15.9 Un sistema de micromatrices para monitorear la expresión génica. Los genes clonados de un organismo se amplifican mediante PCR y,
después de la purificación, una impresora robótica aplica las muestras para generar una micromatriz manchada. Para controlar la expresión de la enzima, el
ARNm de los cultivos de prueba y de referencia se convierte en ADNc mediante transcriptasa inversa y se marca con dos colorantes fluorescentes diferentes. La
mezcla marcada se hibrida con la micromatriz y se escanea usando dos láseres con diferentes longitudes de onda de excitación. Las respuestas de fluorescencia
se miden como proporciones normalizadas que muestran si la respuesta del gen de prueba es mayor o menor que la de referencia.
El proceso se utilizó para el desarrollo de una vacuna experimental contra el conjunto de proteínas celulares debido a los diferentes niveles de mRNA y
estreptococo del grupo B (GBS). El GBS causa infecciones graves en los estabilidad de proteínas y regulación postraduccional. La medición de los
bebés, por lo que es muy deseable contar con una vacuna. Se compararon niveles de ARNm puede mostrar la dinámica de la expresión génica y decir lo
ocho genomas de aislados clínicos de GBS y se analizaron 312 antígenos de que podría ocurrir en la célula, mientras que la proteómica descubre lo que
superficie para determinar su capacidad para proteger a los ratones de la realmente está sucediendo. Gran parte de la investigación en esta área se
infección. Cuatro resultaron ser eficaces y, cuando se combinaron en una conoce como proteómica funcional. Se centra en determinar la función de
sola vacuna, protegieron a los animales contra la infección por todas las diferentes proteínas celulares, cómo interactúan entre sí y las formas en que
cepas clínicas conocidas. Esto demuestra dos conceptos importantes: (1) el se regulan.
análisis del genoma es un mecanismo poderoso para obtener información, Aunque actualmente se están desarrollando nuevas técnicas en
pero los resultados deben verificarse experimentalmente; y (2) la genómica proteómica, nos centraremos brevemente solo en el enfoque más común, la
cumplirá al menos algunas de las expectativas descritas por la prensa popular. electroforesis en gel bidimensional. En este procedimiento, una mezcla de
proteínas se separa usando dos procedimientos electroforéticos diferentes
(dimensiones). Esto permite la visualización de miles de proteínas celulares,
que de otro modo no se separarían en una única dimensión electroforética.
15.7 PROTEÓMICA
Como se muestra en la figura 15.11, la primera dimensión utiliza el enfoque
La función del genoma se puede estudiar tanto a nivel de traducción como a isoeléctrico, en el que las proteínas se mueven electroforéticamente a través
nivel de transcripción. El conjunto completo de proteínas que produce un de un gradiente de pH (p. ej., pH de 3 a 10). Primero, la mezcla de proteínas
organismo se denomina proteoma. Por lo tanto, la proteómica es el estudio se aplica a un gel de acrilamida en un tubo con un gradiente de pH inmovilizado
del proteoma o la variedad de proteínas que puede producir un organismo. y se somete a electroforesis. Cada proteína se mueve a lo largo del gradiente
Es una disciplina esencial porque la proteómica proporciona información de pH hasta que la carga neta de la proteína es cero y la proteína deja de
sobre la función del genoma que los estudios de ARNm no pueden. moverse. El pH en este punto es igual al punto isoeléctrico de la proteína. Así,
No siempre existe una correlación directa entre el ARNm y el la primera dimensión separa las proteínas
arqueas proteína. A veces se analizan proteínas o conjuntos de fragmentos

a través de dos espectrómetros de masas en secuencia, un proceso conocido como
Termoplasma
EM en tándem (figura 15.12). El primer espectrómetro separa proteínas y fragmentos,
acidófilo (Ta)
que se fragmentan aún más. El segundo
Picrophilus
Crenarchaea
torridus (Pt) el espectrómetro luego determina la secuencia de aminoácidos de cada
Sulfolobus fragmento producido en la primera etapa. La secuencia de un todo
solfataricus (Ss) euriarquea
la proteína a menudo se puede determinar mediante el análisis de tales datos de
secuencias de fragmentos. Alternativamente, si el genoma del organismo tiene
sido secuenciado, sólo la secuencia de los aminoácidos N-terminales
bacterias es necesario obtener. Luego se utiliza el análisis por computadora para comparar
eucaria
esta secuencia parcial de aminoácidos con las secuencias traducidas predichas de todos
los ORF anotados en el genoma del organismo. En
de esta forma se puede identificar tanto la proteína como el gen que la codifica. La
(a) investigación adicional de la proteína puede basarse en uno de los
grandes bases de datos de secuencias de proteínas que permiten comparar
análisis. La comparación de secuencias de aminoácidos puede proporcionar información
13
Las tres arqueas sobre la estructura, función y evolución de las proteínas.
21 45 Único La proteómica se ha utilizado para estudiar la fisiología de muchos
Punto Ta
20 microbios, incluyendo E. coli. Algunas áreas de investigación han sido la
Ss punto
efecto de la limitación de fosfato, cambios en el proteoma bajo condiciones anóxicas
condiciones, la producción de proteínas de choque térmico y la respuesta a la
(B)
tóxico 2,4-dinitrofenol. Un enfoque particularmente útil en
estudiar la función del genoma es inactivar un gen específico y luego
Figura 15.10 Genómica comparativa de Picrophilus
buscar cambios en la expresión de proteínas. Porque los cambios en el
tórrido (a) Árbol filogenético simplificado con las posiciones de los
se sigue el proteoma completo, la inactivación del gen puede decir mucho
tres arqueas acidífilas, termófilas P. torridus,T. acidophilum y S.
sobre la función de los genes y los efectos a gran escala de la actividad de los genes.
sulfataricus.(b) ORF encontrados en P. torridus,T. acidophilum y S.
Se han establecido bases de datos de genes y proteínas para varios microbios. Estos
sulfatar icus, ORF compartidos entre P. torridus y T. acidophilum (Ta Pt), o S.
proporcionan información sobre las condiciones bajo
sulfataricus (Sa Pt), y las que son exclusivas de P. torridus (Unique).
que cada proteína se expresa y dónde se encuentra en la célula.
Una segunda rama de la proteómica se llama proteómica estructural. Aquí la
en función de su contenido de aminoácidos ionizables. La segunda dimensión es la atención se centra en la determinación de la tridimensional
electroforesis en gel de poliacrilamida SDS (SDS-PAGE). SDS estructuras de muchas proteínas y usarlas para predecir las estructuras
( dodecil sulfato de sodio) es un detergente aniónico que desnaturaliza las proteínas y de otras proteínas y complejos proteicos. La suposición es que las proteínas se pliegan
recubre los polipéptidos con una carga negativa. Una vez que se ha completado el gel en un número limitado de formas, y que las proteínas pueden ser
iso eléctrico, se empapa en tampón SDS y luego agrupados en familias de estructuras similares. Cuando se determina un número de
colocado en el borde de un gel SDS-PAGE. Luego se aplica un voltaje. estructuras de proteínas para una familia dada, se conocerán los patrones de organización
En estas circunstancias, los polipéptidos se separan de acuerdo con de la estructura de proteínas o las reglas de plegamiento de proteínas.
su peso molecular , es decir, el polipéptido más pequeño viajará Luego, los biólogos computacionales (es decir, los bioinformáticos) usan esta información
más rápido y más lejano. La electrófesis de gel bidimensional puede resolver y la secuencia de aminoácidos de una proteína recién descubierta para predecir su forma
miles de proteínas; cada proteína se visualiza como un punto de variación final, un proceso conocido como modelado de proteínas.
intensidad dependiendo de su abundancia celular. Proteínas radiomarcadas
se utilizan normalmente, lo que permite una mayor sensibilidad para poder distinguir las
1. ¿Qué es la anotación del genoma? ¿Por qué crees que requiere conocimiento de
proteínas recién sintetizadas y determinar sus tasas de síntesis. El análisis por
matemáticas y estadística, así como biología e informática?
computadora se usa para comparar dos dimensiones
2. Describir cómo se construyen y utilizan los microarreglos para analizar la expresión
geles de microbios cultivados en diferentes condiciones o para comparar
génica. ¿Cómo podrían los siguientes científicos usar micromatrices de ADN en
cepas de tipo salvaje y mutantes. Se han desarrollado sitios web para la
su investigación? (a) Un microbiólogo ambiental que esté interesado en cómo el
deposición de tales imágenes, lo que permite a los investigadores acceder a valiosos
El microbio del suelo Rhodopseudomonas palustris degrada el compuesto
y bases de datos cada vez mayores. Electroforesis en gel (sección 14.4)
tóxico 3-clorobenceno. (b) Un microbiólogo médico que quiere aprender sobre
La electroforesis en gel bidimensional es aún más poderosa
cómo el patógeno Salmonella sobrevive dentro de una célula huésped.
cuando se combina con espectrometría de masas (MS). La mancha de proteína
3. ¿Por qué la electroforesis en gel bidimensional permite la visualización de muchos
desconocida se corta del gel y se escinde en fragmentos mediante tratamiento con
más proteínas celulares que las vistas en electroforesis en una sola dimensión?
enzimas proteolíticas. Luego se analizan los fragmentos.
4. ¿Cuál es el papel de la espectrometría de masas en la proteómica?
por un espectrómetro de masas y se traza la masa de los fragmentos.
5. ¿Cuál es la diferencia entre proteómica funcional y estructural? Cómo
Esta huella dactilar masiva se puede utilizar para estimar el amino probable
¿Cree que la proteómica estructural podría usarse en el desarrollo de vacunas?
composición ácida de cada fragmento e identificar tentativamente la
Perspectivas de las gemas microbianas 395
Cargue una mezcla de proteínas Figura 15.11 Electroforesis en gel bidimensional. (a) La técnica
en un gel de tubo de enfoque implica dos pasos de electroforesis. Primero, se separa una mezcla de
isoeléctrico.
proteínas en un gel de enfoque isoeléctrico que tiene forma de tubo. Las proteínas
migran hasta el punto en que su carga neta es cero. Este tubo de gel se coloca
pH 4,0
en un pozo largo encima de un gel de poliacrilamida SDS. Este segundo gel
separa las proteínas según su masa. En este diagrama, solo se ven unos pocos
Las proteínas migran hasta que puntos, pero un experimento real implicaría una mezcla de cientos o miles de
alcanzan el pH donde su carga proteínas diferentes. (b) Una autorradiografía de un gel 2-D. Cada punto representa
neta es 0. En este punto, una
una proteína única.
sola banda podría contener dos
o más proteínas diferentes.
pH 10,0
Coloque el gel del tubo sobre un gel

SDS y separe las proteínas según su
masa molecular. pH 4,0 pH 10,0
SDS-gel
pH 4,0 pH 10,0 200kDa
200kDa
10kDa
10kDa
(b) Una autorradiografía de un gel bidimensional. Cada

(a) La técnica de electroforesis en gel bidimensional la proteína es un punto discreto.
15.8 PERSPECTIVAS DE GENOMAS MICROBIANOS era ha aportado nuevos conocimientos sobre la fisiología microbiana, la
ecología y la evolución.
El desarrollo de la secuenciación aleatoria del genoma completo y otras
técnicas de secuenciación del genoma ha llevado a la caracterización de
muchos genomas microbianos en un tiempo relativamente corto. Estos
Identificación de genes con funciones desconocidas
genomas representan una gran diversidad filogenética y las comparaciones Un resultado común de los estudios genómicos es la identificación de genes a
entre ellos contribuirán significativamente a comprender los procesos evolutivos, los que no se les puede asignar ninguna función. Por ejemplo, el análisis del
deducir qué genes son responsables de diversos procesos celulares, genoma del importante patógeno Neisseria meningitidis, que es un agente
diseccionar las complejidades de la regulación genética y la organización del causante de la meningitis, es bastante típico. Si bien a poco más de la mitad
genoma. Además, la genómica se ha convertido en una herramienta importante de los ORF se les pueden asignar funciones biológicas en función de la
en el desarrollo de nuevos agentes antimicrobianos y puede conducir a nuevos similitud con proteínas de función conocida, el 16 % de los ORF coinciden con
enfoques para desintoxicar desechos peligrosos y proporcionar energía. genes de función desconocida en otros organismos y alrededor de una cuarta
parte no tienen ninguna coincidencia en la base de datos. Se han desarrollado
El examen de los genomas secuenciados hasta la fecha ha proporcionado varios enfoques en un intento de resolver la identidad de genes desconocidos.
información valiosa, ha generado muchas preguntas y ha estimulado nuevas Quizás el más completo se haya probado en la levadura de Baker, también
áreas de investigación. En esta sección, aprendemos cómo los científicos están conocida como Saccharomyces cerevisiae.
utilizando enfoques experimentales para responder algunas preguntas no Cuando el genoma de S. cerevisiae se secuenció por completo en 1996,
resueltas que surgen del análisis del genoma, así como también cómo la genómica solo alrededor de un tercio de los ORF tenían una función conocida. En
norte
En ese momento, un consorcio internacional de científicos inició un proyecto para
dilucidar el papel de los ORF a los que no se les podía atribuir ninguna función.
asignado. Decidieron crear una colección de S. cerevisiae

cepas, cada una con una deleción en un ORF específico de función desconocida.
C
Estos mutantes luego podrían usarse en estudios diseñados para revelar sus fenotipos
mutantes. El fenotipo de cada mutante.
luego se usaría para asignar una función tentativa para el gen.
Las eliminaciones de levadura se crearon mediante una estrategia genética
basada en PCR. En este enfoque, se utilizó PCR para crear casetes de ADN que
Digerir la proteína en podría introducirse en las células de levadura y, a través de la recombinación,
pequeños fragmentos reemplazar un gen específico en el genoma (figura 15.13). Cada ADN
usando una proteasa.
casete contenía tres elementos principales: (1) un gen que codifica la resistencia al
agente antifúngico geneticina (KanMX) que reemplazó
norte
el ORF objetivo. Las células transformadas se incubaron en presencia de geneticina,
de modo que solo las células en las que se había
reemplazado por el gen KanMX pudieron crecer. (2) Secuencias
flanqueando los codones de inicio y parada del ORF objetivo fueron clonados
C
a ambos lados del gen KanMX . Porque estas secuencias
coincidieron con los de los extremos 5 'y 3' del ORF objetivo, fueron
utilizado para dirigir la recombinación homóloga entre el casete y
el cromosoma, lo que resulta en el reemplazo del ORF con el
determinar la masa gen KanMX . (3) Una secuencia de ADN única llamada "barra molecular".
de estos fragmentos con código” se insertó en cada casete para que, una vez que el casete se hubiera integrado
primer espectrómetro.
en el cromosoma, se pudieran identificar las cepas individuales en una población mixta,
como se describe a continuación. Estos casetes fueron
se utilizó para generar más de 2000 cepas mutantes por deleción de S. cere visiae.
PCR (sección 14.3); Creando variabilidad genética: Recombinación en el
1.652 daltones
nivel molecular (sección 13.4)
Los fenotipos de estos mutantes "yeast knock-out" (YKO)
se determinaron en ensayos de competición paralelos. Aquí, se cultivaron juntas
grandes mezclas de diferentes mutantes de deleción bajo condiciones ambientales
específicas (p. ej., alta temperatura o pH). los
El cultivo se muestreó periódicamente y se usó PCR para amplificar el
código de barras molecular de cada eliminador. Por lo tanto, se siguieron los cambios
en las poblaciones mutantes a lo largo del tiempo. Si el gen eliminado fuera importante
0 4,000
para la supervivencia y el crecimiento bajo las condiciones de la prueba, el mutante
Masa/carga deletante al que le faltaba ese gen creció más lentamente y la abundancia de este gen
mutante finalmente se negó. Para evaluar el número relativo de cada
cepa mutante, una mezcla de códigos de barras moleculares amplificados por PCR fue
Analiza este fragmento con hibridaron con sus secuencias complementarias en un microarreglo. los
segundo espectrómetro. la intensidad de cada punto en el microarray reflejó el tamaño de la población
El péptido se fragmenta.
de un extremo de cada cepa en la mezcla. Mutaciones en genes cuyos productos
promover el crecimiento en las condiciones que se estudian dio un efecto menos intenso
señal que aquellos cuyos productos no son requeridos.
Usando este enfoque, se han identificado muchos genes, incluidos aquellos que
están involucrados en el crecimiento en medios ricos y mínimos, a diferentes valores
1,201 1,428 1,652 de pH y en presencia de ciertos fármacos.
1,008 1,315 1,565 De hecho, a finales de 2003, el 80% de los genes de levadura anotados habían
1,114
funciones conocidas (aunque algunas de ellas fueron reveladas por análisis de genes
ortólogos recientemente identificados) y todos los genes en el
Se espera que el genoma sea "conocido" en algún momento de 2007. Claramente,
este enfoque para diseccionar un genoma proporciona información importante
900 1,800
Masa/carga Figura 15.12 El uso de espectrometría de masas en tándem para

ÿAsnÿSerÿAsnÿLeuÿHisÿSerÿ Determinar la secuencia de aminoácidos de un péptido.
extremo 3ÿ
5 ' extremo de ORF de ORF
KanMX
Único y específico
secuencia de nucleótidos
Figura 15.13 Casete de ADN utilizado en la construcción de mutantes por deleción de levadura. El gen KanMX codifica la resistencia a la
agente antifúngico geneticina para que los mutantes de levadura puedan seleccionarse y mantenerse. Las secuencias azules que flanquean el gen KanMX son las mismas que
las secuencias a cada lado del ORF a reemplazar. El código de barras molecular es un elemento genético adicional insertado en cada casete para que
los mutantes individuales pueden identificarse mediante amplificación por PCR del ADN genómico.
y se están realizando proyectos similares para E. coli y la bacteria formadora de Una de las tendencias más alarmantes en el tratamiento de enfermedades infecciosas
endosporas Bacillus subtilis. actualizaciones de estos enfermedad es el surgimiento de bacterias resistentes a los antibióticos. Esto es
Los proyectos se publican en Internet. particularmente cierto entre los estafilococos. Estos microbios grampositivos causan
aproximadamente 1 millón de infecciones graves cada año.
Los dos patógenos oportunistas predominantes son Staphylococ cus epidermidis y S.
Análisis Genómico de Microbios Patógenos aureus. S. epidermidis se encuentra comúnmente
El análisis de los genomas de patógenos vegetales y animales proporciona en la piel y ha surgido como un patógeno grave sólo en los últimos
información considerable sobre la evolución de la virulencia, las interacciones del años. Se ha descubierto que infecta dispositivos médicos implantados como
patógeno del huésped, los posibles métodos de tratamiento y la vacuna válvulas cardíacas artificiales. Por el contrario, S. aureus es más agresivo
desarrollo. Los genomas de numerosos patógenos han sido y puede causar condiciones que van desde infecciones menores de la piel hasta
secuenciados y comparados con los genomas de patógenos relacionados abscesos potencialmente mortales, infecciones cardíacas y síndrome de choque
filogenéticamente, así como con parientes cercanos que no son patógenos. tóxico. Durante la década de 1960, la meticilina y otros semisintéticos
El genoma de Mycoplasma genitalium fue uno de los primeros en Los antibióticos de penicilina se recetaron con frecuencia para tratar las infecciones
ser secuenciado. Este microbio infecta las células de los genitales humanos y locales por estafilococos, lo que dio lugar al desarrollo de S. aureus resistente a la
vías respiratorias. Tiene un genoma de tan solo 580 kilobases (0,58 Mb), meticilina (MRSA) y S. epidermidis (MRSE). Por
uno de los genomas más pequeños de cualquier organismo (figura 15.14). Por lo tanto 2005, el 60% de los aislamientos clínicos de S. aureus fueron resistentes a la
Los datos de secuencia son de gran interés porque ayudan a establecer meticilina; ¡algunas cepas eran resistentes hasta a 20 antibióticos diferentes!
el conjunto mínimo de genes necesarios para la existencia de vida libre. Ahí El único fármaco eficaz contra estas cepas multirresistentes
parecen ser aproximadamente 517 genes (480 que codifican proteínas fue la vancomicina, pero las cepas de S. aureus resistentes a la vancomicina
genes y 37 genes para especies de ARN). Alrededor de 90 proteínas están ahora han sido aislados. Quimioterapia antimicrobiana (capítulo 34)
involucradas en la traducción, y solo alrededor de 29 proteínas para la replicación del Las cepas de S. aureus y S. epidermidis que se aislaron inicialmente entre 1960
ADN. Curiosamente, 140 genes, o el 29% de los del genoma, y 1998 varían en su resistencia a varios
codifican proteínas de membrana, y hasta el 4,5% de los genes parecen de antibióticos y sus niveles de virulencia. Los genomas de varias de estas cepas se
participar en la evasión de las respuestas inmunitarias del huésped. Solo 5 genes han utilizado en análisis genómicos comparativos para rastrear la evolución de la
tienen funciones reguladoras. Incluso en este pequeño genoma, alrededor de una virulencia y la resistencia a los antibióticos.
quinta parte de los genes no coinciden con ninguna secuencia proteica conocida. El origen de unos 1.700 genes que comparten todas las cepas de
Comparación con M. pneumoniae y Ureaplasma urealyticum ambas especies es difícil de determinar. Sin embargo, la mayoría de los genes que son
genomas y estudios de inactivación de genes por inserción de transposones las cepas específicas parecen haber sido introducidas por profagos, transposones,
sugieren que alrededor de 108 a 121 genes de M. genitalium pueden no ser esenciales secuencias de inserción y transferencia de genes mediada por plásmidos.
para la supervivencia. Por lo tanto, para este microbio, el conjunto mínimo de genes Por ejemplo, este análisis revela que un Enterococcus faecalis
parece que se requieren aproximadamente 300 genes para las condiciones de el transposón introdujo resistencia a la vancomicina en S. aureus. Ambas cosas
crecimiento en el laboratorio; alrededor de 100 de estos tienen funciones desconocidas. S. aureus y S. epidermidis han adquirido los genes que codifican
Haemophilus influenzae tiene un genoma mucho más grande, 1,8 megabases y una cápsula hecha de polímeros de glutamato de la gram-positiva
1.743 genes (figura 15.15). Más de un tercio de los patógeno Bacillus anthracis, el agente causal del ántrax. En todo
Los genes tienen funciones desconocidas. La bacteria carece de tres Krebs. tres especies, la cápsula de poliglutamato es un importante factor de virulencia.
genes del ciclo y por lo tanto un ciclo funcional. Dedica muchos genes Enfermedades de contacto directo: enfermedades estafilocócicas (sección 38.3)
(64 genes) a funciones reguladoras. Haemophilus influenzae es un El genoma de otro patógeno, Bacillus anthracis, se sometió a un intenso escrutinio
especies capaces de transformación natural. El proceso debe ser luego de una serie de bioterrorismo basado en cartas.
muy importante para esta bacteria porque contiene 1.465 copias ataques en el otoño de 2001. Aunque los genes que codifican los componentes de la
de la secuencia de reconocimiento utilizada en la captación de ADN durante la toxina del ántrax están codificados en plásmidos, el cromosoma B. an thracis tiene
transformación. Transformación de ADN (sección 13.8) una serie de genes que aumentan la virulencia
Figura 15.14 Mapa del genoma de Mycoplasma genitalium. Las regiones de codificación predichas se muestran con la dirección de transcripción
indicada por flechas. Los genes están codificados por colores según su papel funcional. El operón de ARNr, los genes de ARNt y la proteína adhesina
Se indican los operones (MgPa). Reimpreso con permiso de Fraser, CM, et al. Copyright 1995. El complemento génico mínimo de
Mycoplasma genitalium. Ciencia 270: 397–403. Figura 1, página 398 y The Institute for Genomic Research.
con ortólogos en los patógenos B. cereus, B. thuringiensis y Lis teria monocytogenes. Aunque herramienta importante en el desarrollo de nuevos antibióticos para combatir la amenaza
el genoma de B. anthracis es más cada vez mayor de múltiples bacterias resistentes a los medicamentos. Tradicionalmente, nuevo
similar a la de B. cereus (una causa de intoxicación alimentaria), los ortólogos agentes antimicrobianos han sido descubiertos mediante la detección de miles
encontradas en el genoma de B. thuringiensis son particularmente interesantes. B. de productos naturales por su capacidad para inhibir el crecimiento bacteriano. Esta
thuringiensis es un patógeno de insectos y la fuente de la toxina Bt, que es un proceso que requiere mucha mano de obra, e incluso cuando es realizado por robots, es
se utiliza como insecticida comercial. La evidencia genómica sugiere no particularmente eficiente. Sin embargo, la genómica se puede utilizar para identificar
que B. anthracis puede derivar de un ancestro que infectaba insectos. nuevas estructuras o metabolitos producidos por patógenos específicos.
L. monocytogenes es un patógeno intracelular y los genes encontrados microbios Luego, los científicos pueden diseñar nuevos medicamentos basados en estos
en ambos organismos puede permitir que estos patógenos sobrevivan dentro del huésped componentes celulares, que se denominan dianas farmacológicas. Este nuevo enfoque
células del sistema inmunitario llamadas macrófagos. A diferencia de los genomas de de sintetizar fármacos para interactuar con dianas moleculares particulares es
muchas otras especies bacterianas, hay poca variación en las secuencias de nucleótidos llamado diseño racional de medicamentos y como se describió anteriormente para vacunas
entre diferentes cepas de B. anthracis. Sin embargo, la cuidadosa secuenciación comparativa desarrollo, se ve facilitado en gran medida por la disponibilidad de
del genoma de varias cepas clave genomas
proporciona pistas sobre el origen de la cepa B. anthracis utilizada en La genómica también ha promovido nuestra comprensión de los patógenos.
los ataques bioterroristas estadounidenses de 2001 (figura 15.16). Microbios como productos: que son difíciles o imposibles de cultivar y aquellos con vida inusual
bioplaguicidas (sección 41.8); Preparación contra el bioterrorismo (sección 36.9) ciclos Las clamidias son bacterias gramnegativas, cocoides e inmóviles.
La genómica claramente nos ayuda a comprender cómo las bacterias resistentes a los antibióticos que se reproducen solo dentro de las vesículas citoplasmáticas de las células eucariotas
se comparten los genes y cómo surgen nuevos patógenos. También es importante por un ciclo de vida único. Chlamydia trachomatis infecta a humanos y
pequeño 1
yo no
Pequeño 1.800.000 100,000
pequeño RsrII
1,700,000 pequeño
1,600,000 200,000
pequeño
pequeño
pequeño
pequeño
pequeño
RsrII
300.000
RsrII
1,500,000
400.000
1,400,000
pequeño
500,000
1,300,000
pequeño 600.000
pequeño
1,200,000
pequeño
Pequeños 700.000
1,100,000
pequeño
pequeño
1,000,000
RsrII Pequeños 800.000
900.000
Figura 15.15 Mapa del genoma de Haemophilus influenzae. Las regiones de codificación previstas en el círculo concéntrico exterior se indican con colores que
representan sus roles funcionales. El perímetro exterior muestra los sitios de restricción NotI, RsrII y SmaI. El círculo concéntrico interior muestra regiones de alto
contenido de GC (rojo y azul) y alto contenido de AT (negro y verde). El tercer círculo muestra la cobertura por clones (azul). El cuarto círculo muestra las ubicaciones
de los operones de ARNr (verde), los ARNt (negro) y el profago similar a mu (azul).
El quinto círculo muestra repeticiones simples en tándem y el origen probable de la replicación (flechas verdes que apuntan hacia afuera). Las líneas rojas son
posibles secuencias de terminación. Reimpreso con permiso de Fleischman, RD, et al. 1995. Secuenciación aleatoria y ensamblaje del genoma completo de
Haemophilus influenzae Rd. Ciencia 269: 496–512. Figura 1, página 507 y The Institute of Genomic Research.
causa la enfermedad de transmisión sexual uretritis no gonocócica, can también fue inesperado porque las paredes celulares de las clamidias
probablemente la enfermedad sexual de transmisión más común en los carecen de pepti doglycan. Los microbiólogos no habían podido explicar
Estados Unidos. También es la principal causa de ceguera prevenible en por qué el antibiótico penicilina, que interrumpe la síntesis de
el mundo. El ciclo de vida de la bacteria es tan inusual que uno esperaría peptidoglicanos, es capaz de inhibir el crecimiento de clamidias. La
que su genoma fuera algo atípico. Sorprendentemente, este no es el caso. presencia de enzimas biosintéticas de peptidoglicano ayuda a explicar el
Los microbiólogos consideraban a la clamidia como un “parásito efecto de la penicilina, pero nadie sabe el propósito de la síntesis de
energético” y creían que obtenía todo su ATP de la célula huésped. Los peptidoglicano en esta bacteria. Otra gran sorpresa es la ausencia del
resultados del genoma muestran que Chlamydia tiene los genes para gen ftsZ , que se pensaba que todas las bacterias y arqueas necesitaban
producir al menos algo de ATP por sí misma, aunque también tiene genes para la formación del tabique durante la división celular. La ausencia de
para el transporte de ATP del huésped. La presencia de enzimas para la síntesis este
de peptidogli
gen hace que uno se pregunte cómo se divide la clamidia . Puede ser que algu
B estos genes pueden sufrir una recombinación para generar nuevos

proteínas de superficie, lo que permite al organismo evitar el ataque del sistema
aislado de florida inmunitario. Podría ser posible desarrollar una vacuna para la sífilis
utilizando algunas de las proteínas de superficie recién descubiertas. también podemos
C ser capaz de identificar cepas de T. pallidum utilizando estas proteínas de superficie,
lo cual sería de gran importancia en la epidemiología de la sífilis. los
Ancestral D En última instancia, los resultados del genoma deberían ayudarnos a comprender cómo
"ames"
T. pal lidum causa la sífilis. Alrededor del 40% de los genes tienen funciones desconocidas.
A Posiblemente algunos de ellos son responsables de evitar host
defensas y para la producción de toxinas y otros factores de virulencia.
Ancestral 1997 TX cabra
B. antracis Enfermedades de contacto directo: Enfermedades de transmisión sexual (sección 38.3)
1925 IA vaca Durante siglos, la tuberculosis ha sido uno de los principales flagelos
de la humanidad Cerca de un tercio de la población humana está infectada
con el agente causal Mycobacterium tuberculosis. Después de establecer su residencia
en las células del sistema inmunitario en el pulmón, a menudo permanece en un estado
2001 CA vaca latente hasta que el sistema inmunitario del huésped se recupera.
comprometido. La enfermedad mata a unos 3 millones de personas al año y
Figura 15.16 Árbol filogenético propuesto del aislado de Ames de B. es la causa directa de la muerte de muchos pacientes de SIDA. Como era de esperar, m.
anthracis utilizado en ataques bioterroristas estadounidenses en
la tuberculosis se está volviendo cada vez más resistente a los medicamentos. estudios del genoma
el otoño de 2001. Los aislamientos A–D son cepas de laboratorio; otro podría ser de gran importancia en la lucha por controlar el renovado
los aislamientos se indican por estado y año de cultivo inicial. propagación de la tuberculosis. El genoma anotado de M. tuberculosis fue
Los aislados B y C son idénticos al aislado recuperado del primero
publicado en 1998; en ese momento se predijo que tenía 3.974 genes.
víctima de los ataques (aislado de Florida). El aislado D difiere sólo por la En 2002, se volvió a examinar su genoma y, basándose en gran medida en la inspección
inserción de una sola adenina en una región clave utilizada para la comparación. de pequeños ORF, se identificaron 82 genes adicionales. los
La cepa de laboratorio A tiene dos bases adicionales y ha perdido una de número de genomas publicados durante los cuatro años intermedios es
los plásmidos que codifican la toxina. Este análisis del genoma completo demostró la reflejado por el cambio en el número de genes de función desconocida:
presencia de cuatro elementos genéticos en el genoma que en 1998 había 606 genes para los que no había ninguna función u ortólogo
variar, a pesar de análisis previos que sugieren que estas cepas fueron podría ser asignado; en 2002, solo había 272 genes de este tipo. Significativamente, la
idénticos o casi idénticos. Este enfoque es un nuevo y poderoso mayoría de estos genes siguen siendo hipotéticos porque, aunque se encontraron
técnica para el seguimiento de brotes de enfermedades infecciosas. ortólogos, aún no se ha realizado una asignación funcional.
hecha. Sin duda, a medida que se secuencian más genomas y proteomas
con funciones desconocidas juegan un papel importante en la división celular. Quizás examinado, disminuirá el número de genes de función desconocida para todos los
Chlamydia emplea un mecanismo de división celular diferente al organismos cuyos genomas han sido secuenciados.
la de otros procariotas. Finalmente, el genoma contiene al menos 20 ¿Qué ha revelado la secuencia del genoma de este antiguo patógeno? Más de 250
genes que se han obtenido de células huésped eucarióticas (la mayoría de las bacterias genes están dedicados al metabolismo de los lípidos (E.
no tienen más de 3 o 4 de tales genes). Algunos de estos genes son coli tiene solo alrededor de 50 genes de este tipo), y M. tuberculosis puede obtener
parecido a una planta; originalmente , la clamidia puede haber infectado a un huésped similar a una planta gran parte de su energía degradando los lípidos del huésped. Hay una sorprendentemente
y luego pasó a los animales. Phylum Chlamydiae (sección 21.5); El ciclo celular gran número de elementos reguladores en el genoma. esto puede significar
procariótico: citocinesis (sección 6.1) que el proceso infeccioso es mucho más complejo que antes
Uno de los patógenos humanos más difíciles de estudiar es el pensamiento. Dos familias de nuevas proteínas ricas en glicina con desconocido
agente causal de la sífilis, Treponema pallidum. Esto se debe a que funciones están presentes y representan alrededor del 10% del genoma. Ellos
No es posible cultivar T. pallidum fuera del cuerpo humano. Nosotros puede ser una fuente de variación antigénica involucrada en la defensa contra
sabemos poco sobre su metabolismo o la forma en que evita las defensas del huésped, el sistema inmunitario del huésped. Un problema médico importante ha sido la
y aún no se ha desarrollado una vacuna para la sífilis. Naturalmente, el falta de una vacuna altamente efectiva. una gran cantidad de proteínas que
la secuenciación del genoma de T. pallidum generó un entusiasmo y una esperanza son secretados por la bacteria o en la superficie bacteriana tienen
considerables. Resulta que T. pallidum está lisiado metabólicamente. Puede utilizar los identificados a partir de la secuencia del genoma. Se espera que algunos de
carbohidratos como fuente de energía, pero carece de la estas proteínas se pueden utilizar para desarrollar mejores vacunas. Esto es
Ciclo TCA y enzimas de fosforilación oxidativa (figura 15.17). particularmente importante en vista de la propagación de enfermedades multirresistentes.
T. pallidum también carece de muchas vías biosintéticas (p. ej., para la enzima Tuberculosis M. Mycobacterium tuberculosis (secciones 24.4 y 38.1)
cofactores, ácidos grasos, nucleótidos y algunas proteínas transportadoras de electrones) El genoma de M. tuberculosis se ha comparado con el
y debe depender de moléculas suministradas por su huésped. De hecho, sobre genomas de dos parientes—M. leprae, que causa la lepra, y
El 5% de sus genes codifican proteínas de transporte. Dada la falta de varios M. bovis, el agente causante de la tuberculosis en una amplia gama de animales, incluidas
vías críticas, no es sorprendente que el patógeno no haya sido las vacas y los seres humanos. M. bovis y M. leprae
cultivado con éxito. Los genes de las proteínas de superficie son de particular interés. T. Los genomas difieren de los de M. tuberculosis en algunos aspectos importantes .
pallidum tiene una familia de genes de proteínas de superficie caracterizada por muchas formas. Los genomas de M. bovis y M. tuberculosis son muy similares: casi un 99,5%
secuencias repetitivas. Algunos han especulado que idénticos a nivel de secuencia. Sin embargo, el m
cationes K+
carnitina Cu+
ATPasa tipo P ntpJ
Glutamato/aspartato Glutamato TpF1 Cationes
Pote de espermidina/ troABCD
putrescinaABCD Mg2+
Aminoácidos neutros PRODUCCIÓN DE ENERGÍA mgtCE
D-alanina/glicina dagA Glucosa

Ribosa-5-P Na+
Glucosa-6-P oad AB
Ribulosa-5-P
Vía pentosa fosfato Glic-3-P L-prolina
alanina 6-P-gluconato
glucólisis L-Serina L-glicina
L-Glutamato
tiamina Pi ADP
ENERGÍA
oxaloacetato L-Glutamina ATPasa tipo V
Nucleósidos/ PRPP
adenina ? Na+
nucleótidos piruvato L-aspartato ÿ-cetoglutarato L-asparagina
vertedero PPi lactato ATP SÍNTESIS DE MUREINA N-acetil-

Gin-1-
Acetil-CoA P ? -acetil-D-Gin 8 genes de
dAMP, dCMP, dTMP rampa, rCMP, rUMP Acetilo P síntesis de mureína UDP--
Ácido graso
acetil-Gin L-Glutamato
Acetato UDP- D-Glutamato
norte
dNDP rNDP
Ácido fosfatídico
Ribosa /
PARED CELULAR
galactosa dNTP rNTP Fosfatidil glic-P ?
norte
SÍNTESIS
rbsAC
Fosfatidil glicerol L-alanina D-alanina
Galactosa
mg/ABC Glicerol-3-P
D-alanil-D-alanina
atp
Malato/succinato/ SECRECIÓN DE PROTEÍNAS
fumarato dctM
Pi ADP sec excreción de proteínas
H+
y peptidasas
Glucosa/galactosa/ líder
glicerol-P(?)
22 lipoproteínas putativas
ATPasa tipo V
Figura 15.17 Vías metabólicas y sistemas de transporte de Treponema pallidum. Esto representa el metabolismo de T. pallidum como se deduce de
la anotación del genoma. Tenga en cuenta las capacidades biosintéticas limitadas y la amplia gama de transportadores. Aunque la glucólisis está presente,
faltan el ciclo TCA y el transporte respiratorio de electrones. Los signos de interrogación indican dónde existen incertidumbres o no se han encontrado las
actividades esperadas.
Al genoma de bovis le faltan 11 regiones separadas, lo que hace que su agente del tifus, una enfermedad que mató a millones durante la Primera y la
genoma sea un poco más pequeño (4,3 Mb frente a 4,4 Mb). Las disimilitudes Segunda Guerra Mundial. Carece de genes para la glucólisis y de muchos
de secuencia implican la inactivación de algunos genes, lo que genera genes para la biosíntesis de aminoácidos y nucleósidos. Al igual que M. lep
diferencias importantes en la forma en que las dos bacterias responden a las rae, su genoma contiene varios pseudogenes. También se han observado
condiciones ambientales. Esto puede explicar las diferencias en el rango de inactivación y eliminación de genes en patógenos de plantas. Por ejemplo, el
huéspedes entre estos dos patógenos estrechamente relacionados. La patógeno vegetal Phytoplasma asteris es transmitido por insectos y tiene un
divergencia entre M. tuberculosis y M. leprae es aún más llamativa. El genoma ciclo de vida intracelular tanto en sus insectos vectores como en sus plantas
de M. leprae es un tercio más pequeño que el de M. tuberculosis. hospedantes. Carece de muchos genes relacionados con la biosíntesis de
Aproximadamente la mitad del genoma está desprovisto de genes funcionales. aminoácidos, nucleótidos y ácidos grasos. También carece de muchos genes
En cambio, hay más de 1000 genes no funcionales degradados llamados que funcionan en el metabolismo energético. Presumiblemente, los microbios
pseudogenes. En total, M. leprae parece haber perdido hasta 2000 genes que obtienen nutrientes y ATP de sus huéspedes carecen de la presión
durante su carrera como parásito intracelular. Incluso carece de algunas de las selectiva necesaria para mantener los genes funcionales correspondientes.
enzimas necesarias para la producción de energía y la replicación del ADN. Enfermedades transmitidas por artrópodos (sección 38.2)
Esto podría explicar por qué la bacteria tiene un tiempo de duplicación tan
largo, alrededor de dos semanas en ratones. Una esperanza de los estudios
genómicos es que se puedan descubrir y utilizar proteínas de superficie críticas Análisis genómico de extremófilos Los microbios
para desarrollar una prueba sensible para la detección temprana de la lepra. que viven en entornos hostiles se denominan extremófilos.
Esto permitiría el tratamiento inmediato de la enfermedad antes de que ocurra daño a los nervios.genómico de tales microbios se ha llevado a cabo con el objetivo de
El análisis
Enfermedades de contacto directo: Lepra (sección 38.3) comprender cómo los organismos pueden tolerar condiciones ambientales
Otro microbio que ha reducido el tamaño de su genoma es Rickettsia extremas. Se han analizado los genomas de más de una docena de termófilos
prowazekii, miembro de la -proteobacteria, y parásito intracelular obligado de e hipertermófilos, incluidos miembros de Bacteria y Archaea . Originalmente,
piojos y humanos. es el causante se postuló que
habría una fuerte correlación entre el contenido de GC y la temperatura óptima de estudiar la biodiversidad microbiana. Se puede utilizar la genómica ambiental
crecimiento porque los pares de bases de GC, que comparten tres realizar un censo de las poblaciones microbianas, así como discernir las
enlaces de hidrógeno, son más estables a temperaturas más altas que AT presencia y abundancia de ciertas clases de genes. Es decir,
pares de bases, que comparten sólo dos. Sin embargo, no se ha discernido una la genómica puede preguntar, "¿Quién está ahí y qué están haciendo?" Que hacer
correlación significativa cuando el contenido de GC de genomas completos esto, los fragmentos de ADN se extraen directamente del medio ambiente
fue comparado. Curiosamente, existe una fuerte correlación entre la temperatura óptima y clonados en vectores de plásmidos, de forma muy similar a la construcción de
de crecimiento y el contenido de GC del tRNA y rRNA. bibliotecas genómicas. De esta manera una biblioteca de fragmentos de ADN ambiental
genes; sin embargo, la importancia de este hallazgo no se entiende por completo. pueden mantenerse y amplificarse (figura 15.19). Alternativamente, ciertos genes pueden
También parece extraño que pocos genes sean comunes a todos los termofilos. Uno que obtenerse mediante amplificación por PCR de fragmentos de ADN derivados de muestras
se comparte entre estos procariotas es que para ambientales. Para este enfoque,
girasa inversa. En las arqueas hipertermófilas, esta enzima funciona para relajar el se requiere conocimiento de la secuencia de nucleótidos del gen; esto es
cromosoma superenrollado; se cree que esto ayuda común cuando se amplifican genes que codifican el ARNr 16S con fines taxonómicos.
evitar su desnaturalización en los ambientes calurosos en los que viven. En cualquier caso, se produce una fuente estable de secuencias de nucleótidos que
Deinococcus radiodurans es una bacteria que tiene la notable capacidad de reflejan la diversidad de microbios que crecen en
sobrevivir no solo a la desecación y a los agentes oxidantes, sino también la naturaleza, no sólo aquellos que se pueden cultivar en el laboratorio. A continuación,
-radiación en dosis muchas veces superiores a las necesarias para matar humanos. los nucleótidos pueden secuenciarse y analizarse, o expresarse en un
La radiación ionizante provoca roturas de doble cadena en el ADN, la huésped microbiano y examinado para una función específica, como la
forma más letal de daño en el ADN. D. radiodurans puede volver a ensamblar su genoma producción de nuevos compuestos antimicrobianos. Técnicas para determinar la
después de haberlo fragmentado en miles de taxonomía y filogenia microbiana (sección 19.4)
piezas. Su genoma consta de dos cromosomas circulares (2,6 Mb Un campo que la metagenómica ha revolucionado es el marino.
y 0,4 Mb), un megaplásmido (177.466 pb) y un plásmido pequeño microbiología. Se puede encontrar un promedio de 1 millón de células microbianas.
(45.704 pb). Seguramente, se pensó, D. radiodurans debe ser excelente por mililitro de agua de mar. Si bien durante mucho tiempo se ha reconocido que
en la ejecución de la reparación del ADN. Pero, sorprendentemente, la genómica comparativa Los microbios marinos representan la mayor parte de la biomasa de los océanos,
el análisis muestra que D. radiodurans tiene menos genes de reparación del ADN donde realizan más de la mitad de la fotosíntesis global, ha
que E. coli. Para comprender estos hallazgos, los microbiólogos sido difícil estudiar su diversidad taxonómica y metabólica. En
utilizaron micromatrices con alrededor del 94 % de todos los genes de D. radiodurans 2000, la genómica ambiental condujo al descubrimiento de un nuevo gen procariótico
representados para examinar el transcriptoma (todo el ARNm presente) después del que codifica una proteína de la familia de la rodopsina.
tratamiento con radiación. Este análisis genera información para Las rodopsinas convierten la energía luminosa directamente en un gradiente eléctrico
cada gen. Esto está organizado por análisis de conglomerados jerárquicos. a través de una membrana celular. Durante mucho tiempo se había sostenido que las Archaea eran
donde los genes inducidos (puntos rojos) se agrupan por separado de los genes los únicos procariotas que producen una proteína de la familia de las rodopsinas.
reprimidos (puntos verdes); los genes cuya expresión permanece inalterada se muestran Cuando los genes similares a la rodopsina se amplificaron a partir de una variedad de
en negro (figura 15.18). Estos agrupamientos son entonces taxones procarióticos, se denominaron proteorrodopsinas porque eran
explorado en busca de genes que se sabe que tienen funciones similares y luego encontrado en -proteobacteria (los genes para proteorhodopsin tienen desde entonces
además agrupados por parentesco (el grado de parentesco es estadísticamente también se ha encontrado en -proteobacteria). La naturaleza de los microbios
cuantificado por un coeficiente de correlación, o “valor r”). Tal análisis La diversidad metabólica en el mar ahora se está reconsiderando, ya que se estima que
ha confirmado que el gen recA de reparación del ADN, así como los genes implicados en alrededor del 13% de las bacterias marinas pueden tener los genes para
la replicación y recombinación del ADN, se regulan dramáticamente después de la codifican bombas de protones impulsadas por luz basadas en rodopsina. estas bombas
irradiación. Además, los genes cuyos productos permitir que las bacterias produzcan una fuerza motriz de protones que puede alimentar el
metabolismo directo de la pared celular, transporte celular y muchos genes producción de ATP. Del mismo modo, los presupuestos de nitrógeno marino pueden necesitar
cuyos productos proteicos son desconocidos también son inducidos. Estos resultados recalcularse basándose en el descubrimiento de que el gen que codifica la ni trogenasa,
dejar en claro que la capacidad de D. radiodurans para sobrevivir a niveles tan altos de la enzima que convierte el N2 gaseoso en amonio, es
radiación es más compleja de lo que se pensaba originalmente y requiere presente en cantidades mucho mayores entre las cianobacterias marinas que
la coordinación de una red compleja de procesos que involucran tanto previamente pensado. fototrofia basada en rodopsina (sección 9.12); Filo
Reparación del ADN y actividad metabólica. Deinococcus-Thermus (sección 21.2) Euryarchaeota: Las halobacterias (sección 20.3); Ciclo biogeoquímico: el ciclo
del nitrógeno (sección 27.2)
J. Craig realizó un ambicioso proyecto de metagenómica
15.9 GENÓMICA AMBIENTAL
Venter, Hamilton Smith y colaboradores. Querían determinar
Está claro que la era genómica ha dado paso a nuevas formas de responder preguntas. la biodiversidad procariótica del Mar de los Sargazos, esa porción del
Quizás en ninguna parte es esto más evidente que en Océano Atlántico que rodea las Bermudas. Recogieron agua de mar
el creciente campo de la genómica ambiental, a veces llamado y filtración utilizada para excluir virus (0,2 m) y eucariotas
metagenómica. Si bien el papel dominante de los microorganismos en (0,8 m). Se preparó una biblioteca genómica ambiental a partir de
impulsar los ciclos de nutrientes que sustentan la vida en la Tierra ha sido durante mucho tiempo ADN extraído del agua de mar restante. Después de la secuenciación
reconocidos, los esfuerzos para comprender integralmente microbiana mil millones de pares de bases, seguido de análisis manual y por computadora para
comunidades se han visto obstaculizadas por el hecho de que sólo alrededor del 1% de determinar la relación de secuencia, se determinó que al menos
todos los procariotas han sido cultivados en condiciones de laboratorio. Nuevo Se representaron 1.800 “especies genómicas”, llamadas filotipos .
Las técnicas genómicas ofrecen enfoques independientes del cultivo para Entre estos, unos 145 filotipos eran previamente desconocidos y
Genómica Ambiental 403
Tiempo (h)
Gen#, función putativaa Relación Tiempo
A. patrón de activación similar a recA (veces)b (hr)c

r = 0,83
DR0911 Subunidad beta de la rna polimerasa dirigida por ADN, rpoC 1,99 (±1,37) 0.5
DR2220 Proteína de resistencia al telurio TerB 3,13 (±1,49) 5
DR2221 Proteína de resistencia al telurio TerE 5,24 (±2,94) 3
DRB0069 subtilisina serina proteasa 3,18 (±1,39) 3
DRB0067 Nucleasa extracelular con dominios de Fibronectina III 4,37 (±1,21) 3
DR0261 8-oxo-dGTPasa, muT 3,36 (±1,68) 0.5
DRA0344 Represor LEXA, HTH+proteasa, lexA 1,80 (±1,08) 1.5
DR0099 proteína de unión a ssDNA, ssb 3,01 (±1,20) 0.5
DR2129 Componente ribosómico L17, rplQ 5,92 (±2,09) 1.5
DR2128 Subunidad alfa de la ARN polimerasa, rpoA 4,03 (±2,80) 1.5
DR0324 Probable glutamato formiminotransferasa 3,30 (±1,47) 0.5
DR2337 Proteína no caracterizada 7,41 (±5,71) 1.5
DRA0346 Proteína PprA, implicada en la resistencia al daño del ADN 3,52 (±1,94) 0.5
DR1825 Proteína de membrana de exportación de proteínas 3,21 (±1,48) 1.5
DR1771 UVRA ABC familia ATPasa, uvrA-1 3,52 (±1,15) 1.5
DRA0345 Esterasa predicha 10,05 (±4,39) 1.5
DR0422 Trans-aconitato metilasa 18,85 (±7,46) 1.5
DR1776 Pirofosfatasa de la familia Nudix 4,70 (±2,83) 1.5
DR2340 RecA, recA 7,98 (±3,86) 1.5
DR2610 Proteína de unión periplasmática, fliY 4,13 (±1,67) 0.5
DR1645 Proteína de biosíntesis de ácido teicoico, wecG 5,88 (±2,79) 1.5
DR0696 ATPasa sintasa tipo V, subunidad K 7,19 (±2,16) 1.5
DR1775 Superfamilia I helicasa, uvrD 3,30 (±1,69) 1.5
DR1561 UDP-N-acetilglucosamina 2-epimerasa, wecB 6,00 (±1,40) 1.5
DR2285 MutY, adenina glicosilasa específica de A/G, mutY 2,36 (±0,40) 3
DR2356 Hidrolasa de la familia Nudix 3,35 (±0,45) 3
DR2275 Excinucleasa ABC subunidad B, uvrB 4,93 (±1,81) 3
DR0206 Proteína no caracterizada 5,45 (±2,65) 3
DR0204 Proteína de membrana no caracterizada 6,01 (±1,35) 3
DR1354 Excinucleasa ABC subunidad C, uvrC 3,78 (±0,42) 3
DR0203 Proteína de membrana no caracterizada 3,82 (±0,86) 1.5
DR0205 ABC transportador ATPasa 4,10 (±2,45) 3
DR1357 Transportador ABC, subunidad de permeasa 6,79 (±2,56) 1.5
DR2482 Regulador de transcripción previsto 5,75 (±2,92) 1.5

DR2483 nucleasa McrA 5,43 (±1,22) 1.5
DRA0008 Proteína de membrana conservada 6,60 (±2,00) 3
DRA0234 Proteína no caracterizada 12,76 (±5,27) 1.5

DR1359 transportador ABC, subunidad periplasmática 24,83 (±11,13) 15
DR2127 Proteína ribosómica S4, rpsD 5,40 (±1,50) 3
DR1356 transportador ABC, proteína de unión a ATP 9,85 (±5,98) 3
DRB0136 Helicasa putativa dependiente de ATP DEAH, hepA 5,22 (±0,46) 3
DR1548 Ortólogo de Bacillus ykwD , proteína de la superfamilia PRP1 5,62 (±2,35) 3
DR0207 Proteína relacionada con ComEA, secretada 15,47 (±8,31) 3
DRA0249 Metaloproteinasa, similar a la leishmanolisina 6,47 (±4,43) 3
DR0665 Proteína no caracterizada 11,66 (±5,74) 3
DR0596 Resolvasoma RuvABC, subunidad B, ruvB 3,22 (±1,31) 0.5
DR0912 Subunidad beta de ARN polimerasa dirigida por ADN, rpoB 3,19 (±0,80) 0.5
r = 0,71 B. Patrón de activación relacionado con el crecimiento
DR1172 Proteína de resistencia a la desecación similar a Lea76/LEa29 2,66 (±0,60) 24
DR0461 Ortólogo de Bacillus yacB 2,58 (±0,81) 24
DR1595 6-fosfogluconato deshidrogenasa, gnd 2,30 (±0,52) 24
DRA0043 TDP-ramnosa sintetasa 5,08 (±2,12) 12

DRA0042 Glucosa-1-fosfato timidililtransferasa, rfbA 3,70 (±1,19) 12
DRA0031 Glucosa-1-fosfato timidililtransferasa 2,48 (±1,64) 12
DRA0065 Proteína cromosómica HU HupA, hupA 7,71 (±2,07) 24
DR2263 Bacterioferritina, proteína quelante de hierro 6,41 (±1,97) dieciséis
DRA0275 Citocromo C soluble 4,80 (±1,22) 24
DR1279 Superóxido dismutasa (Mn) 3,91 (±1,43) 24
r = 0,77 C. Patrón reprimido

DR1126 RecJ como la superfamilia DHH Fosfohidrolasa 0,33 (±0,12) 12
DR1337 transaldolasa, tal 0,25 (±0,05) 3
DR0728 Fructoquinasa, cscK 0,37 (±0,13) 3
DR0977 Fosfoenolpiruvato carboxicinasa, pckA 0,48 (±0,22) 1.5

DR1742 Glucosa-6-fosfato isomerasa, pgi 0,42 (±0,12) 1.5
DR1998 Catalasa, CATX, katA 0,23 (±0,07) 3

DR1146 GSP26 estrés general como proteína 0,25 (±0,06) 1.5
DR0493 Formamidopirimidina-ADN glucosidasa, mutM 0,46 (±0,09) 1.5
DR0674 Argininosuccinato sintasa, ASSY, argG 0,35 (±0,15) 3
DR2620 Subunidad I de la citocromo oxidasa, COX1, caaA 0,45 (±0,25) 5
0.2 1 5
Figura 15.18 Análisis de conglomerados jerárquicos de la expresión génica de D. radiodurans después de la exposición a la radiación. Cada
fila de tiras de colores representa un solo gen y el color indica el nivel de expresión en nueve intervalos de tiempo. La columna del extremo izquierdo es
el control y, por lo tanto, es negra (en los niveles de expresión de control). El nivel de inducción o represión en relación con el valor de control se indica
como el Ratio (vez). El tiempo indica el número de horas después de la exposición a la radiación. que se calculó la relación. Cada grupo de genes ha sido
puntuado por parentesco y se ha generado un "árbol" en el extremo izquierdo de los grupos, con el coeficiente de correlación indicado (valor r). Un gran
número de genes que codifican proteínas de reparación, síntesis y recombinación del ADN se inducen con la radiación. Estos se agrupan. Se inducen
menos genes que codifican proteínas implicadas en el metabolismo. Finalmente, se reprimen los genes implicados en otros aspectos del metabolismo.
Análisis basado en secuencias
Preparación de ADN clonado

(a)
atgacgac...gattaca
(B)
tgggctcccatcgctag
Análisis de secuencia genómica

Vector digerido por
restricción E. coli
Biblioteca metagenómica
(C)
ligadura Transformación
Extracción de
ADN genómico
Análisis basado en funciones
Expresión de
genes heterólogos
(D)
Transcripción
ADN recombinante ARNm
ADN genómico
heterólogo Traducción
Proteína
Figura 15.19 Construcción y selección de bibliotecas genómicas directamente del medio ambiente. El ADN Secreción
se ha extraído directamente de (a) esteras bacterianas en el Parque Nacional de Yellowstone , (b) muestras de
suelo de Alaska, (c) larvas de mariposa blanca de repollo y (d) gusanos tubulares de fuentes hidrotermales. El ADN se
clona en vectores adecuados y transformado en un huésped bacteriano. A continuación, se pueden analizar las
secuencias o los productos génicos.
Filotipos del Mar de los Sargazos

Figura 15.20 Diversidad
0.50 filogenética de los microbios
del mar de los Sargazos. La abundancia
0,45 EFG EFTu HSP70 RecA RpoB ARNr
relativa (% en peso de clones) de cada
0.40 grupo de microbios se muestra según
el gen conservado específico que se
0.35
utilizó para el análisis. Los genes
0.30 utilizados fueron los que codifican factor
de elongación G (EFG), factor de
0.25 elongación Tu (EfTu), proteína de
choque térmico 70 (HSP70), recombinasa
0.20
A (RecA), ARN polimerasa B (RpoB) y
0.15 el gen que codifica 16S rRNA.
0.10
0.05
0
clorobi
cloroflexi
Cianobacterias Firmicutes
Actinobacteria
espiroquetas Euryarchaeota
Crenarchaeota
Betaproteobacteria Deltaproteobacteria
Alfaproteobacteria
epsilonproteobacteria
gammaproteobacteria Fusobacteria Deinococcus-Thermus
grupo Bacteroidetes/Chlorobi
Grupo filogenético principal
404
Resumen 405
lo más probable es que represente nuevas especies. La diversidad filogenética se evaluó aún más
1. ¿Cómo se puede usar la secuenciación genómica para hacer preguntas específicas sobre la
mediante la amplificación por PCR de genes, como el gen recA de la recombinasa, el gen del ARNr
fisiología de un microbio dado? Enumere tres resultados interesantes o sorprendentes
16S y el gen que codifica la ARN polimerasa B (rpoB). Las secuencias de estos genes están altamente
obtenidos del análisis genómico de patógenos.
conservadas, lo que los convierte en buenos candidatos para evaluar la diversidad de especies (figura
2. Defina la transferencia lateral de genes. ¿Cómo podría LGT ser en parte responsable de la
15.20). Sorprendentemente, Venter, Smith y sus colaboradores informan del descubrimiento de 1,2
rápido aumento de los microbios resistentes a los antibióticos?
millones de genes previamente desconocidos (sin embargo, este número es controvertido), incluidos
3. ¿Para qué tipos de microorganismos es común la pérdida extensa de genes? ¿Cuál es la
más de 700 nuevos fotorreceptores similares a la proteorrodopsina de taxones que previamente no se
explicación más probable para este fenómeno?
sabía que poseían capacidades de captación de luz. Ciertamente, estos resultados demuestran el poder
4. ¿Cómo podría usarse la genómica ambiental para expandir nuestro conocimiento?
de la metagenómica y muestran que se necesita mucho más estudio antes de que podamos apreciar
borde de las comunidades microbianas terrestres? ¿Cómo podría la industria biotecnológica
completamente la diversidad biológica en los océanos del mundo.
utilizar la genómica ambiental para desarrollar nuevos productos naturales importantes desde
el punto de vista médico o industrial?
Resumen
15.1 Introducción B. El proteoma a menudo se analiza mediante electroforesis en gel bidimensional, en la que se
puede visualizar el conjunto total de proteínas celulares. En muchos casos, la secuencia de
un. La genómica es el estudio de la organización molecular de los genomas, su contenido de
aminoácidos de las proteínas individuales se determina mediante espectrometría de masas; si
información y los productos genéticos que codifican. Puede dividirse en tres grandes áreas:
esto se acopla a la genómica, se puede identificar tanto una proteína de interés como el gen
genómica estructural, genómica funcional y genómica comparativa.
que la codifica (figuras 15.11 y 15.12).
C. La proteómica estructural busca modelar la estructura tridimensional de las proteínas basándose

15.2 Determinación de secuencias de ADN en el análisis informático de los datos de la secuencia de aminoácidos.
un. Los fragmentos de ADN normalmente se secuencian utilizando didesoxinucleótidos y la técnica

de terminación de cadena de Sanger (figura 15.2). 15.8 Perspectivas de los genomas microbianos
un. Un enfoque para identificar genes de función desconocida es construir un banco de mutantes y
15.3 Secuenciación de escopeta del genoma completo estudiar sus fenotipos competitivos. Esto se ha hecho para la levadura Saccharomyces
un. La mayoría de las veces, los genomas microbianos se secuencian utilizando la técnica de cerevisiae, y este enfoque también se está aplicando para los procariotas.
escopeta de genoma completo de Venter, Smith y colaboradores. Hay cuatro etapas

involucradas: construcción de la biblioteca, secuenciación de fragmentos producidos B. Se han analizado los genomas completos de muchos patógenos, proporcionando información
aleatoriamente, alineación de fragmentos y cierre de brechas, y edición de la secuencia final (figura 15.3). sobre la virulencia y la evolución. En algunos casos, se han identificado objetivos potenciales
para nuevas terapias y vacunas. C. El genoma de Mycoplasma genitalium es uno de los más
15.4 Bioinformática
pequeños de cualquier organismo de vida libre. El análisis de este y otros genomas indica que solo
un. El análisis de grandes cantidades de datos del genoma requiere computadoras y programas se requieren alrededor de 265 a 350 genes para el crecimiento en el laboratorio.
sofisticados; estos procedimientos analíticos forman parte de la disciplina de la bioinformática.
D. Haemophilus influenzae carece de un conjunto completo de genes del ciclo de Krebs y tiene
B. El software bioinformático permite la comparación de genes dentro de genomas para identificar 1465 copias de la secuencia de reconocimiento utilizada en la captación de ADN durante la
parálogos y genes entre diferentes organismos para identificar ortólogos. C. La anotación de transformación. mi. El genoma de Chlamydia trachomatis ha deparado muchas sorpresas. Por
genomas se puede usar para identificar muchos genes y su función, pero el papel funcional del 35 ejemplo, parece capaz de producir al menos algo de ATP y peptidoglicano, a pesar de que
al 50% de todos los ORF en un genoma dado generalmente no se puede discernir (figura parece obtener la mayor parte del ATP del huésped y no tiene una célula.
15.4). pared con peptidoglicano. La presencia de genes similares a plantas indica que podría haber
infectado huéspedes similares a plantas antes de pasar a los animales. F. Treponema pallidum,
15.5 Genómica funcional el agente causante de la sífilis, ha perdido muchos de sus genes metabólicos, lo que puede explicar
un. La genómica funcional se utiliza para revelar la estructura del genoma y las relaciones por qué no se ha cultivado fuera de un huésped.
funcionales (figura 15.5).
B. Las micromatrices de ADN (chips genéticos) se pueden utilizar para evaluar la expresión génica gramo. Mycobacterium tuberculosis contiene más de 250 genes para el metabolismo de los lípidos
como una medida de las transcripciones de genes individuales (ARNm). La expresión génica y puede obtener gran parte de su energía de los lípidos del huésped. Se han identificado
se puede determinar para cepas mutantes versus de tipo salvaje o para un organismo dado proteínas de superficie y secretoras que pueden ayudar al desarrollo de vacunas.
bajo condiciones ambientales específicas (figura 15.9). H. Se han estudiado los genomas de muchos extremófilos en un esfuerzo por comprender mejor los
mecanismos por los que estos microbios sobreviven en sus duros hábitats. Deinococcus
15.6 Genómica comparativa radiodurans sobrevive a altos niveles de radiación gamma, en parte debido a su capacidad
para regular drásticamente los genes de reparación del ADN.
un. La comparación de las secuencias del genoma revela mucha información sobre la estructura y
la evolución del genoma, incluida la importancia de la transferencia lateral de genes.
B. La genómica comparativa es una herramienta importante para discernir cómo los microbios se
15.9 Genómica ambiental
han adaptado a nichos ecológicos particulares y en el desarrollo de nuevos agentes terapéuticos
como las vacunas. un. La genómica ambiental es un área de investigación relativamente nueva que se ha utilizado
para aprender más sobre la biodiversidad y el potencial metabólico de las comunidades
15.7 Proteómica microbianas (figuras 15.19 y 15.20).
un. La colección completa de proteínas que un organismo puede producir es su proteoma, y su

estudio se llama proteómica.
Términos clave
alineación 388 etiqueta de secuencia expresada (EST) motivo 389 proteómica 393
anotación 388 390 genómica funcional 383 proteómica oligonucleótido 390 diseño racional de fármacos
bioinformática 388 funcional 393 genómica 383 análisis de marco de lectura abierto (ORF) 388 398 matrices manchadas
método de secuenciación de ADN de terminación conglomerados jerárquicos 402 análisis ortólogo 388 parálogo 388 filotipo 390 genómica estructural
de cadena 384 in silico 388 transferencia lateral u 402 sonda 389 modelado de 383 proteómica estructural
secuencia codificante (CDS) 388 horizontal de genes proteínas 394 proteoma 393 394 transcriptoma 402
genómica comparativa 383 electroforesis en gel
Micromatrices de ADN (chips genéticos) (LGT) 391 bidimensional 393
389 genómica ambiental 402 metagenómica 402 secuenciación de escopeta del genoma completo 384
1. ¿Qué impacto podrían tener las comparaciones de genomas en los esquemas filogenéticos 4. Estás desarrollando una nueva vacuna para un patógeno. Quiere que su vacuna reconozca
actuales de Bacteria y Archaea que se analizan en el capítulo 19? proteínas específicas de la superficie celular. Explique cómo usará el análisis del genoma
2. Proponga un experimento que se pueda hacer fácilmente con una micromatriz de ADN que para identificar posibles objetivos proteicos. ¿Qué enfoques de genómica funcional utilizará
habría requerido años antes de esta nueva tecnología. para determinar cuál de estas proteínas se produce cuando el patógeno está en su huésped?
3. ¿Cuáles son los peligros de la búsqueda de genes y proteínas homólogos?
Aprende más
Campbell, AM y Heyer, LJ 2003. Descubriendo la genómica, la proteómica y la bioinformática. Jain, R.; Rivera, MC; y Lake, JA 1999. Transferencia horizontal de genes entre genomas: La
San Francisco, CA: Benjamín Cunnings. hipótesis de la complejidad. proc. nacional Academia ciencia 96:3801–6.
Camus, JC; Pryor, MJ, Médigue, C.; y Cole, ST 2002. Nueva anotación de la secuencia del Knudson, S. 2004. Guía para el análisis de datos de micromatrices de ADN, 2ª ed. Hoboken,
genoma de Mycobacterium tuberculosis H37Rv. Microbiol. 148:2967–73. Nueva Jersey: John Wiley & Sons, Inc.
Krane, DE y Raymer, ML 2003. Conceptos fundamentales de bioinformática.
Cole, ST, et al., 1998. Descifrando la biología de Mycobacterium tuberculosis a partir de la San Francisco, California: Benjamin Cummings.
secuencia completa del genoma. Naturaleza 393: 537–44. Lander, ES y Weinberg, RA 2000. Genomics: Journey to the center of biol
de la Torre, JR; Christianson, LM; Béjà, O.; Suzuki, Montana; Carlos, DM; Hei delberg, J.; y ogía Ciencia 287: 1777–82.
DeLong, EF 2003. Los genes de proteorrodopsina se distribuyen entre taxones bacterianos Liu, Y. et al. 2003. Dinámica del transcriptoma de Deinococcus radiodurans recuperándose de la
marinos divergentes. proc. nacional Academia ciencia 100:12830–35. radiación ionizante. proc. nacional Academia ciencia 100:4191–96.
Fleischmann, RD, et al. 1995. Secuenciación aleatoria y ensamblaje del genoma completo Meinke, A.; Henics, T.; y E. Nagy. 2004. Los genomas bacterianos allanan el camino a la novela
de Haemophilus influenzae Rd. Ciencia 269: 496–512. vacunas. actual Opinión Microbiol. 7:341–20.
Gill, SR, et al. 2005. Información sobre la evolución de la virulencia y la resistencia a partir del Rhodio, V.; Van Dyk, TK; Bruto, C.; y LaRossa, RA 2002. Impacto de las tecnologías genómicas
análisis completo del genoma de una cepa temprana de Staphylococcus au reus resistente en los estudios de expresión génica bacteriana. año Rev. Micro biol. 56:599–624.
a la meticilina y una cepa de Staphylococcus epi dermidis resistente a la meticilina productora
de biopelículas . J. Bacteriol. 187:2426–38.
Venter, JC, et al. 2004. Secuenciación de escopeta del genoma ambiental del mar de Sar gasso.
Graves, PR y Haystead, TAJ 2002. Guía de proteómica para biólogos moleculares. Microbiol. Ciencia 304: 66–74.
mol. Biol. Rev.: 66(1):39–63.
Winzeler, EA, et al. 1999. Caracterización funcional del genoma de S. cerevisiae mediante
Handelsman, J. 2004. Metagenómica: aplicación de la genómica a mi sin cultivar eliminación de genes y análisis paralelo. Ciencia 285: 901–6.
croorganismos Microbiol. Molec. Biol. Apocalipsis 68:669–85.
Hughes, TR; Robinson, MD; Mitsakakis, N.; y Johnston, M. 2004. La promesa de la genómica
funcional: Completando la enciclopedia de la célula. actual
Opinión Microbiol. 7:546–54.

16Los virus:
Introducción y Generalidades
Características
La cápside del virus simio 40 (SV-40) que se muestra aquí difiere de la mayoría de los icosaédricos
cápsides que contienen solo capsómeros pentaméricos. SV-40 es un pequeño de doble cadena
ADN poliomavirus con 72 capsómeros. Puede causar un sistema nervioso central.
enfermedad en monos rhesus y puede producir tumores en hámsteres. SV-40 fue el primero
descubierto en cultivos de células de riñón de mono durante la preparación del poliovirus
vacuna.
AVANCE
• Los virus son entidades acelulares simples. Solo pueden reproducirse A pesar de su simplicidad, los virus son extremadamente importantes y
dentro de las células vivas porque son parásitos intracelulares obligados. merecen mucha atención. Se conocen muchas enfermedades virales humanas
• Todos los virus tienen una nucleocápside compuesta por un ácido nucleico y cada año se descubren más, como lo demuestra la aparición del SARS y los virus
genoma rodeado por una cápside proteica. Algunos virus tienen un de la influenza aviar. El estudio de
envoltura membranosa que se encuentra fuera de la nucleocápside. El ácido nucleico virus ha contribuido significativamente a la disciplina de la biología molecular. De
del virus puede ser ARN o ADN, monocatenario o bicatenario, lineal o circular. hecho, el campo de la ingeniería genética se basa en
en gran parte a los descubrimientos en virología. Así , la virología (el estudio
• Las cápsides pueden tener simetría helicoidal, icosaédrica o compleja. Ellos de virus) es una parte importante de la microbiología.
Están formados por protómeros que se autoensamblan a través de enlaces no En este capítulo nos centramos en los aspectos más amplios de la virología:
covalentes. su desarrollo como disciplina científica, las propiedades generales
• Aunque cada virus tiene aspectos únicos en su ciclo de vida, un y la estructura de los virus, las formas en que se cultivan los virus
patrón de replicación es observable. El ciclo de vida típico del virus consta de cinco y estudiado, y taxonomía viral. En el capítulo 17 nuestra preocupación es con
pasos: unión a la célula huésped, entrada en el huésped virus de Bacteria y Archaea, y en el capítulo 18 consideramos virus de eucariotas.
célula, síntesis de ácido nucleico viral y proteínas dentro de la célula huésped,
autoensamblaje de viriones dentro de la célula huésped y liberación de viriones
de la célula huésped.
• Los virus se cultivan inoculando huéspedes vivos o cultivos celulares con

una preparación de viriones. La purificación depende principalmente de su gran tamaño Los virus han tenido un enorme impacto en los seres humanos y otros organismos,
en relación con los componentes celulares, alto contenido proteico y gran estabilidad.
pero hasta hace poco se sabía muy poco sobre su naturaleza. Una breve historia
La concentración de virus se puede determinar a partir del virión.
de su descubrimiento y reconocimiento como
contar o del número de unidades infecciosas.
agentes infecciosos singularmente diferentes pueden ayudar a aclarar su naturaleza.
• Los virus se clasifican principalmente sobre la base de su ácido nucleico
características, estrategia reproductiva, simetría de la cápside y la
presencia o ausencia de un sobre.
16.1 DESARROLLO TEMPRANO DE LA VIROLOGÍA
Aunque los antiguos no entendían la naturaleza de sus enfermedades, estaban

familiarizados con enfermedades, como la rabia, que
Estos son agentes infecciosos con una organización acelular bastante simple. Ahora se sabe que son de origen viral. De hecho, hay alguna evidencia de que las
En los
Lacapítulos
mayoría 16, 17 ysólo
posee 18 un
dirigimos
tipo denuestra atenciónya
ácido nucleico, a los
seavirus. grandes epidemias del 165 al 180 d. C. y del 251 al
ADN o ARN, y solo se reproducen dentro de las células vivas. 266, que debilitó severamente al Imperio Romano y ayudó a su
Claramente, los virus son bastante diferentes de los microorganismos procarióticos disminución, puede haber sido causado por los virus del sarampión y la viruela.
y eucarióticos; son estudiados por virólogos. La viruela tuvo un impacto igualmente profundo en el Nuevo Mundo.
Las pulgas grandes tienen pulgas pequeñas en la espalda para

morderlas y las pulgas pequeñas tienen pulgas menores, y así hasta el infinito.
—Augustus De Morgan
408 Capítulo 16 Los Virus: Introducción y Características Generales
La conquista de Hernán Cortés del imperio azteca en México fue filtro bacteriano de porcelana de Charles Chamberland, uno de los
posible gracias a una epidemia que asoló la Ciudad de México. los colaboradores de Pasteur e inventor del autoclave, hizo posible
El virus probablemente fue traído a México en 1520 por la expedición de el descubrimiento de lo que ahora se llama virus. mosaico de tabaco
socorro enviada para unirse a Cortés. Antes de que la epidemia de viruela La enfermedad fue la primera en ser estudiada con el filtro de Chamberland. En
amainara, había matado al rey azteca Cuitlahuac (el sobrino y 1892 Dimitri Ivanowski publicó estudios que mostraban que los extractos de
yerno del emperador asesinado, Moctezuma II) y posiblemente 1/3 hojas de plantas infectadas inducirían la enfermedad del mosaico del tabaco.
de la población. Como los españoles no sufrieron una aflicción similar, incluso después de que la filtración eliminó todas las bacterias. Sin embargo, atribuyó
parecía que la ira de Dios estaba reservada para los nativos. esto a la presencia de una toxina. Martinus Beijerinck, trabajando en
estadounidenses, y este desastre fue visto como un apoyo divino para el dependencia de Ivanowski, publicó los resultados de un extenso
conquista española (Hitos Históricos 16.1). estudios sobre la enfermedad del mosaico del tabaco en 1898 y 1900. Debido a que el
El progreso en la prevención de enfermedades virales comenzó años antes de la la savia filtrada de las plantas enfermas seguía siendo infecciosa, propuso
descubrimiento de virus. A principios del siglo XVIII, Lady que la enfermedad fue causada por una entidad diferente a las bacterias,
Wortley Montagu, esposa del embajador inglés en Turquía, lo que él llamó un virus filtrable. Observó que el virus
observó que las mujeres turcas vacunaban a sus hijos contra se multiplica sólo en células vegetales vivas, pero podría sobrevivir durante
viruela. Los niños desarrollaron un caso leve, pero posteriormente quedaron largos períodos en estado seco. Al mismo tiempo, Friedrich Loeffler y Paul
inmunes. Lady Montagu trató de educar al público inglés sobre el Frosch en Alemania descubrió que la fiebre aftosa del ganado también era
procedimiento pero sin mucho éxito. causada por un virus y no por una toxina. En 1900 Walter Reed inició su
Más adelante en el siglo, un médico rural inglés, Edward Jenner, estudio de la enfermedad de la fiebre amarilla cuyo
estimulado por la afirmación de una niña de que no podía contraer la viruela la incidencia ha ido en aumento en Cuba. Reed demostró que esta
porque había tenido viruela bovina, comenzó a inocular humanos con enfermedad humana se debía a un virus que se transmitía a través de los
material de lesiones de viruela bovina. Publicó los resultados de 23 dedos de los mosquitos. El control de mosquitos pronto redujo la severidad del amarillo.
vacunaciones exitosas en 1798. Aunque Jenner no entendía la naturaleza problema de fiebre Así, a principios del siglo XX, había
de la viruela, se las arregló para establecido que los virus eran diferentes de las bacterias y
proteger a sus pacientes de la temida enfermedad a través de la exposición podría causar enfermedades en las plantas, el ganado y los seres humanos.
al virus de la viruela bovina. Poco después del cambio de siglo, Vilhelm Ellermann y
Hasta bien entrado el siglo XIX, los agentes nocivos eran Oluf Bang en Copenhague informó que la leucemia podría transmitirse entre
a menudo agrupados y a veces llamados virus [ virus del latín, pollos a través de filtrados libres de células y probablemente
veneno o veneno]. Incluso Louis Pasteur usó el término virus para cualquier causado por un virus. Tres años después, en 1911, Peyton Rous de
agente vivo de enfermedades infecciosas. El desarrollo en 1884 de la el Instituto Rockefeller en la ciudad de Nueva York informó que un virus,
16.1 La enfermedad y la colonización temprana de América
Hay pruebas considerables de que las enfermedades, y en particular la viruela, ellos e infectaron a las poblaciones nativas. De hecho, los ingleses señalaron en
jugaron un papel importante en la reducción de la resistencia india a la colonización el final del siglo que las poblaciones indígenas habían disminuido considerablemente
europea de América del Norte. Se ha estimado que la India pero lo atribuyó al conflicto armado más que a la enfermedad.
Las poblaciones en México disminuyeron alrededor del 90% dentro de los 100 años de la inicial. El establecimiento de colonias simplemente proporcionó más oportunidades
contacto con los españoles. La viruela y otras enfermedades fueron una de las principales para la infección y el brote de epidemias. por ejemplo, el
factor en este declive, y no hay razón para suponer que North Los indios hurones se redujeron de un mínimo de 32.000 personas a
América era diferente. Hasta 10 a 12 millones de indios pueden 10.000 en 10 años. Entre la época de la colonización inglesa inicial
han vivido al norte del Río Grande antes del contacto con los europeos. En y 1674, los indios narraganset descendieron de alrededor de 5000 guerreros a
Solo en Nueva Inglaterra, puede haber más de 72.000 en 1600; aún 1000, y los indios de Massachusetts, de 3000 a 300.
solo alrededor de 8.600 permanecieron en Nueva Inglaterra en 1674, y el declive Historias similares se pueden ver en otras partes de las colonias. Algunos
continuó en los años siguientes. Los colonos interpretaron estas plagas como una señal del castigo de Dios de
Una catástrofe tan increíble puede explicarse considerando la situación en el Resistencia indígena: el “Señor puso fin a esta contienda golpeando
momento del contacto europeo con los nativos americanos. Los europeos, habiendo ellos con viruela. . . . Así apaciguó el Señor sus pendencieros
ya sufrido importantes espíritu y hacer lugar para la siguiente parte de su ejército.”
epidemias en los siglos precedentes, eran relativamente inmunes a la Parece claro que las epidemias de enfermedades europeas como la viruela
enfermedades que portaban. Por otro lado, los nativos americanos tenían diezmaron las poblaciones nativas americanas y prepararon el camino
nunca estuvieron expuestos a enfermedades como la viruela y fueron diezmados para la colonización del continente norteamericano. muchos americanos
por epidemias. En el siglo XVI, antes de que se establecieran colonias inglesas ciudades, por ejemplo, Boston, Filadelfia y Plymouth, crecieron
permanentes, se hicieron muchos contactos por parte de sobre sitios de pueblos indios anteriores.
misioneros y exploradores que indudablemente trajeron consigo enfermedades
La estructura de los virus 409
ahora conocido como el virus del sarcoma de Rous, fue responsable de un tumor
Sobre
muscular maligno en los pollos. Estos estudios establecieron que
al menos algunas enfermedades malignas son causadas por virus. El virus del coma Pico
de Rous sar todavía se usa ampliamente en la investigación del cáncer. cápside
En 1915 , Frederick Twort informó que las bacterias también podrían ser cápside
Ácido nucleico
atacado por virus. Twort aisló virus bacterianos que podrían atacar y destruir
Nucleico
micrococos y bacilos intestinales. A pesar de que él
ácido
especuló que sus preparaciones podrían contener virus, Twort hizo
no dar seguimiento a estas observaciones. Quedó para Félix (a) Virus desnudo (b) Virus envuelto
d'Herelle para establecer de manera decisiva la existencia de virus bacterianos.
d'Herelle aisló virus bacterianos de pacientes con disentería, Figura 16.1 Estructura generalizada de virus. (a) El
probablemente causado por Shigella dysenteriae. Señaló que cuando un El virus más simple es un virus desnudo (nucleocápside) que consta de un
suspensión de virus se esparció sobre una capa de bacterias que crecían en cápside geométrica ensamblada alrededor de una hebra de ácido nucleico. (b) Un
agar, se desarrollaron áreas circulares claras que contenían virus y células lisadas. El virus envuelto está compuesto por una nucleocápside rodeada por un
Un recuento de estas zonas claras permitió a d'Herelle estimar membrana flexible llamada envoltura. El sobre suele tener
el número de virus presentes. Este procedimiento para enumerar proteínas virales llamadas picos insertados en él.
virus ahora se llama ensayo de placa; se describe en la sección 16.6.
d'Herelle demostró que los virus bacterianos podían reproducirse
solo en bacterias vivas; por eso los llamó bacteriófagos (o
solo fagos) porque podrían hacer agujeros en el "césped" bacteriano. 16.3 LA ESTRUCTURA DE LOS VIRUS
La naturaleza química de los virus se estableció cuando Wendell
La morfología del virus ha sido intensamente estudiada en el pasado
Stanley anunció en 1935 que había cristalizado el tabaco
décadas debido a la importancia de los virus y la realización
virus del mosaico (TMV) y encontró que era en gran parte o completamente proteína.
esa estructura del virus era lo suficientemente simple para ser entendida. Progreso
Poco tiempo después, Frederick Bawden y Norman Pirie lograron separar las partículas
proviene del uso de varias técnicas diferentes: electrón
del virus TMV en proteínas y ácidos nucleicos.
microscopía, difracción de rayos X, análisis bioquímico e inmunología. Aunque nuestro
ácido. Así, a fines de la década de 1930, se hizo evidente que los virus son
conocimiento es incompleto debido a la
complejos de ácidos nucleicos y proteínas capaces de reproducirse sólo en
gran número de virus diferentes, la naturaleza general del virus
Células vivas.
la estructura se vuelve clara.
16.2 PROPIEDADES GENERALES DE LOS VIRUS Tamaño del virión
Los virus son un grupo único de agentes infecciosos cuya distinción reside en su Los viriones varían en tamaño desde alrededor de 10 a 400 nm de diámetro (figura
organización y patrón simples y acelulares. 16.2). Los virus más pequeños son un poco más grandes que los ribosomas,
de reproducción Una partícula completa de virus o virión consta de mientras que los poxvirus, que incluyen vaccinia, son aproximadamente los
una o más moléculas de ADN o ARN encerradas en una capa de proteína. Algunos del mismo tamaño que las bacterias más pequeñas y se pueden ver en el microscopio
virus tienen capas adicionales que pueden ser muy complejas y contienen óptico. La mayoría de los virus, sin embargo, son demasiado pequeños para ser visibles en el
carbohidratos, lípidos y proteínas adicionales. microscopio óptico y debe observarse con microscopios electrónicos de barrido y de
(figura 16.1). Los virus pueden existir en dos fases: extracelular y transmisión. Microscopía electrónica (sección 2.4)
intracelular. Los viriones, la fase extracelular, poseen pocas o ninguna

enzimas y no pueden reproducirse independientemente de las células vivas. En el
Propiedades estructurales generales
fase intracelular, los virus existen principalmente como replicantes nucleicos
Todos los viriones, incluso si poseen otros constituyentes, se construyen alrededor de
ácidos que inducen el metabolismo del huésped para sintetizar componentes del
un núcleo de nucleocápside (de hecho, algunos virus consisten solo en una
virión; eventualmente se liberan partículas virales completas o viriones.
nucleocápside). La nucleocápside está compuesta por una
En resumen, los virus difieren de las células vivas en al menos tres
ácido nucleico, generalmente ADN o ARN, contenido dentro de una proteína
maneras: (1) su organización simple, acelular; (2) la presencia de
cubierta llamada cápside, que protege el material genético viral y
ya sea ADN o ARN, pero no ambos, en casi todos los viriones; y (3) su
ayuda en su transferencia entre las células huésped.
incapacidad para reproducirse independientemente de las células y llevar a cabo la
Las cápsides son grandes estructuras macromoleculares que se autoensamblan
división celular como lo hacen los procariotas y los eucariotas.
de muchas copias de uno o unos pocos tipos de proteínas. las proteinas
utilizados para construir la cápside se denominan protómeros. Probablemente el más
1. Describir los principales avances técnicos y descubrimientos importantes en el
ventaja importante de esta estrategia de diseño es que la información
desarrollo temprano de la virología. ¿Por qué podría haberse desarrollado tanto la virología
almacenada en el material genético viral se utiliza con la máxima eficacia.
más lentamente sin el uso del filtro de Chamberland?
Por ejemplo, la cápside del virus del mosaico del tabaco (TMV) se construye utilizando
2. ¿Qué científicos hicieron contribuciones importantes al desarrollo de la
un solo tipo de protómero que tiene 158 aminoácidos.
virología? ¿Cuáles fueron sus aportes?
de longitud (figura 16.3). Por lo tanto, de los 6.000 nucleótidos de la
3. ¿En qué se parecen los virus a los organismos celulares? ¿Cómo se diferencian?
Genoma TMV, solo se requieren alrededor de 474 nucleótidos para codificar
(a) Virus vacunal (b) Paramixovirus (paperas) (c) Herpes virus d) Virus orf
(h) Adenovirus
(e) Rabdovirus (f) colifago T-par (g) Fago de (i) Virus de la influenza
cola flexible
(j) Poliomavirus (k) Picornavirus (l) fago X174 (m) Tubulovirus
1 metro
Figura 16.2 Tamaño y morfología de virus seleccionados. Los virus están dibujados a escala. Se proporciona una línea de 1 µm en la parte inferior de
la figura.
para la proteína de la cubierta. Sin embargo, suponga que la cápside de TMV fuera Las cápsides cal son tan rígidas como la cápside TMV. el virus de la gripe
compuesto por seis protómeros diferentes todos alrededor de 150 aminoácidos en El genoma está encerrado en cápsides helicoidales delgadas y flexibles que se pliegan
longitud. Si este fuera el caso, alrededor de 2.900 de los 6.000 nucleótidos dentro de un sobre (figura 16.4).
en el genoma de TMV sería necesario sólo para la construcción de la cápside, y El tamaño de una cápside helicoidal está influenciado por sus dos protómeros
mucho menos material genético estaría disponible para otros y el ácido nucleico encerrado dentro de la cápside. el diametro de
propósitos la cápside es una función del tamaño, la forma y las interacciones de la
Los diversos tipos morfológicos de virus resultan principalmente protómeros. El ácido nucleico parece determinar la cápside helicoidal
de la combinación de un tipo particular de simetría de la cápside longitud porque la cápside no se extiende mucho más allá del extremo
con la presencia o ausencia de una envoltura, que es una capa lipídica del ADN o ARN.
externo a la nucleocápside. Hay tres tipos de cápside

simetría: helicoidal, icosaédrica y compleja. Los viriones que tienen envoltura se
Cápsides icosaédricas
denominan virus envueltos; mientras que esos
que carecen de envoltura se denominan virus desnudos (figura 16.1). El icosaedro es un poliedro regular con 20 caras triangulares equiláteras y 12 vértices
(figura 16.2h, j–l). Es una de las formas favoritas de la naturaleza. La cápside
icosaédrica es la más
Cápsides helicoidales manera eficiente de encerrar un espacio. Unos pocos genes, a veces solo
Las cápsides helicoidales tienen forma de tubos huecos con paredes de proteínas. uno, puede codificar proteínas que se autoensamblan para formar la cápside.
El virus del mosaico del tabaco proporciona un ejemplo bien estudiado de De esta forma, un pequeño número de genes puede especificar una gran estructura
estructura de la cápside helicoidal (figura 16.3). En este virus, el autoensamblaje de tridimensional.
protómeros en una disposición helicoidal o espiral produce Cuando los virus icosaédricos se tiñen negativamente y se ven
un tubo largo y rígido, de 15 a 18 nm de diámetro por 300 nm de largo. los en el microscopio electrónico de transmisión, una estructura compleja es
cápside encierra un genoma de ARN, que está enrollado en espiral y revelado (figura 16.5). Las cápsides están construidas a partir de anillos o
se encuentra dentro de un surco formado por las subunidades proteicas. No todo heli unidades en forma de perilla llamadas capsómeros, cada una generalmente compuesta por cinco
(a)
protómero ARN Sobre
nucleocápside
(a) (B)
Figura 16.4 Virus de la influenza. El virus de la influenza es un envuelto

virus con nucleocápside helicoidal. (a) Vista esquemática. Influenza
Los virus tienen genomas segmentados que consisten en 7 a 8 diferentes
moléculas de ARN. Cada uno está recubierto por proteínas de la cápside. (b) Porque
hay de 7 a 8 nucleocápsidas flexibles encerradas por una envoltura,
los viriones son pleomórficos. Micrografía electrónica (350.000).
o seis protómeros. Los pentámeros (pentones) tienen cinco subunidades; los

hexámeros (hexones) poseen seis. Los pentámeros suelen estar en los vértices de
el icosaedro, mientras que los hexámeros generalmente forman sus bordes y
caras triangulares (figura 16.6). El icosaedro de la figura 16.6 es
construido de 42 capsómeros; se hacen icosaedros más grandes si hay más
se utilizan hexámeros para formar los bordes y las caras (p. ej., adenovirus
0 10nm 20nm tienen una cápside con 252 capsómeros como se muestra en la figura 16.5c,d). En
(B)
algunos virus de ARN, tanto los pentámeros como los hexámeros de una cápside
se construyen con un solo tipo de subunidad. En otros virus, los domadores de
pluma están compuestos de proteínas diferentes a las de los hexámeros.
El autoensamblaje de las cápsides es un proceso notable que se
no completamente entendido. No se requiere actividad enzimática para enlazar
protómeros juntos. Sin embargo, las proteínas que no son de la cápside pueden
estar involucradas. Suelen proporcionar un andamiaje sobre el que se ensamblan
los protomeros.
Aunque la mayoría de las cápsidas icosaédricas parecen contener tanto
pentámeros y hexámeros, el virus simio 40 (SV-40), un pequeño virus de ADN de
doble cadena, solo tiene pentámeros (figura 16.7a). los
El virus está formado por 72 pentámeros cilíndricos con centros huecos. Cinco
brazos flexibles se extienden desde el borde de cada pentámero hacia los
pentámeros vecinos (figura 16.7b,c). los brazos de
pentámeros adyacentes se enroscan entre sí y actúan como cuerdas que
une los pentámeros.
(C) Virus con cápsides de simetría compleja

Aunque la mayoría de los virus tienen cápsides icosaédricas o helicoidales,
Figura 16.3 Estructura del virus del mosaico del tabaco. (a) Un muchos virus no encajan en ninguna categoría. Los poxvirus y
micrografía electrónica de la cápside helicoidal teñida negativamente los bacteriófagos grandes son dos ejemplos importantes.
(400.000). (b) Ilustración de la estructura TMV. Tenga en cuenta que la Los poxvirus son los más grandes de los virus animales (alrededor de
nucleocápside está compuesta por una matriz helicoidal de protómeros con el ARN 400 240 200 nm de tamaño) e incluso se pueden ver con un microscopio de
en espiral por dentro. (c) Un modelo de TMV. contraste de fase o en preparaciones teñidas. Poseen un
(a) (B)
(C) (D)
Figura 16.5 Ejemplos de cápsidas icosaédricas. (a) Modelo de parvovirus canino, 12 capsómeros. (b) Imagen simulada por computadora del
poliomavirus (72 capsómeros) que causa una rara enfermedad desmielinizante del sistema nervioso central. (c) Adenovirus, 252 capsómeros
(171.000). ( d ) Modelo de adenovirus simulado por computadora.
estructura interna excepcionalmente compleja con un exterior en forma de ovoide a Hay una variación considerable en la estructura entre los grandes
ladrillo. La Figura 16.8 muestra la morfología de vaccinia bacteriófagos, incluso aquellos que infectan a un solo huésped. A diferencia de
virus, un poxvirus. El ADN de doble cadena está asociado con con los fagos T-even, muchos otros colifagos (fagos que infectan a E. coli) tienen
proteínas y contenidas en el nucleoide, una estructura central en forma verdaderas cabezas icosaédricas. T1, T5 y lambda
como un disco bicóncavo y rodeado por una membrana. Dos cuerpos elípticos o Los fagos tienen colas sin vaina que carecen de placa base y terminan en
laterales se encuentran entre el nucleoide y su envoltura exterior, una membrana y fibras rudimentarias de la cola. Los colifagos T3 y T7 tienen colas cortas no contráctiles
una capa gruesa cubierta por una serie de túbulos. sin fibras de cola. Se discuten los bacteriófagos
o fibras. con más detalle en el capítulo 17.
Algunos bacteriófagos grandes son aún más elaborados que los
poxvirus. Se dice que los fagos T2, T4 y T6 (fagos T-pares) que infectan a Escherichia
coli tienen simetría binal porque Envolturas virales y enzimas
tienen una cabeza que se asemeja a un icosaedro y una cola que es Muchos virus animales, algunos virus vegetales y al menos un virus bacteriano están
helicoidal. La cabeza icosaédrica es alargada por una o dos filas de delimitados por una capa membranosa externa llamada
hexámeros en el medio y contiene el genoma de ADN (figura 16.9). La cola está sobre (figura 16.10). Las envolturas de virus animales suelen surgir
compuesta por un collar que la une a la cabeza, de las membranas nucleares o plasmáticas de la célula huésped; sus lípidos y
un tubo hueco central, una vaina que rodea el tubo y una placa base compleja. La carbohidratos son constituyentes normales del huésped. En cambio, el sobre
funda está hecha de 144 copias del gp18. las proteínas están codificadas por los genes del virus e incluso pueden proyectarse desde
proteína dispuesta en 24 anillos, cada uno con seis copias. En los fagos T pares, la la superficie de la envoltura en forma de púas, que también se denominan peplómeros.
placa base es hexagonal y tiene un alfiler y un En muchos casos, estos picos están involucrados en la unión de virus a
fibra de la cola articulada en cada esquina. la superficie de la célula huésped. Debido a que difieren entre los virus, también
H
H PAGS
PAGS
PAGS
H H
H H
PAGS
H
H
PAGS
H
PAGS
H
H
PAGS
H
H (a)
PAGS H
H
PAGS
H
H
PAGS
H
H
PAGS
Figura 16.6 La estructura de una cápside icosaédrica

formada a partir de un solo tipo de protómero. Los protómeros
se asocian para formar pentones (P), que se muestran en rojo, o
hexones (H), que se muestran en dorado. Las líneas azules definen
las caras triangulares del icosaedro. Note que los pentones están
ubicados en los vértices y que los hexones forman las aristas y caras
(B)
del icosaedro. Esta cápside contiene 42 capsómeros.
1 2
se puede utilizar para identificar algunos virus. La envoltura es una

estructura membranosa flexible, por lo que los virus envueltos suelen ÿ ÿÿ
tener una forma algo variable y se denominan pleomórficos. Sin embargo,

las envolturas de virus como el virus de la rabia en forma de bala están
6 ÿ''
firmemente unidas a la nucleocápside subyacente y dotan al virión de ÿÿ ÿÿ
una forma característica constante (figura 16.10b). En algunos virus, la ÿ
ÿ 3
envoltura se rompe con disolventes como el éter hasta tal punto que las ÿÿ
actividades mediadas por lípidos se bloquean o las proteínas de la
envoltura se desnaturalizan y se vuelven inactivas. Entonces se dice que ÿ
el virus es "sensible al éter".
El virus de la influenza (figura 16.10a) es un ejemplo bien estudiado
de un virus envuelto. Los picos se proyectan alrededor de 10 nm desde 5
la superficie a intervalos de 7 a 8 nm. Algunos picos poseen la enzima 4
(C)
neu raminidasa, que funciona en la liberación de viriones maduros de la
célula huésped. Otros picos tienen proteínas de hemaglutinina , llamadas Figura 16.7 Una cápside icosaédrica construida con
así porque pueden unir los viriones a las membranas de los glóbulos rojos pentámeros. (a) El virus simio 40 cápside. Los 12 pentámeros en los vértices
y hacer que los glóbulos rojos se agrupen (aglutinen). del icosaedro están en blanco. Los pentámeros que no son de vértice se
Esto se llama hemaglutinación (ver figura 35.11). Las tininas de muestran con cada cadena polipeptídica en un color diferente. (b) Un
Hemagglu participan en la unión del virión a las células huésped. Las pentámero con los brazos extendidos. (c) Un diagrama esquemático de la
proteínas, como las proteínas espigas que están expuestas en la estructura de la superficie representada en la parte a. El cuerpo de cada
superficie de la envoltura exterior, generalmente son glicoproteínas, es pentámero está representado por un diseño floral de cinco pétalos. Cada
decir, las proteínas tienen carbohidratos adheridos a ellas. Una proteína brazo se muestra como una línea o una línea y un cilindro (-hélice) con el
no glicosilada, la proteína M o matriz, se encuentra en la superficie interna mismo color que el resto de su protómero. Los protómeros exteriores se
de la envoltura y ayuda a estabilizarla. numeran en el sentido de las agujas del reloj comenzando por el del vértice.
240– 300nm
Membrana central
200nm
Ácido nucleico
nucleoide
sobre
exterior
Antígenos
proteicos solubles
cuerpo
lateral
(a) (B) (C)
Figura 16.8 Morfología del virus Vaccinia. ( a ) Diagrama de la estructura de vaccinia. (b) Micrografía del virión que muestra claramente el nucleoide (200.000).
( c ) Estructura de la superficie de Vaccinia. Una micrografía electrónica de cuatro viriones que muestra el grueso conjunto de fibras superficiales (150.000).
Ácido nucleico
cabeza de la cápside
Collar
Vaina
fibras
de la cola
Plato base
pasadores de cola
(a) (B)
Figura 16.9 T-Even Colifagos. (a) La estructura del bacteriófago T4. (b) La micrografía muestra el fago antes de la inyección de su ADN.
Originalmente se pensó que todos los viriones carecían de enzimas. aunque los virus carecen de un verdadero metabolismo y no pueden
Sin embargo, como se acaba de ilustrar en la discusión sobre el virus de la reproducirse independientemente de las células vivas, pueden transportar
influenza, este no es el caso. En algunos casos, las enzimas están asociadas una o más enzimas esenciales para completar sus ciclos de vida.
con la envoltura o la cápside (p. ej., la neuraminidasa de influenza), pero la
mayoría de las enzimas virales están ubicadas dentro de la cápside. Muchos
de estos están involucrados en la replicación de ácidos nucleicos. Por ejemplo, Genomas virales
el virus de la influenza usa ARN como material genético y lleva una enzima Los virus son excepcionalmente flexibles con respecto a la naturaleza de sus
que sintetiza ARN usando una plantilla de ARN. Estas enzimas se denominan genomas. Emplean los cuatro tipos posibles de ácidos nucleicos: ADN
polimerasas de ARN dependientes de ARN. Así todos monocatenario, ADN bicatenario, ADN monocatenario
Pico de hemaglutinina
Pico de neuraminidasa
Proteína matriz
Bicapa lipídica
polimerasa
Ribonucleoproteína
50nm
a) Virus de la gripe (b) Virus de la rabia
Picos de nucleocápside
sobre
Sobre
Centro tegumento
Sobre
c) VIH
Picos de la
envoltura de
glicoproteína ÿ
d) Herpesvirus
Figura 16.10 Ejemplos de virus envueltos. (a) Diagrama del virión de

influenza. (b) Virus de la rabia teñido negativamente. (c) Virus de la
inmunodeficiencia humana. (d) Herpesvirus. (e) Imagen de computadora
del virus Semliki Forest, un virus que ocasionalmente causa encefalitis
en humanos. Las imágenes (b), (c) y (d) están coloreadas artificialmente.
e) Virus del bosque de Semliki
Tabla 16.1 Tipos de ácidos nucleicos virales
Tipo de ácido nucleico Estructura de ácido nucleico Ejemplos de virus
ADN
Monocatenario ADN lineal, monocatenario Parvovirus
ADN circular, monocatenario X174, M13, fagos fd

Doble cadena ADN lineal de doble cadena Herpesvirus (virus del herpes simple, citomegalovirus,
virus de Epstein-Barr), adenovirus, colifagos T, fagos
lambda y otros bacteriófagos
ADN lineal de doble cadena con roturas de cadena sencilla colifago T5
ADN de doble cadena con extremos entrecruzados Vaccinia, virus de la viruela
ADN cerrado, circular, de doble cadena Poliomavirus (SV-40), virus del papiloma, fago PM2, virus del
mosaico de la coliflor
ARN
monocatenario ARN lineal, monocatenario, de cadena positiva Picornavirus (polio, rinovirus), togavirus, ARN
bacteriófagos, TMV y la mayoría de los virus de plantas
ARN lineal, monocatenario, de cadena negativa Rabdovirus (rabia), paramixovirus (paperas, sarampión)
ARN lineal, monocatenario, segmentado, de cadena positiva Virus del mosaico del bromo (segmentos individuales en
viriones)
Lineal, monocatenario, diploide (dos monocatenarios Retrovirus (virus del sarcoma de Rous, virus de
idénticos), ARN de cadena positiva la inmunodeficiencia humana)
ARN lineal, monocatenario, segmentado, de cadena negativa Paramixovirus, ortomixovirus (influenza)
Doble cadena ARN lineal, de doble cadena, segmentado Reovirus, virus del tumor de heridas de las plantas, virus de la
polihedrosis citoplasmática de los insectos, fago 6, muchos
micovirus
Modificado de SE Luria, et al., General Virology, 3ª edición, 1983. John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, NY.
ARN y ARN de doble cadena. Los cuatro tipos se encuentran en un virus animal. forma circular una vez que el genoma entra en la célula huésped. Otra característica
La mayoría de los virus de plantas tienen ARN monocatenario importante de los virus de ADN es que sus genomas a menudo
genomas, y la mayoría de los virus bacterianos contienen cadenas dobles contienen bases nitrogenadas inusuales. Por ejemplo, el T-par
ADN. La tabla 16.1 resume muchas variaciones observadas en los ácidos nucleicos los fagos de E. coli tienen 5-hidroximetilcitosina (ver figura 17.9)
virales. El tamaño del material genético viral también varía mucho. en lugar de citosina, y el grupo hidroximetilo a menudo se modifica mediante la
Los genomas más pequeños (los de los virus MS2 y Q) son unión de un resto de glucosa.
alrededor de 4.000 nucleótidos, lo suficientemente grande como para codificar tres o Los virus de ARN también pueden ser de doble cadena (dsRNA) o
cuatro proteínas. MS2, Q y algunos otros virus incluso ahorran espacio monocatenario (ssRNA). Aunque relativamente pocos virus de ARN
mediante el uso de genes superpuestos. En el otro extremo, las bacterias T-even, tienen genomas dsRNA, se sabe que los virus dsRNA infectan animales, plantas,
el herpesvirus y el virus vaccinia tienen genomas de 1,0 a hongos y al menos una especie bacteriana. Más comunes son los virus con
2.0 105 nucleótidos y puede ser capaz de dirigir la síntesis de genomas ssRNA. Algunos genomas de ssRNA
más de 100 proteínas. En los siguientes párrafos la naturaleza de cada tienen una secuencia de bases que es idéntica a la del ARNm viral, en
El tipo de ácido nucleico se resume brevemente. Estructura del gen (sección 11.5) en cuyo caso la cadena de ARN genómico se denomina cadena positiva o
La mayoría de los virus de ADN utilizan ADN de doble cadena (dsDNA) como hebra positiva. De hecho, los ARN de cadena positiva pueden dirigir la síntesis de
su material genético. Sin embargo, algunos tienen ADN monocatenario. proteínas inmediatamente después de ingresar a la célula. Sin embargo, otros virales
(ssDNA) genomas. En ambos casos, los genomas pueden ser lineales o circulares Los genomas de ARN son complementarios en lugar de idénticos a los virales.
(figura 16.11). Algunos genomas de ADN pueden cambiar ARNm, y se denominan hebras negativas o negativas. poliomielitis, tabaco
de una forma a la otra. Por ejemplo, el fago lambda de E. coli Los virus del mosaico, del mosaico del bromo y del sarcoma de Rous son todos positivos.
tiene un genoma que es lineal en la cápside, pero se convierte en un virus de ARN de cadena; rabia, paperas, sarampión e influenza
El cultivo de virus 417
3. Las cuatro formas de ácido nucleico pueden servir como genomas de virus. Describa cada uno, el
tipos de viriones que lo poseen, y cualquier característica física distintiva que

ácido nucleico puede tener. ¿Cuáles son los siguientes: cadena positiva, cadena negativa y
genoma segmentado?
4. ¿Qué ventaja obtendría un virus de ARN si su genoma se asemejara a
¿ARNm eucariótico?
16.4 REPRODUCCIÓN DE VIRUS1

Las diferencias en la estructura del virus y los genomas virales tienen implicaciones
importantes para el mecanismo que utiliza un virus para reproducirse.
dentro de su célula huésped. De hecho, incluso entre virus con características similares
estructuras y genomas, cada uno puede exhibir ciclos de vida únicos. Sin embargo, a pesar
de estas diferencias, se puede discernir un patrón general de reproducción del virus.
Debido a que los virus necesitan una célula huésped en
que para reproducirse, el primer paso en el ciclo de vida de un virus es adherirse a un

Figura 16.11 ADN de fago circular. El ADN circular cerrado
huésped (figura 16.12). A esto le sigue la entrada de la nucleocápside o del ácido nucleico
del fago PM2 (93.000). Tenga en cuenta tanto el relajado y altamente viral en el huésped. Si el
formas retorcidas o superenrolladas. entra la nucleocápside, el genoma generalmente se descubre antes de que puedan ocurrir
más pasos. Una vez libres en el citoplasma, se expresan los genes codificados por el
genoma viral. Es decir, los genes virales
Los virus son ejemplos de virus de ARN de cadena negativa. Muchos ARN
se transcriben y traducen. Esto permite que el virus tome el control de la maquinaria
Los virus tienen genomas segmentados, es decir, el genoma consiste
biosintética de la célula huésped para que se puedan producir nuevos viriones. Luego, el
de más de una cadena o segmento de ARN. En muchos casos, cada
genoma viral se replica y se vuelve viral.
segmento codifica para una proteína. Por lo general, todos los segmentos están encerrados
se sintetizan proteínas. Los nuevos viriones se construyen mediante el autoensamblaje de
en la misma cápside aunque algunos genomas de virus pueden estar compuestos de hasta
las proteínas de la cubierta con los ácidos nucleicos y, finalmente, el
10 a 12 segmentos. Sin embargo, no es necesario que todos los segmentos estén ubicados
los viriones maduros son liberados del huésped. Como se discutió en los capítulos 17 y 18,
en el mismo virión para una
los detalles de la reproducción del virus pueden variar dramáticamente. Por ejemplo,
reproducción. El genoma del virus del mosaico del bromo, un virus que infecta a ciertas
algunos virus se liberan al lisar
especies de gramíneas, se compone de cuatro segmentos distribuidos entre tres partículas
sus anfitriones, mientras que otros brotan del anfitrión sin lisis.
virales diferentes. Los tres de los más grandes
se requieren segmentos para la infectividad. A pesar de este complejo y
arreglo aparentemente ineficiente, el mosaico de bromo diferente
los viriones logran infectar con éxito al mismo huésped. 16.5 EL CULTIVO DE VIRUS
El ARN viral de cadena positiva a menudo se parece al ARNm en más de
Debido a que no pueden reproducirse independientemente de las células vivas,
la equivalencia de su secuencia de nucleótidos. igual de eucariótico
los virus no se pueden cultivar de la misma manera que los microorganismos procarióticos
El ARNm generalmente tiene una tapa 5 'de 7-metilguanosina, muchas plantas
y eucarióticos. Durante muchos años, los investigadores han cultivado virus animales
y los genomas de ARN viral animal están protegidos. Además, la mayoría más
mediante la inoculación de animales huéspedes adecuados o
Los virus animales de ARN de cadena también tienen una secuencia poli-A en el 3 '
huevos embrionados—huevos de pollo fertilizados incubados alrededor de 6 a 8
extremo de su genoma y, por lo tanto, se parecen mucho al ARNm eucariótico
días después de la puesta (figura 16.13). Para preparar el huevo para el cultivo.
con respecto a la estructura de ambos extremos. Por extraño que parezca, un
de virus, la superficie de la cubierta se desinfecta primero con yodo y se penetra con un
Varios ARN virales de plantas de una sola hebra tienen extremos 3 'que se asemejan al
pequeño taladro estéril. Después de la inoculación, el orificio de perforación se
ARN de transferencia eucariota. De hecho, el genoma del tabaco
sellado con gelatina y el huevo incubado. Algunos virus se reproducen
El virus del mosaico en realidad acepta aminoácidos. Transcripción (sección
solo en ciertas partes del embrión; en consecuencia, deben inyectarse en la región
11.6); Traducción (sección 11.8)
adecuada. Por ejemplo, el virus del mixoma
crece bien en la membrana corioalantoidea, mientras que las paperas
1. Defina los siguientes términos: nucleocápside, cápside, cápside icosaédrica,
cápside helicoidal, virus complejo, simetría binal, protómero, capsómero, pentámero
o pentón, y hexámero o hexón. ¿Cómo se asocian los pentámeros y los
hexámeros para formar un icosaedro completo? lo que determina la cápside helicoidal 1
Los virólogos generalmente se refieren a la producción de nuevas partículas de virus dentro de una célula huésped.
largo y diametro? como replicación de virus. De hecho, muchos virólogos afirman que los virus no se reproducen,
2. ¿Qué es un sobre? ¿Qué son las espigas (peplómeros)? ¿Por qué algunos están envueltos? ellos replican. Sin embargo, para evitar confusiones sobre el significado del término replicación,
usaremos el término reproducción cuando discutamos la producción de nuevos
virus pleomórficos? Dé dos funciones que los picos podrían cumplir en el ciclo de
viriones, y use el término replicación cuando discuta la síntesis de nuevas copias
vida del virus y las proteínas que el virus de la influenza usa en estos procesos.
de genomas virales.
Virus
Célula huésped Saco de aire
Inoculación de
Unión del virus a
Cavidad membrana
la célula huésped
corioalantoidea
amniotica
Membrana
corioalantoidea
Cascarón
Cavidad Inoculación en la
cavidad alantoidea
alantoidea
Entrada de saco vitelino
Albúmina
nucleocápside viral o
ácido nucleico
Figura 16.13 Cultivo de virus en un huevo embrionado. Dos sitios

que se utilizan a menudo para cultivar virus animales son la membrana
corioalantoidea y la cavidad alantoidea. El diagrama muestra un embrión de
pollo de 9 días.
Proteínas virales
Síntesis de proteínas
virales y ácidos nucleicos. El virus crece mejor en la cavidad alantoidea. La infección puede producir
ácidos
nucleicos una lesión tisular local conocida como viruela, cuyo aspecto suele ser
virales característico del virus.
Más recientemente, se han cultivado virus animales en cultivos de tejidos
(células) en monocapas de células animales. Esta técnica es posible gracias
al desarrollo de medios de cultivo para células animales y al uso de agentes
antimicrobianos que evitan la contaminación por bacterias y hongos. Los
virus se agregan a una capa de células animales en una placa de Petri
especialmente preparada y se les da tiempo para que se adhieran a las células.
Autoensamblaje de Luego, las células se cubren con una capa delgada de agar para limitar la
viriones
propagación del virión, de modo que solo las células adyacentes se infecten
con viriones recién producidos. Como resultado, a menudo se forman áreas
localizadas de destrucción celular y lisis llamadas placas (figura 16.14) y
pueden detectarse si se tiñen con tintes, como rojo neutro o azul tripán, que
pueden distinguir las células vivas de las muertas. El crecimiento viral no
siempre da como resultado la lisis de las células para formar una placa. Los
virus animales, en particular, pueden causar cambios degenerativos
microscópicos o macroscópicos o anomalías en las células huésped y en los
tejidos. Estos se denominan efectos citopáticos (figura 16.15). Los efectos
Liberación de viriones de
citopáticos pueden ser letales, pero no siempre ocurre la formación de placas a partir de la lisis celula
progenie. Los virus bacterianos y de arqueas se cultivan en cultivos de caldo o
agar de células jóvenes en crecimiento activo. En algunos cultivos infectados,
se destruyen tantas células huésped que los cultivos turbios se aclaran
rápidamente debido a la lisis celular. Los cultivos de agar se preparan
mezclando virus con agar líquido frío y un cultivo adecuado de células
huésped. La mezcla se vierte rápidamente en una placa de Petri que contiene
una capa inferior de agar estéril. Después del endurecimiento, las células en
Figura 16.12 Ilustración generalizada de la reproducción del virus. la capa de agar superior crecen y se reproducen, formando una capa opaca
Existe una gran variación en los detalles de la reproducción del virus para continua o “césped”. Dondequiera que un virión descanse en el agar superior,
especies de virus individuales. el virus infecta una célula adyacente y se reproduce. Eventualmente, la lisis de
Ensayos y purificación de virus 419
poliovirus
placas en césped
de células renales
de mono.
(un)
(un)
(a) 0,5 micras
(B) 0,5 micras

Placas de
bacteriófagos en
césped de células bacterianas.
(C) 0,5 micras

(B)
Figura 16.15 Efectos citopáticos de los virus. (a) Una monocapa de células de
Figura 16.14 Placas de virus. (a) Placas de poliovirus en un cultivo de células fibroblastos normales de las amígdalas fetales. (b) Efectos citopáticos causados por la
de riñón de mono. (b) Placas formadas por bacteriófagos que crecen en un césped de infección de los fibroblastos de las amígdalas fetales con adenovirus. (c) Efectos
células bacterianas. citopáticos causados por la infección de los fibroblastos de las amígdalas fetales con el
virus del herpes simple.
las celdas genera una placa o claro en el césped (figura 16.14b y figura 16.6 PURIFICACIÓN DE VIRUS Y ENSAYOS
16.16). Como se muestra en la figura 16.16, la aparición de placas a menudo
es característica del virus que se está cultivando. Los virólogos deben ser capaces de purificar virus y determinar con precisión
Los virus de plantas se cultivan de diversas formas. Pueden usarse sus concentraciones para poder estudiar la estructura del virus, la
cultivos de tejidos vegetales, cultivos de células separadas o cultivos de reproducción y otros aspectos de su biología. Estos métodos son tan
protoplastos (células que carecen de paredes celulares). Los virus también importantes que el crecimiento de la virología como disciplina moderna
se pueden cultivar en plantas enteras. Las hojas se inoculan mecánicamente dependió de su desarrollo.
cuando se frotan con una mezcla de virus y un abrasivo. Cuando el abrasivo
rompe las paredes celulares, los virus entran en contacto directo con la
Purificación de virus
membrana plasmática e infectan las células huésped expuestas. (En la
naturaleza, el papel del abrasivo lo desempeñan con frecuencia insectos que La purificación hace uso de varias propiedades de virus. Los viriones
chupan o aplastan las hojas de las plantas y, por lo tanto, transmiten virus). son muy grandes en relación con las proteínas, a menudo son más
A menudo se desarrolla una lesión necrótica localizada debido a la rápida estables que los componentes celulares normales y tienen proteínas en
muerte de las células en el área infectada (figura 16.17). Incluso cuando no la superficie. Debido a estas características, se pueden emplear muchas
se producen lesiones, la planta infectada puede presentar síntomas como técnicas útiles para el aislamiento de proteínas y orgánulos para aislar virus.
cambios en la pigmentación o en la forma de las hojas. Algunos virus de Cuatro de los enfoques más utilizados son (1) centrifugación diferencial y en
plantas pueden transmitirse solo si una parte enferma se injerta en una planta sana. gradiente de densidad, (2) precipitación de virus,
T1
(a)
T2
T3
(B)
Figura 16.16 Placas de fago. Placas producidas en un césped de E. coli por
algunos de los colifagos T (fagos T1, T2 y T3). Tenga en cuenta las grandes Figura 16.17 Lesiones necróticas en hojas de plantas. (a) Virus
diferencias en la apariencia de la placa. Las fotografías son aproximadamente del mosaico del tabaco en Nicotiana glutinosa. (b) Infección por el virus del mosaico
1/3 de tamaño completo. del tabaco de una orquídea que muestra cambios en el color de las hojas.
(3) desnaturalización de contaminantes, y (4) digestión enzimática de Se puede lograr una purificación adicional de una preparación de virus
constituyentes de la célula huésped. mediante centrifugación en gradiente (figura 16.19). Se vierte una solución de
La centrifugación diferencial y de gradiente de densidad a menudo se usa sacarosa en un tubo de centrífuga de modo que su concentración aumente de
en los pasos iniciales de purificación para separar las partículas de virus de las manera suave y lineal desde la parte superior hasta la parte inferior del tubo. La
células huésped. El proceso comienza con células huésped en etapas posteriores preparación de virus, a menudo producida por centrifugación diferencial, se
de la infección porque contienen viriones maduros. Las células infectadas se coloca en capas sobre el gradiente y se centrifuga. Como se muestra en la figura
rompen primero en un tampón para producir una suspensión acuosa u 16.19a, las partículas se asientan bajo la fuerza centrífuga hasta que se detienen
homogeneizado que consta de componentes celulares y virus. Luego, los virus en el nivel donde las densidades de virus y sacarosa son iguales (centrifugación
se pueden aislar mediante centrifugación diferencial, la centrifugación de una en gradiente isopícnico). Los virus se pueden separar de otras partículas
suspensión a varias velocidades para separar partículas de diferentes tamaños basándose en diferencias muy pequeñas en la densidad. Los gradientes también
(figura 16.18). Por lo general, el homogeneizado primero se centrifuga a alta pueden separar virus en función de las diferencias en su velocidad de
velocidad para sedimentar los virus y otras partículas celulares grandes. sedimentación (centrifugación de gradiente zonal de velocidad).
Se desecha el sobrenadante, que contiene las moléculas solubles del Cuando se hace esto, las partículas se separan en función del tamaño y la
homogeneizado. A continuación, el sedimento se resuspende y se centrifuga a densidad; por lo general, el virus más grande se moverá más rápidamente por el
baja velocidad para eliminar sustancias más pesadas que los virus. Finalmente, gradiente. La figura 16.19b muestra que los virus difieren entre sí y entre los
la centrifugación a mayor velocidad sedimenta los virus. Este proceso puede componentes de las células con respecto a la densidad (gramos por mililitro) o al
repetirse para purificar aún más las partículas de virus. coeficiente o coeficientes de sedimentación. Así estos
Ensayos y purificación de virus 421
100.000 g 1-3 Decantar; 8.000-10.000 g 10-20 decantar 100.000 g 1-3

horas resuspender min el sobrenadante horas
Figura 16.18 Uso de centrifugación diferencial para purificar un virus. Al principio, el tubo de centrífuga contiene virus homogeneizados e icosaédricos
(en verde). Primero, los virus y los orgánulos celulares más pesados se eliminan de las moléculas más pequeñas. Después de la resuspensión, la mezcla se
centrifuga lo suficientemente rápido como para sedimentar los orgánulos celulares mientras se dejan en suspensión las partículas de virus más pequeñas;
luego se recogen los virus purificados. Este proceso se puede repetir varias veces para purificar aún más los viriones.
20% sacarosa
50%
sacarosa 12 3 4 5
(a)
ARN
2.0
ADN Figura 16.19 Centrifugación en gradiente. (a)

gránulos
Se prepara un gradiente de sacarosa lineal, 1, y la
de almidón
mezcla de partículas se coloca en capas encima, 2 y 3. La
Ribosoma centrifugación, 4, separa las partículas en función de su
densidad y coeficiente de sedimentación (las flechas en
1.5 los tubos de centrífuga indicar la dirección de la fuerza
Fago T3 T2
ÿX174 centrífuga). 5. En la centrifugación en gradiente isopícnico, el
TMV fondo del gradiente es más denso que cualquier partícula, y
Proteínas Polio
Núcleos cada partícula se detiene en un punto del gradiente igual a su
cloroplastos densidad. La centrifugación zonal de velocidad separa las
partículas en función de su coeficiente de sedimentación, una
función tanto del tamaño como de la densidad, porque el fondo
mitocondrias
del gradiente es menos denso que las partículas más densas
Retículo
endoplásmico (áspero y liso)
y la centrifugación se lleva a cabo durante un tiempo más
1.0 breve para que las partículas no se detengan. .Las partículas
100 102 104 106 108 más grandes y densas viajan más rápido. (b) Las densidades
Coeficiente de sedimentación (S) y coeficientes de sedimentación de virus representativos
(B) (mostrados en color) y otras sustancias biológicas.
dos tipos de centrifugación en gradiente son muy efectivos en la purificación de virus.
Aunque los procedimientos de centrifugación eliminan muchas células

material, algunos componentes celulares pueden permanecer en la preparación del
virus. Los virus se pueden separar de cualquier contaminante celular restante
mediante precipitación, desnaturalización o degradación enzimática.
de los contaminantes Muchos procedimientos de precipitación utilizan sulfato de
amonio para precipitar los contaminantes celulares. Inicialmente,
Se agrega sulfato de amonio a una concentración justo por debajo de esa
necesarios para precipitar las partículas del virus. Así, muchos componentes celulares
se precipitan mientras el virus permanece en solución. Después de cualquier
Figura 16.20 Virus del mosaico del tabaco. Un virus del mosaico del tabaco
se eliminan los contaminantes precipitados, más sulfato de amonio
preparación vista en el microscopio electrónico de transmisión. Látex
se añade y los virus precipitados se recogen por centrifugación. Los virus sensibles
Se han añadido perlas de 264 nm de diámetro (esferas blancas).
al sulfato de amonio a menudo se purifican por
precipitación con polietilenglicol.
Porque los virus frecuentemente son menos sensibles a la desnaturalización lo suficientemente grandes, las partículas de virus unen los glóbulos rojos—
condiciones que muchos componentes celulares, la exposición de una preparación es decir, se aglutinan formando una red que se asienta fuera de la suspensión. En la
de virus al calor o un cambio en el pH se puede utilizar en los pasos finales de práctica, los glóbulos rojos se mezclan con una serie de
purificación de virus. Además, algunos virus también toleran el tratamiento con diluciones de virus y se examina cada mezcla. El título de hemaglutinación es la
disolventes orgánicos como el butanol y el cloroformo. Por lo tanto dilución más alta de virus (o el recíproco de la
el tratamiento con disolvente se puede utilizar tanto para desnaturalizar los dilución) que todavía causa hemaglutinación. Este ensayo es un método preciso y
contaminantes proteicos como para extraer los lípidos de la preparación. El solvente rápido para determinar la cantidad relativa de
se mezcla completamente con la preparación de virus, luego se deja reposar virus como el virus de la gripe. Si el número real de virus
y separar en capas orgánicas y acuosas. El virus inalterable necesario para causar la hemaglutinación se determina mediante otra técnica, el
permanece suspendido en la fase acuosa mientras que los lípidos se disuelven en ensayo se puede utilizar para determinar el número de viriones
la fase orgánica. Las sustancias desnaturalizadas por solventes orgánicos se presentes en una muestra.
acumulan en la interfase entre las fases acuosa y orgánica. Una variedad de ensayos indirectos determinan el número de virus en
Uno de los últimos pasos utilizados para purificar los virus es la degradación términos de infectividad, y muchos de estos se basan en el mismo
enzimática de los contaminantes. Esto se usa a menudo para eliminar cualquier resto técnicas utilizadas para el cultivo de virus. Por ejemplo, en la placa
de proteínas celulares y ácidos nucleicos en la preparación del virus. ensayo varias diluciones de virus se sembraron en placas con células huésped
Aunque los virus están compuestos por una cubierta proteica que rodea una apropiadas. Cuando el número de virus sembrados es mucho
ácido nucleico, por lo general son más resistentes al ataque de las nucleasas y inferior al número de células huésped disponibles para la infección y
proteasas que los ácidos nucleicos libres y las proteínas. Para cuando los virus se distribuyen uniformemente, cada placa en una capa de
Por ejemplo, la ribonucleasa y la tripsina a menudo degradan los ácidos ribonucleicos Se supone que las células huésped han surgido de la reproducción de un
y las proteínas celulares sin alterar los viriones. virión único. Por lo tanto, un recuento de las placas producidas en una dilución
particular dará el número de viriones infecciosos, llamados
las unidades formadoras de placa (PFU) y la concentración de unidades infecciosas
Ensayos de virus en la muestra original se pueden calcular fácilmente. Por ejemplo, suponga que 0,10
6
La cantidad de virus en una muestra se puede determinar directamente ml de una dilución 10 del virus
contando el número de partículas o indirectamente mediante la medición de un la preparación produce 75 placas. La concentración inicial de
efecto observable del virus. Los valores obtenidos por los dos enfoques a menudo no unidades formadoras de placa es
se correlacionan estrechamente; sin embargo, ambos son valiosos.
Los viriones se pueden contar directamente con el microscopio electrónico. UFP/ml (75 UFP/0,10 ml)(106 ) 7,5 108 .
En un procedimiento, la muestra que contiene el virus se mezcla con un

concentración conocida de pequeñas perlas de látex y rociado en un Virus que producen diferentes tipos de morfología de placa en la
rejilla de muestra recubierta. Se cuentan las cuentas y los viriones; los la misma placa puede contarse por separado. Aunque el número de
la concentración de virus se calcula a partir de estos recuentos y de la PFU no es igual al número de viriones, sus proporciones son proporcionales: una
concentración de perlas (figura 16.20). Esta técnica suele funcionar preparación con el doble de virus tendrá
bien con preparaciones concentradas de virus de morfología conocida. Los virus se dos veces las unidades formadoras de placa.
pueden concentrar por centrifugación antes El mismo enfoque empleado en el ensayo de placa puede ser
contando si la preparación está demasiado diluida. Sin embargo, si las cuentas y utilizado con embriones y plantas. Los embriones de pollo se pueden inocular con
los virus no se distribuyen uniformemente (como sucede a veces), el recuento final una preparación diluida o se pueden frotar hojas de plantas con una mezcla de virus
será inexacto. diluido y abrasivo. El número de viruelas en
Un método indirecto de contar partículas de virus es el ensayo de membranas embrionarias o lesiones necróticas en las hojas se multiplica
hemaglutinación. Muchos virus pueden adherirse a la superficie del rojo. por el factor de dilución y dividido por el volumen del inóculo para obtener la
glóbulos (ver figura 35.11). Si la razón de virus a células es concentración de unidades infecciosas.
Principios de la taxonomía de virus 423
Cuando los efectos biológicos no se cuantifican fácilmente en estos

100
maneras, la cantidad de virus requerida para causar la enfermedad o la muerte puede
determinarse por el método del punto final. Los organismos o cultivos celulares se
inoculan con diluciones en serie de una suspensión de virus. 80
Los resultados se utilizan para encontrar la dilución de punto final en la que el 50% de
las células u organismos huésped mueren (figura 16.21). el letal
60
dosis (LD50) es la dilución que contiene una dosis lo suficientemente grande para
destruir el 50% de las células u organismos huésped. En un sentido similar, la
dosis infecciosa (ID50) es la dosis que, cuando se administra a un número 40
de huéspedes, provoca una infección del 50% de los huéspedes en las condiciones
empleadas.
20
1. Analice las formas en que se pueden cultivar los virus. Defina los términos viruela,
placa, efecto citopático y lesión necrótica.
2. Mencione los cuatro enfoques principales mediante los cuales se pueden purificar los 0 10-5 10-6 10-7 10-8
virus y describa cómo funciona cada uno. Distinguir entre centrifugación diferencial y
Dilución
de gradiente de densidad en términos de cómo se llevan a cabo.
3. ¿Cómo se puede encontrar la concentración de virus, tanto directa como indirectamente, por
Figura 16.21 Curva hipotética de dosis-respuesta. los
recuentos de partículas y medición de la concentración de unidades infecciosas?
LD50 está indicado por la línea discontinua.
Definir unidades formadoras de placa, dosis letal y dosis infecciosa.
entonces el número de virus y categorías taxonómicas ha continuado

expandir. En su octavo informe, el ICTV describió casi 2000
16.7 PRINCIPIOS DE LA TAXONOMÍA DE VIRUS
especies de virus y las ubicó en 3 órdenes, 73 familias, 9 subfamilias y 287 géneros
La clasificación de los virus se encuentra en un estado mucho menos satisfactorio que (tabla 16.2). El comité da mayor importancia
la de los microorganismos celulares. En parte, esto se debe a la falta de peso en propiedades específicas para definir familias: tipo de ácido nucleico,
conocimiento de su origen e historia evolutiva (Microbial Tid bits 16.2). En 1971, el encadenamiento de ácidos nucleicos, el sentido (positivo o negativo) de
Comité Internacional de Taxonomía de genomas de ssRNA, presencia o ausencia de envoltura, simetría de
Virus (ICTV) desarrolló un sistema de clasificación uniforme. Ya que la cápside y las dimensiones del virión y la cápside. orden de virus
16.2 El origen de los virus

El origen y la evolución posterior de los virus están envueltos en misterio, en parte dimensionados en tiempos específicos, en ácidos nucleicos infecciosos cuya replicación
debido a la falta de un registro fósil. Sin embargo, reciente no pudo ser controlada. Esta conjetura está respaldada por la observación de que los
avances en la comprensión de la estructura y reproducción del virus ácidos nucleicos de los retrovirus (ver sección 18.2)
han hecho posible una especulación más informada sobre los orígenes del virus. En y una serie de otros viriones contienen secuencias bastante similares a
Actualmente hay dos hipótesis principales entretenidas por los virólogos. Eso los de células normales, plásmidos y transposones (ver capítulo 13).
se ha propuesto que al menos algunos de los más complejos envueltos Los pequeños ARN infecciosos llamados viroides (ver sección 18.9) tienen
virus, como los poxvirus y los herpesvirus, surgieron de pequeñas secuencias de bases complementarias a los transposones (ver sección 13.5),
células, probablemente procarióticas, que parasitaban células más grandes y complejas las regiones alrededor del límite de los intrones de ARNm y porciones de
células. Estas células parásitas se volvieron cada vez más simples y más dependientes ADN huésped. Esto ha llevado a la especulación de que han surgido de trones o
en sus anfitriones, al igual que lo han hecho los parásitos multicelulares, en un transposones. Se ha propuesto que las proteínas celulares
proceso conocido como evolución retrógrada. hay varios problemas ensamblados espontáneamente en icosaedros alrededor de núcleos infecciosos
con esta hipótesis. Los virus son radicalmente diferentes de las procariotas, y es difícil ácidos para producir viriones primitivos.
imaginar los mecanismos por los cuales tal Es posible que los virus hayan surgido a través de ambos mecanismos. Debido a
pudo haber ocurrido la transformación o las presiones selectivas que condujeron a ella. que los virus difieren tanto entre sí, parece
Además, uno esperaría encontrar algunas formas intermedias entre procariotas y al probable que se hayan originado independientemente muchas veces durante
menos las más complejas envueltas. el curso de la evolución. Muchos virus han evolucionado de otros
virus, pero tales formas no han sido detectadas. los virus, al igual que los organismos celulares, han surgido de predecesores
La segunda hipótesis es que los virus representan los núcleos celulares específicos. La cuestión de los orígenes del virus es compleja y bastante especulativa;
ácidos que se han vuelto parcialmente independientes de la célula. Posiblemente un progreso futuro en la comprensión de la estructura del virus y
pocas mutaciones podrían convertir los ácidos nucleicos, que solo son sintetizados la reproducción puede aclarar esta cuestión.
los nombres terminan en virales; nombres de familias de virus en viridae; subfamilia sintetizar ARNm viral. Se reconoce el sistema original de Baltimore
nombres, en virinae; y nombres de género (y especie), en virus. Un ejemplo de seis grupos de virus. Desde entonces, el sistema se ha ampliado a
este esquema de nomenclatura se muestra en la figura 16.22. incluyen siete grupos. Esto se hizo en parte considerando
Aunque los informes del comité de ICTV son la autoridad oficial en taxonomía replicación del genoma, así como la síntesis de ARNm en el esquema de
viral, a muchos virólogos les resulta útil utilizar un esquema de clasificación clasificación (tabla 16.3). Como se discutió en los capítulos 17 y 18,
alternativo ideado por el premio Nobel David dicho sistema ayuda a los virólogos (y estudiantes de microbiología) a simplificar
Baltimore. El sistema de Baltimore complementa el sistema de ICTV la amplia gama de ciclos de vida virales en un número relativamente pequeño de
pero se centra en el genoma del virus y el proceso utilizado para tipos básicos.
Tabla 16.2 Algunos grupos de virus comunes y sus características
Taxón ICTV genoma Número Presencia de

(Baltimore Nucleico cápside de Tamaño de Anfitrión
Grupo de sistema)a Tamaño (kbp o kb) Ácido Trenzado Simetríab Capsómeros Envoltura Cápside (nm)c a distancia
Picornaviridae (IV) 7–8 ARN Único I 32 22–30 A

Togaviridae (IV) 10–12 Único I 32 40–70(e) A
Retroviridae (VI) 7–12 Único ¿I? 100(e) A
Orthomyxoviridae (V) 10–15 Único H 9(h), 80–120(e) A
Paramixoviridae (V) 15 Único H 18(h), 125–250(e) A
Coronaviridae (IV) 27–31 Único H 14–16(h), 80–160(e) A
Rabdoviridae (V) 11–15 Único H 18(h), 70–80 A
130–240
(en forma de bala)
Bromoviridae (IV) 8–9 Único yo,b 26–35; PAGS
18–26 30–85
Tobamovirus (IV) 7 Único H 18 300 PAGS
Leviviridae [Q] (IV) 3–4 Único I 32 26–27 B

Reoviridae (III) 19–32 ARN Doble I 92 70–80 A,P
Cystoviridae (III) 13 Doble I 100(e) B
Parvoviridae (II) 4–6 ADN Único I 12 20–25 A
Geminiviridae (II) 3–6 Único I 18 30 PAGS
(partículas emparejadas)
Microviridae (II) 4–6 Único I 25–35 B

Inoviridae (II) 7–9 Único H 6 900–1,900 B
Poliomaviridae (I) 5 ADN Doble I 72 40 A
Papillomaviridae (I) 7–8 Doble I 72 55 A
Adenoviridae (I) 28–45 Doble I 252 60–90 A
Iridoviridae (I) 140–383 Doble I 130–180 A
Herpesviridae (I) 125–240 Doble I 162 100, 180–200(e) A
Poxviridae (I) 130–375 Doble C 200–260 A
250–290(s)
Baculoviridae (I) 80–180 Doble H 40 300(e) A
Hepadnaviridae (VII) 3 Doble C 42 28 (núcleo), A
Caulimoviridae (I) 8 Doble yo,b 42(e) 50; 30 60–900 PAGS
Corticoviridae (I) 9 Doble I 60 B

Myoviridae (I) 39–169 Doble Bi 80 110, 110e B, Arco
Lipothrixviridae (I) dieciséis Doble H 38 410 Arco
a
Comité Internacional ICTV sobre Taxonomía de Virus. Los Sistemas de Clarificación de ICTV y Baltimore se analizan en la sección 16.7.
B
Tipos de simetría: I, icosaédrica; H, helicoidal; C, complejo; Bi, binal; B, baciliforme.
C
Diámetro de la cápside helicoidal (h); diámetro del virión envuelto (e).
D
Gama de huéspedes: A, animal; P, planta; B, bacteria; Arco, arqueón.
mi
El primer número es el diámetro de la cabeza; el segundo número, la longitud de la cola.
Resumen 425
Orden: Mononegavirales
(mono = simple; neg = negativo) Cuadro 16.3 Sistema de clasificación de virus de Baltimore
Un grupo de virus relacionados Grupo Descripción

que tiene ARN de cadena negativa
genomas I Genoma de ADN de doble cadena
Replicación del genoma: dsDNA ÿ dsDNA
Contiene cuatro Síntesis de mRNA: dsDNA ÿ mRNA
familias, incluyendo: II Genoma de ADN monocatenario
Replicación del genoma: ssDNA ÿ dsDNA ÿ ssDNA
Síntesis de mRNA: ssDNA ÿ dsDNA ÿ mRNA
Familia: Paramixoviridae
(paramixo = griego para, por
tercero
Replicación del genoma de ARN
el lado de, y myxo, moco) de doble cadena : dsRNA ÿ ssRNA ÿ dsRNA
Síntesis de mRNA: dsRNA ÿ mRNA
Contiene dos IV Réplica del genoma de ARN
subfamilias, incluyendo:
de cadena positiva : ARN ÿ ARN ÿ ARN
Síntesis de ARNm: ARN ARNm
Subfamilia: Paramyxovirinae
V Replicación del genoma de ARN
de cadena negativa : ARN ÿ ARN ÿ ARN
Síntesis de ARNm: ARN ÿ ARNm
Contiene seis géneros, VI Replicación del genoma de ARN
incluso:
monocatenario : ssRNA ÿ dsDNA ÿ ssRNA
Síntesis de mRNA: ssRNA ÿ dsDNA ÿ mRNA
VII Replicación del genoma de ADN bicatenario
con huecos : dsDNA con huecos ÿ dsDNA ÿ RNA ÿ
ADN ÿ dsDNA gapped
Síntesis de ARNm: dsDNA con huecos ÿ dsDNA ÿ mRNA
Género: Rubulavirus Género: Morbillivirus

Como es el caso con la taxonomía de las formas de vida celular, la
(rúbula, de rubula (morbilli del latín
infans, un nombre antiguo morbillus, forma diminuta taxonomía de los virus está cambiando rápidamente a medida que más y más virus
para las paperas) de morbus = enfermedad) Se secuencian los genomas. Han sido útiles para establecer
relaciones evolutivas entre los virus, y han llevado a la creación de nuevas familias y
géneros de virus.
1. Enumere algunas características utilizadas para clasificar los virus. ¿Cuáles parecen ser las
Especie tipo: Virus de las paperas ( MuV ) Especie tipo: virus del sarampión (MeV) ¿lo más importante?
2. ¿Cuáles son las terminaciones de los nombres de las familias, subfamilias y

Figura 16.22 La denominación de los virus. Debido a la dificultad géneros o especies?
al establecer relaciones evolutivas, la mayoría de las familias de virus no han

sido colocado en un pedido. Los nombres de los virus se derivan de varios aspectos
de su biología e historia, incluidas las características de su estructura,
enfermedades que causan y los lugares donde se identificaron por primera vez o
Reconocido.
Resumen
16.1 Desarrollo temprano de la virología 16.3 La estructura de los virus
un. Los europeos se protegieron por primera vez de una enfermedad viral cuando Edward Jenner un. Todos los viriones tienen una nucleocápside compuesta por un ácido nucleico, por lo general
desarrolló una vacuna contra la viruela en 1798. ADN o ARN, contenido dentro de una cápside proteica formada por uno o más tipos de
B. La invención de Chamberland de un filtro de porcelana que podría eliminar las bacterias de subunidades proteicas denominadas protómeros (figura 16.1).
Las muestras de virus permitieron a los microbiólogos demostrar que los virus eran diferentes B. Hay cuatro tipos de morfología viral: icosaédrico desnudo, helicoidal desnudo,
de bacterias con envoltura icosaédrica y helicoidal, y compleja.
C. A fines de la década de 1930, Stanley, Bawden y Pirie cristalizaron el mosaico del tabaco. C. Las cápsides helicoidales se asemejan a largos tubos huecos de proteínas y pueden ser rígidas o
virus y demostró que estaba compuesto únicamente de proteína y ácido nucleico. muy flexible. El ácido nucleico está enrollado en espiral en el interior del cilindro (figura 16.3b).
16.2 Propiedades generales de los virus

D. Las cápsidas icosaédricas generalmente se construyen a partir de dos tipos de capsómeros:
un. Un virión está compuesto de ADN o ARN encerrado en una capa de proteína (y
pentámeros (pentones) en los vértices y hexámeros (hexones) en los bordes y
a veces también otras sustancias). No puede reproducirse independientemente de las células
caras del icosaedro (figura 16.6).
vivas.
mi. Los virus complejos (p. ej., poxvirus y fagos grandes) tienen una morfología complicada que B. Los sitios de infección viral animal pueden caracterizarse por efectos citopáticos como pústulas
no se caracteriza por una simetría icosaédrica y helicoidal. Los fagos grandes a menudo y placas. Los fagos producen placas en céspedes bacterianos. Los virus de las plantas pueden
tienen simetría binal: sus cabezas son icosaédricas y sus colas, helicoidales (figura 16.9). causar lesiones necróticas localizadas en los tejidos de las plantas (figuras 16.14 a 16.17).
F. Los virus pueden tener una envoltura membranosa que rodea su nucleocápside. Los lípidos de 16.6 Ensayos y purificación de virus
la envoltura generalmente provienen de la célula huésped; por el contrario, muchas proteínas
un. Los virus pueden purificarse mediante técnicas como la centrifugación diferencial y en
de la envoltura son virales y pueden proyectarse desde la superficie de la envoltura como
gradiente, la precipitación y la desnaturalización o digestión de contaminantes (figuras 16.18
puntas o peplómeros. gramo. Los ácidos nucleicos virales pueden ser de cadena simple o doble, y 16.19).
ADN o ARN. La mayoría de los virus de ADN tienen genomas de ADN de doble cadena que
B. Las partículas de virus se pueden contar directamente con el microscopio electrónico de
pueden ser círculos lineales o cerrados (tabla 16.1). H. Los virus de ARN generalmente tienen
transmisión o indirectamente mediante el ensayo de hemaglutinación (figura 16.20). C. Los
ssRNA que puede ser positivo (positivo) o negativo (negativo) en comparación con el ARNm
ensayos de infectividad se pueden utilizar para estimar el número de virus en términos de unidades
(positivo). Muchos genomas de ARN están segmentados.
formadoras de placa, dosis letal (LD50) o dosis infecciosa (ID50).
I. Aunque los virus carecen de un verdadero metabolismo, algunos contienen algunas enzimas necesarias.
16.7 Principios de la taxonomía de virus
sario para su reproducción.
un. En la actualidad, los virus se clasifican con un sistema taxonómico que hace hincapié
16.4 Reproducción de virus principalmente en el tipo y la cadena de los ácidos nucleicos virales, y en la presencia o
ausencia de una cubierta (tabla 16.2).
un. La reproducción del virus se puede dividir en cinco pasos: (1) unión al huésped; (2) entrada en
el host; (3) síntesis de ácido nucleico viral y proteínas; (4) autoensamblaje de viriones y; (5) B. Muchos virólogos utilizan el sistema de clasificación de virus de Baltimore para organizar los
liberación del host (figura 16.12). virus según su tipo de genoma y los mecanismos que utilizan para sintetizar ARNm y replicar
sus genomas (tabla 16.3).
16.5 El cultivo de virus
un. Los virus se cultivan mediante cultivos de tejidos, huevos embrionados, cultivos bacterianos
tures, y otros anfitriones vivos (figura 16.13).
Términos clave
bacteriófago 409 centrifugación en gradiente 420 virus desnudo 410 unidades formadoras de placa (PFU)
simetría binal 412 cápside helicoidal 410 ensayo de lesión necrótica 419 422 cadena positiva o cadena positiva
cápside 409 capsómeros hemaglutinación 422 hexámeros nucleocápside 409 416 protómeros 409 genoma segmentado
410 efectos citopáticos (hexones) 411 cápside icosaédrica pentámeros (pentones) 411 417 virión 409
418 centrifugación 410 dosis infecciosa (ID50) 423 peplomer o espiga 412 fago
diferencial 420 envoltura 412 virus dosis letal (LD50) 423 hebra 409 placa 418 ensayo de virólogo 407
envuelto 410 negativa o hebra negativa 416 placa 422 virología 407
virus 409
1. Se utilizan muchos esquemas de clasificación para identificar bacterias. Estos comienzan con la 2. Considere las diferentes perspectivas sobre el origen de los virus en Microbial Tid bits 16.2.
tinción de Gram, progresan hacia las características de morfología/disposición e incluyen una Discuta si cree que los virus evolucionaron antes que el primer procariota, o si han
batería de pruebas metabólicas. Cree un esquema análogo que pueda usarse para identificar coevolucionado y tal vez todavía están coevolucionando con sus anfitriones.
virus. Puede comenzar considerando el huésped o puede comenzar con los virus que se
encuentran en un entorno particular, como un filtrado marino.
Aprende más
Diamond, J. 1999. Armas, gérmenes y acero. Nueva York: WW Norton. Mayo, MA; Maniloff, J., Desselberger, U.; Bola, Los Ángeles; y Fauquet, CM, editores. 2005.
Taxonomía de virus: VIII informe del Comité Internacional sobre Taxonomía de Virus. San
pedernal, SJ; Enquist, LW; Racaniello, VR; y Skalka, AM 2004. Principios de
Diego: Elservier Academic Press.
virología, 2ª ed. Washington, DC: ASM Press.
Nelson, D. 2004. Taxonomía de fagos: Estamos de acuerdo en no estar de acuerdo. J. Bacteriol.
Foster, KR; Jenkins, MF; y Toogood, AC 1998. La epidemia de fiebre amarilla de Filadelfia de 1793.
186(21):7029–31.
Scientific American (agosto): 88–93.
Oldstone, MB 1998. Virus, plagas e historia. Nueva York: Universidad de Oxford
Hull, R. 2002. Virología vegetal de Matthews, 4ª ed. San Diego: Prensa Académica.
Prensa de la ciudad.
Knipe, DM y Howley, PM, editores en jefe. 2001. Campos de virología, 4ª ed.
Zaitlin, M. 1999. El virus del mosaico del tabaco y sus contribuciones a la virología. Noticias de ASM
Nueva York: Lippincott Williams & Wilkins.
65 (10): 675–80.

17El Virus:
Virus de bacterias
y arqueas
Una micrografía electrónica de barrido de bacteriófagos T-even que infectan a E. coli. los
los fagos son de color azul.
AVANCE
• Virus que infectan células procarióticas, tanto bacterianas como arqueales, En este capítulo nos ocupamos de los virus que infectan las células
han sido identificados. Estos virus son diversos en su morfología procarióticas. Debido a que el descubrimiento de los virus archaeal es
y estrategias reproductivas. relativamente reciente y se sabe poco sobre su biología, nuestro enfoque será
• Algunos virus procarióticos son virus virulentos. Poco después de infectar estar en los bacteriófagos, virus que infectan bacterias. Porque
su anfitrión, comienzan la reproducción. Al término de su vida de su papel crucial en la historia de la genética y la biología molecular, es
ciclo, lisan a su huésped. Este tipo de ciclo de vida se llama ciclo lítico. tentador pensar en los bacteriófagos como útiles solo para
• Algunos virus procarióticos comienzan a reproducirse al entrar en su investigación de laboratorio en estas disciplinas. Sin embargo, los bacteriófagos
anfitrión pero no matan al anfitrión por lisis. Algunos son extruidos de la son miembros significativos de los ecosistemas terrestres y acuáticos. De
célula. Aunque muchos procesos celulares se ralentizan, la célula permanece hecho, pueden ser la forma de vida más abundante en el planeta.
viable y puede liberar muchos descendientes de virus con el tiempo. y son los principales agentes de la evolución microbiana. se ha estimado
• Muchos virus procarióticos son virus templados. Los genomas de que numerosas especies de bacteriófagos infectan cada especie de bacteria.
muchos virus templados pueden integrarse en el cromosoma de la célula huésped, Escherichia coli, por ejemplo, está sujeta a infección por
donde se replican a medida que se replica el cromosoma huésped. Esta relación se más de 20 especies de fagos. Los bacteriófagos también son importantes en
denomina lisogenia y puede mantenerse
industria y medicina. Por ejemplo, muchos fagos destruyen el
durante largos periodos.
bacterias del ácido láctico grampositivas que son fundamentales para la
• El análisis de los genomas virales proporciona información sobre la evolución de producción de productos lácteos fermentados como el yogur y el queso. Los
virus y sus anfitriones.
bacteriófagos también pueden transportar una variedad de factores de virulencia que
convertir sus anfitriones bacterianos en patógenos potentes. Este es el
caso de los principales patógenos humanos como Streptococcus pyogenes,
Staphylococcus aureus, Corynebacterium diphtheriae, Vibrio
derlying el campo de la virología, incluida la información cholerae, E. coli O157:H7 y Salmonella enterica. En el lado positivo, los
El capítulo 16 presenta
sobre muchos
la naturaleza de los
de los hechos
virus, y conceptos
su estructura y taxonomía, médicos rusos han usado bacteriófagos durante años.
y cómo se cultivan y estudian. Claramente los virus son para tratar enfermedades bacterianas. Las investigaciones indican que los fagos pueden ser
un grupo complejo, diverso y fascinante, cuyo estudio eficaz en el tratamiento de infecciones bacterianas, incluidas las causadas
ha hecho mucho por el avance de disciplinas como la genética y la biología por bacterias resistentes a los antibióticos.
molecular.
Quizás se pregunte cómo estos ingenuos forasteros se enteran de la existencia de virus bacterianos. Bastante por
accidente, te lo aseguro. Permítanme ilustrar con referencia a un físico teórico imaginario, que sabía poco
sobre biología en general, y nada sobre virus bacterianos en particular. . físico . . Supongamos ahora que nuestro
imaginario, el alumno de Niels Bohr, se muestra un experimento en el que una partícula de virus entra en un
célula bacteriana y 20 minutos más tarde se lisa la célula bacteriana y se liberan 100 partículas de virus. el lo hará
decir: “¿Cómo es que una partícula se ha convertido en 100 partículas del mismo tipo en 20 minutos? Esto es muy
interesante. ¡Veamos cómo sucede!. . . ¿Es esto multiplicar un truco de química orgánica que el
químicos orgánicos aún no han descubierto? Averigüémoslo.
—Max Delbrück
428 Capítulo 17 Los virus: virus de bacterias y arqueas
17.1 CLASIFICACIÓN DE VIRUS virus desarrollados. Entre los virus archaeal, sólo el virus Methanobacterium
M1 y el virus Halobacterium H se colocan con virus bacterianos (familias
BACTERIANOS Y ARQUEALES
Siphoviridae y Myoviridae, respectivamente).
Algunas de las familias de virus bacterianos y arqueales se muestran en la Esto se debe a que estos dos virus tienen estructuras de cápside y cola
figura 17.1. Estas familias han sido designadas por el Comité Internacional similares a los fagos en estas familias de bacteriófagos existentes. Los seis
para la Taxonomía de Virus (ICTV), organismo responsable de estandarizar virus archaeal asignados restantes definen las nuevas familias de virus
la clasificación de todos los virus, incluidos los que infectan Bacteria y archaeal Fuselloviridae, Guttaviridae, Lipothrixviridae y Rudiviridae. Todas las
Archaea. De las casi 2.000 especies de virus clasificadas y catalogadas por demás familias ilustradas en la figura 17.1 contienen bacteriófagos.
el ICTV, la mayoría son virus de eucariotas y bacterias. De hecho, solo se
han identificado unos 40 virus arqueales. De ellos, solo unos ocho han sido La estructura de la cápside es un rasgo fenotípico fundamental que se
asignados a taxones de virus. Sin embargo, el descubrimiento de los virus utiliza para clasificar los virus de los procariotas. Sin embargo, análisis
archaeal ha tenido un impacto significativo en nuestra comprensión de los recientes de los genomas de los bacteriófagos han revelado problemas con
virus y en el esquema de clasificación de ICTV: los virus archaeal han llevado el uso de la morfología de los fagos en la taxonomía. Esto es especialmente
al reconocimiento de cuatro nuevas familias de virus, y al menos tres familias cierto si uno está tratando de establecer relaciones evolutivas entre los fagos.
más están esperando la aprobación de ICTV (Microbial Diversity y Ecología Como se discutió en la sección 17.6, los módulos genéticos parecen haber
17.1). Esto se debe principalmente a las morfologías inusuales observadas sido intercambiados entre diferentes especies de virus e incluso entre diferentes familias.
entre los virus arqueales conocidos, incluidos los virus que tienen forma de Este tipo de transferencia lateral de genes dificulta la clasificación de los
huso y de gota. Además, muchos están en bacteriófagos, y algunos virólogos sostienen que los enfoques actuales para
clasificar los bacteriófagos deben reconsiderarse y reemplazarse por enfoques
moleculares.
Los bacteriófagos exhiben un amplio grado de diversidad en términos de
estructura del genoma. Aunque la mayoría posee genomas de ADN de doble
dsADN ssADN
cadena (dsDNA), se han identificado y estudiado fagos con genomas de ADN
de cadena simple (ssDNA), ARN de cadena simple (ssRNA) y ARN de doble
Microviridae
cadena (dsRNA). Hasta ahora, hay menos diversidad entre los genomas de
Myoviridae, cabeza isométrica los virus arqueales. Todos son virus dsDNA, ya sean circulares o lineales.
Inoviridae Debido a que la naturaleza del genoma se correlaciona con los mecanismos
pletrovirus
utilizados para la síntesis de ARNm viral y con la replicación de los genomas
Myoviridae, cabeza alargada
virales, la discusión de la reproducción de bacteriófagos que sigue se enfoca
principalmente en estos procesos.
Siphoviridae
Podoviridae
ADN
17.2 FAGOS DE ADN DE DOBLE CADENA VIRULENTOS

Lipothrixviridae Guttaviridae
Inoviridae
Después de que los bacteriófagos de ADN se han reproducido dentro de la
Inovirus célula huésped, muchos de ellos se liberan cuando la célula es destruida por
lisis. Un ciclo de vida del fago que culmina con la explosión de la célula
Plasmaviridae Corticoviridae huésped y la liberación de viriones se denomina ciclo lítico, y los virus que
se reproducen únicamente de esta forma se denominan virus virulentos.
Los eventos que tienen lugar durante el ciclo lítico se revisan en esta sección,
centrándose principalmente en los fagos T-even de E. coli, que son algunos
Fuselloviridae Tectiviridae de los virus más complejos que se conocen (consulte la figura 16.9). Los
fagos T-even son bacteriófagos de ADN de doble cadena con colas contráctiles
Rudiviridae
complejas. Se colocan en la familia Myoviridae.
dsARN ARNss
El experimento de crecimiento de un paso El
desarrollo del experimento de crecimiento de un paso en 1939 por Max

ARN
Cystoviridae Leviviridae Delbrück y Emory Ellis marca el comienzo de la investigación moderna de
bacteriófagos. En un experimento de crecimiento de un solo paso, la
100nm
reproducción de una gran población de fagos se sincroniza para que se
puedan seguir los eventos moleculares que ocurren durante la reproducción.
Figura 17.1 Familias y géneros de virus procarióticos. Un cultivo de bacterias susceptibles como E. coli se mezcla con partículas de
Los Myoviridae son la única familia con colas contráctiles. Los Plasmaviridae bacterias y los fagos se les permite un breve intervalo para adherirse a sus
son pleomórficos. Los tectiviridae tienen cápsides dobles distintivas, mientras células huésped. Luego, el cultivo se diluye en gran medida para que los
que los corticoviridae tienen cápsides complejas que contienen lípidos. viriones liberados tras la lisis de la célula huésped no infecten inmediatamente a nuevos
Fagos virulentos de ADN de doble cadena 429
17.1 Crecimiento independiente del huésped de un virus Archaeal
El hecho de que los virus no pueden replicarse sin infectar primero una célula huésped aminoácido proteína que tiene homología con el intermedio eucariótico
ha resultado en su clasificación como “entidades acelulares” o “formas”—
proteínas de filamento. Ambos filamentos intermedios y ATV purificados
no son células. Así que fue toda una sorpresa cuando un virus archaeal la proteína de la cola se ensambla en estructuras filamentosas sin necesidad de
que desarrolla colas largas solo cuando se descubre fuera de su huésped energía o cofactores. La matriz citoplasmática, los microfilamentos, los filamentos
(ver figura del recuadro). Este virus archaeal fue encontrado en aguas termales ácidas. intermedios y los microtúbulos (sección 4.3)
(pH 1,5, 85–93°C) en Italia, donde infecta al archaeon hipertermofílico Acidianus Se sospecha que el desarrollo de colas solo a altas temperaturas puede ser una
convivator. Cuando el virus infecta a su huésped, se ensamblan viriones con forma de estrategia de supervivencia del virus cuando la célula huésped
limón. Después de la lisis del huésped, comienzan dos "colas". la densidad es baja. Hasta el momento, ATV es el único virus que infecta a los procariotas
formarse en cualquiera de los extremos del virión. Estas proyecciones continúan vive en aguas termales ácidas e induce lisis en lugar de lisogenia.
ensamblando hasta que alcanzan una longitud al menos igual a la de la cápside viral. Por lo tanto, parecería que todos los demás virus han desarrollado la lisogenia como
Curiosamente, las colas solo se producen si los viriones se incuban a altas temperaturas. un medio para sobrevivir en estas duras condiciones. ¿Por qué este virus tiene
temperatura, lo que lleva a la hipótesis de que son parte de una supervivencia Se desconoce la lisis evolucionada y el desarrollo de la cola, pero sugiere que
estrategia. Por lo tanto, el virus se denomina ATV por el virus de dos colas de Acidianus . los virus pueden ser más complicados que simples "entidades".
Para saber más sobre la estructura de las colas, el ATV
Haring, M.; Vestergaard, G.; Raquel, R.; Chen, L.; Garret, RA; y
Se secuenció el genoma. ATV es un virus de ADN de doble cadena que Prangishvili, D. 2005. Desarrollo de virus independiente fuera de un huésped. Naturaleza
codifica sólo nueve proteínas estructurales. La proteína de la cola es un 800 436:1101–02.
(a) (B) (C)
(D)
Virus Acidianus de dos colas, ATV. (a) Los viriones recolectados de una fuente termal ácida tienen dos proyecciones largas, o colas, en cada extremo.
(b, c) El hipertermofílico archaeon A. convivator extruye viriones en forma de limón. (d) Estos posteriormente desarrollan estructuras similares a colas independientes del huésped y
solo cuando están a alta temperatura. Barras de escala: a–c, 0,5 m; d, 0,1 m.
células. Esta estrategia funciona porque los fagos carecen de un medio para buscar Una gráfica de los bacteriófagos liberados de las células huésped versus
fuera de las células anfitrionas y debe contactarlas durante el movimiento aleatorio el tiempo muestra varias fases distintas (figura 17.2). Durante la latencia
a través de la solución. Por lo tanto, es menos probable que los fagos entren en contacto con el huésped. período, que sigue inmediatamente a la adición del fago, no hay liberación de
células en una mezcla diluida. El número de partículas de fago infectivas liberadas viriones. Esto es seguido por el período de subida (ráfaga) cuando
por las bacterias se determina posteriormente a varios intervalos mediante un las células huésped se lisan rápidamente y liberan fagos infecciosos. Finalmente, un
ensayo de placas. Ensayos y purificación de virus (sección 16.6) se alcanza la meseta y no se liberan más virus. El total
Periodo latente Período de subida fago; lipopolisacáridos y proteínas de la pared celular, ácidos teicoicos, flagelos y
pelos pueden servir como receptores. Los fagos T-even de E. coli utilizan
Eclipse lipopolisacáridos o proteínas de la pared celular como receptores.
La variación en las propiedades del receptor es, al menos en parte, responsable de las
preferencias del fago huésped.
La adsorción de fagos T-even implica varias estructuras de cola.
La unión del fago comienza cuando una fibra de la cola entra en contacto con el
receptor apropiado (figura 17.4a). A medida que más fibras de la cola hacen contacto,
Tamaño de ráfaga
la placa base se asienta sobre la superficie (figura 17.4b). La unión probablemente se
debe a interacciones electrostáticas y está influenciada por el pH y la presencia de
iones como Mg2 y Ca2 . Una vez que la placa base se asienta firmemente sobre la
superficie celular, se producen cambios conformacionales en la placa base y la vaina,
y la vaina de la cola se reorganiza de modo que se acorta de un cilindro de 24 anillos
de largo a uno de 12 anillos (figura 17.4c, d). Es decir, la vaina se vuelve más corta y
más ancha, y el tubo central o núcleo es empujado a través de la pared bacteriana.
La placa base contiene la proteína gp5, que tiene actividad de lisozima. Esto ayuda
Tiempo (minutos)
a la penetración del tubo a través de la capa de pepti doglycan. Finalmente, el ADN
lineal se extruye desde la cabeza, a través del tubo de la cola y hacia la célula huésped
Figura 17.2 La curva de crecimiento de un paso. En la parte inicial del período
(figura 17.4e, f ).
latente, el período de eclipse, las células huésped no contienen viriones infecciosos
El tubo puede interactuar con la membrana plasmática para formar un poro a través
completos. Durante el resto del período de latencia, está presente un número creciente
del cual pasa el ADN.
de viriones infecciosos, pero no se libera ninguno. El período de latencia termina con
Los mecanismos de penetración de otros bacteriófagos pueden ser diferentes de
la lisis de la célula huésped y la liberación rápida de viriones durante el período de
los de los fagos T-even, pero la mayoría no se han estudiado con tanto detalle. Una
aumento o explosión. En esta figura, la línea azul representa el número total de
excepción es el fago PRD1 de la familia Tectiviridae, que tiene una membrana debajo
viriones completos. La línea roja es el número de virus libres (los viriones no
de su cápside édrica icosa (figura 17.1). Infecta pseudomonas y miembros de
adsorbidos más los liberados de las células huésped). Cuando E. coli se infecta con
Enterobacteriaceae. El fago PRD1 se une a un receptor de superficie mediante una
el fago T2 a 37 °C, la meseta de crecimiento se alcanza en aproximadamente 30
estructura en forma de espiga en uno de los vértices de su cápside (figura 17.5). Esto
minutos y el tamaño de la explosión es de aproximadamente 100 o más viriones por
provoca un cambio conformacional en las proteínas cap sid. El complejo de espiga-
célula. El período de eclipse es de 11 a 12 minutos y el período de latencia es de
pentón adjunto de la cápside se disocia del virión y la membrana subyacente forma
alrededor de 21 a 22 minutos.
una estructura tubular que penetra la envoltura bacteriana.
El número de fagos liberados se puede utilizar para calcular el tamaño de la ráfaga,

el número de virus producidos por célula infectada. Luego, el ADN del virus se inyecta a través del tubo de membrana en la bacteria. La
El período latente es el tiempo más corto requerido para la reproducción y penetración del tubo de la membrana es posible en parte gracias a dos enzimas, las
liberación del virus. Durante la primera parte de esta fase, las bacterias huésped no cuales rompen el mismo enlace glucosídico que es atacado por la lisozima.
contienen ningún virión infeccioso completo. Esto se puede demostrar lisándolos con
cloroformo. Este segmento inicial del período latente se denomina período de eclipse
porque los viriones detectables antes de la infección ahora están ocultos o eclipsados.
Síntesis de ácidos nucleicos y proteínas de fagos Con la excepción de
El número de fagos infecciosos completos dentro del huésped aumenta después del
final del período de eclipse y la célula huésped está preparada para la lisis. Hepadnaviridae (véanse las tablas 16.1 y 16.3), todos los virus de ADN de doble
cadena siguen una ruta similar para la síntesis de ácidos nucleicos y proteínas virales
(figura 17.6). El genoma de ADN sirve como molde para la síntesis de ARNm, y las
Entre el comienzo de un experimento de crecimiento de un paso y el estallido moléculas de ARNm que se producen se traducen para producir proteínas virales.
final, ocurre una serie de eventos cuidadosamente orquestados (figura 17.3). A

continuación se describen los principales eventos: adsorción a la célula huésped, Algún tiempo después del inicio de la síntesis del ARNm, se produce la replicación del
penetración viral de la célula huésped, síntesis de ácidos nucleicos y proteínas virales, ADN y se forman más genomas virales. Los detalles de la síntesis de ácidos nucleicos
ensamblaje de partículas de fagos y liberación de viriones. y proteínas varían de un virus a otro, pero todos están diseñados para manipular la
célula huésped en beneficio del virus.
El bacteriófago T4 servirá como nuestro ejemplo.
Dentro de los 2 minutos posteriores a la inyección de ADN de T4 en una célula
Adsorción y penetración Como todos los huésped de E. coli , la ARN polimerasa de E. coli comienza a sintetizar el ARNm de
virus, los bacteriófagos no se adhieren al azar a la superficie de una célula huésped; T4 (figura 17.3). Este ARNm se llama ARNm temprano porque se produce antes de
más bien, se sujetan a estructuras superficiales específicas llamadas receptores. La que se produzca el ADN viral. El ARNm temprano dirige la síntesis de factores
naturaleza de estos receptores varía con el proteicos y enzimas necesarios para tomar el control del huésped.
inyección de ADN cromosoma huésped
ARNm temprano hecho

Lisis de la célula huésped 0 minutos
22 minutos
ARNm
15 minutos 2 minutos
Viriones formados ADN huésped degradado
3 minutos
13 minutos
cabezas llenas ADN del fago replicado
12 minutos 5 minutos
cabeza y ARN tardío

colas hechas hecho
(a) 9 minutos
(b2)
Figura 17.3 El ciclo de vida del bacteriófago T4. (a) Un diagrama esquemático
que representa el ciclo de vida con los minutos posteriores a la inyección de ADN para cada etapa.
(b) Las micrografías electrónicas muestran el desarrollo de bacteriófagos T2 en E. coli. (b1)
Varios fagos están cerca de la bacteria, y algunos están adheridos y probablemente inyectándose
su ADN. (b2) Aproximadamente 30 minutos después de la inyección, la bacteria contiene numerosos
(b1) fagos completos.
célula y obligarla a fabricar constituyentes virales adicionales. T4 controla la expresión de sus genes al regular la actividad de la ARN
Algunas enzimas tempranas específicas de virus degradan el ADN del huésped polimerasa de E. coli . Inicialmente, los genes T4 son transcritos por la ARN
a nucleótidos, lo que detiene simultáneamente la expresión del gen del huésped. polimerasa normal del hospedador y el factor sigma.
70
y proporcionar materia prima para la síntesis de ADN viral. Dentro de 5 (ver tabla 12.3). Después de un breve intervalo, una enzima viral cataliza
minutos, comienza la síntesis de ADN viral. La replicación del ADN se inicia la transferencia del grupo químico ADP-ribosa desde NAD
desde varios orígenes de replicación y procede bidireccionalmente desde cada a una subunidad de ARN polimerasa (ver figura 11.27). Esta modificación de la
uno. La replicación del ADN viral es seguida por la enzima huésped ayuda a inhibir la transcripción del huésped.
síntesis de ARNm tardíos, que son importantes en etapas posteriores de genes y promueve la expresión génica del virus. Más tarde el segundo -
la infección. Por lo tanto, la expresión de genes virales se ordena temporalmente. subunidad recibe un grupo ADP-ribosilo. Esto apaga algunos de los
¿Cómo logra T4 esto? genes T4 tempranos, pero no antes del producto de un gen temprano,
(a) Aterrizaje (b) Adjunto (c) Contracción de la cola (d) Penetración y (e) inyección de ADN
destaponamiento
Célula
muro
Figura 17.4 Adsorción de fagos T4 e inyección de ADN.

(a-e) La adsorción y la inyección de ADN están mediadas por la cola del fago.
fibras y placa base como se muestra aquí. (f) Una micrografía electrónica de
una célula de E. coli infectada por un fago T-even. Estos fagos tienen
inyectaron su ácido nucleico a través de la pared celular y ahora tienen
cápsides vacías.
(F)
motA, estimula la transcripción de genes algo posteriores. Uno de El mecanismo de defensa bacteriano se llama restricción. También se pueden usar
estos últimos genes codifican el factor sigma gp55. Este factor sigma ayuda a la ARN otros grupos químicos para modificar el ADN del fago y protegerlo.
polimerasa a unirse a los promotores tardíos y transcribir contra las enzimas de restricción. Por ejemplo, los grupos metilo son
genes tardíos, que se activan alrededor de 10 a 12 minutos después de la infección. Sistemas agregado a los grupos amino de adenina y citosina en lambda
regulatorios globales (sección 12.5) el ADN del fago por la misma razón.
La estrecha regulación de la expresión de los genes T4 se ve favorecida por la El genoma T4 es dsDNA lineal y muestra lo que se denomina redundancia
organización del genoma T4. Como puede verse en la figura 17.7, terminal, es decir, una secuencia de bases se repite en cada
genes con funciones relacionadas, como los genes para la cabeza del fago final de la molécula. Estas dos características contribuyen a la
o la construcción de la fibra de la cola, por lo general se agrupan. Temprano formación de largas moléculas de ADN llamadas concatémeros, que
y los genes tardíos también se agrupan por separado en el genoma; ellos se componen de varias unidades genómicas unidas entre sí en el mismo
incluso se transcriben en diferentes direcciones: genes tempranos en el orientación (figura 17.10). ¿Por qué ocurre esto? Como se discutió en
sentido contrario a las agujas del reloj y genes tardíos, en el sentido de las agujas del reloj. capítulo 11, los extremos de las moléculas de ADN lineal no se pueden replicar sin
También es evidente en la figura 17.7 que una parte considerable de una maquinaria especial como la enzima telomerasa
el genoma de T4 codifica los productos necesarios para su replicación, incluidas observado en eucariotas. T4 no tiene actividad de telomerasa.
todas las subunidades proteicas de su replisoma y enzimas Por lo tanto, cada molécula de ADN de la progenie tiene 3' de cadena sencilla.
necesaria para prepararse para la síntesis de ADN (figura 17.8). Algunos de termina Estos extremos participan en la recombinación homóloga con
estas enzimas sintetizan un componente importante del ADN de T4, regiones de doble cadena de otras moléculas de ADN de la progenie, generando los
hidroximetilcitosina (HMC) (figura 17.9). HMC es un nucleótido modificado que concatémeros. Durante el ensamblaje, los concatemeros se
reemplaza a la citosina en el ADN de T4. Una vez que HMC está escindido de tal manera que el genoma empaquetado en la cápside es ligeramente
sintetizada, la replicación se produce por un mecanismo similar al más largo que el conjunto de genes T4. Por lo tanto, cada virus de la progenie tiene un
visto en bacterias. Una vez que se ha sintetizado el ADN de T4, se glucosila mediante unidad del genoma que comienza con un gen diferente. Sin embargo, si cada
la adición de glucosa a los residuos de HMC. Los residuos de HMC glucosilados el genoma de los virus de la progenie fue circularizado, la secuencia de
protegen el ADN de T4 del ataque de E. coli los genes en cada virión serían los mismos (figura 17.10). Por lo tanto
endonucleasas llamadas enzimas de restricción, que de otro modo escindirían el se dice que el genoma T4 está permutado circularmente, y la genética
ADN viral en puntos específicos y lo destruirían. Esta el mapa de T4 se dibuja como una molécula circular.
ADN
Membrana
cápside de proteína
enzimas líticas
receptor de fagos
OM
PG
PM
Unión al receptor El vértice externo se disocia. ADN

Transformación de membrana. entrega
Degradación de peptidoglicano
Figura 17.5 Unión y penetración de la célula huésped por el fago PRD1. Las capas de la pared celular de los gramnegativos se indican mediante OM
(membrana externa), PG (peptidoglicano) y PM (membrana plasmática). Ver texto para más detalles.
Asamblea de partículas de fago

El ensamblaje del fago T4 es un proceso de autoensamblaje
ARNm excepcionalmente complejo que involucra proteínas virales especiales y algunos
Proteína
Factores de la célula huésped. El ARNm tardío dirige la síntesis de tres tipos
de proteínas: (1) proteínas estructurales del fago, (2) proteínas que ayudan
con el ensamblaje del fago sin convertirse en parte de la estructura del
virión, y (3) proteínas involucradas en la lisis celular y la liberación del fago.
ADN ADN La transcripción tardía del ARNm comienza aproximadamente 9 minutos después del ADN de T4
inyección en E. coli. Todas las proteínas del fago requeridas para el

Figura 17.6 Estrategia de replicación utilizada por los virus de ensamblaje se sintetizan simultáneamente y luego se usan en cuatro
ADN de doble cadena. Debido a que el genoma de los virus de ADN líneas de subensamblaje independientes (figura 17.11). La placa base es
de doble cadena es similar al huésped, el proceso de replicación formado por 16 productos génicos, a los que se les asignan números
se asemeja mucho a la de la célula huésped y puede implicar el uso de en lugar de nombres (figura 17.12). Una vez terminada la placa base,
polimerasas del huésped, polimerasas virales o ambas. El ADN sirve como el tubo de cola se construye sobre él y la funda se ensambla alrededor del
la plantilla para la replicación del ADN y la síntesis del ARNm. Traducción tubo. La procabeza del fago (procapsid) está formada por 10 proteínas. El
del ARNm por la maquinaria de traducción de la célula huésped produce virus prohead se ensambla con la ayuda de proteínas de andamiaje que se
proteínas, que se ensamblan con el ADN viral para hacer madurar degradan o eliminan después de la construcción .
viriones. Estos finalmente se liberan del host. terminado. Una proteína portal especial se encuentra en la base de la
prohead donde se conecta con la cola. La proteína portal participa en el ataca al peptidoglicano en la pared celular del huésped. Lo es a veces
empaquetamiento del ADN, produciendo la cabeza madura (figura llamada lisozima T4. Otra proteína T4 llamada holina crea agujeros
17.11). Después de completar la cabeza, se combina espontáneamente en la membrana plasmática de E. coli , lo que permite que la lisozima T4 se mueva
con el conjunto de cola. La figura 17.12 muestra el virión maduro y del citoplasma al peptidoglicano.
las proteínas a partir de las cuales se construye.
El empaquetamiento del ADN dentro de la procabeza T4 se logra mediante un
Abrazadera
complejo de proteínas a veces llamado “paquetesoma”. El paquete consta de la
proteína portal que acabamos de mencionar. también contiene helicasa
3ÿ
un conjunto de proteínas llamado complejo terminasa, que genera 5ÿ 5ÿ
extremos bicatenarios en los extremos de los concatemeros creados cuando 5ÿ 3ÿ
el genoma viral fue replicado. Estos extremos de doble cadena son 3ÿ
primasa
necesarios para empaquetar el genoma T4. Una vez generadas, las proteínas
ARNasa H
terminales y el ADN del fago se unen a la proteína portal en el
ligasa
base de la procabeza. El paquete completo luego mueve el ADN
en el prohead, un proceso impulsado por la hidrólisis de ATP. El con catemer se
corta cuando la cabeza del fago se llena de ADN, un ADN
molécula aproximadamente un 3% más larga que la longitud de un conjunto de genes T4.
proteínas de unión a ssDNA
Liberación de partículas de fago Figura 17.8 Un modelo del replisoma T4. T4 codifica
Muchos fagos lisan sus células huésped al final de la red intracelular. la mayoría de las proteínas necesarias para replicar su genoma dsDNA,
fase. La lisis de E. coli por T4 tiene lugar después de unos 150 virus incluyendo componentes del replisoma T4. Esta figura ilustra
las partículas se han acumulado en la célula huésped (figura 17.13). Dos el replisoma viral en la horquilla de replicación. Compara este modelo
intervienen proteínas. Uno dirige la síntesis de una enzima que con el replisoma bacteriano que se muestra en la figura 11.16.
en,
ati
polimerasa
I replicono
tyo
ARN
D mih
D
H
D mi
D
Hidroximetilasa
T
yo
ADN
mi
exonucleasa
T4
rll
mi (lisis) tubo de cola r
no
_
agudeza Andamio
proteína
mi
T
Illinois
FIB
mir
yo
aI ate
pags
yo
Tsmi
_
uc mioti
norte
Ba
etla bo
metro
_
l Idsyo_ m
Figura 17.7 Un mapa del genoma T4. Se muestran algunos de sus genes y sus funciones. Los genes con funciones relacionadas tienden a ser
agrupados juntos.
NH2
1. ¿Cómo se lleva a cabo un experimento de crecimiento de un paso? Resuma lo que
CH2OH _
norte
ocurre en cada fase. Definir período latente, período de eclipse, período de subida
(ráfaga) y tamaño de ráfaga.
2. Defina los siguientes términos: adsorción, penetración, ensamblaje de fagos, fagos

O
norte
liberación, ciclo lítico, sitio receptor, ARNm temprano, ARNm tardío, hidroximetilcitosina,
H
restricción, enzimas de restricción, concatémeros y proteínas de andamiaje. Use
estos términos para escribir un párrafo que describa el ciclo de vida de T4

Figura 17.9 5-hidroximetilcitosina (HMC). En el ADN T4,
bacteriófago
el HMC a menudo tiene glucosa unida a su hidroxilo.
3. Explique por qué el genoma del fago T4 se permuta circularmente.
ABCDEA
ADN de los padres
La replicación produce descendencia

moléculas de cadena sencilla
3ÿ termina.
ABCDEA
La recombinación homóloga entre

6 a 10 moléculas descendientes
crea un concatemero.
ABCDEABCDEABCDEABCDEABCDEABCDEABCDEA
El concatémero se
ABCDEA BCDEAB CDEABC DEABCD EABCDE ABCDEA escinde como
El ADN es
empaquetado en
cabezas de fago
C C C C C C
B D B D B D B D B D B D circularizado
genoma
A mi A mi A mi A mi A mi A mi
Figura 17.10 El genoma permutado circularmente y con redundancia terminal de T4. La formación de concatémeros durante la replicación de
el genoma T4 es un paso importante en la reproducción del fago. Durante el ensamblaje de los viriones, la cabeza del fago se llena con ADN escindido de
el concatémero. Debido a que en cada cabeza se empaqueta un poco más de un conjunto de genes T4, cada virión contiene un fragmento de ADN diferente.
(nótese que los extremos de los fragmentos son diferentes). Sin embargo, si cada genoma fuera circularizado, la secuencia de genes sería la misma.
proteínas de la cabeza
Proteínas Jefe
Prohead
de placa base
23, 24
hoc, soc
PI I, II, III
alt.
ADN Bigotes/cuello wac,
Prohead
Plato base 20, 13, 14
ADN
Cabeza madura Cola

Tubo
con ADN 3, 15, Fibras de la
18, 19 cola 34, 35, 36, 37
tubo y funda Placa base 7,

8, 9, 10, 11, 12, 6, 25,
bigotes y
53, 5, 27, 29, 26, 28,
cuello
48, 54
Figura 17.12 El virión T4 maduro. T4 se compone de numerosas

Proteínas
proteínas, la mayoría de las cuales se designan con números en lugar de
de fibra de cola
nombres. Se indican las proteínas que comprenden cada componente del
fago. Esta imagen fue reconstruida a partir de micrografías electrónicas. El
Collar
fago se muestra a una resolución de 3 nm.
Figura 17.11 El ensamblaje del bacteriófago T4. Tenga en cuenta las

líneas de subensamblaje para la placa base, el tubo de cola y la vaina, las
fibras de la cola y la cabeza.
17.3 FAGOS DE ADN DE CADENA ÚNICA

Aunque muchos virus bacterianos son virus de ADN de doble cadena, se han
identificado varios fagos de ADN de cadena sencilla (ssDNA) y se ha estudiado Figura 17.13 Liberación de bacteriófagos T4 por lisis de la célula huésped.
su replicación. Dos fagos ssDNA de E. coli , X174, un fago icosaédrico que La célula huésped se ha lisado (parte superior derecha de la célula) y los
pertenece a Microviridae, y fd phage, un fago filamentoso que pertenece a viriones se han liberado al entorno.
Inoviridae, son el foco de esta sección. Los viriones de la progenie también se pueden ver en el citoplasma.
Además, las cápsidas vacías de los fagos infectantes recubren el exterior de
El ciclo de vida de X174 comienza con su unión a la pared celular de su la célula (X36 500).
huésped. El genoma de ssDNA circular se inyecta en la célula, mientras que la
cápside proteica permanece fuera de la célula. El genoma de ssDNA de X174
tiene la misma secuencia de bases que el mRNA viral y, por lo tanto, se dice sis a través de un método diferente al utilizado por el fago T4. En lugar de
que es DNA de cadena positiva. Para que ocurra la transcripción o la replicación producir una enzima similar a la lisozima, como lo hace la T4, X174 produce una
del genoma, el ADN del fago debe convertirse a una forma de doble cadena enzima (enzima E) que bloquea la síntesis de peptidoglicano. La enzima E inhibe
llamada forma replicativa (RF) (figura 17.14). Esto se logra mediante la ADN la actividad de la proteína bacteriana MraY, que cataliza la transferencia de
polimerasa bacteriana. La forma replicativa dirige la síntesis de más copias de precursores de mureína a los transportadores de lípidos (ver figura 10.12). El
RF y ADN de cadena positiva, ambas mediante replicación en círculo rodante. bloqueo de la síntesis de la pared celular debilita la pared de la célula huésped,
Después del ensamblaje de los viriones, el huésped libera el fago. lo que hace que la célula se lice y libere los viriones de la progenie.
Replicación del ADN (sección 11.4)
Fagos de ARN 437
ADN
Bacteriano
ADN polimerasa
Réplica
de ADN (forma replicativa)
círculo rodante
Réplica de
círculo rodante
Transcripción
ADN
ARNm
Traducción
Nuevos viriones
Proteínas
Figura 17.14 La reproducción de X174, un fago de ADN de cadena

positiva. Ver texto para más detalles.
Aunque el fago fd también tiene un genoma de ADN de cadena positiva

circular, se comporta de manera muy diferente a X174 en muchos aspectos.
Tiene la forma de una fibra larga de unos 6 nm de diámetro por 900 a 1900
nm de longitud (figura 17.1). Su ssDNA se encuentra en el centro del filamento
y está rodeado por un tubo hecho de una proteína de cubierta organizada en
forma helicoidal. El virus infecta las células F , Hfr y Fÿ de E. coli adhiriéndose
a la
punta del pilus; el ADN ingresa al huésped a lo largo o posiblemente a través
del pilus sexual codificado por el factor F con la ayuda de una proteína de
adsorción especial. Al igual que con X174, primero se sintetiza una forma
replicativa y luego se transcribe. Luego, una proteína codificada por fago
Figura 17.15 Liberación del fago Pf1. El fago Pf1 es un bacteriófago
ayuda en la replicación del ADN del fago mediante la replicación en círculo
filamentoso que se libera de Pseudomonas aeruginosa sin lisis. En esta
rodante. A diferencia de T4 o X174, fd y otros fagos fd filamentosos no matan
ilustración, los cilindros azules son hélices hidrofóbicas que atraviesan la
a su célula huésped. En cambio, establecen una relación en la que se liberan
membrana plasmática, y los cilindros rojos son hélices anfipáticas que se
continuamente nuevos viriones mediante un proceso secretor. Las proteínas
encuentran en la superficie de la membrana antes del ensamblaje del virus.
de la cubierta del fago filamentoso se insertan primero en la membrana.
En cada protómero, las dos hélices están conectadas por un bucle peptídico
Luego, la cubierta se ensambla alrededor del ADN viral a medida que se
corto y flexible (amarillo). Se cree que la hélice azul se une con el ADN viral
secreta a través de la membrana plasmática del huésped (figura 17.15).
circular monocatenario (verde) a medida que se extruye a través de la
Aunque la célula huésped no se lisa, crece y se divide a un ritmo ligeramente
membrana. La hélice roja se adhiere simultáneamente a la cubierta viral en
reducido.
crecimiento que se proyecta desde la superficie de la membrana.
Eventualmente, la hélice azul abandona la membrana y también se convierte
en parte de la cápside.
17.4 FAGOS DE ARN
Aunque la mayoría de los bacteriófagos son virus de ADN, se han identificado forma replicativa para sintetizar miles de copias de ARN.
y estudiado numerosos fagos de ARN. Muchos de estos son virus de ARN ss. Algunas de estas cadenas positivas se utilizan para producir más ARN a fin
Los bacteriófagos MS2 y Q , de la familia Leviviridae, son virus pequeños, sin de acelerar la síntesis de ARN. Otras hebras de ARN actúan como ARNm y
cola, icosaédricos, de ARN de cadena positiva (figura 17.1). Se adhieren al dirigen la síntesis de proteínas del fago. Finalmente, las hebras de ARN se
lado del pilus F de su huésped E. coli . incorporan a las partículas de virus en maduración. Los viriones maduros son
La retracción del pilus acerca a los viriones a la membrana externa de la liberados por lisis. Se ha estudiado la liberación de viriones para Q.
célula, desde donde logran entrar. Como muchos bacteriófagos, las cápsides Produce una proteína que interfiere con la proteína bacteriana
de estos virus quedan fuera de la célula y solo entra el genoma de ARN. MurA. MurA participa en la síntesis de UDP-NAM, precursor de la síntesis de
Debido a que sus genomas son de cadena positiva, el ARN entrante puede peptidoglicanos. En el caso de X174, esta interferencia debilita la pared celular
actuar como ARN mensajero y dirigir la síntesis de proteínas de fagos. Una y la célula huésped se lisa. Síntesis de azúcares y polisacáridos: Síntesis de
de las primeras enzimas sintetizadas es una replicasa de ARN viral, una peptidoglicano (sección 10.4)
polimerasa de ARN dependiente de ARN (figura 17.16). Luego, la replicasa MS2 y Q tienen sólo tres o cuatro genes y son genéticamente los fagos
copia la hebra positiva para producir un intermedio de doble hebra (ARN), que más simples que se conocen. En MS2, una proteína está involucrada en la
se denomina forma replicativa y es análoga al ADN que se observa en la adsorción del fago a la célula huésped (y posiblemente también en la
reproducción de los fagos ssDNA. La misma replicasa luego usa este construcción o maduración del virión). Los otros tres genes codifican una
proteína de cubierta, una replicasa de ARN y una proteína necesaria para la lisis celular
ARN
1. ¿En qué se diferencia la reproducción de los fagos X174 y fd de ssDNA?
(actividad del ARNm)
entre sí y de T4? ¿En qué se parece su reproducción a la
fagos ssRNA? ¿Cómo se diferencia?
ARN replicasa
2. ¿Qué papel juega la RNA replicasa en la reproducción de los fagos ssRNA? En
fagos dsRNA?
ARN (forma replicativa)
3. ¿Qué tiene de peculiar la estructura y el ciclo de vida del fago 6?
Replicación ARN replicasa
17.5 BACTERIOFAGOS DE TEMPLADO

ARN
Traducción
(ARNm Y LISOGENIA
actividad)
Hasta ahora, en nuestra discusión sobre los bacteriófagos, nos hemos centrado
principalmente en fagos virulentos, aquellos que solo tienen una opción reproductiva:
Proteínas virales genomas de ARN
comenzar la replicación inmediatamente después de entrar
su anfitrión, seguido de la liberación del anfitrión por lisis. Sin embargo,
Muchos fagos de ADN son fagos templados que tienen dos opciones reproductivas:
pueden reproducirse líticamente como lo hacen los virulentos.
Nuevos viriones fagos o pueden permanecer dentro de la célula huésped sin destruir
eso. Muchos fagos templados logran esto integrando sus
Figura 17.16 Reproducción de bacteriófagos de ARN de cadena genoma en el cromosoma de la célula huésped.
positiva. La relación entre un fago templado y su huésped es
llamado lisogenia. La forma del virus que permanece dentro de su huésped.
se llama profago, y las bacterias infectadas se llaman lisógenos
Se han descubierto varios fagos dsRNA. El bacteriófago 6 de Pseudomonas o bacterias lisogénicas. Las bacterias lisogénicas se reproducen y en la mayoría
syringae patovar phaseolicola (anteriormente llamado Pseudomonas phaseolicola), un otras formas parecen ser perfectamente normales. Sin embargo, tienen dos
patógeno vegetal, es el caracteristicas distintivas. La primera es que no pueden ser reinfectados por el mismo
mejor estudiado. Es un bacteriófago inusual por varias razones. Una virus, es decir, tienen inmunidad a la superinfección. La segunda es que bajo
es que es un virus envuelto. Dentro de la envoltura hay una nucleocápsula sid que condiciones apropiadas lisan
contiene un genoma segmentado que consta de tres segmentos de dsRNA y una RNA y liberar partículas de fago. Esto ocurre cuando las condiciones dentro
polimerasa dependiente de RNA. El ciclo de vida de la célula hace que el profago inicie la síntesis de proteínas del fago
el virus también tiene características inusuales. Como MS2 y Q, 6 adjuntos y ensamblar nuevos viriones, un proceso llamado inducción. La inducción conduce a
al lado de un pilus. Sin embargo, 6 usa una proteína de envoltura para facilitar la la destrucción de las células infectadas y la liberación de nuevas
adsorción. La retracción del pilus hace que el fago entre en contacto con la membrana fagos, es decir, la inducción inicia el ciclo lítico. Porque y como
externa. La envoltura viral luego se fusiona con estos fenómenos ocurren se discuten en breve.
la membrana externa de la célula, un proceso mediado por otra envoltura Otro resultado importante de la lisogenia es la conversión lisogénica. Esto
proteína. La fusión de las dos membranas produce la nucleocápside ocurre cuando un fago templado induce un cambio en el
hacia el espacio periplásmico. Aquí, una proteína asociada con la nucleocápside fenotipo de su huésped. Las conversiones lisogénicas a menudo involucran alteraciones
digiere el peptidoglicano, lo que permite que la nucleocápside en las características de la superficie del huésped. Muchos otros lisogénicos
atravesar esa capa de la pared celular de su hospedador gramnegativo. Finalmente, Las conversiones dan al huésped propiedades patógenas. Un ejemplo de
la nucleocápside intacta entra en la célula huésped mediante un proceso que se el primero se observa cuando Salmonella está infectada por el fago épsilon.
asemeja a la endocitosis. Debido a que las células bacterianas no tienen las proteínas El fago cambia las actividades de varias enzimas involucradas en
y otros factores necesarios para la endocitosis, se piensa que las proteínas virales construcción del componente carbohidrato de la bacteria
median este mecanismo de entrada. Una vez dentro del huésped, la ARN polimerasa lipopolisacárido, alterando así las propiedades antigénicas de
viral actúa como transcriptasa, catalizando la síntesis . la bacteria Curiosamente, estos cambios también eliminan el receptor del fago épsilon
de mRNA viral de cada segmento de dsRNA. La enzima también actúa y la bacteria se vuelve inmune a
como una replicasa, sintetizando el ARN de cadena positiva de cada segmento. infección por otro fago épsilon. Un ejemplo de propiedades patógenas alteradas se
Estos están encerrados dentro de proteínas de la cápside recién formadas, donde observa cuando Corynebacterium diphtheriae, la causa de la difteria, se infecta con
sirven como moldes para la síntesis de la hebra negativa complementaria, regenerando fagos . el fago
el genoma de dsRNA. Una vez que se completa el sid de la nucleocápsula, una El genoma codifica la toxina diftérica, responsable de la
proteína viral no estructural llamada P12 funciona síntomas de la enfermedad. Por tanto, sólo aquellas cepas de C. diphtheriae que
en rodear la nucleocápside con un derivado de la membrana plasmática están infectadas por el fago causan la enfermedad. Enfermedades transmitidas por el
sobre. Curiosamente, la nucleocápside envuelta se encuentra aire: Difteria (sección 38.1)
dentro del citoplasma. Finalmente, se agregan proteínas virales adicionales a Claramente, la infección de una bacteria por un fago templado tiene
la envoltura y la célula huésped se lisan, liberando los viriones maduros. impacto significativo en el huésped, pero ¿por qué los virus evolucionarían de esta manera?
Bacteriófagos templados y lisogenia 439
¿Ciclo de vida alternativo? Se han reconocido dos ventajas de la lisogenia. La cascada de eventos que conducen a la lisogenia o al ciclo lítico
La primera es que la lisogenia permite que un virus permanezca viable dentro involucra una cantidad de proteínas reguladoras que funcionan como
de un huésped latente. Las bacterias a menudo se vuelven inactivas debido a represores, activadores o ambos. Dos proteínas reguladoras son de particular
la privación de nutrientes y, mientras se encuentran en este estado, no importancia: el represor lambda (producto del gen cI ) y la proteína Cro
sintetizan ácidos nucleicos ni proteínas. En tales situaciones, un profago (producto del gen cro ). El represor lambda promueve la lisogenia y la proteína
sobreviviría pero la mayoría de los bacteriófagos virulentos no se replicarían, Cro promueve el ciclo lítico. En esencia, la decisión de seguir la lisogenia o
ya que requieren una maquinaria biosintética celular activa. La segunda seguir un ciclo lítico es el resultado de una carrera entre la producción de
ventaja surge cuando hay muchos más fagos en un entorno que células estas dos proteínas. Si prevalece el represor lambda, se inhibe la producción
huésped, una situación a la que los virólogos se refieren como una alta de proteína Cro y se produce lisogenia; si prevalece la proteína Cro, se inhibe
multiplicidad de infección (MOI). En estas condiciones, la lisogenia permite la la producción del represor lambda y se produce el ciclo lítico. Esto se debe a
supervivencia de las células huésped para que el virus pueda seguir que el represor lambda impide la transcripción de genes virales, mientras que
reproduciéndose. Cro hace justo lo contrario: asegura la expresión de genes virales.
Debería quedar claro a partir de esta discusión que una vez que un fago
templado infecta a su huésped, debe "decidir" qué ciclo reproductivo seguir. El represor lambda tiene una longitud de 236 aminoácidos y se pliega en
¿Cómo hace esta elección? La forma en que los fagos moderados toman esta forma de mancuerna con dominios globulares en cada extremo (figura 17.20).
decisión se ilustra mejor con el bacteriófago lambda. Un dominio se une al ADN mientras que el otro se une a otra molécula
Lambda es un fago de ADN de doble cadena que infecta la cepa K12 de E. represora lambda para formar un dímero. El dímero es la forma más activa del
coli. Tiene una cabeza icosaédrica de 55 nm de diámetro y una cola no represor. El represor lambda se une a dos sitios operadores, OL y OR,
contráctil con una fina fibra de cola en su extremo (figura 17.17). bloqueando así la transcripción de la mayoría de los genes virales (figura
Su genoma de ADN es una molécula lineal con extremos cohesivos: tramos 17.21 y tabla 17.1). Cuando se une a OL, reprime la transcripción del promotor
monocatenarios, de 12 nucleótidos de largo, que son complementarios entre PL (promotor hacia la izquierda). Del mismo modo, cuando se une a OR
sí y pueden formar pares de bases. reprime la transcripción en la dirección hacia la derecha desde PR (promotor
Como la mayoría de los bacteriófagos, lambda se adhiere a su huésped hacia la derecha). Sin embargo, también activa la transcripción en la dirección
y luego inyecta su genoma en el citoplasma, dejando la cápside afuera. hacia la izquierda desde el promotor cI PRM (RM significa mantenimiento del
Una vez dentro de la célula, el genoma lineal se circulariza cuando los dos represor ). Recuerde que cI codifica el represor lambda.
extremos cohesivos forman pares de bases entre sí; las rupturas en las hebras Así, el represor lambda controla su propia síntesis.
están selladas por la ADNligasa de la célula huésped (figura 17.18). El Como se señaló anteriormente, si el represor lambda gana la carrera con
genoma lambda ha sido mapeado cuidadosamente y se han localizado más la proteína Cro, se establece la lisogenia y el genoma lambda se integra en el
de 40 genes (figura 17.19). La mayoría de los genes se agrupan según su cromosoma huésped. La integración es catalizada por la enzima integrasa, el
función, con grupos separados involucrados en la síntesis de la cabeza, la producto del gen int , y tiene lugar en un sitio del cromosoma huésped llamado
síntesis de la cola, la lisogenia, la replicación del ADN y la lisis celular. Esta sitio de unión (att) (figura 17.19; véase también la figura 13.40). Se encuentra
organización es importante porque una vez que el genoma se circulariza, un sitio homólogo en el genoma del fago, por lo que los sitios att del fago y de
ocurre una cascada de eventos reguladores que determinan si el fago sigue la bacteria pueden aparearse entre sí. El sitio bacteriano está ubicado entre
un ciclo lítico o establece lisogenia. La regulación de los genes apropiados se los operones galactosa (gal) y biotina (bio) y, como resultado de la integración,
ve facilitada por la agrupación y la transcripción coordinada del mismo el genoma lambda circular se convierte en un tramo lineal de ADN ubicado
promotor. A continuación, primero proporcionamos una descripción general de entre estos dos operones huésped (figura 17.22). El profago puede
la lisogenia y el ciclo lítico de lambda. A esto le sigue un examen más detallado permanecer integrado indefinidamente, siendo replicado a medida que se
del proceso de toma de decisiones. replica el genoma bacteriano.
5ÿ GGGCGGCGACCT 3ÿ 3ÿ
CCCGCCGCTGGA 5ÿ
Circularización
GGGCGGCGACCT
CCCGCCGCTGGA
círculo
abierto
Figura 17.18 ADN del fago lambda. Un diagrama del ADN del fago
lambda que muestra sus extremos cohesivos monocatenarios de 12
bases (impresos en púrpura) y la circularización que hacen posible sus
Figura 17.17 Bacteriófago Lambda. secuencias de bases complementarias.
Figura 17.19 El genoma del proteína cro proteína cII

fago lambda ( ). Los genes están represor proteínas de replicación del ADN
codificados por colores según su función.
proteína N cII
Los genes sombreados en naranja CI cro OP
codifican proteínas reguladoras que proteína c III norte
Regulador de
determinan si se seguirá el ciclo lítico o
cIII genes tardíos
lisogénico. Los genes involucrados en el Proteínas de q
recombinación Proteínas de lisis
establecimiento de la lisogenia están apuesta
OL, PL PRM O, PR PRE S

sombreados en amarillo. Los necesarios exo R
Rz
para el ciclo lítico están sombreados en marrón. Primeros
También se señalan importantes promotores promotores y operadores
PAQ
y operadores. Escisiónasa xi
Pi Promotores PRÿ NuI
integrasa En t tardíos del ciclo lítico
A
att
fago ÿ W
48.502 nucleótidos B
Nu3
proteínas
C de la cabeza
mi
FI
Z FII
tu
V
GRAMO
j T
H
IKLM
Proteínas de cola
4 5
1 1
2 4
2
3 3
norte
norte
17 pb
(a) (B)
Figura 17.20 Unión del represor lambda. (a) Un modelo de computadora del represor lambda que se une al operador lambda. El dímero represor lambda (marrón y
tostado) está unido al ADN (azul y azul claro). Los brazos del dímero envuelven los principales surcos de la doble hélice. (b) Un diagrama del complejo represor lambda-
ADN. El represor se une a un tramo de 17 pb del operador. Las 3 hélices hacen el contacto más cercano con las ranuras principales del operador (las hélices están
etiquetadas en orden, comenzando en la terminal N de la cadena).
Región reguladora de ÿ
x int cIII N cI cro cll OPQ
Genes que codifican los productos involucrados
en regla
Pi tL PL relaciones públicas PRE tR2
OL O tR1 Sitios de acción de las proteínas reguladoras
PMR
La transcripción comienza en PR y PL.
Transcripciones de ARN
x int cIII N cI cro cll OPQ

OL O tR1
PMR
La unión de la proteína N se extiende

transcripción de PR y PL.
antiterminador
norte norte
x int cIII N cI cro cllO PQ
Si el complejo cII/cIII se acumula OL O tR1 Si la proteína cro se acumula a

a niveles altos, la PMR niveles altos, prevalece el ciclo lítico.
prevalece el ciclo lisogénico. o
Establecimiento de cII/cIII activa la transcripción de PI y PRE. Comienzo de cro proteína inhibe la transcripción de
el estado lisogénico La expresión posterior de cI la vía lítica PL pero permite la transcripción de PR.
(el represor ÿ) inhibe PR y PL.
cII-cIII cII-cIII cII-cIII cro norte
CI
x int cIII N cI cro clll OP Q S x int cIII N cI cro cll OPQ RS
Pi tL PL relaciones públicas PRE tR2 PAQ PRÿ Pi tL PL relaciones públicas PRE tR2 PAQ PRÿ
OL O tR1 OL O tR1
PMR PMR
Mantenimiento de cI (el represor ÿ) inhibe Vía lítica

el estado lisogénico PR y PL pero activa PRM. tardía
represor
CI
Activa PMR cro norte
Inhibe PL
q
Inhibe relaciones públicas
x int cIII N cI cro cll OPQS x int cIII cI cro cll OPQ RS
Pi tL PL relaciones públicas PRE tR2 PAQ PRÿ Pi tL PL relaciones públicas PRE tR2 PAQ PRÿ
OL O tR1 OL O tR1
PMR
Figura 17.21 El proceso de toma de decisiones para establecer la lisogenia o la vía lítica. Las transcripciones iniciales son sintetizadas por
la ARN polimerasa del huésped. Estos codifican la proteína N y la proteína Cro. La proteína N es un antiterminador que permite que la transcripción
avance más allá de las secuencias terminadoras tL, tR1 y tR2. Esto permite la transcripción de otros genes reguladores, así como los genes xis e int.
genes Estos últimos genes codifican las enzimas excisionase e integrase, respectivamente. El lado izquierdo de la figura ilustra lo que ocurre si
se establece la lisogenia. El lado derecho de la figura muestra la vía lítica.
Tabla 17.1 Funciones de los promotores y operadores de Lambda

Promotor u
Operador Derivación de nombre Función
Promotor hacia la izquierda Promotor de la transcripción de los genes N, cIII, xis e int ; importante en el establecimiento de la lisogenia
ES
OL Operador hacia la izquierda Sitio de unión para represor lambda y proteína Cro; la unión por el represor lambda mantiene el estado lisogénico; la
unión a la proteína Cro impide el establecimiento de la lisogenia
relaciones públicas
Promotor hacia la derecha Promotor de la transcripción de los genes cro, cII, O, P y Q ; Las proteínas Cro, O, P y Q son
necesario para el ciclo lítico; La proteína CII ayuda a establecer la lisogenia
O Operador hacia la derecha Sitio de unión para represor lambda y proteína Cro; unión por represor lambda mantiene
estado lisogénico; la unión por Cro permite que ocurra la transcripción
Promotor de Lambda promotor del gen cI (gen represor lambda); reconocido por la proteína CII, un transcripcional
PRE
Establecimiento represor activador; importante en el establecimiento de la lisogenia
Pi Promotor del gen de la integrasa La transcripción de PI genera ARNm para la proteína integrasa, pero no para la escisión;
reconocido por el activador transcripcional CII; importante para establecer la lisogenia
PAQ El promotor para la transcripción de ARNm de Anti-Q de PAQ genera un ARN antisentido que se une al ARNm de Q , impidiendo su traducción; reconocido por el
activador transcripcional CII; importante para establecer la lisogenia
PMR Promotor por represor Promotor de la transcripción del gen represor lambda (cI); activado por represor lambda;
Mantenimiento importante en el mantenimiento de la lisogenia
PRÿ Promotor hacia la derecha promotor de la transcripción de genes estructurales virales; activado por proteína Q; importante en
ciclo lítico
m mÿ
A R
cromosoma ÿ
att
j norte
(a) PÁGINAS
(a)
ÿ
galón biografía de bb
(B) cromosoma bacteriano
(B)
metro
A metro
ÿ
R
biografía
j ÿ
galón
PAGS B
ÿ norte
(C) B PAGS
(C)
integrasa
Profago
ÿ ÿ ÿ
galón BNP R mm A Biografía de JPB

lisogénico
(D) cromosoma
Figura 17.22 Inserción y escisión reversibles del fago lambda. Después de la circularización, el sitio att P, Pÿ (a) se alinea con una secuencia bacteriana correspondiente B, Bÿ (b) y se
integra entre los operones gal y bio para formar el profago, (c) y (d). Si el proceso es
invertido, el cromosoma lambda circular se restaurará y luego podrá reproducirse.
442
La proteína Cro está compuesta por 66 aminoácidos y como la transcripción se termina al final de estos dos genes. Sin embargo,
represor lambda, forma un dímero que se une a los sitios del operador O una vez que se sintetiza la proteína N, funciona como un antiterminador
y OL, bloqueando la transcripción de los promotores PR y PL (figura 17.23). Si la para que la ARN polimerasa continúe la transcripción más allá de la N y
proteína Cro gana la carrera con el represor lambda, cro genes. Así, a partir de PR, los genes de replicación cII y ADN O, P,
bloquea la síntesis del represor lambda e impide la integración de y Q se transcriben (el gen Q codifica la proteína Q); de PL,
el genoma lambda en el cromosoma huésped. En el momento en que se bloquea la cIII y todos los genes a través de la escisión (xis) y la integración
síntesis del represor lambda, otra proteína reguladora (int) se transcriben los genes. La síntesis de las proteínas CII y CIII es crítica para
llamada proteína Q se ha acumulado. Q promueve la transcripción de el siguiente paso en la infección—es en este punto
un promotor llamado PR', y en presencia de proteína Q, los genes donde se elige entrar en lisogenia o en ciclo lítico.
que codifica proteínas estructurales virales, así como otras proteínas necesarias CII es una proteína activadora transcripcional que reconoce la
para el ensamblaje del virus y la lisis del huésped, se transcriben. En última instancia, el promotor PRE (promotor para el establecimiento del represor lambda ) y
El huésped se lisa y se liberan los nuevos viriones. inicia la transcripción del gen cI , que codifica el represor lambda. También reconoce
Con esta breve introducción y descripción general, ahora podemos examinar a los promotores PI y PAQ. Transcripción
el proceso de toma de decisiones más de cerca. La secuencia de hacia la izquierda desde el promotor PI sintetiza ARNm que codifica el
acontecimientos se desarrolla de la siguiente manera. Una vez que el genoma enzima integrasa, que cataliza la inserción de ADN lambda
lambda se circulariza dentro del citoplasma del huésped, el huésped inicia la transcripción. en el cromosoma de E. coli . La transcripción hacia la izquierda desde PAQ sintetiza
ARN polimerasa en los promotores PR y PL (figura 17.21). Muy un ARN antisentido que es complementario al ARNm que codifica la proteína Q.
al principio de la infección, sólo se expresan los genes N y cro , y Recuerde que la proteína Q es necesaria para
expresión de genes estructurales y de lisis virales. la actividad de la
La proteína CII está influenciada por factores ambientales. Por ejemplo,
La proteína CII es particularmente susceptible a las proteasas. Cuando E. coli es
en condiciones ricas en nutrientes, se forman muchas proteasas y CII es
más probabilidades de degradarse. El papel de la proteína CIII es proteger a CII
de la degradación. Sin embargo, su protección no es completa y en
ciertas condiciones, CII se inactiva ya sea que CIII esté presente o no.
En este punto de la infección, varios genes están siendo transcritos y sus
mensajes, así como las proteínas que codifican, están siendo transcritos.
acumularse dentro de la célula huésped. Estos incluyen la proteína Cro,
represor lambda, proteína CII, proteína CIII, integrasa, proteína N,
y proteína Q. Ahora es cuando la carrera entre el represor lambda y la proteína Cro
comienza en serio. Recuerde que tanto la proteína Cro
y el represor lambda se unen al sitio regulador OR. Si Cro se une a OR,
bloquea la síntesis del represor lambda. Si el represor lambda se une
O, promueve su propia síntesis pero bloquea la síntesis del Cro
proteína. Porque la síntesis de la proteína Cro comienza antes de la síntesis
(a) del represor lambda, inicialmente la cantidad de proteína Cro excede
la cantidad de represor lambda. Sin embargo, la proteína Cro se une O
con menos fuerza que el represor lambda. Por lo tanto, se necesita una mayor
concentración de proteína Cro en la célula para unirse a OR y bloquear la unión del
represor lambda. Si la proteína CII es abundante (es decir, no es
siendo degradado por las proteasas del huésped), entonces la cantidad de represor
1 1 lambda en la célula será suficiente para ganar la carrera por el sitio de regulación
2
2
OR . Por lo tanto, la integrasa catalizará la integración de lambda.
3 3
genoma en el cromosoma huésped. Además, el ARN antiQ
ser abundante La hibridación de esta molécula antisentido a la
El ARNm que codifica la proteína Q conduce a la destrucción de la proteína Q.
mensaje. Por lo tanto, la acción de CII, represor lambda, y
17 pb antiQ RNA reprime la síntesis de todas las proteínas virales excepto
(B) represor lambda. Si la proteína CII no es abundante (es decir, la célula está en
un ambiente rico en nutrientes y muchas proteasas están presentes
Figura 17.23 Unión a proteína Cro. (a) Un modelo que llena el espacio dentro de la célula, lo que lleva a la degradación de CII), luego la proteína Cro
del complejo Cro proteína-ADN. La proteína Cro está en amarillo. (b) Un se acumulará a un nivel suficiente para superar al represor lambda para los sitios
diagrama del complejo dímero de proteína Cro-ADN. como la lambda OL y OR . Transcripción de los genes represores lambda y otros genes que
proteína represora, la proteína Cro funciona como un dímero y se une funcionan para establecer la lisogenia
a dos surcos principales de ADN adyacentes. se bloqueará y el ciclo lítico continuará.
Ahora hemos considerado los procesos regulatorios que dictan 17.6 GENOMAS DE BACTERIOFAGOS
si se establece la lisogenia o se persigue el ciclo lítico.
Sin embargo, existen dos fenómenos adicionales relacionados con el estado lisogénico Así como el análisis genómico y la bioinformática están revolucionando
que también debemos considerar. La primera es la inmunidad a nuestra comprensión de los microbios celulares, también nos están dando
más infección. Ya hemos visto cómo se logra esto. una nueva imagen dramática de la biología y la evolución de los virus. En
por el fago épsilon de Salmonella. El fago lambda utiliza un mecanismo diferente. En presentes, las secuencias de nucleótidos completas de los genomas de dsDNA
una bacteria lisogénica lambda, el único virus Se han determinado más de 150 bacteriófagos con cola. Este conjunto
proteína sintetizada es represor lambda. Por lo tanto, si una nueva lambda de genomas incluye los de muchos bacteriófagos de laboratorio
el fago infecta la célula, el represor lambda puede unirse al regulador cepas, así como nuevos aislados ambientales. Aunque esto representa solo una
sitios del genoma viral entrante inmediatamente, y la expresión pequeña fracción de la diversidad de bacteriófagos,
de todos los genes (y superinfección) está bloqueado. El segundo fenómeno es la la comparación de los genomas disponibles ha revelado características sorprendentes
y temas claros.
inducción, que generalmente ocurre en respuesta a factores ambientales como la luz
ultravioleta o mutágenos químicos que Quizás el descubrimiento más significativo es que los genomas
dañar el ADN. Este daño altera la actividad de la proteína RecA. Como se describe Los bacteriófagos tienen un carácter muy mosaico (figura 17.24).
en el capítulo 13, RecA juega un papel importante en los procesos de recombinación La comparación de varios bacteriófagos con cola revela bloques de
y reparación del ADN. Cuando es activado por el ADN secuencias relacionadas compartidas entre diferentes pares de genomas en un
daño, RecA interactúa con el represor lambda, causando que el represor se escinda moda combinatoria. Por ejemplo, un bloque de genes puede ser
a sí mismo. A medida que más y más proteínas represoras se destruyen a sí mismas, similares en el fago A y el fago B, pero diferentes de los de
la transcripción del gen cI disminuye, fago C. Sin embargo, el fago C puede poseer un segundo bloque de
reduciendo la cantidad de represor lambda en la célula. Finalmente genes relacionados con los del fago A, pero no con los del fago B. Este
el nivel se vuelve tan bajo que el inicio de la transcripción del xis, la naturaleza del mosaico se ve en una comparación de bacteriófagos
int, y se produce cro genes. El gen xis codifica la proteína excisionasa. Se une a la lambda, N15 y HK97. Lambda y N15 comparten genes similares
integrasa, lo que hace que invierta la integración. para el ensamblaje de la cabeza y la cola, pero sus genes de lisogenia y lisis son
proceso, y el profago se libera del cromosoma huésped. Como no relacionado. Los genes de lisogenia y lisis de Lambda son más similares
a los de HK97.
Los niveles del represor lambda disminuyen, los niveles de proteína Cro aumentan.
Eventualmente, la síntesis del represor lambda se bloquea por completo. La naturaleza del mosaico tiene implicaciones importantes para muchos aspectos.
y el ciclo lítico continúa hasta completarse. Transducción: transducción de la biología de los fagos. Una es que sugiere genomas de bacteriófagos
especializada (sección 13.9) no podría haber divergido como un todo de un ancestro común;
Nuestra atención ha estado en el fago lambda, pero hay muchos más bien, cada gen o bloque de genes parece tener una historia evolutiva única. Otra
otros fagos templados. La mayoría, como lambda, existen como integrados implicación es que el intercambio genético a
profagos en el lisógeno. Sin embargo, no todos los fagos templados se integran en el Es posible que se hayan producido bloques completos de genes sustitutos entre
cromosoma huésped en sitios específicos. bacteriófago secuencias no homólogas—secuencias con poca o ninguna similitud. Este mecanismo
Mu usa un mecanismo de transposición para integrarse aleatoriamente en de recombinación no homóloga es distinto de los tipos de recombinación descritos
el genoma Luego expresa una proteína represora que inhibe en el capítulo 13.
crecimiento lítico. Además, la integración no es un requisito absoluto para la lisogenia. Se cree que la recombinación no homóloga tiene lugar de forma relativamente
El fago P1 de E. coli es similar a lambda en aleatoria a lo largo de los genomas de fagos, pero la selección genética
que se circulariza después de la infección y comienza a fabricar re presor. Sin conserva sólo aquellos genomas recombinantes que producen viables
embargo, permanece como un ADN circular independiente. descendencia de bacteriófagos. La ocurrencia de recombinación no homóloga también
molécula en el lisógeno y se replica al mismo tiempo que el permite que los bacteriófagos adquieran genes de
cromosoma huésped. Cuando E. coli se divide, el ADN de P1 se reparte sus huéspedes bacterianos y transferir genes al huésped. Donación
entre las células hijas para que todos los lisógenos contengan uno o dos de genes por bacteriófagos ha contribuido claramente a la evolución de cepas
copias del genoma del fago. bacterianas patógenas. Las toxinas similares a shiga de E. coli enterohemorrágica
O157:H7 están codificadas por un profago
1. Defina lisogenia, fago templado, lisógeno, profago, inmunidad y ausente de los genomas de las cepas de E. coli que no causan enfermedades. De
inducción. hecho, casi una cuarta parte del genoma de E. coli 0157:H7
2. ¿Qué ventajas podría obtener un fago al ser capaz de realizar lisogenia? no se comparte con la cepa comensal E. coli K12, y completamente la mitad
3. Describa la conversión lisogénica y su significado. de esto es conferido por los profagos.
4. Precisamente cómo, en términos moleculares, una célula bacteriana se vuelve lisogénica por un tem
Nuestro vistazo a la genómica de los bacteriófagos ha proporcionado
perate fago como lambda? nuevos conocimientos sobre la evolución de los virus y otras formas de vida.
5. ¿Cómo se induce a un profago a volver a estar activo? Se espera que a medida que más genomas virales sean secuenciados y analizados,
6. Describa las funciones del represor lambda, proteína Cro, proteína RecA, inte una comprensión aún más clara de su evolución y
grasa y escisionasa en lisogenia e inducción. sus contribuciones a la evolución de los organismos celulares
seguir.
7. ¿En qué se diferencian los fagos templados Mu y P1 del fago lambda?
Resumen 445
Montaje de la cabeza Montaje de cola Mantenimiento del episoma lineal
N15 nu3 umud cro

nu1 AWBCDE ZU V GT FiFii H ML KI j parb para teléfono
repA cl Q adeM lysZ
Montaje de la cabeza Montaje de cola Integración Lisogenia y lisis
Siphoviridae nu3 x cl clll R

nu1 AWBCDE FiFii ZU V GT H ML KI j lom STF tfa int apuesta exo norte cro correos RzSQ
Montaje de la cabeza Montaje de cola Integración Lisogenia y lisis
7 11 13 23 int abc xis cro R

HK97
1 2 3 4 5 6 10 12 15 H MLK yo 22 j STF tfa abc2 erf norte cl cll O dnaB QS Rz
Integración
Montaje de la cabeza Montaje de cola Antígeno Lisogenia y lisis
SfV 21 gtrV xisgtrB presa adeM R Rz1

YMLK987654321 tmp URWVQPN 29intgtrA cro cro lexa 43 q S Rz
Myoviridae
Integración Montaje de la cabeza Montaje de cola
Mu kilo lys rz1 com

ner A c B juego CDEH ¿F? GIZTJKL MI tmp NPQVWRSU ginebra mamá
0 2 4 6 8 10 12 13 dieciséis 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48
Kilopares de bases de ADN genómico
Figura 17.24 Naturaleza en mosaico de los genomas de bacteriófagos. Los módulos de genes homólogos tienen un color similar. Tenga en cuenta que el fago
HK97 (familia Siphoviridae) comparte genes de ensamblaje de la cola con otros miembros de su familia (fagos y N15), pero comparte genes de ensamblaje de la cabeza
con el fago Sfv, un miembro de Myoviridae.
Resumen
17.1 Clasificación de virus bacterianos y archaeales F. La replicación del ADN de T4 produce concatémeros, hebras largas de varios genomas
ejemplares enlazados entre sí (figura 17.10).
un. El ICTV ha reconocido numerosas familias de virus cuyos miembros infectan células procarióticas.
De estos, cuatro son nuevas familias que contienen virus arqueales. gramo. Los viriones completos se ensamblan inmediatamente después de los componentes separados.
con morfologías de cápside inusuales (figura 17.1). han sido construidos. Este es un proceso de autoensamblaje, pero requiere la participación de
proteínas de andamiaje (figura 17.11).
B. La clasificación de los bacteriófagos se dificulta por el descubrimiento de que
Se ha producido una considerable transferencia lateral de genes entre especies virales.
17.3 Fagos de ADN monocatenario
un. La replicación de los fagos ssDNA procede a través de la formación de una forma replicativa (RF)
17.2 Fagos virulentos de ADN de doble cadena
de doble cadena (figura 17.14). Los fagos ssDNA filamentosos
un. El ciclo lítico de los bacteriófagos virulentos es un ciclo de vida que termina con el huésped
se liberan continuamente sin lisis de la célula huésped (figura 17.15).
lisis celular y liberación de viriones.
B. El ciclo de vida del fago se puede estudiar con un experimento de crecimiento de un paso que es 17.4 Fagos de ARN
dividido en un período de eclipse inicial dentro del período latente, y un período de subida un. Cuando el ARN de los fagos de ARN de cadena positiva entra en una célula bacteriana, actúa como un
(figura 17.2). mensajero y dirige la síntesis de ARN replicasa, que luego produce
C. El ciclo de vida del fago T4, un virus dsDNA de E. coli, se compone de varios formas replicativas de doble cadena y, posteriormente, muchas copias de ARN
etapas. En la fase de adsorción, el fago se une a un sitio receptor específico. (figura 17.16).
en la superficie bacteriana. Esto es seguido por la penetración de la pared celular y B. El fago 6 es un fago dsRNA. Es inusual porque tiene una envoltura membranosa, un mecanismo de
inserción del ácido nucleico viral en la célula (figura 17.3). entrada en su huésped similar a una endocitosis inusual y un
D. La transcripción del ADN de T4 produce primero el ARNm temprano, que dirige la síntesis de los genoma segmentado. La 6 cápside contiene una ARN polimerasa dependiente de ARN, que
factores proteicos y enzimas necesarios para tomar el control del huésped. actúa tanto como transcriptasa como replicasa.
y fabricar ácidos nucleicos de fagos. El ARNm tardío se produce después del ADN.
replicación y dirige la síntesis de proteínas de la cápside, proteínas involucradas en 17.5 Bacteriófagos templados y lisogenia
ensamblaje de fagos, y los necesarios para la lisis celular y la liberación de fagos. un. Los fagos moderados, a diferencia de los virulentos, a menudo se reproducen en sincronía con
mi. El ADN T4 contiene hidroximetilcitosina (HMC) en lugar de citosina, y el genoma del huésped para producir un clon de células infectadas por virus. esta relacion es
a menudo se agrega glucosa al HMC para proteger el ADN del fago del ataque de lisogenia, y la célula infectada se llama lisógeno. La forma latente del fago.
enzimas de restricción del huésped (figura 17.9). El genoma dentro del lisógeno es el profago.
B. La lisogenia es reversible y se puede inducir al profago para que vuelva a activarse y lisar a F. El paso final en la formación de profagos es la inserción o integración del genoma lambda en
su huésped. C. Un fago templado puede inducir un cambio en el fenotipo de su célula el cromosoma de E. coli ; esto es catalizado por la enzima integrasa (figura 17.22).
huésped que no está directamente relacionado con la finalización de su ciclo de vida. Tal cambio
se llama conversión. gramo. Varios factores ambientales pueden reducir los niveles del represor y desencadenar la inducción.
El profago se vuelve activo y produce una proteína de escisión que hace que la integrasa
D. Dos de las primeras proteínas que aparecen después de la infección con lambda son el revierta la integración, libere el profago e inicie un ciclo lítico.
represor lambda y la proteína Cro. El represor lambda bloquea la transcripción del gen cro
17.6 Genomas de bacteriófagos
y otros genes necesarios para el ciclo lítico, mientras que la proteína Cro inhibe la
transcripción del gen represor lambda (figura 17.21). mi. Hay una carrera entre la síntesis un. Se han determinado las secuencias de nucleótidos completas de más de 150 bacteriófagos
de dsDNA con cola.
del represor lambda y la de la proteína Cro. Si el nivel de proteína Cro aumenta lo suficiente con
el tiempo, se bloquea la síntesis del represor lambda y se inicia el ciclo lítico; de lo contrario, B. Los genomas de bacteriófagos tienen un carácter de mosaico, con bloques cortos de genes
todos los genes que no sean el gen represor lambda se reprimen y la célula se convierte compartidos en diferentes combinaciones. La naturaleza de mosaico de sus genomas
en un lisógeno. sugiere que la transferencia lateral de genes y la recombinación no homóloga han
contribuido a la evolución de los fagos (figura 17.24).
Términos clave
bacteriófagos 427 tamaño inducción 438 lisogenia 438 enzima de restricción 432
de explosión 430 integrasa 439 ciclo lítico 428 período de subida o explosión 429
concatémero 432 represor lambda 439 recombinación no homóloga 444 ARN replicasa 437
Proteína cro 439 ARNm tardío 431 experimento de crecimiento de un paso proteínas de andamiaje 433
ARNm temprano período latente 429 428 profago 438 receptor 430 forma fago moderado 438
430 período de lisógeno 438 replicativa (RF) 436 restricción 432 transcriptasa 438 virus
eclipse 430 escisionasa 444 bacterias lisogénicas 438 virulentos 428
hidroximetilcitosina (HMC) 432 conversión lisogénica 438
1. ¿Puedes pensar en una forma de simplificar aún más los genomas de los ssRNAphages MS2 4. La elección entre lisogenia y lisis está influenciada por muchos factores. ¿Cómo se “percibirían”
y Q? ¿Sería posible eliminar uno de sus genes? ¿Si es así, Cuál? y se comunicarían a la maquinaria transcripcional las condiciones externas, como el hambre
2. Aún no se han descubierto fagos de ARN moderados. ¿Cómo podría esta ausencia o el hacinamiento, y cómo influirían en esta elección?
¿ser explicado? 5. La explicación más sencilla de por qué la endolisina de T4 se expresa tan tarde en la
3. ¿Cómo podría una célula bacteriana resistir las infecciones por fagos? Dar esos mecanismos infección es que su promotor es reconocido por el factor sigma alternativo gp55. Proponga
mencionados en el capítulo y especular sobre otras posibles estrategias. una explicación diferente.
Aprende más
Calendario, R., editor. Los bacteriófagos, 2ª ed. Londres: Oxford University Press. Miller, ES; Kutter, E.; Mosig, G.; Arisaka, F.; Kunisawa, T.; y Rüger, W. 2003.
Genoma del bacteriófago T4. Microbiol. mol. Biol. Rev. 67(1):86–156.
Campbell, AM 2001. Bacteriófagos. En Fields Virology, 4.ª ed., DM Knipe y PM Howley, editores
en jefe, 659–82. Filadelfia: Lippincott Williams & Wilkins. Nechaev, S. y Severinov, K. 2003. Modificaciones del huésped inducidas por bacteriófagos
ARN polimerasa. año Rev. Microbiol. 57:301–22.
Dyall-Smith, M.; Tang, S.-L.; y Bath, C. 2003. Haloarchaealvirus: How di Poranen, MM; Daugelavicÿius, R.; y Bamford, DH 2002. Principios comunes en la entrada viral.
verso son ellos? Res. Microbiol. 154:309–13. año Rev. Microbiol. 56:521–38.
Fischetti, VA 2005. Enzimas líticas de bacteriófagos: nuevos antiinfecciosos. Tendencias Prangishvili, D. y Garrett, RA 2005. Viruses of hyperthermophilic crenarchaea.
Microbiol. 13(10):491–96. Tendencias Microbiol. 13(11):535–42.
pedernal, SJ; Enquist, LW; Racaniello, VR; y Skalka, AM 2004. Principios de virología, 2ª ed. Ptashne, M. 2004. Un cambio genético: Phage lambda revisited, 3d ed. Cold Spring Harbor, Nueva
Washington, DC: ASM Press. York: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Lorenzo, JG; Hatfull, GF; y Hendrix, RW 2002. Imbroglios of viral tax onomy: Genetic exchange Rydman, PS y Bamford, DH 2002. Las enzimas de los fagos digieren el peptidoglicano para
and failings of phenetic approachs. J. Bact. 184(17):4891–4905. administrar el ADN. Noticias de ASM 68 (7) 330–5.
Snyder, JC; Stedman, K.; Arroz, G.; Wiedenheft, B.; Spuhler, J.; y Young, MJ
Mayo, MA; Maniloff, J.; Desselberger, U.; Bola, Los Ángeles; y Fauquet, CM, editores. 2005. 2003. Virus de arqueas hipertermófilas. Res. Microbiol. 154:474–82.
Taxonomía de virus: VIII informe del Comité Internacional de Taxonomía de Virus, San
Diego: Elsevier Academic Press.

18Los virus:
Virus eucarióticos y otros
Agentes infecciosos acelulares
Un modelo del componente ribonucleasa H de la transcriptasa inversa que es

complejado con un híbrido ARN-ADN (proteína en amarillo, ADN azúcar-fosfato
columna vertebral en lavanda, columna vertebral de ARN en rosa, bases en azul).
AVANCE
• Los virus eucarióticos son extremadamente diversos y exhiben una asombrosa va
Variedad de morfologías y estrategias de ciclo de vida.
• Aunque los detalles difieren, la reproducción del virus eucariótico es similar En el capítulo
algún detalle 17 presentamos
porque virus bacterianos
son muy importantes y arqueales
para los campos de en
a la de los bacteriófagos en tener la misma serie de fases: biología molecular y genética, así como a la virología. En esto
adsorción, penetración, replicación de ácidos nucleicos virales y síntesis de proteínas capítulo nos centramos en los virus que utilizan organismos eucarióticos como
virales, ensamblaje de cápsides y liberación viral. Hospedadores. Aunque se discuten los virus de plantas e insectos, colocamos
• Los virus pueden dañar sus células anfitrionas de diversas formas, desde especial énfasis en los virus de vertebrados porque son muy
inhibición directa de la síntesis de ADN, ARN y proteínas hasta la alteración de las
bien estudiados y son los agentes causantes de tantos importantes
membranas plasmáticas y la formación de cuerpos de inclusión.
enfermedades humanas El capítulo se cierra con un breve resumen de lo que
• Algunas infecciones de virus de vertebrados tienen un inicio rápido y relativamente
Se sabe acerca de agentes infecciosos que son aún más simples en su
corta duración. Otros establecen infecciones crónicas a largo plazo o son
construcción que los virus: los viroides, virusoides y priones.
inactivo por un tiempo y luego vuelve a activarse. Las infecciones lentas por virus pueden
tardar años en desarrollarse.
• El cáncer puede ser causado por varios factores, incluidos los virus.
Los virus pueden introducir oncogenes en una célula, transportar elementos reguladores
de la transcripción que estimulan un protooncogén celular o, de otro modo,
maneras de transformar las células en células tumorales. 18.1 TAXONOMÍA DE VIRUS EUCARIÓTICOS
• Los virus de las plantas son responsables de muchas enfermedades importantes, pero tienen De los casi 6.000 virus conocidos, la mayoría infecta organismos eucarióticos.
no ha sido tan intensamente estudiado debido a desafíos técnicos. La mayoría son
Han sido clasificados por el Comité Internacional de Taxonomía de Virus
virus ARN. Los insectos son los agentes de transmisión más importantes,
(ICTV) en numerosas familias,
y algunos virus de plantas se multiplican en tejidos de insectos antes de ser inoculados
basado principalmente en la estructura del genoma, la estrategia de
en otra planta.
replicación, la morfología y la relación genética. Algunas de las familias
• Numerosos virus infectan a los insectos. Muchas de estas infecciones van acompañadas de
representativas de virus de vertebrados se muestran en la figura 18.1. Algunos
la formación de cuerpos de inclusión característicos. A
número de virus de insectos se muestran prometedores como control biológico
los géneros representativos y sus descripciones se ilustran en las figuras
Agentes para plagas de insectos. 18.2 y 18.3. Como se ilustra en estas figuras, eucariotas
• También existen agentes infecciosos más simples que los virus. Los viroides son cortos
Los virus pueden estar desnudos (sin envoltura) o envueltos. Ellos
hebras de ARN infeccioso responsable de varias enfermedades de las plantas. también exhiben una gran diversidad en sus genomas, observándose todos
Los virusoides son ARN infecciosos que requieren un virus auxiliar para entrar en una los tipos. Su ácido nucleico puede ser monocatenario o doble.
célula diana. trenzado, circular o lineal. Algunos virus eucarióticos tienen genomas
• Los priones son partículas proteicas asociadas con ciertas enfermedades neurológicas segmentados que consisten en más de un ácido nucleico distinto.
degenerativas en humanos y ganado. molécula.
El virus. Observe este virus: piense cuán pequeño es su arsenal y, sin embargo, cuán fuerte es su llamada; Se llevó mi celular, ahora
toma tu celular, y cuando se vaya tomará nuestros genes también. Genes que son llaves maestras para el crecimiento Eso
encenderlo, apagarlo o ambos; Si vuelve a mí o a ti, será dueño de las llaves maestras para hacer un número
en nuestros vasos; dar un golpe de estado.
—Michael Newman
448 Capítulo 18 Los virus: virus eucarióticos y otros agentes infecciosos acelulares
dsADN ssADN
Iridoviridae Circoviridae
Poxviridae ranavirus
Asfarviridae Chordopoxvirinae linfocistivirus
ADN
Parvoviridae
dsADN (RT) Parvovirinae
Poliomaviridae
Hepadnaviridae Herpesviridae Papillomaviridae Adenoviridae
dsARN ARNss ( ) ARNss (RT)
Rabdoviridae
Lyssavirus
Orthomyxoviridae vesiculovirus retroviridae
Reoviridae
ortoreovirus Efemerovirus
Orbivirus novirhabdovirus
coltivirus
rotavirus
Aquareovirus
Paramyxoviridae Bornaviridae Arenaviridae Bunyaviridae

Orthobunyavirus
hantavirus
nairovirus
ARN
Birnaviridae Flebovirus
Aquabirnavirus filoviridae
Avibirnavirus
ARNss ()
Nodaviridae
Caliciviridae Picornaviridae Betanodavirus Togaviridae
100nm astroviridae Flaviviridae Coronaviridae Arteriviridae
Figura 18.1 Descripción esquemática de las familias (-idae), subfamilias (-inae) y géneros (virus) de virus que infectan a los vertebrados. RT significa
transcriptasa inversa.
18.2 REPRODUCCIÓN DE VIRUS DE VERTEBRADOS células con el receptor adecuado, los virus vertebrados muestran tropismo.
Es decir, solo infectan ciertos organismos y, en algunos casos, solo infectan
La reproducción de los virus de vertebrados es muy similar en muchos ciertos tejidos dentro de ese huésped (Diversidad microbiana y ecología
aspectos a la de los fagos. La reproducción de virus de vertebrados se 18.1). Los receptores de la célula huésped tienen funciones celulares
puede dividir en varias etapas: adsorción, penetración, replicación de ácidos específicas. Por ejemplo, normalmente pueden unirse a hormonas u otras
nucleicos virales y síntesis de proteínas virales, ensamblaje de cápsides moléculas esenciales para la función y el papel de la célula en el cuerpo
virales y liberación de virus maduros. Cada una de estas etapas se describe (tabla 18.1). Muchos receptores del huésped son miembros de la superfamilia
brevemente. de las inmunoglobulinas, un grupo de glicoproteínas. La mayoría de los
miembros de la superfamilia de las inmunoglobulinas son proteínas de
superficie que participan en la respuesta inmunitaria y en las interacciones
Adsorción de viriones Se célula-célula. Algunos ejemplos son el receptor CD4 del virus de la
cree que los encuentros entre el virus y la superficie de la célula huésped inmunodeficiencia humana (VIH), el receptor del poliovirus y el receptor
ocurren a través de una colisión aleatoria del virión con un huésped potencial. ICAM (molécula de adhesión intercelular ) del rinovirus. En algunos casos,
Sin embargo, la adsorción al huésped está mediada por una interacción parece que dos o más receptores de la célula huésped están involucrados
entre los receptores en la superficie de la célula huésped y las moléculas en en la unión. El virus del herpes simple interactúa con un glicosaminoglicano
la superficie del virión. Debido a que el virión se adhiere solo a los huéspedes y un miembro de la familia de receptores del factor de necrosis tumoral/factor de crecimiento nervios
449
géneros familia
de
virus montaje Sitio
de
la
cápside Tamaño
(nm) simetría varamiento
Figura
18.2
La
taxonomía
de
los
virus
animales
de
ADN. [Anfitrión:
enfermedad] Representante cápside desnudo Envuelto
o
Varicela-
zoster
Virus
de
Epstein
Barr Virus
del
herpes
simple,
linfoma
de
Burkitt] [Humanos:
mononucleosis
infecciosa, [Humanos:
varicela] Tipo
2
[Humanos:
infecciones
genitales] Tipo
1[Humanos:
ampollas
febriles,
infecciones
respiratorias,
encefalitis]
180–
200
(en
sobre)
100–
110
(cápside)
Herpesviridae
icosaédrico
Núcleo
Avipoxvirus Ortopoxvirus
[Pollos:
viruela
aviar] [Humanos,
ganado:
viruela
vacuna] [Humanos:
viruela]
(envuelto) envuelto
Poxviridae Citoplasma
200–
260x
Complejo
250–
290
virus
de
la
granulosis poliedrosis
nuclear
[Insectos] virus 40–
110
×
200–
400
35–
40
×
200–
350
Baculoviridae
(envuelto)
Núcleo (cápside)
Helicoidal
Doble
Poliomavirus virus
del
papiloma
[Humanos,
ratones:
tumores
en
ratones] [Humanos,
conejos:
tumores
benignos
(verrugas)]
Papovaviridae
Núcleo
45–
55
aviadenovirus
mastadenovirus
[Aves] [Humanos:
infecciones
respiratorias]
adenoviridae
icosaédrico
Núcleo
60–
90 Desnudo
cerdo
africano
iridovirus
virus
de
la
fiebre [Artrópodos] Iridoviridae
Citoplasma
130–
180
parvovirus
[Humanos,
caninos:
gastroenteritis]
Parvoviridae
icosaédrico
Núcleo
Desnudo
Único
22
450
Figura
18.3
La
taxonomía
de
los
virus
animales
de
ARN. [Anfitrión:
enfermedad] géneros
y
grupos Representante familia
de
virus montaje Sitio
de
la
cápside Tamaño
(nm) simetría cápside desnudo Envuelto
o sentido Unico
filamento varamiento
citovirus rotavirus Orbivirus
[Insectos] Diarrea] [Humanos: [Humanos:
encefalitis] icosaédrico
Reoviridae
Citoplasma
Desnudo
Doble
75–
80
40–
75
(en
sobre)
pestivirus Rubivirus Flavivirus alfavirus
25–
35
(cápside)
[Cerdos:
cólera
porcina] [Humanos:
rubéola] [Humanos:
fiebre
amarilla,
dengue] [Humanos:
encefalitis]
icosaédrico
Togaviridae Citoplasma envuelto
Infeccioso
80–
160
(envuelto)
(diámetro
de
la
cápside)
[Humanos:
infección
de
las
vías
respiratorias
superiores] Virus
de
la
bronquitis
por
rinovirus
Coronaviridae
Citoplasma envuelto
Helicoidal
14–
16
Positivo
hepatovirus enterovirus
[Humanos:
hepatitis
A] [Humanos:
resfriado
común] [Humanos:
poliomielitis] Picornaviridae
icosaédrico
Citoplasma
22–
30
Desnudo
Hepatitis
E virus
norwalk
vesicular
virus exantema
de
cerdo
Calciviridae icosaédrico
Citoplasma
35–
40 Desnudo
80–
100
(en
sobre)
durante
la
replicación intermedio
de
ADN
Humano Célula
T
humana Oncornavirus
C
retroviridae
icosaédrico Único
virus
de
la
inmunodeficiencia virus
de
la
leucemia [Aves,
ratones:
sarcomas,
leucemias] Citoplasma envuelto
Orthomyxoviridae
80–
120
(en
sobre)
Virus
de
la
gripe
9
(diám.
de
la
cápside)
[Humanos,
cerdos] Citoplasma envuelto
Helicoidal
Lyssavirus
[Animales
de
sangre
caliente:
rabia] Rabdoviridae
Citoplasma envuelto
conformado) 130–
240
(viñeta
70–
80
x
Helicoidal
Negativo
California
Bunyaviridae
(envuelto)
virus
de
la
encefalitis Citoplasma envuelto
[Humanos]
90–
100
Helicoidal
virus
de
lassa
Arenaviridae
[Humanos:
fiebre
hemorrágica] Citoplasma envuelto
50–
300 Helicoidal
125–
250
(en
sobre)
morbillivirus Neumovirus paramixovirus
18
(diám.
de
la
cápside)
Paramixoviridae
[Humanos:
sarampión] [Humanos:
neumonía,
resfriado
común] [Humanos:
resfriados,
infecciones
respiratorias,
paperas]
Citoplasma envuelto
Helicoidal
Tabla 18.1 Ejemplos de proteínas de la superficie de la célula huésped que sirven como receptores de virus
Virus Receptor de superficie celular
adenovirus Proteína del receptor de adenovirus Coxsackie (CAR)

Virus de Epstein Barr Receptor para la proteína del complemento C3d en linfocitos B humanos
virus de la hepatitis A Alfa 2-macroglobulina
Virus del herpes simple, tipo 1 sulfato de heparán
Virus de inmunodeficiencia humana proteína CD4 en células T colaboradoras, macrófagos y monocitos; CXCR-4 o el receptor CCR5
virus de la gripe A Glicoproteína que contiene ácido siálico
Virus del sarampión Proteína reguladora del complemento CD46
poliovirus receptor de poliovirus (PVR); Molécula similar a la inmunoglobulina
virus de la rabia Receptor de acetilcolina en las neuronas
rinovirus Moléculas de adhesión intercelular (ICAM) en la superficie de las células epiteliales respiratorias
rotavirus 21 y 4 1 integrinas
virus vaccinia Receptor del factor de crecimiento epidérmico
CD4 y CXCR-4 (fusina) o el receptor CCR5 (CC-CKR-5). Ambas cosas Penetración y decapado
de estas moléculas huésped normalmente se unen a las quimiocinas, moléculas de
Los virus penetran la membrana plasmática y entran en una célula huésped.
señalización producidas por el sistema inmunitario. Mediadores químicos en la
poco después de la adsorción. Durante o poco después de la penetración, el ácido nucleico
resistencia inespecífica (innata): Citoquinas (sección 31.6)
viral se prepara para la expresión y replicación. Para
La distribución de los receptores de la célula huésped a los que se unen los virus
algunos virus, esto implica eliminar algunas o todas las proteínas de la cápside,
varía tanto a nivel celular como tisular. célula eucariótica
un proceso llamado decapado, mientras que otros virus permanecen encapsulados. Debido
Las membranas tienen microdominios llamados balsas lipídicas que parecen estar
a que la penetración y el decapado a menudo están acoplados,
involucrados tanto en la entrada como en el ensamblaje del virión. por ejemplo, el
considerarlos juntos. Los mecanismos de penetración y desprendimiento varían según el
los receptores de virus envueltos como el VIH y el Ébola se concentran en balsas lipídicas.
tipo de virus porque los virus difieren tanto
Cuando el virus se une a estos receptores,
grandemente en estructura y modo de reproducción. Por ejemplo, los virus envueltos
la célula huésped es engañada para que endocitose el virus. Distribución en
pueden ingresar a las células de una manera diferente a los viriones desnudos. Además,
el nivel del tejido juega un papel crucial en la determinación del tropismo de
algunos virus inyectan sólo su ácido nucleico,
el virus y el resultado de la infección. Por ejemplo, los receptores de poliovirus se mientras que otros deben asegurarse de que un ARN o ADN asociado a virus
encuentran sólo en la nasofaringe humana, el intestino y las células del asta anterior de la
polimerasa, o incluso un núcleo organizado, también ingresa a la célula huésped.
médula espinal. Por lo tanto, infecta estos tejidos,
Todo el proceso de adsorción y descubrimiento puede tomar desde
causando enfermedad gastrointestinal en sus formas más leves y parálisis minutos a varias horas.
enfermedad en sus formas más graves. Por el contrario, los receptores del virus del
Para muchos virus, los mecanismos detallados de penetración no están claros; parece
sarampión están presentes en la mayoría de los tejidos y la enfermedad se disemina
que la mayoría de los virus emplean uno de dos modos diferentes de entrada (figura 18.4).
en todo el cuerpo, lo que resulta en la característica erupción generalizada del
sarampión. La membrana plasmática y la estructura de la membrana (sección 4.2)
El sitio de la superficie del virus que interactúa con la célula huésped. 1. Fusión de la envoltura viral con la membrana de la célula huésped—La
El receptor puede consistir simplemente en una proteína estructural de la cápside o en una sobres de paramixovirus, los Retroviridae y algunos
matriz de dichas proteínas. En algunos virus, por ejemplo, el poliovirus y los rinovirus, el otros virus se fusionan directamente con la membrana plasmática de la célula huésped
sitio de unión está en la parte inferior de un (figura 18.4a). La fusión puede involucrar glicoproteínas de la envoltura que
depresión superficial o valle. El sitio puede unirse a la superficie de la célula huésped. se unen a las proteínas de la membrana plasmática. Después de la fijación de
proyecciones, pero no puede ser alcanzada por los anticuerpos del huésped. Sobre Paramixovirus, suceden varias cosas: los lípidos de la membrana se reorganizan, las
las glicoproteínas también pueden participar en la adsorción y penetración de los virus mitades adyacentes de las membranas en contacto
envueltos. Por ejemplo, el virus del herpes simple. se fusionan y se forma un poro de fusión proteináceo. Luego, la nucleocápside ingresa
tiene dos glicoproteínas de envoltura que se requieren para la unión, al citoplasma de la célula huésped, donde una polimerasa viral, asociada con la
y al menos cuatro glicoproteínas participan en la penetración. En otra nucleocápside, comienza a transcribir.
casos, el virus se adhiere a la célula huésped a través de proyecciones especiales, como el ARN del virus mientras aún está dentro de la cápside.
las fibras que se extienden desde las esquinas del adenovirus 2. Entrada por endocitosis: los virus sin envoltura y algunos virus con envoltura ingresan
icosaedros (ver figura 16.5d) o los picos de envuelto a las células por endocitosis. Pueden ser engullidos por endocitosis mediada por
virus Por ejemplo, el virus de la influenza tiene hemaglutinina receptores para formar
picos que se adhieren a las células huésped al interactuar con el ácido siálico (ácido N vesículas (figura 18.4b). Los viriones se adhieren a las membranas recubiertas de clatrina.
acetilneuramínico) en la superficie de la célula huésped. hoyos, y los hoyos luego se pellizcan para formar vesículas recubiertas llenas
Reproducción de virus de vertebrados 453
Picos
Proteína de la cápside
Nucleico
ácido
Sobre
Receptor
(a) Entrada del virus envuelto por fusión con la membrana plasmática
H+
Saburral Saburral endosoma

fosa vesícula
(b) Entrada del virus envuelto por endocitosis
cápside
Nucleico
ácido
Receptor
(c) Entrada de virus desnudo por endocitosis
Figura 18.4 Entrada de virus animal. Ejemplos de unión y entrada de virus animales en las células huésped. Los virus envueltos pueden (a) entrar después
fusión de la envoltura con la membrana plasmática, o (b) escape de la vesícula después de la endocitosis. (c) Los virus desnudos como el poliovirus, un picor navirus, pueden ser absorbidos
por endocitosis y luego insertar su ácido nucleico en el citoplasma a través del membrana vesicular. también es posible
que insertan el ácido nucleico directamente a través de la membrana plasmática dentro de un hoyo revestido. Consulte el texto para obtener una descripción de los modos de entrada.
con virus Estas vesículas se fusionan con los endosomas después de la revestimiento o puede funcionar mientras aún está unido a los componentes de la
se ha eliminado la clatrina; dependiendo del virus, escape de cápside. Los virus desnudos carecen de envoltura y, por lo tanto, no pueden emplear
la nucleocápside o su genoma pueden aparecer antes o después de la fusión de vesículas. el mecanismo de fusión de membranas (figura 18.4c). En este caso,
Las enzimas endosomales pueden ayudar en la eliminación del revestimiento del virus y parece que la acidificación de las vesículas provoca un cambio conformacional de
los pH bajos a menudo desencadenan el proceso de eliminación del revestimiento. en a las la cápside. La cápside alterada entra en contacto con la membrana de la vesícula
al menos en algunos casos, la envoltura viral se fusiona con la membrana y libera el ácido nucleico viral en el
endosómica y la nucleocápside se libera en el citoplasma (las proteínas de la citoplasma a través de un poro de la membrana (picornavirus) o rompe la membrana
cápside pueden haberse eliminado parcialmente). para liberar el virión (adenovirus). virus
por enzimas endosómicas). Una vez en el citoplasma, el ácido nucleico viral también puede entrar en la célula huésped a través de la formación de caveolas.
el ácido puede ser liberado de la cápside al completar la ONU Organelos de las vías biosintético-secretora y endocítica (sección 4.4)
Replicación y transcripción del genoma en los virus de ADN Aunque los detalles ARN polimerasa para formar ARNm, que dirigen la síntesis de varias proteínas tempranas.
En su mayoría son proteínas reguladoras y las enzimas necesarias para la replicación del
varían, la replicación y la transcripción del genoma en los virus de ADN siguen un curso
ADN del virus (figura 18.6, pasos 1 y 2). La replicación del gen con una polimerasa de ADN
similar. La primera parte de la fase sintética, gobernada por los primeros genes, se dedica
específica del virus comienza en el núcleo celular dentro de las 4 horas posteriores a la
a hacerse cargo de la célula huésped ya la síntesis de ADN y ARN virales. Algunos virus
infección (paso 3). La síntesis de ADN del huésped se ralentiza gradualmente durante una
animales inhiben el ADN, el ARN y la síntesis de proteínas de la célula huésped, aunque el
infección viral letal (no todas las infecciones por herpes provocan la muerte celular
ADN celular no suele degradarse. Por el contrario, otros virus pueden estimular la síntesis
inmediata). Enfermedades por contacto directo: Herpes genital (sección 37.3)
de macromoléculas del huésped. La replicación del ADN generalmente ocurre en el núcleo
de la célula huésped; los poxvirus son excepciones ya que sus genomas se replican en el
Los poxvirus , como el virus vaccinia, se encuentran entre los virus más grandes
citoplasma.
conocidos y son morfológicamente complejos. Su dsDNA posee más de 200 genes. Estos
virus ingresan a través de endocitosis mediada por receptores en vesículas cubiertas; el
El ARN mensajero, al menos el ARNm temprano, se transcribe a partir del ADN mediante
núcleo central escapa del endosoma y entra al citoplasma. El núcleo contiene una polimerasa
enzimas del huésped. Los poxvirus son nuevamente la excepción, ya que su ARNm
de ARN dependiente de ADN que sintetiza los primeros ARNm, uno de los cuales dirige la
temprano es sintetizado por una polimerasa viral. Algunos ejemplos de reproducción de
producción de una enzima que completa la eliminación del revestimiento del virus. La ADN
virus de ADN ayudarán a ilustrar estas generalizaciones.
polimerasa y otras enzimas necesarias para la replicación del ADN también se sintetizan
Los parvovirus infectan a los animales, incluidos los humanos; uno causa la enfermedad
temprano en el ciclo reproductivo, y la replicación del genoma comienza alrededor de 1,5
del quinto en los niños. Tienen un genoma compuesto por una molécula de ADN
horas después de la infección.
monocatenario (ss) de unas 4.800 bases. Los parvovirus se encuentran entre los más
simples de los virus de ADN. El genoma es tan pequeño que dirige la síntesis de solo tres
Aproximadamente en el momento en que comienza la replicación del ADN, se inicia la
polipéptidos, todos componentes de la cápside. Aun así, el virus debe recurrir al uso de
transcripción de los genes tardíos. Muchas proteínas tardías son proteínas estructurales
genes superpuestos para encajar tres genes en una molécula tan pequeña. Es decir, las
utilizadas en la construcción de la cápside. El ciclo reproductivo completo de los poxvirus
secuencias de bases que codifican las tres cadenas polipeptídicas se superponen entre sí
dura unas 24 horas. Enfermedades transmitidas por el aire: Viruela (sección 37.1)
y se leen utilizando diferentes marcos de lectura. Dado que el genoma no codifica ninguna
Los hepadnavirus , como el virus de la hepatitis B, son bastante diferentes de otros
enzima, el virus debe usar enzimas de la célula huésped para todos los procesos
virus de ADN con respecto a la replicación del genoma. Tienen genomas circulares de
biosintéticos. Por lo tanto, el ADN viral solo puede replicarse en el núcleo durante la fase S
dsDNA que consisten en una hebra completa, pero cortada, y una hebra complementaria
del ciclo celular, cuando la célula huésped replica su propio ADN. Debido a que el genoma
que tiene una brecha grande, es decir, está incompleta (figura 18.7). Después de infectar
viral es monocatenario, se debe engañar a la ADN polimerasa huésped para que lo copie.
la célula, el ADN vacío del virus se libera en el núcleo. Allí, las enzimas de reparación del
Mediante el uso de una secuencia autocomplementaria en los extremos del ADN viral, el
huésped llenan el espacio y sellan la muesca, produciendo un ADN circular cerrado
genoma del parvovirus se pliega sobre sí mismo para formar un cebador para la replicación
covalentemente. La transcripción de los genes virales ocurre en el núcleo utilizando la ARN
(figura 18.5). Esto es reconocido por la polimerasa de ADN huésped y se produce la
polimerasa del huésped y produce varios ARNm, incluido un ARN grande de 3,4 kilobases
replicación del ADN. Replicación del ADN (sección 11.4)
conocido como pregenoma (ARN). Los ARN se mueven hacia el citoplasma y los ARNm se
traducen para producir proteínas virales que incluyen proteínas centrales y una polimerasa
que tiene tres actividades (ADN polimerasa, transcriptasa inversa, RNasa H). Luego, el
Los herpesvirus son un gran grupo de virus de ADN icosaédricos, envueltos y de doble
pregenoma de ARN se asocia con la polimerasa y la proteína central para formar una
cadena (ds) responsables de muchas enfermedades humanas y animales importantes. El
partícula central inmadura. Posteriormente, la transcriptasa inversa realiza la transcripción
genoma es una pieza lineal de ADN de unos 160.000 pares de bases de largo y contiene al
inversa del ARN usando un cebador de proteína para formar un ADN de cadena negativa a
menos de 50 a 100 genes. Inmediatamente después de la liberación del ADN viral en el
partir del ARN del pregenoma.
núcleo del huésped, el ADN se circulariza y es transcrito por el huésped.
Después de que casi todo el ARN del pregenoma ha sido degradado por la RNasa H, el
fragmento de ARN restante sirve como cebador para la síntesis del genoma de ADNbc con
B B'
huecos, utilizando el ADN de cadena negativa como plantilla. Finalmente, se completa la
A A' nucleocápside y se liberan los viriones de la progenie. Enfermedades de contacto directo:
Hepatitis virales (sección 37.3)
Replicación del genoma, transcripción y síntesis de proteínas en los virus

A' D D' A
de ARN Los virus de ARN son mucho más diversos en sus estrategias
C C' reproductivas que los virus de ADN. La mayoría de los virus de ARN se pueden colocar en
uno de los cuatro grupos generales en función de sus modos de replicación y transcripción
Figura 18.5 La estructura secundaria del genoma de ssDNA del parvovirus. El del genoma, y su relación con el genoma de la célula huésped. La figura 18.8 resume los
genoma de ssDNA lineal de los parvovirus exhibe un apareamiento de bases ciclos reproductivos característicos de estos grupos. Debido a las características únicas de
intracatenario que da como resultado la formación de regiones de doble cadena en los ciclos de vida de los retrovirus, los consideraremos por separado. Para esto
cada extremo de la molécula. Esto proporciona un cebador para la síntesis de ADN por
parte de la ADN polimerasa huésped.
Figura 18.6 Ciclo de vida generalizado del Penetración y

virus del herpes simple tipo 1. Solo se muestra decapado
una vía posible para la liberación de los viriones. Adsorción
Citoplasma
Núcleo
1 Circularización del genoma y transcripción

de genes inmediatos-tempranos 1
Inmediato –
ÿ-proteínas
temprano
2 Las proteínas ÿ, productos de genes tempranos
inmediatos, estimulan la transcripción de genes 2
tempranos. ADN concatemérico
3 ÿ-proteínas Temprano
3 Las proteínas ÿ, productos de genes tempranos,
funcionan en la replicación del ADN, produciendo
ADN concatemérico. Los genes tardíos se Ensamblaje de
transcriben. nucleocápside
4
Las proteínas ÿ, productos de genes tardíos, ÿ-Proteínas Tarde
4 En ciernes
participan en el ensamblaje del virión.
Proteínas Urgencias ásperas
aparato
de Golgi
Vesícula de
transporte
()
exocitosis
3ÿ
()
Entre los virus de ARN, un aspecto es común a sus ciclos de vida: deben
codificar una ARN polimerasa dependiente de ARN, que se utiliza para
sintetizar ARNm ( actividad de transcriptasa) o para replicar el genoma de
5ÿ
3ÿ ARN (actividad de replicasa ). Algunos virus ssRNA utilizan la misma
5ÿ enzima para llevar a cabo ambas funciones. Sin embargo, en otros virus,
La
una forma de la polimerasa sintetiza ARNm y otra forma replica el genoma.
transcriptasa inversa
En todos los casos, el mRNA es el producto inicial; más adelante en la
infección, ocurre un cambio a la replicación del genoma (figura 18.8a-c).
Figura 18.7 El genoma vacío de los hepadnavirus. Comenzamos examinando los virus de ARN de cadena positiva.
Los genomas de los hepadnavirus son inusuales en varios aspectos. Los picornavirus , como el poliovirus, son los virus ssRNA de cadena
La hebra negativa de la molécula de dsDNA está completa, pero positiva mejor estudiados (Técnicas y aplicaciones 18.2).
cortada. La enzima transcriptasa inversa está unida a su extremo 5 '. Usan su genoma de ARN de cadena positiva como un ARNm gigante, y
La hebra positiva está abierta; es decir, está incompleto (se muestra en los ribosomas del hospedador sintetizan un péptido enorme que luego es
púrpura). Un tramo corto de ARN está unido a su extremo 5' (mostrado escindido (procesado) por las enzimas codificadas por el virus y el
en verde). Al ingresar al núcleo huésped, la muesca en la cadena negativa hospedador para formar las proteínas maduras (figura 18.8a). Una de las
se sella y el espacio en la cadena positiva se llena, lo que produce una proteínas producidas es una polimerasa de ARN dependiente de ARN.
molécula de dsDNA circular cerrada covalentemente. Cataliza la síntesis de un ARN de cadena negativa a partir del genoma de cadena p
ARN
genoma
ARN
(a) Virus de ARN de cadena sencilla positivos (p. ej., picornavirus)
ARN
ARN ARN
(b) Virus de ARN monocatenario negativo (p. ej., paramixovirus y orthomixovirus)
ARN
ARN
(c) Virus de ARN de doble cadena (p. ej., reovirus)
ARN ADN ADN
ARN
(d) Retrovirus (p. ej., VIH)
Figura 18.8 Estrategias reproductivas de virus de vertebrados con genomas de ARN.
formando un dsRNA llamado forma replicativa (RF). La forma genoma (figura 18.9). Así, la polimerasa ingresa al huésped con el
replicativa se utiliza como molde para la síntesis de moléculas de ARN genoma viral. Luego, el genoma sirve como molde para la síntesis de
de cadena positiva, algunas de las cuales sirven como moléculas de ARNm (figura 18.9, paso 1). Más tarde, el virus cambia de la síntesis de
ARNm. Otras moléculas de ARN de cadena positiva se encapsulan y ARNm a la replicación del genoma. Durante esta fase del ciclo de vida,
sirven como genomas de progenie. La formación de la forma replicativa las moléculas de ARN de cadena positiva sintetizadas a partir de los
crea un problema para el virus: el dsRNA activa ciertas defensas del segmentos del genoma de cadena negativa sirven como moldes para
huésped, incluida la producción de interferón, que inhibe la replicación viral. nuevos genomas de ARN de cadena negativa (figura 18.9, paso 4).
El virus evita este problema sintetizando solo una pequeña cantidad de Los virus dsRNA tienen desafíos adicionales. La naturaleza de
moléculas de ARN de cadena negativa, lo que limita el número de doble cadena de sus genomas impide la traducción de la cadena positiva
formas replicativas de doble cadena presentes en la célula huésped. dentro del dúplex de ARN. Además, si el genoma de dsRNA se libera en
Los virus de ARN de cadena negativa deben adoptar un enfoque el huésped, podría desencadenar defensas del huésped que podrían
diferente para la transcripción y la replicación del genoma (figura 18.8b). abortar el proceso de infección. Por lo tanto, estos virus no solo
Debido a que su genoma no puede funcionar como un ARNm, estos introducen en la célula una polimerasa de ARN dependiente de ARN;
virus deben llevar al menos una ARN polimerasa dependiente de ARN a también mantienen sus genomas encerrados en una partícula subviral
la célula huésped durante la entrada. Por ejemplo, los ortomixovirus, (figura 18.8c). Es dentro de la partícula subviral donde se produce la
como el virus de la influenza A, tienen genomas segmentados (es decir, síntesis de ARNm. Las moléculas de ARNm se liberan de la partícula y
el genoma consta de múltiples piezas o segmentos), y las subunidades el huésped las traduce en varias proteínas virales. Algunos de estos se
de proteína que forman la polimerasa, así como otras proteínas, recubren el ARN.
utilizan en el ensamblaje de partículas adicionales que contienen cadenas positivas.
pH
5-6
1 La actividad endonucleasa de la proteína PB1 Pozo vesícula

endosoma
escinde la tapa y aproximadamente 10 nucleótidos recubierta nucleocápside de ARN
revestido
del extremo 5´ del ARNm del huésped (captura de
la tapa). El fragmento se utiliza para cebar la
síntesis de ARNm viral mediante la actividad de la
ARN polimerasa dependiente de ARN de la proteína Citoplasma
PB1.
3
4 +ssRNA –ssRNA
2 El ARNm viral se traduce. Los primeros productos
incluyen más proteínas NP y PB1.
notario público PB1
3 La actividad de ARN polimerasa de la proteína
PB1 sintetiza ARNss a partir de moléculas de 1
C ()
ARNss genómicos. 2
ARNm del huésped
4 La actividad de ARN polimerasa de la proteína 5ÿ c 3ÿ C

PB1 sintetiza nuevas copias del genoma usando C
ARNm viral
ssRNA creado en el paso 3 como molde. Algunos
de estos nuevos segmentos del genoma sirven como Núcleo
moldes para la síntesis de más ARNm viral.
Más adelante en la infección, se convertirán en

genomas de progenie. 5
5 Las moléculas de ARNm viral transcritas de otros segmentos

del genoma codifican proteínas estructurales como la
hemaglutinina (HA) y la neuraminidasa (NA). Estos mensajes
5ÿ c
son traducidos por ribosomas asociados a ER y entregados a
3ÿ
la membrana celular.
HA NA Urgencias ásperas
6 Los segmentos del genoma viral se empaquetan como

viriones de progenie que brotan de la célula huésped.
aparato
de Golgi
Inserción de
proteínas de la envoltura
En ciernes
Figura 18.9 Ciclo de vida simplificado del virus de la influenza. Se han eliminado varios pasos por simplicidad y claridad. Después de la entrada por
endocitosis mediada por receptor, la envoltura del virus se fusiona con la membrana del endosoma, liberando las nucleocápsidas en el citoplasma (cada
segmento del genoma está asociado con las proteínas de la nucleocápsida [NP] y PB1 para formar la nucleocápsida). Las nucleocápsidas ingresan al
núcleo, donde ocurre la síntesis de ARNm y genomas virales. Crítico para la producción de ARNm y genomas virales es la enzima ARN polimerasa
dependiente de ARN. Esta enzima es una actividad de la proteína PB1. La otra es la actividad de la endonucleasa, que se utiliza para escindir los 5 extremos
del ARNm del huésped. Los pasos 1 a 6 ilustran los pasos restantes del ciclo de vida del virus.
ARN. El ARN de cadena positiva es la plantilla para la síntesis de ARN sirve como cebador necesario para la síntesis de ácidos nucleicos. La
de cadena negativa y se regenera el genoma de dsRNA. transformación de ARN en ADN tiene lugar en dos pasos. En primer
Los retrovirus como el VIH poseen genomas de ssRNA pero lugar, la transcriptasa inversa utiliza el ARN como molde para formar un
difieren de otros virus de RNA en que primero deben sintetizar DNA híbrido ARN-ADN. Luego, el componente ribonucleasa H (RNasa H) de
antes de transcribir el mRNA y replicar su genoma. la transcriptasa inversa degrada la hebra de ARN para dejar ADN.
El virus tiene una polimerasa de ADN dependiente de ARN, comúnmente Después de sintetizar el ADN, la transcriptasa inversa lo utiliza como
llamada transcriptasa inversa (RT), que copia el genoma de ARN para plantilla para producir un ADN de doble cadena llamado ADN proviral.
formar una molécula de ADN (figura de apertura del capítulo y figura El ADN proviral se integra en el genoma de la célula huésped. A partir
18.8d). Curiosamente, el ARN de transferencia es transportado por el virus y de ahí, la ARN polimerasa del huésped puede dirigir la síntesis de ARNm y
18.2 Construyendo un virus
El poliovirus se ha construido completamente desde cero a partir de la Algunos científicos creen que será posible hacer casi
secuencia de bases de su genoma de ARN. porque el ADN cualquier virus una vez que se conoce la secuencia del genoma. Esta podría
es más fácil de sintetizar que el ARN, una copia del ADN del poliovirus ser una amenaza particular si los bioterroristas lograran crear la viruela. Otros
El genoma de ARN unido al promotor de la polimerasa de ARN del fago T7 creen que no será tan fácil crear un patógeno virulento como
se produjo por primera vez utilizando máquinas sintetizadoras de ADN. los viruela. El genoma de la viruela es mucho más grande que el del poliovirus y
A continuación, se incubó el ADN sintético con la polimerasa de ARN del fago sería más difícil de sintetizar. A diferencia del caso del poliovirus, el ADN de
T7 y los nucleótidos apropiados. La polimerasa usó el la viruela no es infeccioso por sí mismo y requiere la
Plantilla de ADN para formar copias completas de ARN del poliovirus presencia de proteínas de virión tales como polimerasas. Así uno sería
genoma A continuación, los genomas de ARN se incubaron con un medio libre de células. tienen que encontrar una manera de suministrar estas enzimas, tal vez mediante el uso de ayudantes
extracto citoplasmático de células HeLa, que suministró los constituyentes virus Una amenaza potencialmente mayor es la síntesis de híbridos especiales
necesarios para la síntesis de proteínas. El ARN dirigió la síntesis de cepas que son muy infecciosas y también bastante letales. En una nota más
proteínas de poliovirus; las proteínas y el ARN luego se ensamblaron positiva, puede ser posible construir sustancialmente debilitado
espontáneamente en viriones de poliovirus infecciosos completos. Estas cepas de virus como el poliovirus para la producción de vacunas más eficaces.
partículas podrían infectar una cepa especial de ratones y causar una enfermedad quePreparación contra el bioterrorismo (sección 36.9)
se parecía a la poliomielitis humana.
nuevos genomas de ARN. Observe que durante este proceso la información genética visto a menudo en el sitio de maduración del virus (figura 18.10). El ensamblaje de
se transfiere del ARN al ADN en lugar de hacerlo del ADN. las cápsides de virus envueltos es generalmente similar al de las cápsidas desnudas.
al ARN como en el flujo de información celular. Replicación del ADN (sección 11.4) viriones, excepto poxvirus. Estos se ensamblan en el citoplasma mediante un
Otro aspecto interesante de los ciclos de vida de los virus de ARN proceso largo y complejo que comienza con el encierro.
está relacionado con la síntesis de sus proteínas. Una característica clave de la de una porción de la matriz citoplasmática a través de la construcción de un nuevo
traducción en las células eucarióticas es que sus moléculas de ARNm codifican un membrana. Luego, el ADN recién sintetizado se condensa, pasa
proteína única. Sin embargo, los virus de ARN deben generar múltiples proteínas. a través de la membrana, y se mueve al centro de la inmadura
Se han descrito varias estrategias para lograr esto. Como ya se señaló para los virus. La construcción de cuerpos nucleoideos y elípticos tiene lugar dentro
picornavirus, la síntesis de una poliproteína la membrana
a partir de un ARN de tamaño genómico se produce. La poliproteína es más tarde

escindida para dar lugar a todas las proteínas que necesita el virus para completar
Liberación de virión
su ciclo de vida. Esos virus de ARN que han segmentado
Los genomas pueden usar cada segmento para codificar una proteína diferente. Los mecanismos de liberación de viriones difieren entre desnudos y envueltos.
Algunos virus de ARN tienen una ARN polimerasa dependiente de ARN. virus Los viriones desnudos parecen ser liberados con mayor frecuencia por la célula huésped.
que es capaz de iniciar la síntesis de ARNm en sitios internos a lo largo del lisis. Por el contrario, la formación de envolturas y la liberación de virus envueltos
ARN molde. Esto genera ARNm subgenómico, que es suelen ser procesos simultáneos, y la célula huésped
ARNm que es más pequeño que el genoma de ARN. El empalme de ARN es puede continuar la liberación de viriones durante algún tiempo. Todas las envolturas virales son
utilizado por algunos virus de ARN para generar diferentes transcritos y derivados de las membranas de las células huésped mediante un proceso de varios pasos. Primero,
por lo tanto diferentes proteínas. Finalmente, la traducción en sí misma puede llevar a Las proteínas codificadas por virus se incorporan a la membrana plasmática.
síntesis de múltiples proteínas a través del cambio de marco ribosómico, Luego, la nucleocápsida se libera simultáneamente y la envoltura
lo que provoca la traducción de un marco de lectura diferente que produce un formado por brotación de membranas (figuras 18.11 y 18.12). En varios
proteína diferente con cada fotograma leído. Muchos virus de ARN utilizan familias de virus, una proteína de matriz (M) se une a la membrana plasmática y
varias de estas estrategias para producir una gama completa de proteínas virales. ayuda en la germinación. La mayoría de las envolturas surgen del plasma.
membrana. Sin embargo, en los herpesvirus, la yema y la formación de la envoltura
suelen afectar a la membrana nuclear (tabla 18.2). los
Ensamblaje de cápsides de virus el retículo endoplásmico, el aparato de Golgi y otras membranas internas también
Algunos genes tardíos dirigen la síntesis de proteínas de la cápside, y estos pueden usarse para formar envolturas.
autoensamblarse espontáneamente para formar la cápside al igual que en la Curiosamente, se ha descubierto que los filamentos de actina pueden
morfogénesis de bacteriófagos. Recientemente, el proceso de autoensamblaje ha sido ayuda en la liberación del virión. Muchos virus alteran los microfilamentos de actina.
demostrado dramáticamente (Técnicas y Aplicaciones 18.2). Parece que durante el del citoesqueleto de la célula huésped. Por ejemplo, el virus vaccinia aparece
ensamblaje del virus icosaédrico, se liberan procápsides vacías. para formar largas colas de actina y usarlas para moverse intracelularmente a más
primero formado; luego el ácido nucleico se inserta de alguna manera desconocida. a 2,8 m por minuto. Los filamentos de actina también impulsan vaccinia
El sitio de morfogénesis varía según el virus (tabla 18.2). Grande a través de la membrana plasmática. De esta manera el virión se escapa
grupos paracristalinos de viriones completos o procapsids son sin destruir la célula huésped e infecta las células adyacentes. Esto es
Infecciones citocidas y daño celular 459
Tabla 18.2 Sitios intracelulares de reproducción de virus animales
Virus Replicación de ácidos nucleicos Asamblea de la cápside Membrana utilizada en la brotación

Virus de ADN
adenovirus Núcleo Núcleo
Hepadnavirus Citoplasma Citoplasma Retículo endoplásmico

Herpesvirus Núcleo En la membrana nuclear Núcleo
virus del papiloma Núcleo Núcleo

Parvovirus Núcleo Núcleo
Poliomavirus Núcleo Núcleo

Poxvirus Citoplasma Citoplasma
Virus ARN
Coronavirus Citoplasma Citoplasma Aparato de Golgi y retículo endoplásmico
ortomixovirus Núcleo Citoplasma Membrana de plasma
Paramixovirus Citoplasma Citoplasma Membrana de plasma

picornavirus Citoplasma Citoplasma
Reovirus Citoplasma Citoplasma
retrovirus Citoplasma y núcleo En la membrana plasmática Membrana de plasma
Rabdovirus Citoplasma Citoplasma Membrana plasmática, membranas intracitoplasmáticas
Togavirus Citoplasma Citoplasma Membrana plasmática, membranas intracitoplasmáticas
4. Resuma el ciclo de vida del retrovirus. ¿Qué es el ADN proviral? ¿Cómo se sintetiza?
¿Cómo cree que se relaciona la capacidad de formar ADN proviral con la
etapa asintomática de la infección por VIH?
5. Comparar el ciclo de vida del retrovirus con el de un bacteriófago lisogénico
como lambda. ¿Qué ventaja puede tener un virus al incorporar su
genoma en el de la célula huésped?
18.3 INFECCIONES POR CITOCIDAS Y DAÑO CELULAR

Una infección que resulta en muerte celular es una infección citocida.
Los virus de vertebrados pueden dañar a sus células anfitrionas de muchas maneras; con frecuencia
esto conduce a la muerte celular. Microscópico o macroscópico degenerativo
cambios o anomalías en las células y tejidos del huésped se refieren a
Figura 18.10 Racimos paracristalinos. Una matriz cristalina de como efectos citopáticos (CPE). Siete posibles mecanismos de
daño de la célula huésped se describen brevemente aquí. Sin embargo, debería

adenovirus dentro del núcleo celular (35.000).
Cabe destacar que más de uno de estos mecanismos puede ser
involucrada en un efecto citopático.

similar al mecanismo de patogenia utilizado por la bacteria
1. Muchos virus pueden inhibir la síntesis de proteínas, ADN y ARN del huésped. Virus
Listeria monocytogenes. La matriz citoplasmática, los microfilamentos, los
citocidas (p. ej., picornavirus, herpesvirus,
filamentos intermedios y los microtúbulos (sección 4.3); Enfermedad 4.1: Moverse
y adenovirus) son particularmente activos en este sentido. los
Los mecanismos de inhibición aún no están claros.

1. Compara y contrasta cada etapa de la reproducción de virus vertebrados con 2. Los endosomas celulares pueden dañarse, lo que resulta en la liberación de
los observados para los bacteriófagos. enzimas hidrolíticas y destrucción celular.
2. Lo que probablemente juega el papel más importante en la determinación del tejido y 3. La infección por virus puede alterar drásticamente las membranas plasmáticas
¿Especificidad del huésped de los virus vertebrados? Dé algunos ejemplos específicos. mediante la inserción de proteínas específicas del virus para que las células infectadas
3. En general, los virus de ADN pueden depender mucho más de sus células huésped que sean atacadas por el sistema inmunitario. Cuando se infecta con virus como el herpesvirus
pueden los virus de ARN. ¿Por qué es así? ¿Qué estrategias utilizan los virus de ARN para y el virus del sarampión, como
completar sus ciclos de vida? muchas como 50 a 100 células pueden fusionarse en una anormal, gigante,
Membrana de plasma
neuraminidasa
Proteína matriz
hemaglutinina
Ribonucleoproteína
Figura 18.11 Liberación del virus de la influenza por gemación de la membrana plasmática. Primero, las proteínas de la cubierta viral
(hemaglutinina y neuraminidasa) se insertan en la membrana plasmática del huésped. Luego, la nucleocápside se acerca a la superficie interna de la
membrana y se une a ella. Al mismo tiempo, las proteínas virales se acumulan en el sitio y se excluyen las proteínas de la membrana del huésped. Finalmente,
la membrana plasmática brota para formar simultáneamente la envoltura viral y liberar el virión maduro.
VIH
forma madura
Partículas en ciernes
(a) (B)
Figura 18.12 Liberación del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) por gemación de la membrana plasmática. (a) Una micrografía
electrónica de transmisión de partículas de VIH que empiezan a brotar, así como algunas partículas maduras. (b) Una vista de micrografía electrónica de
barrido de partículas de VIH brotando de un linfocito.
Virus y Cáncer 461
célula multinucleada llamada sincitio. El VIH parece destruir las células T auxiliares Un pequeño grupo de virus causa un desarrollo extremadamente lento
CD4 al menos en parte a través de sus efectos sobre infecciones, a menudo llamadas enfermedades de virus lentos o infecciones lentas, en
la membrana plasmática. cuyos síntomas pueden tardar años en aparecer. El virus del sarampión ocasionalmente
4. Altas concentraciones de proteínas de varios virus (p. ej., produce una infección lenta. Un niño puede tener una normalidad
virus de las paperas y el virus de la influenza) pueden tener un efecto tóxico directo caso de sarampión, luego de 5 a 12 años después desarrollan una enfermedad degenerativa
sobre las células y los organismos. enfermedad cerebral llamada panencefalitis esclerosante subaguda (SSPE).
5. Se forman estructuras intracelulares llamadas cuerpos de inclusión . Los lentivirus como el VIH también causan enfermedades lentas.
durante muchas infecciones de virus. Estos pueden resultar de la agrupación de

subunidades o viriones dentro del núcleo o citoplasma. 1. ¿Qué es una infección citocida? ¿Qué es un efecto citopático? Resume el
(p. ej., los cuerpos de Negri en las infecciones por rabia); ellos también pueden formas en que los virus pueden dañar las células huésped durante las infecciones citocidas.
contienen componentes celulares como ribosomas (infecciones por arenavirus) o 2. Definir lo siguiente: infección aguda, infección persistente, infección crónica,
cromatina (herpesvirus). Independientemente de su composición, estos cuerpos de infección por virus latente y enfermedad por virus lento.
inclusión pueden alterar directamente la célula 3. ¿Por qué una infección puede ser crónica o latente?
estructura.
6. Las alteraciones cromosómicas resultan de infecciones por ella

pesvirus y otros.
18.5 VIRUS Y CÁNCER
7. Finalmente, la célula huésped puede no destruirse directamente sino transformarse en
una célula maligna. Esto se discute en la sección 18.5. El cáncer [cáncer del latín , cangrejo] es uno de los problemas médicos más graves.
problemas en las naciones desarrolladas. Es el foco de una inmensa
cantidad de investigación. Un tumor [del latín tumere, hincharse] es un crecimiento
o bulto de tejido resultante de neoplasia, células nuevas anormales
18.4 PERSISTENTE, LATENTE Y LENTO
crecimiento y reproducción debido a la pérdida de regulación. Células tumorales
INFECCIONES VIRUS
tienen formas aberrantes y membranas plasmáticas alteradas que pueden
Muchas infecciones virales (p. ej., influenza) son infecciones agudas, que contienen antígenos tumorales distintivos. Su proliferación no regulada y la pérdida de
es decir, tienen un inicio bastante rápido y duran un tiempo relativamente corto diferenciación dan como resultado un crecimiento invasivo que
(figura 18.13). Sin embargo, algunos virus pueden establecer infecciones persistentes forma masas celulares desorganizadas. Esta reversión a un estado más primitivo o menos
que duran muchos años. Hay varios tipos de persistentes diferenciado se denomina anaplasia.
infecciones En las infecciones virales crónicas, el virus casi siempre está Hay dos tipos principales de tumores con respecto al total
Los síntomas clínicos y detectables pueden ser leves o estar ausentes durante forma o patrón de crecimiento. Si las células tumorales permanecen en su lugar para formar
periodos largos. Algunos ejemplos son el virus de la hepatitis B y el VIH. en latente una masa compacta, el tumor es benigno. Por el contrario, las células de tumores malignos
infecciones por virus el virus deja de reproducirse y permanece inactivo o cancerosos pueden diseminarse activamente por todo el
durante un tiempo antes de volver a activarse. Durante la latencia, no cuerpo en un proceso conocido como metástasis, a menudo flotando en el
síntomas o virus son detectables, aunque los anticuerpos contra el sangre y establecer tumores secundarios. Algunos cánceres no son
el virus puede estar presente en niveles bajos. Ejemplos son el herpes simple sólidos, pero suspensiones celulares. Por ejemplo, las leucemias se componen de glóbulos
virus, virus de la varicela-zoster, citomegalovirus y virus de Epstein-Barr blancos malignos indiferenciados que circulan por todo el cuerpo. De hecho, surgen docenas
virus que causa la mononucleosis. Virus del herpes simple tipo 1 de tipos de cáncer
a menudo infecta a los niños y luego se vuelve latente dentro de los ganglios del sistema de una variedad de tipos de células y afectan a todo tipo de organismos.
nervioso; años después se puede activar para causar resfriado Como cabría esperar de la amplia diversidad de cánceres, hay
llagas El virus de la varicela-zoster causa la varicela en los niños Existen muchas causas de cáncer, de las cuales solo unas pocas están directamente
y luego, después de años de inactividad, puede producir la enfermedad de la piel relacionadas con los virus. Posiblemente hasta un 30 a 60% de los cánceres pueden
culebrilla (las infecciones iniciales en adultos resultan en varicela). Estos y estar relacionado con la dieta y el humo del cigarrillo. Muchas sustancias químicas en
otros ejemplos de infecciones persistentes se analizan con más detalle en el capítulo 37. nuestro entorno son cancerígenas y pueden causar cáncer al inducir
mutaciones genéticas o interferir con la diferenciación celular normal.
Las causas de la persistencia y la latencia son probablemente múltiples, Sin embargo, es importante tener en cuenta que muchos cánceres no están relacionados
aunque los mecanismos precisos aún no están claros. El virus a los factores de riesgo ambientales.
el genoma puede integrarse en el genoma del huésped convirtiéndose así en un provirus. La carcinogénesis es un proceso complejo de varios pasos. Puede ser iniciado por
Los virus pueden volverse menos antigénicos y por lo tanto menos una sustancia química, por lo general un mutágeno, pero el cáncer no parece desarrollarse
susceptibles de ser atacados por el sistema inmunológico. A menudo, las infecciones por hasta que al menos un evento desencadenante más (posiblemente
virus están latentes en un sitio que no está sujeto a un ataque inmunitario, como el exposición a otro carcinógeno químico o a un virus).
sistema nervioso central. Los virus también pueden mutar a menos virulentos. Los genes que causan cáncer, u oncogenes, están directamente involucrados. Algunos
y formas de reproducción más lenta. A veces, una mutación por deleción Los oncogenes son aportados a una célula por los virus, como se discute
produce una partícula de interferencia defectuosa (DI) que no puede reproducirse pero luego. Otros surgen de genes dentro de la célula llamados proto-onco genes. Los
retrasa la reproducción normal del virus, lo que reduce la capacidad del huésped protooncogenes son genes celulares necesarios para el normal
daño y el establecimiento de una infección crónica. Mutaciones y sus crecimiento. Si están mutados o sobreexpresados, pueden volverse
base química (sección 13.1) oncogenes Es decir, sus productos contribuyen a la malignidad
Adsorción al
huésped
Penetración
Rápida
multiplicación
Activación del
protooncogén del huésped
(humano) o inserción de oncogén
(otros animales)
El virus Liberación lenta

está presente del virus sin muerte
pero no daña celular.
al huésped
Muerte celular
y liberación Activación
de virus.
Infección Infección Infección Transformación en

aguda latente crónica célula maligna
Infecciones persistentes
Figura 18.13 Tipos de infecciones y sus efectos en las células huésped.
transformación de la célula. Muchos oncogenes están involucrados en la regulación del La vigilancia inmunitaria y la destrucción de las células cancerosas también pueden ser
crecimiento celular y la transducción de señales; por ejemplo, algún código para factores menos eficaces en las personas mayores.
de crecimiento que regulan la reproducción celular. Puede ser que varios cánceres surjan Aunque se sabe que los virus causan muchos cánceres en animales, es muy difícil
a través de diferentes combinaciones de causas. No es sorprendente que las posibilidades demostrar que este es el caso de los cánceres humanos porque se deben usar métodos
de desarrollar cáncer aumenten con la edad porque una persona mayor habrá tenido más indirectos de estudio y los postulados de Koch no se pueden aplicar completamente. Uno
tiempo para acumular las mutaciones necesarias para la transformación oncogénica. trata de encontrar partículas y componentes de virus dentro de las células tumorales,
utilizando técnicas como
Virus de plantas 463
microscopía electrónica, pruebas inmunológicas, ensayos basados en ADN y ser catastrófico. Las células pueden acumular rápidamente las mutaciones adicionales
ensayos enzimáticos. También se hacen intentos para aislar los virus cancerosos necesarias para la transformación oncogénica. El núcleo y la célula
sospechados mediante el cultivo en cultivo de tejidos u otros animales. división (sección 4.8)
A veces, una buena correlación entre la presencia de un virus Los retrovirus ejercen sus poderes oncogénicos de una manera diferente. Algunos
y se puede detectar el cáncer. llevan oncogenes capturados de las células huésped muchos, muchos
En la actualidad, los virus han sido implicados en la génesis de al menos hace generaciones. Por lo tanto, transforman la célula huésped trayendo el
menos ocho cánceres humanos. Con la excepción de unos pocos retrovirus, estos virus oncogén en la célula. Por ejemplo, el virus del sarcoma de Rous lleva una
tienen genomas de dsDNA. gen src oncogénico mutado que codifica una tirosina hiperactiva
quinasa Esta enzima se localiza en la membrana plasmática y
1. El virus de Epstein-Barr (EBV) es uno de los virus del cáncer humano mejor
fosforila el aminoácido tirosina en varias proteínas celulares. Estas proteínas dirigidas a
estudiados. El EBV es un herpesvirus y la causa de
Src son esenciales para mantener la
dos cánceres. El linfoma de Burkitt es un tumor maligno del
la capacidad de la célula para responder a las señales normales contra el crecimiento de otros
mandíbula y abdomen encontrados en niños del centro y oeste
células y la matriz extracelular. Cuando se fosforilan, se activan y anulan estas señales,
África. El EBV también causa carcinoma nasofaríngeo. Ambas cosas
indicando en efecto un crecimiento no regulado. Los retrovirus humanos HTLV-1 y
Se han encontrado partículas y genomas de EBV dentro del tumor
HTLV-2
células; Los pacientes con linfoma de Burkitt también tienen niveles elevados de
transformar un grupo de células del sistema inmunitario llamadas células T mediante la
anticuerpos contra el EBV en la sangre. Curiosamente, hay algunas pruebas
producción de una proteína reguladora que a veces activa genes implicados en la
que una persona también debe haber tenido malaria para desarrollar el síndrome de Burkitt
división celular y estimula la reproducción del virus.
linfoma Los factores ambientales deben jugar un papel, porque
El segundo mecanismo de transformación utilizado por los retrovirus implica la
EBV no causa mucho cáncer en los Estados Unidos a pesar de
integración de un genoma viral en el cromosoma huésped.
su prevalencia. Esto puede deberse a una baja incidencia de malaria.
tal que los elementos reguladores virales fuertes están cerca de una célula
en los Estados Unidos.
protooncogén. Esto da como resultado un nivel tan alto de expresión de
2. El virus de la hepatitis B parece estar asociado con una forma de
la proteína celular que el gen es ahora un oncogén. Por ejemplo, algunos retrovirus de
cáncer de hígado (carcinoma hepatocelular) y puede integrarse
pollo inducen linfomas cuando son
en el genoma humano.
integrado junto al protooncogén celular c-myc , que codifica
3. El virus de la hepatitis C provoca cirrosis hepática, que puede provocar
para una proteína que está involucrada en la inducción de ADN o
al cáncer de hígado.
síntesis de ARN.
4. El herpesvirus humano 8 y el VIH están asociados con el desarrollo del sarcoma de
Kaposi.
1. ¿Cuáles son las principales características del cáncer?
5. Algunas cepas del virus del papiloma humano se han relacionado con
2. ¿Cómo pueden los virus causar cáncer? ¿Existen otras formas en las que se podría
cáncer de cuello uterino.
desarrollar una malignidad?
6. Al menos dos retrovirus, el linfotrópico de células T humanas
3. Defina los siguientes términos: tumor, neoplasia, anaplasia, metástasis y
virus I (HTLV-1) y HTLV-2, están asociados con la leucemia de células T adultas y
oncogen
la leucemia de células pilosas, respectivamente. Otro
los cánceres asociados a retrovirus bien pueden descubrirse en el
futuro.
Los virus que se sabe que causan cáncer se llaman oncovirus. Todos 18.6 VIRUS DE LAS PLANTAS
Los oncovirus dsDNA humanos conocidos desencadenan la transformación cancerosa Aunque desde hace tiempo se reconoce que los virus pueden infectar
de las células mediante un mecanismo similar. Codifican proteínas plantas y causan una variedad de enfermedades, los virus de las plantas generalmente
que se unen y por lo tanto inactivan proteínas celulares conocidas como no han sido tan bien estudiados como los bacteriófagos y animales
supresores de tumores. Las proteínas supresoras de tumores regulan las células virus Esto se debe en parte a que a menudo son difíciles de cultivar.
ciclar o monitorear y/o reparar daños en el ADN. Dos supresores de tumores que se y purificar. Algunos virus, como el virus del mosaico del tabaco (TMV),
sabe que son objetivos de las proteínas de oncovirus humanos son se puede cultivar en protoplastos aislados de células vegetales al igual que los fagos
llamado Rb y p53. Rb tiene múltiples funciones en el núcleo, todas y algunos virus animales se cultivan en suspensiones celulares. Sin embargo, muchos
de los cuales son críticos para el ciclo celular normal. Cuando las moléculas de Rb no pueden crecer en cultivos de protoplastos y deben ser inoculados en plantas enteras
se vuelven inactivas por una proteína oncoviral, las células se reproducen sin control. o en preparaciones de tejidos. Esto hace
Por lo tanto, se dice que son hiperproliferativos. La proteína p53 a menudo se conoce estudiar el ciclo de vida es difícil. Muchos virus de plantas requieren insecto
como "el guardián de la vectores de transmisión; algunos de estos se pueden cultivar en monocapas de cultivos
genoma.” Esto se debe a que p53 normalmente inicia la detención del ciclo celular o la celulares derivados de pulgones, chicharritas u otros
muerte celular programada en respuesta al daño del ADN. Sin embargo, cuando p53 insectos
es inactivado por una proteína oncoviral, Los elementos esenciales de la morfología de la cápside se describen en el capítulo
no puede hacerlo y el daño genético persiste. Desde el punto de 16 y se aplican a virus de plantas porque no difieren significativamente en su
Desde el punto de vista del virus, la hiperproliferación y la falta de muerte celular construcción de sus parientes de fagos y virus animales
programada son beneficiosas. Sin embargo, para la célula, puede (figura 18.14). Muchos tienen cápsides helicoidales rígidas o flexibles.
dsADN (RT) ssADN

Caulimoviridae
Caulimovirus Geminiviridae
Similar a CsVMV
similar al PVCV
similar a SbCMV Mastrevirus nanovirus
ADN
Curtovirus Begomovirus
Badnavirus
similar a RTBV
dsARN ARNss (–) ARNss (+)
Bromoviridae
Sequiviridae
Tombusviridae Cucumovirus
Bunyaviridae Luteoviridae bromovirus
Tospovirus marafivirus
Reoviridae sobemovirus
Fiyivirus timovirus Ilarvirus
fitoreovirus (Umbravirus)
Rabdoviridae
Orizavirus Tenuivirus
citorhabdovirus
nucleorhabdovirus ofiovirus
Alfamovirus
Comoviridae
ideovirus
ARNss (RT)
Partitiviridae tobamovirus
alfacriptovirus pseudoviridae
ARN betacriptovirus Tobravirus
Hordeivirus
Ourmiavirus furovirus
Pecluvirus
pomovirus
Benyvirus
Allexivirus, Carlavirus, Foveavirus, Potexvirus
varicosavirus Capillovirus, Trichovirus, Vitivirus
Potyviridae
Closteroviridae
100nm
Figura 18.14 Descripción esquemática de familias y géneros de virus que infectan plantas. RT significa transcriptasa inversa.
(virus del mosaico del tabaco). Otros son icosaédricos o han modificado el patrón el virus, a menudo son responsables de transmitir los virus de las plantas de una
icosaédrico con la adición de capsómeros adicionales (virus del mosaico amarillo planta a otra. A medida que el insecto se alimenta de la planta, puede recoger
del nabo, figura 18.15). La mayoría de las cápsidas están compuestas por un una partícula de virus en su aparato bucal. En algunos casos, el virus se almacena
tipo de proteína; aún no se han detectado proteínas de unión especializadas. Casi en el intestino anterior del insecto a medida que el insecto se traslada a otra planta.
todos los virus de plantas son virus de ARN, ya sea monocatenario o bicatenario. Sin embargo, algunos virus de plantas pueden reproducirse dentro de los tejidos
Los caulimovirus y los geminivirus con sus genomas de ADN son excepciones a de los insectos; estos virus usan plantas e insectos como huéspedes. Ya sea que
esta regla. se transmita pasivamente o se reproduzca activamente en el insecto huésped,
Como todos los virus, los virus de las plantas deben penetrar en una célula cuando el insecto se alimenta de otra planta, las partículas de virus pueden
huésped antes de que puedan reproducirse. Sin embargo, la penetración de las transferirse a la nueva planta.
células vegetales se ve obstaculizada por el hecho de que están protegidas por Como se señaló anteriormente, la mayoría de los virus de plantas son virus
capas externas complejas, incluidas las paredes celulares. La entrada de un virus de ARN y, de estos, los virus de ARN de cadena positiva son los más comunes.
vegetal en su huésped requiere la presencia de daño mecánico en la pared TMV es el virus de ARN de cadena positiva mejor estudiado y es el tema central
celular, y esto generalmente es causado por insectos u otros animales que se de esta discusión. Recuerde que los genomas de cadena positiva de los virus de
alimentan de plantas. Particularmente importantes son los insectos chupadores ARN pueden servir como ARNm. Sin embargo, tras la entrada en su huésped, el
como pulgones y chicharritas. Estos insectos no solo crean una entrada para genoma de ARN de TMV no se traduce inmediatamente. Más bien el ARN es
Virus de plantas 465
procesada por un mecanismo que no se comprende. La resultante actividad polimerasa. Por lo tanto, es posible que algo de ARN de cadena positiva
Los ARNm codifican varias proteínas, incluida la proteína de la cubierta y una los virus de las plantas hacen uso de la enzima huésped.
ARN polimerasa dependiente de ARN. Así TMV puede replicar su Después de que la proteína de cubierta y el genoma de ARN de TMV hayan sido
propio genoma. Este no es el caso con todos los RNAplant de cadena positiva. sintetizados, se ensamblan espontáneamente en TMV completos
virus La mayoría de las plantas contienen una enzima con ARN dependiente de ARN viriones en un proceso altamente organizado (figura 18.16). Los pro tomeros se unen para
formar discos compuestos por dos capas de
protómeros dispuestos en una espiral helicoidal. Asociación de proteína de la cubierta
con TMV, el ARN comienza en un sitio de iniciación de ensamblaje específico cerca
al extremo 3ÿ del genoma. La cápside helicoidal crece mediante la adición de protómeros,
probablemente como discos, al extremo del bastón. Como
la varilla se alarga, el ARN pasa a través de un canal en su centro
y forma un bucle en el extremo creciente. De esta forma, el ARN puede encajar fácilmente en
forma de espiral en el interior de la cápside helicoidal.
La reproducción dentro del huésped depende de la capacidad del virus para
repartidos por toda la planta. Los virus pueden moverse largas distancias
a través de la vasculatura vegetal; generalmente viajan en el floema.
La propagación de virus de plantas en tejidos no vasculares se ve obstaculizada por
la presencia de paredes celulares resistentes. Sin embargo, un virus como
TMV se propaga lentamente, alrededor de 1 mm/día o menos, moviéndose desde la célula
a la célula a través de los plasmodesmos. Estos son citoplasmáticos delgados
hebras que se extienden a través de agujeros en las paredes celulares adyacentes que se unen
células vegetales por puentes angostos. Se requieren “proteínas de movimiento” virales para
la transferencia de una célula a otra. La proteína de movimiento TMV
se acumula en los plasmodesmos, pero no se conoce bien la forma en que promueve el
movimiento del virus.
Varios cambios citológicos pueden tener lugar en infectados con TMV

Figura 18.15 Virus del mosaico amarillo del nabo (TYMV). un ARN células. Las infecciones por virus de plantas a menudo producen microscópicamente visibles
virus de plantas con simetría icosaédrica. inclusiones intracelulares, generalmente compuestas de agregados de viriones.
3ÿ 3ÿ 3ÿ 3ÿ
(a) 5ÿ (B) 5ÿ (C) 5ÿ (D) 5ÿ
Figura 18.16 Montaje de TMV. La fase de elongación de la construcción de la nucleocápside del virus del mosaico del tabaco. El alargamiento de la hélice.
la cápside mediante la adición de un disco de proteína en su extremo se muestra en una secuencia de cuatro ilustraciones; dibujos lineales que representan el comportamiento del ARN
están incluidos. El genoma de ARN se inserta a sí mismo a través del orificio de un disco que se aproxima y luego se une a la ranura del disco cuando se traba en
lugar al final del cilindro.
18.7 VIRUS DE HONGOS Y PROTISTAS

La mayoría de los micovirus, virus que infectan hongos, se han aislado
de hongos superiores como Penicillium y Aspergillus. Contienen dsRNA y tienen cápsides
isométricas (es decir, sus cápsides son
poliedros aproximadamente esféricos), que tienen aproximadamente de 25 a 50
nm de diámetro. Muchos parecen ser virus latentes. Algunos my covirus inducen síntomas
de enfermedades en huéspedes como el hongo Agaricus bisporus, pero los efectos
citopáticos y los virus tóxicos
los productos aún no han sido observados. Los hongos (capítulo 26)
Se sabe mucho menos sobre los virus de los hongos inferiores, y solo
unos pocos han sido examinados en detalle. Tanto dsRNA como ssRNA
se han encontrado genomas; Las cápsides suelen ser isométricas o
hexagonales y varían en tamaño de 40 a más de 200 nm. A diferencia del
virus de hongos superiores, la reproducción de virus en hongos inferiores va acompañada
de destrucción y lisis de la célula huésped.
Los virus que infectan a los protistas fotosintéticos pertenecen a la familia
Phycodnaviridae. Cuatro géneros son reconocidos por el ICTV.
Todos tienen genomas de dsDNA lineales. Esos virus de algas que tienen
(a) estudiados tienen cápsides poliédricas. Un virus de Uronema gi gas se parece a muchos
bacteriófagos por tener cola. Otro grupo interesante de virus infecta a las cepas de Chlorella
que son
endosimbiontes del protista ciliado Paramecium busaria. Estas
Los virus tienen genomas muy grandes y codifican proteínas que normalmente no
codificada por genomas virales. Ellos, junto con el Mimivirus descrito a continuación, han
fomentado una discusión considerable sobre lo que
Las características distinguen a los organismos celulares de las entidades acelulares.
Se han estudiado los virus de sólo tres géneros de protozoos.
Se sabe que Giardia intestinalis y Leishmania spp. están infectados por miembros de
Totiviridae, una familia de virus icosaédricos desnudos con genomas de dsRNA. Finalmente,
un virus dsDNA gigante,
llamado Mimivirus, ha sido descubierto en la ameba Acan thamoeba polyphaga. El virus
tiene 400 nm de diámetro y tiene una
genoma de unos 800 kilopares de bases de tamaño; por lo tanto su genoma es más grande
que la de algunas bacterias. El mimivirus está relacionado lejanamente con el
Poxviridae y Phycodnaviridae. Los protistas (capítulo 25)
(B)
Figura 18.17 TMV intracelular. (a) Una masa cristalina de

viriones del mosaico del tabaco de una lesión de 10 días en un Chenopodium 18.8 VIRUS DE INSECTOS
hoja de amaranticolor. (b) Vista de fractura por congelación de una masa cristalina de
Se sabe que los miembros de muchas familias de virus infectan insectos.
viriones del mosaico del tabaco en una célula de hoja infectada. En ambas vistas la
Algunos usan insectos como agentes para propagarse a poblaciones de animales y plantas
las partículas se pueden ver longitudinalmente y en sección transversal.
susceptibles. Estos incluyen Flaviviridae y To gaviridae, cuyos miembros causan fiebre
amarilla, enfermedad del Nilo Occidental,
A veces se desarrollan cristales hexagonales de viriones de TMV casi puros en células y varios tipos de encefalitis viral. Otras familias de virus se utilizan en sectas como
infectadas con TMV (figura 18.17). Los cloroplastos de la célula huésped se vuelven huéspedes primarios. De estos, probablemente los más importantes son
anormales y a menudo se degeneran, mientras que los nuevos los Baculoviridae, Reoviridae, Iridoviridae y Polydnaviridae.
Se inhibe la síntesis de cloroplastos. Los Iridoviridae son virus icosaédricos con lípidos en su
cápsides y un genoma de dsDNA lineal. Ellos son los responsables de la
Enfermedades virales iridiscentes de la mosca grulla y algunos escarabajos. los
1. ¿Por qué los virus de plantas no han sido tan bien estudiados como los virus animales y bacterianos?
El nombre del grupo proviene de la observación de que las larvas de infectados
2. Describir en términos moleculares la forma en que se reproduce el TMV.
Los insectos pueden tener una coloración iridiscente debido a la presencia de
3. ¿Cómo se transmiten los virus de plantas entre huéspedes?
viriones cristalizados en sus cuerpos grasos.
4. Comparar virus de plantas y vertebrados en términos de su entrada en el huésped
Muchas infecciones por virus de insectos van acompañadas de la formación de
células. ¿Por qué difieren tanto en este aspecto?
cuerpos de inclusión dentro de las células infectadas. Granulosis
Viroides y Virusoides 467
los virus forman inclusiones de proteínas granulares, generalmente en el citoplasma. están encerrados en cuerpos de inclusión protectores, estos virus
Virus de la poliedrosis nuclear y poliedrosis citoplasmática tienen una buena vida útil y una mejor viabilidad cuando se dispersan en el
infecciones producen cuerpos de inclusión poliédricos en el núcleo o ambiente. Finalmente, son muy adecuados para la producción comercial porque a
el citoplasma de las células afectadas. Aunque los tres tipos de virus menudo alcanzan concentraciones extremadamente altas.
generan cuerpos de inclusión, pertenecen a dos claramente diferentes en tejido larval (hasta 1010 virus por larva). El uso de virus de la polihedrosis nuclear para
familias Los virus de la polihedrosis citoplasmática son reovirus; el control del gusano cogollero del algodón,
son icosaédricos con doble capa y tienen dsRNA La polilla del mechón del abeto de Douglas, la polilla gitana, el garfio de la alfalfa y la
genomas Los virus de la poliedrosis nuclear y los virus de la granulosis son mosca de sierra del pino europeo han sido aprobados por la Agencia de Protección
baculovirus: virus envueltos en forma de bastón de simetría helicoidal y con dsDNA. Ambiental de EE. UU. o están siendo considerados. la granulosis
el virus de la polilla de la manzana también es útil. Generalmente cuerpos de inclusión
Los cuerpos de inclusión, tanto poliédricos como granulares, son de naturaleza se rocían sobre el follaje consumido por los insectos objetivo. Los virus más sensibles se
proteica y encierran uno o más viriones (figura 18.18). En la secta las larvas se infectan administran liberando insectos infectados a
cuando se alimentan de hojas contaminadas propagar la enfermedad. Como en el caso de otros plaguicidas, es posible que en el
con cuerpos de inclusión. Los cuerpos poliédricos protegen a los viriones. futuro se desarrolle resistencia a estos agentes.
contra el calor, el pH bajo y muchos productos químicos; los virus pueden permanecer
viables en el suelo durante años. Sin embargo, cuando se expone a la 1. Describir las principales características de los virus que infectan a los hongos superiores,
contenido alcalino de las vísceras de los insectos, los cuerpos de inclusión se disuelven para hongos inferiores y protistas. ¿De qué manera parecen diferir de una
liberar los viriones, que luego infectan las células del intestino medio. algunos virus ¿otro?
permanecen en el intestino medio mientras que otros se esparcen por todo el insecto. 2. Resumir la naturaleza de la granulosis, poliedrosis nuclear y citoplasma
Al igual que los virus bacterianos y de vertebrados, los virus de insectos pueden virus polihedrosis y la forma en que se transmiten por inclusión
persisten en un estado latente dentro del huésped durante generaciones sin producir cuerpos.
síntomas de enfermedad. Una reaparición de la enfermedad puede 3. ¿Qué son los baculovirus y por qué son tan prometedores como agentes de control
ser inducido por productos químicos, choque térmico o incluso un cambio en la biológico de plagas de insectos?
dieta de insectos.
Gran parte del interés actual en los virus de insectos surge de su
prometedores como agentes de control biológico de plagas de insectos. Mucha gente
18.9 VIROIDES Y VIRUSOIDES
espera que algunos de estos virus puedan reemplazar parcialmente el uso
de plaguicidas químicos tóxicos. Los baculovirus han recibido la Aunque algunos virus son extremadamente pequeños y simples, incluso
más atención por al menos tres razones. En primer lugar, atacan solo a los vertebrados y Existen agentes infecciosos más simples. Los viroides son agentes infecciosos que
tienen una especificidad de huésped considerable; esto significa consisten solo en ARN. Los virusoides, anteriormente llamados ARN satélite,
que deberían ser seguros para los organismos no objetivo. Segundo, porque son similares a los viroides en que también consisten solo en ARN. Finalmente, los
priones son agentes infecciosos que consisten únicamente en proteínas. Las prisiones
se analizan en la sección 18.10.
Los viroides causan más de 20 enfermedades diferentes de las plantas, incluida la

enfermedad del tubérculo fusiforme de la papa, la enfermedad de exocortis de los árboles de cítricos y
enfermedad del crisantemo acrobático. Los viroides son ssRNA circulares, covalentemente
cerrados, de aproximadamente 250 a 370 nucleótidos de largo (figuras 18.19).
y 18.20). El ARN circular normalmente existe en forma de varilla
debido al apareamiento de bases intrahebra, que forma bicatenario
regiones con bucles monocatenarios (figura 18.20). algunos viroides
se encuentran en el nucléolo de las células huésped infectadas, donde entre
Pueden presentarse 200 y 10.000 ejemplares. Otros se encuentran dentro
cloroplastos. Curiosamente, el ARN de los viroides no codifica
cualquier producto genético, por lo que no pueden replicarse a sí mismos. Más bien,
se cree que el viroide es replicado por una de las células huésped
ARN polimerasas dependientes de ADN. Evidentemente, la polimerasa huésped utiliza el
ARN del viroide como molde para la síntesis de ARN.
en lugar del ADN del huésped. La polimerasa huésped sintetiza una molécula de ARN
complementaria, un ARN de cadena negativa. Esto entonces
sirve como molde para la misma polimerasa huésped, y se sintetizan nuevos ARN virales.
Ambos pasos pueden ocurrir por un mecanismo similar a un círculo rodante.
Figura 18.18 Cuerpos de inclusión. Una sección de un citoplasma Una planta puede estar infectada con un viroide sin mostrar
poliedro de una polilla gitana (Lymantria dispar). el ocluido síntomas, es decir, puede tener una infección latente. sin embargo, el
las partículas de virus con núcleos densos son claramente visibles (50,000). mismo viroide en otra especie huésped puede causar una enfermedad grave.
Escherichia coli
Dominio de Región conservada dominio

Dominio patogenicidad central variable Dominio
terminal izquierdo
(PAGS) (CRC) (V) terminal derecho
(TL) (TR)
Figura 18.20 Estructura del viroide. Este diagrama esquemático muestra

la organización general de un viroide. El círculo de ARN monocatenario
cerrado tiene un apareamiento de bases intracatenario extenso y bucles no
ADN de
apareados intercalados. Los viroides tienen cinco dominios. La mayoría de
bacteriófago T2
los cambios en la patogenicidad de los viroides parecen surgir de variaciones
bacteriófago T2
en los dominios P y TL .
aisladas, cuya virulencia varía desde aquellas que causan solo síntomas leves
hasta variedades letales. Todas las variaciones en la patogenicidad se deben
a unos pocos cambios de nucleótidos en dos regiones cortas del viroide. Se
cree que estos cambios de secuencia alteran la forma del bastón y, por lo
tanto, su capacidad para causar enfermedades.
Los virusoides son similares a los viroides en que también son
moléculas de ssRNA circulares covalentemente cerradas con regiones capaces
de apareamiento de bases intracadena. A diferencia de los viroides, codifican
uno o más productos genéticos y, por lo general, necesitan un virus auxiliar
ADN de poliomavirus
para infectar las células huésped. El virus auxiliar suministra productos
Poliomavirus genéticos y otros materiales que necesita el virusoide para completar su ciclo
de replicación. El virusoide mejor estudiado es el virusoide de la hepatitis D
humana, que tiene una longitud de 1.700 nucleótidos. Utiliza el virus de la
ARN
del bacteriófago f2 hepatitis B como virus auxiliar. Si una célula huésped contiene tanto el virus
de la hepatitis B como el virusoide de la hepatitis D, el ARN del virusoide y su
bacteriófago f2
producto génico, llamado antígeno delta, pueden empaquetarse dentro de la
Viroide (un círculo de ARN monocatenario cerrado) envoltura del virus. Estos virusoides envueltos y antígenos delta son capaces
de entrar en otras células huésped, donde el ARN del virus es transcrito por la
Figura 18.19 Viroides, virus y bacterias. Una comparación de Escherichia ARN polimerasa II del huésped. Enfermedades de contacto directo: Hepatitis
coli, varios virus y el viroide del tubérculo ahusado de la papa con respecto al virales (sección 37.3)
tamaño y la cantidad de ácido nucleico que poseen. (Todas las dimensiones
se amplían aproximadamente 40.000.)
18.10 PRIONES
La patogenicidad de los viroides no se comprende bien, pero se sabe que se Los priones (por partículas proteicas infecciosas) causan una variedad de
requieren regiones particulares del ARN; los estudios han demostrado que la enfermedades neurodegenerativas en humanos y animales. El prión mejor
eliminación de estas regiones bloquea el desarrollo de la enfermedad (figura estudiado es el prión de la tembladera, que causa la enfermedad de la
18.20). Algunos datos sugieren que los viroides causan enfermedades al tembladera en las ovejas. Los animales afectados pierden la coordinación de
desencadenar una respuesta eucariota llamada silenciamiento de ARN, que sus movimientos, tienden a rasparse o frotarse la piel y finalmente no pueden caminar.
normalmente funciona para proteger contra la infección por virus dsRNA. Los investigadores han demostrado que la tembladera es causada por
Durante el silenciamiento del ARN, la célula detecta la presencia del dsRNA y una forma anormal de una proteína celular. La forma anormal se denomina
lo degrada selectivamente. Los viroides pueden usurpar esta respuesta PrPSc ( proteína priónica asociada a la tembladera ) y la forma celular normal
mediante la hibridación con moléculas específicas de ARNm del huésped a se denomina PrPC. La evidencia respalda un modelo en el que la entrada de
las que tienen una secuencia de nucleótidos complementaria. Se cree que la PrPSc en el cerebro de un animal hace que la proteína PrPC cambie de su
formación de la molécula bicatenaria de ARNm híbrido viroide:huésped conformación normal a la forma anormal. Las moléculas de PrPSc recién
provoca el silenciamiento del ARN. Esto da como resultado la destrucción del producidas luego convierten más moléculas de PrPC en la forma anormal de
mensaje del huésped y, por lo tanto, el silenciamiento del gen del huésped. La PrPSc . No está claro cómo la PrPSc provoca este cambio conformacional.
falta de expresión de un gen huésped requerido conduce a la enfermedad en la plantaSin embargo, el modelo mejor respaldado es que la PrPSc interactúa
huésped.
El viroide del tubérculo fusiforme de la papa (PSTV) es el viroide más directamente con la PrPC, provocando el cambio. Cabe señalar que los ratones
intensamente estudiado. Su ARN consta de unos 359 nucleótidos, mucho más que carecen del gen PrP no pueden infectarse con PrPSc. Aunque la evidencia
pequeño que el genoma de cualquier virus. Varias cepas de PSTV han sido es sólida de que PrPSc hace que PrPC se pliegue de manera anormal,
Resumen 469
No se comprende bien cómo esto desencadena la pérdida de neuronas. Evidencia La variante CJD difiere de la CJD solo en el origen: las personas adquieren vCJD
reciente sugiere que la interacción de PrPSc con PrPC sirve para por comer carne contaminada, mientras que la CJD es una condición extremadamente
moléculas de PrPC entrecruzadas . Las moléculas de PrPC entrecruzadas desencadenan rara causada por una mutación espontánea del gen que codifica
una serie de eventos llamados apoptosis o muerte celular programada. la proteína priónica. CJD y GSS son raros y de distribución cosmopolita entre personas
Así, la proteína normal, pero entrecruzada, provoca la pérdida de neuronas, de mediana edad, mientras que se ha encontrado kuru
mientras que la proteína anormal actúa como agente infeccioso. solo en los Fore, una tribu del este de Nueva Guinea. Esta tribu tenía la costumbre de
Además de la tembladera, los priones son responsables de la consumir a los parientes muertos. Las mujeres y los niños recibieron
encefalopatía espongiforme (BSE o “enfermedad de las vacas locas”), y la las partes del cuerpo menos deseables para comer; esto incluía el cerebro. Por lo tanto
enfermedades humanas kuru, insomnio familiar fatal, Creutzfeldt-Jakob ellos y sus hijos estaban infectados. Se detuvo el canibalismo
(ECJ) y síndrome de Gerstmann-Strässler-Scheinker hace muchos años, y kuru ha sido eliminado.
(GSS). Todo resulta en una degeneración progresiva del cerebro y
eventual muerte. En la actualidad, no existe un tratamiento eficaz. Enojado 1. ¿Qué son los viroides y por qué son de gran interés?
La enfermedad de las vacas alcanzó proporciones epidémicas en Gran Bretaña en el 2. ¿En qué se diferencia un viroide de un virus?
1990 e inicialmente se propagó porque el ganado se alimentaba con harina hecha de 3. ¿Qué es un prión? ¿En qué forma un prión parece diferir fundamentalmente
todas las partes del ganado, incluido el tejido cerebral. Ahora se ha mostrado de virus y viroides?
que comer carne de ganado con BSE puede causar una variante de 4. Los priones son difíciles de detectar en los tejidos del huésped. ¿Por qué crees que esto es así?
Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob en humanos (vECJ). Más de 90 personas han muerto ¿Por qué cree que no hemos sido capaces de desarrollar tratamientos efectivos?
en el Reino Unido y Francia a causa de esta fuente. por estas enfermedades?
Resumen
18.1 Taxonomía de los virus eucarióticos 18.3 Infecciones citocidas y daño celular
un. Los virus eucarióticos se clasifican según muchas propiedades; los más importantes son sus ácidos un. Los virus pueden destruir las células huésped de muchas maneras durante las infecciones citocidas. Estas
nucleicos y estrategias de replicación (figuras 18.1–18.3). incluyen mecanismos tales como la inhibición de la síntesis de proteínas, ADN y ARN del huésped;
daño endosómico; alteración de las membranas de las células huésped; y la formación de cuerpos de
inclusión.
18.2 Reproducción de virus de vertebrados
un. El primer paso en el ciclo reproductivo de los virus de vertebrados es la adsorción del
18.4 Infecciones virales persistentes, latentes y lentas
virus a un sitio receptor de células diana; a menudo estructuras especiales de cápside o envoltura
están involucrados en este proceso. un. Aunque muchas infecciones virales son agudas, tienen un inicio rápido y son breves.
B. La entrada del virus en la célula huésped puede ir acompañada de la eliminación de la cápside duración, algunos virus pueden establecer infecciones persistentes que duran años.
Algunas infecciones son crónicas. Los virus también pueden permanecer inactivos por un tiempo.
del ácido nucleico, un proceso llamado decapado. La mayoría de las veces, la penetración ocurre a
través de la absorción endocitótica para formar vesículas recubiertas o fusión. y luego reanudar la actividad en lo que se llama una infección latente. Virus lentos
de la envoltura con la membrana plasmática (figura 18.4). puede actuar tan lentamente que una enfermedad se desarrolla a lo largo de los años (figura 18.13).
C. En los virus de ADN, el ARNm y las proteínas virales tempranos están involucrados en hacerse cargo del
18.5 Virus y cáncer
célula huésped y la síntesis de ADN y ARN viral. La replicación del ADN a menudo toma
lugar en el núcleo del huésped y el ARNm es fabricado inicialmente por las enzimas del huésped. un. El cáncer se caracteriza por la formación de un tumor maligno que hace metástasis o invade otros tejidos
D. Los parvovirus son tan pequeños que deben conservar el espacio del genoma utilizando y puede propagarse por el cuerpo. La carcinogénesis es un proceso complejo de varios pasos que
genes superpuestos y otros mecanismos similares. Los poxvirus difieren de involucra muchos factores.
otros virus de vertebrados de ADN en que la replicación del ADN tiene lugar en el citoplasma del B. Los virus causan cáncer de varias maneras. Por ejemplo, pueden traer un gen que causa cáncer, u
huésped y llevan una polimerasa de ARN. Los hepadnavirus usan transcriptasa inversa para replicar oncogén, a una célula, o el virión puede insertar una transcripción
su genoma de dsDNA con brechas. elemento regulador junto a un protooncogén celular y estimular el gen para
mi. El genoma de los virus ssRNA positivos puede actuar como un mRNA, mientras que los genomas de mayor actividad. Alternativamente, las proteínas virales pueden inactivar el supresor de tumores
virus ssRNA negativos dirigen la síntesis de mRNA por un virus asociado. proteínas, promoviendo así la hiperproliferación y la mutación.
transcriptasa. Los reovirus de ARN de doble cadena utilizan virus asociados y

transcriptasas recién sintetizadas para producir ARNm (figura 18.8). 18.6 Virus de plantas
F. Los genomas de virus de ARN se replican en el citoplasma de la célula huésped. La mayoría de los ARNss un. La entrada de los virus de las plantas en sus huéspedes generalmente está mediada por daños mecánicos
Los virus usan una replicasa viral para sintetizar una forma replicativa de dsRNA que luego a la planta. Esto crea aberturas en las paredes celulares de las plantas a través de las cuales
dirige la formación de nuevos genomas. el virus puede entrar. Los animales que se alimentan de plantas, especialmente los insectos, son a menudo los
gramo. Los retrovirus usan transcriptasa inversa para sintetizar una copia de ADN de su ARN causa de este daño.
genoma Una vez que se ha sintetizado el ADN proviral de doble cadena, se integra en el genoma del B. La mayoría de los virus de plantas tienen un genoma de ARN y pueden ser helicoidales o icosaédricos.
huésped y dirige la formación del ARN y la proteína del virus. Dependiendo del virus, el genoma del ARN puede ser replicado por una ARN polimerasa dependiente
H. Los genes tardíos codifican las proteínas necesarias en (1) la construcción de la cápside por uno mismo del ARN del huésped o por un ARN específico del virus.
proceso de ensamblaje y (2) liberación de virus. replicasa
I. Por lo general, los viriones desnudos se liberan tras la lisis celular. En la reproducción de virus con C. La nucleocápside TMV se forma espontáneamente por autoensamblaje cuando los discos de
envoltura, la liberación del virus y la formación de la envoltura normalmente ocurren simultáneamente complejo de protómeros de proteína de cubierta con el ARN.
después de la modificación de la membrana plasmática del huésped, y la célula no se
lisado (figura 18.11).
18.7 Virus de hongos y protistas 18.9 Viroides y Virusoides
un. Los micovirus de hongos superiores tienen cápsides isométricas y dsRNA, mientras que los un. Existen agentes infecciosos más simples que los virus. Por ejemplo, varias enfermedades de
virus de hongos inferiores pueden tener genomas dsRNA o dsDNA. B. Solo se han aislado las plantas son causadas por hebras cortas de ARN infeccioso llamadas viroides (figura
y estudiado unos pocos virus de protistas. Algunos son de especial interés porque tienen 18.20). B. Los virusoides son ARN infecciosos que codifican uno o más productos génicos.
genomas de dsDNA extremadamente grandes que incluyen genes que normalmente no se Requieren un virus auxiliar para la replicación.
encuentran en los genomas virales.
18.10 Priones
18.8 Virus de insectos
un. Los priones son pequeños agentes proteínicos asociados con al menos seis trastornos
un. Los miembros de varias familias de virus infectan insectos, y muchos de estos virus degenerativos del sistema nervioso: tembladera, encefalopatía espongiforme bovina, kuru,
producir cuerpos de inclusión que ayuden en su transmisión. insomnio familiar fatal, síndrome de Gerstmann-Strässler-Scheinker y enfermedad de
B. Los baculovirus y otros virus están encontrando usos como agentes de control biológico para Creutzfeldt-Jakob. La naturaleza precisa de los priones aún no está clara.
plagas de insectos. B. La mayor parte de la evidencia apoya la hipótesis de que las proteínas priónicas existen en
dos formas: la forma infecciosa, anormalmente plegada y una forma celular normal. La
interacción entre la forma anormal y la forma celular convierte la forma celular
forma en la forma anormal.
Términos clave
infección aguda 461 genes tardíos protooncogén 461 ADN enfermedades de virus lentos 461
anaplasia 461 458 infección viral latente 461 proviral 457 replicasa ARNm subgenómico 458
cáncer 461 metástasis 461 455 forma replicativa sincitio 461 transcriptasa
infección viral crónica 461 neoplasia 461 (RF) 455 retrovirus 457 455 tropismo 448 tumor 461
infección citocida 459 oncogén 461
efecto citopático (CPE) 459 oncovirus 463 transcriptasa inversa (RT) 457
partícula de interferencia defectuosa (DI) infección persistente 461 ribonucleasa H 457 supresor de tumores 463
461 genes tempranos 454 cuerpos de prion 468 procapsids 458 cambio de marco ribosomal 458 viroide 467
inclusión 461 silenciamiento de ARN 468 virusoide 468
1. Considere cada uno de los siguientes pasos de reproducción viral: adsorción, penetración, Es difícil probar que un virus específico causa cáncer en humanos. ¿Es correcto decir que
replicación y transcripción. Sugiera una estrategia mediante la cual se podría inhibir o los virus causan cáncer? Explica por qué o por qué no.
desalentar farmacológicamente la entrada y propagación de virus en células animales. 4. Por lo que sabe sobre el cáncer, ¿es probable que se pueda usar un solo tipo de tratamiento
¿Puede explicar el rango de hospedantes utilizando algunos de los mismos fundamentos? para curarlo? ¿Qué enfoques podrían ser efectivos para prevenir el cáncer?
2. ¿Sería ventajoso que un virus dañara las células huésped? Si no es así, ¿por qué no se evita
el daño al host? ¿Es posible que un virus se vuelva menos patógeno cuando ha estado 5. Proponga algunos experimentos que podrían ser útiles para determinar qué priones son
asociado con la población huésped durante más tiempo? y cómo causan enfermedades.
3. ¿Cómo se prueba que un virus está causando cáncer? Trate de pensar en enfoques distintos
a los discutidos en el capítulo. Da una razón principal por la que es tan diferente
Aprende más
Chien, P.; Weissmann, JS; y DePace, AH 2004. Principios emergentes de la herencia priónica Smith, AE y Helenius, A. 2004. Cómo entran los virus en las células animales. Ciencia
basada en la conformación. año Rev. Bioquímica. 73:617–56. 304:237–41.
pedernal, SJ; Enquist, LW; Racaniella, VR; y Skalka, AM 2004. Principios de virología, 2ª ed. Wang, MB; Bian, XY; Wu, LM; Liu, LX; Smith, NA; Isenegger, D.; Wu, RM; Masuta, C.; Vance, VB;
Washington, DC: ASM Press. Watson, JM; Rezaian, A.; Dennis, ES; y Waterhouse, PM 2004. Sobre el papel del
Gibbs, WW 2003. Desenredando las raíces del cáncer. ciencia Soy. 289(1):56–65. silenciamiento del ARN en la patogenicidad y evolución de virioides y satélites de virus. proc.
nacional Academia ciencia 101(9):3275–80.
Hull, R. 2002. Virología vegetal de Matthew, 4ª ed. San Diego: Prensa Académica.
Raoult, D.; Audic. S.; Roberto, C; Abergel, C.; Renesto, P.; Ogata, H.; LaScola, B.; Susana, M.; y
Claverie, J.-M. 2004. La secuencia del genoma de 1,2 megabases de mimivirus. Ciencia
306:1344–50.

19microbianoEvolución,
Taxonomía y Diversidad
Los estromatolitos que se muestran aquí son rocas estratificadas formadas por la incorporación de
minerales en esteras microbianas. Los estromatolitos fosilizados indican que
Los microorganismos existieron temprano en la historia de la Tierra.
AVANCE
• Las relaciones evolutivas entre los tres dominios de la vida: • La edición actual del Manual de Bacteriología Sistemática de Bergey es
Bacteria, Archaea y Eucarya—están representados en el universo organiza filogenéticamente y distribuye Bacteria y Archaea entre 25 phyla.
árbol filogenético. La raíz, u origen, se sitúa al principio de la línea de descendencia
bacteriana. Esto sugiere que Archaea y Eucarya comparten
una ascendencia común que es independiente de las bacterias. tan largo
La historia evolutiva ha generado un grado espectacular de diversidad microbiana.
mundo crobial es su extraordinaria diversidad. Parece que

• La hipótesis del mundo del ARN sugiere que la primera autorreplicación
Uno de losseaspectos más casi
representan fascinantes y atractivos
todas las de la mi fisiologías y estilos
formas, tamaños,
entidad era ARN y que esta molécula formó la base de la
de vida posibles. En esta sección del texto nos centramos en la diversidad
primera celda primitiva. Aunque no está claro cómo los primeros eucarióticos
surgió el núcleo, hay abundante evidencia que demuestra que microbiana. El capítulo 19 introduce los principios generales de
las mitocondrias y los cloroplastos surgieron de proteobacterias y cianobacterias evolución microbiana y taxonomía. A esto le sigue una encuesta de cinco
endosimbióticas, respectivamente. hidrogenosomas, capítulos (20–24) de los grupos procarióticos más importantes.
encontrados en algunos protistas anaerobios, parecen compartir el mismo ancestro Nuestro estudio de la diversidad microbiana termina con una introducción a la
común que las mitocondrias. Principales tipos de microorganismos eucarióticos: protistas y hongos.
• Para dar sentido a la diversidad de organismos, es necesario
agrupar organismos similares y organizar estos grupos en
una disposición jerárquica no superpuesta. La taxonomía es la ciencia de la
clasificación biológica.
• Se usa un enfoque polifásico para clasificar los procariotas. Esto combina 19.1 EVOLUCIÓN MICROBIANA
información que se basa en el análisis del fenotipo microbiano,
La diversidad biológica generalmente se considera en términos de plantas y
características genotípicas y filogenéticas. Los resultados de estos análisis
animales; sin embargo, la variedad de formas de vida microbiana es enorme y
a menudo se resumen en diagramas en forma de árbol llamados dendogramas.
en gran parte inexplorada. Considere la diversidad metabólica de los
• Morfológicos, fisiológicos, metabólicos, ecológicos, genéticos y
microorganismos; esto por sí solo sugiere que el número de hábitats ocupados
Todas las características moleculares son útiles en taxonomía porque
por microbios supera con creces al de todos los organismos más grandes. Cómo
reflejan la organización y la actividad del genoma. Las secuencias de ácidos
¿La vida microbiana ha sido capaz de irradiar a un nivel tan desconcertante?
nucleicos son probablemente los mejores indicadores de la filogenia microbiana.
de la diversidad? Para responder a esta pregunta, se debe considerar la
y parentesco porque los ácidos nucleicos son el material genético en sí o los
productos de la transcripción génica. ARNr de subunidades pequeñas evolución microbiana. El campo de la evolución microbiana, como cualquier otro
y los genes que los codifican muestran una serie de características que empeño científico, se basa en la formulación de hipótesis,
hacerlos útiles para determinar las filogenias microbianas. la recopilación de datos, el análisis de los datos y la reforma
• La taxonomía bacteriana está cambiando rápidamente debido a la adquisición de de hipótesis basadas en evidencia recién adquirida. Es decir,
nuevos datos, particularmente el uso de técnicas moleculares como la el estudio de la evolución microbiana se basa en el método científico.
comparación de la estructura del ARN ribosomal y las secuencias cromosómicas. Sin duda, a veces es más difícil acumular pruebas cuando
Esto está conduciendo a nuevas clasificaciones filogenéticas. considerando eventos que ocurrieron millones, y a menudo miles de millones, de
¿Lo que hay en un nombre? Lo que llamamos rosa con cualquier otro nombre olería igual de dulce. . . .
—W. Shakespeare
472 Capítulo 19 Evolución microbiana, taxonomía y diversidad
hace años, pero el advenimiento de la biología molecular ha ofrecido a los caldero de productos químicos que reaccionaron entre sí, "probando"
científicos un registro vivo de la historia antigua de la vida. Este capítulo aleatoriamente la estabilidad de las moléculas resultantes. Esto significa
describe el resultado de esta investigación científica. que las primeras células evolucionaron cuando la Tierra era un lugar muy
diferente: caliente y anóxico, con una atmósfera rica en gases como
hidrógeno, metano, dióxido de carbono, nitrógeno y amoníaco. Para dar
El origen de la vida La cuenta de la evolución de la vida, se deben considerar las tres moléculas
datación de meteoritos mediante el uso de radioisótopos sitúa a nuestro celulares esenciales: ADN, ARN y proteínas; una de estas moléculas
planeta en una edad estimada de 4500 a 4600 millones de años. Sin presumiblemente se desarrolló primero y es la clave para comprender todo
embargo, las condiciones en la Tierra durante los primeros cien millones de lo que siguió. Las proteínas son capaces de realizar trabajo celular pero no
años fueron demasiado duras para sustentar cualquier tipo de vida. La pueden replicarse, mientras que el ADN es exactamente lo contrario. Para
primera evidencia directa de vida celular se descubrió en 1977 en una que la vida evolucionara, se necesitaba una molécula que pudiera replicarse
formación geológica en Sudáfrica conocida como pedernal Swartkoppie, un y realizar trabajo celular. Una posible solución a este problema se sugirió en
tipo granular de sílice. Estos fósiles microbianos, así como los del pedernal 1981 cuando Thomas Cech descubrió el ARN autoempalmable en el
Archaean Apex de Australia, se han fechado en unos 3.500 millones de microbio eucariótico Tetrahymena. Tres años más tarde, Sidney Altman
años (figura 19.1). A pesar de estos hallazgos, el registro fósil microbiano encontró que RNaseP en Escherichia coli es una molécula de ARN que
es comprensiblemente escaso. Así pues, para reconstruir los primeros escinde los enlaces fosfodiéster. Las moléculas de ARN que poseen
acontecimientos que condujeron al origen de la vida, los biólogos deben actividad catalítica se denominan ribozimas y, para algunos, la capacidad
basarse principalmente en pruebas indirectas. Cada pieza de evidencia del ARN para catalizar reacciones bioquímicas sugiere un mundo de ARN
debe encajar como un rompecabezas para que surja una imagen coherente. precelular, un término acuñado por Walter Gilbert en 1986. Esta hipótesis
sugiere que la primera molécula autorreplicante fue el ARN, que es capaz
de almacenar, copiar y expresar información genética, y también posee
La primera entidad autorreplicante: el mundo del ARN El origen actividad enzimática. En esta versión de la vida temprana, se ensamblaron
de la vida se basa en una sola pregunta: ¿Cómo surgieron las primeras y destruyeron varias formas de moléculas durante aproximadamente
células? Nadie puede decir con certeza; sin embargo, parece probable que quinientos millones de años, hasta que finalmente se generó una entidad
la primera entidad autorreplicante fuera mucho más simple que incluso las parecida al ARN moderno encerrado en una vesícula lipídica. Cositas
células vivas modernas más primitivas. Antes de que existiera la vida, la Tierra era un
microbianas 11.2: ARN catalítico (ribozimas)
Figura 19.1 Bacterias fosilizadas. Se muestran

varios microfósiles que se asemejan a bacterias, algunos
con dibujos interpretativos. (a) Secciones delgadas de
pedernal Archean Apex de Australia Occidental; los restos
fosilizados de procariotas tienen unos 3.500 millones de
años. (b) Gloeodiniopsis, de unos 1.500 millones de años,
de pedernal carbonáceo en la Formación Satka de los
Montes Urales del sur. La flecha apunta a la cubierta
envolvente. (c) Palaeolyngbya, de unos 950 millones de
años, de esquisto carbonáceo de la Formación Lakhanda
de la región de Khabarovsk en el este de Siberia.
(B)
(a) (C)
Evolución microbiana 473
Además de su capacidad para replicarse y realizar actividades enzimáticas, la

función del ARN sugiere su antiguo origen. Considere que gran parte de la reserva
celular de ARN en las células modernas
existe en el ribosoma, una estructura que consiste en gran parte de rRNA
y utiliza mRNA y tRNA para construir proteínas. De hecho, el ARNr
sí mismo cataliza la formación de enlaces peptídicos durante la síntesis de proteínas.
Por lo tanto, el ARN parece estar bien preparado para su importancia en el desarrollo
de proteínas. Debido a que el ARN y el ADN son estructuralmente
similar, el ARN podría haber dado lugar a ADN de doble cadena. Eso
se postula que una vez que el ADN evolucionó se convirtió en la instalación de almacenamiento
para las funciones celulares porque proporcionó una estructura químicamente más
estable. Otras dos piezas de evidencia apoyan el ARN
hipótesis mundial: el hecho de que la moneda de energía de la célula,
ATP, es un ribonucleótido, y el descubrimiento más reciente de que
El ARN puede regular la expresión génica. Así que parecería que las proteínas, los
genes y la energía celular se remontan al ARN.
Riboswitches (secciones 12.3 y 12.4)
Otros se muestran escépticos ante la hipótesis del mundo del ARN. ellos reclaman
condiciones en la Tierra hace 4 mil millones de años habrían impedido la
formación estable de ribosa, fosfato, purinas y pirimidinas—
todo lo necesario para construir el ARN. De hecho, mientras que las bases de purina tienen
generado abióticamente en una mezcla calentada de hidrógeno
cianuro y amoníaco, los científicos hasta ahora no han podido hacer
pirimidinas de manera similar. Otro problema con el ARN
La hipótesis mundial es la inestabilidad del ARN una vez ensamblado. En
1996, James Ferris y sus colegas pudieron superar el
problema de la degradación del ARN mediante la adición del mineral arcilloso mont
morillonita a una solución de nucleótidos químicamente cargados. Ellos Figura 19.2 Estromatolitos. Estos son estromatolitos en Shark
mostró que la tasa de síntesis de ARN era más rápida que su degradación. Más tarde, Bahía, Australia Occidental. Los estromatolitos modernos están en capas o
ellos y otros demostraron en experimentos similares que rocas estratificadas formadas por la incorporación de sulfatos de calcio,
Los aminoácidos en solución con los minerales hidroxiapatita e il lite también podrían carbonatos de calcio y otros minerales en esteras microbianas. los
polimerizarse en polipéptidos de alrededor de 50 aminoácidos. Los tapetes están formados por cianobacterias y otros microorganismos.
residuos de ácido. Para algunos, estos experimentos proporcionan
evidencia de la biosíntesis de los primeros polímeros orgánicos. Sin embargo, un
problema adicional con la hipótesis del mundo del ARN se refiere a la capacidad del hace unos 3 mil millones de años. Los estromatolitos son rocas estratificadas, a menudo
ARN primitivo para autorreplicarse. Recuerda que en abovedados, que se forman por la incorporación de sedimentos minerales
En las células modernas, el ARN es sintetizado por la enzima ARN polimerasa, una en tapetes microbianos dominados por cianobacterias (figura 19.2). La evidencia
proteína. La replicación del ARN temprano sin una proteína fue reciente ha demostrado que algunos estromatolitos fosilizados se formaron
presumiblemente logrado por una antigua ribozima. Hasta ahora, no hay tal de una forma similar. La presencia de oxígeno era crítica porque
no se ha encontrado ribozima, ni se ha generado experimentalmente. Así, aunque está permitió la evolución de una variedad más amplia de estrategias de captura de energía,
claro que la vida microbiana en última instancia incluida la respiración aeróbica. Transporte de electrones y oxidativo.
surgió de una mezcla aleatoria de sustancias químicas, el mecanismo real por el cual fosforilación (sección 9.5); Respiración anaeróbica (sección 9.6)
surgió la primera entidad similar a una célula es una controversia que Irónicamente, el estudio de los organismos más antiguos es uno de
puede que nunca se resuelva. Transcripción (sección 11.6) las disciplinas más jóvenes de las ciencias biológicas. La habilidad para
La vida celular temprana, aunque primitiva en comparación con la vida moderna, cultivo y examinar microorganismos se desarrolló sólo sobre
todavía era relativamente complejo. Las células tenían que obtener energía de un duro, hace 150 años Casi de inmediato, los primeros microbiólogos intentaron clasificar los
ambiente anóxico. Cuando los científicos intentan reconstruir la naturaleza de la vida microbios y organizarlos según las posibles relaciones entre ellos. Dos elementos
muy antigua, buscan microbios existentes (vivos) en busca de importantes no
pistas Por ejemplo, se piensa que el metabolismo basado en FeS observado entendido hasta finales del siglo XX hizo esto especialmente
en algunas arqueas hipertermófilas puede haber un remanente de la primera difícil. Primero, solo alrededor del 1% de todos los microbios han sido cultivados.
forma de quimiosmosis. Aquí se sugiere que el productor de energía en el laboratorio. En segundo lugar, la evaluación más precisa de las relaciones
reacción FeS H2S ÿFeS2 H2 proporcionó el poder reductor (H2) evolutivas entre organismos se obtiene comparando las secuencias de nucleótidos y
para producir una fuerza motriz de protones. La fotosíntesis también parece aminoácidos. Antes del advenimiento de
han evolucionado temprano en la historia de la Tierra. Hay evidencia fósil de técnicas basadas en secuencias, fue imposible discernir las relaciones evolutivas entre
colocar la evolución de las cianobacterias y la fotosíntesis oxigénica en los microorganismos.
Los tres dominios de la vida corroborada por pruebas bioquímicas y genéticas adicionales. Recuerde del
capítulo 3 que la mayoría de las bacterias tienen peptidoglicano en la pared celular.
La investigación basada en secuencias más importante fue iniciada por
contienen ácido murámico y tienen lípidos de membrana con ácidos grasos de
Carl Woese. En 1977, Woese y su colaborador George Fox utilizaron
cadena lineal unidos a éster que se asemejan a los lípidos de membrana
las secuencias de nucleótidos de las subunidades pequeñas de ARN ribosomal
eucarióticos (tabla 19.1). Las arqueas se diferencian de las bacterias en
(SSU rRNAs) de una variedad de organismos para determinar que todos los
muchos aspectos y se parecen al Eucarya en algunos aspectos. Aunque
organismos vivos pertenecen a uno de los tres dominios: Archaea, Bacteria,
Archaea se describen con más detalle en el capítulo 20, debe ser
y Eucarya. Esta observación inicial ha sido refinada y
Tabla 19.1 Comparación de Bacteria, Archaea y Eucarya
Propiedad bacterias arqueas eucaria
Núcleo encerrado en una membrana Ausente Ausente Regalo

con nucleolo
complejo interno Ausente Ausente Regalo

Organelos membranosos
Pared celular Casi siempre tienen Variedad de tipos, sin ácido murámico Sin ácido murámico
peptidoglicano que contiene
ácido murámico
Lípido de membrana Tienen ácidos grasos de cadena Tienen cadenas alifáticas Tienen ácidos grasos de cadena
lineal unidos a éster ramificadas unidas por éter. lineal unidos a éster
Vesículas de gas Regalo Regalo Ausente
ARN de transferencia Timina presente en la mayoría de los ARNt No hay timina en el brazo T o TC de timina presente
N-formilmetionina transportada por ARNt
ARNt iniciador Metionina transportada por el ARNt Metionina transportada por el ARNt
iniciador iniciador
ARNm policistrónico Regalo Regalo Ausente
intrones de ARNm Ausente Ausente Regalo
Empalme, protección y ausencia de ARNm Ausente Regalo

Relave poli A
Ribosomas
Tamaño 70S 70S 80S (ribosomas citoplasmáticos)
Reacción del factor de elongación no reacciona reacciona reacciona
2 con toxina diftérica
Sensibilidad al cloranfenicol y la Sensible Insensible Insensible

kanamicina
Sensibilidad a la anisomicina Insensible Sensible Sensible
ARN polimerasa dependiente de ADN

Número de enzimas Una Una Tres
Estructura Patrón de subunidad simple Patrón de subunidades complejas similar Patrón de subunidad complejo
(6 subunidades) a las enzimas eucarióticas (8 a 12 (12–14 subunidades)
subunidades)
Sensibilidad a la rifampicina Sensible Insensible Insensible
Promotores de tipo polimerasa II ausentes Regalo Regalo
Metabolismo
ATPasa similar No sí sí
Metanogénesis Ausente Regalo Ausente
Fijación de nitrogeno Regalo Regalo Ausente
Fotosíntesis basada en Regalo Ausente presenta

clorofila
quimiolitotrofia Regalo Regalo Ausente
a
Presente en los cloroplastos (de origen bacteriano).
Evolución microbiana 475
señaló que se diferencian de las bacterias en que carecen de ácido murámico en replicación, transcripción y traducción, siempre que ese gen sea
sus paredes celulares y en poseer (1) lípidos de membrana con cadenas alifáticas encontrado en los tres dominios. Aunque los detalles de filogenética
ramificadas unidas por éter, (2) ARN de transferencia sin timidina en el brazo T o construcción de árboles y el uso de ARNr SSU para medir la relación
TC, (3) ARN polimerasa distintiva se discuten con más detalle más adelante (p. 489), el concepto general no es
enzimas y (4) ribosomas de diferente composición y forma. difícil de comprender. En este caso, las secuencias de ARNr 16S y 18S
Así, aunque Archaea y Bacteria tienen una arquitectura celular similar, varían de una colección diversa de procariotas y eucariotas, respectivamente, están
considerablemente a nivel molecular. Ambas cosas alineados desde el extremo 5' hasta el 3' y son homólogos
Los grupos difieren de los eucariotas en su ultraestructura celular y muchos los residuos se comparan por parejas. Cada diferencia de secuencia de nucleótidos
otras propiedades. Sin embargo, la tabla 19.1 muestra que tanto las bacterias se cuenta y sirve para representar alguna distancia evolutiva entre los organismos.
y Archaea comparten algunas propiedades bioquímicas con las células eucarióticas. Cuando los datos de un gran
Por ejemplo, las bacterias y los eucariotas tienen enlaces éster número de organismos se comparan, la relación evolutiva
lípidos de membrana; Archaea y eucariotas son similares con respecto entre organismos puede determinarse, pero no la velocidad a la que uno
a algunos componentes de los sistemas sintéticos de ARN y proteínas. organismo divergió de otro. En pocas palabras, en lugar de medir el tiempo, las
Las arqueas (capítulo 20) ramas de ese árbol miden la distancia evolutiva entre los organismos. El concepto
Hay varios puntos de vista con respecto a la historia evolutiva de es análogo a un mapa que
microbios Primero consideraremos el árbol filogenético universal como muestra con precisión la distancia entre dos ciudades, pero debido a
propuesto por Norman Pace (figura 19.3). Este análisis se basa en muchos factores, uno no puede determinar el tiempo necesario para viajar que
Análisis de secuencias de ARNr SSU de organismos de los tres dominios distancia. Así, la distancia evolutiva se mide a lo largo de cada línea:
de vida. Es importante destacar que se puede construir un árbol similar a partir de las cuanto más larga es la línea, más divergentes evolutivamente son los dos
secuencias de nucleótidos de cualquier gen cuyo producto esté involucrado en el ADN. organismos (o tipos de organismos) en cada extremo.
¿Qué nos dice el árbol filogenético universal sobre el
¿origen de la vida? Cerca del centro hay una línea llamada "Raíz". Esto es
donde los datos indican el último ancestro común a los tres dominios debe colocarse
bacterias (no hay ramas aquí porque no hay

no existe tal organismo existente). La raíz, u origen de la vida moderna, es
en la rama bacteriana; parece que Archaea y Eu carya evolucionaron
Flavobacteria
independientemente, separadas de Bacteria. Siguiendo las líneas de descenso
clorobio desde la raíz, hacia el
leptonema temperatura
bajo Archaea y Eucarya, es evidente que compartían

Clostridium
Bacilo ascendencia pero divergieron y se convirtieron en dominios separados. La evolución
Marina
heliobacteria común de estas dos formas de vida es aún evidente en la
Termoplasma
Arqueoglobo
Arthrobacter
pOPS19 forma en que Archaea y Eucarya procesan la formación genética. Por ejemplo, las
Haloferax
cloroflexo
Termo Metanospirillum ARN polimerasas de Eucarya
termotoga
pOPS66 Médico de Marina. 1 temperatura baja y las Archaea se parecen entre sí, con exclusión de las Bacterias. De ello se deduce
Raíz 22 12
que las bacterias utilizan la subunidad sigma de la ARN polimerasa para iniciar la
EM17
Sulfolobus transcripción génica, mientras que Archaea y
los eucariotas usan los llamados sitios de unión TATA, como se discute en
arqueas
capítulos 11 y 20. Así, el árbol filogenético universal presenta
Homo
una imagen por la cual toda la vida, independientemente del dominio eventual, surgió
Zea (maíz)
criptomonas 0.1 cambios por sitio de un solo ancestro común. Uno puede imaginar lo universal
Aclia árbol de la vida como un árbol real que crece de una sola semilla.
Costaría
porfira Sin duda, hay hipótesis alternativas. Una noción es que
los dominios Bacteria y Eucarya surgieron de forma relativamente independiente,
Giardia
y las Archaea son un mosaico, con rasgos combinados de los otros
dos. Este punto de vista se basa en gran medida en la observación de que, si bien el
Archaea comparte un gran número de genes con Eucarya, tienen una
número aún mayor de genes en común con las bacterias. Otra interpretación
eucaria sugiere que los primeros eucariotas surgieron de dos ancestros procariotas
antiguos: un archaeon y una bacteria. Esta
la noción se explora más aquí.
Como hemos visto, los genes tanto de Archaea como de Bacteria se pueden
Figura 19.3 Árbol filogenético universal. Estos evolutivos encontrar en los cromosomas eucarióticos, pero ¿cómo llegaron ?
las relaciones se basan en comparaciones de secuencias de ARNr. Longitud de ¿allí? Mientras que el árbol filogenético universal indica que los genes comunes
ramas indica relaciones evolutivas entre organismos pero reflejan un solo ancestro común, la fusión del genoma
sin tiempo. Los microbios están impresos en negro. La hipótesis intenta explicar la evolución del núcleo. Esta
hipótesis afirma que ciertos genes arqueales y bacterianos fueron una -proteobacteria que quedó engullida en una célula precursora
combinados para formar un único genoma eucariótico. Sugiere que las antiguas y proporcionó una función que era esencial para la célula huésped. Puede
células arqueas fueron invadidas por gramnegativos primitivos. ser que la toxicidad del oxígeno se eliminó porque el intracelular
proteobacterias. Se cree que las arqueas conservaron la La bacteria usó la respiración aeróbica para generar ATP. A cambio, el
bacterias porque estas últimas realizaron alguna proeza metabólica que anfitrión proporcionó nutrientes y un lugar seguro para vivir. Estas bacterias
confirió una ventaja de supervivencia a su anfitrión. eventualmente genes Los endosimbiontes evolucionaron para convertirse en mitocondrias. Esta hipótesis
necesarios para una vida independiente se perdieron a causa de la bacteria mientras también explica la evolución de los cloroplastos a partir de una cianobacteria
algunos genes esenciales se transfirieron al protonúcleo del huésped. endosimbiótica. Actualmente la cianobacteria
Las proteobacterias (capítulo 22) Procloron se ha convertido en un candidato favorito como el pariente existente
de la cianobacteria endosimbiótica que dio origen a las algas verdes
y cloroplastos vegetales. Este microbio vive dentro de los invertebrados marinos y
El origen endosimbiótico de las es el único procariota que tiene clorofila a y
mitocondrias y los cloroplastos b, pero no ficobilinas. Esto hace que Prochloron sea más similar a
En contraste con el origen no resuelto del núcleo, la hipótesis endosimbiótica
cloroplastos. Bacterias fotosintéticas: Phylum Cyanobacteria (sección 21.3)
generalmente se acepta como el origen de las mitocondrias y los cloroplastos. Esa Recientemente, se ha propuesto una teoría adicional de la endosimbiosis. La
endosimbiosis fue responsable hipótesis del hidrógeno afirma que el endosimbionte
para el desarrollo de estos orgánulos (independientemente de la exacta era una proteobacteria anaeróbica que producía H2 y CO2
mecanismo) se apoya en el hecho de que ambos orgánulos tienen como productos finales de la fermentación. En ausencia de un H2 externo
ribosomas de tipo bacteriano y la mayoría tiene un solo cromosoma circular. De fuente, el huésped se volvió dependiente de la bacteria, lo que hizo
hecho, la inspección de la figura 19.3 muestra que las mitocondrias y los cloroplastos ATP por fosforilación a nivel de sustrato. En última instancia, el en dosimbionte se
pertenecen al linaje bacteriano. Importante convirtió en uno de los dos orgánulos. Si el endosimbionte desarrolló la capacidad
la evidencia del origen de las mitocondrias proviene del genoma de realizar la respiración aeróbica,
secuencia de la -proteobacterium Rickettsia prowazekii, un parásito intracelular evolucionó hasta convertirse en una mitocondria. Sin embargo, en aquellos casos en que el
obligado. Su genoma está más estrechamente relacionado con endosimbionte no adquirió la capacidad de respirar, se convirtió en
el de los genomas mitocondriales modernos que el de cualquier otra bacteria. Se un hidrogenosoma: un orgánulo que se encuentra en algunos protistas existentes
cree que las mitocondrias descienden de tales
que producen ATP por fermentación (figura 19.4). Mientras que algunos son-
Orgánicos
Glucosa
glucólisis
atp
piruvato
(a) hidrogenosoma
piruvato
atp
atp
acetato
H2
CO2
(B) (C)
Figura 19.4 Hidrogenosomas de Trichomonas vaginalis. (a) Imagen de contraste de interferencia diferencial del protista Trichomonas
vaginal. (b) Hidrogenosomas de la célula T. vaginalis que se muestra en (a) marcados con un anticuerpo rojo fluorescente que reconoce el
enzima málica específica del hidrogenosoma. (c) El diagrama esquemático de un hidrogenosoma muestra la función de la fosforilación a nivel de sustrato.
Introducción a la clasificación y taxonomía microbiana 477
cree que los hidrogenosomas podrían derivarse de las mitocondrias,

tres líneas de evidencia actualmente apoyan la idea alternativa de que
Los hidrogenosomas y las mitocondrias surgieron del mismo origen ancestral.
orgánulo: (1) Las proteínas de choque térmico de proteobacterias, mitocondrias e
hidrogenosomas están estrechamente relacionadas; (2) subunidades de
la enzima mitocondrial NADH deshidrogenasa son activas en el
hidrogenosomas del protista Trichomonas vaginalis; y (3) el especie 2
genoma primitivo encontrado en los hidrogenosomas del protista

Nyctotherus ovalis codifica componentes de una cadena de transporte de electrones
especie 1
mitocondrial. En conjunto, estos datos sugieren que las mitocondrias y los hidrogenosomas
son versiones aeróbicas y anaeróbicas.
del mismo orgánulo ancestral. Los protistas (capítulo 25)
Hora
Finalmente, la teoría endosimbiótica propuesta por Lynn Margulis
y sus colegas combina elementos del origen endosimbiótico de las mitocondrias con la
Figura 19.5 Equilibrios puntuados. Esta teoría describe
hipótesis de la fusión del genoma. La teoría endosimbiótica serial (SET) exige el
desarrollo de la tasa de evolución como resultado de cambios periódicos y abruptos en la
eucariotas en una serie de pasos endosimbióticos discretos. Esta teoría sugiere que la ambiente. Estos cambios interrumpen el ritmo lento y constante de
motilidad evolucionó primero a través de la endosimbiosis. evolución, lo que resulta en períodos de especiación relativamente rápida. En el
entre espiroquetas anaerobias y otra anaerobia. A continuación, se cree que los núcleos diagrama que se muestra aquí, las especies 1 y 2 surgieron siguiendo tales
se formaron por el desarrollo de cambios ambientales drásticos.
membranas Estas primeras formas nucleadas habrían sido similares a los protistas
modernos con hidrogenosomas. el endosimbiótico
Se cree que los eventos necesarios para la evolución de las mitocondrias ies diseñados para evaluar la competencia entre poblaciones microbianas
han ocurrido más tarde, dando lugar a los primeros hongos y células animales, ha dado lugar a algunas observaciones sorprendentes. Se había pensado que
con eventos endosimbióticos posteriores que conducen al desarrollo de cloroplastos y diferencias genéticas muy pequeñas entre las poblaciones microbianas de
plantas. las mismas especies tenían poca importancia evolutiva. Sin embargo, los experimentos de
laboratorio demuestran que cuando la selección es
aplicadas, diferencias genéticas muy pequeñas pueden dar como resultado que una
Procesos evolutivos población supere a otra. Estos análisis recientes ayudan a iluminar el
Claramente, la figura 19.3 demuestra el asombroso nivel de diversidad microbiana que los mecanismos potenciales por los cuales se produjo el vasto nivel de diversidad
refleja cientos de millones de años de evolución. La aplicación de la teoría de la selección microbiana y ayudarán a orientar los estudios futuros. Mecanismos de
natural de Darwin a diversidad genética (capítulo 13); Genómica comparativa (sección 15.6)
la evolución microbiana requiere una consideración especial. anagénesis,
también conocido como microevolución, se refiere a pequeños cambios genéticos aleatorios
1. ¿Por qué se cree que el ARN es la primera biomolécula autorreplicante?
cambios que ocurren a lo largo de generaciones para impulsar lentamente la especiación
2. ¿Cómo es la evidencia de que Archaea y Bacteria comparten genes comunes?
o la extinción, las cuales son formas de macroevolución.
interpretado en la teoría universal del árbol de la vida? ¿En la hipótesis de la fusión del
Ni la microevolución ni la macroevolución ocurren a una constante
genoma? ¿Qué teoría prefieres? ¿Por qué?
calificar. En cambio, el registro fósil muestra que el ritmo lento y constante
3. Explique la hipótesis endosimbiótica del origen de las mitocondrias y
de la evolución se interrumpe periódicamente por rápidos estallidos de especiación
cloroplastos. Enumere dos piezas de evidencia que apoyen esta hipótesis.
impulsados por cambios abruptos en el medio ambiente (figura 19.5).
4. ¿Qué es un hidrogenosoma? ¿Por qué se piensa que las mitocondrias y hy
Este fenómeno se denomina equilibrio puntuado y fue introducido por Niles Eldredge y
¿Los drogenosomas surgieron de un único orgánulo progenitor común? Qué es
el difunto Steven Jay Gould. los
una hipótesis alternativa?
La teoría de los equilibrios puntuados es una razón importante por la que la distancia 5. ¿Cuál es la diferencia entre macroevolución y microevolución? Defina equilibrios
evolutiva, medida por la similitud de los genes en los organismos vivos, proporciona poca
puntuados. ¿Por qué ayuda esta teoría a explicar por qué
o ninguna información sobre cuándo
árbol filogenético universal no puede ilustrar la velocidad a la que ocurrió la
se produjo una divergencia evolutiva.
evolución de los organismos?
La evolución procariótica da como resultado la generación de diversidad microbiana
sobre la cual los procesos selectivos determinan el desarrollo
de nuevas especies. Recuerde que la diversidad genética en Archaea y
Las bacterias deben ocurrir asexualmente. Así, los cambios genéticos hereditarios en
19.2 INTRODUCCIÓN A LOS MICROBIANOS
estos organismos se introducen principalmente por dos mecanismos:
CLASIFICACIÓN Y TAXONOMÍA
mutación y transferencia genética lateral (horizontal) (LGT). La secuenciación del genoma
ha revelado que LGT, particularmente en forma de transposición y transferencia de genes Los microbiólogos se enfrentan a la abrumadora tarea de comprender
mediada por fagos (transducción), aparece la diversidad de formas de vida que no se pueden ver a simple vista
ser más importante de lo que se pensaba. Además, modelo semental pero puede vivir aparentemente en cualquier parte de la Tierra. Una de las primeras herramientas.
necesaria para examinar este nivel de diversidad es una clasificación fiable Clasificación fenética
sistema. Taxonomía (griego taxis, arreglo u orden, y
Durante mucho tiempo, los taxónomos microbianos se basaron exclusivamente en
nomos, ley, o nemein, distribuir o gobernar) se define como la
un sistema fenético, que agrupa a los organismos en función de
ciencia de la clasificación biológica. En un sentido más amplio consiste
la similitud mutua de sus características fenotípicas. Esta
de tres partes separadas pero interrelacionadas: clasificación, nomenclatura e
El sistema de clasificación logró poner orden en la biología.
identificación. Una vez que se selecciona un esquema de clasificación,
diversidad y aclaró la función de las estructuras morfológicas.
se utiliza para organizar organismos en grupos llamados taxones (s., taxón)
Por ejemplo, porque la motilidad y los flagelos siempre están asociados
basado en la similitud mutua. La nomenclatura es la rama de la taxonomía que
en microorganismos particulares, es razonable suponer que los flagelos están
se ocupa de la asignación de nombres a
involucrados en al menos algunos tipos de motilidad. Aunque
grupos de acuerdo con las reglas publicadas. La identificación es la
estudios fenéticos pueden revelar posibles relaciones evolutivas,
lado práctico de la taxonomía, el proceso de determinar si un aislado en particular
no dependen del análisis filogenético. ellos comparan
pertenece a un taxón reconocido. El término sistemática
muchos rasgos sin asumir que cualquier característica es filogenéticamente más
se utiliza a menudo para la taxonomía. Sin embargo, muchos taxónomos definen
importante que otras, es decir, los rasgos no ponderados son
sistemática en términos más generales como “el estudio científico de los
empleados para estimar la similitud general. obviamente lo mejor
organismos con el objetivo último de caracterizar y ordenar
La clasificación fenética se construye comparando tantos
ellos de manera ordenada.” Cualquier estudio de la naturaleza de los organismos,
atributos como sea posible. Organismos que comparten muchas características.
cuando el conocimiento adquirido se utiliza en taxonomía, es parte de la
forman un solo grupo o taxón.
sistemática. Así, la sistemática abarca disciplinas como la morfología, la ecología,
la epidemiología, la bioquímica, la biología molecular, la
y fisiología. Clasificación filogenética
Uno de los sistemas de clasificación más antiguos, llamado clasificación Con la publicación en 1859 de Darwin's On the Origin of
natural, ordena los organismos en grupos cuyos miembros comparten especies, los biólogos comenzaron a desarrollar filogenéticos o filéticos
muchas características y refleja tanto como sea posible la naturaleza biológica sistemas de clasificación que buscaban comparar organismos en el
de los organismos. El botánico sueco Carl von Linné, o base de las relaciones evolutivas. El término filogenia (del griego
Carolus Linnaeus , como a menudo se le llama, desarrolló el primer natural phylon, tribu o raza, y génesis, generación u origen) se refiere a
clasificación, basada en gran medida en las características anatómicas, en el el desarrollo evolutivo de una especie. Los científicos se dieron cuenta
mediados del siglo XVIII. Fue una gran mejora con respecto a que cuando observaron diferencias y similitudes entre organismos como resultado
sistemas artificiales previamente empleados porque el conocimiento de un de procesos evolutivos, también ganaron
la posición del organismo en el esquema proporcionó información sobre conocimiento de la historia de la vida en la Tierra. Sin embargo, durante gran parte
muchas de sus propiedades. Por ejemplo, la clasificación de los seres humanos como En el siglo XX, los microbiólogos no pudieron emplear eficazmente los sistemas
mamíferos denota que tienen pelo, temperatura corporal autorreguladora y de clasificación filogenética, principalmente debido a
glándulas mamarias productoras de leche en la hembra. la falta de un buen registro fósil. Cuando Woese y Fox propusieron
Cuando la clasificación natural se aplica a organismos superiores, El uso de secuencias de nucleótidos de ARNr para evaluar las relaciones
Las relaciones evolutivas se hacen evidentes simplemente porque la evolutivas entre microorganismos abrió la puerta a la resolución de preguntas de
La morfología de una estructura dada (p. ej., alas) en una variedad de organismos larga data sobre el origen y
(patos, pájaros cantores, halcones) sugiere cómo esa estructura evolución de la mayoría de las formas de vida en la Tierra: los microbios.
podría haber sido modificado para adaptarse a entornos específicos o La validez de este enfoque ahora es ampliamente aceptada y hay
comportamientos Sin embargo, la asignación taxonómica de los microbios es actualmente hay más de 200.000 secuencias de ARNr 16S y 18S diferentes en
no necesariamente enraizado en la relación evolutiva. Por ejemplo, las bases de datos internacionales GenBank y Ribosomal Database Project (RDP-
patógenos bacterianos y microbios de importancia industrial fueron II). Como se discute más adelante (p. 485), el
nombres dados históricamente que describen las enfermedades que causan o El poder del ARNr como herramienta filogenética y taxonómica se basa en
los procesos que realizan (es decir, Vibrio cholerae, Clostridium las características de la molécula de ARNr que la convierten en un buen indicador
tetani y Lactococcus lactis). Aunque estas etiquetas son de uso práctico, hacen de la historia evolutiva y el tamaño cada vez mayor del rRNA
poco para guiar al taxonomista interesado en el base de datos de secuencias
gran mayoría de microbios que no son ni patógenos ni de consecuencia industrial.
Nuestra comprensión reciente de las relaciones evolutivas entre los microbios
ahora sirve como base teórica. Clasificación genotípica
base para la clasificación taxonómica. Actualmente existen muchas formas en las que el genotipo de un microbio puede
En la práctica, la determinación del género y la especie de un nuevo evaluarse en términos taxonómicos. Algunas de estas técnicas se analizan más
procariota descubierto se basa en la taxonomía polifásica. Esta adelante en este capítulo (sección 19.4). En general,
El enfoque incluye características fenotípicas, filogenéticas y genotípicas. Para clasificación genotípica busca comparar la similitud genética
comprender cómo se incorporan todos estos datos en un entre organismos. Los genes individuales o los genomas completos pueden ser
perfil coherente de criterios taxonómicos, primero debemos considerar el comparado. Desde la década de 1970, se ha aceptado ampliamente que los
componentes individuales y determinar cómo se evalúan procariotas cuyos genomas son al menos 70% homólogos pertenecen a
cuantitativamente a través de la taxonomía numérica. la misma especie Desafortunadamente, este valor umbral del 70% fue escaso.
Introducción a la clasificación y taxonomía microbiana 479
establecido para evitar la interrupción de las asignaciones de especies existentes; está

Tabla 19.2 Cálculo de coeficientes de asociación
no se basa en consideraciones teóricas sobre la identidad de las especies.
para dos organismos
Afortunadamente, los datos genéticos obtenidos utilizando enfoques moleculares más
nuevos suelen coincidir con estas asignaciones más antiguas. En este ejemplo, los organismos A y B se comparan en términos de
personajes que comparten y no comparten. Los términos de la asociación
Las ecuaciones de los coeficientes se definen de la siguiente manera:
Taxonomía numérica
El desarrollo de las computadoras ha hecho posible el enfoque cuantitativo conocido Organismo B
1 0
como taxonomía numérica. Peter HA Sneath
y Robert Sokal han definido la taxonomía numérica como “la
1 a B
agrupación por métodos numéricos de unidades taxonómicas en taxones
la base de sus estados de carácter.” La información sobre las propiedades de los
Organismo A
organismos se convierte en una forma adecuada para el análisis numérico.
0 C D
análisis y luego se comparan por medio de una computadora. La clasificación
resultante se basa en la similitud general juzgada por la comparación de muchas
características, a cada una de las cuales se les da el mismo peso. Esta
un número de caracteres codificados como presentes (1) para ambos organismos
Este enfoque no era factible antes de la llegada de las computadoras debido a la gran
b y c números de caracteres que difieren (1,0 o 0,1) entre el
cantidad de cálculos involucrados.
dos organismos
El proceso comienza con una determinación de la presencia o
d número de caracteres ausentes (0) en ambos organismos
ausencia de caracteres seleccionados en el grupo de organismos bajo
Número total de caracteres comparados abcd
estudio. Un carácter generalmente se define como un atributo sobre el cual un
se puede hacer una sola declaración. Muchos caracteres, al menos 50 y
preferiblemente varios cientos, deben compararse para obtener una a + re
El coeficiente de coincidencia simple (SSM)
y clasificación fiable. Lo mejor es incluir muchos diferentes a+b+c+d
tipos de datos: morfológicos, bioquímicos y fisiológicos. a
Después del análisis de caracteres, un coeficiente de asociación, una función El coeficiente de Jaccard (SJ)
a+b+c
que mide la concordancia entre caracteres poseídos por
dos organismos, se calcula para cada par de organismos en el
grupo. El coeficiente de coincidencia simple (SSM), el coeficiente más utilizado en
bacteriología, es la proporción de caracteres que coinciden independientemente de si
el atributo está presente o no.
ausente (tabla 19.2). A veces, el coeficiente de Jaccard (SJ) es La importancia de estos grupos o fenómenos en la tradición
calculado ignorando cualquier carácter que ambos organismos carezcan términos taxonómicos no siempre es evidente, y los niveles de similitud
(tabla 19.2). Ambos coeficientes aumentan linealmente en valor desde 0.0 en qué grupos se etiquetan como especies, géneros, etc., es una cuestión de juicio. A
(sin coincidencias) a 1.0 (100% de coincidencias). veces, los grupos se denominan simplemente fenómenos.
Los coeficientes de coincidencia simples, u otros coeficientes de asociación, se y precedido por un número que muestra el nivel de similitud por encima
organizan para formar una matriz de similitud. Esto es un que aparecen (por ejemplo, un 70-phenon es un phenon con 70% o
matriz en la que las filas y columnas representan organismos, y mayor similitud entre sus constituyentes). Fenómenos formados en
cada valor es un coeficiente de asociación que mide la similitud alrededor del 80% de similitud a menudo son equivalentes a especies.
de dos organismos diferentes para que cada organismo se compare con La taxonomía numérica ha demostrado ser una poderosa herramienta en la
todos los demás de la tabla (figura 19.6a). Organismos con gran taxonomía microbiana. Aunque a menudo simplemente ha reconfirmado esquemas
semejanza se agrupan y se separan de organismos diferentes (figura 19.6b); tales de clasificación ya existentes, a veces aceptados
grupos de organismos se denominan fenómenos (a veces llamados fenómenos). las clasificaciones se encuentran deficientes. Métodos taxonómicos numéricos
también se puede utilizar para comparar secuencias de macromoléculas tales
Los resultados del análisis taxonómico numérico a menudo se resumen con un como ARN y proteínas.
diagrama en forma de árbol llamado dendrograma (figura
19.6c). El diagrama generalmente se coloca de lado con el eje X
1. ¿Qué es una clasificación natural?
o abscisa graduada en unidades de semejanza. Cada punto de bifurcación es
2. ¿Qué es la taxonomía polifásica y qué tres tipos de datos considera?
en el valor de similitud que relaciona las dos ramas. los organismos
3. ¿Qué es la taxonomía numérica y por qué las computadoras son tan importantes para esto?
en las dos ramas comparten tantas características que los dos
¿Acercarse?
se ve que los grupos están separados solo después de examinar los coeficientes de
4. Defina los siguientes términos: coeficiente de asociación, coeficiente de coincidencia
asociación mayores que la magnitud del punto de ramificación
simple, coeficiente de Jaccard, matriz de similitud, fenómeno y dendrograma.
valor. Debajo del valor del punto de bifurcación, los dos grupos parecen estar
5. ¿Qué par de especies tiene más similitud mutua, un par con un coeficiente de
una. La ordenada en un dendrograma de este tipo no tiene un significado especial, y
asociación de 0,9 o uno con un coeficiente de 0,6? ¿Por qué?
los grupos pueden disponerse en cualquier orden conveniente.
bacterias
1 235 64
100
90
80
70
% de similitud
60
100%
1 1.0 1
50
ÿ90% similitud
de
%
2 0,92 1.0 2
40
80–90%
3 0.81 0.77 1.0 3
Bacteria Bacteria
30
70–80%
4 0.27 0.31 0.29 1.0 5
40–50% 20
5 0.43 0.41 0,45 0.30 1.0 6

30–40% 10
6 0.38 0.42 0.44 0.32 0,72 1,0 4 20-30%

0
123456 4 5 6 123
Bacteria Bacteria
(a) (B) (C)
Figura 19.6 Agrupamiento y dendogramas en taxonomía numérica. (a) Una pequeña matriz de similitud que compara seis cepas de bacterias.
El grado de similitud varía desde ninguna (0.0) hasta similitud completa (1.0). (b) Las bacterias se han reorganizado y unido para formar grupos de cepas similares. Por ejemplo,
las cepas 1 y 2 son las más similares. El grupo de 1 más 2 es bastante similar a la cepa 3, pero no en absoluto a la cepa 4. (c) Un dendrograma que muestra los resultados del
análisis en la parte (b). Las cepas 1 y 2 son miembros de un fenómeno de 90 y las cepas 1 a 3 forman un fenómeno de 80.
Si bien las cepas 1–3 pueden ser miembros de una sola especie, es muy poco probable que las cepas 4–6 pertenezcan a la misma especie que la 1–3.
reproducción sexual pero falla con muchos microorganismos porque no se

19.3 RANGOS TAXONÓMICOS
reproducen sexualmente. Como hemos comentado, las especies procarióticas
La clasificación de los microbios implica ubicarlos dentro de niveles se caracterizan por criterios fenotípicos, genotípicos y filogenéticos. Una
taxonómicos jerárquicos. Los microbios en cada nivel o rango comparten un especie procariótica es una colección de cepas que comparten muchas
conjunto común de características específicas. Los rangos están dispuestos propiedades estables y difieren significativamente de otros grupos de cepas.
en una jerarquía que no se superpone, de modo que cada nivel incluye no Una cepa consta de los descendientes de un solo cultivo microbiano puro.
solo los rasgos que definen el rango superior, sino también un nuevo conjunto La definición de una especie procariótica es subjetiva y puede interpretarse
de rasgos más restrictivos (figura 19.7). El rango más alto es el dominio, y de muchas maneras. Con una cantidad cada vez mayor de datos de
todos los procariotas pertenecen a Bacteria o Archaea. Dentro de cada secuencias del genoma, algunos han argumentado que la definición de una
dominio, cada microbio se asigna (en orden descendente) a un filo, clase, especie procariótica necesita una revisión adicional. Tal vez una especie
orden, familia, género y especie (tabla 19.3). debería ser la colección de organismos que comparten las mismas secuencias
Algunos procariotas también reciben una designación de subespecie. Los en sus genes básicos de mantenimiento (genes que codifican productos que
grupos microbianos en cada nivel tienen un sufijo específico que indica ese son requeridos por todas las células y que normalmente se expresan
rango o nivel. Los microbiólogos a menudo usan nombres informales en lugar continuamente). Tomará mucho más trabajo resolver este problema complejo.
de nombres formales y jerárquicos. Ejemplos típicos de tales nombres son Cualquiera que sea la definición, idealmente una especie también debería
bacterias púrpuras, espiroquetas, bacterias oxidantes de metano, bacterias ser fenotípicamente distinguible de otras especies similares.
reductoras de sulfato y bacterias del ácido láctico. Como veremos, estos Hay varias formas diferentes en las que se pueden describir las cepas
nombres informales pueden no tener importancia taxonómica, ya que pueden dentro de una especie. Los biovares son cepas variantes caracterizadas por
incluir especies de varios filos. Un buen ejemplo de esto son las “bacterias diferencias bioquímicas o fisiológicas, los morfovares difieren
del azufre”. morfológicamente y los serovares tienen propiedades antigénicas distintivas.
El grupo taxonómico básico en la taxonomía microbiana es la especie. Para cada especie, una cepa se designa como cepa tipo. Por lo general, es
Los taxónomos que trabajan con organismos superiores definen el término una de las primeras cepas estudiadas y, a menudo, se caracteriza más
especie de manera diferente a como lo hacen los microbiólogos. Las especies completamente que otras cepas; sin embargo, no tiene que ser el miembro
de organismos superiores son grupos de poblaciones naturales entrecruzadas más representativo. La cepa tipo para la especie se denomina especie tipo y
o potencialmente entrecruzadas que están reproductivamente aisladas de es el tipo nomenclatural o el titular del nombre de la especie. Un tipo
otros grupos. Esta es una definición satisfactoria para los organismos capaces de nomenclatural es un dispositivo para en-
Técnicas para Determinar la Taxonomía y Filogenia Microbiana 481
Dominio bacterias
Filo proteobacteria
Clase ÿ-proteobacteria ÿ-Proteobacteria ÿ-Proteobacteria ÿ-Proteobacteria ÿ-Proteobacteria
Pedido Cromatiales Tiotrichales Legionellales Pseudomonadales Vibrionales Pasteurellales Enterobacteriales
Familia enterobacterias
Género Enterobacter Escherichia Klebsiella Proteo Salmonela Serratia Shigela Yersinia
Especies S. boydii S. dysenteriae S. flexneri S. sonnei
Figura 19.7 Disposición jerárquica en taxonomía. En este ejemplo, los miembros del género Shigella se ubican dentro de categorías taxonómicas superiores.
rangos No se dan todas las posibilidades de clasificación para cada rango para simplificar el diagrama. Tenga en cuenta que -ales denota orden y -ceae indica familia.
Lactococcus, basado en análisis de rRNA y otras características.

Tabla 19.3 Un ejemplo de rangos y nombres taxonómicos
Así Streptococcus faecalis es ahora Enterococcus faecalis. Con frecuencia
Rango Ejemplo el nombre se abreviará abreviando el nombre del género con
una sola letra mayúscula, por ejemplo E. coli. Una nueva procariota
Dominio bacterias
la especie no puede ser reconocida hasta que haya sido publicada en el International
Filo proteobacteria
Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology; hasta ese momento, el nombre de
Clase gammaproteobacteria la nueva especie aparecerá en
Pedido Enterobacteriales comillas. Manual de Bergey de Bacteriología Sistemática
Familia enterobacterias contiene el sistema actualmente aceptado de taxonomía procariótica
Género Shigela y se analiza más adelante en la sección 19.8.
Especies S. dysenteriae
1. ¿Cuál es la diferencia entre una especie procariótica y una cepa?
2. Definir morfovar, serovar y cepa tipo.
3. ¿Cuál es la forma correcta de escribir el nombre de este microbio: bacillus subtilis,
permanencia segura de los nombres cuando se produzcan reordenamientos taxonómicos. ¿Bacillus subtilis, Bacillus subtilis o Bacillus subtilis? identificar el género
lugar. Cuando se produzcan revisiones de nomenclatura, la especie tipo debe nombre y el nombre de la especie. Verifica tus respuestas consultando el texto.
permanecer dentro del género del cual es el tipo nomenclatural. Solamente
aquellas cepas muy similares a la cepa tipo oa la especie tipo se incluyen en una
especie. Cada especie se asigna a un género, la siguiente
rango en la jerarquía taxonómica. Un género es un grupo bien definido. 19.4 TÉCNICAS DE DETERMINACIÓN MICROBIANA
de una o más especies que está claramente separada de otros géneros. TAXONOMÍA Y FILOGENIA
En la práctica, existe una considerable subjetividad en la asignación de especies a
Se utilizan muchos enfoques diferentes para clasificar e identificar
un género, y los taxónomos pueden estar en desacuerdo sobre la composición de
microorganismos Para mayor claridad, se han dividido en dos
géneros
grupos: clasico y molecular. Los métodos empleados a menudo en la identificación
Los microbiólogos nombran los microorganismos utilizando el sistema binomial
rutinaria de bacterias en el laboratorio se tratan en el capítulo sobre microbiología clínica
de Linneo. El nombre latinizado y en cursiva consta de dos partes. La primera parte, en
(véase el capítulo 35).
mayúscula, es la
nombre genérico, y el segundo es el nombre de la especie sin mayúsculas
o epíteto específico (p. ej., Escherichia coli). El nombre de la especie es Características clásicas
estable; el epíteto más antiguo para un organismo en particular tiene prioridad y debe Los enfoques clásicos de la taxonomía hacen uso de morfológicos,
usarse. Por el contrario, un nombre genérico puede cambiar características fisiológicas, bioquímicas, ecológicas y genéticas. Estas características
si el organismo se asigna a otro género debido a nueva información. Por ejemplo, se han empleado en la taxonomía microbiana durante muchos años. Son bastante útiles
algunos miembros del género Strepto coccus se colocaron en dos nuevos géneros, en la rutina.
Enterococcus y identificación y también puede proporcionar información filogenética.
Características morfológicas
Tabla 19.5 Algunas alteraciones fisiológicas y metabólicas
Las características morfológicas son importantes en la taxonomía microbiana para
Características utilizadas en la clasificación e
muchas razones. La morfología es fácil de estudiar y analizar, en particular en los
identificación
microorganismos eucarióticos y las procariotas más complejas. Además, las
comparaciones morfológicas son valiosas porque Fuentes de carbono y nitrógeno
características estructurales dependen de la expresión de muchos genes, son Constituyentes de la pared celular
generalmente genéticamente estables, y normalmente (al menos en eucariotas) no Fuentes de energia

no varían mucho con los cambios ambientales. Así morfológico
productos de fermentación
la similitud a menudo es una buena indicación de la relación filogenética.
Tipo nutricional general
Muchas características morfológicas diferentes se emplean en la
Temperatura óptima de crecimiento y rango
clasificación e identificación de microorganismos (tabla 19.4).
Luminiscencia
Aunque el microscopio óptico siempre ha sido una herramienta muy importante
Mecanismos de conversión de energía.
herramienta, su límite de resolución de alrededor de 0,2 m reduce su utilidad en
ver microorganismos y estructuras más pequeñas. La transmisión Motilidad
Tolerancia osmótica
y microscopios electrónicos de barrido, con su mayor resolución,
han ayudado enormemente al estudio de todos los grupos microbianos. Relaciones de oxígeno
Microscopía y preparación de muestras (capítulo 2) pH óptimo y rango de crecimiento
Pigmentos fotosintéticos
Características fisiológicas y metabólicas Requerimientos de sal y tolerancia
Las características fisiológicas y metabólicas son muy útiles porque están Metabolitos secundarios formados
directamente relacionadas con la naturaleza y actividad de las enzimas
Sensibilidad a inhibidores metabólicos y antibióticos
microbianas y las proteínas de transporte. Dado que las proteínas son genes
inclusiones de almacenamiento
productos, el análisis de estas características proporciona una indirecta
comparación de genomas microbianos. La tabla 19.5 enumera algunos de los
más importante de estas propiedades. tales como los requisitos de temperatura, pH, oxígeno y osmótica
concentración. Muchos requisitos de crecimiento también se consideran
Características ecológicas características fisiológicas (tabla 19.5). Interacciones microbianas
La capacidad de un microorganismo para colonizar un ambiente específico. (sección 30.1); La influencia de los factores ambientales en el crecimiento (sección 6.5)
tiene valor taxonómico. Algunos microbios pueden ser muy similares en
muchos otros aspectos, pero habitan en diferentes nichos ecológicos, lo que sugiere que Análisis genético
pueden no estar tan estrechamente relacionados como se sospechaba al principio. Algunos Debido a que la mayoría de los eucariotas son capaces de reproducirse sexualmente, genéticamente
ejemplos de propiedades ecológicas taxonómicamente importantes son El análisis ha sido bastante útil en la clasificación de estos organismos. Como se
patrones de ciclo de vida; la naturaleza de las relaciones simbióticas; la capacidad mencionó anteriormente, la especie se define en términos de
de causar enfermedad en un huésped particular; y preferencias de hábitat reproducción sexual cuando sea posible. Aunque los procariotas no
reproducirse sexualmente, el estudio del intercambio de genes cromosómicos
a través de la transformación, la conjugación y la transducción es a veces útil en
su clasificación.
Cuadro 19.4 Algunas características morfológicas utilizadas
en la clasificación e identificación La transformación puede ocurrir entre diferentes procariotas
especies, pero rara vez entre géneros. la demostración de
Rasgo Grupos microbianos
La transformación entre dos cepas proporciona evidencia de una estrecha relación
forma de celda Todos los grupos principalesa ya que la transformación no puede ocurrir a menos que los genomas
Tamaño de celda Todos los grupos principales
son bastante similares. Se han llevado a cabo estudios de transformación.
con varios géneros: Bacillus, Micrococcus, Haemophilus, Rhizo bium, y otros. A
Morfología colonial Todos los grupos principales
Características ultraestructurales
pesar de la utilidad de la transformación, sus resultados
Todos los grupos principales
a veces son difíciles de interpretar porque la ausencia de transformación puede
Comportamiento de tinción bacterias, algunos hongos
deberse a factores distintos de las diferencias importantes en el ADN.
Cilios y flagelos Todos los grupos principales
secuencia. Transformación de ADN (sección 13.8)
Mecanismo de motilidad Bacterias deslizantes, espiroquetas
Los estudios de conjugación también arrojan datos taxonómicamente útiles,
Forma y ubicación de las endosporas. Bacterias formadoras de endosporas
en particular con las bacterias entéricas. Por ejemplo, Escherichia puede dergo
Morfología y ubicación de las esporas. Bacterias, protistas, hongos conjugación con los géneros Salmonella y Shigella pero no
inclusiones celulares Todos los grupos principales con Proteo y Enterobacter. Estas observaciones encajan con otras
Color Todos los grupos principales datos que muestran que los tres primeros de estos géneros están más
estrechamente relacionados entre sí que con Proteus y Enterobacter. estafa bacteriana
a
Se utiliza para clasificar e identificar al menos algunas bacterias, hongos y protistas. jugación (sección 13.7); Clase Gammaproteobacteria: Orden Enterbacteriales
(sección 22.3)
Los plásmidos son importantes taxonómicamente porque pueden confundir el 1.5

análisis de los rasgos fenotípicos. La mayoría de los géneros microbianos portan
plásmidos y algunos plásmidos se transmiten de un microbio a otro con relativa
1.4
facilidad. Cuando tales plásmidos codifican un fenotipo
rasgo (o rasgos) que se está utilizando para desarrollar un esquema taxonómico,
1.3
el investigador puede suponer que el rasgo está codificado por genes cromosómicos.
Así, las características fenéticas de un microbio se malinterpretan y su grado relativo
de relación con otro microbio puede
1.2
ser sobreestimado. Por ejemplo, la producción de sulfuro de hidrógeno y

fermentación de lactosa son muy importantes en la taxonomía de las bacterias 1.1
entéricas, sin embargo, los genes para ambos rasgos pueden estar en los plásmidos como
así como los cromosomas bacterianos. Hay que tener cuidado para evitar errores. 1.0
como resultado de rasgos transmitidos por plásmidos. Plásmidos (sección 3.5) 70ºC 80ºC Tm 90ºC 100ºC
Figura 19.8 Curva de fusión del ADN. Se indica la Tm .

Características moleculares
Es difícil sobreestimar cómo el estudio del ADN, ARN y
proteínas ha avanzado nuestra comprensión de la evolución microbiana aumenta a medida que se rompen los enlaces de hidrógeno y alcanza una meseta
y taxonomía. Los biólogos evolutivos que estudian plantas y animales se basan en cuando todo el ADN se ha vuelto monocatenario (figura 19.8). los
un rico registro fósil para armar una historia de cambios morfológicos; en estos casos, el punto medio de la curva ascendente da la temperatura de fusión, una medida
los enfoques moleculares sirven para directa del contenido de GC.
complementar estos datos. Por el contrario, los microorganismos no han dejado casi Se ha determinado el contenido de GC de muchos microorganismos (tabla
ningún registro fósil, por lo que el análisis molecular es el único método factible. 19.6). El contenido de GC de ADN de animales y
medio de recopilar un conjunto de datos grande y preciso de un número plantas superiores promedia alrededor del 40% y oscila entre 30 y
de microbios Cuando los científicos tienen cuidado de hacer solo comparaciones 50%. Por el contrario, el ADN de los microorganismos eucarióticos y procarióticos
válidas, las inferencias filogenéticas basadas en enfoques moleculares varía mucho en contenido de GC; GC procariótico
proporcionar el análisis más robusto de la evolución microbiana. contenido es el más variable, desde alrededor de 25 hasta casi
80%. A pesar de una gama tan amplia de variación, el contenido de GC
Composición de base de ácido nucleico de cepas dentro de una especie particular es constante. Si dos organismos
Los genomas microbianos se pueden comparar directamente y taxonómicamente difieren en su contenido de GC en más de un 10%, su
La similitud se puede estimar de muchas maneras. El primero, y posiblemente Los genomas tienen secuencias de bases bastante diferentes. Por otro lado,
la técnica más simple a emplear es la determinación de no es seguro asumir que los organismos con GC muy similares
Composición de bases de ADN. El ADN contiene cuatro bases de purina y pirimidina: contenidos también tienen secuencias de bases de ADN similares porque dos muy
adenina (A), guanina (G), citosina (C) y timina. pueden construirse diferentes secuencias de bases a partir de las mismas
(T). En el ADN de doble cadena, A se empareja con T y G con C. proporciones de pares de bases AT y GC. Sólo si dos microorganismos
Así, la relación (GC)/(AT) o contenido de GC, el porcentaje de también son similares fenotípicamente hace su contenido de GC similar
GC en el ADN, refleja la secuencia de bases y varía con los cambios de secuencia sugieren una estrecha relación.
de la siguiente manera: Los datos de contenido de GC son valiosos al menos de dos maneras. Primero,
pueden confirmar un esquema taxonómico desarrollado utilizando otros
G+C datos. Si los organismos en el mismo taxón son demasiado diferentes en GC
Mol% G + C = * 100
G+C+A+T contenido, el taxón probablemente debería dividirse. Segundo, GC
contenido parece ser útil en la caracterización de géneros procarióticos
La composición de bases del ADN se puede determinar de varias porque la variación dentro de un género suele ser inferior al 10% incluso
formas. Aunque el contenido de GC se puede determinar después de la hidrólisis del aunque el contenido puede variar mucho entre géneros. Por ejemplo, Staphylococcus
ADN y el análisis de sus bases con alto rendimiento tiene un contenido de GC de 30 a 38%, mientras que
cromatografía líquida (HPLC), los métodos físicos son más fáciles y El ADN de Micrococcus tiene 64 a 75% de GC; sin embargo, estos dos géneros de
más a menudo utilizado. El contenido de GC a menudo se determina a partir de la Los cocos grampositivos tienen muchas otras características en común.
temperatura de fusión (Tm) del ADN. En ADN de doble cadena
tres enlaces de hidrógeno unen los pares de bases GC y dos enlaces se conectan Hibridación de ácidos nucleicos
En pares de bases. Como resultado, el ADN con un mayor contenido de GC La similitud entre los genomas se puede comparar más directamente
tienen más enlaces de hidrógeno, y sus hebras se separan a mayor mediante el uso de estudios de hibridación de ácidos nucleicos . Si se forma una
temperaturas, es decir, tiene un punto de fusión más alto. La fusión del ADN se puede mezcla de ADN monocatenario (ssDNA) al calentar cadenas bicatenarias
seguir fácilmente espectrofotométricamente porque el (ds) El ADN se enfría y se mantiene a una temperatura de unos 25 °C por debajo de la
la absorbancia del ADN a 260 nm (luz ultravioleta) aumenta durante la hebra Tm, las hebras con secuencias de bases complementarias se reasociarán a
separación. Cuando una muestra de ADN se calienta lentamente, la absorbancia formar dsDNA estable, mientras que las hebras no complementarias
Tabla 19.6 Contenido GC representativo de microorganismos
Organismo Porcentaje GC Organismo Porcentaje GC Organismo Porcentaje GC
bacterias Rodospirillum 62–66 Triquetrum de peridinio 53

Actinomyces 59–73 Rickettsia 29–33 38–42
Physarum policéfalo
Anabaena 39–44 Salmonela 50–53 41
Plasmodium berghei
Bacilo 32–62 38 escenadesmo 52–64
espirilum
Bacteroides 28–61 51–65 39
espiroquetas espirogira
Bdellovibrio 49,5–51 30–38 45
Estafilococo Estentor polimorfo
Caulobacter 62–65 33–44 19–33
Estreptococo tetrahymena
clamidia 41–44 69–73 tricomonas 29–34
Streptomyces
clorobio 49–58 31–37 45–59
Sulfolobus tripanosoma
cromacio 48–70 46 Volvox carteri 50
Termoplasma
Clostridium 21–54 tiobacilo 52–68
33–42 hongos
Cytophaga Treponema 25–53
Agaricus bisporus 44
Deinococcus 62–70
protistas amanita muscaria 57
Escherichia 48–59
Acanthamoeba castellanii 56–58 Aspergillus niger 52
Halobacteria 66–68
Acetabularia mediterránea 37–53 Blastocladiella emersonii 66
hipomicrobio 59–67
ameba proteus 66 Candida albicans 33–35
Metanobacteria 32–50
clamidomonas 60–68 Claviceps purpúrea 53
micrococo 64–75
Chlorella 43–79 Coprinus lagopus 52–53
micobacteria 62–70
Ciclotella críptica 41 Fomes fraxineus 56
micoplasma 23–40
Dictyostelio 22–25 Mucor rojo 38
mixococo 68–71
Euglena gracilis 46–55 Neurospora crasa 52–54
Neisseria 48–56
Lycogala 42 Penicillium notatum 52
Nitrobacter 59–62
Nitella 49 Polyporus palustris 56
oscilatorio 40–50
Nitzschia angularis 47 Rhizopus nigricans 47
Procloron 41
Ochromonas danica 48 Saccharomyces cerevisiae 36–42
Proteo 38–41
Paramecio spp. 29–39 Saprolegnia parasitica 61
Pseudomonas 58–69
permanecen sin emparejar (figura 19.9). Porque hebras con similares, pero condiciones de bridación y menos del 5% de diferencia en Tm de diez, pero no
no idénticas, las secuencias se asocian para formar menos estables a la temperatura siempre, se consideran miembros de la misma
híbridos de dsDNA, incubación de la mezcla de 30 a 50ÿC por debajo del especies.
Tm permite que se formen híbridos de ssDNA más diversos. Incubación en Si las moléculas de ADN tienen una secuencia muy diferente,
10 a 15ÿC por debajo de la Tm permite la formación de híbridos solo con no forman un híbrido estable y detectable. Por lo tanto, la hibridación ADN-
hebras casi idénticas. ADN se utiliza para estudiar únicamente microorganismos estrechamente
En una de las técnicas de hibridación más utilizadas, relacionados. Los organismos relacionados más lejanamente se pueden comparar por
Los filtros de nailon con hebras de ADN no radiactivas unidas se incuban a la realización de experimentos de hibridación ADN-ARN utilizando ARN ribosomal
temperatura adecuada con fragmentos de ssDNA o de transferencia radiactivo. Las relaciones a distancia pueden
hecho radiactivo con 32P, 3 H, o 14C. Después de permitir que los detectarse porque los genes rRNA y tRNA representan sólo una
fragmentos radiactivos hibriden con el ADN ss unido a la membrana, se lava pequeña porción del genoma total del ADN y no han evolucionado como
la membrana para eliminar cualquier resto no hibridado. rápidamente como la mayoría de los otros genes microbianos. La tecnica es parecida
Se mide el ssDNA y su radiactividad. La cantidad de radiactividad unida al filtro al empleado para la hibridación ADN-ADN: el ADN unido a la membrana se
refleja la cantidad de hibridación y, por lo tanto, la similitud de las secuencias incuba con ARNr radiactivo, se lava y se
de ADN. El grado contado Una medida aún más precisa de la homología es
de similitud u homología se expresa como el porcentaje de radiactividad del obtenido al encontrar la temperatura requerida para disociarse y
ADN experimental retenido en el filtro en comparación con eliminar la mitad del rRNA radiactivo de la membrana; los
el porcentaje de radiactividad del ADN homólogo unido bajo el a mayor temperatura, más fuerte es el complejo rRNA-DNA
mismas condiciones (la tabla 19.7 proporciona ejemplos). dos cepas y cuanto más parecidas sean las secuencias. Estructura génica: genes que codifican
cuyo ADN muestre al menos un 70% de relación en condiciones óptimas de hy para tRNA y rRNA (sección 11.5)
Tabla 19.7 Comparación de especies de Neisseria por experimentos
de hibridación de ADN
ADN unido a membranaa Porcentaje de homologíab
Neisseria meningitidis 100

ADN de doble cadena N. gonorrhoeae 78
n. sicca 45
n.flava 35
Fuente: Datos de TE Staley y RR Colwell, “Applications of Molecular Genetics and

Taxonomía numérica para la clasificación de bacterias” en Revisión anual de ecología y sistemática,
8: 282, 1973.
Desnaturalización a temperatura a
El ADN no radiactivo unido a la membrana experimental de cada especie se incubó con
por encima de Tm ADN radiactivo de N. meningitidis , y la cantidad de radiactividad unida a la membrana fue
Medido. Cuanta más radiactividad se une, mayor es la homología entre las secuencias de ADN.
B
ADN de N. meningitidis unido a ADN experimental/Cantidad unida a la membrana adherida
ADN de N. meningitidis 100
Secuenciación de ácidos nucleicos

ADN monocatenario A pesar de la utilidad de la determinación del contenido de GC y los estudios de
hibridación de ácidos nucleicos, los rRNA de pequeños ribosomales
subunidades (ARNr 16S y 18S de procariotas y eucariotas,
respectivamente) se han convertido en las moléculas de elección para inferir
filogenias microbianas y hacer asignaciones taxonmicas en el
nivel de género. Los rRNA de subunidades pequeñas (SSU rRNA) son casi
ideal para estudios de evolución microbiana y relación porque
Renaturalización a temperatura
juegan el mismo papel en todos los microorganismos. Además, debido a que el ribosoma
por debajo de Tm
es absolutamente necesario para la supervivencia y el
Los rRNA SSU son parte de la estructura ribosómica compleja, el
los genes que codifican los ARNr de SSU no pueden tolerar mutaciones grandes. Por lo tanto
estos genes cambian muy lentamente con el tiempo y no parecen ser
sujeto a la transferencia horizontal de genes, un factor importante en la comparación de
secuencias de diferentes filos. La utilidad de los ARNr SSU
Emparejamiento inicial de bases
se extiende por la presencia de ciertas secuencias que son variables
entre organismos y otras regiones que son bastante estables. Las regiones variables
permiten la comparación entre microbios estrechamente relacionados
mientras que las secuencias estables permiten la comparación de microorganismos
relacionados de forma distante.
La capacidad de amplificar regiones de genes de rRNA (rDNA) por la
reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y secuenciar el ADN usando
La tecnología de secuenciación automatizada ha aumentado considerablemente la
eficiencia mediante la cual se pueden obtener secuencias de ARNr de SSU. PCR puede
utilizarse para amplificar el ADNr de los genomas de los organismos porque
las secuencias de nucleótidos conservadas flanquean las regiones de interés. En
práctica, esto significa que los cebadores de PCR están fácilmente disponibles o pueden
generarse para amplificar rDNA de cultivos y no cultivos
microbios Como se señaló, el Proyecto de base de datos de ribosomas tiene

ADN renaturalizado
secuencias de más de 200.000 microbios. PCR (sección 14.3); Determinación de
secuencias de ADN (sección 15.2)
El análisis comparativo de las secuencias de ARNr 16S de miles de organismos ha
demostrado la presencia de secuencias distintivas de oligonucleótidos (figura 19.10).
Estos son cortos,
Secuencias de nucleótidos conservadas que son específicas para un grupo
filogenéticamente definido de organismos. Por lo tanto, las secuencias características
Figura 19.9 Fusión e hibridación de ácidos nucleicos. que se encuentran en Bacteria rara vez o nunca se encuentran en Archaea.
Las hebras complementarias se muestran en morado y azul.

~ 230
bases
Escherichia coli Methanococcus vannielii Saccharomyces cerevisiae
Figura 19.10 ARN de la subunidad ribosómica pequeña. Ejemplos representativos de estructuras secundarias de ARNr de los tres principales
dominios: Bacteria (Escherichia coli), Archaea (Methanococcus vannielii) y Eucarya (Saccharomyces cerevisiae). Los puntos rojos marcan posiciones
donde Bacteria y Archaea normalmente difieren. Fuente: Datos de CP Woese. Revisiones microbiológicas, 51(2):221–227, 1987.
secuencias de nucleótidos y la aplicación de algoritmos informáticos

Tabla 19.8 Secuencias distintivas de ARNr 16S seleccionadas
permitir la comparación de secuencias entre cualquier número de organismos.
para algunos grupos bacterianosa
Al comparar secuencias de ARNr entre dos microorganismos,
su relación se puede representar mediante un coeficiente de asociación,
o valor Sab . Cuanto más altos son los valores de Sab , más estrechamente están
relacionados los organismos entre sí. Si las secuencias del 16S
Los ARNr de dos organismos son idénticos, el valor Sab es 1,0. Después
-Proteobacteria
Se han determinado los valores de Sab , una computadora
cianobacterias espiroquetas Bacteroides azufre
verde azufre
verde
sin Deinococcus Positivo
Gram
bajo)
(GC Positivo
Gram
alto)
(GC Planctomyces
calcula la relación de los organismos y resume sus relaciones en un

árbol o dendrograma (figuras 19.3 y 19.6c).
Consenso de posición Las secuencias distintivas están presentes en genes distintos de los que
en la composición del ARNr codifican el ARN ribosómico. Muchos genes tienen inserciones o deleciones de
47 C tu GRAMO longitudes específicas y secuencias en posiciones fijas, y un particular
53 A GRAMO GRAMO GRAMO
inserción o supresión se puede encontrar exclusivamente entre todos los miembros
570 GRAMO tu tu de uno o más filos. RS Gupta se refiere a estos como conservados en dels. Estas
secuencias de firma son particularmente útiles en estudios filogenéticos cuando
812 GRAMO C C
están flanqueadas por regiones conservadas. En
906 GRAMO
Agricultura
A A
tales casos, los cambios observados en la secuencia de la firma no pueden ser
955 tu C.A.
debido a desalineaciones en la secuencia. Las secuencias de firmas ubicadas
1.207 GRAMO C CC
en algunos genes domésticos altamente conservados no aparecen
1.234 C una UA
muy afectado por las transferencias laterales de genes y, como SSU rRNA, puede
emplearse en el análisis filogenético.
a
Un signo más en una columna significa que el grupo tiene la misma base que la secuencia de consenso. Si el
la letra se da en mayúscula, se cambia en más del 90% de los casos. Una letra minúscula significa un El uso de secuencias de ADN para determinar especies y cepas (como
base de ocurrencia menor (< 15% de los casos). opuesto al género) la identidad requiere el análisis de los genes que evolucionan
más rápido que los que codifican ARNr. A menudo, se secuencian y comparan
entre cinco y siete genes conservados, una técnica denominada tipificación de
y viceversa (tabla 19.8). Asimismo, el rRNA 18S de eucariotas también lleva secuencias multilocus (MLST, por sus siglas en inglés). Múltiples genes
secuencias características que son específicas del dominio generalmente se examinan para evitar resultados engañosos que pueden surgir
Eucarya. Ya sea ARNr completos o, más a menudo, ARNr específicos mediante transferencia lateral de genes. MLST se desarrolló originalmente para
los fragmentos se pueden comparar. La alineación adecuada de SSU rRNA discriminar entre cepas patógenas, pero se ha vuelto más ampliamente
aplicado a la taxonomía microbiana. Aunque MLST es útil para diferenciar aislamientos utilizado para amplificar específicamente las secuencias repetitivas por PRC. Se
a nivel de cepa y especie, los datos se vuelven utilizan imprimaciones diferentes para cada tipo de elemento repetitivo, y el
demasiado difícil de interpretar en niveles taxonómicos más altos. los resultados se clasifican como derivados de BOX-PCR, ERIC-PCR o
REP-PCR (figura 19.11). En cada caso los fragmentos amplificados
Huellas Genómicas de muchas muestras microbianas se pueden resolver y visualizar en
Un grupo de técnicas llamadas huellas dactilares genómicas también pueden ser un gel de agarosa. Cada carril del gel corresponde a un solo aislado bacteriano, y el
se utiliza para clasificar los microbios y ayudar a determinar las relaciones patrón creado por muchas muestras se asemeja a
filogenéticas. A diferencia de los análisis moleculares discutidos hasta ahora, la toma un código de barras UPC. Luego, el "código de barras" se analiza por computadora usando
de huellas dactilares genómicas no implica la secuenciación de nucleótidos. software de reconocimiento de patrones, así como software que calcula
En su lugar, emplea la capacidad de las endonucleasas de restricción para relaciones filogenéticas. Porque la toma de huellas dactilares de ADN permite
reconocer secuencias específicas de nucleótidos. Así el patrón de identificación a nivel de especie, subespecie y, a menudo, cepa,
Los fragmentos de ADN generados por la escisión de la endonucleasa (llamados es valiosa no sólo en el estudio de la diversidad microbiana, sino también en
fragmentos de restricción) son una representación directa de la secuencia de la identificación de patógenos humanos, animales y vegetales también.
nucleótidos (consulte la figura 14.3 y la tabla 14.2). la comparacion de
fragmentos de restricción entre especies y cepas es la base de Secuenciación de aminoácidos
análisis de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) . Las secuencias de aminoácidos de las proteínas reflejan directamente las secuencias
Otro ensayo se basa en altamente conservados y repetitivos de ARNm y, por lo tanto, representan los genes que codifican su síntesis. Hay varias
Secuencias de ADN presentes en muchas copias en los genomas de la mayoría formas de comparar proteínas. lo mas
bacterias gramnegativas y algunas grampositivas. Hay tres enfoque directo es determinar la secuencia de aminoácidos de las proteínas con la
familias de secuencias repetitivas: los elementos BOX de 154 pb, los misma función. El valor de una proteína determinada en los estudios taxonómicos y
Consenso intergénico repetitivo enterobacteriano de 124–127 pb filogenéticos varía. las secuencias de
(ERIC) y secuencias palindrómicas extragénicas repetitivas (REP) de 35–40 pb. las proteínas con funciones diferentes a menudo cambian a ritmos diferentes;
Estas secuencias se encuentran generalmente en algunas secuencias cambian bastante rápido mientras que otras son muy estables.
sitios distintos entre los genes, es decir, son intergénicos. Porque Sin embargo, si las secuencias de proteínas con el mismo
se conservan entre géneros, los cebadores de oligonucleótidos se pueden función son similares, los organismos que los poseen pueden ser
Células/tejido infectado
Preparación
reacciones de PCR
ADN aislado Amplificación
Análisis de conglomerados
– –
Clasificación/
identificación
+
+
Imagen
Análisis de patrones
electroforesis
Biblioteca
Figura 19.11 Descripción general de la técnica de huellas dactilares genómicas basada en secuencias de nucleótidos repetitivas.
estrechamente relacionada. Las secuencias de citocromos y otros electrones Género Tensión

Familia Especies Subespecies
proteínas de transporte, histonas y proteínas de choque térmico, transcripción
y proteínas de traducción, y una variedad de enzimas metabólicas han secuenciación del genoma
Se ha utilizado en estudios taxonómicos y filogenéticos. A diferencia de,
Proteínas de rápida evolución, como las proteínas de la superficie externa del Secuenciación de ADNr 16S
patógeno de la sífilis Treponema pallidum, no son apropiados para

Mol% G+C
propósitos taxonómicos o filogenéticos. Por lo tanto, no todas las proteínas son
adecuado para estudiar cambios a gran escala que ocurren durante períodos prolongados. Hibridación ADN-ADN
Sin embargo, las proteínas adecuadas pueden ofrecer algunas ventajas.
sobre comparaciones de ARNr. Una secuencia de 20 aminoácidos tiene más Tipificación de secuencias multilocus
información por sitio que una secuencia de cuatro nucleótidos. Proteína

Perfiles de proteínas de células enteras
secuencias se ven menos afectadas por las diferencias específicas del organismo en
contenido de GC que las secuencias de ADN y ARN. Finalmente, la alineación de secuencias Huellas dactilares genómicas
de proteínas es más fácil porque no depende de
estructura secundaria como lo es una secuencia de ARNr.
Hay varias formas de comparar proteínas. el mas directo
Figura 19.12 Resolución taxonómica relativa de varios
enfoque es determinar la secuencia de aminoácidos de las proteínas
Técnicas Moleculares.
con la misma función. Debido a que la secuenciación de proteínas es lenta y
Con frecuencia se han empleado métodos costosos y más indirectos para comparar
19.5 EVALUACIÓN DE LA FILOGENIA MICROBIANA
proteínas. La movilidad electroforética de
proteínas es útil para estudiar las relaciones a nivel de especies y subespecies. Los La taxonomía microbiana está cambiando rápidamente. Esto se debe al conocimiento cada
anticuerpos pueden discriminar entre muy similares vez mayor de la biología de los microorganismos, los notables avances en la tecnología
Se utilizan proteínas y técnicas inmunológicas para comparar proteínas de diferentes informática y el uso de la tecnología molecular.
microorganismos. La Figura 19.12 muestra el características para determinar las relaciones filogenéticas entre
utilidad taxonómica de varios tipos de análisis moleculares, incluido el perfilado de proteínas; microorganismos Esta sección describe brevemente algunas de las formas
con la excepción de la secuenciación del genoma, en el que se evalúan las relaciones filogenéticas.
está claro que una combinación de enfoques es mejor para la identificación a nivel de
especie o inferior.
Cronómetros moleculares
Las secuencias de ácidos nucleicos y proteínas cambian con el tiempo.
y se consideran cronómetros moleculares. Este concepto,
sugerido por primera vez por Zuckerkandl y Pauling (1965), es importante
en el uso de secuencias moleculares en la determinación filogenética
1. ¿Cuáles son las ventajas de usar cada grupo principal de características?
relaciones y se basa en el supuesto de que existe un reloj evolutivo. De acuerdo con esta
(morfológico, fisiológico/metabólico, ecológico, genético y molecular) en clasificación
idea, las secuencias de muchos
e identificación? ¿Cómo se relaciona cada grupo con el
Los ARNr y las proteínas cambian gradualmente con el tiempo sin destruir o alterar
naturaleza y expresión del genoma? Da ejemplos de cada tipo de
característica. gravemente sus funciones. Uno supone que tal
los cambios son selectivamente neutrales, ocurren bastante aleatoriamente y aumentan
2. ¿Qué modos de intercambio genético en procariotas han resultado taxonómicamente
linealmente con el tiempo. Cuando las secuencias de moléculas similares son bastante
¿útil? ¿Por qué los plásmidos tienen tanta importancia en la taxonomía bacteriana?
diferentes en dos grupos de organismos, los grupos
3. ¿Cuál es el contenido de GC del ADN y cómo se puede determinar mediante
divergieron unos de otros hace mucho tiempo. El análisis filogenético usando cronómetros
¿Estudios de temperatura de fusión?
C
moleculares es un tanto complejo y controvertido porque la tasa de cambio de secuencia
4. ¿Por qué no es seguro asumir que dos microorganismos con la misma G
puede variar. los
contenido pertenecen a la misma especie? ¿De qué dos maneras son contenidos de GC
eventos de especiación rápidos y relativamente infrecuentes descritos por
datos taxonómicamente valiosos?
equilibrios puntuados (figura 19.5) requieren periodos caracterizados
5. Describir cómo se llevan a cabo los estudios de hibridación de ácidos nucleicos utilizando
por un cambio especialmente rápido. Además, diferentes moléculas y
ADN unido a la membrana. ¿Por qué se desearía variar la temperatura de
varias partes de la misma molécula pueden cambiar a diferentes velocidades.
incubación durante la hibridación? ¿Cuál es la ventaja de conducir ADN-ARN?
Se utilizan moléculas muy conservadas, como los ARNr, para seguir
¿Estudios de hibridación?
cambios evolutivos a gran escala, mientras que se emplean moléculas que cambian
6. ¿Cómo se realizan los estudios de secuenciación de ARNr y por qué el ARNr es tan adecuado para
rápidamente para seguir la especiación. Cuadrando la noción de
determinar la relación?
cronómetros moleculares con el registro fósil que demuestra
7. ¿En qué se parece la huella genómica al análisis de secuencias de ARNr? Como hacer
los equilibrios puntuados son difíciles. Por esta razón, algunos científicos
las dos técnicas difieren?
Prefiero hablar de relación evolutiva en lugar de tasas de
8. Enumere algunas proteínas utilizadas en estudios filogenéticos y taxonómicos. Por qué son
evolución. Se requerirán más estudios para establecer la precisión y utilidad de los
son útiles?
cronómetros moleculares.
Las principales divisiones de la vida 489
Árboles filogenéticos utilizado para minimizar el número de lagunas y desajustes en las secuencias
Las relaciones filogenéticas se ilustran en forma de diagramas ramificados o árboles. que se comparan. Bioinformática (sección 15.4)
Una vez alineadas las moléculas, se determina el número de posiciones que
Un árbol filogenético es un gráfico hecho de ramas.
varían en las secuencias. Estos datos son
que conectan nodos (figura 19.13). Los nodos representan taxonómico
se utiliza para calcular una medida de la diferencia entre las secuencias. A menudo,
unidades como especies o genes; los nodos externos al final de la
la diferencia se expresa como la evolución
las ramas representan organismos vivos (existentes). como en el universal
distancia. Esto es simplemente una indicación cuantitativa del número
árbol filogenético (figura 19.3), la longitud de las ramas representa
de posiciones que difieren entre dos macromoléculas alineadas.
el número de cambios moleculares que han tenido lugar entre los
Se realizan ajustes estadísticos para retromutaciones y múltiples
dos nodos Finalmente, un árbol puede estar desarraigado o enraizado. un desrooteado
sustituciones que se hayan producido. Luego, los organismos se agrupan en grupos
árbol (figura 19.13a) simplemente representa relaciones filogenéticas
en función de la similitud en las secuencias. lo mas
pero no proporciona un camino evolutivo. La figura 19.13a muestra que
organismos similares se agrupan, luego se comparan con los
A está más relacionado con C que con B o D, pero no
organismos restantes para formar un grupo más grande asociado entre sí
especificar el antepasado común de las cuatro especies o la dirección de
en un nivel más bajo de similitud o distancia evolutiva. los
cambiar. Por el contrario, el árbol con raíz (figura 19.13b) da un nodo que
El proceso continúa hasta que todos los organismos están incluidos en el árbol.
sirve como el ancestro común y muestra el desarrollo de la
Las relaciones filogenéticas también pueden estimarse mediante técnicas como
cuatro especies de esta raíz. Es mucho más difícil desarrollar un
el análisis de parsimonia. En este enfoque, las relaciones se determinan estimando
árbol enraizado. Por ejemplo, hay 15 posibles árboles con raíces que conectan cuatro
el número mínimo de
especies, pero solo tres posibles árboles sin raíces.
cambios de secuencia requeridos para dar las secuencias finales que se comparan.
Los árboles filogenéticos se desarrollan comparando nucleótidos o
Se supone que el cambio evolutivo ocurre a lo largo del
secuencias de aminoácidos. Para comparar dos moléculas, sus secuencias
el camino más corto con la menor cantidad de cambios o pasos desde un antepasado
primero debe alinearse para que las partes similares coincidan. el objeto es
hasta el organismo en cuestión. El árbol o patrón de relaciones.
para alinear y comparar secuencias homólogas, aquellas que son similares
se prefiere que sea más simple y requiera la menor cantidad de suposiciones.
porque tenían un origen común en el pasado. esto no es facil
tarea, y las computadoras y las matemáticas bastante complejas deben ser em
1. ¿Qué son los cronómetros moleculares y sobre qué suposiciones se basan?
¿establecido? Compare estos supuestos con el concepto de equilibrio puntuado.
2. Definir árbol filogenético y distancia evolutiva. ¿Cuál es la diferencia entre
A B un árbol sin raíz y uno con raíz?
Rama
19.6 LAS PRINCIPALES DIVISIONES DE LA VIDA
La división de todos los organismos vivos en tres dominios:

Archaea, Bacteria y Eucarya: se ha vuelto ampliamente aceptado
C Nodos D
entre los microbiólogos. Aunque en este texto se enfatiza el árbol filogenético universal
(a) propuesto por Norman Pace (figura

19.3), algunos científicos sostienen que las bacterias surgieron mucho antes
B
Archaea y Eucarya, como se muestra en la figura 19.14a. Sin embargo, se muestra
otra interpretación en el árbol de ovocitos (figura 19.14b),
que propone que dependientes de azufre, extremadamente termofílicos
Los procariotas llamados eocitos [del griego eo, alba y cyta, vaso hueco] forman un
grupo separado más relacionado con los eucariotas que con los eucariotas.
D
las arqueas. La existencia de tales organismos como un dominio o grupo separado
ha sido recibida con considerable escepticismo. Finalmente,
la idea de que Eucarya surgió de la fusión de una bacteria y
C
un archaeon se ilustra en la figura 19.14c. Hay muchas razones
por qué los biólogos no pueden ponerse de acuerdo sobre un modelo único. Por
ejemplo, la selección de genes a comparar puede tener un impacto
en el árbol resultante. Cuando los genes que codifican proteínas utilizadas para la
se comparan el almacenamiento y el procesamiento de la información genética, los árboles
A
que son consistentes con los obtenidos por el análisis SSU rRNA son
(B) generada (p. ej., figura 19.3). Por otro lado, cuando se comparan las proteínas
involucradas en el metabolismo, los árboles que ubican a las bacterias
Figura 19.13 Ejemplos de árboles filogenéticos. (a) Sin raíz y las Archaea como parientes más cercanos se generan. Sin embargo, la comparación
árbol que une cuatro unidades taxonómicas. (b) Árbol enraizado. Ver texto para más detalles. de otras actividades de "limpieza" conduce a árboles que colocan
bacterias arqueas eucaria bacterias arqueas Eocitos Eucarya
(a) (B)
bacterias eucaria arqueas
(C)
Figura 19.14 Variaciones en el diseño del "Árbol de la vida". Estos tres árboles filogenéticos alternativos se discuten en el texto.
Archaea y Eucarya están más estrechamente relacionados (figura 19.14a). que contribuyen al acervo genético original. Aunque existe una amplia transferencia
Otros factores que pueden dar lugar a árboles incongruentes incluyen duplicaciones de genes entre Archaea y Bacteria a lo largo de su desarrollo, Eucarya rara vez
de genes no reconocidos que ocurrieron antes de que los dominios participó en interacciones laterales .
formado, lo que lleva a patrones confusos. Tasas de evolución desiguales transferencia de genes después de la formación de hongos, plantas y animales. Eso
puede distorsionar los árboles. La información filogenéticamente importante puede Es posible que las células eucarióticas se originaran en un proceso complejo
se han perdido en algunas secuencias moleculares. Puede haber una variación de involucrando muchas transferencias de genes tanto de bacterias como de arqueas.
secuencia significativa entre las mismas moléculas de diferentes cepas de la misma Esta hipótesis sigue siendo consistente con la formación de mitocondrias y
especie. A menos que varias cepas sean cloroplastos por endosimbiosis con -proteobacte ria y cianobacterias,
analizado, se pueden extraer conclusiones falsas. Por lo tanto, pueden resultar respectivamente. Presuntamente los tres
árboles universales inexactos cuando solo se emplean las secuencias de unas los dominios permanecen separados porque hay muchas más transferencias de
pocas moléculas. genes dentro de cada dominio que entre ellos.
Uno de los mayores desafíos en la construcción de un

El árbol está muy extendido, es frecuente HGT. Los estudios de secuenciación del genoma han
demostrado que hay una HGT extensa dentro y entre dominios. Árboles moleculares versus orgánicos
Los eucariotas poseen genes tanto de bacterias como de arqueas, y En este texto, árboles filogenéticos derivados de secuencias de ARNr 16S
ha habido un intercambio de genes frecuente entre los dos dominios óticos se presentan porque estos datos son los más extensos y son
procarios. Parece que al menos algunas bacterias incluso han adquirido genes considerado como el más preciso por la mayoría de los microbiólogos
eucarióticos. Aunque una variedad de mecanismos pueden y biólogos evolutivos. Árboles filogenéticos basados en la
ser responsable, se ha sugerido que gran parte de este movimiento de genes se análisis de moléculas como proteínas o ácidos nucleicos, se consideran árboles
produce a través de la transferencia mediada por virus. Claramente, el patrón de filogenéticos moleculares. Debe recordarse que
evolución microbiana no es tan lineal y arborescente como estos árboles se basan en genes individuales, no en organismos completos.
previamente pensado. Esto ha impulsado el desarrollo de árboles Antes del advenimiento de la filogenia molecular, se construyeron árboles que
que intentan mostrar HGT (figura 19.15). Este árbol se parece a un clasificaban organismos eucariotas sin significado significativo.
web o red con muchas ramas laterales que unen varios consideración de la gran diversidad de microbios o su historia evolutiva. Dichos
troncos, cada rama representando la transferencia de uno o algunos árboles orgánicos generalmente reflejan los requisitos de organización de los
genes En lugar de tener un solo tronco principal o ancestro común zoólogos y botánicos a expensas de
en su base, este árbol tiene varios troncos o grupos de células primitivas filogenética. Algunos se discuten aquí.
Las principales divisiones de la vida 491
organismos procarióticos. El reino Protista es el menos homogéneo y el más

difícil de definir. Los protistas son eucariotas con organización unicelular, ya
sea en forma de células solitarias o
5
colonias de células que carecen de tejidos verdaderos. Pueden tener ingestión,
nutrición fotoautotrófica o de absorción, e incluyen la mayoría
de los microorganismos conocidos como algas, protozoos y muchos de
los hongos más simples. El reino Fungi contiene eucariotas y
4
predominantemente organismos multinucleados, con núcleos dispersos
3
2 en un micelio amurallado ya menudo septado; su nutrición es absortiva. La
1
taxonomía de los principales filos de protistas y hongos es
discutido con más detalle en los capítulos 25 y 26, respectivamente.
La mayoría de los biólogos ya no aceptan el sistema de los cinco reinos.
Un problema importante es su falta de distinción entre Archaea y Bacteria.
Además, el reino Protista es demasiado
bacterias arqueas eucaria diversa para ser taxonómicamente útil. Finalmente, los límites entre los reinos
Protista, Plantae y Fungi están mal definidos.
Por ejemplo, las algas pardas probablemente no estén estrechamente relacionadas con
las plantas a pesar de que el sistema de cinco reinos los coloca en
las Plantae.
Por lo tanto, no sorprende que se hayan sugerido varias alternativas. El
sistema de los seis reinos es la opción más sencilla; divide el
reino Monera o Procaryotae en dos reinos, Eubacte ria y Archaeobacteria
plástidos (figura 19.16b). Muchos intentos han sido
hecho para dividir a los protistas en varios reinos mejor definidos.
mitocondrias El sistema de ocho reinos de Thomas Cavalier-Smith es un buen ejemplo
(figura 19.16c). Cavalier-Smith cree que las diferencias en
la estructura celular y la organización genética son excepcionalmente
importantes para determinar la filogenia; por lo tanto, ha utilizado características
ultraestructurales, así como secuencias de ARNr y otros datos moleculares en
desarrollando su clasificación. Divide todos los organismos en dos imperios y
ocho reinos. El imperio Bacteria contiene dos reinos, Eubacteria y
Comunidad ancestral común Archaeobacteria. El segundo imperio,
de células primitivas la Eucariota, contiene seis reinos de organismos eucariotas.
Hay dos nuevos reinos de eucariotas. Los Archezoa son organismos
Figura 19.15 Árbol filogenético universal con lateral unicelulares eucarióticos primitivos como Giardia que tienen 70S
Transferencias de genes. El efecto de la HGT en la evolución de la vida ribosomas y carecen de aparatos de Golgi, mitocondrias, cloroplastos,
da como resultado un árbol con interconexiones en forma de red que complican el y peroxisomas. El reino Chromista contiene principalmente organismos
surgimiento de los tres dominios de la vida. El inserto muestra la fotosintéticos que tienen sus cloroplastos dentro de la luz de
serie de eventos necesarios para dar lugar a la herencia estable de un el retículo endoplásmico rugoso en lugar de en la matriz citoplasmática (como
gen en un nuevo organismo. es el caso en el reino Plantae). diatomeas, algas pardas,
las criptomonas y los oomicetos se colocan en Chromista. los
Los límites de los cuatro reinos restantes (Plantae, Fungi, Ani malia y Protozoa)
reinos se han ajustado para definir mejor cada uno .
El primer sistema de clasificación que ganó popularidad es el reino y distinguirlo de los demás.
sistema de cinco reinos sugerido por primera vez por Robert Whittaker en
1969 (figura 19.16a). Los organismos se ubican en cinco reinos.
basado en al menos tres criterios principales: (1) tipo de célula: procariota Clasificación de nivel superior de Eucarya
o eucariótico, (2) nivel de organización celular—unicelular o En 2005, la Sociedad Internacional de Protistólogos, en colaboración con
multicelular, y (3) tipo nutricional. En este sistema, el reino Animalia contiene parasitólogos, micólogos y psicólogos (científicos que estudian hongos y
heterótrofos multicelulares sin paredes. algas, respectivamente), propuso una
células eucarióticas y principalmente nutrición ingerida, mientras que esquema de clasificación basado en criterios morfológicos, bioquímicos y
reino Plantae está compuesto por organismos pluricelulares con análisis filogenéticos moleculares de microorganismos eucarióticos
células eucariotas amuralladas y principalmente nutrición fotoautotrófica. Los (no se consideraron los procariotas; sin embargo, se reconocen los dominios
microbiólogos estudian a los miembros de los otros tres reinos. El reino Bacte ria y Archaea ). Seis filogenéticamente coherentes
Monera o Procaryotae contiene todos se establecieron grupos pero no se colocaron en orden jerárquico
Plantae hongos Animalia
Figura 19.16 Sistemas de eucariotas y procariotas

Algas Filogenia. Diagramas esquemáticos simplificados del (a)
sistema de cinco reinos (Whittaker), (b) sistema de seis
protozoos Protista reinos y (c) sistema de ocho reinos (Cavalier-Smith).
Plantae cromista hongos Animalia
Bacteria Mónera
protozoos Imperio
Eucariota
(a) Arquezoa
Arqueobacterias
Plantae hongos Animalia
Imperio
Eubacterias bacterias
(C)
Protista
Eubacterias Arqueobacterias
(B)
(tabla 19.9). De interés específico, particularmente cuando se compara los esquemas de Whittaker, y las Plantae entrarían dentro de las Pro tista según
con el árbol filogenético sin raíces que se muestra en la figura 19.3, es el Whittaker). Este nuevo esquema de clasificación
colocación de animales y hongos en el mismo "supergrupo", el se presenta con más detalle cuando se presentan protistas y hongos
Opistoconta. Esto implica que los animales y los hongos comparten una línea de (capítulos 25 y 26, respectivamente).
descendencia. Del mismo modo, se observa que las plantas superiores (Plantae) surgieron
de las algas verdes; ambos se colocan en el supergrupo Archae plastida. Este esquema 1. Describa las dos alternativas principales al árbol filogenético universal de
de clasificación reconoce que los esquemas de clasificación basados en reinos no son Pace (figura 19.3) que se representan en la figura 19.16a–c. ¿Por qué hay
¿Ha habido dificultades para desarrollar un árbol preciso? Discutir el efecto de
filogenéticamente válidos. Para
frecuente transferencia horizontal de genes en árboles filogenéticos.
ejemplo, para dar cuenta de los datos filogenéticos moleculares, uno
tendría que colocar reinos dentro de reinos (por ejemplo, los Ani malia tendrían que 2. ¿Con qué tres criterios principales dividió Whittaker los organismos en cinco
estar dentro de los Fungi en Cavalier-Smith y reinos?

Manual de Bergey de Bacteriología Sistemática 493
Tabla 19.9 Clasificación de Eucarya propuesta por la Sociedad Internacional de Protistólogos
Super-Grupo Funciones unificadoras Primer puesto Descripción general
opistokonta hongos Uni o pluricelulares. Durante al menos una etapa del ciclo de vida, las células tienen
mesomicetozoos un solo cilio posterior sin mastigonemas (proyecciones parecidas a pelos en los
metazoos flagelos); poseen cinetosomas (cuerpos basales) o centríolos; cuando son
Choanomonada unicelulares, las mitocondrias tienen crestas planas. Incluye levaduras, hongos
y Animalia.
arqueplastos glaucofita El endosimbionte de cianobacterias ancestrales ha dado lugar a plástidos fotosintéticos con
Rhodophyceae clorofila a, plástidos que luego se perdieron en algunos; utiliza almidón como producto
cloroplastida de almacenamiento; generalmente con pared celular hecha de celulosa;
mitocondrias con crestas aplanadas. Incluye el Charophyta (verde
algas) y plantas superiores.
Amoebozoa tubulina La motilidad ameboidea generalmente se basa en el citoesqueleto de actino-miosina con
Flabelinea pseudópodos redondeados (lobopodios); células ya sea desnudas o testadas (que
estereomixida tienen una concha); las mitocondrias suelen tener crestas tubulares; generalmente
Acanthamoebidae uninucleado pero a veces multinucleado; quistes comunes; algunos carecen de
Entamoebida mitocondrias, peroxisomas e hidrogenosomas (p. ej., Entamoeba). Incluye mohos
Mastigamoebidae mucilaginosos celulares y acelulares.
pelomixa
eumicetozoos
Rizaria Cercozoa Poseen pseudópodos delgados (filopodios) que pueden ser simples, ramificados o
haplosporidios sostenido por microtúbulos (axopodios); biciliada o ameboidea. Incluye
Foraminíferos endoparásitos plasmodiales de animales marinos y de agua dulce.
Gromía
radiolaria
Cromalveolata criptofíceas Formas autotróficas, mixotróficas y heterótrofas; algunos tienen eyectosomas
haptofita (tricoquistes: estructuras similares a dardos que se usan para la defensa);
Stramenopiles plastidio de endosimbiosis secundaria con un arqueplasto ancestral; plástido luego
alveolada perdido o reducido en algunos, o readquirido en otros. Incluye diatomeas,
dinoflagelados, cocolitos, Apixcomplexa (p. ej., Plasmodium),
algas marinas/kelps y Ciliophora (p. ej., Paramecium, Stentor).
Excavata Fornicata Surco de alimentación de suspensión (citostoma) presente o que se cree que se ha
Malawimonas perdido en algunos; alimentan capturando partículas de una corriente generada
Parabasalia por flagelos. Incluye Giardia, Trichomonas y Euglena.
Preaxostila
Jakobida
Heterolobosea
Euglenozoa
3. Describa brevemente los sistemas de seis y ocho reinos. ¿Cómo se diferencian de

El manual está ahora en su novena edición. En 1984, la primera edición de
el sistema de los cinco reinos? ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de los Se publicó el Manual de Bacteriología Sistemática de Bergey . Eso
árboles orgánicos? contenía descripciones de todas las especies procarióticas luego identificadas
4. ¿En qué se diferencia el esquema de clasificación de alto nivel de los enfoques (Diversidad microbiana y ecología 19.1). La segunda edición será
basados en el reino? constará de cinco volúmenes; el primer volumen se publicó en 2001 y
el segundo en 2005. Se esperan tres volúmenes adicionales en 2007.
Ha habido un enorme progreso en la taxonomía procariótica.
desde que se publicó el primer volumen del Manual de Bacteriología
Sistemática de Bergey . En particular, la secuenciación de rRNA,
19.7 MANUAL DE BERGEY DE SISTEMÁTICA
El ADN y las proteínas ha hecho factible el análisis filogenético de procariotas.
BACTERIOLOGÍA Así, mientras que la clasificación microbiana en la primera edición era
En 1923, David Bergey, profesor de bacteriología en la Universidad de fenética (basada en la caracterización fenotípica), la
Pensilvania, y cuatro colegas publicaron una clasificación de bacterias que La segunda edición del Manual de Bergey es en gran parte filogenética.
podría utilizarse para la identificación de bacterias. Aunque las propiedades de tinción de Gram generalmente se consideran
especies, el Manual de Bacteriología Determinativa de Bergey. Esta características fenéticas, también juegan un papel en la filogenética.
19.1 Listas de nomenclatura "oficial": una carta de Bergey's*
En varias ocasiones últimamente, se ha dado la impresión de que el estatus arenas de nombres en la literatura del pasado. La gran mayoría eran
de un taxón bacteriano en el Manual de Bacteriología Sistemática de inútiles, porque, salvo unos 2.500 nombres, era imposible saber exactamente
Bergey o en el Manual de Bacteriología Determinativa de Bergey es, en a qué bacterias se referían. Por lo tanto, estos 2.500 se mantuvieron en las
cierto sentido, oficial. Con frecuencia se dan impresiones similares sobre el Listas Aprobadas. Los nombres solo están aprobados en el sentido de que
estado de los nombres en la Lista Aprobada de Nombres de Bacterias y en fueron aprobados para su retención en la nueva nomenclatura bacteriológica.
las Listas de Validación de nombres recientemente propuestos que El resto perdió posición en la nomenclatura, lo que significa que no tienen
aparecen regularmente en el International Journal of Systematic que ser considerados al proponer nuevos nombres bacterianos (aunque los
Bacteriology. Por lo tanto, es importante aclarar estas cuestiones. nombres pueden ser revividos individualmente por una buena causa bajo
No existe tal cosa como una clasificación oficial. El Manual de Bergey disposiciones especiales).
no es "oficial", es simplemente el mejor consenso en ese momento, y El nuevo Código Internacional de Nomenclatura de Bacterias re
aunque siempre se ha tenido mucho cuidado para obtener una visión sólida exige que todos los nombres nuevos se publiquen válidamente para ganar
y equilibrada, siempre hay regiones en las que faltan datos o son confusos, posición en la nomenclatura, ya sea mediante su publicación en artículos
lo que da como resultado diferencias. opiniones e inestabilidad taxonómica. en el International Journal of Systematic Bacteriology o, si se publican en
Cuando el Manual de Bergey niega que sea una clasificación oficial, otro lugar, mediante su anuncio en las Listas de Validación. Los nombres
muchos bacteriólogos pueden sentir que la tierra sólida está temblando. en las Listas de Validación son, por lo tanto, válidos solo en el sentido de
Pero muchas áreas están, de hecho, razonablemente bien establecidas. que están válidamente publicados (y por lo tanto deben tenerse en cuenta
Sin embargo, la taxonomía es en parte una cuestión de juicio y opinión, en la nomenclatura bacteriana). Los nombres no tienen que ser adoptados
como lo es toda ciencia, y hasta que se disponga de nueva información, en todas las circunstancias; si los usuarios creen que el caso científico de
diferentes bacteriólogos pueden legítimamente tener puntos de vista los nuevos taxones y los nombres publicados válidamente no es lo
diferentes. No se les puede obligar a aceptar ninguna “clasificación oficial”. suficientemente fuerte, no es necesario que adopten los nombres. Por
Debe recordarse que, hasta el momento, conocemos sólo un pequeño ejemplo, Helicobacter pylori fue inmediatamente aceptado como reemplazo
porcentaje de las especies bacterianas en la naturaleza. Los avances en la de Campylobacter pylori por la comunidad científica, mientras que Tatlockia
técnica también revelan nuevas luces sobre las relaciones bacterianas. Por micdadei generalmente no había sido aceptado como reemplazo de
lo tanto, debemos esperar que los límites existentes de los grupos tengan Legionella micdadei. La economía fiscal sigue siendo una cuestión de juicio
que ser rediseñados en el futuro, y se espera que la biología molecular, en científico y acuerdo general.
particular, implique una gran cantidad de cambios en las próximas décadas.
La situación con las Listas Aprobadas y las Listas de Validación es *De PHA Sneath y DJ Brenner, “Official Nomenclature Lists in ASM
bastante similar. Cuando los bacteriólogos acordaron hacer un nuevo News, 58(4):175, 1992. Copyright © de la American Society for
comienzo en la nomenclatura bacteriológica, se enfrentaron a decenas de miles. Microbiology. Reimpreso con permiso.
clasificación de los microbios. Algunas de las principales diferencias entre descripciones y arreglos filogenéticos que han sido revisados
bacterias gramnegativas, grampositivas y micoplasmas (bacterias que carecen desde la publicación del volumen 1.)
de pared celular) se resumen en la tabla 19.10.
La tabla 19.11 resume la organización planificada de la segunda edición e
En esta sección se describen las características generales de la 2ª edición
indica dónde se puede encontrar la discusión de un grupo en particular en
del Manual de Bergey . Esta edición tiene más información ecológica sobre
este libro de texto.
taxones individuales. No agrupa a todos los procariotas clínicamente
importantes como lo hizo la primera edición. En cambio, las especies
patógenas se colocan filogenéticamente y, por lo tanto, se dispersan a lo largo 19.8 UNA ENCUESTA DE FILOGENIA Y DIVERSIDAD
de los siguientes cinco volúmenes. PROCARIÓTICA
Volumen 1—The Archaea, and the Deeply Branching and Antes de comenzar una introducción detallada a la diversidad procariótica,
bacterias fototróficas examinaremos brevemente los grupos principales tal como se presentan en
Volumen 2: Las proteobacterias la segunda edición del Manual de Bergey. Esta descripción general pretende
Volumen 3—Las bacterias grampositivas de bajo GC ser solo un estudio general de la diversidad procariótica. La segunda edición
ubica a los procariotas en 25 filos, de los cuales solo algunos se mencionarán
Volumen 4—Las bacterias grampositivas de alto GC
aquí. Muchos de estos grupos se analizan con mucho más detalle en los
Volumen 5—Los Planctomycetes, Spirochaetes, capítulos 20 a 24.
Fibrobacteres, Bacteroidetes, Fusobacterias, Chlamydiae, El Volumen 1 contiene una amplia diversidad de procariotas en los
Acidobacteria, Verrumicrobia y Dictyoglomus dominios Archaea y Bacteria. En la actualidad, las Archaea se dividen en dos
(El Volumen 5 también contendrá una sección que actualiza filos en función de las secuencias de ARNr (figura 19.17). los
Una encuesta sobre la filogenia y la diversidad de las procarióticas 495
Cuadro 19.10 Algunas diferencias características entre bacterias gramnegativas y grampositivas
Propiedad Bacterias Gram-negativo bacterias grampositivas micoplasmas
Pared celular Pared de tipo gramnegativo con Pared de tipo grampositivo con una Carecen de una pared celular y precursores
capa interna de peptidoglucano de 2 a 7 pared celular gruesa y homogénea de peptidoglicano; encerrado por una
nm y membrana externa (de 7 a 8 nm de (20-80 nm) compuesta principalmente membrana plasmática
espesor) de lípidos, proteínas y de peptidoglicano. Pueden estar

lipopolisacáridos. (Puede haber una tercera presentes otros polisacáridos y ácidos
capa más externa de proteína). teicoicos.
forma de celda Esferas, óvalos, varillas rectas o curvas, Esferas, varillas o filamentos; puede mostrar De forma pleomórfica; quizás
hélices o filamentos; algunos tienen verdadera ramificación filamentoso, puede formar ramas
vainas o cápsulas.
Reproducción Fisión binaria, a veces en ciernes Fisión binaria, crecimiento de formas filamentosas Brotación, fragmentación y/o por extensión de
la punta fisión binaria
Metabolismo Fototrófico, quimiolitoautotrófico o Generalmente quimioorganoheterótrofos, quimioorganoheterotrófico; la mayoría unos
quimioorganoheterótrofo pocos fototróficos requieren colesterol y de cadena larga
ácidos grasos para el crecimiento.
Motilidad Móvil o inmóvil. flagelos Muy a menudo inmóvil; tienen Generalmente inmóvil
la colocación puede variar: polar, flagelos peritricos cuando son
lofotricosa, peritricosa. La motilidad también móviles
puede resultar del uso de filamentos axiales

(espiroquetas) o motilidad deslizante.
Apéndices Puede producir varios tipos de Generalmente carecen de apéndices (pueden tener Carecen de apéndices
apéndices: pilosidades y fimbrias, esporas en hifas)
prótesis, tallos
endosporas No puede formar endosporas algunos grupos No puede formar endosporas
Tabla 19.11 Organización del Manual de Bacteriología Sistemática de Bergey

Rango taxonómico Géneros representativos Cobertura de libros de texto
Volumen 1. Las arqueas y las bacterias

fototróficas y profundamente ramificadas
Dominio Archaea
Filo Crenarchaeota
Clase I. Termoproteicas Termoproteus, Pyrodictium, Sulfolobus págs. 507–8
Filo Euryarchaeota
Clase I. Metanobacterias Metanobacteria págs. 508–13
Clase II. metanococos metanococo
Clase III. Metanomicrobia metanomicrobio
Clase IV. halobacterias halobacterium, halococo págs. 514–16
Clase V. Termoplasmáticos Termoplasma, Picrophilus, Ferroplasma págs. 516–17

Clase VI. termococos termococo, pirococo pags. 517
Clase VII. Archaeoglobi Clase Arqueoglobo pags. 517
VIII. Metanopiri Metanopiro págs. 510–12

Bacterias de dominio
Phylum Aquificae Aquifex, Hydrogenobacter pags. 519
Phylum Thermotogae Termotoga, Geotoga pags. 520
Phylum Thermodesulfobacteria termodesulfobacteria
Phylum Deinococcus-Thermus Deinococcus, Termo pags. 520
(Continuado)
Tabla 19.11 Organización del Manual de Bacteriología Sistemática de Bergey, (Continuación)
Bacterias de dominio , (continuación)

Filo Crisiogenetes Crisógenos
filo cloroflexi Cloroflexo, Herpetosifón pags. 523
Filo Thermomicrobia termomicrobio
Filo Nitrospira Nitrospira

Filo Deferribacteres Geovibrio
Phylum Cianobacterias Procloron, Synechococcus, Pleurocapsa, Oscillatoria, Anabaena, págs. 524–29

Nostoc, Stigonema
filo clorobi clorobio, pelodictión pags. 523
Volumen 2. Las proteobacterias

Phylum Proteobacteria
Clase I. Alphaproteobacteria Rhodospirillum, Rickettsia, Caulobacter, Rhizobium, Brucella, págs. 540–46
Nitrobacter, Metilobacterium, Beijerinckia, Hyphomicrobium
Clase II. Betaproteobacteria Neisseria, Burkholderia, Alcaligenes, Comamonas, Nitrosomonas, págs. 546–51
Metilófilo, Thiobacillus
Clase III. gammaproteobacteria Chromatium, Leucothrix, Legionella, Pseudomonas, Azotobacter, págs. 551–61
Vibrio, Escherichia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, Shigella,
Yersinia, Haemophilus
Clase IV. Deltaproteobacteria Clase Desulfovibrio, Bdellovibrio, Myxococcus, Polyangium págs. 562–67
V. Epsilonproteobacteria Campylobacter, Helicobacter págs. 567–68
Volumen 3. El bajo GC
bacterias grampositivas
Phylum Firmicutes
Clase I. Clostridios Clostridium, Peptostreptococcus, Eubacterium, Desulfotomaculum, págs. 576–78
Heliobacteria, Veillonella
Clase II. Mollicutes Micoplasma, ureaplasma, espiroplasma, acoleplasma págs. 571–72
Clase III. bacilos Bacilo, Caryophanon, Paenibacillus, Thermoactinomyces, págs. 578–86
Lactobacillus, Streptococcus, Enterococcus, Listeria, Leuconostoc,
Estafilococo
Volumen 4. Las bacterias
grampositivas de alto GC
Phylum Actinobacteria
Clase Actinobacteria Actinomyces, Micrococcus, Arthrobacter, Corynebacterium, págs. 589–602
Mycobacterium, Nocardia, Actinoplanes, Propionibacterium,
Streptomyces, Thermomonospora, Frankia, Actinomadura,
Bifidobacteria
Volumen 5. Los Planctomycetes,
espiroquetas, fibrobacterias,
Bacteriodetes y Fusobacteria Filo
Planctomycetes Filo Chlamydiae Filo Planctomyces, Gemmata págs. 530–31
Spirochaetes Filo Fibrobacteres Filo clamidia págs. 531–32
Acidobacteria Filo Bacteroidetes Spirochaeta, Borrelia, Treponema, Leptospira págs. 532–34
fibrobacter
acidobacteria
Bacteroides, Porphyromonas, Prevotella, Flavobacterium, págs. 534–36

Sphingobacterium, Flexibacter, Cytophaga
Phylum Fusobacteria Fusobacterium, Streptobacillus
Filo Verrucomicrobia verrucomicrobium
Filo Dictyoglomi Dictyoglomus

Phylum Gemmatimonadetes gemmatimonas
bacterias negativas que tienen ácidos grasos inusuales y se parecen

Aquifex con respecto a sus lípidos unidos a éter.
Halobacteriales
3. Phylum Deinococcus-Thermus. El orden Deinococcales
contiene bacterias que son extraordinariamente resistentes a la radiación.
El género Deinococcus tiñe gram positivo. tiene unico
Metanomicrobianos
lípidos y una alta concentración de pigmentos carotenoides, que
puede protegerlo de la radiación.
Termoplasmatales
Euryarchaeota 4. Phylum Chloroflexi. El filo Chloroflexi tiene una clase
y dos órdenes. Muchos miembros de este grupo gramnegativo
metanobacteriales se llaman bacterias verdes sin azufre. Cloroflexo lleva a cabo
fotosíntesis anoxigénica y es una bacteria deslizante; por el contrario,
Metanococales Herpetosiphon es una bacteria no fotosintética, de deslizamiento
respiratorio. Ambos géneros tienen peptidoglicanos inusuales y
termococales carecen de lipopolisacáridos en sus membranas externas.
5. Phylum Cianobacterias. Las bacterias fotosintéticas oxigénicas se colocan
Sulfolobales en el phylum Cyanobacteria, que contiene
Crenarchaeota la clase Cyanobacteria y cinco subsecciones basadas en morfología y ciclo
de vida. Las cianobacterias tienen clorofila a y
desulfurococales casi todas las especies poseen ficobilinas. Estas bacterias pueden ser
unicelulares o filamentosos, ramificados o no ramificados.
Figura 19.17 Filogenia de Archaea. El árbol se basa Las cianobacterias incorporan CO2 fotosintéticamente a través de
en datos de 16S rRNA y muestra relaciones entre los órdenes mejor uso del ciclo de Calvin al igual que las plantas y muchas bacterias
estudiados. Cada tetraedro representa un grupo de fotosintéticas moradas.
organismos; sus bordes horizontales indican el más corto y el más largo 6. Filo Clorobi. El phylum Chlorobi contiene sustancias anoxigénicas
sucursales en el grupo. bacterias fotosintéticas conocidas como bacterias verdes del azufre.
Pueden incorporar CO2 a través del tricarboxílico reductor
ciclo ácido en lugar del ciclo de Calvin y oxidar sulfuro a
gránulos de azufre, que se acumulan fuera de la célula.
El filo Crenarchaeota contiene organismos metabolizadores de azufre
termofílicos e hipertermofílicos de los órdenes Thermoproteales, El volumen 2 está dedicado por completo a las proteobacterias
Desulfurococcales y Sulfolobales. Sin embargo, recientemente gramnegativas. El phylum Proteobacteria es un gran y extremadamente
se han descubierto muchas otras Crenarchaeota . Algunos están inhibidos por grupo complejo que actualmente contiene más de 2.000 especies en 538
el azufre; otros crecen a lo largo de los océanos del mundo como géneros Aunque todos están relacionados, el grupo es bastante diverso.
plancton. El phylum claramente es más diverso de lo que se pensaba. en morfología, fisiología y estilo de vida. Todos los principales nutricionales
El segundo filo, el Euryarchaeota, contiene principalmente tipos están representados: fototrofia, heterotrofia y quimiolitotrofia de varias
procariotas metanogénicas y procariotas halófilas; organismos termofílicos, variedades. Muchas especies son importantes en
reductores de azufre (los termoplasmas y medicina, industria e investigación biológica. ejemplos destacados
termococos) también están en este filo. Los dos filos se dividen son los géneros Escherichia, Neisseria, Pseudomonas, Rhizobium,
en ocho clases y 12 órdenes. Rickettsia, Salmonella y Vibrio. El filo se divide en
Las bacterias son un conjunto extraordinariamente diverso de cinco clases basadas en datos de rRNA. Debido a que las bacterias
procariotas que se han dividido en 23 filos (figura 19.18). fotosintéticas se encuentran
, en
, las clases y de las proteobacterias, muchas
El Volumen 1 cubre los grupos bacterianos profundamente ramificados y todas creen que todo el phylum surgió de un ancestro fotosintético. Presumiblemente,
las bacterias fototróficas excepto las proteobacterias fotosintéticas. los muchas cepas perdieron la fotosíntesis al adaptarse metabólicamente a nuevos
filos más importantes se describen en estas secciones. nichos ecológicos.
1. Phylum Aquificae. El phylum Aquificae contiene bacterias autótrofas como 1. Clase I—Alfaproteobacteria. Las -proteobacterias incluyen la mayoría de
Aquifex e Hydrogenobacter que las formas oligotróficas (aquellas capaces de
puede utilizar hidrógeno para la producción de energía. Aquifex (que significa creciendo con bajos niveles de nutrientes). Rodospirillum y otros
“fabricante de agua”) en realidad produce agua usando hidrógeno para Las bacterias púrpuras sin azufre son fotosintéticas. algunos géneros
reducir el oxígeno. Este grupo contiene algunas de las bacterias más tienen modos metabólicos inusuales: metilotrofia (p. ej., Methy lobacterium),
termofílicas conocidas y es la rama más profunda o más antigua. quimiolitotrofia (Nitrobacter) y nitrógeno
de las Bacterias. fijación (Rhizobium). Rickettsia y Brucella son importantes
2. Phylum Thermotogae. Este filo se compone de una clase patógenos Aproximadamente la mitad de los microbios de este grupo tienen
y seis géneros. Thermotoga y otros miembros de la clase morfología distintiva como prótesis (Caulobacter,
Thermotogae son anaeróbicas, termófilas, fermentativas, gram Hyphomicrobium).
Aquifex pirofilus Aquificae

Thermotoga marítima termotogas
“Deinococcus-Thermus”
Thermus aquaticus Deinococcus radiodurans
cloroflexi
Chloroflexus aurantiacus Corynebacterium glutamicum Mycobacterium tuberculosis
micrococo lúteo Actinobacteria

(Altos G + C gram positivos)
Streptomyces griseus
Frankia sp.
Fusobacterium ulcerans fusobacteria
estafilococo aureus
Firmicutes
(Bajos G + C gram positivos)
Bacillus cereus Enterococcus faecalis Streptococcus pyogenes Mycoplasma pneumoniae
lívido
Clostridium perfringens Anabaena cylindrica Synechococcus cianobacterias
oscilatorio sp.
Chlamydia trachomatis
Maris
Clorobium limicola Planctomyces Chlorobi Planctomycetes Chlamydiae
Flexibacter litoralis Cytophaga aurantiaca Flavobacterium

hidatis
Bacteroides fragilis
Fibrobacter succinogenes Treponema pallidum

Bacteroidetes Fibrobacteres Espiroquetas
Borrelia burgdorferi Campylobacter jejuni ÿ-Proteobacteria

Helicobacter pylori
Desulfovibrio desulfuricanos
Bdellovibrio bacteriovorus ÿ-Proteobacteria
Myxococcus xanthus Rickettsia rickettsii Caulobacter crescentus ÿ-proteobacteria

proteobacteria
Rhodospirillum rubrum
Vibrión
coli
cholerae Escherichia ÿ-Proteobacteria
ÿ-Proteobacteria
Pseudomonas aeruginosa Neisseria gonorrhoeae Alcaligenes denitrificans Nitrosococcus mobilis
Figura 19.18 Filogenia de las bacterias. El árbol se basa en comparaciones de ARNr 16S. Ver texto para discusión. Fuente: Proyecto de base
de datos ribosomal.
2. Clase II—Betaproteobacteria. Las -proteobacterias superponen la Vías de Doudoroff y de las pentosas fosfato. Unas pocas son
subdivisión metabólicamente. Sin embargo, las -proteobacterias fotosintéticas (p. ej., Chromatium y Ectothiorhodospira),
tienden a utilizar sustancias que se difunden a partir de la metilotróficas (Methylococcus) o sulfurosas (Beggiatoa).
descomposición orgánica en la zona anóxica de los hábitats. 4. Clase IV —Deltaproteobacteria. Las -proteobacterias contienen
Algunas de estas bacterias utilizan sustancias como hidrógeno ocho órdenes y 20 familias. Muchas de estas bacterias se pueden
(Alcaligenes), amoníaco (Nitro somonas), metano (Methylobacillus) colocar en uno de tres grupos. Algunos son depredadores de otras
o ácidos grasos volátiles (Burkholderia). bacterias (p. ej., Bdellovibrio). El orden Myxococcales contiene las
3. Clase III—Gammaproteobacteria. Las -proteobacterias componen mixobacterias fructíferas como Myxococcus, Stig matella y
un grupo grande y complejo de 14 órdenes y 28 familias. Polyangium. Las mixobacterias a menudo también se alimentan de
Muchos son quimioorganotróficos, facultativamente anaeróbicos y otras bacterias. Finalmente, la clase tiene una variedad de
fermentativos. Sin embargo, existe una diversidad considerable anaerobios que generan sulfuro a partir de sulfato y azufre mientras
entre las -proteobacterias con respecto al metabolismo energético. oxidan nutrientes orgánicos (Desulfovibrio).
Algunas familias importantes, como Enterobacteriaceae, Vibrionaceae 5. Clase V —Epsilonproteobacteria. Esta clase está compuesta por un
y Pasteurellaceae , utilizan la vía de Embden-Meyerhof y la vía de solo orden, Campylobacterales, y tres familias.
las pentosas fosfato. Otros, como Pseudomon adaceae y A pesar de su pequeño tamaño, dos importantes géneros patógenos
Azotobacteriaceae , son aerobios y tienen el Entner son -proteobacterias: Campylobacter y Helicobacter.
El Volumen 3 del Manual de Bergey examina las bacterias grampositivas con cus, Mycobacterium y Propionibacterium han sido recientemente
bajo contenido de GC en su ADN, que son miembros clasificados en los subórdenes Actinomicineae, Micrococcineae,
del filo Firmicutes. La línea divisoria es aproximadamente 50% GC; Corynebacterineae y Propionibacterineae porque los estudios de ARNr han
las bacterias con un mol% inferior a este valor están en el volumen 3. La mayoría demostrado que son actinobacterias. El más grande y más
de estas bacterias se tiñen de grampositivas y son heterótrofas. Sin embargo, género complejo es Streptomyces, que contiene alrededor de 150 especies.
debido a su estrecha relación con las bacterias grampositivas de bajo GC, los El Volumen 5 describe una variedad de diez phyla que se encuentran
micoplasmas se colocan aquí aunque aquí por conveniencia. La inclusión de estos grupos en el volumen 5
carecen de paredes celulares y, por lo tanto, se tiñen de gram negativos. Hay no implica que estén directamente relacionados. Aunque son todos
considerable variación en la morfología: algunos son bastones, otros son bacterias gramnegativas, existe una variación considerable en la morfología, la
cocos y micoplasmas son pleomórficos. Las endosporas pueden ser fisiología y el patrón del ciclo de vida. Varios géneros son de
regalo. El filo contiene tres clases. considerable importancia biológica o médica. Consideramos brevemente cuatro
de los 10 filos.
1. Clase I—Clostridia. Esta clase contiene tres órdenes y 11
familias Aunque varían en morfología y tamaño, los 1. Phylum Planctomycetes. Los planctomicetos están relacionados con
los miembros tienden a ser anaeróbicos. Géneros como Clostridium, las clamidias según sus secuencias de ARNr. El phylum contiene solo un
Desulfotomaculum y Sporohalobacter forman bacterias verdaderas orden, una familia y cuatro géneros.
endosporas; muchos otros no. Clostridium es uno de los Los planctomicetos son células cocoides a ovoides o en forma de pera que
géneros bacterianos más grandes. carecen de peptidoglicano. Algunos tienen un nucleoide encerrado en una
2. Clase II—Mollicutes. La clase Mollicutes contiene cinco o membrana. Aunque normalmente son unicelulares, el género
ders y seis familias. A los miembros de la clase a menudo se les llama Isosphaera formará cadenas. Se dividen por brotación y
micoplasmas. Estas bacterias carecen de paredes celulares y no pueden puede producir apéndices no protésicos llamados tallos. Los tomicetos de
producir peptidoglicano o sus precursores. Debido a que los mycoplasmas Planc crecen en hábitats acuáticos y muchos se mueven mediante flagelos o
están limitados únicamente por la membrana plasmática, son motilidad deslizante.
pleomórficos y varían en forma de cocos a helicoidales o 2. Phylum Chlamydiae. Este pequeño filo contiene una clase,
filamentos ramificados. Normalmente son inmóviles y se tiñen. un orden y cuatro familias. El género Chlamydia es, con mucho,
gram negativo debido a la ausencia de una pared celular. A diferencia de el género más importante. Las clamidias son parásitos intracelulares
casi todas las demás bacterias, la mayoría de las especies requieren obligados con un ciclo de vida único que involucra dos etapas distintas:
esteroles para el crecimiento. Los géneros Mycoplasma y Spiro plasma cuerpos elementales y cuerpos reticulados. Estas
contienen varios animales y plantas importantes. las bacterias se asemejan a los planctomicetos porque carecen de peptidoglicano.
patógenos Son pequeños organismos cocoides sin apéndices.
3. Clase III—Bacilos. Esta gran clase comprende una gran variedad Las clamidias son patógenos importantes y causan muchos
de bacilos y bacilos grampositivos, aerobios o anaerobios facultativos enfermedades
cocos La clase Bacilli tiene dos órdenes, Bacillales y Lacto bacillales, y 17 3. Phylum Spirochaetes. Este filo contiene forma helicoidal,
familias. Al igual que con los miembros de la clase bacterias gramnegativas móviles caracterizadas por un
Clostridia, algunos géneros (p. ej., Bacillus, Sporosarcina, Paeni bacillus y Morfología y mecanismo de motilidad. El límite exterior
Sporolactobacillus) forman endosporas verdaderas. los es una membrana externa especial que rodea el protoplásmico
clase contiene muchos importantes desde el punto de vista médico e industrial cilindro, que contiene el citoplasma y el nucleoide.
géneros: Bacillus, Lactobacillus, Streptococcus, Lactococcus, Los flagelos periplásmicos se encuentran entre el cilindro protoplásmico
Enterococcus, Listeria y Staphylococcus. y la membrana exterior. Los flagelos giran y mueven la célula.
aunque no tengan contacto directo con el ambiente externo. Estos
El Volumen 4 está dedicado a los grampositivos de alto GC, aquellas bacterias
quimioheterótrofos pueden ser de vida libre, simbióticos o parásitos. Por
con valores de mol% por encima del 50 al 55%. Todas las bacterias en este
ejemplo, los géneros Treponema y
volumen se colocan en el filo Actinobacteria y clase
Borrelia contiene varios patógenos humanos importantes. los
actinobacterias. Existe una enorme variedad morfológica entre
phylum tiene una clase, Spirochaetes, tres familias y 13
estos procariotas. Algunos son cocos, otros son regulares o irregulares.
géneros
varillas Los grampositivos de alto GC llamados actinomicetos a menudo se forman
4. Filo Bacteroidetes. Este filo tiene tres clases (Bac teroides, Flavobacteria y
filamentos ramificados complejos llamados hifas. Aunque ninguno de
Sphingobacteria), tres órdenes,
estas bacterias producen verdaderas endosporas, muchos géneros forman
y 12 familias. Algunos de los géneros más conocidos son Bacteroides,
esporas asexuales y algunas tienen ciclos de vida complejos. Hay una variedad
Flavobacterium, Flexibacter y Cytophaga. los
considerable en la química de la pared celular entre los de alto gramo GC
Las bacterias deslizantes Flexibacter y Cytophaga son ecológicamente
positivos Por ejemplo, la composición del peptidoglucano varía
importantes y se comentan más adelante.
muy. Las micobacterias producen grandes ácidos micólicos que distinguen sus
paredes celulares de las de otras bacterias. Debido a que el Manual de Bergey es el principal recurso en procariotas
La taxonomía de estas bacterias es muy compleja. Hay taxonomía utilizada por los microbiólogos de todo el mundo, seguimos
cinco subclases, seis órdenes, 14 subórdenes y 44 familias. géneros Manual de Bergey en la organización de la encuesta de diversidad procariótica,
como Actinomyces, Arthrobacter, Corynebacterium, Micrococ capítulos 20 a 24. En la medida de lo posible, la organización de la
Se emplea la segunda edición del Manual de Bergey . El capítulo 20 está dedicado los nombres permanecen sin cambios en la segunda edición del Manual de Bergey.
a Archaea. El capítulo 21 cubre las bacterias del volumen uno. Por el contrario, los nombres de órdenes y taxones superiores no siempre están
y cinco excepto Archaea. El capítulo 22 está dedicado a las proteobacterias. Los completamente asentados. Porque los nombres de clases y órdenes
capítulos 23 y 24 tratan sobre el GC bajo y el GC alto. todavía están cambiando, su uso se mantiene al mínimo.
bacterias grampositivas, respectivamente. El contenido del capítulo sigue el
esquema filogenético general del Manual de Bergey. filogenético y
1. Resuma brevemente los dos filos en el dominio archaeal.
los detalles organizativos bien pueden cambiar un poco antes de la publicación
2. Dé algunas formas en que las cinco clases de proteobacterias difieren de
de cada volumen, pero la imagen general debe reflejar adecuadamente la
El uno al otro.
segunda edicion.
3. ¿En qué filas (y clases de Proteobacteria y Firmicutes) se ubican las
Finalmente, se debe enfatizar que la nomenclatura procariótica
siguientes: cianobacterias, bacterias verdes no sulfurosas, Rickettsia,
está muy en proceso de cambio. Los nombres de familias y géneros son bastante
Enter obacteriaceae, Campylobacter, Clostridium, micoplasmas, Bacillus,
bien establecido y estable en el nuevo sistema (al menos en ausencia de futuros
Streptomyces y Mycobacterium, Chlamydia, Treponema y Cytophaga?
descubrimientos); de hecho, muchas familias y géneros
Resumen
19.1 Evolución microbiana C. El contenido de GC del ADN se determina fácilmente y es taxonómicamente valioso
un. La vida precelular puede haber sido un "mundo de ARN" porque el ARN tiene la capacidad porque es un reflejo indirecto de la secuencia de bases (tabla 19.6).
capacidad para replicar y catalizar reacciones químicas. D. Los estudios de hibridación de ácidos nucleicos se utilizan para comparar secuencias de ADN
B. Los organismos vivos se pueden dividir en tres dominios: Eucarya, Bacte ria y Archaea (tabla o ARN y así determinar la relación genética (figura 19.9).
19.1). mi. La secuenciación de ácidos nucleicos es el método más poderoso y directo para comparar
C. El origen de las células eucariotas es una cuestión sin resolver. La raíz del árbol filogenético genomas. Las secuencias de rRNA 16S y 18S se utilizan con mayor frecuencia en
universal sugiere que Bacteria, Archaea y Eucarya tienen un solo estudios filogenéticos de microbios procarióticos y eucarióticos, respectivamente
ancestro común, pero que Archaea y Eucarya evolucionaron independientemente de (figura 19.10). Los genomas microbianos completos ahora están siendo secuenciados y
las bacterias (figura 19.3). comparado.
D. La teoría endosimbiótica afirma que las mitocondrias y los cloroplastos evolucionaron F. La secuencia de aminoácidos de algunas proteínas puede ser taxonómica y filogenéticamente
de un endosimbiótico -proteobacterium y cyanobacterium, respectivamente. relevante, aunque el valor de cada proteína debe evaluarse individualmente.
Los hidrogenosomas y las mitocondrias probablemente derivan de un solo ancestro común
(figura 19.4). 19.5 Evaluación de la filogenia microbiana
un. Las relaciones filogenéticas a menudo se muestran en forma de diagramas ramificados.

19.2 Introducción a la clasificación y taxonomía microbiana llamados árboles filogenéticos (figura 19.13). Los árboles pueden estar enraizados o no
un. La taxonomía, la ciencia de la clasificación biológica, se compone de tres partes: enraizados y se crean de varias maneras diferentes.
clasificación, nomenclatura e identificación. B. Las secuencias de ARNr, ADN y proteínas se utilizan para producir filogenética
B. Se utiliza un enfoque polifásico para clasificar los microbios. Esto incorpora información árboles. A menudo, los miembros de un grupo tendrán una secuencia de ARNr característica
mación obtenida del análisis genético, fenotípico y filogenético. única que los distingue de los miembros de otros grupos taxonómicos.
C. Las clasificaciones pueden construirse por medio de taxonomía numérica, en

el cual la similitud general de los organismos se determina usando un software de 19.6 Las principales divisiones de la vida
computadora para calcular y analizar los coeficientes de asociación (figura 19.6). un. Aunque la mayoría de los microbiólogos favorecen el sistema de tres dominios, existen
alternativas como los sistemas de cinco, seis y ocho reinos (figura 19.16).
19.3 Rangos taxonómicos
B. En 2005, la Sociedad Internacional de Protistólogos propuso un esquema de clasificación de
un. Los rangos taxonómicos se organizan en una jerarquía que no se superpone (figura 19.7). nivel superior de Eucarya basado filogenéticamente (tabla 19.9).
B. La definición de especie es diferente para la reproducción sexual y asexual.

organismos Una especie procariótica es una colección de cepas que tienen muchas 19.7 Manual de Bacteriología Sistemática de Bergey
propiedades estables en común y difieren significativamente de otros grupos de un. El Manual de Bacteriología Sistemática de Bergey proporciona el sistema aceptado de
son.
taxonomía procariótica.
C. Los microorganismos se nombran según el sistema binomial. B. La segunda edición del Manual de Bergey proporciona clasificaciones filogenéticas.
Los procariotas se dividen en dos dominios y 25 phyla (tabla 19.11, y
19.4 Técnicas para determinar la taxonomía y filogenia microbiana figuras 19.17 y 19.18). Comparaciones de secuencias de ácidos nucleicos, particularmente
un. El enfoque clásico para determinar la taxonomía y filogenia microbiana incluye el uso de Las secuencias de ARNr 16S son la base de esta clasificación.
características morfológicas, fisiológicas, metabólicas, ecológicas y genéticas.

19.8 Estudio de la filogenia y la diversidad de las procarióticas
B. El estudio de la transformación y la conjugación en bacterias es a veces taxonómicamente un. La segunda edición del Manual de Bergey tiene cinco volúmenes. La organización general
útil. Los rasgos transmitidos por plásmidos pueden causar errores en la taxonomía bacteriana de los cinco volúmenes se resume en la tabla 19.10 y se describe brevemente
si no se tiene cuidado. aquí.
Aprende más 501
(1) Volumen 1: Las arqueas y las bacterias fototróficas y profundamente ramificadas. Este volumen (4) Volumen 4: Las bacterias grampositivas de alto GC. bacterias grampositivas
describe las arqueas, las cianobacterias, las bacterias verdes sulfurosas y no sulfurosas, los con contenido de GC por encima de alrededor del 50 al 55% están en este volumen. Tales grupos
deinococos y otros grupos profundamente ramificados. como Corynebacterium, Mycobacterium, Nocardia y los actinomicetos son
(2) Volumen 2: Las Proteobacterias. Todas las proteobacterias (bacterias moradas) son ubicado aquí.
colocados en este volumen y se dividen en cinco grupos principales basados en rRNA (5) Volumen 5: Planctomycetes, Spirochaetes, Fibrobacteres, Bacteroidetes,
secuencias y otras características: -proteobacteria, -proteobacteria, - y fusobacterias. El Volumen 5 tiene una variedad de diferentes grupos de bacterias gramnegativas.
proteobacteria, -proteobacteria y -proteobacteria. Los ejemplos más importantes en la práctica son las clamidias y
(3) Volumen 3: Las bacterias grampositivas de bajo GC. Este volumen contiene las espiroquetas.
bacterias grampositivas con un contenido de GC inferior al 50 % aproximadamente. Algunos de los
grupos principales son los clostridios, los bacilos, los estreptococos y los estafilococos. Mis
coplasmas también se colocan aquí.
Términos clave
anagénesis 477 Coeficiente de Jaccard (SJ) 479 análisis de parsimonia 489 serovariedad 480
sistema binomial 480 macroevolución 477 sistema fenético 478 matriz de similitud 479
biovar 480 temperatura de fusión (Tm) 483 fenómenos 479 coeficiente de coincidencia simple
dendograma 479 microevolución 477 clasificación filogenética o filética (SSM) 479
hipótesis endosimbiótica 476 cronómetros moleculares 488 sistemas 478 ARN ribosómico de subunidad pequeña (SSU)
distancia evolutiva 489 morfovar 480 árbol filogenético 489 ARNr) 474
contenido de GC 483 tipificación de secuencias multilocus filogenia 478 especie 480
(MLST) 486 taxonomía polifásica 478 tensión 480

hipótesis de fusión del genoma 475
clasificación natural 478 especies procarióticas 480 estromatolitos 473
huellas dactilares genómicas 487
clasificación genotípica 478 nomenclatura 478 protistas 491 sistemática 478
hibridación de ácidos nucleicos 483 equilibrios puntuados 477 taxón 478

género 481
hipótesis del hidrógeno 476 taxonomía numérica 479 ribozimas 472 taxonomía 478
hidrogenosoma 476 secuencias distintivas de ARN mundo 472 tipo cepa 480
identificación 478 oligonucleótidos 485 teoría endosimbiótica serial (SET) 477 árbol filogenético universal 475
1. ¿Qué experimentos podrían diseñarse en una microbiología y/o química moderna? 4. Los procariotas se clasificaron fenéticamente en la primera edición del Manual de Bergey
¿Laboratorio de investigación para probar la hipótesis del mundo del ARN? de Bacteriología Sistemática. ¿Cuáles crees que son las ventajas y desventajas de la clasificación
filogenética utilizada en la segunda edición?
2. Comparar los hallazgos del árbol filogenético universal y la fusión del genoma
hipótesis. Debatir los pros y los contras de cada uno. 5. Discuta los problemas para desarrollar un árbol filogenético preciso. ¿Es posible crear un árbol
filogenético universal completamente exacto?
3. Considere el hecho de que el uso de la secuenciación del ARNr 16S como herramienta taxonómica y
filogenética ha resultado en la triplicación del número de filos procarióticos. Por qué 6. ¿Por qué es probable que cambie considerablemente el actual sistema de clasificación de procariotas?
¿Cree que el advenimiento de esta técnica genética ha ampliado el número actualmente aceptado ¿Cómo se seleccionarían las mejores características para usar en la identificación de procariotas
de filos microbianos? desconocidos y la determinación de la relación?
Aprende más
ADL, SM; Simpson, AGB; Agricultor, MA; Anderson, RA; Anderson, Oregón; Ciccarelli, FD; Doerks, T.; von Mering, C.; Creevey, CJ; Snel, B.; y Bork, P.
Barta, JR; y Bowser, SS, et al. 2005. La nueva clasificación de grado superior 2006. Hacia la reconstrucción automática de un árbol de la vida altamente resuelto. Ciencia.
de eucariotas con énfasis en la taxonomía de protistas. J. Eucariota. Microbiología. 52:399–451. 311:1283–1287.
Doolittle, WF 2000. Arrancando el árbol de la vida. ciencia Soy. 282(2):90–95.

Baquero, FI; Negri, MC; y Morosin, MI 1998. Selección de diferencias muy pequeñas en la evolución
Dyall, SD; Marrón, MT; y Johnson, PJ 2004. Invasiones antiguas: de endosimbiontes a orgánulos. Ciencia
bacteriana. Internacional Microbiol. 1:295–300.
304: 253–57.
Boxma, B., et al. 2005. Una mitocondria anaeróbica que produce hidrógeno. Nature 434:74–79.
Garrity, gerente general, editor en jefe. 2001. Manual de bacteriología sistemática de Bergey. Martin, M. y Miklos, M. 1998. La hipótesis del hidrógeno para el primer eucariota.
2ª ed., vol. 1, DR Boone y RW Castenholz, editores. Nueva York: Springer Verlag. Naturaleza 392:37–41.
Mayr, E. 1998. ¿Dos imperios o tres? proc. nacional Academia ciencia 95:9720–23.
Garrity, gerente general, editor en jefe. 2005. Manual de bacteriología sistemática de Bergey, Pace, NR 1997. Una visión molecular de la diversidad microbiana y la biosfera. ciencia
2ª ed., vol. 2, DJ Brenner, NR Krieg, JT Staley, editores. Nueva York: encia 276:734–40 .
Springer-Verlag.
Sapp, J. 2005. La dicotomía procariota-eucariota: significados y mitología. Mi crobiol. mol. biografía
Gevers, D.; Cohan, FM; Lorenzo, JG; Spratt, BG; Coenye, T.; Feil, EJ; Apocalipsis 69:292–305.
Stackenbrandt, E., et al. 2005. Reevaluación de especies procarióticas. Naturaleza Rev.
Microbiol. 3:733–39. Woese, CR y Fox, GE 1977. Estructura filogenética del dominio procariótico: los reinos primarios.
proc. nacional Academia ciencia EE.UU. 74:5088–90.
Hall, BG 2001. Árboles filogenéticos simplificados: un manual práctico para biólogos moleculares.
Woese, CR; Kandler, O.; y Wheelis, ML 1990. Hacia un sistema natural de
Sunderland, Mass: Sinauer Associates.
organismos: Propuesta para los dominios Archaea, Bacteria y Eucarya. proc.
Hrdy, I.; Hirt, RP; Dolezal, P.; Bardonová, L.; Fomentar, PG; Tachezy, J.; y Em bley, TM 2004. Los nacional Academia ciencia 87:4576–79.
hidrogenosomas de Trichomonas contienen el módulo NADH deshidrogenasa del complejo
mitocondrial I. Nature 432:618–22.
Koch, AL 2003. ¿Fueron los bacilos grampositivos las primeras bacterias? Tendencias microbianas.
11(4):166–70.

20Las arqueas
Las arqueas se encuentran a menudo en ambientes extremos como este géiser en

Parque Nacional Yellowstone.
AVANCE
• Archaea difiere en muchos aspectos tanto de Bacteria como de Eu carya. Estos incluyen En este capítulo comenzamos con una introducción general a Archaea.
diferencias en la estructura y química de la pared celular, Luego discutimos brevemente la biología de cada grupo arqueológico principal.
estructura lipídica de la membrana, biología molecular y metabolismo.
• Las arqueas son más conocidas por crecer en unos pocos hábitats restringidos
(por ejemplo, los que son hipersalinos o de alta temperatura). Sin embargo lo és
ahora es evidente que las Archaea están más ampliamente distribuidas.
• La edición actual del Manual de Bergey divide las Archaea en La comparación de las secuencias de ARNr de una gran variedad de
dos filos, Crenarchaeota y Euryarchaeota, cada uno con varias
organismos muestra que los organismos pueden dividirse en tres dominios:
pedidos.
Bacteria, Archaea y Eucarya (ver figura 19.3). Algunos
• Muchas Archaea tienen características estructurales, químicas y metabólicas especiales. de las características más importantes de estos dominios se resumen
adaptaciones que les permiten crecer en ambientes extremos. en la tabla 19.1. Debido a que las Archaea son diferentes tanto de las bacterias
• Las arqueas metanogénicas y reductoras de sulfato tienen cofactores únicos que como de los eucariotas, sus propiedades más distintivas son primero
participan en la metanogénesis. descrito con cierto detalle y comparado con los de este último
dos grupos.
20.1 INTRODUCCIÓN A LAS ARCHAEA

Manual de Bacteriología Sistemática de Bergey. Capítulos
20 y 20
Los capítulos 21 acubren el material
24 examinan contenido en
los procariotas los volúmenes
descritos en 1y Las Archaea [del griego archaios, antiguo] incluyen microbios
5 de la segunda edición. El capítulo 20 describe Archaea; el capítulo 21 se encontrado en dos filos; Crenarchaeota y Euryarchaeota _
centra en los grupos bacterianos de los volúmenes 1 y 5. El capítulo 22 cubre (figura 20.1). Al igual que las bacterias, las arqueas son muy diversas,
las proteobacterias, que se encuentran en el volumen 2. tanto en morfología como en fisiología. Pueden teñir cualquier gramo
El Volumen 3 está dedicado a las bacterias grampositivas de bajo GC, positivo o gram negativo y puede ser esférico, en forma de bastón,
que discutimos en el capítulo 23. Finalmente, el capítulo 24 trata con el espiral, lobulada, cúbica, triangular, en forma de placa, irregularmente
bacterias de alto GC de volumen 4. conformado o pleomórfico. Algunas son células individuales, mientras que otras
Como suele ser el caso, las ideas que marcan una época llevan consigo supuestos implícitos y no analizados que, en última instancia,
impedir el progreso científico hasta que sean reconocidos por lo que son. Lo mismo ocurre con la distinción entre procariotas
y eucariotas. Nuestra incapacidad para comprender su verdadera naturaleza preparó el escenario para el repentino desmoronamiento de
el concepto cuando se descubrió una "tercera forma de vida" a fines de la década de 1970, un descubrimiento que en realidad dejó
muchos biólogos incrédulos. Las arqueobacterias, como se conoce a esta tercera forma, han revolucionado
nuestra noción del procariota, han alterado y refinado la forma en que pensamos sobre la relación
. en la visión que desarrollemos del antepasado
entre procariotas y eucariotas. . e influirá fuertemente
que dio origen a toda la vida existente.
—CR Woese y RS Wolfe

504 Capítulo 20 Las arqueas
Crenarchaeota Membranas y paredes celulares de las arqueas

arqueas
Euryarchaeota Como se discutió en el capítulo 3, las arqueas pueden teñir grampositivas
Aquificae o gram negativas, aunque carecen del ácido murámico y
termotogas D-aminoácidos que componen el peptidoglicano. Sin las limitaciones de la molécula
cloroflexi conservada de peptidoglicano, las células arqueales
Deinococcus-Thermus Las paredes pueden ser bastante diversas. Por ejemplo, algunas arqueas
metanogénicas tienen pseudomureína (un polímero similar al peptidoglicano que es
Gram-positivos de bajo GC reticulados con L-aminoácidos), mientras que otros contienen un complejo
polisacárido similar al sulfato de condroitina del tejido conjuntivo animal. Curiosamente,
Gram-positivos de GC alto
algunas arqueas hipertermófilas y
Los metanógenos tienen paredes de proteínas. Paredes celulares de arqueas (sección 3.7)
Una de las características más distintivas de las arqueas son los lípidos de su
proteobacteria
membrana. Como se muestra en la tabla 19.1, las Archaea difieren de ambas
Las bacterias y Eucarya tienen hidrocarburos de cadena ramificada unidos al glicerol
mediante enlaces éter (en lugar de éster). Las arqueas termófilas a veces unen dos
espiroquetas grupos de glicerol para formar
cianobacterias tetraéteres largos. Las cadenas laterales de Diether suelen tener 20 carbonos de largo,
Planctomycetes y Chlamydiae y las cadenas de tetraéter contienen 40 átomos de carbono. Sin embargo, las células
clorobi puede ajustar la longitud de la cadena ciclando las cadenas para formar anillos
Bacteroidetes pentacíclicos. Tales anillos pentacíclicos son utilizados por archaea termófilas para
ayudar a mantener el delicado equilibrio cristalino líquido de
la membrana a altas temperaturas. Los fosfolípidos polares, los sulfolípidos y los
Figura 20.1 Relaciones filogenéticas entre
glicolípidos también se encuentran en las membranas de las arqueas.
Procariotas. Las Archaea están resaltadas.
Membranas de células procarióticas (sección 3.2)
Genética y Biología Molecular

formar filamentos o agregados. Varían en diámetro de 0,1 a Algunas características de la genética de las arqueas son similares a las de las
más de 15 m, y algunos filamentos pueden crecer hasta 200 m de longitud. bacterias, mientras que otras se parecen más a las de Eucarya. los
La multiplicación puede ser por fisión binaria, brotación, fragmentación, Los genomas de algunas arqueas son significativamente más pequeños que los de
u otros mecanismos. Las Archaea son igualmente diversas fisiológicamente. Pueden muchas bacterias. Por ejemplo, mientras que el genoma de Bacillus subtilis
ser aeróbicos, facultativamente anaeróbicos o estrictamente es de 4,20 millones de pares de bases (Mb), el crenarchaeote Pyrobaculum
anaeróbico Nutricionalmente van desde quimiolitoautótrofos hasta El genoma de aerophilum es de 2,22 Mb y el de Methanobacterium
organótrofos. Incluyen psicrófilos, mesófilos e hipertermófilos que pueden crecer por thermoautotrophicum, un euryarchaeote, es de 1,75 Mb. Un signo de diversidad
encima de los 100°C. arqueológica es la variación en el contenido de GC, de alrededor del 21%
al 68%. Hasta la fecha, parece que Archaea tiene pocos plásmidos.
Genómica comparativa entre los completamente secuenciados
Ecología Los genomas de arqueas, bacterias y eucariotas muestran varias tendencias
Los tipos de ambientes donde las arqueas se han encontrado con más frecuencia aparentes. Primero, alrededor del 30% de todos los genes compartidos exclusivamente
encontrados incluyen áreas con temperaturas muy altas o bajas o entre arqueas y eucariotas codifican proteínas involucradas en
pH, sales concentradas o completamente anóxico. Estos son generalmente transcripción, traducción o metabolismo del ADN. En cambio, una gran
denominados “ambientes extremos”. Sin embargo, términos como número de genes compartidos solo entre Bacteria y Archaea
extremo e hipersalino reflejan una perspectiva humana, lo que significa participan en rutas metabólicas. Además, hay evidencia
que son situaciones donde los humanos no podrían sobrevivir. Sobre el para la transferencia horizontal de genes entre estos dos dominios, especialmente
contrario, la mayor parte de la Tierra (los océanos) es un “ambiente extremo” donde entre bacterias termófilas y arqueas (ver figura
hace mucho frío (alrededor de 4°C), oscuro y bajo altas temperaturas. 19.15). El pequeño número de genes encontrados en los tres dominios
presión. Muchas arqueas están bien adaptadas a estos ambientes, no parece ajustarse a ningún patrón específico.
donde pueden crecer en grandes números. Por ejemplo, las arqueas constituyen al La replicación del ADN de las arqueas parece ser una mezcla compleja de
menos el 34% de la biomasa procariótica en al menos algunos Características eucarióticas y procarióticas. Al igual que las bacterias, la mayoría de las arqueas
Aguas costeras antárticas. En algunos ambientes hipersalinos, su tienen cromosomas circulares con un solo origen de replicación, y
las poblaciones se vuelven tan densas que la salmuera es roja con archaeal la replicación parece ser bidireccional. Sin embargo, en archaeal
pigmentos Algunas arqueas son simbiontes en el tracto digestivo de genomas que han sido secuenciados, el origen de replicación está flanqueado
animales Las secuencias de genes Archaeal se han encontrado en el suelo y por genes que codifican la proteína de iniciación de tipo eucariótico Cdc6/Orc1
aguas superficiales oceánicas templadas y tropicales. Microoganismos en y al menos unas pocas arqueas tienen orígenes múltiples. Si bien originalmente se
ambientes marinos y de agua dulce (capítulo 28) pensó que las proteínas de replicación de las arqueas eran uniformemente
Introducción a las arqueas 505
Un análisis adicional del genoma de tipo eucariótico revela que algunas proteínas de tiempos difiere del de los ribosomas bacterianos y eucarióticos.
replicación son similares a las de las bacterias, mientras que otras son similares. Se asemejan a los ribosomas eucarióticos en su sensibilidad al antibiótico anisomicina
únicamente arqueal. Algunos cromosomas de arqueas difieren de las bacterias en que y su insensibilidad al cloranfenicol y
tienen histonas similares a las eucariotas que se unen al ADN para formar kanamicina. Además, su factor de elongación 2 reacciona con la toxina diftérica como
estructuras similares a nucleosomas. lo hace el EF-2 eucariótico. Traducción (sección 11.8)
La transcripción en Archaea también combina características bacterianas y Al igual que la síntesis de proteínas arqueales, la secreción de proteínas arqueales tiene
eucarióticas. Las ARN polimerasas de arqueas constan de al menos 10 características bacterianas y eucarióticas. Los tres dominios tienen partículas de
subunidades altamente homólogas a las subunidades eucarióticas. También, reconocimiento de señales (SRP) que se dirigen a nuevas proteínas a los sitios de
Al igual que la polimerasa de ARN nuclear eucariota, las polimerasas de ARN de translocación de cationes, pero el SRP archaeal difiere de los otros dos.
arqueas no reconocen eficientemente las regiones promotoras sin la dominios Al igual que en las bacterias, el SRP de las arqueas se une a la secuencia
ayuda de proteínas adicionales. En cambio, el reconocimiento del promotor depende señal de una preproteína y puede dirigirla a la proteína dependiente de Sec.
de al menos dos proteínas similares a las eucarióticas: la proteína de unión a la caja vía de secreción para el transporte a través de la membrana plasmática. los
TATA (TBP) y el factor de transcripción B (TFB). Por lo tanto es Sin embargo, las proteínas de la vía dependientes de Archaeal Sec
No sorprende que muchos promotores de arqueas sean similares a ciertos se parecen más a las de la vía eucariótica que a las proteínas bacterianas. Después
promotores eucarióticos, que poseen una caja TATA (una secuencia de 7 pb de que la preproteína se mueve a través de la membrana, su señal
encontrado alrededor de 25 pb antes del sitio de inicio de la transcripción) precedido por la secuencia es eliminada por una peptidasa señal que se asemeja a una subunidad
una región rica en purina llamada elemento B sensible (BRE). En eu cariotas, el BRE de la peptidasa eucariótica. Secreción de proteínas en procariotas (sección 3.8)
es el sitio al que se une el factor de transcripción IIB.
Se cree que Archaeal TFB y TBP se unen a la región BRE de
El ADN como requisito previo para el ensamblaje de subunidades de ARN polimerasa Metabolismo
antes del inicio de la transcripción (figura 20.2). Sin embargo, No es sorprendente, en vista de su variedad de estilos de vida, archaeal
El ARNm de las arqueas parece ser similar al ARNm bacteriano en el sentido de que El metabolismo varía mucho entre los miembros de diferentes
es policistrónico y no hay evidencia de empalme de ARNm. Transcripción: grupos Algunas arqueas son organótrofas; otros son autótrofos. A
Transcripción en Archaea (sección 11.6) pocos incluso realizan fototrofia basada en rodopsina.
Finalmente, la maquinaria de traslación en Archaea es El metabolismo de los carbohidratos de las arqueas se entiende mejor. La enzima
único. A diferencia de las bacterias y los eucariotas, el brazo TC de 6-fosfofructoquinasa no se ha encontrado en ninguna arquea,
Archaeal tRNA carece de timina y contiene pseudouridina o 1- y no parecen degradar la glucosa a través de la ruta de Embden Meyerhof. Sin
metilpseudouridina. El ARNt iniciador de arqueas transporta metionina al igual que el embargo, algunos hipertermófilos parecen
ARNt iniciador eucariótico. Aunque archaeal tienen una vía de Embden-Meyerhof modificada que involucra varios
Los ribosomas son 70S, similares a los ribosomas bacterianos, los estudios de nuevas enzimas, incluida una fosfofructoquinasa dependiente de ADP. Los halófilos y
microscopía electrónica muestran que su forma es bastante variable y algunos termófilos extremos catabolizan la glucosa utilizando una forma modificada de la vía
de Entner-Doudoroff en la que el
los intermedios iniciales no están fosforilados. Todas las arqueas que tienen
estudiado puede oxidar el piruvato a acetil-CoA. Les falta el
BRE complejo piruvato deshidrogenasa presente en eucariotas y bacterias respiratorias y
utiliza la enzima piruvato oxidorreductasa para
este propósito. Los halófilos y el termoplasma termófilo extremo parecen tener un ciclo
de ácido tricarboxílico funcional.
Los metanógenos no catabolizan la glucosa de manera significativa,
por lo que no es de extrañar que carezcan de un tricarboxílico completo
ciclo ácido. Se ha obtenido evidencia de cadenas respiratorias funcionales en halófilos
y termófilos. La descomposición de la glucosa en
piruvato (sección 9.3); El ciclo del ácido tricarboxílico (sección 9.4)
Se sabe muy poco en detalle acerca de las rutas biosintéticas en
sitio de inicio las arqueas. Los datos preliminares sugieren que las vías sintéticas
para aminoácidos, purinas y pirimidinas son similares a los de
otros organismos. Algunos metanógenos pueden fijar el dinitrógeno atmosférico.
Muchas arqueas, incluidas las halófilas y las metanógenas, utilizan un
inversión de la vía de Embden-Meyerhof para sintetizar glucosa,
y al menos algunos metanógenos y termófilos extremos emplean
Figura 20.2 Los promotores de Archaeal se parecen a los de glucógeno como principal material de reserva. Síntesis de azúcares y
eucariotas. La estructura cristalina del complejo ternario entre polisacáridos (sección 10.4); Síntesis de aminoácidos (sección 10.5)
TBP, el extremo carboxilo de TFB y una región de ADN que contiene un La autotrofia está muy extendida entre los metanógenos y los extremos.
Caja TATA y BRE. El ADN se muestra en gris; TBP es la cinta amarilla termófilos, y la fijación de CO2 ocurre en más de una forma. Thermoproteus y
estructura; y TFB es magenta, con su hélice de reconocimiento en turquesa. posiblemente Sulfolobus incorporan CO2 por el mecanismo reductor
ciclo del ácido tricarboxílico (figura 20.3a). Esta vía también está presente divididos en cinco grupos principales basados en diferencias fisiológicas y
en las bacterias verdes del azufre. Las arqueas metanogénicas y morfológicas.
probablemente los termófilos más extremos incorporan CO2 mediante la vía Sobre la base de la evidencia filogenética, el Manual de Bergey divide
reductora de acetil CoA (figura 20.3b). Una vía similar también está presente las Archaea en phyla Euryarchaeota [griego eurus, ancho, y griego archaios,
en las bacterias acetogénicas y en las bacterias reductoras de sulfato autótrofas. antiguo o primitivo] y Crenarchaeota [griego crene, manantial o fuente, y
archaios]. Los euriarqueotes reciben este nombre porque ocupan muchos
nichos ecológicos diferentes y tienen una variedad de patrones metabólicos.
Taxonomía Archaeal A El phylum Eur yarchaeota es muy diverso con ocho clases (Methanobacteria,
estas alturas debería quedar claro que las Archaea son bastante distintas Methanococci, Halobacteria, Thermoplasmata, Thermococci, Arch chaeglobi,
de otros organismos vivos. Dentro del dominio, sin embargo, existe una gran Methanopyri, y la recientemente agregada Methanomicro-
diversidad. Como se muestra en la tabla 20.1, el Archaea puede ser di
Figura 20.3 Mecanismos de fijación autótrofa Glucosa P

de CO2 . (a) El ciclo reductor del ácido
tricarboxílico. El ciclo se invierte con ATP y
equivalentes reductores [H] para formar acetil-
CoA a partir de CO2. El acetil-CoA se puede piruvato de fosfenol
carboxilar para producir piruvato, que luego se
puede convertir en glucosa y otros compuestos.
Esta secuencia parece funcionar en Thermoproteus
neutrophilus. (b) La síntesis de acetil-CoA y
piruvato
piruvato a partir de CO2 en Methanobacterium
thermoautotrophicum. Un carbono proviene de la oxaloacetato
2[H]
reducción del CO2 a un grupo metilo, y el segundo CO2
se produce al reducir el CO2 a monóxido de Acetil-CoA
malato
carbono mediante la acción de la enzima CO
deshidrogenasa (E1). Luego, los dos carbonos se H2O
combinan para formar un grupo acetilo. Corrin-E2 Fumarato
representa la enzima que contiene cobamida 2[H]
involucrada en las transferencias de metilo. Las ADP+Pi
succinato
coenzimas y enzimas metanógenas especiales se
atp CoASH
describen en las figuras 20.10 y 20.11.
CoASH
ADP atp
+ Pi
Citrato
Succinil-CoA
2[H] CoASH
isocitrato
CO2
ÿ-cetoglutarato
2[H] CO2
(a)
Corrin-E2
6[H]
CO2 CH3X _ CH3 Corrin-E2
MFR
H4MPT O CoASH O CO2
CH3 C E1 CH3 C SCoA piruvato
CO deshidrogenasa (E1)
2[H]
CO2 CO E1
CO
(B)
Filo Crenarchaeota 507
Cuadro 20.1 Características de los principales grupos fisiológicos de arqueas
Grupo Características generales Géneros representativos
Arqueas metanogénicas Anaerobios estrictos. El metano es el principal producto metabólico final. S0 puede ser Metanobacteria
reducido a H2S sin producir producción de energía. Las células poseen coenzima M, metanococo
factores 420 y 430 y metanopterina. metanomicrobio
Metanosarcina
Reductores de sulfato Archaeal Células cocoides gramnegativas irregulares. H2S formado a partir de tiosulfato y sulfato. Arqueoglobo
Crecimiento autótrofo con tiosulfato y H2. Puede crecer heterótrofamente.
También se formaron trazas de metano. Extremadamente termofílico y estrictamente anaeróbico.
Posee factor 420 y metanopterina pero no coenzima M ni factor 430.
Archaea extremadamente halófilas Bastones, cocos o células de forma irregular, que pueden incluir pirámides o cubos. Halobacteria
Se tiñen de gram negativas o gram positivas, pero como todas las arqueas Halococo
carecen de peptidoglicano. Principalmente quimioorganoheterótrofos. La mayoría de las Natronobacteria
especies requieren cloruro de sodio 1,5 M, pero algunas sobreviven con tan solo 0,5 M. La
mayoría produce colonias características de color rojo brillante; algunos no están pigmentados.
De neutrofílico a alcalofílico. Generalmente mesófilo; sin embargo, se sabe que al
menos una especie crece a 55°C. Poseen bacteriorrodopsina o halorrodopsina y
pueden usar energía luminosa para producir ATP.
Archaea sin pared celular Células pleomórficas que carecen de pared celular. Termoacidofilico y Termoplasma
quimioorganotrófico. Facultativamente anaeróbico. La membrana plasmática contiene
una glicoproteína rica en manosa y un lipoglucano.
Extremadamente termófilo Bacilos, filamentos o cocos gramnegativos. Obligadamente termófila (temperatura de desulfurococo
S0 -metabolizadores crecimiento óptima entre 70 y 110 °C). Por lo general, son anaerobios estrictos, pero pirodictio
pueden ser aerobios o facultativos. acidófilos o neutrofílicos. autótrofos o heterótrofos. pirococo
La mayoría son metabolizadores de azufre. S0 reducido a H2S anaeróbicamente; H2S Sulfolobus
o S0 oxidado a H2SO4 aeróbicamente. termococo
termoproteo
bia), nueve órdenes y 16 familias. Los metanógenos, extremo

1. ¿Qué son las Archaea? Describa brevemente las formas principales en que se
halófilos, reductores de sulfato y muchos termófilos extremos con
diferencian de las bacterias y los eucariotas.
metabolismo dependiente del azufre se localizan en Euryarchaeota.
2. ¿En qué se diferencian las paredes celulares de las arqueas de las de las bacterias? ¿Qué es
Los metanógenos son el grupo fisiológico dominante.
pseudomureína?
Se cree que los crenarchaeotes (figura 20.4) se parecen al antepasado de
3. ¿En qué se diferencian los lípidos de la membrana de las arqueas de los de las bacterias y
Archaea, y casi todas las especies bien caracterizadas
eucariotas? ¿Cómo contribuyen estas diferencias a la supervivencia de
son termófilos o hipertermófilos. El filo Crenarchaeota
las arqueas termófilas e hipertermófilas?
tiene una sola clase, Thermoprotei, que se divide en cuatro órdenes y seis familias. El
4. Enumera las diferencias entre Archaea y otros organismos con respecto a
orden Thermoproteales contiene gramnegativos anaeróbicos a facultativos,
Replicación, transcripción y traducción del ADN.
hipertermofílicos.
5. Describa brevemente la forma en que las arqueas degradan y sintetizan la glucosa. En
varillas A menudo crecen quimiolitoautotróficamente al reducir el azufre a sulfuro de
¿De qué dos formas inusuales incorporan CO2?
hidrógeno. Los miembros del orden Sulfolobales son
6. ¿Cómo se distinguen los filos Euryarchaeota y Crenarchaeota?
termoacidófilos en forma de coco. El orden Desulfurococcales
contiene cocoides con tinción gramnegativa o hipertermófilos en forma de disco.
Crecen quimiolitotróficamente por hidrógeno
oxidación u organotróficamente por fermentación o respiración con
azufre como aceptor de electrones. Recientemente se añadió la orden Caldisphaerales .
20.2 FILO CRENARCHAEOTA
Tiene un solo género, Caldisphaera, cuyos miembros Como se mencionó anteriormente, la mayoría de las crenarqueotas que han
Son cocos termoacidofílicos, aerobios, heterótrofos. la taxonomía cultivadas son extremadamente termófilas, y muchas son ácidas y dependientes del
de ambos filos indudablemente se someterán a más revisiones a medida que más azufre. El azufre se puede utilizar como un
se descubren organismos. Este es particularmente el caso de los cre narchaeotes aceptor de electrones en la respiración anaeróbica o como donante de electrones
debido al descubrimiento de formas mesófilas en el por litótrofos. Muchos son anaerobios estrictos. Crecen en agua calentada
Oceano; estas crenarchaeotas pueden constituir una fracción significativa de geotérmicamente o en suelos que contienen azufre elemental. Estas
el picoplancton oceánico. Los entornos están dispersos por todo el mundo. Ejemplos son los
Figura 20.4 El Phylum Crenarchaeota. Un árbol filogenético desarrollado con datos de rRNA 16S para especies de tipo crenarchaeotal. Se indican tres órdenes.
aguas termales ricas en azufre en el Parque Nacional de Yellowstone y las organotróficamente y oxidan glucosa, aminoácidos, alcoholes y ácidos
aguas que rodean las áreas de actividad volcánica submarina (figura 20.5). orgánicos con azufre elemental como aceptor de electrones.
Tales hábitats a veces se llaman solfatara. Estas arqueas pueden ser muy Es decir, Thermoproteus puede realizar la respiración anaeróbica. También
termófilas y, a menudo, se clasifican como hipertermófilas. El ejemplo más crecerá quimiolitotróficamente usando H2 y S0 . El monóxido de carbono o
extremo fue aislado de un respiradero hidrotermal activo en el noreste del CO2 puede servir como única fuente de carbono.
Océano Pacífico. Este es uno de los tres nuevos aislamientos que constituyen Aunque los Crenarchaeota son conocidos por su vida a altas temperaturas
un nuevo género en la familia Py rodictiaceae . Su tasa de crecimiento óptima y pH ácido, el análisis de secuencias de fragmentos de ADN derivados
es de aproximadamente 105 °C, ¡pero incluso esterilizar este microbio en directamente de muestras ambientales revela que este filo está más extendido
autoclave a 121 °C durante una hora no logra matarlo! Es estrictamente en la naturaleza. Recuerde que solo una pequeña fracción de los microbios
anaeróbico y utiliza Fe(III) como receptor terminal de electrones y H2 o se ha cultivado, por lo que la capacidad de analizar comunidades microbianas
formiato como donadores de electrones (figura 20.6). utilizando técnicas moleculares es una forma importante de comprender
En la actualidad, Crenarchaeota contiene 25 géneros; dos de los géneros verdaderamente la diversidad microbiana. Dichos estudios han revelado que
mejor estudiados son Thermoproteus y Sulfolobus. Los miembros del género Crenarchaeota tiene poblaciones significativas en el plancton marino de aguas
Sulfolobus se tiñen como gramnegativos y son arqueas esféricas aeróbicas polares, templadas y tropicales. Crenarchaeotes también parece habitar
con lóbulos irregulares con una temperatura óptima de alrededor de 70 a 80 arrozales, suelos, sedimentos de lagos de agua dulce y se han aislado al
°C y un pH óptimo de 2 a 3 (figura 20.7a,b). menos dos especies simbióticas, una de un pepino de mar de agua fría y otra
Por esta razón, son termoacidófilos, llamados así porque crecen mejor a de una esponja marina. A medida que se aprenda más sobre estos microbios,
valores de pH ácidos y altas temperaturas. Su pared celular contiene nuestra comprensión de la filogenia de las arqueas sin duda mejorará y
lipoproteínas y carbohidratos. Crecen litótrofamente sobre gránulos de azufre probablemente se modificará (Microbial Diversity & Ecology 20.1). Técnicas
en fuentes y suelos ácidos calientes mientras oxidan el azufre a ácido sulfúrico para determinar la taxonomía y filogenia microbiana: Características
(figuras 20.5b y 20.7b). moleculares (sección 19.4)
El oxígeno es el aceptor de electrones normal, pero se puede usar hierro
férrico. Los azúcares y los aminoácidos como el glutamato también sirven
como fuentes de carbono y energía.
Thermoproteus es una varilla larga y delgada que se puede doblar o
20.3 FILO EURYARCHAEOTA
ramificar (figura 20.7c). Su pared celular está compuesta de glicoproteína.
Thermoproteus es un anaerobio estricto y crece a temperaturas de 70 a 97°C Euryarchaeota es un filo muy diverso con muchos géneros (figura 20.8). Aquí,
y valores de pH entre 2,5 y 6,5. Se encuentra en aguas termales y otros se discuten brevemente cinco grupos fisiológicos principales que comprenden
hábitats acuáticos calientes ricos en azufre. puede crecer los euriarqueotes.
Figura 20.5 Hábitats de arqueas termófilas. (a) El Pump Geyser en el

Parque Nacional de Yellowstone. El color naranja se debe a los pigmentos
carotenoides de las arqueas termófilas. (b) El Caldero de Azufre en el Parque
Nacional de Yellowstone. El agua está en su punto de ebullición y muy rica en
azufre. Sulfolobus crece bien en tales hábitats.
(a) (B)
(a) (B)
Figura 20.6 Crenarchaeote extremadamente hipertermofílico. (a) Un miembro de la familia Pyrodictiaceae crece después de la esterilización en autoclave a 121
°C, como lo demuestra su capacidad para reducir el Fe(III) a magnetita cuando se incuba anaeróbicamente. (b) Una micrografía electrónica de transmisión muestra la
envoltura celular de una sola capa (S) y membrana citoplasmática. La estructura de la pared celular es una característica distintiva de Archaea. Barra de escala 1m.
509
(a) (B)
Figura 20.7 Sulfolobus y Thermoproteus. (a) Una sección

delgada de Sulfolobus brierleyi. El archaeon, de aproximadamente
1 m de diámetro, está rodeado por una capa amorfa (AL) en lugar de
una pared celular bien definida; la membrana plasmática (M) también
es visible. (b) Una micrografía electrónica de barrido de una colonia
de Sulfolobus creciendo en el mineral molibdenita (MoS2) a 60°C. A
un pH de 1,5 a 3, el organismo oxida el componente de sulfuro del
mineral a sulfato y solubiliza el molibdeno. ( c ) Micrografía electrónica
de Thermoproteus tenax. Barra 1 m. (C)
Los metanógenos Los Uno de los grupos metanogénicos más inusuales es la clase
metanógenos son anaerobios estrictos que obtienen energía Methanopyri. Tiene un orden, Methanopyrales, una familia y un solo
convirtiendo CO2, H2, formiato, metanol, acetato y otros compuestos género, Methanopyrus. Este metanógeno hipertermofílico con forma de
en metano o metano y CO2. Son autótrofos cuando crecen en H2 y bastón ha sido aislado de un respiradero hidrotermal marino.
CO2. Este es el grupo más grande de arqueas. Hay cinco órdenes Methanopyrus kandleri tiene una temperatura mínima de 84°C y una
(Methanobacteriales, Methanococcales, Methanomicro biales, óptima de 98°C; crecerá a temperaturas de hasta 110°C.
Methanosarcinales y Methanopyrales) y 26 géneros, que difieren mucho Methanopyrus ocupa la rama más profunda y antigua de los
en forma general, secuencia de ARNr 16S, química y estructura de la euriarqueotes. Quizás los antepasados de las arqueas metanogénicas
pared celular, lípidos de la membrana y otras características. Por se encontraban entre los primeros organismos. Ciertamente parecen
ejemplo, los metanógenos construyen tres tipos diferentes de paredes celulares.
estar bien adaptados para vivir en condiciones similares a las que se
Varios géneros tienen paredes con pseudomureína; otras paredes supone que existieron en una Tierra joven.
contienen proteínas o heteropolisacáridos. La morfología de algunos Como podría deducirse de la capacidad de los metanógenos para
metanógenos se muestra en la figura 20.9, y las propiedades producir metano en forma anaeróbica, su metabolismo es inusual.
seleccionadas de géneros representativos se presentan en la tabla Estos procariotas contienen varios cofactores únicos:
20.2. Cabe señalar que, aunque casi todas las arqueas de estos tetrahidrometanopterina (H4MPT), metanofurano (MFR), coenzima M
órdenes son metanógenos, los metanótrofos (es decir, organismos que (ácido 2-mercaptoetanosulfónico), coenzima F420 y coenzima F430
usan metano como carbono y fuente de energía) se han descubierto (figura 20.10). Los tres primeros cofactores llevan la unidad C1 cuando
recientemente en los Methanosarcinales (Microbial Diversity & Ecology 20.2). el CO2 se reduce a CH4. F420 transporta electrones y protones, y F430
Pyrobaculum aerophilum
Aeropyrum pernix
Sulfolobus solfataricus
Pyrococcus abyssi
Pyrococcus horikoshii
Pyrococcus furiosus
Methanocaldococcus jannaschii
Metanobacterium thermoautotrophicum
Archaeoglobus fulgidus
(a)
Methanosarcina barkeri
Haloarcula marismortui
Halobacterium sp.
Termoplasma acidófilo
Ferroplasma
acidarmanus
Figura 20.8 El Phylum Euryarchaeota. Un árbol filogenético desarrollado a

partir de las secuencias de nucleótidos de secuencias de ARNr de subunidades
pequeñas y grandes.
es un tetrapirrol de níquel que actúa como cofactor de la enzima metil-CoM

metilreductasa. Se cree que la vía para la síntesis del metano funciona como se
muestra en la figura 20.11. Parece que la síntesis de ATP está relacionada con la
metanogénesis por transporte de electrones, bombeo de protones y un mecanismo
quimiosmótico. Algunos metanógenos pueden vivir de forma autotrófica formando (B)
acetil-CoA a partir de dos moléculas de CO2 y luego convirtiendo el acetil-CoA en

piruvato y otros productos (figura 20.3b). Transporte de electrones y fosforilación
oxidativa: la cadena de transporte de electrones (sección 9.5)
Los metanógenos prosperan en ambientes anóxicos ricos en materia orgánica:

el rumen y el sistema intestinal de los animales, sedimentos marinos y de agua dulce,
pantanos y ciénagas, fuentes termales, digestores de lodos anóxicos e incluso dentro
de protozoos anaeróbicos. Los metanógenos son a menudo de importancia ecológica.
La tasa de producción de metano puede ser tan grande que a veces se elevan
burbujas de metano a la superficie de un lago o estanque. Los metanógenos del rumen
son tan activos que una vaca puede eructar de 200 a 400 litros de metano al día.
Interacciones microbianas: el ecosistema del rumen (sección 30.1)
Las arqueas metanogénicas son potencialmente de gran importancia práctica

ya que el metano es un combustible de combustión limpia y una excelente fuente de
(C)
energía. Durante muchos años, las plantas de tratamiento de aguas residuales han
estado utilizando el metano que producen como fuente de energía para calor y electricidad.
Los microbios del digestor anaeróbico degradan desechos particulados, como lodos Figura 20.9 Metanógenos seleccionados. (a) Methanobrevibacter
de aguas residuales, a H2, CO2 y acetato. Los metanógenos reductores de CO2 smithii. (b) Methanogenium marisnigri; micrografía electrónica
forman CH4 a partir de CO2 y H2, mientras que los metanógenos aceticlásticos (45.000).(c) Methanosarcina mazei; SEM. Barra 5m.
escinden el acetato en CO2 y CH4 (alrededor de 2/3 del metano producido por un
digestor anaeróbico proviene del acetato). Un kilogramo de materia orgánica puede La evidencia de que las concentraciones de metano en la atmósfera han ido en
producir hasta 600 litros de metano. Es muy probable que la investigación futura aumento durante los últimos 200 años. La producción de metano puede promover
aumente en gran medida la eficiencia de la producción de metano y haga de la significativamente el calentamiento global en el futuro. Recientemente se ha
metanogénesis una fuente importante de energía libre de contaminación. Tratamiento descubierto que los metanógenos pueden oxidar el Fe0 y usarlo para producir metano
de aguas residuales (sección 41.2) y energía. Esto significa que los metanógenos que crecen alrededor de tuberías de
La metanogénesis también puede ser un problema ecológico. El metano absorbe hierro enterradas o sumergidas y otros objetos pueden contribuir significativamente a
la radiación infrarroja y, por lo tanto, es un gas de efecto invernadero. Hay ev la corrosión del hierro. Microorganismos del suelo y la atmósfera (sección 29.6)
Filo Euryarchaeota 513
Cuadro 20.2 Características seleccionadas de géneros representativos de metanógenos
metanogénico
Género Morfología % de composición de la pared de GC Sustratos de motilidad de reacción de Gram utilizados
Orden Metanobacteriales
Metanobacteria Varillas o 32–61 pseudoureína a variables H2 CO2, formiato

filamentos largos
Metanotermo Directo a ligeramente 33 pseudoureína H2CO2 _

varillas curvas con un exterior
capa de proteína S
Orden Metanococales
metanococo cocos irregulares 29–34 Proteína H2 CO2, formiato

Orden Metanomicrobianos
metanomicrobio Varillas curvas cortas 45–49 Proteína H2 CO2, formiato

Metanogenio cocos irregulares 52–61 proteína o H2 CO2, formiato
glicoproteína
Metanospirillum varillas curvas o 47–52 Proteína H2 CO2, formiato

espirilla
Orden Metanosarcinales
Metanosarcina Cocos irregulares, 36–43 Heteropolisacárido o a variable H2 CO2, metanol,

paquetes proteína metilaminas,
acetato
20.2 Archaea metanótrofa
El ambiente marino puede contener hasta 10,000 billones

toneladas de hidrato de metano enterrado en el fondo del océano, alrededor del doble del
cantidad de todas las reservas conocidas de combustibles fósiles. Aunque algo de metano
sube hacia la superficie, a menudo se usa antes de que escape del
sedimentos en los que está enterrado. Esto es una suerte porque el metano
es un gas de efecto invernadero mucho más potente que el dióxido de carbono. Si el
atmósfera se inundaran de metano, la Tierra podría volverse demasiado
caliente para apoyar la vida tal como la conocemos. El motivo de esta desaparición.
del metano en los sedimentos no ha sido claro hasta un descubrimiento reciente.
Mediante el uso de sondas fluorescentes para secuencias de ADN específicas,
se ha descubierto un conjunto de arqueas y bacterias en anóxicos,
sedimentos ricos en metano. Estos grupos de procariotas contienen un
núcleo de unas 100 arqueas del orden Methanosarcinales sur
redondeado por una capa de bacterias sulfato-reductoras relacionadas con Desul
fosarcina (ver figura del recuadro). Estos dos grupos parecen cooperar
metabólicamente de tal manera que el metano se oxida anaeróbicamente
y sulfato reducido; tal vez las bacterias utilizan productos de desecho de
oxidación del metano para obtener energía a partir de la reducción del sulfato. Isótopo
Los estudios muestran que las arqueas se alimentan de metano y las bacterias se
gran parte de su carbono de las arqueas. Estos metanótrofos pueden ser
contribuyentes cruciales al ciclo del carbono de la Tierra porque se piensa Archaea consumidoras de metano. Un grupo de metanótrofos
que oxidan hasta 300 millones de toneladas de metano al año. arqueas, teñidas de rojo por una sonda fluorescente específica, rodeadas
por una capa de bacterias marcadas por una sonda fluorescente verde.
Figura 20.10 Coenzimas metanógenas.
(a) la coenzima MFR, (b) H4MPT y (c) la coenzima M son

–
ARRULLO utilizado para transportar unidades de un carbono durante la metanogénesis.
CH MFR y una forma más simple de H4MPT llamada metantopterina

2
– (MPT; no se muestra) también participan en la síntesis de

O OOC CH 2
H2N CH2
acetil-CoA. Las porciones de las coenzimas que transportan el
CH2 O CH2 CH2 [ NH C CH2 CH2 CH] 3
CH
O – las unidades de un carbono se muestran en azul. H4MPT lleva
ARRULLO
unidades de carbono en los nitrógenos 5 y 10, como las más
(a) Metanofurano (MFR) enzima común tetrahidrofolato. (d) Coenzima F420
participa en las reacciones redox. La parte de la molécula
que se oxida y reduce reversiblemente.
– (e) La coenzima F430 participa en reacciones catalizadas por
ARRULLO
la enzima metil-CoM metilreductasa.

CH 2
10NH CH2 [CHO] CH2 O O
O 3
H O CH O
OH HO 2
norte
HC
hn
5 CH 3
CH 2
OPOCH HS CH2 CH2 S O–
–
H2N norte
norte
CH O– ARRULLO O
3
H
(b) Tetrahidrometanopterina (H4MPT) (c) Coenzima M
OH OH OH O CH 3
O ARRULLO-
H2C CH CH CH CH2 OPO CH C NH CH ARRULLO-
norte norte O CH 2
HO O CH 2 O
CH 2
NUEVA HAMPSHIRE
CH 2
hn CH
CO 3
OH H2NOC H2C
CH 2
CH 2
ARRULLO-
NUEVA HAMPSHIRE
H3C
norte norte
2H+
+
Director de operaciones de HC–
2e- Ni
CH 2 –
norte norte
R
OOC H2C CH ARRULLO-
H 2
CH 2
norte norte
HO O –
ARRULLO
CH 2
O
NUEVA HAMPSHIRE
CH 2
S.S –
O
ARRULLO
(d) Coenzima F420 (e) Coenzima F430
Las halobacterias Las notas requieren al menos NaCl 1,5 M (alrededor del 8 %, p/vol) y, por lo general,
Los halófilos extremos o halobacterias, orden Halobacteri ales, son otro grupo tienen un crecimiento óptimo a alrededor de 3 a 4 M de NaCl (17 a 23%). Ellos
importante de arqueas, actualmente con 17 géneros. crecerá a concentraciones de sal cercanas a la saturación (alrededor de
en una familia, las Halobacteriaceae (figura 20.12). La mayoría son 36%). Las paredes celulares de la mayoría de las halobacterias dependen tanto de la
quimioorganotrofos aerobios con metabolismo respiratorio. Los halófilos extremos presencia de NaCl que se desintegran cuando la concentración de NaCl cae por
demuestran una amplia variedad de capacidades nutricionales. Los primeros debajo de 1,5 M. Por lo tanto, las halobacterias solo crecen en hábitats de alta
halófilos se aislaron de pescado salado en el salinidad, como salinas marinas y lagos salados como el
1880 y requería nutrientes complejos como el extracto de levadura. Mar Muerto entre Israel y Jordania, y el Gran Lago Salado en
Los aislamientos más recientes crecen mejor en medios definidos, utilizando Utah. Los halófilos se utilizan en la producción de muchos alimentos salados.
carbohidratos o compuestos simples como glicerol, acetato o piruvato como fuente productos, incluida la salsa de soja. Las halobacterias a menudo tienen una
de carbono. Los halófilos pueden ser móviles o inmóviles. pigmentación de rojo a amarillo debido a los carotenoides que probablemente se usan como
y se encuentran en una variedad de formas celulares. Estos incluyen cubos y protección contra la luz solar intensa. Pueden alcanzar niveles de población tan
pirámides además de bastones y cocos. altos que los lagos salados, las salinas y el pescado salado se vuelven rojos.
El rasgo distintivo más obvio de esta familia es su absoluta dependencia de Probablemente el miembro mejor estudiado de la familia es Halobac terium
una alta concentración de NaCl. estos procarios salinarium. Esta archaeon es inusual porque produce una
Filo Euryarchaeota 515
+
Figura 20.11 Síntesis de metano. Camino para 5,10-metenil-H4MPT
H2O
Síntesis de CH4 a partir de CO2 en M. thermoautotrophicum. (C)
2e-
Abreviaturas de cofactores: metanopterina (MPT),
F420
metanofurano (MFR) y 2-mercaptoetanosulfónico MFR
CHO H4MPT
ácido o coenzima M (CoM). la naturaleza de la CO2
(HC O)
intermedios que contienen carbono que provienen del CO2 2e-
5,10-metileno-H4MPT
a CH4 se indican entre paréntesis.
CHO MFR ( CH2 )
H4MPT
(HC O)
2e-
Metil-H4MPT
(CH3 )
CH3SCom SA CoM
H2
Hidrogenasa +
metil CoM
metilreductasa
(F430)
MODA
H+
CH4
a) Halobacterium salinarium (b) “Haloquadratum walsbyi”
Figura 20.12 Ejemplos de halobacterias. (a) Halobacteria. Una cultura joven que ha formado largas varas; SEM. Barra 1 m.
b) “Haloquadratum walsbyi”; SEM. Barra 1 m.
proteína llamada bacteriorrodopsina que puede atrapar la energía de la luz sin la la membrana plasmática al espacio periplásmico durante estas alteraciones, y los
presencia de clorofila. Estructuralmente similar al cambios de la base de Schiff están directamente involucrados en esto
rodopsina que se encuentra en el ojo de los mamíferos, la bacteriorrodopsina movimiento (figura 20.13). La bacteriorrodopsina sufre varias
funciona como una bomba de protones impulsada por la luz. Como todos los miembros de la cambios conformacionales durante el fotociclo. Estos cambios conformacionales
familia de la rodopsina, la bacteriorrodopsina tiene dos características distintas: (1) también están involucrados en el transporte de protones. El bombeo de protones
un cromóforo que es un derivado del retinal (un aldehído de la vitamina A), que se impulsado por la luz genera un gradiente de pH que se puede utilizar
une covalentemente a la proteína mediante una base de Schiff para impulsar la síntesis de ATP por un mecanismo quimiosmótico.
con el grupo amino de la lisina (figura 20.13); y (2) siete dominios que se extienden Transporte de electrones y fosforilación oxidativa (sección 9.5); Fototrofeo:
por la membrana conectados por bucles a cada lado con Fototrofia basada en rodopsina (sección 9.12)
la retina descansando dentro de la membrana. Las moléculas de bacteriorrodpsina Halobacterium tiene tres rodopsinas adicionales, cada una con un
forman agregados en una región modificada de la membrana celular. función diferente. La halorodopsina utiliza la energía de la luz para transportar
llamada membrana púrpura. Cuando el retinal absorbe la luz, el doble iones de cloruro en la célula y mantener una concentración intracelular de 4 a 5 M
El enlace entre los carbonos 13 y 14 cambia de una configuración trans a una cis y concentración de KCl. Dos más se llaman rodopsina I sensorial (SRI)
la base de Schiff pierde un protón. Los protones se mueven a través y SRII. Las rodopsinas sensoriales actúan como fotorreceptores, en este caso,
Figura 20.13 El fotociclo de la

A2H
bacteriorrodopsina. En este mecanismo +
norte
H
hipotético, el componente retinal de la
Membrana de plasma
bacteriorrodopsina queda enterrado en Lys
la membrana y la retina interactúa con
dos aminoácidos, A1 y A2 (aspartatos
A1- _
96 y 85), que pueden aceptar y donar
H+
protones de manera reversible.
hÿ 2
A2 está conectado al exterior de la celda H+
1
y A1 está más cerca del interior de la
celda. La absorción de luz por el retinal –
en el paso 1 desencadena una + A2
A2H
isomerización de 13-trans-retinal a 13-cis- NUEVA HAMPSHIRE
retinal. Luego, el retinal dona un protón a Lys

A2 en los pasos 2 y 3, mientras que A1
norte
Lys
+ H
recoge otro protón del interior y A2 es
liberando un protón al exterior. En los A1- _
HA1
pasos 4 y 5, el retinal obtiene un protón de
A1 y se isomeriza de nuevo a la forma 13-trans.
6 3
El ciclo está entonces listo para comenzar de nuevo
después del paso 6.
A2H
HA2
••
norte
HA1
norte
Lys
+ H Lys
–
A1
4
5
+ HA2
–
NUEVA HAMPSHIRE A1
Lys
uno para luz roja y otro para azul. Controlan la actividad flagelar para las rodopsinas conservan las siete hélices transmembrana a través de la
posicionar el organismo de manera óptima en la columna de agua. Halobac membrana celular y el residuo de lisina que forma el enlace de la base de
terium se traslada a un lugar de alta intensidad de luz, pero en el que la luz Schiff con el retinal. Microorganismos en ambientes marinos: La zona fótica
ultravioleta no es lo suficientemente intensa como para ser letal. del océano abierto (sección 28.3)
Sorprendentemente, ahora parece que la rodopsina está ampliamente
distribuida entre los procariotas. El análisis de la secuencia de ADN del
bacterioplancton marino no cultivado revela la presencia de genes de Los termoplasmas
rodopsina entre las dos y las proteobacterias. Esta rodopsina recién procariotas de la clase Thermoplasmata son termoacidófilos que carecen
descubierta se llama proteorrodopsina. Las cianobacterias también tienen de paredes celulares. En la actualidad se conocen tres géneros,
proteínas de rodopsina, que al igual que SRI y SRII de las halobacterias, Thermoplasma, Pi crophilus y Ferroplasma . Son lo suficientemente
detectan la calidad espectral de la luz. Por lo tanto, las moléculas de diferentes entre sí como para clasificarlas en familias separadas,
cianobacterias también se consideran rodopsinas sensoriales. estos procarióticos Thermoplasmataceae, Picrophilaceae y Ferroplasmataceae.
Resumen 517
Metabolizadores S0 extremadamente termofílicos Este grupo fisiológico
contiene la clase Thermococci, con un orden, Thermococcales. Los Thermococcales son

estrictamente anaeróbicos y pueden reducir el azufre a sulfuro. Son móviles por flagelos y
tienen temperaturas óptimas de crecimiento alrededor de 88 a 100°C. El orden contiene una
familia y tres géneros, Thermo coccus, Paleococcus y Pyrococcus.
Euryarchaeota reductora de sulfato Los reductores de
sulfato Euryarchaeal se encuentran en la clase Archaeoglobi y en el orden Archaeoglobales.

Este orden tiene solo una familia y tres géneros. Archaeoglobus contiene células cocoides
irregulares de tinción gramnegativa con paredes celulares que consisten en subunidades de
glicoproteína. Puede extraer electrones de una variedad de donantes de electrones (p. ej., H2,
lactato, glucosa) y reducir sulfato, sulfito o tiosulfato a sulfuro. El azufre elemental no se usa
como aceptor. Archaeoglobus es extremadamente termofílico (el óptimo es de unos 83°C) y ha
Figura 20.14 Termoplasma. Micrografía electrónica de transmisión. Barra 0,5 m.
sido aislado de fumarolas hidrotermales marinas. El organismo no solo es inusual por ser capaz
de reducir el sulfato, a diferencia de otras arqueas, sino que también posee el metanógeno
coenzimas F420 y la metanopterina.
El termoplasma crece en los montones de basura de las minas de carbón. Estas pilas
contienen grandes cantidades de pirita de hierro (FeS), que las bacterias quimiolitotróficas
oxidan a ácido sulfúrico. Como resultado, las pilas se vuelven muy calientes y ácidas. Este es
un hábitat ideal para Thermoplasma porque crece mejor entre 55 y 59 °C y un pH de 1 a 2.
1. ¿Qué son los termoacidófilos y dónde crecen? ¿De qué manera utilizan el azufre en su
Aunque carece de pared celular, su membrana plasmática está reforzada por grandes
metabolismo? Describa brevemente Sulfolobus y Thermoproteus.
cantidades de tetraéteres de diglicerol, polisacáridos que contienen lípidos y glicoproteínas. El
ADN del organismo se estabiliza por asociación con histonas arqueales que condensan el ADN
2. Caracterizar en general las arqueas metanogénicas y distinguirlas de otros grupos.
en estructuras que se asemejan a los nucleosomas eucarióticos. A 59 °C, el termoplasma
adopta la forma de un filamento irregular, mientras que a temperaturas más bajas es esférico
3. Describa brevemente cómo los metanógenos producen metano y las funciones de
(figura 20.14). Las células pueden ser flageladas y móviles.
sus cofactores únicos en este proceso.
4. ¿Dónde se encuentran los metanógenos? Discutir su ecológico y práctico
importancia.
Picrophilus es aún más inusual que Thermoplasma. Originalmente se aisló de campos
5. ¿Dónde se encuentran los halófilos extremos y qué es inusual en sus paredes celulares
solfatáricos moderadamente calientes en Japón. Aunque carece de una pared celular regular,
y requisitos de crecimiento?
Picrophilus tiene una capa S fuera de su membrana plasmática. Las células crecen como cocos
6. ¿Qué es la membrana morada y qué pigmento contiene?
de forma irregular, alrededor de 1 a 1,5 m de diámetro, y tienen grandes cavidades
7. ¿Cómo puede el termoplasma vivir en montones de basura de carbón ácido y muy caliente
citoplasmáticas que no están delimitadas por membranas. Picrophilus es aeróbico y crece entre
cuando carece de una pared celular? ¿Cómo se estabiliza su ADN? ¿Qué tiene de
47 y 65°C con un óptimo de 60°C. Es más destacable en sus requisitos de pH: crece sólo por
extraordinario Picrophilus?
debajo de pH 3,5 y tiene un crecimiento óptimo a pH 0,7. ¡El crecimiento incluso ocurre a
8. Caracterizar Archaeoglobus. ¿En qué se parece a los metanógenos y en qué se
aproximadamente pH 0!
diferencia de otros termófilos extremos?
Resumen
20.1 Introducción a las Archaea D. Su ARNt, ribosomas, factores de elongación, ARN polimerasas y otros componentes
distinguen a Archaea de bacterias y eucariotas. mi. Aunque gran parte del metabolismo
un. Las Archaea son muy diversas con respecto a la morfología, la reproducción, la fisiología
y la ecología. Aunque son más conocidos por su crecimiento en hábitats anóxicos, de las arqueas parece similar al de otros organismos, las arqueas difieren con respecto al
hipersalinos y de alta temperatura, también habitan en aguas marinas árticas, templadas catabolismo de la glucosa, las vías para la fijación de CO2 y la capacidad de algunas
y tropicales. para sintetizar metano (figura 20.3). F. Las arqueas pueden dividirse en cinco grupos:
B. Las paredes celulares de las arqueas no contienen peptidoglicano y difieren de las paredes arqueas metanogénicas, reductoras de sulfato, halófilas extremas, arqueas sin pared celular
bacterianas en estructura. Pueden estar compuestos de pseudomureína, polisacáridos y metabolizadoras de S0 extremadamente termófilas (tabla 20.1).
o glicoproteínas y otras proteínas. C. Los lípidos de la membrana de las arqueas se
diferencian de los de otros organismos por tener hidrocarburos de cadena ramificada gramo. La segunda edición del Manual de Bergey divide Archaea en dos filos, Crenarchaeota
conectados al glicerol por enlaces éter. Los lípidos bacterianos y eucarióticos tienen y Euryarchaeota, cada uno con varios órdenes (figuras 20.4 y 20.8).
glicerol conectado a ácidos grasos por enlaces éster.
20.2 Filo Crenarchaeota a. Los C. Los halófilos extremos o halobacterias son quimioheterótrofos aeróbicos que requieren al
menos 1,5 M de NaCl para crecer. Se encuentran en hábitats como salinas, lagos salados
metabolizadores de S0 extremadamente termofílicos del phylum Crenarchaeota dependen del
y pescado salado.
azufre para su crecimiento y con frecuencia son acidófilos. El azufre se puede utilizar
como aceptor de electrones en la respiración anaeróbica o como donante de electrones D. Halobacterium salinarum puede llevar a cabo la fototrofia sin clorofila o bacterioclorofila
por parte de los litótrofos. Casi siempre son anaerobios estrictos y crecen en suelo mediante el uso de bacteriorrodopsina, que emplea la retina para bombear protones a
calentado geotérmicamente y agua rica en azufre. través de la membrana plasmática (figura 20.13). mi. El arqueón termofílico Thermoplasma
crece en montones de desechos de carbón ácido y caliente y sobrevive a pesar de la falta de
20.3 Filo Euryarchaeota una pared celular. Otro termoplasma, Pi crophilus, puede crecer a pH 0.
un. El filo Euryarchaeota contiene cinco grupos principales: metanógenos, halobacterias,

termoplasmas, metabolizadores de S0 extremadamente termofílicos y arqueas reductoras F. La clase Thermococci contiene organismos extremadamente termofílicos que pueden
reducir el azufre a sulfuro.
de sulfato.
B. Las arqueas metanogénicas son anaerobias estrictas que pueden obtener energía a través gramo. Las arqueas reductoras de sulfato se colocan en la clase Archaeoglobi. El termófilo
de la síntesis de metano. Tienen varios cofactores inusuales que están involucrados en la extremo Archaeoglobus se diferencia de otras arqueas en el uso de una variedad de
metanogénesis (figuras 20.10 y 20.11). donantes de electrones para reducir el sulfato. También contiene los cofactores de
metanógeno F420 y metanopterina.
Términos clave
Arqueas 503 halobacterias 514 pseudomureína 504 rodopsina sensorial 515

bacteriorrodopsina 515 Korarchaeota 511 membrana púrpura 515 termoacidófilos 508
halófilos extremos 514 metanógenos 510
1. ¿Crees que las Archaea deberían estar separadas de las Bacterias aunque ambos grupos 4. ¿Por qué los enlaces éter serían más estables en las membranas que los lípidos éster?
son procarióticos? Da tu razonamiento y evidencia. ¿Cómo estabilizaría la membrana de un termófilo la presencia de enlaces tetraéter?
2. Explique por qué la fijación de CO2 por Thermoproteus y posiblemente por Sulfolobus usando 5. Suponga que desea aislar procariotas de una fuente termal en Yellowstone
una reversión reductora del ciclo TCA no es fotosíntesis. Parque Nacional. ¿Cómo lo harías?
3. A menudo, cuando aumenta la temperatura, muchos procariotas cambian su forma de varillas

alargadas a esferas. Sugiera una razón para este cambio.
Aprende más
Bell, S. y Jackson, SP 2001. Mecanismo y regulación de la transcripción en ar Kelman, LM y Kelman, A. 2003. Archaea: An archetype for replication initi
chaea. actual Opinión Microbiol. 4:208–13. estudios de ación? mol. Microbiol. 48: 605–15.
Burggraf, S.; Huber, H.; y Stetter, KO 1997. Reclasificación de las órdenes y familias crenar Oren, A. 1999. Aspectos bioenergéticos del halofilismo. Microbiol. mol. Biol. 63(2): 334–48 .
chaeal de acuerdo con los datos de la secuencia 16S rRNA. En t. j
sist. Bacteriol. 47(3): 657–60.
Huérfano, VJ; Casa, CH; Hinrichs, K.-U.; McKeegan, KD; y DeLong, EF
Fuhrman, JA y Davis, AA 1997. Arqueas generalizadas y nuevas bacterias de las profundidades 2001. Archaea consumidoras de metano reveladas por análisis isotópico y filogenético
marinas, como lo muestran las secuencias del gen 16S rRNA. Mar. Ecol. prog. Ser. 150: acoplado directamente. Ciencia 293: 484–87.
275–85.
Pereto, J.; López-García, P.; y Moreira, D. 2004. Biosíntesis de lípidos ancestrales y evolución
Gaasterland, T. 1999. Archaeal genomics. actual Opinión Microbiol. 2: 542–47. temprana de membranas. Tendencias Bioquímica. ciencia 29: 469–77.
Garrity, gerente general, editor en jefe. 2001. Manual de bacteriología sistemática de Bergey, 2.ª Sowers, KR y Schreier, HJ 1999. Sistemas de transferencia de genes para Archaea.
ed., vol. 1, DR Boone y RW Castenholz, editores. Nueva York: Springer Verlag. Tendencias Microbiol. 7(5): 212–19.
Walsby, AE 2005. Archaea con celdas cuadradas. Tendencias Microbiol. 13: 193–95.
Grabowski, B. y Kelman, Z. 2003. Replicación del ADN de las arqueas: Proteínas eucariotas en
Aguas, E., et al. 2003. El genoma de Nanobacterium equitans: información sobre la evolución
un contexto bacteriano. año Rev. Microbiol. 57: 487–516.
temprana de Archaeal y el parasitismo derivado. proc. nacional Academia ciencia EE.UU. 100:
Kashefi, K. y Lovley, D. 2004. Ampliación del límite superior de temperatura para la vida. 12984–88.
Ciencia 301: 934.

para obtener recursos adicionales.
21Bacterias:
Los deinococos
y las no proteobacterias
Gram negativos
Las espiroquetas se distinguen por su estructura y mecanismo de motilidad.
El Treponema pallidum que se muestra aquí causa sífilis.
AVANCE
• Algunos grupos bacterianos, como los representados por los hipertermófilos Aquifex Al describir cada grupo bacteriano, incluimos aspectos como
y Thermotoga, se ramifican profundamente y características distintivas, morfología, reproducción, fisiología, metabolismo y
muy viejo; otros taxones bacterianos han surgido más recientemente. ecología. La taxonomía de cada uno de los principales
• Todas las bacterias fotosintéticas, incluidas las cianobacterias, fueron se resume el grupo y se discuten las especies representativas.
una vez considerado un grupo fenéticamente unificado. Sin embargo, el análisis Los estudiantes de microbiología deberían apreciar las bacterias como organismos
filogenético revela que las bacterias fotosintéticas moradas son vivos y no simplemente como agentes de enfermedades de poco interés o interés.
proteobacterias, separándose de ellas azufre verde y verde importancia en otros contextos.
bacterias no sulfurosas. Las cianobacterias se separan de otras
bacterias fotosintéticas porque se asemejan a los fotótrofos eucarióticos en que
tienen ambos fotosistemas I y II y llevan a cabo
fotosíntesis oxigénica. Sus secuencias de ARNr también indican que
son diferentes de otras bacterias fotosintéticas.
21.1 ACUÍFICOS Y TERMOTOGAS
• Las bacterias, como las clamidias, que son parásitos intracelulares obligados, han Los microbios termofílicos se encuentran tanto en el dominio bacteriano como en
perdido parte de su independencia metabólica. el de las arqueas, pero hasta la fecha, todos los procariotas hipertermofílicos
a través de la pérdida de genes de vías metabólicas. Utilizan el suministro de energía (aquellos con temperaturas óptimas de crecimiento por encima de 85°C) pertenecen a
y/o los constituyentes celulares de su huésped. las arqueas. Los phyla Aquificiae y Thermotoga son dos ejemplos de bacterias
• La motilidad deslizante está ampliamente distribuida entre las bacterias y es muy termófilas.
útil para organismos que digieren nutrientes insolubles o se desplazan Se piensa que el phylum Aquificae representa el más profundo o
las superficies de sustratos húmedos y sólidos. rama más antigua de Bacteria (ver figura 19.3). Contiene una clase,
un orden y ocho géneros. Dos de los géneros mejor estudiados son
Aquifex e Hydrogenobacter. Aquifex pyrophilus es un bacilo microaerófilo
gramnegativo. Es termofílico con una temperatura
tomo 1 de la segunda edición del Manual de Bergey. Volúmenes óptimo de 85°C y un máximo de 95°C. Aquifex es un quimiolitoautótrofo que
El capítulo1 20
y 5examina las Archaea,
del Manual de Bergeyque se encuentran
también describenen volamplia
una . variedad captura energía al oxidar hidrógeno, tiosulfato y azufre con oxígeno como aceptor
de otros grupos procarióticos que son miembros del segundo dominio: las terminal de electrones.
bacterias. El capítulo 21 está dedicado a 10 de estas bacterias. Porque Aquifex e Hydrogenobacter son termofílicos
fila. Sus ubicaciones filogenéticas se representan en la figura 21.1. quimiolitoautótrofos, se ha sugerido que el original
Seguimos la organización general y la perspectiva del segundo El antepasado bacteriano probablemente era termofílico y quimiolitoautotrófico.
edición del Manual de Bergey en la mayoría de los casos. Quimiolitotrofia (sección 9.11)
Hay amplias áreas del paisaje bacteriológico en las que hasta ahora hemos detectado sólo algunos de los
picos más altos, mientras que el resto de la hermosa cordillera aún está oculta en las nubes y la mañana
nieblas de la ignorancia. La portería sigue tirada en el suelo, pero tenemos que agacharnos para agarrarla.
—Prefacio a Los procariotas
520 Capítulo 21 Bacterias: los deinococos y los gram negativos no proteobacterianos
Crenarchaeota quimioheterótrofo con una ruta glucolítica funcional que puede crecer
arqueas anaeróbicamente en carbohidratos y proteínas digeridas.
Euryarchaeota
El genoma de Aquifex tiene aproximadamente un tercio del tamaño
Aquificae
del genoma de Es cherichia coli y, como se esperaba, contiene los genes
termotogas
necesarios para la quimiolitoautotrofia. El genoma de Thermotoga es algo
cloroflexi
más grande y tiene genes para la degradación del azúcar. Alrededor del
Deinococcus-Thermus
24% de sus secuencias de codificación son similares a los genes de las
arqueas; esta proporción es mayor que la de otras bacterias, incluida
Bacterias grampositivas de bajo GC
Aquifex (16% de similitud) y puede deberse a la transferencia lateral
Bacterias grampositivas de alto GC (horizontal) de genes. Genómica comparativa (sección 15.6)
proteobacteria
21.2 DEINOCOCCUS-TERMO
El filo Deinococcus-Thermus contiene la clase Deinococci y los órdenes
Deinococcales y Thermales. Solo hay tres géneros en el filo; el género
espiroquetas
Deinococcus es el mejor estudiado. Los deinococos son esféricos o en
cianobacterias
forma de bastón con rRNA 16S claramente diferente. A menudo se asocian
Planctomycetes y Chlamydiae en pares o tétradas (figura 21.3a) y son aeróbicos, mesófilos y catalasa
clorobi
positivos; por lo general, pueden producir ácido a partir de unos pocos
Bacteroidetes azúcares. Aunque se tiñen como grampositivas, su pared celular está
cubierta con una membrana externa como las bacterias gramnegativas
Figura 21.1 Relaciones filogenéticas entre procariotas. (figura 21.3b). También difieren de los cocos grampositivos en que tienen
Se destacan el grupo Deinococcus-Thermus y otros gramnegativos L-ornitina en su peptidoglucano, carecen de ácido teicoico y tienen una
no proteobacterianos. membrana plasmática con grandes cantidades de ácido palmitoleico en
lugar de fosfolípidos de fosfatidilglicerol. Casi todas las cepas son
extraordinariamente resistentes tanto a la desecación como a la radiación;
pueden sobrevivir entre 3 y 5 millones de rad de radiación (una exposición
de 100 rad puede ser letal para los humanos).
Queda mucho por descubrir sobre la biología de estas bacterias. Los

deinococos se pueden aislar de la carne molida, las heces, el aire, el agua
dulce y otras fuentes, pero aún no se conoce su hábitat natural. Su gran
resistencia a la radiación se debe a su capacidad para reparar un genoma
gravemente dañado, que consta de un cromosoma circular, un
megaplásmido y un plásmido pequeño. Cuando se expone a altos niveles
de radiación, el genoma se rompe en muchos fragmentos. Dentro de 12 a
24 horas, el genoma se vuelve a armar, lo que garantiza la viabilidad. No
está claro cómo se logra esto. Los estudios del genoma han demostrado
1 ÿm que D. radiodurans tiene un sistema de reparación de ADN muy eficiente;
sin embargo, aún no se han informado nuevos genes de reparación del
ADN (consulte la figura 15.18). Parece que la capacidad de acumular altos
Figura 21.2 Thermotoga marítima. Tenga en cuenta la vaina suelta que niveles de Mn(II) puede ayudar a proteger al microbio de los altos niveles
se extiende desde cada extremo de la celda. de especies tóxicas de oxígeno inducidas por la radiación. Actualmente,
el mecanismo por el cual Mn(II) confiere protección no está claro. A la
vista desde genomas microbianos: Análisis genómico de extremófilos (sección 15.8)
La segunda rama más antigua o más profunda es el phylum Thermoto
gae, que tiene una clase, un orden y seis géneros. Los miembros del
género Thermotoga [del griego therme, calor; Latín toga, prenda exterior],
21.3 BACTERIAS FOTOSINTÉTICAS
como Aquifex, son termófilos con un crecimiento óptimo de 80°C y un
máximo de 90°C. Son bacilos gramnegativos con una cubierta exterior Hay tres grupos de bacterias fotosintéticas gramnegativas: las bacterias
similar a una vaina (como una toga) que puede extenderse o hincharse moradas, las bacterias verdes y las cianobacterias (tabla 21.1). Las
desde los extremos de la célula (figura 21.2). Crecen en áreas termales cianobacterias difieren fundamentalmente de las bacterias fotosintéticas
activas que se encuentran en sistemas hidrotermales marinos y manantiales verdes y moradas en que son capaces de llevar a cabo la fotosíntesis
solfatáricos terrestres. A diferencia de Aquifex, Thermotoga es una oxigénica. Tienen fotosistemas I
bacterias fotosintéticas 521
Figura 21.3 Los Deinococos. (a) Un Deinococcus

microcolonia de radiodurans que muestra cocos dispuestos en
tétradas (diámetro medio de la celda 2,5 m). (b) La pared celular de
D. radiodurans con una matriz de proteína de superficie regular (RS), una
capa de peptidoglicano (PG) y una membrana externa (OM).
Barra 100nm.
(a)
RS PG OM
(B)
y II, utilizan el agua como donante de electrones y generan oxígeno durante la Los pigmentos les permiten usar luz en el espectro rojo lejano que no es
fotosíntesis. Por el contrario, las bacterias moradas y verdes tienen utilizado por otros organismos fotosintéticos (tabla 21.2). Además,
un solo fotosistema y utilizan la fotosíntesis anoxigénica. Como no pueden usar la absorción de bacterioclorofila alcanza su punto máximo entre 350 y 550 nm,
agua como fuente de electrones, emplean moléculas reducidas como sulfuro de permitiéndoles crecer a mayores profundidades porque la longitud de onda más corta
hidrógeno, azufre, la luz puede penetrar más lejos en el agua. Como resultado, cuando el agua es lo
hidrógeno y materia orgánica como su fuente de electrones para la reducción de suficientemente clara, se desarrolla una capa de bacterias verdes y moradas en el agua.
NAD(P) a NAD(P)H. En consecuencia, muchos morados Zona anóxica rica en sulfuro de hidrógeno.
y las bacterias verdes forman gránulos de azufre. Las bacterias de azufre púrpura El Manual de Bergey clasifica las bacterias fotosintéticas en siete
acumulan gránulos dentro de sus células, mientras que las bacterias de azufre verde grupos principales distribuidos entre cinco filos bacterianos. El phylum Chloroflexi
depositan los gránulos de azufre fuera de sus células. El morado contiene la bacteria verde no sulfurosa y la
las bacterias que no contienen azufre normalmente usan moléculas orgánicas como un electrón phylum Chlorobi, la bacteria verde del azufre. Las cianobacterias son
fuente. También hay diferencias en los pigmentos fotosintéticos, la colocados en su propio filo, las cianobacterias. Las bacterias moradas son
organización de las membranas fotosintéticas, requerimientos nutricionales y repartidos entre tres grupos. Las bacterias de azufre púrpura se colocan en
relaciones de oxígeno. Fototrofia (sección 9.12) las -proteobacterias, familias Chromatiaceae y Ectothiorho dospiraceae. Las bacterias
Las diferencias en los pigmentos fotosintéticos y los requerimientos de oxígeno moradas sin azufre se distribuyen entre las -proteobacterias (cinco familias diferentes)
entre las bacterias fotosintéticas tienen consecuencias ecológicas significativas. y una familia
Como se muestra en la figura 21.4, las clorofilas, de las -proteobacterias. Finalmente, las heliobacterias grampositivas en
Las bacterioclorofilas y sus pigmentos accesorios asociados tienen el filo Firmicutes también son fotosintéticos. parece que
espectros de absorción distintos. Las cianobacterias oxigenadas y los protistas ha habido una considerable transferencia horizontal de fotosíntesis
fotosintéticos dominan las capas superiores aireadas de agua dulce y genes entre los cinco filos. Al menos 50 genes relacionados con la fotosíntesis son
comunidades microbianas marinas, donde absorben grandes cantidades de comunes a los cinco. En este capítulo, describimos la
luz roja y azul. Debajo de estos microbios, el púrpura anoxigénico y cianobacterias y bacterias verdes; Las bacterias moradas se discuten en
Las bacterias fotosintéticas verdes habitan en las zonas anóxicas más profundas que capítulo 22, mientras que las heliobacterias se presentan en el capítulo 23. Clase
son ricos en sulfuro de hidrógeno y otros compuestos reducidos que pueden Gammaproteobacteria: la bacteria del azufre púrpura (sección 22.3); clase clostridios
utilizarse como donantes de electrones. Su bacterioclorofila y accesorio. (sección 23.4)
Cuadro 21.1 Características de los principales grupos de bacterias fotosintéticas gramnegativas
Oxígeno
fotosintético
Bacterias fotosintéticas anoxigénicas bacterias
Característica Azufre verde verde sin azufre Azufre Púrpura púrpura sin azufre cianobacterias
Principales pigmentos de bacterioclorofilas Bacterioclorofilas a Bacterioclorofila a Bacterioclorofila a Clorofila a más ficobiliproteínas

fotosintéticas a más c, d o eprincipal)
(el pigmento yc _ ob ob
Proclorococo
tiene divinilo
derivados de
clorofila a
yb _
Morfología de las Sistema fotosintético Los clorosomas presentes en Sistema fotosintético Sistema fotosintético Tilacoides contenido en
membranas parte en los clorosomas cuando crecen y son contenido en membranas
fotosintéticas anaeróbicamente independientes de la membrana
plasmática complejos de membrana esférico o lamelar alineado con
esféricos o lamelares complejos de membrana ficobilisomas
que son continuos que son continuos
con la membrana con la membrana
plasmática plasmática
Donadores de H2, H2S, S Donantes H2, H2S, S Generalmente H2O

electrones fotosintéticos fotoheterótrofos: moléculas orgánicas:
una variedad de a veces reducido

azúcares, compuestos de
aminoácidos y azufre o H2
ácidos orgánicos;
donantes fotoautótrofos—H2S, H2
Deposición de azufre Fuera de la celda Dentro de la celdac Fuera de la celda en un
pocos casos
Naturaleza de anoxigénico anoxigénico anoxigénico anoxigénico Oxígeno

fotosíntesis (a veces
facultativamente
anoxigénico)
metabólico general Obligatoriamente anaeróbico Obligatoriamente anaeróbico Usualmente Fotolitoautótrofos
escribe fotolitoautótrofos Usualmente fotolitoautótrofos aerobios
fotoheterótrofos; a veces fotoorganoheterótrofos
fotoautotrófico o anaerobios; algunos facultativos
quimioheterótrofo fotolitoautótrofos (en la
(cuando es aeróbico y oscuridad,
en la oscuridad) quimioorganoheterótrofos)
Motilidad inmóvil; algunos tienen vesículas de Móvil con polar Móvil con polar Inmóvil,
gas deslizante flagelos; algunos flagelo o inmóvil; nadando algunos tienen
están peritricicamente motilidad gaseosa sin vesículas,
o deslizamiento
flagelos
flagelados
motilidad; algunos
tener vesículas de gas
Porcentaje GC 48–58 53–55 45–70 61–72 35–71
Phylum o clorobi cloroflexi -, -, y -proteobacteria cianobacterias

clase -proteobacteria -proteobacteria
(Rodocilo)
a
Características de Clorobi.
B
Características del cloroflexo.
C
Con excepción de Ectothiorhodospira.
522
Tabla 21.2 Bacterioclorofila procariótica y

Máxima absorción de clorofila
Cianobacteria:
chl a y
ficobiliproteínas Máximo de longitud de onda larga (nm)
en éter Rango aproximado de
Pigmento o Acetona valores en celdas
clorofila a 665 680–685
Bacterioclorofila a 775 850–910 (bacterias

Bacteria púrpura:
Bchl un moradas)a
Bacterioclorofila b 790 1020–1035
Bacterioclorofila c 660 745–760
Bacterioclorofila d 650 725–745
Bacterioclorofila e 647 715–725

Bacteria púrpura:
bchlb _
a
El espectro de la bacterioclorofila a en las bacterias verdes tiene un máximo diferente, 805–810 nm.
mi
Bacteria púrpura: juntos por carotenoides y lípidos. Los clorosomas contienen accesorios
Bchl e y un
pigmentos de bacterioclorofila, pero el centro de reacción de la bacterioclorofila se
a encuentra en la membrana plasmática donde se obtiene
C energía de los pigmentos del clorosoma. Estas bacterias prosperan en el
zonas de lagos anóxicas y ricas en sulfuro. Aunque carecen de flagelos
Bacteria púrpura: y son inmóviles, algunas especies tienen vesículas de gas (figura 21.5a)
Bchl c y a
para ajustar su profundidad para una luz óptima y sulfuro de hidrógeno. Esos
a
las formas sin vesículas se encuentran en lodos ricos en sulfuro en el fondo de
400 500 600 700 800 900 1, 000 1, 100 lagos y estanques.
Longitud de onda (nm) Las bacterias verdes del azufre son muy diversas morfológicamente.
Pueden ser bastoncillos, cocos o vibriones; algunos crecen individualmente y otros
Clorofilas (chl)
& Bacterioclorofilas (Bchl) forman cadenas y racimos. Son de color verde hierba o
de color marrón chocolate. Los géneros representativos son Chlorobium,
ficobiliproteínas
Prosthecochloris y Pelodictyon.
carotenoides
filo cloroflexi
Figura 21.4 Pigmentos fotosintéticos. Espectro de absorción El filo Chloroflexi tiene miembros fotosintéticos y no fotosintéticos. Chloroflexus es
de cinco bacterias fotosintéticas que muestran las diferencias en el principal representante de la
máximos de absorción y las contribuciones de varios accesorios bacterias verdes no sulfurosas fotosintéticas . Sin embargo, el término
pigmentos “verde sin azufre” es un nombre inapropiado porque no todos los miembros de este
grupo son verdes, y algunos utilizan azufre. Chloroflexusis un filamentoso,
bacteria termófila deslizante que a menudo se aísla de
filo clorobi a aguas termales alcalinas donde crece en forma de naranja-rojizo
El filo Chlorobi tiene una sola clase (Chlorobia), orden esteras, generalmente en asociación con cianobacterias. se parece a la
(Chlorobiales) y familia (Chlorobiaceae). El azufre verde bacterias verdes del azufre con pequeños clorosomas y bacterias accesorias
Las bacterias son un pequeño grupo de fotolito autótrofos anaeróbicos obligados rioclorofila c. Sin embargo, al igual que la bacteria púrpura, sus complejos
que utilizan sulfuro de hidrógeno, azufre elemental e hidrógeno como fuentes de captadores de luz contienen bacterioclorofila a y se encuentran en el
electrones. El azufre elemental producido por membrana de plasma. Finalmente, su metabolismo es más similar al de
oxidación de sulfuro se deposita fuera de la celda. Sus pigmentos fotosintéticos la bacteria púrpura no sulfurosa. Chloroflexus puede realizar fotosíntesis
se ubican en vesículas elipsoidales llamadas clorosomas o vesículas de clorobio , anoxigénica con compuestos orgánicos como fuentes de carbono o
las cuales están adheridas al plasma. crecer aeróbicamente como un quimioheterótrofo. no aparece de cerca
membrana pero no se continúan con ella. Los clorosomas son los relacionado con cualquier otro grupo bacteriano basado en estudios de ARNr 16S y
complejos captadores de luz más eficientes que se encuentran en la naturaleza. los es una rama profunda y antigua del árbol bacteriano (ver figura 19.3).
La membrana del clorosoma no es una bicapa lipídica normal. En su lugar, las El análisis genómico de Chloroflexus aurantiacus debería ayudar a dilucidar el
moléculas de bacterioclorofila se agrupan en matrices laterales sujetas a origen de la fotosíntesis.
Figura 21.5 Azufre verde típico

bacterias (a) Una micrografía electrónica de
Pelodictyon clathratiforme (105.000). Nota
los clorosomas (áreas grises oscuras) y el gas
vesículas (áreas de color gris claro con extremos puntiagudos).
(b) Chlorobium limicola con extracelular
gránulos de azufre.
(b) Clorobium limicola
(a) Pelodictyon clathratiforme
Los no fotosintéticos, deslizantes, en forma de bastón o filamentosos

La bacteria Herpetosiphon también está incluida en este filo. Su petosifón es un
quimioorganotrofo aeróbico con metabolismo respiratorio que utiliza oxígeno como
aceptor de electrones. Puede ser
aislado de hábitats de agua dulce y suelo.
1. Indique las principales características distintivas de Aquifex, Thermotoga y

los deinococos. ¿Qué se cree que contribuye a la desecación ya la
resistencia a la radiación de los deinococos?
2. ¿En qué se diferencian la fotosíntesis oxigénica y la anoxigénica?

¿Por qué? ¿Cuál es el significado ecológico de estas diferencias?
3. En términos generales, indique las características principales de los siguientes grupos:
bacterias de azufre púrpura, bacterias no de azufre púrpura y bacterias de azufre verde. Cómo
¿En qué se diferencian las bacterias de azufre púrpura y verde?
4. ¿Qué son los clorosomas o vesículas de clorobio?
5. Compare la bacteria verde sin azufre (Chloroflexi) y la bacteria verde del azufre
(Clorobi).
Figura 21.6 Tilacoides y cianobacterias

ficobilisomas. Synechococcus lividus con una extensa
Phylum Cianobacterias sistema tilacoidal. Los ficobilisomas que recubren estos tilacoides son
claramente visibles como gránulos en la ubicación t (85.000).
Las cianobacterias son el grupo más grande y diverso de
bacterias fotosintéticas. Hay poco acuerdo sobre la
número de especies de cianobacterias. Las clasificaciones más antiguas tenían como
hasta 2.000 o más especies. En un sistema reciente esto ha Dios.” Al igual que las algas rojas, las cianobacterias utilizan las ficobiliproteínas como
reducido a 62 especies y 24 géneros. Manual de Bergey de pigmentos accesorios. Los pigmentos fotosintéticos y los componentes de la cadena
La bacteriología sistemática describe 56 géneros. cianobacteria de transporte de electrones se encuentran en las membranas tilacoides revestidas
la diversidad se refleja en el contenido de GC del grupo, que con partículas llamadas ficobilisomas (figura 21.6). Estos contienen pigmentos de
varía de 35 a 71%. Aunque las cianobacterias son bacterias gram negativas, su ficobilina, particularmente ficocianina y ficoeritrina, que transfieren energía al
sistema fotosintético se parece mucho a fotosistema II. Dióxido de carbono
la de los eucariotas porque tienen clorofila a y fotosistemas I y II, por lo que realizan se asimila a través del ciclo de Calvin; las enzimas necesarias
la fotosíntesis oxigénica. para este proceso se localizan en estructuras internas denominadas carboxisomas.
De hecho, las cianobacterias alguna vez se conocieron como "azul-verde al. El carbohidrato de reserva es el glucógeno. A veces
Membrana de plasma
gránulos de Pared celular
glucógeno
Fila de ficobilisomas
(vista lateral)
tilacoides
ficobilisoma
fila
(vista frontal)
Gránulo de
polifosfato
cianoficina
gránulo de lípido
Nucleoide o
nucleoplasma carboxisoma
ficobilisomas
Ribosoma
Pared celular
tilacoides
vesícula de gas
Membrana de plasma
carboxisoma
1 ÿm ribosoma 70S
(a) (B)
Figura 21.7 Estructura de la célula cianobacteriana. (a) Diagrama esquemático de una célula vegetativa. El inserto muestra una vista ampliada
del sobre con su membrana exterior y peptidoglicano. (b) Sección delgada de Synechocystis durante la división. Muchas estructuras son visibles.
(a) Copyright de la ilustración © Hartwell T. Crim, 1998.
almacenan nitrógeno extra como polímeros de arginina o ácido aspártico señalando la calidad espectral de la luz (ver pág. 515). Muchas especies
en gránulos de cianoficina . El fosfato se almacena en gránulos de de cianobacterias usan vacuolas de gas para ubicarse en una iluminación
polifosfato (figura 21.7). Debido a que las cianobacterias carecen de la óptima en la columna de agua, una forma de foto taxis. La motilidad
enzima -cetoglutarato deshidrogenasa, no tienen un ciclo de ácido deslizante es utilizada por otras cianobacterias (Micro bial Diversity &
cítrico completamente funcional. La ruta de las pentosas fosfato juega un Ecology 21.1). Aunque las cianobacterias carecen de flagelos, alrededor
papel central en el metabolismo de los carbohidratos. Aunque muchas de un tercio de las cepas marinas de Synechococcus nadan a velocidades
cianobacterias son fotolitoautótrofas obligadas, algunas pueden crecer de hasta 25 m/s por un mecanismo desconocido.
lentamente en la oscuridad como quimioheterótrofas al oxidar la glucosa La motilidad de natación no se utiliza para la fototaxis; en cambio, parece
y algunos otros azúcares. En condiciones anóxicas, Oscillatoria limnetica usarse en la quimiotaxis hacia compuestos nitrogenados simples como la
oxida sulfuro de hidrógeno en lugar de agua y lleva a cabo una fotosíntesis urea.
anoxigénica de forma muy similar a la bacteria fotosintética verde. Las cianobacterias muestran una gran diversidad con respecto a la
Obviamente, las cianobacterias son capaces de una considerable reproducción y emplean una variedad de mecanismos: fisión binaria,
flexibilidad metabólica. gemación, fragmentación y fisión múltiple. En el último proceso, una
Las cianobacterias también varían mucho en forma y apariencia. Su célula aumenta de tamaño y luego se divide varias veces para producir
diámetro oscila entre 1 y 10 my pueden ser unicelulares, existir como una descendencia mucho más pequeña, que se libera tras la ruptura de
colonias de muchas formas o formar filamentos llamados tricomas (figura la célula parental. La fragmentación de cianobacterias filamentosas puede
21.8c). Un tricoma es una fila de células bacterianas que están en generar pequeños filamentos móviles llamados hormogonias. Algunas
estrecho contacto entre sí en un área grande. Aunque muchos aparecen especies desarrollan akinetes, células en reposo especializadas, latentes
de color verde azulado debido a la ficocianina, los aislamientos del océano y de paredes gruesas que son resistentes a la desecación (figura 21.9a).
abierto son de color rojo o marrón debido al pigmento ficoeritrina. Las A menudo, estos germinan para formar nuevos filamentos.
cianobacterias modulan las cantidades relativas de estos pigmentos en Muchas cianobacterias filamentosas fijan nitrógeno atmosférico por
un proceso conocido como adaptación cromática. Cuando se percibe medio de células especiales llamadas heterocistos (figura 21.9).
luz naranja, se estimula la producción de ficocianina, mientras que la luz Alrededor del 5 al 10% de las células se convierten en heterocistos
azul y azul verdosa promueve la producción de ficoeritrina. Se cree que cuando estas cianobacterias se ven privadas de nitrato y amoníaco, sus
las rodopsinas sensoriales pueden jugar un papel en fuentes preferidas de nitrógeno. Cuando las células individuales de cianobacterias
a) Chroococcus turgidus (b) Nostoc
(c) oscilatorio d) Anabaena spiroides y Microcystis aeruginosa
Figura 21.8 Bacterias fotosintéticas oxigénicas. Cianobacterias representativas. (a) Chroococcus turgidus, dos colonias de cuatro células
cada uno (600). (b) Nostoc con heterocistos (550). (c) Tricomas oscilatorios vistos con la óptica de contraste de interferencia de Nomarski (250). (d) El
cianobacterias Anabaena spiroides y Microcystis aeruginosa. La espiral A. spiroides está cubierta por una gruesa vaina gelatinosa (1.000).
una cadena filamentosa se diferencian en heterocistos, los heterocistos aunque se han asignado muchos géneros, los nombres de las especies no se han
desarrollar una pared celular muy gruesa. Dentro de estas células especializadas, las no obstante, ha sido designado en la mayoría de los casos. El Manual de Bergey divide el
membranas fotosintéticas se reorganizan y las proteínas que fabrican cianobacterias en cinco subsecciones con 56 géneros (tabla 21.3).
se degrada el fotosistema II y los ficobilisomas. fotosistema Éstos se distinguen usando la morfología de la célula o del filamento y
Permanece funcional para producir ATP, pero no se genera oxígeno. patrones reproductivos. Algunas otras propiedades importantes en la caracterización de
Esta incapacidad para generar O2 es crítica porque la enzima nitrogenasa es cianobacterias son la ultraestructura, las características genéticas, la fisiología y la
extremadamente sensible al oxígeno. La gruesa pared del heterocisto bioquímica, y el hábitat/ecología (preferido).
retarda o previene la difusión de O2 en la célula, y cualquier O2 presente es hábitat y hábito de crecimiento). La subsección I contiene bastones unicelulares
consumido durante la respiración. Estructura y fisiología del heterocisto. o cocos. La mayoría son inmóviles y todos se reproducen por fisión binaria.
asegúrese de que permanezca anaeróbico; se dedica a la fijación de nitrógeno o en ciernes. Los organismos de la subsección II también son unicelulares,
y no se replica. Obtiene nutrientes de las plantas adyacentes. aunque varias celdas individuales pueden mantenerse juntas en un agregado por una
células y aporta nitrógeno fijado en forma de aminoácidos. La fijación de nitrógeno pared exterior. Los miembros de este grupo se reproducen por fisión múltiple para
también la llevan a cabo algunas cianobacterias que carecen formar células reproductivas esféricas muy pequeñas.
heterocistos. Algunos fijan nitrógeno en condiciones anóxicas y oscuras en esteras llamados beocitos, que escapan cuando se rompe la pared exterior.
microbianas. Formas planctónicas como Trichodesmium fijan nitrógeno . Algunos baeocitos se dispersan por motilidad deslizante. El otro
y contribuir significativamente al balance de nitrógeno marino. Síntesis de aminoácidos: tres subsecciones contienen cianobacterias filamentosas. filamentos
Fijación de nitrógeno (sección 10.5); Ciclo biogeoquímico: ciclo del nitrógeno (sección a menudo están rodeados por una vaina o capa de limo. Cianobacterias en
27.2) la subsección III forma tricomas no ramificados compuestos únicamente de células
La clasificación de las cianobacterias aún no está resuelta. En la actualidad, todos vegetativas, mientras que las otras dos subsecciones producen heteroquistes en
los esquemas taxonómicos deben considerarse tentativos y ausencia de una fuente adecuada de nitrógeno y también pueden
21.1 El mecanismo de la motilidad deslizante
La motilidad deslizante siempre ocurre en una superficie sólida, pero varía Se han propuesto una variedad de mecanismos para la motilidad
mucho en velocidad (desde alrededor de 2 m por minuto hasta más de 600 m deslizante. Las fibrillas o filamentos citoplasmáticos están asociados con la
por minuto) y en la naturaleza del movimiento. Aunque se observó por primera envoltura de muchas bacterias deslizantes. En Oscillatoria parecen ser
vez hace más de 100 años, el mecanismo por el cual las bacterias se deslizan contráctiles y pueden producir ondas en la membrana externa, lo que resulta
sigue siendo un misterio. Las bacterias como Myxococcus y Flexibacter se en movimiento. La motilidad deslizante puede entenderse mejor en la bacteria
deslizan en una dirección paralela al eje longitudinal de sus células. Myxococcus xanthus. Este microbio en forma de varilla se desliza en un patrón
Otros (Saprospira) viajan con un movimiento similar al de un tornillo o incluso de inversiones, por lo que tiene dos "motores" de motilidad, uno en cada polo.
se mueven en una dirección perpendicular al eje longitudinal de las células en Al deslizarse hacia adelante, los pili tipo IV ubicados en el polo frontal tiran de
su tricoma (Simonsiella). Beggiatoa, cianobacterias y algunas otras bacterias las células hacia adelante. Este tipo de motilidad deslizante solo es posible
giran alrededor de su eje longitudinal mientras se deslizan, pero esto no cuando las células están en un grupo y pueden contactarse entre sí. Por eso
siempre se ve. Muchos se flexionarán o contraerán, además de deslizarse. se llama motilidad social o S. El segundo motor de motilidad consta de
Tal diversidad en el movimiento de deslizamiento puede indicar que existe estructuras similares a boquillas en el polo trasero que expulsan limo para
más de un mecanismo de motilidad. Esta conclusión está respaldada por la empujar las células a lo largo de la superficie. Debido a que la producción de
observación de que algunos planeadores (p. ej., Cytophaga, Flexibacter y mucosidad puede ocurrir en células solitarias, el deslizamiento impulsado por
Flavobacterium) mueven perlas de látex adheridas sobre su superficie, este mecanismo se denomina motilidad aventurera o A. Si bien los pili siempre
mientras que otros, como Myxococcus , no mueven perlas o las mueven muy se localizan en la parte frontal de la celda, las estructuras de las toberas son
lentamente. (Es decir, no todas las bacterias que se deslizan tienen muy dinámicas y cambian de un polo a otro durante las inversiones de
componentes de la superficie celular que se mueven rápidamente). Aunque deslizamiento. La presencia de dos mecanismos de deslizamiento diferentes
se requiere limo para deslizarse, no parece impulsar a las bacterias en una sola bacteria sugiere que una mayor investigación puede revelar una
directamente; más bien, probablemente los adhiere al sustrato y lubrica la diversidad adicional entre los microorganismos que se deslizan. Clase
superficie para un movimiento más eficiente. Deltaproteobacteria: Orden Myxococcales (sección 22.4)
A
H
(a) Cylindrospermum
1 ÿm
(c) Heterocisto de Anabaena

h
h Figura 21.9 Ejemplos de heterocistos y acinetos. (a) Cylindrospermum
con heterocistos terminales (H) y acinetos subterminales (A) (500). (b)
Anabaena, con heterocistos. ( c ) Una micrografía electrónica de un heterocisto
de Anabaena. Tenga en cuenta la pared celular (W), las paredes exteriores
adicionales (E), el sistema de membrana (M) y un canal de poro a la celda
(b) Anabaena adyacente (P).
527
Tabla 21.3 Características de las subsecciones de cianobacterias
Reproducción Representante
Subsección Forma general y Crecimiento Heterocistos % GC Otras propiedades géneros
I Bastones unicelulares Fisión binaria, 31–71 inmóvil o croococo

o cocos; en ciernes nadar sin Gloeothece
no filamentoso flagelos Gleocapsa
agregados Proclorococo
Procloron
sinecococo
II Bastones unicelulares o Fisión múltiple para 40–46 Solo algunos Pleurocapsa
cocos; pueden formar beocitos baeocitos son Dermocarpella
mantenerse juntos móviles. croococcidiopsis
en agregados
tercero
Filamentoso, Fisión binaria en un 34–67 Generalmente móvil Lyngbya
no ramificado solo plano, oscilatorio
tricomas con fragmentación Proclorotrix
solo células espirulina
vegetativas Pseudanabaena
IV El tricoma Fisión binaria en un 38–47 A menudo móvil, Anabaena
filamentoso solo plano, puede producir Cylindrospermum
no ramificado fragmentación acinetos. afanizomenón
puede contener para formar Nostoc
células especializadas hormogonia escitonema
calothrix
V Tricomas Fisión binaria en 42–44 Puede producir fischerella
filamentosos con más de un acinetos; estigonema
ramas o plano, se forman mayor Geitlería
compuestos por hormogonios complejidad
más de una fila de morfológica y
células diferenciación en
cianobacterias
formar acinetas. Las cianobacterias heteroquísticas se subdividen en ura 21.10). Estas bacterias son unicelulares, esféricas y de
las que forman filamentos no ramificados (inciso IV) y 8 a 30 m de diámetro. Su mol% de GC es de 31 a 41.
cianobacterias que se dividen en un segundo plano para producir ramas Prochlorothrix es de vida libre, tiene células cilíndricas que forman filamentos
o agregados (inciso V). y crece en agua dulce. Su ADN tiene un GC superior
Las cianobacterias que se conocen colectivamente como contenido (53 mol%).
proclorfitas (géneros Prochloron, Prochlorococcus y Prochlorococcus marinus, que tiene menos de 1 m de diámetro,
Prochlorothrix) se distinguen por la presencia de clorofila a y b y su falta de florece a unos 100 metros por debajo de la superficie del océano. Se diferencia de
ficobilinas. Esta disposición de pigmentos imparte un color verde hierba a otras proclorofitas por tener divinil clorofila a y b y -caroteno en lugar de
estos microbios. como el único clorofila a y -caroteno. Durante el
procariotas para poseer clorofila b, los ancestros de unicelulares verano, alcanza concentraciones de 5 105 células por mililitro. Eso
algunos consideran que las proclorofitas son las mejores candidatas es uno de los más numerosos del plancton marino y puede ser el
como los endosimbiontes que dieron origen a los cloroplastos. Considerable organismo fotosintético oxigénico más abundante en la Tierra.
La controversia ha rodeado su filogenia, pero la pequeña subunidad Otra indicación de la gran diversidad entre las cianobacterias es la
El análisis de secuencias de ARNr los ubica con las cianobacterias. amplia gama de hábitats que ocupan. Termofílico
Evolución microbiana: el origen endosimbiótico de las mitocondrias y los cloroplastos las especies pueden crecer a temperaturas de hasta 75°C en aguas
(sección 19.1) termales neutras a alcalinas. Debido a que estos fotoautótrofos son tan resistentes,
Los tres géneros de proclorofitas reconocidos son bastante diferentes son colonizadores primarios de suelos y superficies que carecen
entre sí. Procloron fue descubierto por primera vez como un del crecimiento de las plantas. Algunas formas unicelulares incluso crecen en las fisuras.
simbionte extracelular que crece en la superficie o dentro de rocas del desierto. En estanques y lagos tibios ricos en nutrientes, la superficie
la cavidad cloacal de los invertebrados ascidios marinos coloniales (fig. las cianobacterias como Anacystis y Anabaena pueden reproducirse
(a) (B)
Figura 21.10 Procloron. (a) Una micrografía electrónica de barrido de células Prochloron en la superficie de una colonia de Didemnum candidum.
(b) Sección delgada de Prochloron didemni; Micrografía electrónica de transmisión (23.500).
característica de las aguas dulces con alto contenido de materia orgánica que
se utilizan como indicadores de contaminación del agua. Enfermedad 25.1: Floraciones de
algas nocivas; Microorganismos en ambientes marinos y de agua dulce (capítulo 28)
Las cianobacterias son particularmente exitosas en el establecimiento
relaciones simbióticas con otros organismos. por ejemplo, ellos
son el socio fotosintético en la mayoría de las asociaciones de líquenes.
Las cianobacterias son simbiontes con protozoos y hongos, y las especies fijadoras de
nitrógeno forman asociaciones con una variedad de plantas (hepáticas, musgos,
gimnospermas y angiospermas). Interacciones microbianas (sección 30.1)
1. Resuma las principales características de las cianobacterias que las distinguen

de otros organismos fotosintéticos.
2. Defina o describa lo siguiente: ficobilisomas, hormogonios, acinetos, heterocistos y
baeocitos.
3. ¿Qué es un tricoma y en qué se diferencia de una simple cadena de células?
Figura 21.11 Floración de cianobacterias y algas en un 4. Discuta brevemente las formas en que se reproducen las cianobacterias.
Estanque eutrófico. 5. Describe en qué se diferencian una célula vegetativa, un heterociste y un acineto.
¿Cómo se modifican los heterocistos para llevar a cabo la fijación de nitrógeno? Por qué
¿Crees que los heterocistos se consideran células diferenciadas terminalmente?

rápidamente para formar flores (figura 21.11). La liberación de grandes
6. Da las características de los cinco grupos principales de cianobacterias.
cantidades de materia orgánica tras la muerte de los microorganismos en flor estimulan el
7. Compara las proclorofitas con otras cianobacterias y cloroplastos.
crecimiento de bacterias quimioheterótrofas.
¿Por qué crees que la filogenia de las proclorófitas ha sido tan difícil?
Estos microbios posteriormente agotan el oxígeno disponible. esto mata establecer?
peces y otros organismos. Algunas especies pueden producir toxinas que
8. Enumere algunos impactos positivos y negativos importantes que tienen las cianobacterias
matar ganado y otros animales que beben el agua. Otro
sobre los seres humanos y el medio ambiente.
Las cianobacterias (p. ej., Oscillatoria) son tan resistentes a la contaminación y
(a) (B)
nucleoide
CW
CM
MCI
Riboplasma
parifoplasma
cuerpo nuclear
sobre
Anammoxosoma
gemmata obscuriglobus "Candidatus Brocadia anammoxidans"

(C)
Figura 21.12 Compartimentación celular de planctomicetos. (a) Una micrografía electrónica de Gemmata obscuriglobus que muestra la
envoltura del cuerpo nuclear (E), la membrana intracitoplasmática (ICM) y el paryphoplasm (P). (b) Una micrografía electrónica del anaeróbico
planctomiceto oxidante de amoníaco “Candidatus Brocadia anammoxidans” (las comillas indican una nomenclatura no resuelta). el anamoxosoma
está etiquetado como AM. (c) Dibujos esquemáticos correspondientes a (a) y (b): pared celular (CW), membrana citoplasmática (CM).
21.4 PHYLUM PLANCTOMYCETES separados de la membrana citoplasmática por una región periférica libre
de ribosomas llamada parifoplasma. El nucleoide del planc tomycete
El filo Planctomycetes contiene una clase, un orden y Gemmata obscuriglobus se encuentra en el cuerpo nuclear,
cuatro géneros. Los planctomicetos son morfológicamente únicos. que está encerrado en una doble membrana. La especie “Candi datus
bacterias, que tienen células compartimentadas (figura 21.12). Aunque Brocadia anammoxidans” no localiza su ADN
cada especie es única, todas siguen una organización celular básica dentro de un cuerpo nuclear; sin embargo, tiene otro compartimento: el
que incluye una membrana citoplasmática estrechamente rodeada anammoxosoma. Este es el sitio de la oxidación anaeróbica del
por la pared celular, que carece de peptidoglicano. El interno más grande amoníaco, una forma única y recientemente descubierta de quimiolitotrofia.
compartimiento, la membrana intracitoplásmica (ICM), se separa en el que el ion amonio (NH4 ) sirve como donante de electrones y
Phylum Chlamydiae 531
nitrito (NO2 ) como aceptor terminal de electrones; se reduce a tamaño de 0,2 a 1,5 m. Se reproducen sólo dentro de las vesículas citoplásmicas
gas nitrógeno (N2). Nótese que la nomenclatura de este microbio es de las células huésped mediante un ciclo de desarrollo único que implica la
todavía en proceso de cambio, por lo que en algunos casos los nombres de formación de dos tipos de células: cuerpos elementales y
géneros y especies se encierran entre comillas. Ciclo biogeoquímico: ciclo del nitrógeno cuerpos reticulares. Aunque su envoltura se asemeja a la de
(sección 27.2) otras bacterias gramnegativas, la pared celular difiere en que carece de ácido
El género Planctomyces se adhiere a las superficies a través de un tallo murámico y una capa de peptidoglicano. Los cuerpos elementales logran
y firme; los otros géneros del orden carecen de tallos. La mayoría de estabilidad osmótica mediante el entrecruzamiento de sus proteínas de membrana externa,
estas bacterias tienen ciclos de vida en los que las células sésiles brotan para y posiblemente proteínas periplásmicas, con enlaces disulfuro.
producir células enjambre móviles. Las células swarmer están flageladas. Las clamidias tienen un metabolismo extremadamente limitado y dependen de su
y nadar por un rato antes de establecerse para adjuntar y comenzar células huésped para metabolitos clave. Esto se refleja en el tamaño de sus
reproducción. genoma Es relativamente pequeño, de 1,0 a 1,3 Mb; el contenido de GC es del
41 al 44%.
La reproducción de las clamidias comienza con la unión de un
cuerpo elemental (EB) a la superficie celular (figura 21.13). Los cuerpos
21.5 FILO CHLAMYDIAE elementales tienen un diámetro de 0,2 a 0,6 m, contienen material nuclear denso
Las clamidias gramnegativas son parásitos intracelulares obligados. Es decir, en electrones y una pared celular rígida, y son infecciosos.
deben crecer y reproducirse dentro de las células huésped. Aunque su capacidad La célula huésped fagocita las EB, que se mantienen en inclusión.
para causar enfermedades es ampliamente reconocida, muchos cuerpos donde el EB se reorganiza para formar un reticulado
las especies crecen dentro de protistas y células animales sin efectos adversos. cuerpo (RB) o cuerpo inicial. El RB está especializado para la reproducción
Se cree que estos huéspedes representan un reservorio natural para más que para la infección. Los cuerpos reticulados tienen de 0,6 a 1,5 m de
las clamidias. de diámetro y tienen material nuclear menos denso y más ribosomas que los EB;
El filo Chlamydiae tiene una clase, un orden, cuatro familias y solo seis sus paredes también son más flexibles. alrededor de 8 a
géneros. El género Chlamydia es, con mucho, el 10 horas después de la infección, el cuerpo reticulado sufre binaria
más importantes y mejor estudiados; será el centro de nuestra atención. Las la fisión y la reproducción de RB continúan hasta que la célula huésped muere. A
clamidias son bacterias cocoides inmóviles, que varían en la inclusión llena de clamidia puede volverse lo suficientemente grande como para ser vista
RB cuerpo elemental Cuerpo reticulado (cuerpo inicial)
Tamaño de aproximadamente 0,3 ÿm Tamaño 0,5–1,0 ÿm

Pared celular rígida Pared celular frágil
Relativamente resistente a la sonicación Sensible a la sonicación
Resistente a la tripsina Lisado por tripsina
Contenido de ARN:ADN = 1:1 Contenido de ARN:ADN = 3:1
Tóxico para ratones No tóxico para ratones.
BI
Organismos aislados infecciosos Organismos aislados no infecciosos
EB Adaptado para la supervivencia extracelular Adaptado para el crecimiento intracelular
Plasma RB en proceso fagosoma lisado

membrana Fisión binaria del fagosoma y membrana plasmática
EB RB
02 6 12 18 24 30 36 42 48
Horas después de la infección
(a) (B)
Figura 21.13 El ciclo de vida de las clamidias. (a) Una micrografía electrónica de un cuerpo de inclusión que contiene una mezcla de pequeños, negros
cuerpos elementales (EB), cuerpos reticulados más grandes (RB) y un cuerpo intermedio (IB), una célula de clamidia intermedia en morfología entre
EB y RB. Los RB aparecen grises y granulados debido a una alta concentración de ribosomas. (b) Una representación esquemática de la infección
ciclo de las clamidias.
en un microscopio óptico e incluso llenar el citoplasma del huésped. después de 20 la placenta y el feto; el ojo; y el líquido sinovial de las articulaciones.
a las 25 horas, los RB comienzan a diferenciarse en EB infecciosos y Chlamydiophila pneumoniae es una causa común de
continuar este proceso hasta que la célula huésped se lisa y libera el neumonía. Enfermedades humanas causadas por bacterias (capítulo 38)
clamidiae 48 a 72 horas después de la infección.
El metabolismo de las clamidias es muy diferente al de otras
Bacterias Gram-negativo. Se había pensado que la clamidia
21.6 ESPIROQUETAS DEL FILO
no puede catabolizar carbohidratos u otras sustancias ni sintetizar ATP. Chlamydia
psittaci, una de las especies mejor estudiadas, El phylum Spirochaetes (del griego spira, espiral, y chaete, cabello)
Carece tanto de flavoproteína como de cadena de transporte de electrones del citocromo. contiene bacterias quimioheterótrofas gramnegativas que se distinguen por su
portadores, pero tiene una translocasa de membrana que adquiere ATP del huésped estructura y mecanismo de motilidad. Ellos son
a cambio de ADP. Por lo tanto, las clamidias parecen ser parásitos energéticos que bacterias largas y delgadas (de 0,1 a 3,0 m por 5 a 250 m) con forma helicoidal
dependen completamente de sus anfitriones para obtener ATP. Sin embargo, esta flexible (figura 21.14). Muchas especies son tan delgadas que
podría no ser la historia completa. La C. trachomatis solo son claramente visibles en un microscopio óptico por medio de
secuencia del genoma indica que la bacteria puede ser capaz de óptica de contraste de fase o de campo oscuro. Las espiroquetas difieren mucho
sintetizar al menos algo de ATP. Aunque hay dos genes para de otras bacterias con respecto a la motilidad y puede moverse a través
translocasas ATP/ADP, también hay genes para nivel de sustrato soluciones muy viscosas aunque carecen de flagelos giratorios externos.
fosforilación, transporte de electrones y fosforilación oxidativa. Cuando se les Cuando están en contacto con una superficie sólida, exhiben deslizamiento o
suministran precursores del huésped, los RB pueden movimientos de gateo. Su patrón único de motilidad se debe a una
sintetizar ADN, ARN, glucógeno, lípidos y proteínas. Presumiblemente, los RB estructura morfológica inusual llamada filamento axial. los
tienen porinas y proteínas de transporte de membrana activas, pero se sabe poco microscopio óptico (sección 2.2)
sobre ellas. También pueden sintetizar Las características distintivas de la morfología de las espiroquetas son evidentes
al menos algunos aminoácidos y coenzimas. Los EB tienen una actividad metabólica en micrografías electrónicas (figura 21.15). El protoplásmico central
mínima y no pueden absorber ATP ni sintetizar proteínas. Están diseñados cilindro contiene citoplasma y el nucleoide, y está limitado por
exclusivamente para la transmisión y una membrana plasmática y una pared celular gramnegativa. dos a mas
infección. Perspectivas de los genomas microbianos: análisis genómico de microbios de cien flagelos, llamados fibrillas axiales, flagelos periplásmicos,
patógenos (sección 15.8) o endoflagelos, se extienden desde ambos extremos del cilindro y a menudo
Tres especies de clamidias son patógenos importantes de humanos y otros se superponen entre sí en el tercio central de la celda (figura 21.16c,d).
animales de sangre caliente. C. trachomatis infecta Todo el complejo de flagelos periplásmicos, el filamento axial,
humanos y ratones. En humanos causa tracoma, uretritis no gonocócica y otras se encuentra dentro de una cubierta exterior flexible. La vaina exterior contiene lípidos,
enfermedades. C. psittaci causa psitacosis proteína y carbohidrato y varía en estructura entre diferentes géneros. Se desconoce
Inhumanos. Sin embargo, a diferencia de C. trachomatis, también infecta su función precisa, pero la vaina es esencial porque las espiroquetas mueren si se
muchos otros animales (p. ej., loros, pavos, ovejas, vacas y daña o se extrae. los
gatos) e invade los tractos intestinal, respiratorio y genital; La vaina externa de Treponema pallidum tiene pocas proteínas expuestas en
(a) Cristispira
(c) Leptospira interrogante (b) Treponema pálido
Figura 21.14 Las espiroquetas. Ejemplos representativos.(a) Cristispira sp. de una almeja; contraste de fase (2.200).
(b) Treponema pallidum (1.000). (c) Leptospira interrogans (2.200).
Filo Espiroquetas 533
sistema operativo
fibrilla axial AF
Sistema operativo AF para PC
Cilindro protoplásmico PC IP
vaina exterior OS
FA
poro de inserción IP
ordenador personal
(a1)
(C)
500nm
1um
(a2)
ordenador personal
sistema operativo
Cilindro
protoplásmico
nucleoide ordenador personal
Pared celular
Ribosoma
fibrilla axial
Membrana de plasma
FA
Vaina exterior
(B) (D)
Figura 21.15 Morfología de la espiroqueta. (a1) Una vista superficial de la estructura de la espiroqueta interpretada a partir de micrografías electrónicas. (a2)
Una vista longitudinal de Treponema zuelzerae con fibrillas axiales que se extienden en la mayor parte de la longitud de la celda. (b) Una sección transversal de una
espiroqueta típica que muestra detalles morfológicos. (c) Micrografía electrónica de una sección transversal de Clevelandina de la termita Reticulitermes flavipes que
muestra la vaina exterior, el cilindro protoplásmico y las fibrillas axiales (70 000). ( d ) Sección longitudinal de Cristispira que muestra la vaina exterior (OS), el cilindro
protoplásmico (PC) y las fibrillas axiales (AF).
su superficie Esto permite que la espiroqueta de la sífilis evite el ataque de los

Vaina exterior
anticuerpos del huésped.
La forma en que los flagelos periplásmicos impulsan a la célula no se ha

establecido completamente. Los mutantes con flagelos rectos en lugar de curvos fibrilla axial
son inmóviles. Los flagelos periplásmicos giran como los flagelos externos de otras Cilindro protoplásmico
bacterias. Esto hace que la cubierta exterior con forma de sacacorchos gire y mueva
la celda a través del líquido circundante (figura 21.16). La rotación flagelar también
puede flexionar o doblar la célula y explicar el movimiento de rastreo que se ve en
las superficies sólidas.
Figura 21.16 Motilidad de la espiroqueta. Un mecanismo

Las espiroquetas pueden ser anaeróbicas, anaeróbicas facultativas o
hipotético para la motilidad de las espiroquetas. Ver texto para más detalles.
aeróbicas. Los carbohidratos, los aminoácidos, los ácidos grasos de cadena larga
y los alcoholes grasos de cadena larga pueden servir como carbono y energía.
fuentes.
El grupo es excepcionalmente diverso ecológicamente y crece en

hábitats que van desde el barro hasta la boca humana. Los miembros de la
género Spirochaeta son de vida libre y a menudo crecen en ambientes anóxicos y
ambientes marinos y de agua dulce ricos en sulfuro. algunas especies de
el género Leptospira crece en agua óxica y suelo húmedo. Algunos
Las espiroquetas forman asociaciones simbióticas con otros organismos y
se encuentran en una variedad de lugares: el intestino posterior de las termitas y
cucarachas comedoras de madera, el tracto digestivo de los moluscos (Cristispira)
y mamíferos, y las cavidades bucales de los animales (Treponema denti cola, T. oralis).
Espiroquetas de intestinos posteriores de termitas y agua dulce
los sedimentos tienen nitrogenasa y pueden fijar nitrógeno. Existe evidencia de que
contribuyen significativamente a la nutrición nitrogenada de
termitas Las espiroquetas cubren las superficies de muchos protozoos de termitas y
cucarachas comedoras de madera (figura 21.17). Por ejemplo,
el flagelado Myxotricha paradoxa está cubierto de delgadas espiroquetas (0,15 por 10 m
de largo) que están firmemente unidas y ayudan
mover el protozoario. Algunos miembros de los géneros Treponema,
Borrelia y Leptospira son patógenos importantes; por ejemplo,
Treponema pallidum causa sífilis y Borrelia burgdorferi es (a)
responsable de la enfermedad de Lyme. El estudio de T. pallidum y su papel
en la sífilis se ha visto obstaculizada por la incapacidad de cultivar la espiroqueta fuera
de su huésped humano. La secuencia del genoma de T. pallidum
muestra que esta espiroqueta está metabólicamente incapacitada y depende bastante
de su huésped. El genoma de B. burgdorferi consta de un cromosoma lineal de 910.725
pares de bases y al menos 17 pares de bases lineales y
plásmidos circulares, que constituyen otros 533.000 pares de bases.
Los plásmidos tienen algunos genes que normalmente se encuentran en los cromosomas,
S S
y las proteínas de los plásmidos parecen estar involucradas en el desarrollo bacteriano.
virulencia. Perspectivas de los genomas microbianos: análisis genómico de patógenos
microbios (sección 15.8); Enfermedades transmitidas por artrópodos: enfermedad de Lyme (sección 38.2);
Enfermedades de contacto directo: Enfermedades de transmisión sexual (sección 38.3)

El Manual de Bergey divide el phylum Spirochaetes en uno
clase, un orden (Spirochaetales) y tres familias (Spiro chaetaceae, Serpulinaceae y
Leptospiraceae). En el presente,
Hay 13 géneros en el filo. La tabla 21.4 resume algunos
de las propiedades más distintivas de géneros seleccionados.
1. Describir los Planctomycetes y sus propiedades más distintivas.

2. Indique las principales características del filo Chlamydiae. ¿Qué son los cuerpos
elementales y reticulados? Describa brevemente los pasos en la vida de la clamidia
ciclo. ¿Por qué crees que las clamidias se diferencian en tipos de células especializadas?
para la infección y la reproducción?
3. ¿En qué se diferencia el metabolismo de las clamidias del de otras bacterias?

4. Defina los siguientes términos: cilindro protoplásmico, fibrillas axiales o flagelos
periplásmicos, filamento axial y vaina externa. Dibujar y etiquetar un diagrama de espiroqueta
morfología, localizando estas estructuras. ¿Por qué crees que esta forma de motilidad
podría ser especialmente adecuado para el movimiento a través de fluidos viscosos?
(B)
Figura 21.17 Asociaciones de espiroquetas y protozoos. los

21.7 FILO BACTEROIDES las espiroquetas superficiales sirven como órganos de motilidad para los protozoos.
El filo Bacteroidetesis es muy diverso y parece más cercano (a) La asociación espiroqueta-Personympha con las espiroquetas
relacionado con el filo Chlorobi. El phylum tiene tres clases. proyectándose desde la superficie del protista. (b) Micrografía electrónica de
(Bacteroides, Flavobacteria y Sphingobacteria), 12 familias, pequeñas espiroquetas (S) adheridas a la membrana del flagelado
y 63 géneros. protozoario Barbulanympha.
Filo Bacteroidetes 535
Cuadro 21.4 Características de los géneros de espiroquetas
Dimensiones (m) y Contenido de GC Oxígeno (% Energía de carbono

Género flagelos mol) Relación Fuente Hábitats
espiroquetas 0,2–0,75 5–250; 2–40 flagelos 51–65 Facultativamente carbohidratos Acuáticos y de

periplásmicos (casi siempre anaeróbico o vida libre.
2) 0,5–3,0 30–180; 100 anaeróbico
Cristispira flagelos periplásmicos 0,1–0,4 NAa ¿Anaeróbico N/A Tracto digestivo de

5–20: 2–16 flagelos facultativo? moluscos
Treponema periplásmicos 25–53 Anaeróbico o Carbohidratos o Boca, intestino

microaerófilo aminoácidos tracto y genital
áreas de animales;
algunos son
patógeno
(sífilis, pian)
borrelia 0,2–0,5 3–20; 14–60 flagelos 27–32 Anaeróbico o carbohidratos Mamíferos y
periplásmicos microaerófilo artrópodos;
patógenos (recurrentes
fiebre, enfermedad de Lyme)
leptospira 0,1 6–24; 2 35–53 Aerobio Ácidos grasos y Vida libre o

flagelos periplasmáticos alcoholes patógenos de
mamíferos, generalmente
ubicado en el riñón
(leptospirosis)
leptonema 0,1 6–20; 2 51–53 Aerobio Ácidos grasos Mamíferos
flagelos periplasmáticos
Braquispira 0,2 1,7–6,0; 8 25–27 anaeróbico N/A Intestinal de mamíferos
flagelos periplásmicos tracto
serpulina 0,3–0,4 7–9; 16–18 flagelos 25–26 anaeróbico Carbohidratos y Intestinal de mamíferos
periplásmicos aminoácidos tracto
a
NA, información no disponible
La clase Bacteroides contiene bacterias anaerobias, gramnegativas, B. fragilis es un patógeno anaeróbico particularmente común que se encuentra en
bastones sin esporas, móviles o inmóviles de diversas formas. Estas Infecciones abdominales, pélvicas, pulmonares y sanguíneas.
Las bacterias son quimioheterótrofas y normalmente producen una mezcla de Otro grupo importante en Bacteroidetes es la clase
ácidos orgánicos como productos finales de fermentación. no se reducen Esfingobacterias. Además de la similitud en sus secuencias de ARNr 16S, las
sulfato u otros compuestos de azufre. Los géneros se identifican mediante esfingobacterias a menudo tienen esfingolípidos en sus células.
propiedades tales como forma general, motilidad y patrón de flagelación, paredes Algunos géneros de esta clase son Sphingobacterium, Saprospira,
y productos finales de fermentación. Estas bacterias crecen en hábitats Flexibacter, Cytophaga, Sporocytophaga y Crenothrix.
como la cavidad oral y el tracto intestinal de los vertebrados y el Los géneros Cytophaga, Sporocytophaga y Flexibacter
rumen de los rumiantes. Interacciones microbianas: El ecosistema del rumen difieren entre sí en morfología, ciclo de vida y fisiología.
(sección 30.1); Microbiota normal del cuerpo humano: Intestino grueso (sección 30.3) Las bacterias del género Cytophaga son bacilos delgados, a menudo con
Aunque la dificultad de cultivar estos anaerobios ha impedido extremos puntiagudos (figura 21.18a). Sporocytophaga es similar a Cy tophaga
nuestra comprensión de ellos; están claramente extendidas y son importantes. A pero forma células esféricas en reposo llamadas microquistes (figura 21.18b,c).
menudo benefician a su anfitrión. Bacteroides ruminicola es un Flexibacter produce filamentos largos y flexibles
componente principal de la flora del rumen; fermenta almidón, pectina, células cuando es joven (figura 21.18d) y es incapaz de utilizar complejos
y otros carbohidratos. Alrededor del 30% de las bacterias aisladas de polisacáridos. A menudo, las colonias de estas bacterias son de color amarillo a
las heces humanas son miembros del género Bacteroides, y estos organismos naranja debido a los pigmentos carotenoides o flexirrubina. Algunos de
pueden proporcionar nutrición adicional al degradar la celulosa, las flexirrubinas están cloradas, lo cual es inusual para los biológicos
pectinas y otros carbohidratos complejos (ver figura 30.18). los moléculas.
la familia también está involucrada en la enfermedad humana. miembros del genero Los miembros de los géneros Cytophaga y Sporocytophaga son
Bacteroides están asociados con enfermedades de los principales sistemas de órganos, aerobios que degradan activamente polisacáridos complejos. Los citofagas del
que van desde el sistema nervioso central hasta el sistema esquelético. suelo digieren celulosa; tanto el suelo como las formas marinas atacan
(a) citofagos (b) Sporocytophaga myxococcoides (c) Microquistes de S. myxococcoides
Figura 21.18 Bacterias no fotosintéticas, no fructíferas y deslizantes. Miembros representantes

del orden Cytophagales. (a) Cytophaga sp. (1.150). (b) Sporocytophaga myxococcoides,
células vegetativas en agar (1,170). (c) Sporocytophaga myxococcoides, microquistes maduros (1750).
(d) Flexibacter elegans (d) Células de hilo largo de Flexibacter elegans (1100).
quitina, pectina y queratina. Algunas especies marinas incluso degradan En g. El mecanismo de deslizamiento no se comprende bien (Microbial
agar, un componente de las algas. Los citofagas juegan un papel importante en Diversidad y Ecología 21.1).
la mineralización de la materia orgánica y puede causar grandes daños La motilidad deslizante le da a la bacteria muchas ventajas. Muchos
a artes de pesca expuestos y estructuras de madera. Ellos también son un Las bacterias deslizantes aerobias quimioheterótrofas digieren activamente en sustratos
componente principal de la población bacteriana en el tratamiento de aguas residuales macromoleculares solubles como la celulosa y la quitina.
presumiblemente contribuyen significativamente al proceso de tratamiento de y la motilidad deslizante es ideal para encontrarlos. Porque
residuos. Tratamiento de aguas residuales (sección 41.2) muchas de las enzimas digestivas están asociadas a la pared celular, las bacterias deben
Aunque la mayoría de los citofagas son de vida libre, algunos pueden aislarse de estar en contacto con fuentes de nutrientes insolubles; deslizándose
huéspedes vertebrados y son patógenos. Cytophaga colum naris y otras causan la motilidad lo hace posible. El movimiento de deslizamiento está bien adaptado
enfermedades como la enfermedad columnaris, el resfriado a hábitats más secos y al movimiento dentro de masas sólidas como suelo,
enfermedades del agua y podredumbre de aletas en peces de agua dulce y marinos. sedimentos y madera podrida que son permeados por pequeños canales. Finalmente, las
La motilidad deslizante tan característica de estos organismos es bacterias deslizantes, como las bacterias flageladas, pueden posicionarse en condiciones
muy diferente de la motilidad flagelar. La motilidad deslizante está presente. óptimas de intensidad de luz, oxígeno,
en una amplia diversidad de taxones: aerobios fructíferos y no fructíferos sulfuro de hidrógeno, la temperatura y otros factores que influyen
quimioheterótrofos, cianobacterias, bacterias verdes no sulfurosas y crecimiento y supervivencia.
al menos dos géneros grampositivos (Heliobacterium y Desul fonema). Las bacterias
deslizantes carecen de flagelos y son estacionarias mientras
1. Dar las principales propiedades de la clase Bacteroides.
suspendida en medio líquido. Al entrar en contacto con una superficie,
2. ¿Cómo benefician y dañan estas bacterias a sus huéspedes?
se deslizan, dejando un rastro de limo. El movimiento puede ser muy
3. Enumere tres ventajas de la motilidad deslizante.
rápido; algunos citofagas viajan 150 m en un minuto, mientras que las bacterias filamentosas
4. Describa brevemente los siguientes géneros: Cytophaga, Sporocytophaga y
que se deslizan pueden alcanzar velocidades de más de 600 m.
Flexibacter.
m/minuto. Los organismos jóvenes son los más móviles y la motilidad
5. ¿Por qué los citofagas son ecológicamente importantes?
a menudo se pierde con la edad. Los niveles bajos de nutrientes generalmente estimulan el deslizamiento.
Preguntas de pensamiento crítico 537
Resumen
21.1 Aquificae y Thermotogae H. Muchas cianobacterias fijadoras de nitrógeno forman heterocistos, células especializadas
en las que se produce la fijación de nitrógeno (figura 21.9b,c). I. El Manual de Bergey
un. Aquifex y Thermotoga son bacilos gramnegativos hipertermofílicos que representan las
dos ramas filogenéticas más profundas o más antiguas de las bacterias. divide las cianobacterias en cinco subsecciones e incluye las proclorófitas en el filo
Cianobacterias (tabla 21.3).
21.2 Deinococcus-Thermus
21.4 Phylum Planctomycetes
un. Los miembros del orden Deinococcales son cocos y bacilos aerobios grampositivos que se
distinguen por su excepcionalmente gran resistencia a la desecación y la radiación. un. Los filos Planctomycetes y Chlamydiae carecen de peptidoglicano en sus paredes. Los
Planctomycetes tienen una compartimentación celular inusual (figura 21.12).
21.3 Bacterias fotosintéticas

21.5 Filo Chlamydiae
un. Las cianobacterias realizan la fotosíntesis oxigénica; Las bacterias moradas y verdes
utilizan la fotosíntesis anoxigénica. B. Los cuatro grupos más importantes de bacterias un. Las clamidias son bacterias gramnegativas, cocoides e inmóviles que se reproducen dentro
de las vacuolas citoplásmicas de las células huésped mediante un ciclo de vida que
fotosintéticas moradas y verdes son las bacterias moradas del azufre, las bacterias moradas
involucra cuerpos elementales (EB) y cuerpos reticulados (RB) (figura 21.13). Son
sin azufre, las bacterias verdes con azufre y las bacterias verdes sin azufre (tabla 21.1).
parásitos energéticos.
C. Los pigmentos de bacterioclorofila de las bacterias moradas y verdes les permiten vivir en
21.6 Filo Espiroquetas
zonas anóxicas más profundas de los hábitats acuáticos. D. El phylum Chlorobi incluye
las bacterias verdes del azufre, fotolitoautótrofas obligatoriamente anaeróbicas que utilizan un. Las espiroquetas son bacterias gramnegativas, helicoidales, largas y delgadas que son
sulfuro de hidrógeno, azufre elemental e hidrógeno como fuentes de electrones. móviles debido al filamento axial que subyace a una vaina o membrana externa (figura
21.15).
mi. Las bacterias verdes sin azufre como Chloroflexus se colocan en el phylum Chlo roflexi.
Chloroflexus es una bacteria termófila filamentosa y deslizante que es metabólicamente 21.7 Filo Bacteroidetes
similar a la bacteria púrpura no sulfurosa. un. Los miembros de la clase Bacteroides son bacilos anaeróbicos obligados, quimioheterótrofos,
F. Las cianobacterias realizan la fotosíntesis oxigénica mediante un aparato fotosintético sin esporas, móviles o inmóviles de varias formas. Algunos son importantes simbiontes
similar al de los eucariotas. Los ficobilisomas contienen los pigmentos captadores de luz rumen e intestinales, otros pueden causar enfermedades.
ficocianina y ficoeritrina (figura 21.7). gramo. Las cianobacterias se reproducen por fisión B. La motilidad deslizante está presente en una diversidad de bacterias, incluidas las
binaria, gemación, fisión múltiple y fragmentación por filamentos para formar hormogonias. esfingobacterias. C. Los citofagas degradan proteínas y polisacáridos complejos y son activos
Algunos producen un akinete inactivo. en la mineralización de la materia orgánica.
Términos clave
akinetes 525 clamidias 531 motilidad deslizante fotosíntesis oxigénica 520 flagelos
fotosíntesis anoxigénica 521 fibrillas clorosomas 523 525 bacterias verdes sin azufre periplásmicos 532 fototaxis 525
axiales 532 adaptación cromática 525 523 bacterias verdes de azufre ficobilisomas 524 cuerpo reticulado
filamento axial 532 cianobacterias 524 cianoficina 523 heterocistos 525 hormogonia (RB) 531 tricoma 525
baeocitos 526 525 cuerpo elemental (EB) 525 cuerpo inicial 531
carboxisoma 524 531

1. La cianobacteria Anabaena crece bien en un medio líquido que contiene nitrato como única 3. Proponga dos enfoques experimentales que podría usar para examinar el mecanismo por
fuente de nitrógeno. Suponga que transfiere algunos de estos filamentos al mismo medio, el cual se desliza Cytophaga .
excepto que carece de nitrato y otras fuentes de nitrógeno. Describe los cambios
morfológicos y fisiológicos que observas.
2. Las bacterias de estos filos emplean muchos tipos de movimientos. Revíselos y proponga
mecanismos por los cuales la energía (ATP o gradientes de protones) podría impulsar la
locomoción.
Aprende más
Daly, MJ; Gaidamakova, EK; Matrosova, VY; Valienko, A.; Zhai, M.; Litvaitis, MK 2002. Una prueba molecular de filogenia de cianobacterias: Inferencias
Venkateswaran, A.; Hess, M.; Omelchenko, MV; Kostandarithes, HM; del análisis de restricciones. Hidrobiología 468: 135–45.
Makarova, KS; Wackett, LP; Fredrickson, JK; y Ghosal, D. 2004. La acumulación de
McBride, MJ 2001. Motilidad de deslizamiento bacteriano: múltiples mecanismos para la célula
Mn(II) en Deinococcus radiodurans facilita la radiación gamma movimiento sobre superficies. año Rev. Microbiol. 55:49–75.
resistencia. Ciencia 306:1025–28.
Olson, I.; Paster, BJ; y Dewhirst, FE 2000. Taxonomy of spirochetes. Anaer
Everett, KD 2000. Chlamydia and Chlamydiales: Más de lo que parece. Veterinario. Ob 6:39–57 .
Microbiol. 75:109–26.
Partensky, F.; Hess, WR; y Vaulot, D. 1999. Prochlorococcus, un procariota foto-sintético
Golden, JW y Yoon, SA. 2003. Desarrollo de heterocistos en Anabaena. actual marino de importancia global. Microbiol. mol. Biol. Ap. 63(1):
Opinión Microbiol. 6:557–63. 106–27.
Honda, D.; Yokota, A.; y Sugiyama, J. 1999. Detección de siete linajes evolutivos principales Raymundo, J.; Zhaxybayeva, O.; Gogarten, JP; Gerdes, SY; y Blankenship, RE 2002. Análisis
en cianobacterias basados en el análisis de la secuencia del gen 16S rRNA con nuevas del genoma completo de procariotas fotosintéticos. Ciencia
secuencias de cinco cepas marinas de Synechococcus . mol. Evol. 48: 298:1616–20.
723–39.
Strous, M.; Fuerst, JA; Kramer, EHM; Logemann, S.; Muyzer, G.; van de Pas Schoonen, K.;
Lilburn, TG; Kim, KS; Ostrom, NE; Byzek, KR; Leadbetter, JR; y Breznak, JA 2001. Fijación Webb, R.; Kuenen, JG; y Jetten, MSM 1999. Falta
de nitrógeno por espiroquetas simbióticas y de vida libre. Science 292:2495–98 . litótrofo identificado como nuevo planctomiceto. Naturaleza 400: 446–49.
Ting, CS; Rocap, G.; Rey, J.; y Chisholm, SW 2002. Fotosíntesis de cianobacterias en los
Lindsay, Sr.; Webb, RI; Strous, M.; Jetten, MS; Mayordomo, MK; Forde, RJ; y océanos: los orígenes y la importancia de las estrategias divergentes de captación de
Fuerst, JA 2001. Compartimentación celular en planctomicetos: nuevos tipos luz. Tendencias Microbiol. 10(3):134–42.
de organización estructural de la célula bacteriana. Arco. Microbiol. 175:413–29.

22Bacterias:
Las proteobacterias
Salmonella enterica serovar Typhi, teñida aquí con el tinte fluorescente

naranja de acridina, es un importante patógeno humano. Provoca fiebre tifoidea.
AVANCE
• El filo Proteobacteria es el grupo bacteriano filogenéticamente coherente más grande El volumen 2 de la segunda edición del Manual de Bergey está dedicado
con más de 2000 especies asignadas a más de enteramente a las proteobacterias. Este es el grupo de bacterias más grande
500 géneros. y diverso; actualmente hay más de 500 géneros. Aunque los estudios de ARNr
• Muchas de estas bacterias gramnegativas tienen una importancia considerable, ya sea 16S muestran que son filogenéticamente
como agentes de enfermedades o por su contribución a la relacionadas, las proteobacterias varían notablemente en muchos aspectos. los
ecosistemas Además, bacterias como Escherichia coli, son importantes La morfología de estas bacterias gramnegativas varía desde simples
organismos experimentales estudiados en muchos laboratorios. bastoncillos y cocos hasta géneros con prótesis, yemas e incluso
• Estas bacterias son muy diversas en su metabolismo y estilos de vida, cuerpos fructíferos. Fisiológicamente son igual de diversos. Los fotoautótrofos,
que van desde el parasitismo intracelular obligado hasta una vida libre quimiolitotrofos y quimioheterótrofos son todos
existencia en el suelo y en los hábitats acuáticos. bien representado. No existe un patrón general obvio en el metabolismo, la
• Las bacterias quimiolitotróficas obtienen energía y electrones al oxidar compuestos morfología o la estrategia reproductiva que caracterice
inorgánicos en lugar de los nutrientes orgánicos empleados por muchas bacterias. A proteobacterias.
menudo tienen importantes beneficios ecológicos. La comparación de secuencias de ARNr 16S ha revelado cinco linajes
impacto debido a su capacidad para oxidar muchas formas de inorgánicos de descendencia dentro del phylum Proteobacteria: Alphaproteobacteria,
nitrógeno y azufre.
Betaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Deltaproteobacteria,
• Algunas proteobacterias producen estructuras especializadas como prostecas, tallos, y Epsilonproteobacteria (figura 22.1). Sin embargo, nueva secuencia
yemas, vainas o cuerpos fructíferos complejos. Los datos sugieren que la separación entre las Betaproteobacterias
• Muchas bacterias que se especializan en modos de existencia depredadores o parásitos, y Gammaproteobacteria es menos distinta de lo que se pensaba. Si un análisis
como Bdellovibrio y las rickettsias, han renunciado posterior respalda esto, las Betaproteobacterias pueden considerarse un
parte de su independencia metabólica a través de la pérdida de vías metabólicas. subgrupo de las Gammaproteobacterias. Los miembros de la
Dependen del suministro de energía de la presa o del huésped
-, -,
Las bacterias fotosintéticas moradas se encuentran entre las y -proteobacterias.
y/o constituyentes celulares.
Esto ha llevado a la propuesta de que la proteobacteria surgió de un solo
ancestro fotosintético, presumiblemente similar a la bacteria púrpura. Es decir,
el phylum se considera
monofilético, aunque esto ha sido cuestionado recientemente. Posteriormente,
en los volúmenes 1 y 5 de la segunda edición del Manual de Bergey. la fotosíntesis se habría perdido por varias líneas, y
Ahora
En los presentamos
capítulos las bacterias
20 y 21 describimos que sedetratan
muchos en el volumen
los grupos 2
que se encuentran
se adquirieron nuevas capacidades metabólicas a medida que estas bacterias se adaptaban
de la segunda edición del Manual de Bergey. Proporcionamos un a diferentes nichos ecológicos.
descripción general de las principales características biológicas de cada grupo y algunas
bacterias representativas seleccionadas de particular interés.
Los microbios son un hombre vigi- lable y vivo, como un conservatorio lleno de millones de plantas en estas macetas.
—Finley Peter Dunne

540 Capítulo 22 Bacterias: las proteobacterias
Crenarchaeota
arqueas
Euryarchaeota Rickettsiaceae
Aquificae
Thermatogae
cloroflexi
Deinococcus-Thermus
esfingomonadáceas
Gram-positivos bajos en G + C
Alto G + C Gram-positivos ÿ-
Rhodobacteraceae
Proteobacteria ÿ-
Proteobacteria
ÿ-proteobacteria
Rhizobiaceae
ÿ-Proteobacteria Bartonellaceae
ÿ-Proteobacteria Brucellaceae
Phyllobacteriaceae
espiroquetas
cianobacterias
Bradyrhizobiaceae
Planctomycetes y Chlamydiae Hyphomicrobiaceae
clorobi Metilobacteriaceae
Beijerinckiaceae
Bacteroidetes
Metilocistáceas
Figura 22.1 Relaciones filogenéticas entre los procariotas. Caulobacteraceae

Se destacan las proteobacterias.
Acetobacteraceae
22.1 CLASE ALFAPROTEOBACTERIA

Las -proteobacterias incluyen la mayoría de las proteobacterias Rhodospirillaceae
oligotróficas (aquellas capaces de crecer con bajos niveles de nutrientes).
Algunos tienen modos metabólicos inusuales, como metilotrofia
(Methylobacterium), quimiolitotrofia (Nitrobacter) y la capacidad de fijar
Figura 22.2 Relaciones filogenéticas entre las principales
nitrógeno (Rhizobium). Los miembros de géneros como Rickettsia y
familias dentro de las -Proteobacterias. Las relaciones se basan
Brucella son patógenos importantes; de hecho, Rick ettsia es un parásito
en datos de secuencias de ARNr 16S.
intracelular obligado. Muchos géneros se caracterizan por una morfología
distintiva, como las prótesis.
La clase Alphaproteobacteria tiene siete órdenes y 20 familias. La Las especies pueden oxidar niveles muy bajos y no tóxicos de sulfuro a
figura 22.2 ilustra las relaciones filogenéticas entre los principales grupos sulfato, pero no oxidan azufre elemental a sulfato. En ausencia de luz, la
dentro de las proteobacterias y la tabla 22.1 resume las características mayoría de las bacterias moradas no azufradas pueden crecer
generales de muchas de las bacterias analizadas en las siguientes aeróbicamente como quimioorganoheterótrofas, pero algunas especies
secciones. llevan a cabo fermentaciones anaeróbicas. El oxígeno inhibe la síntesis de
bacterioclorofila y carotenoides, por lo que los cultivos que crecen
aeróbicamente en la oscuridad son incoloros.
Las bacterias moradas no sulfurosas Las bacterias púrpuras no sulfurosas varían considerablemente en
Todas las bacterias moradas usan fotosíntesis anoxigénica , poseen morfología (figura 22.3). Pueden ser espirales (Rhodospirillum), bastones
bacterioclorofilas aob y tienen su aparato fotosintético en sistemas de (Rhodopseudomonas), semicírculos o círculos (Rhodocyclus), o incluso
membrana que se continúan con la membrana plasmática. La mayoría son formar prótesis y brotes (Rhodomicrobium). Debido a su metabolismo, son
móviles por flagelos polares. Todas las bacterias de pieles moradas nonsul más frecuentes en el lodo y el agua de lagos y estanques con abundante
son -proteobacterias, con la excepción de Rhodocy clus ( -proteobacterias). materia orgánica y bajos niveles de sulfuro. También hay especies marinas.
Bacterias fotosintéticas (sección 21.3)
Las bacterias púrpuras sin azufre son excepcionalmente flexibles Rhodospirillum y Azospirillum (ambos de la familia Rho dospirillaceae)
en la elección de una fuente de energía. Normalmente crecen se encuentran entre varios géneros bacterianos capaces de formar quistes.
anaeróbicamente como fotoorganoheterótrofos; atrapan la energía de la Estas células en reposo difieren de las endosporas bien caracterizadas
luz y emplean moléculas orgánicas como fuentes de electrones y carbono producidas por bacterias grampositivas como Bacillus y Clostridium. Al
(ver tabla 21.1). Aunque se les llama bacterias no sulfurosas, algunas igual que las esporas, los quistes son muy resistentes a la desecación.
clase alfaproteobacteria 541
Cuadro 22.1 Características de las proteobacterias seleccionadas
Dimensiones (m) y Contenido de GC Tamaño del Oxígeno Otro

Género Morfología (% en moles) genoma (Mb) Requisito Caracteristicas distintivas
agrobacteria 0,6–1,0 1,5–3,0; 57–63 2.5 Aerobio Quimioorganotrofo que puede

bacilos móviles, sin invadir plantas y causar
esporas, con flagelos tumores
peritricos
Caulobacter 0,4–0,6 1–2; en 62–65 4.0 Aerobio heterótrofos y oligotróficos; división

forma de bastón o celular asimétrica
vibrioide con un
flagelo
y prostheca y
holdfast
hipomicrobio 0,3–1,2 1–3; en 59–65 Dakota del Norte* Aerobio Se reproduce por brotación;
forma de varilla u metilotrófico
ovalada con prótesis
polares
Nitrobacter 0,5–0,9 1,0–2,0; en 59–62 3.4 Aerobio Quimiolitotrofo, oxida nitrito a
forma de barra o pera, nitrato
a veces móvil por
flagelos
rizobio 0,5–1,0 1,2–3,0; 57–66 5.1 Aerobio Invade plantas leguminosas para
bastones móviles producir nódulos radiculares fijadores
con flagelos de 0,7 de nitrógeno
Rodospirillum a 1,5 de ancho; células 62–64 4.4 Anaeróbico, Fotoheterótrofo en

espirales con flagelos microaeróbico, condiciones anóxicas
polares 0,3–0,5 0,8– aeróbico
Rickettsia 2,0; bastones cortos 29–33 1.1–1.3 Aerobio Parásito intracelular obligado
inmóviles
*Nd: No determinado; genoma aún no secuenciado
pero son menos tolerantes a otros estreses ambientales como varía, tienden a ser muy pequeños. Por ejemplo, Rickettsia es de 0,3 a
calor y luz ultravioleta. Los quistes se forman en respuesta a la limitación de 0,5 m de diámetro y 0,8 a 2,0 m de largo; Coxiella es de 0,2 a
nutrientes. Tienen una gruesa capa exterior y almacenan una gran cantidad de 0,4 m por 0,4 a 1,0 m. Todas las especies son parásitas o mutualistas.
poli-hidroxibutirato (PHB). Las bacterias formadoras de quistes no son Las formas parasitarias crecen en eritrocitos, macrófagos,
limitado a -proteobacteria; por ejemplo Azotobacter, una -proteobacterium, también y células endoteliales vasculares. A menudo también viven en chupadores de sangre.
forma quistes. La matriz citoplasmática: En artrópodos como pulgas, garrapatas, ácaros o piojos, que sirven como vectores o
cuerpos de clusión (sección 3.3); La endospora bacteriana (sección 3.11) huéspedes primarios. Interacciones microbianas (sección 30.1)
Debido a que estos géneros incluyen importantes patógenos humanos,
su reproducción y metabolismo han sido intensamente estudiados.
Rickettsia y Coxiella
Las rickettsias ingresan a la célula huésped al inducir la fagocitosis. Miembros
El género Rickettsia se ubica en el orden Rickettsiales y del género Rickettsia escapan inmediatamente del fagosoma y se reproducen por
familia Rickettsiaceae de la -proteobacteria, mientras que Cox iella está en el orden fisión binaria en el citoplasma (figura 22.4). Por el contrario, Coxiella permanece
Legionellales y la familia Coxiellaceae de dentro del fagosoma después de fusionarse con
las -proteobacterias. Sin embargo, aquí discutimos Rickettsia y un lisosoma y en realidad se reproduce dentro del fagolisosoma.
Coxiella juntos por su similitud en el estilo de vida, a pesar de su aparente distancia Finalmente, la célula huésped estalla y libera nuevos organismos. además
filogenética. Al sufrir daños por la lisis celular, el huésped se ve perjudicado por los efectos tóxicos de
Estas bacterias tienen forma de bastón, cocoides o pleomórficas con las paredes celulares de las rickettsias (la toxicidad de la pared parece estar relacionada con la
paredes típicas de gramnegativos y sin flagelos. Aunque su tamaño mecanismo de penetración en las células huésped). Fagocitosis (sección 31.3)
a) Rhodospirillum rubrum (b) R. rubrum
c) Rhodopseudomonas acidophila d) Rhodocyclus purpureus (e) Rhodomicrobium vannielii
Figura 22.3 Bacterias moradas no sulfurosas típicas. a) Rhodospirillum rubrum; contraste de fase ( 410).(b) R. rubrum crecido anaeróbicamente en
la luz. Obsérvense las invaginaciones vesiculares de las membranas citoplasmáticas; Micrografía electrónica de transmisión ( 51.000).(c) Rhodopseudomonas
acidófila; contraste de fase. (d) Rhodocyclus purpureus; contraste de fase. Barra 10 m.(e) Rhodomicrobium vannielii con células vegetativas y yemas;
contraste de fase.
Las rickettsias son muy diferentes de la mayoría de las otras bacterias en surgió de una asociación endosimbiótica con un ancestro de
fisiología y metabolismo. Carecen de vías glucolíticas y Rickettsia. Evolución microbiana: origen endosimbiótico de las mitocondrias y
no utilice la glucosa como fuente de energía, sino que oxide el glutamato y los cloroplastos (sección 19.1)
intermediarios del ciclo del ácido tricarboxílico, como el succinato. Estos órdenes contienen muchos patógenos importantes. Rickettsia
La membrana plasmática de rickettsias tiene transporte mediado por transportadores prowazekii y R. typhi están asociados con la fiebre tifoidea, y R.
y los nutrientes y coenzimas de la célula huésped se absorben y rickettsii, con fiebre exantemática de las Montañas Rocosas. Coxiella burnetii
utilizado directamente. Por ejemplo, las rickettsias absorben tanto NAD como causa la fiebre Q en humanos. Estas enfermedades se discuten en algunos
uridina difosfato glucosa. Su membrana también tiene un transportador de detalles en el capítulo 38. Las rickettsias también son patógenos importantes de
intercambio tardío de adenias que intercambia ADP por ATP externo. Por lo tanto animales domésticos como perros, caballos, ovejas y ganado.
El ATP huésped puede proporcionar gran parte de la energía necesaria para el crecimiento.
Esta dependencia metabólica explica por qué muchos de estos organismos deben
cultivarse en los sacos vitelinos de embriones de pollo o en células de cultivo de Caulobacteraceae e Hyphomicrobiaceae
tejidos. La secuenciación del genoma muestra que R. prowazekii es Algunas proteobacterias no son simples bacilos o cocos, sino
similar en muchos aspectos a las mitocondrias. Posiblemente mitocondrias tener algún tipo de apéndice. Estas bacterias tienen una vida interesante.
Figura 22.4 Rickettsia y Coxiella.
Morfología y reproducción de Rickettsias. (a) Un

fibroblasto humano lleno de Rickettsia prowazekii
(1.200). (b) Un fibroblasto de embrión de pollo tarde en
infección con R. prowazekii citoplasmático libre
(13.600). (c) Coxiella burnetti creciendo dentro
vacuolas de fibroblastos (9.000). (d) R. prowazekii
dejando un fagosoma roto (flecha) y
entrando en la matriz citoplasmática (46.000).
(a) (B)
(C) (D)
ciclos que presentan una prótesis o reproducción por gemación. A

prostheca (pl., prosthecae), también llamado tallo, es una extensión de
la célula, incluida la membrana plasmática y la pared celular, que es más estrecha
que la célula madura. La brotación es claramente diferente de
la fisión binaria normalmente utilizada por las bacterias. El brote aparece por primera vez
como una pequeña protuberancia en un solo punto y se agranda para formar una célula
madura. La mayor parte o la totalidad de la envoltura celular del cogollo tiene un tamaño
recién sintetizado. Por el contrario, partes de la envoltura de la célula parental se comparten
con las células de la progenie durante la fisión binaria. Finalmente, los padres
célula conserva su identidad durante la brotación, y la nueva célula es a menudo
más pequeño que su padre. En la fisión binaria, la célula parental desaparece y
forma una progenie de igual tamaño. Las familias Caulobac teraceae e
Hyphomicrobiaceae de las -proteobacterias contienen 1 µm
dos de los géneros de prótesis mejor estudiados: Caulobacter e Hy phomicrobium.
El ciclo celular procariótico (sección 6.1)
El género Hyphomicrobium contiene quimioheterótrofos, Figura 22.5 Prótesis, bacterias en ciernes. hipomicrobio
bacterias aeróbicas en ciernes que con frecuencia se adhieren a objetos sólidos en
facilis con hifa y brote joven.
ambientes de agua dulce, marinos y terrestres. (Ellos
crecen en baños de agua de laboratorio.) La célula vegetativa mide
alrededor de 0,5 a 1,0 por 1 a 3 m (figura 22.5). Al comienzo de brote de la hifa. El capullo finalmente se suelta como un óvalo a
el ciclo reproductivo, la célula madura produce una prótesis (también célula de enjambre en forma de pera, que se aleja nadando y luego se asienta
llamada hifa), de 0,2 a 0,3 m de diámetro, que crece hasta varios y comienza a brotar. La célula madre puede brotar varias veces en el
m de longitud (figura 22.6). El nucleoide se divide y una copia punta de su hifa.
se mueve hacia la hifa mientras se forma una yema en su extremo. A medida que Hyphomicrobium también tiene una fisiología y nutrición distintivas. Los
la yema madura, produce de uno a tres flagelos y un tabique divide el azúcares y la mayoría de los aminoácidos no soportan abundantes
Figura 22.6 El ciclo de vida de Hyphomicrobium. célula de enjambre

con subpolar
a lateral
flagelo (uno
Brote a tres)
joven
nuevo nucleoide
moviendo hacia dentro
hifa
formación de hifas
La hifa se alarga más y

produce otro capullo.
crecimiento; en cambio Hyphomicrobium crece en etanol y acetato entonces la célula comienza el ciclo de nuevo. Este proceso toma alrededor de dos
y florece con compuestos de un carbono como el metanol, horas para completar. La especie C. cresentus se ha convertido en un importante
formiato y formaldehído. Es decir, es un metil-otrofo facultativo y puede obtener organismo modelo en el estudio del desarrollo microbiano
tanto energía como carbono a partir de compuestos reducidos de un carbono. Es y el ciclo celular bacteriano.
tan eficiente en la adquisición de un carbono
moléculas que puede crecer en un medio sin carbono añadido
fuente (presumiblemente el medio absorbe suficiente atmósfera Familia Rhizobiaceae
compuestos de carbono). Hyphomicrobium puede comprender hasta un 25% El orden Rhizobiales de las -proteobacterias contiene 11 familias con una gran
de la población bacteriana total en cultivos oligotróficos o pobres en nutrientes variedad de fenotipos. Esto incluye a la familia
hábitats de agua dulce. Hyphomicrobiaceae, que ya se ha discutido. Una familia importante en este orden
Las bacterias del género Caulobacter alternan entre polarmente es Rhizobiaceae, que incluye el
varillas flageladas y células que poseen una prótesis y uniones , géneros aeróbicos Rhizobium y Agrobacterium.
por el cual se adhieren a sustratos sólidos (figura 22.7). Increíblemente, Los miembros del género Rhizobium son de 0,5 a 0,9 por 1,2 a
el material secretado al final de la Caulobacter cresentus Varillas móviles de 3,0 m que se pleomórficas en condiciones adversas (figura
Holdfast es la molécula de adhesión biológica más fuerte que se conoce— 22.9). Las células a menudo contienen poli-hidroxibutirato
una especie de superpegamento bacteriano. Las caulobacterias generalmente se aíslan inclusiones. Crecen simbióticamente dentro de las células de los nódulos de la raíz.
de agua dulce y hábitats marinos con bajos niveles de nutrientes, pero de leguminosas como bacteroides fijadores de nitrógeno (figura 22.9b, también
también están presentes en el suelo. A menudo se adhieren a las bacterias, ver figura 29.13). De hecho, las leguminosas son la familia de plantas más exitosa
protistas fotosintéticos y otros microorganismos y pueden absorber nutrientes de la Tierra, con más de 18 000 especies. Sus
liberados por sus huéspedes. La prótesis se diferencia de la proliferación refleja su capacidad para establecer relaciones simbióticas con
la de Hyphomicrobium en que carece de componentes citoplasmáticos bacterias que forman nódulos en sus raíces. Dentro de
y está compuesto casi en su totalidad por la membrana plasmática y la célula los nódulos los microbios reducen o fijan el nitrógeno atmosférico
muro. Crece más tiempo en medios pobres en nutrientes y puede alcanzar más en amonio, haciéndolo directamente disponible para la planta huésped.
más de 10 veces la longitud del cuerpo celular. La prótesis puede mejorar la El proceso por el cual las bacterias realizan esta fascinante e importante simbiosis se
eficiencia de absorción de nutrientes de hábitats diluidos al aumentar el área de analiza en el capítulo 29. Síntesis de amino
superficie; también le da a la célula flotabilidad adicional. ácidos: Fijación de nitrógeno (sección 10.5); Asociaciones de microorganismos con
El ciclo de vida de Caulobacter es inusual (figura 22.8). Cuándo plantas vasculares: Los rizobios (sección 29.5)
lista para reproducirse, la célula se alarga y se forma un único flagelo polar en el El género Agrobacterium se ubica en la familia Rhizobi aceae pero se
extremo opuesto a la prótesis. Luego, la célula se somete a una fisión binaria diferencia de Rhizobium en que no estimula el nódulo de la raíz.
transversal asimétrica para producir una formación o fijación de nitrógeno. En cambio, las agrobacterias invaden el
célula enjambre flagelada que se aleja nadando. El enjambre, que corona, raíces y tallos de muchas plantas y transforman las células vegetales
no puede reproducirse, se detiene, expulsa su flagelo y forma en células tumorales que proliferan de forma autónoma. La mayoría de los genes
una nueva prótesis en el extremo anteriormente flagelado. El nuevo acechado que codifican características distintivas se llevan en plas
1 µm
(a) (D)
Figura 22.7 Morfología y reproducción de Caulobacter.

(a) Rosetas de células adheridas entre sí por sus prótesis;
contraste de fase (600).(b) Una célula que se divide para producir un enjambre
(6.030). Nota prostheca y flagelo.(c) Una celda acechada y una
Célula de enjambre flagelada ( 6.030). (d) Una roseta de células como se ve en
el microscopio electrónico.
(B) (C)
síntesis de pili célula de

enjambre
medios (ver figura 29.19). La especie mejor estudiada es A. tumefa ciens, Rotación flagelar Desprendimiento de flagelo
que penetra en muchas plantas de hoja ancha a través de heridas.
y causa la enfermedad de la agalla de la corona (figura 22.10). La capacidad
para producir tumores depende de la presencia de un gran plásmido Ti (para Finalización de
la citocinesis.
la inducción de tumores ). La producción de tumores por Agrobacterium es Celda
discutido en mayor detalle en Técnicas y Aplicaciones 14.2 acechada
Formación de tallos
y la sección 29.5. Plásmidos (sección 3.5)
bacterias nitrificantes
La taxonomía de las bacterias aerobias quimiolitotróficas, aquellas
bacterias que obtienen energía y electrones a partir de compuestos inorgánicos reducidos.
compuestos, es bastante complejo. Normalmente estas bacterias emplean
CO2 como su fuente de carbono y por lo tanto son quimiolitoautótrofos,
pero algunos pueden funcionar como quimiolitoheterótrofos y utilizar fuentes Figura 22.8 Ciclo de vida de Caulobacter. Células pedunculadas unidas
de carbono orgánico reducidas. En el Manual de Bergey, el a un sustrato sufren una fisión binaria asimétrica que produce una
Las bacterias quimiolitotrofas se distribuyen entre las y -, -, acechada y una célula flagelada, llamada célula enjambre. el enjambre
-proteobacterias. Las bacterias nitrificantes se encuentran en todos la célula nada libremente y produce pili hasta que se asienta, expulsa sus flagelos,
tres clases. Quimiolitotrofia (sección 9.11) y forma un tallo. Solo las células pedunculadas pueden dividirse.
(a)
Figura 22.10 Agrobacterium. Tumor en la agalla de la corona de un tomate
planta causada por Agrobacterium tumefaciens.
sales de amonio El nitrato es fácilmente utilizado por las plantas, pero también es rápidamente
(B)
se pierde a través de la lixiviación de nitratos solubles en agua y por desnitrificación a gas
nitrógeno, por lo que los beneficios obtenidos de la nitrificación pueden ser
Figura 22.9 Rhizobium. (a) Rhizobium leguminosarum con
fugaz. Ciclo biogeoquímico: ciclo del nitrógeno (sección 27.2)
dos flagelos polares (14.000). (b) Micrografía electrónica de barrido de
bacteroides en raíz de alfalfa (640).
1. Describir las propiedades generales de las -proteobacterias.
2. Discuta las características y la fisiología del no azufre púrpura
Las bacterias nitrificantes son una colección muy diversa de
bacterias. ¿Dónde se esperaría encontrarlas creciendo?
bacterias El Manual de Bergey ubica los géneros nitrificantes en tres
3. Describa brevemente las características y el ciclo de vida del género Rickettsia.
clases y varias familias: Nitrobacter en las Bradyrhizobi aceae, -proteobacteria; Nitrosomonas
4. ¿En qué difieren la fisiología y el metabolismo de las rickettsias
y Nitrosospira en el de la de otras bacterias?
Nitrosomonadaceae, -proteobacteria; Nitrococcus en Ec tothiorhodospiraceae,
5. Nombre algunas enfermedades rickettsiales importantes.
-proteobacteria; y nitrosococos en
6. Defina los siguientes términos: prostheca, stalk, broting, swarmer cell, methy
las Chromatiaceae, -proteobacterias. Todos son organismos aerobios, gram negativos con
lotroph y holdfast.
la capacidad de capturar energía del
7. Describa brevemente la morfología y los ciclos de vida de Hyphomicrobium y
oxidación de amoníaco o nitrito. Sin embargo, se diferencian Caulobacter.
considerablemente en otras propiedades (tabla 22.2). Los nitrificantes pueden ser
8. ¿Qué tiene de inusual la fisiología de Hyphomicrobium? ¿Cómo influye esto en su
bastoncillos, elipsoidales, esféricas, espirales o lobuladas, y
distribución ecológica?
puede poseer flagelos polares o peritricos (figura 22.11).
9. ¿Cómo difieren Agrobacterium y Rhizobium en el estilo de vida? que efecto hace
A menudo tienen extensos complejos de membrana en su citoplasma. La identificación se
Agrobacterium tiene en plantas hospedantes?
basa en propiedades tales como su preferencia por el nitrito o el amoníaco, su forma general
10. ¿Qué son las bacterias quimiolitotróficas?
y la
11. Indique las principales características de las bacterias nitrificantes y analice sus
naturaleza de cualquier citomembrana presente.
importancia ecológica. ¿Cómo difiere el metabolismo de Nitrobacter
Las bacterias nitrificantes contribuyen de manera importante al ciclo del nitrógeno. En de la de Nitrosomonas?
el suelo, los sistemas de eliminación de aguas residuales y los hábitats marinos y de agua
dulce, las -proteobacterias Nitrosomonas y Nitrospira
y la -proteobacterium Nitrosococcus oxidan el amoníaco a nitrito. En los mismos nichos,
22.2 CLASE BETAPROTEOBACTERIA
miembros del género -proteobacterial
Nitrococcus luego oxida nitrito a nitrato. Todo el proceso de Las -proteobacterias se superponen metabólicamente a las -proteobacterias
convertir el amoníaco en nitrito en nitrato se llama nitrificación y pero tienden a usar sustancias que se difunden a partir de la descomposición orgánica
ocurre rápidamente en suelo óxico tratado con fertilizantes que contienen am en la zona anóxica de los hábitats. Algunas de estas bacterias usan hidrógeno,
Clase Betaproteobacteria 547
Cuadro 22.2 Características seleccionadas de bacterias nitrificantes representativas
Morfología y tamaño Contenido de GC

Especies celular (m) Reproducción Motilidad Citomembranas (mol%) Habitat
Oxidante de amoníaco
bacterias
Nitrosomonas europaea (- Vara; 0,8–1,1 Fisión binaria Periférico, 50,6–51,4 Suelo, aguas
proteobacteria) 1,0–1,7 lamelar residuales,
agua dulce, marina
Nitrosococcus oceani (- cocoide; 1,8– Fisión binaria ; 1 o más Haz 50.5 Obligatoriamente
proteobacteria) 2,2 de diámetro flagelos paralelo ubicado marino
subpolares centralmente, lamelar
Nitrosospira briensis (- Espiral; 0,3– Fisión binaria o ; 1 a 6 Flagelos 53,8–54,1 Tierra
proteobacteria) 0,4 de diámetro peritricos raros
Nitrito-oxidante
bacterias
Nitrobacter winogradskyi (- Varilla, a En ciernes o;1 Casquete polar 61.7
proteobacteria) menudo en forma flagelo de vesículas Suelo, agua
de pera; 0,5–0,9 polar aplanadas dulce, marina
1,0–2,0 en la región
periférica de la
célula
Nitrococcus mobilis (- cocoide; 1,5– 1,8 Fisión binaria ;1o2 61,3 (1 cepa) Marina
proteobacteria) de diámetro flagelos Citomembranas
subpolares tubulares dispuestas
al azar en el
citoplasma
De Brenner, DJ; Krieg, NR; y Staley, JT Eds. 2005. Manual de Bergey de Bacteriología Sistémica 2ª ed. vol. 2: Las Proteobacterias. Garrity, Gerente General Ed. en Jefe. Nueva York: Springer.
amoníaco, metano, ácidos grasos volátiles y sustancias similares. Como mamíferos, y algunos son patógenos humanos. Neisseria gonor rhoeae es el
con las proteobacterias hay una diversidad metabólica considerable; agente causal de la gonorrea; Neisseria meningitidis
las -proteobacterias pueden ser quimioheterótrofas, fotolitotrofas, es responsable de algunos casos de meningitis bacteriana. Enfermedades de contacto
metilotrofos y quimiolitotrofos. directo: Enfermedades de transmisión sexual (sección 38.3)
La clase Betaproteobacteria tiene siete órdenes y 12 familias. La figura
22.12 muestra las relaciones filogenéticas entre
Orden Burkholderiales
grupos principales dentro de las proteobacterias, y la tabla 22.3 resume las
características generales de muchas de las bacterias discutidas en esta La orden contiene cuatro familias, tres de ellas con conocidos
sección. Aquí discutimos dos géneros con importantes géneros El género Burkholderia se coloca en la familia Burkholder iaceae. Este
patógenos humanos: Neisseria y Bordetella. género se estableció cuando Pseudomonas se dividió

en al menos siete géneros según los datos de ARNr: Acidovorax,
Aminobacter, Burkholderia, Comamonas, Deleya, Hydrogen ophaga y
Orden Neisseriales Methylobacterium. Los miembros del género Burkholderia son gramnegativos,
El orden Neisseriales tiene una familia, Neisseriaceae, con 15 aerobios, no fermentadores, no esporíferos,
géneros El género más conocido y más intensamente estudiado es Neis seria. bastones rectos mesófilos. A excepción de una especie, todas son
Los miembros de este género son cocos gram negativos, aeróbicos e inmóviles móvil con un solo flagelo polar o un penacho de flagelos polares. Se produce
que se presentan con mayor frecuencia en pares con lados adyacentes. catalasa y, a menudo, son oxidasa positivas. La mayoría de las especies
aplanado Pueden tener cápsulas y fimbrias. el genero es utilizar PHB como su reserva de carbono. Una de las especies más importantes.
quimioorganotrófico, y produce las enzimas oxidasa y es B. cepacia, que puede degradar más de 100 moléculas orgánicas diferentes
catalasa (por lo que se dice que son oxidasa positiva y catalasa y es muy activa en el reciclaje de materiales orgánicos en la naturaleza.
positivo). Son habitantes de las mucosas de Originalmente descrito como el patógeno vegetal que causa la pudrición de la cebolla,
Burkholderiales
Metilófilos
neisseriales
nitrosomonadales
10 micras
(a) rodociclados
hidrogenófilos
Figura 22.12 Relaciones filogenéticas entre los principales

grupos dentro de las -Proteobacterias. Las relaciones se basan
en datos de secuencias de ARNr 16S.
ha emergido en los últimos 20 años como un importante patógeno nosocomial.

Es un problema particular para los pacientes con fibrosis quística. Otras dos
especies, B. mallai y B. pseudomallai , son patógenos humanos que podrían
utilizarse indebidamente como agentes de bioterrorismo. Preparación contra el
bioterrorismo (sección 36.9)
Sorprendentemente, dos géneros dentro de la familia Burkholderiaceae son
capaces de formar simbiosis fijadoras de nitrógeno con leguminosas muy
0,25 micras
parecidas a los rizobios que pertenecen a las -proteobacterias.
(B) El análisis del genoma de las proteobacterias fijadoras de nitrógeno Burk holderia
y Ralstonia revela la presencia de genes de nodulación (nod) que son muy
similares a los de los rizobios. Esto sugiere un origen genético común. Se cree
que las proteobacterias adquirieron la capacidad de formar nódulos simbióticos
fijadores de nitrógeno con las leguminosas a través de la transferencia lateral de
genes.
La familia Alcaligenaceae contiene el género Bordetella.
Este género está compuesto por cocobacilos aerobios gramnegativos, de
aproximadamente 0,2 a 0,5 por 0,5 a 2,0 m de tamaño. Bordetella es un
quimioorganotrofo con metabolismo respiratorio que requiere azufre orgánico y
nitrógeno (aminoácidos) para crecer. Es un parásito de los mamíferos que se
multiplica en las células del epitelio respiratorio.
Bordetella pertussis es una especie encapsulada e inmóvil que causa la tos ferina.
Enfermedades transmitidas por el aire: Difteria (sección 38.1)
Algunos géneros del orden tienen una vaina, una estructura hueca en forma
0,5 micras
de tubo que rodea una cadena de células. Las vainas a menudo se ajustan bien,
pero nunca están en contacto íntimo con las células que encierran y pueden
(C) contener óxidos férricos o mangánicos. Tienen al menos dos funciones. Las
vainas ayudan a que las bacterias se adhieran a superficies sólidas y adquieran
Figura 22.11 Bacterias nitrificantes representativas. nutrientes del agua que corre lentamente a medida que pasa, incluso si es pobre
(a) Nitrobacter winogradskyi; contraste de fase (2.500). (b) N. en nutrientes. Las vainas también protegen contra depredadores como los
winogradskyi. Obsérvese el casquete polar de las citomembranas protozoos y la -proteobacterium Bdellovibrio (pág. 563).
(213.000). (c) N. europaea con extensas membranas citoplasmáticas (81,700).
Clase Betaproteobacteria 549
Otro
Dimensiones (m) y Contenido de GC genoma Oxígeno Distintivo
Género Morfología (% en moles) Tamaño (Mb) Requisito Características
Bordetella 0,2–0,5 0,5–2,0; inmóvil 66–70 3.7–5.3 Aerobio Requiere azufre y nitrógeno
orgánicos; parásito de los
cocobacilo mamíferos
Burkholderia 0,5–1,0 1,5–4; 59–69,5 4.1–7.2 Aeróbico, algunos poli-hidroxibutirato como
varillas rectas con capaces de reserva; puede ser
flagelos simples o un anaeróbico patógeno
mechón en el polo respiración
sin 3
leptothrix 0,6–1,5 2,5–15; 68–71 Dakota del Norte* Aerobio vainas incrustadas con
bastones rectos en óxidos de hierro y
cadenas con vaina, células manganeso
libres flageladas
Neisseria 0,6–1,9; cocos en pares 48–56 2.2–2.3 Aerobio Habitante de las mucosas
con aplanado membranas de
lados adyacentes mamíferos
Nitrosomonas El tamaño varía con la 45–54 2.8 Aerobio quimiolitotrofo que
cepa; células esféricas oxida el amoníaco a
a elipsoidales con nitrito
membranas
intracitoplasmáticas
esferotilo 1,2–2,5 2–10; cadenas 70 Dakota del Norte Aerobio Vainas no incrustadas
simples de células con con hierro y
vainas, pueden tener óxidos de manganeso
sujetadores
tiobacilo 0,3–0,5 0,9–4; bastones, a 52–68 Dakota del Norte Aerobio Todos quimiolitotrofos,
menudo con flagelos oxida el azufre reducido
polares compuestos a sulfato, algunos
también quimioorganotrófico
*Nd: No determinado; genoma aún no secuenciado
Dos géneros con vaina bien estudiados son Sphaerotilus y Lep tothrix.
Sphaerotilus forma largas cadenas de varillas envainadas, de 0,7 a
2,4 por 3 a 10 m, adherido a plantas sumergidas, rocas y otros
a a
objetos sólidos, a menudo por un sujetador (figura 22.13 ). Enjambre único
células con un haz de flagelos subpolares escapan del filamento y
formar una nueva cadena después de unirse a un objeto sólido en otro sitio.
Sphaerotilus prefiere el agua dulce corriente lentamente contaminada con
aguas residuales o residuos industriales. Crece tan bien en aguas residuales activadas.
lodo que a veces forma masas enredadas de filamentos y
interfiere con la correcta sedimentación del lodo. Leptothrix deposita
característicamente grandes cantidades de óxidos de hierro y manganeso
10 micras
en su vaina (figura 22.14). Esto parece protegerlo y permitir
Leptothrix para crecer en presencia de altas concentraciones de compuestos
10 micras
de hierro solubles.
(a) (B)
Figura 22.13 Bacteria envainada, Sphaerotilus natans. Orden Nitrosomonadales

(a) Cadenas de células envainadas y vainas vacías. (b) Cadenas con Se encuentran varios quimiolitotrofos en el orden Nitro somonadales. Dos
holdfasts (indicados por la letra a) y celdas individuales que contienen géneros de bacterias nitrificantes (Nitrosomonas
gránulos de poli-hidroxibutirato. y Nitrosospira) son miembros de la familia Nitrosomonadaceae
10 micras
(a) (B)
Figura 22.14 Bacterias envainadas, morfología de Leptothrix. ( a ) Tricomas de L. lopholea que irradian de una colección de sujetadores.
(b) Vainas de L. cholodnii incrustadas con MnO2.
(a) (B)
Figura 22.15 El género Spirillum. (a) Spirillum volutans con flagelos bipolares visibles (450). (b) Spirillum volutans; contraste de fase ( 550).
pero se discutieron anteriormente con otros géneros de bacterias nitrificantes flagelos (tabla 22.4). El Manual de Bergey dispersa estas bacterias
(págs. 545–546). El quimiolitotrofo acechado Gallionella está en este orden. La entre dos clases; por ejemplo, Thiobacillus y
familia Spirillaceae tiene un género, Spirillum (figura 22.15). Macromonas son proteobacterias, mientras que Thiomicrospira,
Thiobacterium, Thiospira, Thiothrix, Beggiatoa y otras son
-proteobacterias. Solo algunas de estas bacterias han sido aisladas y
Orden Hydrogenophilales estudiadas en cultivo puro. La mayor parte se conoce sobre los géneros
Este pequeño pedido contiene Thiobacillus, uno de los mejor estudiados Thiobacillus y Thiomicrospira. Thiobacillus es un
quimiolitotrofos y más prominentes del azufre incoloro bacilo gramnegativo, y Thiomicrospira es una célula espiral larga (figura 22.16);
bacterias Al igual que las bacterias nitrificantes, las bacterias sulfurosas incoloras ambos tienen flagelos polares. Se diferencian de muchos de
son un grupo muy diverso. Muchos son unicelulares en forma de varilla o las bacterias nitrificantes porque carecen de extensos sistemas de membranas
bacterias espirales oxidantes de azufre que son inmóviles o móviles por internas.
Clase Gammaproteobacteria 551
Tabla 22.4 Géneros oxidantes de azufre incoloro
Motilidad; Contenido de GC Ubicación de

Género Forma de celda Flagelos (mol%) Depósito de azufre Tipo nutricional
tiobacilo Varillas ; polar 62–67 extracelular Quimiolitotrofo obligado o

facultativo
tiomicrospira Espirales, coma o en forma de barra o ; polar 39,6–49,9 extracelular Quimiolitotrofo obligado
tiobacteria Varillas incrustadas en Coger intracelular
masas gelatinosas Probablemente quimioorganoheterótrofo
Tiospira Varillas en espiral, generalmente con ; polar N/A intracelular Desconocido
extremos puntiagudos. (solo o en

mechones)
Macromonas Varillas, cilíndricas o en forma ; penacho polar 67 intracelular
de frijol Probablemente quimioorganoheterótrofo
a
Cuando el sulfuro de hidrógeno se oxida a azufre elemental.
B
NA, datos no disponibles.
crecen por encima de pH 6), estas bacterias prosperan en los hábitats que tienen
acidificado por la producción de ácido sulfúrico, aunque la mayoría de los otros
organismos no pueden. La producción de grandes cantidades de sulfúrico
ácido y hierro férrico por T. ferrooxidans corroe el concreto y la tubería
estructuras Los tiobacilos a menudo causan una gran contaminación por ácidos y
metales cuando liberan metales de los desechos mineros. Sin embargo,
Las bacterias oxidantes de azufre también son beneficiosas. pueden aumentar
fertilidad del suelo cuando liberan azufre elemental al oxidarlo a
sulfato. Los tiobacilos se utilizan en el procesamiento de minerales metálicos de baja ley.
1,0 micras
debido a su capacidad para lixiviar metales del mineral. Biogeoquímica
ciclado: ciclo del azufre (sección 27.2)
Figura 22.16 Bacterias incoloras del azufre. tiomicrospira

pelophila, a -proteobacterium, con flagelos polares.
2. Describa brevemente los siguientes géneros y su importancia práctica: Neisseria,
El metabolismo de Thiobacillus ha sido intensamente estudiado. Eso Burkholderia y Bordetella.
crece aeróbicamente al oxidar una variedad de compuestos inorgánicos de azufre (azufre 3. ¿Qué es una funda y qué utilidad tiene?
elemental, sulfuro de hidrógeno, tiosulfato) a sulfato. 4. ¿Cómo mantiene Sphaerotilus su posición en el agua corriente? Cómo lo hace
ATP es producido por una combinación de fosforilación oxidativa reproducir y dispersar su progenie?
y fosforilación a nivel de sustrato por medio de adenosina 5ÿ- 5. Caracterice las bacterias incoloras del azufre y discuta su ubicación en el
fosfosulfato. Aunque Thiobacillus normalmente usa CO2 como su segunda edición del Manual de Bergey.
principal fuente de carbono, T. novellus y algunas otras cepas pueden crecer 6. ¿Cómo obtienen energía las bacterias incoloras del azufre al oxidar los compuestos de azufre?
heterótrofamente. Algunas especies son metabólicamente muy flexibles. ¿libras? ¿Qué es el 5ÿ-fosfosulfato de adenosina?
Por ejemplo, Thiobacillus ferrooxidans también utiliza hierro ferroso como 7. Enumere varios impactos positivos y negativos que tienen las bacterias que oxidan el azufre
donador de electrones y produce hierro férrico y ácido sulfúrico. sobre el medio ambiente y las actividades humanas.
T. denitrificans incluso crece anaeróbicamente al reducir el nitrato a

gas nitrógeno. Curiosamente, algunas otras bacterias oxidantes de azufre
como Thiobacterium y Macromonas probablemente no derivan
energía de la oxidación del azufre. Pueden usar el proceso para desintoxicar el peróxido
22.3 CLASE GAMMAPROTEOBACTERIA
de hidrógeno producido metabólicamente.
Las bacterias oxidantes de azufre tienen una amplia distribución y gran Las -proteobacterias constituyen el subgrupo más grande de proteobacterias con una
importancia práctica. Thiobacillus crece en suelos y hábitats acuáticos, tanto de agua extraordinaria variedad de tipos fisiológicos.
dulce como marina. En los hábitats marinos, Thiomi crospira es más importante que Muchos géneros importantes son quimioorganotróficos y facultativamente
Thiobacillus. Debido a su anaeróbico Otros géneros contienen quimioorganótrofos aeróbicos,
gran tolerancia a los ácidos (T. thiooxidans crece a pH 0,5 y no puede fotolitotrofos, quimiolitotrofos o metilotrofos. Según
Según algunos estudios de hibridación de ADN-ARNr, las proteobacterias ría en 14 órdenes y 28 familias. La figura 22.17 ilustra las relaciones
se componen de varios grupos profundamente ramificados. Uno consiste filogenéticas entre los grupos principales y las proteobacterias
en la bacteria del azufre púrpura; un segundo incluye los parásitos seleccionadas, y la tabla 22.5 describe las características generales .
intracelulares Legionella y Coxiella. Los dos grupos más grandes tics de algunas de las bacterias discutidas en esta sección.
contienen una amplia variedad de géneros no fotosintéticos. La
superfamilia I de ARN ribosomal está representada por las familias
Vibrionaceae, Enter obacteriaceae y Pasteurellaceae. Estas bacterias Las bacterias púrpuras del azufre
utilizan las vías de Embden-Meyerhof y de las pentosas fosfato para Como se mencionó anteriormente, las bacterias fotosintéticas púrpuras
catabolizar los carbohidratos. La mayoría son anaerobios facultativos. La se distribuyen entre tres subgrupos de proteobacterias. A pesar de la
superfamilia II de ARN ribosómico contiene principalmente aerobios que diversidad de estos organismos, comparten algunas características
a menudo utilizan las vías de Entner Doudoroff y pentosa fosfato para generales, que se resumen en la tabla 21.1 (ver pág. 522). La mayoría
catabolizar muchos tipos diferentes de moléculas orgánicas. Los géneros de las bacterias púrpuras que no contienen azufre son proteobacterias y
Pseudomonas, Azotobacter, Moraxella, Xanthomonas y Acinetobacter se analizaron anteriormente en este capítulo (págs. 540 y 541). Debido
pertenecen a esta superfamilia. a que las bacterias del azufre púrpura son -proteobacterias, se describen aquí.
La excepcional diversidad de estas bacterias es evidente por el El Manual de Bergey divide las bacterias del azufre púrpura en dos
hecho de que el Manual de Bergey divide la clase Gammaproteobacte familias: Chromatiaceae y Ectothiorhodospiraceae en el
Ectothiorhodospira halochloris
Aeromonadaceae (Aeromonas)
Chromatium vinosum
Alteromonadaceae (Shewanella)
Thiothrix nivea
Enterobacteriaceae (Escherichia, Salmonella,
Coxiella burnetii
Shigela, Proteo)
Methylomonas rubra
Pasteurellaceae (Pasteurella, Haemophilus)
Metilococo capsulatus
Succinivibrionaceae (Ruminobacter)
Oceanospirillum japonicum
Vibrionaceae (Vibrio, Photobacterium)
Pseudomonas aeruginosa
Photobacterium leiognathi
Halomonadaceae (Halomonas) Vibrio cholerae
Pasteurella multicida
Oceanospirillaceae (Oceanospirillum) Haemophilus influenzae
Yersinia pestis
Proteo vulgar
Pseudomonadaceae (Pseudomonas, Azotobacter)
Serratia marcescens
Erwinia herbícola
citrobacter freundii
Moraxellaceae (Moraxella, Acinetobacter) Salmonella typhi
Escherichia coli
(b)
Methylococcaceae (Methylococcus, Methylomonas) (b)
Francisellaceae (Francisella)
Piscirickettsiaceae (Hydrogenovibrio, Thiomicrospira)
Legionellaceae (Legionella)
Figura 22.17 Relaciones filogenéticas entre

Betaproteobacteria -Proteobacterias. ( a ) Los principales grupos filogenéticos basados en
comparaciones de secuencias de ARNr 16S. Los géneros representativos
se dan entre paréntesis. Cada tetraedro del árbol representa un grupo de
organismos relacionados; sus bordes horizontales muestran las ramas
Xanthomonadales (Xanthomonas)
más cortas y más largas del grupo. La ramificación múltiple en el mismo
nivel indica que el orden de ramificación relativo de los grupos no se
Chromatiales (Chromatium, Thiococcus, Thiospirillum) puede determinar a partir de los datos. ( b ) Las relaciones de algunas
especies basadas en datos de secuencia de rRNA 16S. Fuente: Proyecto
(a) de base de datos ribosomal.
Dimensiones (m) y Contenido de GC Oxígeno (mol

Género Morfología %) Requisito Otras características distintivas
Azotobacter 1,5–2,0; células ovoides, pleomórficas, 63,2–67,5 Aerobio Puede formar quistes; fijar nitrógeno
flagelos peritricos o inmóviles 1–200 2– de forma no simbiótica
Beggiatoa 10; las células incoloras forman filamentos, 35–39 aeróbico o motilidad deslizante; puede formar azufre
ya sea solos o en colonias microaerofílico inclusiones con sulfuro de hidrógeno
presente
cromacio 1–6 1,5–16; flagelos polares en forma de 48–50 anaeróbico Fotolitoautótrofo que puede utilizar
bastón u ovoides, rectos o ligeramente sulfuro; azufre almacenado dentro de la
curvados Ectothiorhodospira 0.7–1.5 de celda
diámetro; vibrioide- o 61,4–68,4 Anaeróbico, algo Pilas laminares internas de

flagelos polares en forma de bastón aeróbico o membranas; deposita gránulos de
microaerofílico azufre fuera de las células
Escherichia 1,1–1,5 2–6; bastones rectos, 48–59 Facultativamente Fermentador ácido mixto; ácido fórmico
flagelos peritricos o inmóviles anaeróbico convertido a H2 y CO2, lactosa
fermentada, citrato no utilizado
Haemophilus 1,0 de ancho, longitudes variables; 37–44 facultativo o fermentativo; requiere factores de
cocobacilos o bacilos, inmóviles aerobio crecimiento presentes en la sangre;
parásitos en las membranas mucosas
leucothrix Filamentos largos de células cilíndricas 46–51 Aerobio Dispersión por gonidios, los filamentos
cortas, generalmente presentes no se deslizan; rosetas formadas;
heterótrofo
metilococo 0,8–1,5 1,0–1,5; cocos con cápsulas, 59–65 Aerobio Puede formar un quiste; usa metano,
inmóviles metanol y formaldehído como
únicas fuentes de carbono y energía
fotobacteria 0,8–1,3 1,8–2,4; bastones rectos y gruesos 39–44 Facultativamente Dos especies pueden emitir luz azul
con flagelos polares 0,5–1,0 1,5–5,0; anaeróbico verdosa; Na necesario para el crecimiento
Pseudomonas recto o 58–69 aeróbico o Metabolismo respiratorio con
bastones ligeramente curvados, flagelos polares anaeróbico oxígeno o nitrato como aceptor;
facultativo algunos usan H2 o CO como energía
fuente
Vibrión 0,5–0,8 1,4–2,6; varillas rectas o curvas con 38–51 Facultativamente metabolismo fermentativo o
flagelos polares envainados anaeróbico respiratorio; iones de sodio
estimular o son necesarios para
crecimiento; oxidasa positiva
orden Chromatiales. La familia Ectothiorhodospiraceae contiene

ocho géneros. Ectothiorhodospira tiene rojo, en forma de espiral, polarmente
células flageladas que depositan glóbulos de azufre en el exterior (fig ure 22.18). Las
membranas fotosintéticas internas están organizadas como
pilas laminares. Las bacterias típicas del azufre púrpura se encuentran en
la familia Chromatiaceae, que es mucho más grande y contiene
26 géneros.
Las bacterias del azufre púrpura son anaerobias estrictas y por lo general
fotolitoautótrofos. Oxidan el sulfuro de hidrógeno a azufre y
depositarlo internamente como gránulos de azufre (generalmente dentro de invaginated
bolsas de la membrana plasmática); a menudo eventualmente se oxidan
el azufre a sulfato. El hidrógeno también puede servir como donante de electrones. 10 micras
Thiospirillum, Thiocapsa y Chromatium son bacterias típicas del azufre púrpura (figura
22.19). Se encuentran en anóxicos, ricos en sulfuro.
zonas de lagos, pantanos y lagunas donde pueden ocurrir grandes floraciones Figura 22.18 Bacterias moradas. Ectothiorhodospira mobilis;
bajo ciertas condiciones (figura 22.20). micrografía de luz.
10 micras
(a) Chromatium vinosum

(a)
0,3 micras
(b) C. vinosum
Figura 22.19 Bacterias típicas del azufre púrpura. (a) Chromatium vinosum con (B)
gránulos de azufre intracelular. (b) Micrografía electrónica de C. vinosum. Obsérvese
el sistema de membrana vesicular intracitoplasmática. Figura 22.20 Bacterias moradas fotosintéticas del azufre. (a) Bacterias
Las grandes áreas blancas son los antiguos sitios de glóbulos de azufre. de azufre fotosintéticas moradas que crecen en un pantano. (b) Una laguna
de aguas residuales con una floración de bacterias fotosintéticas moradas.
Orden Thiotrichales Los electrones son utilizados por la cadena de transporte de electrones en la
El orden Thiotrichales contiene tres familias, la más grande de las cuales es la familia producción de energía. Muchas cepas también pueden crecer de forma heterótrofa
Thiotrichaceae. Esta familia tiene varios géneros que oxidan compuestos de azufre con acetato como fuente de carbono, y algunas incorporan CO2 de forma autótrofa.
(ver las bacterias incoloras del azufre [pág. 550] y el capítulo 9 para la oxidación del Leucothrix (figura 22.22) es un quimioorganotrofo aeróbico que forma filamentos
azufre y la quimiolitotrofia). o tricomas de hasta 400 m de largo. Suele ser marino y está adherido a sustratos
Morfológicamente están presentes tanto bastoncillos como formas filamentosas. sólidos mediante un anclaje. Leu cothrix tiene un ciclo de vida complejo en el que se
Dos de los géneros planeadores mejor estudiados de esta familia son Beg dispersa por la formación de gonidios. La formación de rosetas a menudo se ve en
giatoa y Leucothrix (figuras 22.21 y 22.22). Beggiatoa es microaerófila y crece en la cultura (figura 22.22d). Thiothrix es un género relacionado que forma filamentos
hábitats ricos en sulfuro, como manantiales de azufre, agua dulce con material envainados y libera gonidios desde el extremo abierto de la vaina (figura 22.23). A
vegetal en descomposición, arrozales, marismas y sedimentos marinos. Sus diferencia de Leucothrix, Thiothrix es un quimiolitotrofo que oxida el sulfuro de
filamentos contienen células cortas en forma de disco y carecen de vaina. Beggiatoa hidrógeno y deposita internamente gránulos de azufre. También requiere un
es metabólicamente muy versátil. Oxida el sulfuro de hidrógeno para formar grandes compuesto orgánico para su crecimiento (es decir, es un mixótrofo). Thiothrix crece
granos de azufre ubicados en bolsas formadas por invaginaciones de la membrana en sistemas de aguas residuales ricas en sulfuro y lodos activados.
plasmática. Beggiatoa puede posteriormente oxidar el azufre a sulfato.
Orden Methylococcales La única

10 micras
familia en este orden es Methylococcaceae. Contiene bastoncillos, vibrios y cocos
que utilizan metano, metanol y otros compuestos reducidos de un solo carbono
como su única fuente de energía y carbono en condiciones aeróbicas o
microaeróbicas (bajo nivel de oxígeno).
Es decir, son metilotrofas, distinguiéndolas de las bacterias que utilizan metano
exclusivamente como fuente de carbono y energía, a las que se denomina
metanótrofas. La familia contiene siete géneros, dos de los cuales son
Methylococcus (células esféricas, inmóviles) y Methylomonas (bastones rectos,
curvos o ramificados con un solo flagelo polar). Al oxidar el metano, las bacterias
contienen conjuntos complejos de membranas intracelulares. Casi todos son
capaces de formar quistes. La metanogénesis a partir de sustratos como H2 y CO2
está muy extendida en suelos y aguas anóxicos, y las bacterias metilotróficas
crecen por encima de los hábitats anóxicos en todo el mundo.
Figura 22.21 Beggiatoa alba. Una micrografía de luz que muestra parte de
Las bacterias oxidantes de metano utilizan el metano como fuente de energía
una colonia (400). Tenga en cuenta los gránulos de azufre oscuro dentro de
y carbono. El metano se oxida primero a metanol por la enzima metano
muchos de los filamentos.
monooxigenasa. Luego, el metanol se oxida a formaldehído por la metanol
deshidrogenasa y los electrones
Figura 22.22 Morfología y reproducción de Leucothrix mucor. (a)

Ciclo de vida de L.mucor. (b) Separación de gonidios de la punta del
Filamento filamento maduro; contraste de fase (1.400).(c) Gonidia agregando para
formar rosetas; contraste de fase (950).(d) Rosetas jóvenes en desarrollo
Formación (1500).(e) Un nudo formado por un filamento de Leucothrix.
de filamentos
Síntesis de
retención
División celular
y formación de Rosetón
filamentos.
Migración
y asociación de
gonidios
Gonidia
(a) (B)
(C) (D) (mi)

Células de pseudomonas
Figura 22.23 Tiotriz. Una colonia de Thiothrix vista con microscopía

(a)
de contraste de fase (1,000).
de esta oxidación se donan a una cadena de transporte de electrones para la

síntesis de ATP. El formaldehído puede asimilarse al material celular mediante la
actividad de cualquiera de dos vías, una que involucra la formación del aminoácido
serina y la otra que procede a través de la síntesis de azúcares como la fructosa
6-fosfato y la ribulosa 5-fosfato.
Orden Pseudomonadales
flagelos
Pseudomonas es el género más importante del orden Pseudomonadales, la familia
Pseudomonaceae. Estas bacterias son bastoncillos rectos o ligeramente curvados,
de 0,5 a 1,0 m por 1,5 a 5,0 m de largo y son móviles por uno o varios flagelos (B)
polares (figura 22.24; ver figura 3.32a). Estos quimioheterótrofos suelen realizar
respiración aeróbica. A veces, el nitrato se usa como aceptor terminal de electrones Figura 22.24 El Género Pseudomonas. (a) Una micrografía de contraste
en la respiración anaeróbica. Todas las pseudomonas tienen un ciclo de ácido de fase de células de Pseudomonas que contienen gránulos de PHB (poli- -
tricarboxílico funcional y pueden oxidar sustratos completamente a CO2. La hidroxibutirato). (b) Una micrografía electrónica de transmisión de
mayoría de las hexosas se degradan por la vía de Entner-Doudoroff en lugar de la Pseudomonas putida con cinco flagelos polares, cada flagelo alrededor de 5–7
vía de Emb den-Meyerhof. La descomposición de la glucosa en piruvato (sección longitud mínima.
9.3); El ciclo del ácido tricarboxílico (sección 9.4); ver también el apéndice II.
proceso de ción (la descomposición microbiana de materiales orgánicos a

sustancias inorgánicas) en la naturaleza y en el tratamiento de aguas residuales.
El género Pseudomonas es un taxón excepcionalmente heterogéneo
Las pseudomonas fluorescentes pueden usar aproximadamente 80 sustancias
compuesto actualmente por unas 60 especies. Muchos se pueden colocar en uno
diferentes como fuentes de carbono y energía.
de los siete grupos de homología de ARNr. Los tres grupos mejor caracterizados
Microorganismos en el medio ambiente del suelo (sección 29.3)
se subdividen según propiedades tales como la presencia de polihidroxibutirato
2. Varias especies (p. ej., P. aeruginosa) son sujetos experimentales importantes.
(PHB), la producción de un pigmento fluorescente, la patogenicidad, la presencia
Muchos avances en fisiología microbiana y bioquímica provienen de su
de arginio dihidrolasa y la utilización de glucosa. Por ejemplo, el subgrupo
estudio. Por ejemplo, el estudio de P. aeruginosa ha mejorado
fluorescente no acumula PHB y produce un pigmento amarillo verdoso soluble en
significativamente nuestra comprensión de cómo las bacterias forman
agua difusible que emite fluorescencia bajo la radiación ultravioleta (figura 22.25).
biopelículas y el papel de la señalización extracelular en las comunidades
Pseudomonas aeruginosa, P. fluorescens, P. putida y P. syringae son miembros
bacterianas y la patogénesis. El genoma de P. aeruginosa tiene una cantidad
de este grupo.
inusualmente grande de genes para el catabolismo, el transporte de nutrientes,
la salida de moléculas orgánicas y la regulación metabólica. Esto puede
Las pseudomonas tienen un gran impacto práctico en varios
explicar su capacidad para crecer en muchos entornos y resistir los antibióticos.
formas, incluidas estas:
1. Muchos pueden degradar una variedad excepcionalmente amplia de moléculas Crecimiento microbiano en entornos naturales: biopelículas (sección 6.6); Sistemas
orgánicas. Por lo tanto, son muy importantes en la mineraliza regulatorios globales: Quorum sensing (sección 12.5)
3. Algunas pseudomonas son patógenos importantes de animales y plantas. pags. bastones rectos o curvos con flagelos polares (figura 22.27). La mayoría son
aeruginosa infecta a personas con baja resistencia, como los pacientes con oxidasa positivo, y todos usan D-glucosa como su única o principal fuente de energía
fibrosis quística. También invade quemaduras y causa infecciones en el tracto y carbono (tabla 22.6). La mayoría son microorganismos acuáticos, muy extendidos
urinario. P. syringae es un importante patógeno vegetal. en agua dulce y en el mar. Hay
4. Las pseudomonas como P. fluorescens están involucradas en la ocho géneros en la familia: Vibrio, Photobacterium, Salinivibrio,
deterioro de la leche, la carne, los huevos y los mariscos refrigerados porque Listonella, Allomonas, Enterovibrio, Catencoccus y Grimontia.
crecen a 4 °C y degradan los lípidos y las proteínas. Varios vibriones son patógenos importantes. Vibrio cholerae
causa cólera y V. parahaemolyticus puede causar gastroenteritis
El género Azotobacter también pertenece a la familia Pseudomon adaceae. El
en humanos después del consumo de mariscos contaminados. V. an guillarum y
género contiene bacterias grandes y ovoides, de 1,5 a 2,0 m
otros son responsables de las enfermedades de los peces. transmitido por los alimentos
de diámetro, que pueden ser móviles por flagelos peritricos. Las celdas
y enfermedades transmitidas por el agua: Cólera (sección 38.4)
son a menudo pleomórficos, que van desde varillas hasta formas cocoides, y
El genoma de Vibrio cholerae contiene alrededor de 3.800 marcos de lectura
forman quistes a medida que envejece el cultivo (figura 22.26). El género es
abiertos distribuidos entre dos cromosomas circulares, el cromosoma 1 (2,96
aeróbico, catalasa positivo y fija nitrógeno de forma no simbiótica. Azo tobacter está
millones de pares de bases) y el cromosoma 2 (1,07 millones de pares de bases).
muy extendido en el suelo y el agua.
millones de pb). El cromosoma más grande tiene principalmente genes para
funciones celulares esenciales, como la replicación del ADN, la transcripción y
Orden Vibracionales síntesis de proteínas. También tiene la mayoría de los genes de virulencia. Por
Tres órdenes estrechamente relacionados de proteobacterias contienen varios ejemplo, el gen de la toxina del cólera está ubicado en un CTX integrado.
géneros bacterianos importantes. Cada orden tiene solo una familia. fago en el cromosoma 1. El cromosoma 2 también tiene genes esenciales
de bacilos gramnegativos anaerobios facultativos. La tabla 22.6 resume las tales como genes de transporte y genes de proteínas ribosómicas. Copias de
propiedades distintivas de las familias Enterobacte riaceae, Vibrionaceae y algunos genes están presentes en ambos cromosomas. Quizás V. cholerae logra
Pasteurellaceae de los órdenes una duplicación del genoma y una división celular más rápidas
Enterbacteriales, Vibrionales y Pasteurellales, respectivamente. distribuyendo sus genes entre dos cromosomas.
El orden Vibrionales contiene una sola familia, las Vibri onaceae. Los miembros Varios miembros de la familia son inusuales por ser bioluminiscentes. Vibrio
de la familia Vibrionaceae son gramnegativos, fischeri, V. harveyi y al menos dos especies de Pho tobacterium se encuentran entre
las pocas bacterias marinas capaces de
bioluminiscencia y emiten una luz azul verdosa debido a la actividad de la enzima
luciferasa (Microbial Diversity & Ecology
22.1). El pico de emisión de luz suele estar entre 472 y 505
nm, pero una cepa de V. fischeri emite luz amarilla con una mayor
pico a 545 nm. Aunque muchas de estas bacterias son de vida libre,
V. fischeri, V. harveyi, P. phosphoreum y P. leiognathi viven simbióticamente en los
órganos luminosos de peces (figura 22.28) y calamares .
(ver figura 6.30).
Orden Enterobacteriales
La familia Enterobacteriaceae es la más grande de las familias enumeradas
en la tabla 22.6. Contiene gramnegativos, perítricamente flagelados
Figura 22.25 Fluorescencia de Pseudomonas. Pseudomonas o inmóviles, facultativamente anaeróbicos, bastones rectos con simple
colonias de aeruginosa fluorescentes bajo luz ultravioleta.
Figura 22.26 Azotobacter. (a) Micrografía electrónica

de A. chroococcum vegetativo. (b) Quiste de Azotobacter.
0,2 micras
(a) (B)
Cuadro 22.6 Características de las familias de bacilos gramnegativos anaerobios facultativos
Características enterobacterias Vibrionaceae Pasteurellaceae
Dimensiones de la celda 0,3–1,0 1,0–6,0 m 0,3–1,3 1,0–3,5 m 0,2–0,4 0,4–2,0 m
Morfología varillas rectas; flagelos peritricos o Varillas rectas o curvas; flagelos Células cocoides a bastoncillos,
inmóviles polares; se pueden producir a veces pleomórficas; inmóvil
flagelos laterales en medios sólidos
Fisiología Oxidasa negativa Oxidasa positiva; todos pueden usar Oxidasa positiva; hemo y/o
D-glucosa como única o principal NAD a menudo requerido para
fuente de carbono el crecimiento; fuente de
nitrógeno orgánico requerida
contenido de GC 38–60% 38–51% 38–47%
relaciones simbióticas Algunos parásitos de mamíferos y La mayoría no son patógenos; varios Parásitos de mamíferos y aves.
aves; algunas especies fitopatógenas habitan órganos de luz de organismos marinos
géneros representativos Escherichia, Shigella, Salmonella, Vibrio, fotobacteria Pasteurella, Haemophilus

Citrobacter, Klebsiella,
Enterobacter, Erwinia, Serratia,
Proteo, Yersinia
Del editor en jefe de GM Garrity. Manual de Bacteriología Sistemática de Bergey, vol. 2. Copyright © 2005 Nueva York: Springer. Reimpreso con permiso.
para producir ácido fórmico en fermentaciones de ácido fórmico. esos entéricos

Las bacterias que producen grandes cantidades de gas durante la fermentación
del azúcar, como Escherichia spp., tienen la hidrogenoliasa fórmica
complejo que degrada el ácido fórmico a H2 y CO2. la familia puede
dividirse en dos grupos en función de sus productos de fermentación.
La mayoría (p. ej., los géneros Escherichia, Proteus, Salmonella,
y Shigella) realizan fermentaciones ácidas mixtas y producen
principalmente lactato, acetato, succinato, formiato (o H2 y CO2), y
etanol. Por el contrario, Enterobacter, Serratia, Erwinia y Kleb siella son
fermentadores de butanodiol. Los principales productos del butanodiol.
fermentación son butanodiol, etanol y dióxido de carbono. Los dos
tipos de fermentación de ácido fórmico se distinguen por el metilo
pruebas de red y de Voges-Proskauer. Fermentaciones (sección 9.7)
Debido a que las bacterias entéricas son tan similares en morfología,
Normalmente se utilizan pruebas bioquímicas para identificarlos después de
un examen preliminar de su morfología, motilidad y crecimiento.
respuestas (la figura 22.29 proporciona un ejemplo simple). Algo mas
Figura 22.27 Las Vibrionaceae. Micrografía electrónica de Las pruebas comúnmente utilizadas son aquellas para el tipo de fermentación
Vibrio alginolyticus cultivado en agar, mostrando una vaina polar de ácido fórmico, utilización de lactosa y citrato, producción de indol a partir de
flagelo y flagelos laterales desenvainados (18.000). triptófano, hidrólisis de urea y producción de sulfuro de hidrógeno.
Por ejemplo, la fermentación de lactosa ocurre en Escherichia y Enterobacter
Requerimientos nutricionales. El orden Enterobacteriales solo tiene pero no en Shigella, Salmonella o Proteus. Tabla 22.7
una familia, Enterobacteriaceae, con 44 géneros. La relación resume algunas de las propiedades bioquímicas útiles para distinguir entre
entre Enterobacteriales y los órdenes Vibrionales y Pasteurellales se puede géneros de bacterias entéricas. Los fermentadores de ácido mixto se
ver al inspeccionar la figura 22.17. encuentran a la izquierda en esta tabla y el butanodiol
Las propiedades metabólicas de las Enterobacteriaceae son muy fermentadores a la derecha. La utilidad de las pruebas bioquímicas en
útil para caracterizar sus géneros constituyentes. Los miembros de la La identificación de bacterias entéricas se demuestra por la popularidad de
familia, a menudo llamada enterobacteria o bacterias entéricas [del griego los sistemas de identificación comerciales, como Enterotube y API.
enterikos, perteneciente al intestino], todos degradan los azúcares por 20-E, que se basan en estas pruebas. Identificación de microorganismos a partir
medio de la vía de Embden-Meyerhof y escinde el ácido pirúvico de especímenes (sección 35.2)
22.1 Bioluminiscencia bacteriana
Varias especies de los géneros Vibrio y Photobacterium pueden emitir Proceso energéticamente caro. bacterias luminiscentes que ocupan el
luz de un color azul verdoso. La enzima luciferasa cataliza la reacción y utiliza Los órganos luminosos de los peces no emiten luz cuando crecen como organismos
mononucleótido de flavina reducido, oxígeno molecular, de vida libre en el agua de mar. Bacterias luminiscentes de vida libre
y un aldehído de cadena larga como sustratos. puede reproducirse e infectar a los peces jóvenes. Una vez asentado en el luminoso de un pez
órgano, la molécula autoinductora de detección de quórum producida por el
FMNH2 O2 RCHO ÿluciferasa ÿÿÿ FMH H2O RCOOH luz bacterias estimula la emisión de luz. Otras bacterias luminiscentes
crecer en alimentos potenciales como pequeños crustáceos puede usar luz
La evidencia sugiere que un intermedio de flavina excitado unido a una enzima para atraer peces a la fuente de alimento. Después de la ingestión, podrían establecer
es la fuente directa de luminiscencia. porque los electrones una relación simbiótica en el intestino del huésped.
utilizados en la generación de luz probablemente se desvían de la cadena de El mecanismo por el cual el autoinductor regula la producción de luz.
transporte de electrones y de la síntesis de ATP, las bacterias gastan una energía en estas bacterias marinas es un modelo importante para comprender la detección
considerable en la luminiscencia. La actividad de luminiscencia está regulada y puede ser de quórum en muchas bacterias gramnegativas, incluidas varias
apagado o encendido en las condiciones adecuadas. patógenos Sistemas regulatorios globales: Quorum sensing (sección 12.5)
Hay mucha especulación sobre el papel de la luminiscencia bacteriana y su
valor para las bacterias, particularmente porque es un
Figura 22.28 Bioluminiscencia. (a) Una fotografía del pez linterna del Atlántico
Kryptofanaron alfredi. El área clara debajo del ojo es el órgano luminoso del pez, que puede ser
cubierto por una tapa de tejido. (b) Las masas de fotobacterias en la vista SEM están separadas por delgadas
células epiteliales. (c) Sección ultrafina del órgano luminoso de un pez, Equulities novaehollandiae,
con la bacteria bioluminiscente Photobacterium leiognathi, PL.
ES
2 micras
6,0 micras
(a) (B) (C)
Los miembros de Enterobacteriaceae son tan comunes, están tan Erwinia son los principales patógenos de las plantas de cultivo y causan tizones,
extendidos e importantes que probablemente se vean con mayor frecuencia en marchitez, y varias otras enfermedades de las plantas. Estos y otros miembros
la mayoría de los laboratorios que cualquier otra bacteria. Escherichia coli es de la familia se analizan con más detalle en el capítulo 38.
sin duda la bacteria mejor estudiada y la experimental Depuración de aguas y análisis sanitario (sección 41.1)
organismo de elección para muchos microbiólogos. es un habitante
del colon de humanos y otros animales de sangre caliente, y
es bastante útil en el análisis de agua para la contaminación fecal. Orden Pasteurellales
Algunas cepas causan gastroenteritis o infecciones del tracto urinario. La familia Pasteurellaceae en el orden Pasteurellales difiere
Varios géneros contienen patógenos humanos muy importantes responsables de los Vibrionales y los Enterobacteriales de varias maneras
de una variedad de enfermedades: Salmonella (figura 22.30), (tabla 22.6). En particular, son pequeños (de 0,2 a 0,4 m de diámetro) e
fiebre tifoidea y gastroenteritis; Shigella, disentería bacilar; inmóviles, normalmente oxidasa positivos, tienen necesidades nutricionales
Klebsiella, neumonía; Yersinia, peste. miembros del genero complejas de varios tipos y son parásitos en general.
Figura 22.29 Identificación bacilos gramnegativos,

de géneros de enterobacterias. oxidasa negativos
Una clave dicotómica para seleccionar

géneros de bacterias entéricas basados
sobre motilidad y bioquímica móvil inmóvil
características. Las siguientes
se utilizan abreviaturas: ONPG,
o-nitrofenil- -D
galactopiranósido (una prueba ONPG + ONPG – Citrato - Citrato +
para -galactosidasa); ADNasa, adonitol – Adonitol +
desoxirribonucleasa; Gel. Liq.,

licuefacción de gelatina; y vicepresidente,
Citrato + Citrato - ureasa - Ureasa + D-xilosa – D-xilosa +
Voges-Proskauer (una prueba para
Manitol + manitol –
fermentación de butanodiol).
ADNasa – ADNasa +
Gel. Liq. – Gel. Liq. +
Vicepresidente – vicepresidente +
citrobacter Enterobacter Serratia Escherichia Salmonela Proteo Shigela Yersinia Klebsiella
Cuadro 22.7 Algunas características de géneros seleccionados en las enterobacterias
Características Escherichia Shigela Salmonela citrobacter Proteo
rojo de metilo
Voges-Proskauer D
producción de indol () D D D
uso de citrato () D
producción de H2S ( )D ( )
ureasa ()
-galactosidasa ( ) dd ( ) ( )
Gas de la glucosa
Ácido de lactosa D
Fenilalanina
desaminasa
Lisina () ()
descarboxilasa
ornitina ( ) D( ) () D
descarboxilasa
Motilidad D ()
Licuación de gelatina
(22°C)
% GC 48–59 49–53 50–53 50–52 38–41
Tamaño del genoma (Mb) 4.6–5.5 4.6 4.5–4.9 ndd Dakota del Norte
Otro 1,1–1,5 2,0–6,0 m; No hay gas de azúcares 0,7–1,5 2–5 m; 1,0 2,0–6,0 m; 0,4–0,8 1,0–3,0 m;
caracteristicas peritrichous cuando motile flagelos peritricos peritrico peritrico
a
( ) suele estar presente
B
( ) generalmente ausente
C
d, las cepas o especies varían en posesión de características
D
Nd: No determinado; genoma aún no secuenciado
560
vertebrados. La familia contiene siete géneros: Pasteurella, 4. ¿En qué hábitats se esperaría ver crecer las Methylococcaceae?
Haemophilus, Actinobacillus, Lonepinella, Mannheimia, Pho coenobacter y Gallibacterium . ¿y por qué?
5. ¿Qué es un metilotrofo? ¿Cómo utilizan el metano las bacterias oxidantes de metano?

Como era de esperar, los miembros de esta familia son más conocidos como fuente de energía y fuente de carbono?
por las enfermedades que causan en humanos y muchos animales. Pasteurella multocida y P. 6. Indique las principales propiedades distintivas de los géneros Pseudomonas y Azoto
haemolytica son animales importantes bacter. Discuta brevemente los cambios taxonómicos que han ocurrido en el
patógenos P. multocida es responsable del cólera aviar, que mata género Pseudomonas.
muchos pollos, pavos, patos y gansos cada año. P. haemolyt ica es, al menos en parte, 7. ¿Por qué las pseudomonas son bacterias tan importantes? Qué es
responsable de la neumonía en bovinos, ovinos y ¿mineralización?
cabras (p. ej., “fiebre del transporte” en el ganado). H. influenzae tipo b es un importante 8. Enumere los principales rasgos distintivos de las familias Vibrionaceae, Enterobacte
patógeno humano que causa una variedad de enfermedades, que incluyen riaceae y Pasteurellaceae.
meningitis en niños. Enfermedades de transmisión aérea: Meningitis (sección 38.1) 9. ¿Qué principal enfermedad humana está asociada con las Vibrionaceae y qué
especie lo causa?
10. Describa brevemente la bioluminiscencia y la forma en que se produce.

11. ¿En qué dos grupos se pueden colocar las bacterias entéricas según sus patrones de
2. ¿Cuáles son las principales características de la bacteria del azufre púrpura? contrastar el
fermentación?
familias Chromatiaceae y Ectothiorhodospiraceae.
12. Da dos razones por las que las enterobacterias son tan importantes.
3. Describa los géneros Beggiatoa, Leucothrix y Thiothrix.
Yersinia Klebsiella Enterobacter Erwinia Serratia

a B
() () corriente continua
(37°C) () ()
D D () ()
() () ()
()
D () ()
()
() () ( ) ( ) ( )dd D
() ()
()()
() () D D
D () D
(37°C)
( ) día ( )
46–50 53–58 52–60 50–54 52–60
4.6 Dakota del Norte Dakota del Norte 5.1 5.1

0,5–0,8 1,0–3,0 m; 0,3–1,0 0,6–6,0 m; 0,6–1,0 1,2–3,0 m; 0,5–1,0 1,0–3,0 m; 0,5–0,8 0,9–2,0 m;
peritrico cuando es encapsulado peritrico peritrico; peritrico; colonias a
movil fitopatógenos y menudo pigmentadas
saprófitos
a) Salmonella enteritidis (b) S. typhi
Figura 22.30 Las Enterobacteriaceae. Salmonella tratada con tinciones fluorescentes. (a) Salmonella enterica serovar Enteritidis con
flagelos peritricos (500). S. enteritidis se asocia con gastroenteritis. (b) S. enterica serovar Typhi con tinción de naranja de acridina (2000).
S. typhi causa fiebre tifoidea.
22.4 Clase Deltaproteobacteria Aunque las

desulfuromonadales
-proteobacterias no son un gran conjunto de géneros, muestran una
diversidad morfológica y fisiológica considerable. Estas bacterias se
pueden dividir en dos grupos generales, todos ellos quimioorganotrofos. Mixococales
Algunos géneros son depredadores como los bdellovibrios y las

desulfomonilo
myxobacterias. Otros son anaerobios que generan sulfuro a partir de
sulfato y azufre mientras oxidan los nutrientes orgánicos. La clase tiene
ocho órdenes y 20 familias. La figura 22.31 ilustra las relaciones Syntrophobacteraceae
filogenéticas entre los principales grupos dentro de las proteobacterias, y
la tabla 22.8 resume las propiedades generales de algunos géneros
Desulfobacteraceae
representativos.
Desulfobulbaceae
Órdenes Desulfovibrionales, Desulfobacterales y
Desulfuromonadales
Estas bacterias reductoras de sulfato o azufre son un grupo diverso unido

por su naturaleza anaeróbica y la capacidad de usar azufre elemental o Desulfovibrionales
sulfato y otros compuestos de azufre oxidado como aceptores de
electrones durante la respiración anaeróbica (figura 22.32). Una cadena
de transporte de electrones reduce el azufre y el sulfato a sulfuro de Figura 22.31 Relaciones filogenéticas entre los principales
hidrógeno y genera la fuerza motriz de protones que impulsa la síntesis de grupos dentro de las proteobacterias. Las relaciones se basan
ATP. El género reductor de sulfato mejor estudiado es Desulfovibrio; en la secuencia de ARNr 16S.
Desulfuromonas usa solo azufre elemental como aceptor.
Respiración anaeróbica (sección 9.6) más prevalente en sedimentos marinos y estuarinos anóxicos. También
Estas bacterias son muy importantes en el ciclo del azufre dentro del se puede aislar de digestores de metano y lodos anóxicos ricos en sulfuro
ecosistema. Debido a que cantidades significativas de sulfato están de hidrógeno de hábitats de agua dulce. Utiliza azufre elemental, pero no
presentes en casi todos los hábitats acuáticos y terrestres, las bacterias sulfato, como aceptor de electrones. A menudo, la reducción de sulfato y
reductoras de sulfato están muy extendidas y activas en lugares anóxicos azufre es evidente por el olor del sulfuro de hidrógeno y el ennegrecimiento
por la digestión microbiana de materiales orgánicos. El desulfovib rio y del agua y los sedimentos por el sulfuro de hierro. La producción de sulfuro
otras bacterias reductoras de sulfato prosperan en hábitats como lodos y de hidrógeno en suelos anegados puede matar animales, plantas y
sedimentos de lagos y arroyos contaminados, lagunas y digestores de microorganismos. Las bacterias reductoras de sulfato tienen un impacto
aguas residuales y suelos anegados. Desulfuromonas es negativo en la industria debido a su papel principal en la corrosión anaeróbica de
Clase Deltaproteobacteria 563
Cuadro 22.8 Características de - y - Proteobacterias seleccionadas
Clase Contenido de GC Oxígeno (%

Género Dimensiones (m) y Morfología mol) Requisito Otras características distintivas
-Proteobacteria
Bdellovibrio 0,2–0,5 0,5–1,4; varillas en forma de 49,5–51 Aerobio Se alimenta de otras bacterias gramnegativas
coma con un flagelo polar envainado donde crece en el periplasma, alterna
entre las fases reproductivas depredadoras
e intracelulares
desulfovibrio 0,5–1,5 2,5–10; bastones curvos 46,1–61,2 anaeróbico Oxida compuestos orgánicos a
oa veces rectos, móviles por flagelos acetato y reduce el sulfato o azufre
polares 0,4–0,9 1,0–4,0; varillas rectas a H2S
Desulfuromonas o ligeramente curvadas u ovoides, flagelos 54–62 anaeróbico Reduce el azufre a H2S, oxida el
laterales o subpolares acetato a CO2, forma colonias de
color rosa o melocotón.
mixococo 0,4–0,7 2–8; bastones delgados con 68–71 Aerobio Forma cuerpos fructíferos con microquistes
extremos cónicos, motilidad no encerrados en un esporangio.
Estigmatela deslizante 0,7–0,8 4–8; varillas rectas 67–68 Aerobio Cuerpos fructíferos pedunculados
con extremos cónicos, motilidad deslizante con esporangiolos que
contienen mixosporas (0,9–1,2 2–4 m)
-Proteobacteria
Campylobacter 0,2–0,8 0,5–5; espiralmente curvado 29–47 Carbohidratos microaerofílicos no fermentados ni oxidados;
células con un solo flagelo polar en uno oxidasa positiva y ureasa negativa;
o ambos extremos encontrado en el intestino
tracto, órganos reproductivos y orales
cavidad de los animales
Helicobacter 0,2–1,2 1,5–10; celdas helicoidales, curvas 24–48 Catalasa microaerófila y oxidasa positiva; urea rápidamente
o rectas con extremos redondeados; hidrolizada; Se encuentra en la
múltiples flagelos envainados mucosa gástrica de humanos y otros
animales
hierro en tuberías, sistemas de calefacción y otras estructuras. Ciclo utes con la ayuda de varias enzimas hidrolíticas que libera. Su
químico biogeo: ciclo del azufre (sección 27.2) el flagelo se pierde durante la penetración de la célula.
Después de la entrada, Bdellovibrio toma el control de la célula huésped y
crece en el espacio periplásmico (entre la pared celular y
Orden Bdellovibrionales membrana plasmática) mientras que la célula huésped pierde su forma y se redondea
El orden tiene solo la familia Bdellovibrionaceae y cuatro géneros. El género arriba. El depredador inhibe la síntesis de proteínas, ADN y ARN del huésped en
Bdellovibrio [del griego bdella, sanguijuela] contiene bacilos curvos aerobios cuestión de minutos y altera la membrana plasmática del huésped para que
gramnegativos con flagelos polares (figura 22.33). que los constituyentes citoplasmáticos se fugan fuera de la célula. El crecimiento
El flagelo es inusualmente grueso debido a la presencia de una vaina. La bacteria utiliza los aminoácidos del huésped como fuente de carbono, nitrógeno
que se continúa con la pared celular. Bdellovibrio tiene un estilo de vida distintivo: se y energía. Emplea ácidos grasos y nucleótidos directamente en
alimenta de otras bacterias gramnegativas y alterna entre una fase depredadora que biosíntesis, ahorrando así carbono y energía. La bacteria crece rápidamente hasta
no crece y una fase intracelular. convertirse en un largo filamento debajo de la pared celular y luego se divide en
fase reproductiva. muchos descendientes flagelados más pequeños, que escapan a la superficie.
El ciclo de vida de Bdellovibrio es complejo aunque requiere lisis de la célula huésped. Tal fisión múltiple es rara en los procariotas.
sólo de 1 a 3 horas para su realización (figura 22.34). La bacteria libre nada muy El ciclo de vida de Bdellovibrio se parece al de los bacteriófagos.
rápidamente (alrededor de 100 células por segundo) hasta que choca violentamente de muchas maneras. No en vano, si se emplata un cultivo de Bdellovibrio
con su presa. Se adhiere a la en agar con bacterias anfitrionas, se formarán placas en la bacteria
superficie bacteriana, comienza a girar tan rápido como 100 revoluciones por césped. Esta técnica se utiliza para aislar cepas puras y contar las
segundo, y perfora un agujero a través de la pared de la célula huésped en 5 a 20 minutos número de organismos viables al igual que con los fagos.
0,2 micras
(a) Desulfovibrio saprovorans

Figura 22.33 Morfología de Bdellovibrio. Bdellovibrio bacteriovorus teñido
negativamente con su flagelo polar envainado.
Orden Myxococcales Las
mixobacterias son bacterias aerobias gramnegativas del suelo que se

caracterizan por una motilidad deslizante, un ciclo de vida complejo con la
producción de cuerpos fructíferos y la formación de mixosporas latentes.
Además, su contenido de GC es de alrededor del 67 al 71 %, significativamente
más alto que el de la mayoría de las bacterias deslizantes.
Las células mixobacterianas son bastoncillos, de aproximadamente 0,4 a 0,7
por 2 a 8 m de largo, y pueden ser delgados con extremos cónicos o gruesos
con extremos redondeados y romos (figura 22.35). El orden Myxococcales se
divide en seis familias según la forma de las células vegetativas, las mixosporas
y los esporangios. Diversidad microbiana y ecología 21.1: El mecanismo de la
motilidad deslizante La mayoría de las mixobacterias son microdepredadores o
(b) Desulfovibrio gigas carroñeros. Secretan una variedad de enzimas digestivas que lisan
bacterias y levaduras. Muchas mixobacterias también secretan antibióticos, que
pueden matar a sus presas. Los productos de la digestión, principalmente
péptidos pequeños, se absorben. La mayoría de las mixobacterias utilizan
aminoácidos como fuente principal de carbono, nitrógeno y energía. Todos son
quimioheterótrofos con metabolismo respiratorio.
El ciclo de vida de las mixobacterias es bastante distintivo y en muchos

aspectos se asemeja al de los mohos mucilaginosos celulares (figura 22.36).
En presencia de un suministro de alimentos, las mixobacterias migran a lo largo
de una superficie sólida, alimentándose y dejando rastros de limo. Durante esta
etapa, las células a menudo forman un enjambre y se mueven de manera coordinada.
Algunas especies se congregan para producir una lámina de células que

se mueve rítmicamente para generar ondas u ondas. Cuando se agota su
suministro de nutrientes, las mixobacterias se agregan y se diferencian
en un cuerpo fructífero. Clasificación protista: Eumycetozoa (sección 25.6)
El ciclo de vida de la especie Myxococcus xanthus ha sido bien estudiado.
El desarrollo de este microbio es inducido por la limitación de nutrientes e implica
(c) Desulfobacter postgatei
el intercambio de al menos cinco moléculas señalizadoras extracelulares
Figura 22.32 Las bacterias disimilatorias reductoras de sulfato o diferentes que permiten que las células se comuniquen entre sí. Se han
azufre. Ejemplos representativos. (a) Micrografía de contraste de fase caracterizado dos de estas señales. Tanto el factor A, una mezcla de péptidos
de Desulfovibrio saprovorans con inclusiones de PHB (2000). (b) y aminoácidos, como el factor proteína C se liberan y ayudan a desencadenar
Desulfovibrio gigas; contraste de fase (2000). (c) Desulfobacter el proceso. El desarrollo del cuerpo fructífero también requiere motilidad
postgatei; contraste de fase (2.000). deslizante.
Clase Deltaproteobacteria 565
Bdellovibrio Figura 22.34 El ciclo de vida de Bdellovibrio. (a) Un

diagrama general que muestra el ciclo de vida completo.
(b) Bdellovibrio bacteriovorus penetrando la pared celular de E.
presa bacteriana
coli (55.000). (c) Un Bdellovibrio encapsulado entre
Pared celular
la pared celular y la membrana plasmática de E. coli (60.800).
Plasma
membrana
10 minutos
20 minutos
10 seg
150–210 minutos
20 minutos
(a)
(B) (C)
idad Se han caracterizado dos tipos de deslizamiento en M. xanthus: hecho de alrededor de 100.000 células (Myxococcus) al elaborado,
la motilidad aventurera (A) es impulsada por la extrusión de un material similar a un estructuras ramificadas en forma de árbol formadas por Stigmatella y Chon dromyces
gel desde el polo trasero; la motilidad social (S) está gobernada por (figura 22.37). Algunas células se convierten en osporas myx latentes que con
la producción de pili retráctiles desde el extremo frontal de la celda. frecuencia están encerradas en estructuras amuralladas llamadas
Cuando los pili se retraen, la célula avanza lentamente. Este tipo de motilidad se esporangiolos o esporangios. Cada especie forma una característica
denominó originalmente motilidad social porque solo se observa en células que están cuerpo fructífero.
muy juntas. Ahora se sabe que Las mixosporas no solo están latentes sino también resistentes a la desecación.
Se requiere contacto de célula a célula para la motilidad S porque las células comparten y pueden sobrevivir hasta 10 años en condiciones adversas.
lipoproteínas de la membrana externa involucradas en la secreción de pili. Permiten que las mixobacterias sobrevivan largos períodos de sequía y
Una variedad de nuevas proteínas se sintetizan durante la fructificación. privación de nutrientes. El uso de cuerpos fructíferos proporciona más
formación del cuerpo Los cuerpos fructíferos varían en altura de 50 a 500 protección para las mixosporas y ayuda en su dispersión. (Los
m y a menudo son de color rojo, amarillo o marrón por carotenoide las mixosporas a menudo se encuentran suspendidas sobre la superficie del suelo).
pigmentos Varían en complejidad desde simples objetos globulares. Las mixosporas se mantienen juntas dentro del cuerpo fructífero, una colonia
(a) (B) (C)
Figura 22.35 Bacterias fructíferas deslizantes (mixobacterias). Células mixobacterianas y mixosporas. (a) Stigmatella aurantiaca (1200).
(b) Chondromyces crocatus (950). (c) Mixosporas de Myxococcus xanthus (1100). Todas las fotografías tomadas con un microscopio de contraste de fase.
Agregar
Crecimiento
vegetativo
Fructificación
Fructificación
cuerpo
mixospora
(a) (B)
Figura 22.36 Ciclo de vida de Myxococcus xanthus. (a) Cuando los nutrientes son abundantes, M. xanthus crece vegetativamente. Sin embargo cuando
los nutrientes se agotan, un intercambio complejo de moléculas de señalización extracelular hace que las células se agreguen y formen cuerpos fructíferos.
La mayoría de las células dentro de un cuerpo fructífero se convertirán en mixosporas en reposo que no germinarán hasta que los nutrientes estén disponibles. (b) Escaneo
micrografías electrónicas tomadas durante la formación de agregados (0–12 horas) y cuerpos fructíferos (24 horas).
de mixobacterias se desarrolla automáticamente cuando las mixosporas célula individual tendrá más dificultad para superar difusional
se liberan y germinan. Esta organización comunal puede ser pérdidas que un enjambre de células.
ventajoso porque las mixobacterias obtienen nutrientes al secretar Las mixobacterias se encuentran en los suelos de todo el mundo. ellos son los mas
enzimas hidrolíticas y absorbentes de productos digestivos solubles. A comúnmente aislado de suelos neutros o material vegetal en descomposición
Una masa de mixobacterias puede producir concentraciones de enzimas como hojas y cortezas de árboles, y de estiércol animal. Aunque
suficientes para digerir a sus presas más fácilmente que una célula individual. crecen en hábitats tan diversos como las selvas tropicales y las
Las enzimas extracelulares se difunden lejos de su fuente, y en tundra ártica, son más abundantes en las zonas cálidas.
Clase Epsilonproteobacteria 567
mixosporas Pared de esporangiolos Figura 22.37 Cuerpos fructíferos mixobacterianos.

(a) Una ilustración de la estructura típica del cuerpo
fructífero. (b) Myxococcus fulvus. Los cuerpos fructíferos
esporangiola
miden entre 150 y 400 m de altura. c) Myxococcus stipitatus.
El tallo es tan alto como 200 m. ( d ) Chondromyces crocatus
visto con el SEM. El tallo puede alcanzar los 700 mo más de
mixosporas
Sobre de limo altura.
mixosporas
esporangiola
Tallo
Cuerpo fructífero de Cuerpo fructífero de
mixococo Poliangio
Cuerpo fructífero de
Estigmatela
(a)
(b) Myxococcus fulvus c) Myxococcus stipitatus (d) Chondromyces crocatus
Los géneros génicos, Campylobacter y Helicobacter, son bacilos gramnegativos microaerófilos,

1. Caracterice brevemente las -proteobacterias.
móviles, helicoidales o vibrioides. La Tabla 22.8 resume algunas de las características de estos
2. Describa la especialización metabólica del sulfato disimilatorio o azufre
dos géneros.
bacterias reductoras. ¿Por qué son importantes?
El género Campylobacter contiene tanto especies no patógenas como patógenas para
3. Caracterizar el género Bdellovibrio y detallar su ciclo de vida.
humanos y otros animales. C. fetus causa enfermedades reproductivas y abortos en bovinos y
4. Indique las principales características distintivas de las mixobacterias. ¿Cómo
ovinos. Se asocia con una variedad de condiciones en humanos que van desde septicemia
obtienen la mayoría de sus nutrientes?
(patógenos o sus toxinas en la sangre) hasta enteritis (inflamación del tracto intestinal). C.
5. Describe brevemente el ciclo de vida de las mixobacterias. ¿Qué son los cuerpos fructíferos y
jejuni provoca abortos en ovejas y diarrea por enteritis en humanos. Enfermedades transmitidas
mixosporas?
por los alimentos y el agua: gastroenteritis por Campylobacter jejuni (sección 38.4)
Hay al menos 23 especies de Helicobacter, todas aisladas del estómago y la parte

22.5 CLASE EPSILONPROTEOBACTERIA
superior del intestino de humanos, perros, gatos y otros mamíferos. En los países en desarrollo,
Las -proteobacterias son las más pequeñas de las cinco clases de proteobacterias. Todos del 70 al 90% de la población está infectada; los países desarrollados oscilan entre el 25 y el
ellos son bacilos gramnegativos delgados, que pueden ser rectos, curvos o helicoidales. Las 50%. La mayoría de las infecciones probablemente se adquieren durante la infancia, pero el
-proteobacterias tienen un orden, Campylobacterales, y tres familias: Campylobacteraceae, modo preciso de transmisión no está claro. El principal patógeno humano es Helicobacter
Heli cobacteraceae y la recientemente añadida Nautiliaceae. dos pato pylori, que causa gastritis
(a) (B)
Figura 22.38 - Las proteobacterias dominan las esteras microbianas filamentosas en un manantial de una cueva sulfurosa de Wyoming. (a) Un canal
formada por el manantial aparece de color blanco debido a la alta densidad de proteobacterias filamentosas. La estaca en el centro de la foto (flecha) es
unos 25 cm de alto. (b) Proteobacterias filamentosas dentro de los manantiales.
y enfermedad de úlcera péptica. H. pylori produce grandes cantidades de La segunda edición del Manual de Bergey es el resultado del reciente aislamiento de
ureasa, y la hidrólisis de urea parece estar asociada con su dos géneros de especies moderadamente termófilas (de crecimiento óptimo).
virulencia. Enfermedades de contacto directo: úlcera péptica y gastritis (sección 38.3) temperatura de unos 55°C) quimiolitoautótrofos de aguas profundas
respiraderos hidrotermales. Los miembros de los géneros Nautilia y Camini bacter son
Se han secuenciado los genomas de C. jejuni y H. pylori (ambos con un tamaño anaerobios estrictos que oxidan H2 y usan azufre como un
aproximado de 1,6 millones de pares de bases). ahora están siendo aceptor de electrones Las especies se encuentran viviendo libremente o como
estudiados y comparados para comprender los estilos de vida y simbiontes de la macrofauna de ventilación. Interacciones microbianas: a base de sulfuro
patogenicidad de estas bacterias. mutualismos (sección 30.1)
Ahora se reconoce que las proteobacterias son más metabólica y ecológicamente

diversas de lo que se pensaba anteriormente. Por ejemplo, esteras microbianas
1. Describe brevemente las propiedades de las -proteobacterias.
filamentosas en cavernas anóxicas ricas en sulfuro
2. Dé las características generales de Campylobacter y Helicobacter. ¿Qué
Los manantiales están dominados por miembros de las -proteobacterias (figura
es su importancia para la salud pública?
22.38). La inclusión de una nueva familia, las Nautiliaceae, en el
Resumen
Las proteobacterias son el grupo más grande y diverso de bacterias. Sobre la base de los datos de C. Muchas proteobacterias tienen prótesis, tallos o reproducción por gemación.
la secuencia del ARNr, se dividen en cinco clases: las y -proteobacterias. -, -, -, -, La mayoría de estas bacterias se sitúan entre las -proteobacterias.
D. Dos ejemplos de bacterias en gemación y/o apéndices son Hyphomicrobium

(bacterias en ciernes que producen células swarmer) y Caulobacter (bacterias con
22.1 Clase Alfaproteobacteria prótesis y sujetadores) (figuras 22.5–22.8).
un. Las bacterias púrpuras no sulfurosas pueden crecer en forma anaeróbica como mi. Rhizobium lleva a cabo la fijación de nitrógeno, mientras que Agrobacterium provoca la
fotoorganoheterótrofas y, a menudo, en forma aeróbica como quimioorganoheterótrofas (figura 22.3). Ellosdesarrollo de tumores vegetales. Ambos pertenecen a la familia Rhizobiaceae de la
se encuentran en hábitats acuáticos con abundante materia orgánica y bajos niveles de sulfuro -proteobacterias (figuras 22.9 y 22.10).
niveles F. Las bacterias quimiolitotróficas obtienen energía y electrones de compuestos inorgánicos
B. Las rickettsias son parásitos intracelulares obligados responsables de muchas enfermedades reducidos. Las bacterias nitrificantes son aerobias que oxidan amoníaco o nitrito a nitrato y son
(figura 22.4). Poseen numerosas proteínas de transporte en sus membranas plasmáticas y responsables de la nitrificación (tabla 22.2).
hacen un amplio uso de nutrientes, coenzimas y ATP de la célula huésped.
22.2 Clase Betaproteobacteria gramo. Los bacilos gramnegativos facultativamente anaerobios más importantes se encuentran en
tres familias: Vibrionaceae, Enterobacteriaceae y Pasteurellaceae (tabla 22.6).
un. El género Neisseria contiene cocos gramnegativos aerobios, inmóviles, que generalmente se
presentan en pares. Colonizan las membranas mucosas y causan varias enfermedades
humanas. H. Las Enterobacteriaceae, a menudo denominadas enterobacterias o bacterias entéricas, son
bacilos rectos gramnegativos, perítricamente flagelados o inmóviles, facultativamente
B. Sphaerotilus, Leptothrix y varios otros géneros tienen vainas, estructuras parecidas a tubos
anaeróbicos, con requerimientos nutricionales simples.
huecos que rodean cadenas de células sin estar en contacto íntimo con las células (figura
22.14). I. Las bacterias entéricas suelen identificarse mediante una variedad de pruebas fisiológicas y son
C. Las bacterias de azufre incoloras como Thiobacillus oxidan azufre elemental, sulfuro de organismos experimentales muy importantes y patógenos de plantas y animales (tabla 22.7
y figura 22.29).
hidrógeno y tiosulfato a sulfato mientras generan energía quimiolitotróficamente.
22.4 Clase Deltaproteobacteria
22.3 Clase Gammaproteobacteria un. Las proteobacterias contienen bacterias gramnegativas quimioorganotróficas que son
anaeróbicas y pueden utilizar azufre elemental y compuestos de azufre oxidado como
un. Las -proteobacterias son el subgrupo más grande de proteobacterias con una gran variedad
aceptores de electrones en la respiración anaeróbica (tabla 22.8). Son muy importantes en
de tipos fisiológicos (tabla 22.5 y figura 22.17).
el ciclo del azufre en el ecosistema. Otras -proteobacterias son aerobios depredadores.
B. Las bacterias del azufre púrpura son anaerobias y normalmente fotolitoautótrofas.
Oxidan el sulfuro de hidrógeno a azufre y depositan los gránulos internamente (figura 22.19).
B. Bdellovibrio es un bacilo aerobio curvo con flagelo polar envainado que se alimenta de otras
bacterias gramnegativas y crece dentro de su espacio periplásmico (figuras 22.33 y 22.34).
C. Bacterias como Beggiatoa y Leucothrix crecen en largos filamentos o tricomas (figuras 22.21 y
C. Las mixobacterias son bacterias aerobias gramnegativas del suelo con motilidad deslizante
22.22). Ambos géneros tienen motilidad deslizante. Beggiatoa es principalmente un
y un ciclo de vida complejo que conduce a la producción de mixosporas latentes contenidas dentro
quimiolitotrofo y Leucothrix, un quimioorganotrofo. D. Las Methylococcaceae son metilotrofas;
de los cuerpos fructíferos (figuras 22.35–22.37).
utilizan metano, metanol y otros compuestos reducidos de un solo carbono como su único carbono
y energía
fuentes.
22.5 Clase Epsilonproteobacteria
mi. El género Pseudomonas contiene bacilos aerobios, gramnegativos, rectos o ligeramente
curvados, que son móviles por uno o varios flagelos polares y no tienen prótesis ni vainas un. Las proteobacterias son las más pequeñas de las clases de proteobacterias y contienen dos
(figura 22.24). F. Las pseudomonas participan en los procesos de mineralización natural, son géneros patógenos importantes: Campylobacter y Helicobacter.
Son bacilos gramnegativos microaerófilos, móviles, helicoidales o vibrioides. B.
importantes sujetos experimentales, causan muchas enfermedades y, a menudo, estropean los
alimentos refrigerados. Recientemente se ha agregado una nueva familia, las Nautiliaceae . Muchas de estas bacterias
son quimiolitoautótrofas de ecosistemas de respiraderos hidrotermales de aguas profundas.
Términos clave
bacterias entéricas (enterobacterias) 558 mineralización 556 bacterias púrpuras sin azufre 540
-proteobacteria 540
enteritis 567 mixobacterias 564 bacterias púrpuras del azufre 553
-proteobacteria 546
fisión binaria 543 -proteobacteria 567 mixosporas 565 septicemia 567 vaina 548
bioluminiscencia 557 cuerpo fructífero 564 nitrificación 546
-proteobacteria 551 bacterias nitrificantes 546 tallo 543

brotación 543
bacterias sulfurosas incoloras 550 sujeción 544 prostheca 543 proteobacteria
-proteobacteria 562 metilotrofo 544 539
1. Helicobacter pylori produce grandes cantidades de ureasa. La ureasa cataliza la 3. Bdellovibrio es un depredador intracelular. Una vez que invade el periplasma, logra inhibir
reacción: muchos aspectos del metabolismo del huésped. Sugiera un mecanismo por el cual esta
O inhibición podría ocurrir tan rápidamente.
4. ¿Por qué la capacidad de formar quistes latentes podría ser una gran ventaja para Agrobacterium
H2N C NH2 ÿ CO2 2NH3 Sugiera por pero no tanto para Rhizobium?
qué esto permite que H. pylori habite en el hábitat ácido del estómago 5. ¿Por qué las bacterias deslizantes y en gemación y/o anexas se distribuyen entre tanto
mucosa muchas secciones diferentes en el Manual de Bergey?
2. Los metilótrofos oxidan el metano a metanol, luego a formaldehído y finalmente a acetato.

Sugiera mecanismos por los cuales la bacteria se protege de los efectos tóxicos de los
intermedios, metanol y formaldehído.
Aprende más
Balows, A.; Truper, HG; Dworkin, M.; Más duro, W.; y Schleifer, K.-H. 1992. El ter profundus sp. nov., una novela termófila de Nautiliales ord. nov. dentro de
procariotas, 2ª ed. Nueva York: Springer-Verlag. clase "Epsilonproteobacteria", aislada de un respiradero hidrotermal de aguas profundas.
Engel, A., S.; Lee, N.; Porter, ML; popa, Los Ángeles; Bennett, PC; y Wagner, M. En t. J. Sys. Evol. Microbiol. 54:41–5.
2003. Las “Epsilonproteobacteria” filamentosas dominan los tapetes microbianos de Miroshnichenko, ML; Kostrikina, NA; Haridon, SL; Jeathon, C.; Hippe, H.;
manantiales de cuevas sulfurosas. aplicación Reinar. Microbiol. 69:5503–11. Stackenbrandt, E.; y Bonch-Osmolovskaya, EA 2002. Nautilia lithotroph ica gen. nov., sp.
Eremeeva, ME y Dasch, GA 2000. Rickettsiae. En Encyclopedia of microbi ology, 2.ª ed., vol. nov. una proteobacteria termófila reductora de azufre aislada de un respiradero hidrotermal
4, J. Lederberg, editor en jefe, 140–80. San Diego: de aguas profundas. En t. J. Sys. Evol. Microbiol. 52:
Prensa Académica. 1299-1304.
Garrity, gerente general, editor en jefe. 2005. Manual de Bacteriología Sistemática de Bergey, Moulín, LO; Munve, A.; Dreyfus, B.; y Boivin-Masson, C. 2001. Nodulación
2ª ed., vol. 2, DJ Brenner, NR Krieg y JT Staley, editores. Nueva York: de leguminosas por miembros de la subclase de Proteobacteria. Naturaleza 411:
948–50.
Springer-Verlag.
Kaplan, HB 2003. Desarrollo multicelular y motilidad deslizante en Myxococcus Parkhill, J., et al. 2000. La secuencia del genoma del patógeno transmitido por alimentos
xanto actual Opinión Microbiol. 6:572–77. Campy lobacter jejuni revela secuencias hipervariables. Naturaleza 403: 655–68.
McGrath, PT; Vollier, P.; y McAdams, HH 2004. Marcando el ritmo: Mecanismos que vinculan Shapiro, L.; Mc Adams, HH; y Losick, R. 2002. Generando y explotando po
la progresión del ciclo celular de Caulobacter con eventos celulares macroscópicos. laridad en bacterias. Ciencia 298: 1942–46.
actual Opinión Microbiol. 7:192–97. Zhu, J.; Oger, PM; Schrammeijer, B.; Hooykaas, PJ; Farrand, SK; y
Miroshnichenko, ML; Haridon, SL; Schumann, P.; Muelles.; Bonch Osmolovskaya, EA; Winans, SC 2000. La base de la tumorigénesis de la agalla de la corona. J. Bacteriol. 182:
3885–95.
Jeanthon, C.; y Stackenbrandt, E. 2004. Caminibac

23Bacterias:
El bajo GC
Gram positivos
Los lactobacilos son indispensables para la industria alimentaria y láctea. Ellos no son
considerados patógenos.
AVANCE
• El Manual de Bergey agrupa filogenéticamente las bacterias grampositivas en 23.1 INTRODUCCIÓN GENERAL
dos grupos principales: las bacterias grampositivas de bajo GC
y las bacterias grampositivas de alto GC. Esta clasificación es Históricamente, las bacterias grampositivas se agruparon sobre la base de
basado principalmente en secuencias de ácido nucleico en lugar de fenotípicas su forma general (p. ej., bastones, cocos o irregulares) y su capacidad para
semejanza. formar endosporas. Sin embargo, el análisis de las relaciones filogenéticas
• Los grampositivos de bajo GC contienen (1) clostridios y parientes, dentro de las bacterias grampositivas por comparación de
(2) los micoplasmas y (3) los bacilos y lactobacilos. Entre los clostridios se Las secuencias de ARNr 16S muestran que se dividen en un grupo de GC
encuentran formadores de dosporas, cocos y bastoncillos. bajo y un grupo de GC alto, o grupo actinobacteriano (figura 23.1).
y grupos de bacilos. Así, la posesión común de una estructura compleja como La edición más reciente del Manual de Bacteriología Sistemática de Bergey
una endospora no indica necesariamente un parentesco cercano entre los ubica a las bacterias grampositivas de bajo GC en el volumen 3.
géneros. Este volumen describe más de 1.300 especies ubicadas en 255 géneros.
• La estructura de los peptidoglicanos varía entre los diferentes grupos en formas La pared celular bacteriana: paredes celulares Gram-positivas (sección 3.6)
que suelen ser útiles en su identificación.
Las bacterias grampositivas de bajo GC se ubican en el filo Firmicutes y
• La mayoría de las bacterias grampositivas son inofensivas y de vida libre se dividen en tres clases: Clostridia, Mollicutes y Bacilli. El filo Firmicutes es
saprofitos, pero la mayoría de los grupos principales incluyen patógenos de grande y complejo; eso
humanos, otros animales y plantas. Algunas bacterias grampositivas son tiene 10 órdenes y 34 familias. Los micoplasmas, clase Mollicutes,
muy importante en la industria alimentaria y láctea. también se consideran grampositivos bajos en GC a pesar de su falta de
una pared celular. Los datos de ARN ribosomal indican que los micoplasmas
están estrechamente relacionados con los lactobacilos. La figura 23.2
muestra las relaciones filogenéticas entre algunas de las bacterias de este capítulo.
3 de la segunda edición de Bergey's Manual of Systematic
Este capítulo examina Esta
Bacteriología. muchas de las
edición delbacterias
Manual deque se encuentran
Bergey divide el en volumen
bacterias grampositivas filogenéticamente entre los volúmenes 3 y
23.2 CLASE MOLLICUTES (LOS MICOPLASMAS)
4. Aquí nos enfocamos en los micoplasmas, Clostridium y sus parientes, y los La clase Mollicutes tiene cinco órdenes y seis familias. Los géneros mejor
bacilos y lactobacilos. estudiados se encuentran en los órdenes Mycoplasmatales (My coplasma,
Ureaplasma), Entomoplasmatales (Entomoplasma,
Observamos, después de haber cultivado la bacteria a través de una serie de cultivos de este tipo, cada cultivo fresco siendo
inoculado con una gotita del cultivo anterior, que el último cultivo de la serie fue capaz de multiplicar
y actuar en el cuerpo de los animales de tal manera que los animales desarrollaron ántrax con todos los síntomas
típico de este afecto.
Tal es la prueba, que consideramos impecable, de que el ántrax es causado por esta bacteria.
-Luis Pasteur
572 Capítulo 23 Bacterias: los grampositivos de bajo GC
Crenarchaeota característicamente pequeño con menos de 1000 genes; parece que no se

arqueas
Euryarchaeota requieren muchos genes para mantener una existencia de vida libre. Mis coplasmas
Aquificae pueden ser saprofitos, comensales o parásitos, y muchos son patógenos de
Thermatogae plantas, animales o insectos. Perspectivas de los genomas microbianos: análisis
cloroflexi genómico de microbios patógenos (sección 15.8)

Metabólicamente, los micoplasmas son incapaces de sintetizar una serie de
Deinococcus-Thermus
macromoléculas. Además de requerir esteroles, también necesitan ácidos grasos,
Gram-positivos bajos en G + C vitaminas, aminoácidos, purinas y pirimidinas. Algunos producen ATP por la vía de
Embden-Meyerhof y la fermentación del ácido láctico. Otros catabolizan la arginina o
Gram-positivos de GC alto + la urea para generar ATP. La vía de las pentosas fosfato parece ser funcional en al
menos algunos micoplasmas; ninguno parece tener el ciclo completo del ácido
tricarboxílico.
proteobacteria
Los micoplasmas están muy extendidos y pueden aislarse de animales, plantas,
el suelo e incluso pilas de compost. Aunque sus complejos requisitos de crecimiento
pueden dificultar su crecimiento en cultivos puros (axénicos), alrededor del 10% de los
espiroquetas
cultivos de células de mamíferos en uso probablemente estén contaminados con
cianobacterias
micoplasmas. Esto interfiere seriamente con los experimentos de cultivo de tejidos. En
Planctomycetes y Chlamydiae
los animales, los micoplasmas colonizan las membranas mucosas y las articulaciones
clorobi
y, a menudo, se asocian con enfermedades de las vías respiratorias y urogenitales.
Bacteroidetes
Los micoplasmas causan varias enfermedades importantes en el ganado, por ejemplo,
pleuroneumonía bovina contagiosa en ganado (M. mycoides), enfermedad respiratoria
Figura 23.1 Relaciones filogenéticas entre los procariotas. crónica en pollos (M. gallisepticum) y neumonía en cerdos (M. hyopneumoniae). M.
Se destacan las bacterias grampositivas de bajo GC. pneumoniae causa neumonía atípica primaria en humanos. Ureaplasma urealyticum
se encuentra comúnmente en el tracto urogenital humano. Ahora se sabe que está
asociado con el parto prematuro de los recién nacidos, así como con la meningitis y la
Mesoplasma, Spiroplasma), Acholeplasmatales (Acholeplasma) y Anaeroplasmatales neumonía neonatales. Los espiroplasmas se han aislado de insectos, garrapatas y
(Anaeroplasma, Asteroleplasma). una variedad de plantas. Provocan enfermedades en plantas de cítricos, repollo,
La Tabla 23.1 resume algunas de las principales características de estos géneros. brócoli, maíz, abejas melíferas y otros huéspedes. Los artrópodos a menudo pueden
actuar como vectores y transportar los espiroplasmas entre las plantas. Es probable
Los miembros de la clase Mollicutes se denominan comúnmente my coplasmas. que se descubran más moluscos patógenos a medida que mejoren las técnicas para
Aunque evolucionaron a partir de ancestros con paredes celulares grampositivas, su detección, aislamiento y estudio.
ahora carecen de paredes celulares y no pueden sintetizar precursores de
peptidoglicano. Por lo tanto, son resistentes a la penicilina pero susceptibles a la lisis
por choque osmótico y tratamiento con detergente. Debido a que están limitados
únicamente por una membrana plasmática, estos procariotas son pleomórficos y su
forma varía desde organismos esféricos o en forma de pera, de alrededor de 0,3 a 0,8 1. ¿Qué característica morfológica distingue a los micoplasmas? ¿En qué
m de diámetro, hasta filamentos ramificados o helicoidales (figura 23.3). Algunos clase se encuentran? ¿Por qué se han colocado con las bacterias
micoplasmas (p. ej., M. genitalium) tienen una estructura terminal especializada que grampositivas de bajo GC?
se proyecta desde la célula y les da forma de matraz o de pera. Esta estructura ayuda 2. ¿Para qué podrían usar los micoplasmas los esteroles?
a adherirse a las células eucariotas. Se encuentran entre las bacterias más pequeñas 3. ¿Cuál cree que podría ser la relación entre el tamaño del micoplasmagenoma
capaces de autorreproducirse. Aunque la mayoría son inmóviles, algunos pueden y los requisitos de crecimiento?
deslizarse por superficies cubiertas de líquido. La mayoría de las especies difieren de 4. ¿Dónde se encuentran los micoplasmas en los animales? Enumere varios animales y hu
la gran mayoría de las bacterias en que requieren esteroles para su crecimiento, que enfermedades del hombre causadas por ellos. ¿Qué tipos de organismos suelen infectar
se incorporan a la membrana plasmática. Aquí los esteroles pueden facilitar la los espiroplasmas?
estabilidad osmótica. La mayoría son anaerobios facultativos, pero unos pocos son
anaerobios obligados. Cuando crecen en agar, la mayoría de las especies forman
colonias con apariencia de “huevos fritos” porque crecen en la superficie del agar en 23.3 ESTRUCTURA DE PEPTIDOGLICANOS Y
el centro mientras se extienden hacia afuera en la superficie en los bordes de la colonia
ENDOSPORAS
(figura 23.4). Sus genomas se encuentran entre los más pequeños que se encuentran
en los procariotas, con un tamaño de 0,7 a 1,7 Mb (tabla 23.1); el contenido de GC Tradicionalmente, las bacterias grampositivas se han clasificado en gran medida sobre
varía de 23 a 41%. Se han secuenciado los genomas completos de los patógenos la base de características observables, como la forma celular, la agrupación y
humanos Mycoplasma genitalium, M. pneumoniae y Ureaplasma urealyticum . Estos disposición de las células, la presencia o ausencia de endosporas, las relaciones de
genomas son oxígeno, los patrones de fermentación y la química de los peptidoglucanos. Debido a
la importancia de pep
Estructura de peptidoglucanos y endosporas 573
Figura 23.2 Relaciones filogenéticas en el Phylum Firmicutes

“Lactobacillales” (Lactobacillus, Enterococcus, Streptococcus) (grampositivos de bajo GC). (a) Los principales grupos filogenéticos
con géneros representativos entre paréntesis. Cada tetraedro del árbol
representa un grupo de organismos relacionados; sus bordes
horizontales muestran las ramas más cortas y más largas del grupo.
Mollicutes (Mycoplasma, Spiroplasma) La ramificación múltiple en el mismo nivel indica que el orden de
ramificación relativo de los grupos no se puede determinar a partir de
los datos. Las comillas alrededor de algunos nombres indican que no
Planococcaceae, Caryophanaceae
(Planococcus, Caryophanon) son nombres taxonómicos formalmente aprobados. ( b ) Las relaciones
de algunas especies basadas en la fecha de secuencia del ARNr 16S.
Bacillaceae (Bacillus)
Fuente: Proyecto de base de datos ribosomal.
“Estafilococos” (Staphylococcus)
“Sporolactobacilaceae” (Sporolactobacillus)
“Listeriaceae” (Listeria)
Brevibacillus, Paenibacillus
Ammoniphilus, Aneurinibacillus, Oxalófago
“Alicyclobacillaceae” (Alicyclobacillus, Pasteuria)
“Termoactinomycetaceae” (Thermoactinomyces)
Lactococcus lactis
“Lachnospiraceae” (Lachnospira) Streptococcus pyogenes
steotococos neumonia
Acoleplasma mínimo
micoplasma pneumoniae
“Peptostreptococcaceae” (Peptostreptococcus) espiroplasma apis
enterococo faecalis
“Eubacteriaceae” (Eubacterium) Leuconostoc lactis
Lactobacillus acidophilus
Listeria monocytogenes
Clostridiaceae (Clostridium, Sarcina) Caryophanon latum
estafilococo aureus
Staphylococcus epidermidis
Haloanaerobiales (Haloanaerobium) Bacilo megaterium
Bacillus subtilis
“Acidaminococcaceae” (Veillonella) Paenibacillus macerans
Peptococcaceae (Peptococcus, Desulfotomaculum) Aliciclobacillus acidocaldarius
Sintrofomonadáceas (Syntrophomonas) Epulopiscio
Moorella Veillonella parvula
Sulfobacillus Desulfotomaculum nigrificans
Heliobacterium fasciatum
Termoanaerobacter, Termoanaerobio Clostridium botulinum
Clostridium tetani
(a) (B)
tidoglicano y endosporas en estas bacterias, discutimos brevemente las cadenas se entrecruzan mediante puentes interpeptídicos que
estos dos componentes importantes. contienen L-aminoácidos monocarboxílicos o glicina, o ambos (figura
La estructura del peptidoglicano varía considerablemente entre los 23.5b). Muchos géneros, incluidos Staphylococcus, Streptococcus,
diferentes grupos de grampositivos. Muchas bacterias grampositivas (y Micrococcus, Lactobacillus y Leuconostoc , tienen este tipo de peptidoglicano.
la mayoría de las gramnegativas) tienen una estructura de peptidoglicano El género Streptomyces grampositivo alto en GC y varios otros géneros
en la que el ácido meso- diaminopimélico en la posición 3 está actinobacterianos han reemplazado el ácido meso-diaminopimélico con
directamente unido a través de su grupo amino libre con el carboxilo ácido L,L-diaminopimélico en la posición 3 y tienen un residuo de glicina
libre de la D-alanina terminal de una cadena peptídica adyacente . como puente interpeptídico. Las corinebacterias patógenas de las
figura 23.5a). Estos incluyen Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, plantas (también grampositivas con alto contenido de GC) proporcionan
Mycobacterium y Nocardia. En otras bacterias grampositivas, la lisina otro ejemplo de variación de peptidoglicano. En algunas de estas
sustituye al ácido diaminopimélico en la posición 3 y las subunidades peptídicasbacterias,
del glicano
el puente interpeptídico conecta las posiciones 2 y 4 del péptido
Cuadro 23.1 Propiedades de algunos miembros de la clase Mollicutes
No. de genoma
Especies Contenido de GC Tamaño esterol Otro
Género Reconocidas (% en moles) (Megabyte) Requisito Habitat Características distintivas
acoleplasma 13 26–36 1,50–1,65 No Vertebrados, algunos Crecimiento óptimo a

plantas e insectos 30–37 °C
anaeroplasma 4 29–34 1,50–1,60 sí Bovino u ovino Anaerobios sensibles

panza al oxígeno
Asteroleplasma 1 40 1.50 No Bovino u ovino Anaerobios sensibles

panza al oxígeno
entomoplasma 5 27–29 0,79–1,14 sí insectos, plantas Crecimiento óptimo, 30°C

mesoplasma 12 27–30 0,87–1,10 No insectos, plantas Crecimiento óptimo, 30°C;
crecimiento sostenido en
medio sin suero
solo con 0.04%
entre 80
micoplasma 104 23–40 0,60–1,35 sí humanos, animales Crecimiento óptimo

generalmente a 37°C
espiroplasma 22 25–30 0,94–2,20 sí insectos, plantas Filamentos helicoidales;

crecimiento óptimo en
30–37°C
Ureaplasma 6 27–30 0,75–1,20 sí humanos, animales Hidrólisis de urea
Adaptado de JG Tully, et al., “Taxonomía revisada de la clase Mollicutes” en International Journal of Systematic Bacteriology, 43(2):378–85. Copyright © 1993 Sociedad Americana de Microbiología, Washington,
DC Reimpreso con autorización.
(a) (B)
Figura 23.3 Los micoplasmas. Micrografías electrónicas de Mycoplasma pneumoniae que muestran su naturaleza pleomórfica. (a) Una transmisión
micrografía electrónica de varias células (47,880). La celda central tiene forma de matraz o de pera debido a su estructura terminal. (b) Un escaneo
micrografía electrónica (26.000).
subunidades en lugar de 3 y 4 (figura 23.5c). Debido a que el puente de bacterias grampositivas como Staphylococcus aureusin , en las que casi
marea interpéptico conecta los grupos carboxilo del ácido glutámico y la ala todos los ácidos murámicos están entrecruzados con otros. Estas variantes
nueve, en el puente se usa un diaminoácido como la ornitina. Muchos estructurales suelen ser características de grupos particulares y son
se encuentran otras variaciones en la estructura del peptidoglicano, incluyendo por lo tanto, taxonómicamente útil. Síntesis de azúcares y polisacáridos:
otras estructuras entre puentes y grandes diferencias en la frecuencia Síntesis de peptidoglicano (sección 10.4)
de entrecruzamiento entre cadenas de glicanos. Los bacilos y la mayoría de Las endosporas bacterianas se ensamblan dentro de la diferenciación
las bacterias gram negativas tienen menos enlaces cruzados entre cadenas que célula madre, que se lisa para liberar la espora libre. esporas maduras
Estructura de peptidoglucanos y endosporas 575
tienen una estructura compleja con una capa externa, una corteza y una
membrana de esporas interna que rodea al protoplasto (figura 23.6).
Contienen ácido dipicolínico, son muy resistentes al calor y pueden
permanecer latentes y viables durante períodos muy prolongados (Microbial
Tidbits 23.1). Aunque las bacterias formadoras de endosporas se
distribuyen ampliamente, son principalmente habitantes del suelo. Las
condiciones del suelo son a menudo extremadamente variables, y las
endosporas son una ventaja obvia para sobrevivir a los períodos de sequía
o privación de nutrientes. En un experimento bien documentado, las esporas
se mantuvieron viables durante unos 70 años. También se ha informado
que se han recuperado esporas viables de abejas dominicanas encerradas
en ámbar de 25 a 40 millones de años. Si se confirma este resultado, ¡las
Figura 23.4 Colonias de micoplasma. Tenga en cuenta la apariencia
esporas de un ancestro de Bacillus sphaericus han sobrevivido durante más de 25 m
de "huevo frito", las colonias se tiñeron antes de fotografiar (100).
Figura 23.5 Ejemplos representativos de NAG NAM NAG
estructura de peptidoglicano. (a) El

1 L-Ala NAG = N-acetilglucosamina
peptidoglicano con un entrecruzamiento directo entre
NAM = ácido N-acetilmurámico
las posiciones 3 y 4 de las subunidades peptídicas, que
2 D-Glu D-Ala 4 COOH
está presente en la mayoría de las bacterias
gramnegativas y muchas grampositivas. (b) El 3 meso-DAP meso-DAP 3 CH H2N
peptidoglicano con lisina en la posición 3 y un puente
interpeptídico. El soporte contiene seis puentes típicos: 4 D-Ala D-Glu 2 (CH2)3
(1) Staphylococcus aureus, (2) S. epidermidis, (3)

L-ala 1
Micrococcus roseus y Streptococcus thermophilus, (4) CH H2N
Lactobacillus viridescens, (5) Streptococcus salvarius y

(a) ROCÍN NAM NAG COOH
(6) Leuconostoc cremoris. Las flechas indican la
polaridad de los enlaces peptídicos que corren en la meso-DAP
dirección C a N. (c) Un ejemplo del puente cruzado que
NAG NAM NAG
se extiende entre las posiciones 2 y 4 de Corynebacterium
poinsettiae. El interpuente contiene un D-diaminoácido 1 L-Ala 1 Gly5 D-Ala 4
como la ornitina, y la L-homoserina (L-Hsr) está en la
2 L-ala Gly4–5 3
posición 3. Las abreviaturas y estructuras de los 2 D-Glu L-Lys
aminoácidos en la figura se encuentran en el apéndice I.
3 L-Lis 3 D-Glu 2
L-Ala3
4 D-Ala 4 L-ala L-Ser L-ala 1
5 L-Jue gly NAG NAM NAG
6 L-Ser L-Ala2
(B)
NAG NAM NAG

NH2
1 gly
CH2
2 D-Glu D-Orn D-Ala 4 CH2

ÿ
3 L-Hsr L-Hsr 3
CH2
4 (D-Ala) D-Glu 2
HC NH2
gly 1 COOH
NAG NAM NAG L-ornitina

(C)
abrigo exterior
abrigo interior
Corteza
Centro
nucleoide
(a) (B)
Figura 23.6 Endosporas bacterianas. (a) Una sección transversal coloreada de una célula de Bacillus subtilis en proceso de esporulación. El óvalo en el
el centro es una endospora que está casi madura; cuando alcanza la madurez, la célula madre se lisará para liberarlo . (b) Una sección transversal de un
Espora de B. subtilis que muestra la corteza y las capas de cubierta de esporas que rodean el núcleo. La endospora en (a) mide 1,3 m; la espora en (b) mide 1,2 m.
23.1 Esporas en el espacio
Durante la discusión del siglo XIX sobre la cuestión de la Incluso más recientemente Peter Weber y J. Mayo Greenberg de la
evolución de la vida, la hipótesis de la panspermia se hizo popular. De acuerdo Universidad de Leiden en los Países Bajos han estudiado el efecto de
con esta hipótesis, la vida no evolucionó a partir de la materia inorgánica de la muy alto vacío, baja temperatura y radiación UV en la supervivencia
Tierra sino que llegó como esporas bacterianas viables que habían escapado de esporas de Bacillus subtilis. Sus datos sugieren que las esporas dentro de
de otro planeta Más recientemente, el astrónomo británico Fred una nube molecular interestelar podrían sobrevivir entre 4,5 y 45
Hoyle ha revivido la hipótesis basándose en su estudio de la absorción de millones de años Las nubes moleculares se mueven a través del espacio a velocidades
radiación por el polvo interestelar. Hoyle sostiene que el polvo suficientes para transportar esporas entre sistemas solares en este período de tiempo.
Los granos eran inicialmente células bacterianas viables que se han degradado, Aunque estos resultados no prueban la hipótesis de la panspermia, sí
y que el comienzo de la vida en la Tierra se debió a la llegada de esporas son consistentes con la posibilidad de que las bacterias puedan viajar
bacterianas que habían sobrevivido a su viaje por el espacio. entre planetas capaces de albergar vida.
se han realizado informes posteriormente; todos estos estudios tendrán que

23.4 CLASE CLOSTRIDIA
ser reconfirmado. Por lo general, las endosporas se observan a la luz
microscopio después de la tinción de esporas o por microscopía de contraste de fase de La clase Clostridia tiene una variedad muy amplia de bacterias grampositivas
células sin teñir. También se pueden detectar calentando un cultivo a 70 distribuidas en tres órdenes y 11 familias. Las características de algunos de los
a 80 °C durante 10 minutos, seguido de incubación en el medio de crecimiento adecuado géneros más importantes se resumen en
medio. Porque solo las endosporas y algunos termófilos tabla 23.2. Las relaciones filogenéticas se muestran en la figura 23.2.
sobrevivir tal calentamiento, el crecimiento bacteriano confirma tentativamente su Con mucho, el género más grande es Clostridium. Incluye obligatoriamente
presencia. La endospora bacteriana (sección 3.11); Preparación y tinción de Bacterias anaerobias, fermentativas, grampositivas que forman en dosporas. El
especímenes (sección 2.3) género contiene más de 100 especies en varios
Hay dos clases de bacterias formadoras de endosporas de GC bajo: grupos filogenéticos distintos. El género Clostridium puede ser
Clostridia (los clostridios y parientes) y Bacilli (los subdividido en varios géneros en el futuro.
bacilos y lactobacilos) (figura 23.2). Cada clase incluye ambos Los miembros del género Clostridium tienen un gran impacto práctico.
bastones y cocos y se discuten aquí. Debido a que son anaeróbicos y forman un ambiente resistente al calor
clase clostridios 577
Tabla 23.2 Características de Clostridia y Parientes
Dimensiones (m) y Contenido de GC Oxígeno (% mol)

Género Morfología Parentesco Otras Características Distintivas
Clostridium 0,3–2,0 1,5–20; en forma de varilla, a menudo 22–55 anaeróbico No realiza reducción disimilatoria de sulfato;
pleomórficas, inmóviles o peritricosas generalmente
quimioorganotróficos, fermentativos,
y catalasa negativa; forma ovalada o
endosporas esféricas
Desulfotomaculum 0,3–1,5 3–9; bastones rectos o curvos, flagelos 37–50 anaeróbico Reduce el sulfato a H2S, forma
peritricos o polares endosporas subterminales a terminales;
se tiñe de gram negativo pero tiene pared
de gram positivo, catalasa negativa
heliobacteria 1,0 4–10; varillas que se doblan con frecuencia, 52–55 anaeróbico Fotoheterotrófico con
motilidad deslizante bacterioclorofila g; gramo de manchas
negativo pero tiene pared grampositiva,
algunos forman endosporas
Veillonella 0,3–0,5; cocos en pares, cadenas cortas y masas; 36–43 anaeróbico Tiñe Gram negativo; piruvato y lactato
inmóvil fermentado, pero no
carbohidratos; acetato, propionato,
CO2 y H2 producidos a partir de lactato;
parásitos en la boca, intestinos y
vías respiratorias de los animales
dosporas, son responsables de muchos casos de deterioro de los alimentos,

incluso en alimentos enlatados. C. botulinum es el agente causal del botulismo.
Los clostridios a menudo pueden fermentar aminoácidos para producir ATP.
oxidando un aminoácido y usando otro como receptor de electrones en un
proceso llamado reacción de Stickland (ver figura 9.19).
Esta reacción genera amoníaco, sulfuro de hidrógeno, ácidos grasos,
y aminas durante la descomposición anaeróbica de proteínas.
Estos productos son responsables de muchos olores desagradables que surgen
durante la putrefacción. Enfermedades transmitidas por los alimentos y el agua: Botulismo
(sección 38.4)
Varios clostridios producen toxinas y son enfermedades importantes
agentes C. tetani (figura 23.7) es el agente causante del tétanos,
y C. perfringens, de gangrena gaseosa e intoxicación alimentaria. El análisis
de la secuencia del genoma de C. per fringens revela que el microbio posee C. tetani
los genes para la fermentación con producción de gas, pero carece de ellos .
genes que codifican enzimas para el ciclo TCA o una cadena respiratoria. Figura 23.7 Clostridium tetani con esporas redondas
No obstante, C. perfringens tiene un tiempo de duplicación extraordinario y terminales.
de sólo 8 a 10 minutos en el huésped humano. clostridios también
son industrialmente valiosos; por ejemplo, se utiliza C. acetobutylicum
fabricar butanol en algunos países. izado por la presencia de bacterioclorofila g. Tienen un centro de reacción tipo
Desulfotomaculum es otro anaeróbico, formador de endosporas. fotosistema I como las bacterias verdes del azufre, pero
género. A diferencia de Clostridium, reduce el sulfato y el sulfito a sulfuro de no tienen membranas fotosintéticas intracitoplasmáticas; pigmentos
hidrógeno durante la respiración anaeróbica (figura 23.8). Aunque tiñe están contenidos en la membrana plasmática. como Desulfotomaculum,
gramnegativos, los estudios de microscopía electrónica han tienen una pared celular de tipo grampositivo con menos de lo normal
demostró que Desulfotomaculum tiene una pared celular de tipo grampositivo. contenido de peptidoglicano, y se tiñen de gram negativos. Algunas
Esto concuerda con los estudios filogenéticos que lo ubican con el bajo heliobacterias forman endosporas. Fototrofia (sección 9.12)
GC grampositivos. La ubicación filogenética de los osos del género Veillonella
Las heliobacterias son un excelente ejemplo de la diversidad en mencionando Aunque estas bacterias se tiñen de gramnegativas, las de Bergey
esta clase. Los géneros Heliobacterium y Heliophilum son un Manual los ubica en la familia Acidominococcaceae, en el or der Clostridiales.
grupo de bacterias anaerobias y fotosintéticas inusuales Los miembros del género Veillonella son anaeróbicos,
23.5 CLASE BACILO

La segunda edición del Manual de Bergey recoge una gran variedad
de bacterias grampositivas en una clase, bacilos, y dos órdenes,
Bacillales y Lactobacillales. Estos órdenes contienen 17 familias y más de 70
géneros grampositivos que representan cocos, cocos y bacilos formadores de

endosporas y bacilos no esporulados. los
primero se describirá la biología de algunos miembros del orden Bacillales ; luego
se considerarán importantes representantes del orden Lacto bacillales . Las
relaciones filogenéticas
entre algunos de estos organismos se muestran en la figura 23.1,
y las características de los géneros seleccionados se resumen en
tabla 23.3.
Orden Bacillales
Figura 23.8 Desulfotomaculum. Desulfotomaculum
El género Bacillus, familia Bacillaceae, es el más grande del orden (figura 23.9).
acetoxidans con esporas; contraste de fase (2.000).
El género contiene bacilos quimioheterótrofos grampositivos, formadores de
endosporas, que suelen ser móviles con
cocos quimioheterótrofos que varían en diámetro desde alrededor de 0.3 a flagelos peritricos. Es aeróbico, o a veces facultativo, y
2,5 metros Por lo general, son diplococos (a menudo con sus lados adyacentes catalasa positiva. Muchas especies una vez incluidas en este género han
aplanado), pero pueden existir como células individuales, grupos o cadenas. Todos se ha colocado en otras familias y géneros en base a los datos de secuencia de
tienen requisitos nutricionales complejos y fermentan sustancias rRNA. Por ejemplo, el género Alicyclobacillus contiene
como carbohidratos, lactato y otros ácidos orgánicos, y amino bacilos acidófilos, esporosos, grampositivos o gramvariables que
ácidos para producir gas (CO2 y, a menudo, H2) más una mezcla de volátiles tienen ácidos grasos alicíclicos con anillos de 6 o 7 carbonos en sus
ácidos grasos. Son parásitos de los homeotérmicos (de sangre caliente) membranas Los miembros son aerobios o facultativos y tienen un contenido de
animales GC de aproximadamente 51 a 60%. Otro género, Paenibacillus
Como muchos grupos de bacterias anaerobias, los miembros de este [Latín paene, casi, y bacillus], contiene bacterias grampositivas
género no han sido estudiados a fondo. Algunas especies forman parte de bastones que son facultativos, móviles por flagelos peritricos, tienen
la biota normal de la boca, el tracto gastrointestinal y el endosporas elipsoidales y esporangios hinchados, producen ácido
tracto urogenital de humanos y otros animales. Por ejemplo, Veil lonella abunda en y a veces gas de la glucosa y varios azúcares, y tienen
la superficie de la lengua y en la placa dental de los seres humanos y puede un contenido de GC de 40 a 54%. Algunos ejemplos de organismos
aislarse de la vagina. Veillonella es inusual que anteriormente estaban en el género Bacillus son Paenibacillus
crecer bien con ácidos orgánicos como lactato, piruvato y alvei, P. macerans y P. polymyxa.
malato sin poder fermentar la glucosa y otros carbohidratos. Se adapta bien al Bacillus subtilis, la especie tipo del género, es la más
entorno bucal porque puede utilizar bacteria grampositiva bien estudiada. Es un organismo modelo útil para el estudio
el ácido láctico producido a partir de carbohidratos por los estreptococos de la regulación génica, la división celular, el quórum
y otras bacterias orales. Veillonella se encuentran en infecciones de la detección y diferenciación celular. Su genoma de 4.2 Mb fue
cabeza, los pulmones y el tracto genital femenino, pero su papel preciso en uno de los primeros genomas en ser completamente secuenciado. genoma
dichas infecciones no está claro. la secuenciación revela una serie de elementos interesantes. Por ejemplo, varias
familias de genes se han ampliado por gen
duplicación; la familia más grande codifica transportadores ABC,
1. Describe, en un diagrama, la composición química y la estructura del
que son el tipo de proteína más frecuente en B. subtilis. Ahí
peptidoglicano que se encuentra en bacterias gramnegativas y muchas grampositivas
hay 18 genes que codifican factores sigma. Recuerde que el uso de
géneros
subunidades sigma alternativas de la ARN polimerasa es una forma de
2. ¿En qué se diferencian las paredes celulares de los bacilos y la mayoría de las bacterias gramnegativas?
qué bacterias regulan la expresión génica. En este caso, muchos de
de las de bacterias grampositivas como S. aureus con respecto a
los factores sigma gobiernan la esporulación y otras respuestas a
frecuencia de entrecruzamiento?
condiciones estresantes. El genoma contiene genes para el catabolismo de muchas
3. ¿Qué es una endospora bacteriana? Dé sus propiedades más importantes y dos
fuentes de carbono diversas y la síntesis de antibióticos.
maneras de demostrar su presencia. ¿Por qué cree que los informes de esporas viables
Hay al menos 10 profagos integrados o remanentes de
de fuente antigua han sido recibidos con escepticismo?
profagos. Secreción de proteínas en procariotas (sección 3.8); Sistemas de
4. Dar las características generales de Clostridium, Desulfotomaculum, el él
regulación global: Esporulación en Bacillus subtilis (sección 12.5); Genómica
liobacterias y Veillonella. Discuta brevemente por qué cada uno es interesante o de
comparada (sección 15.6)
importancia práctica.
Muchas especies de Bacillus son de considerable importancia.
5. ¿Cuál crees que es el significado evolutivo del descubrimiento de un
Algunos producen los antibióticos bacitracina, gramicidina y
género fotosintético dentro de las bacterias grampositivas de bajo GC?
polimixina. B. cereus (figura 23.9b) causa algunas formas de alimentos
clase bacilos 579
Cuadro 23.3 Características de los miembros de la clase Bacilli
Dimensiones (m) y Contenido de GC Genoma Oxígeno (mol%) Otro

Género Morfología Tamaño (Mb) Relación Caracteristicas distintivas
Bacilo 0,5–2,5 1,2–10; 32–69 4.2–5.4 Aeróbico o Forma endosporas; catalasa

varillas rectas, facultativo positivo; quimioorganotrófico
peritricous
Cariofán 1,5–3,0 10–20; 41–46 Dakota del Norte* Aerobio Acetato única fuente importante
bacilos multicelulares de carbono; catalasa positiva;
con extremos las células de los tricomas tienen
redondeados, peritricos más ancho que largo, los tricomas
puede estar en cadenas cortas
enterococo 0,6–2,0 0,6–2,5; 34–42 3.2 Facultativo Fermenta carbohidratos a lactato sin gas;
células esféricas u requerimientos nutricionales complejos;
ovoides en pares o catalasa negativa; ocurre ampliamente,
cadenas cortas, sin particularmente en las heces
esporas, a veces móviles
material
Lactobacillus 0,5–1,2 1,0–10; 32–53 1.9–3.3 Facultativo o Fermentativo, al
generalmente largos, microaerofílico menos la mitad del producto final
bastoncillos regulares, sin es lactato; requiere medios ricos y
esporas, rara vez móviles complejos; catalasa y
citocromo negativo
Lactococcus 0,5–1,2 0,5–1,5; 38–40 2.4 Facultativo Quimioorganotrófico con
células esféricas u metabolismo fermentativo;
ovoides en pares o lactato sin gas producido; catalasa
cadenas cortas, sin negativa; requerimientos
esporas, inmóviles nutricionales complejos; en
productos lácteos y vegetales
Leuconostoc 0,5–0,7 0,7–1,2; células 38–44 Dakota del Norte Facultativo Requiere carbohidratos
esféricas u ovoides, en fermentables y un medio rico en
pares o cadenas; inmóvil nutrientes para crecer; la fermentación
y no esporoso produce lactato, etanol y gas;
catalasa y
citocromo negativo
Estafilococo 0,9–1,3; células esféricas 30–39 2.5–2.8 Facultativo Quimioorganotrófico con metabolismo
que ocurren solas y en tanto respiratorio como fermentativo,
grupos irregulares, generalmente catalasa positivo,
inmóviles y sin esporas asociado a piel y mucosas de
vertebrados
Estreptococo 0,5–2,0; esférico o 34–46 1.8–2.2 Facultativo Fermentativa, produciendo

células ovoides en pares principalmente lactato y sin gas;
o cadenas, inmóviles y sin catalasa negativa; comúnmente
esporas atacan los glóbulos rojos (- o -
hemólisis); complejo
Requerimientos nutricionales;
comensales o parásitos en
animales
termoactinomyces 0,4 a 1,0 de diámetro; 52,0–54,8 Dakota del Norte Aerobio Generalmente termofílico; cierto
El micelio ramificado las endosporas se forman
y septado se parece al individualmente en las hifas; numerosos
de los actinomicetos. en heno en descomposición, materia vegetal y
compost
*Nd: No determinado; genoma aún no secuenciado.

Figura 23.9 Bacilo. (a) B. antracis,

esporas elípticas y centrales (1.600).
(b) B. cereus teñido con SYTOX Green
tinción de ácido nucleico y visto por
epifluorescencia y diferencial
microscopía de contraste de interferencia.Las células
que brillan en verde están muertos.
(a) Bacilo anthracis (b) B. cereus
Figura 23.10 El Parasporal

Cuerpo. (a) Una micrografía electrónica
de una célula esporulante de B. sphaericus
que contiene un cuerpo paraesporal justo
debajo de la endospora. (b) El
cuerpo paraesporal cristalino en un
mayor aumento. el cristal es
rodeado de dos capas
sobre (flechas).
(a) (B)
envenenamiento y puede infectar a los humanos. B. anthracis es el causante cuerpo poral contiene proteínas tóxicas para las larvas de mosquitos y puede
agente de la enfermedad ántrax, que puede afectar tanto a los animales de granja ser útil en el control de los mosquitos que transmiten la malaria
como a los seres humanos. Varias especies se utilizan como insecticidas. Para parásito Plasmodium. Enfermedades zoonóticas: ántrax (sección 38.6); Microbios
Por ejemplo, B. thuringiensis y B. sphaericus forman un cristal de proteína sólido, como productos: Bioplaguicidas (sección 41.8)
el cuerpo paraesporal, junto a sus endosporas durante la formación de esporas El género Thermoactinomyces ha sido históricamente clasificado
(figura 23.10). La B. thuringiensis como un actinomiceto porque forma filamentos que diferencian
El cuerpo paraesporal contiene toxinas proteicas que matan a más de 100 de hifas de sustrato asociadas al suelo a hifas aéreas que crecen hacia arriba.
especies de polillas al disolverse en el intestino alcalino de las orugas Sin embargo, el análisis filogenético lo ubica con el bajo
y destruir el epitelio. Las proteínas de la toxina solubilizadas Microbios GC del orden Bacillales, familia Thermoactinomy cetaceae. Su
son escindidos por proteasas del intestino medio en polipéptidos tóxicos más pequeños contenido de GC (52–55% mol) es considerablemente más bajo
que atacan las células epiteliales del intestino. El contenido intestinal alcalino que la de las actinobacterias. Este género es termofílico y
escapa a la sangre, causando parálisis y muerte. Uno de estos crece entre 45 y 60°C; forma esporas individuales tanto en su micelio aéreo como
Se ha demostrado que las toxinas forman poros en la membrana plasmática. en el sustrato (figura 23.11) y su secuencia de ARNr 16S
de las células del insecto objetivo. Estos canales permiten monovalente sugiere una relación con el género Bacillus. Thermoactino myces se encuentra
cationes como el potasio para pasar. B. thuringiensis comúnmente en pajares húmedos, pilas de compost y
Los genes de la toxina han sido manipulados para hacer una variedad de plantas otros hábitats de alta temperatura. A diferencia de las exosporas de actinomicetos,
modificadas genéticamente resistentes a las plagas. El B. sphaericus paras Thermoactinomyces (figura 23.11b) forma verdaderas endosporas que son
clase bacilos 581
Figura 23.11 Thermoactinomyces. a) Thermoactinomyces vulgaris

micelio aéreo con endosporas en desarrollo en las puntas de las hifas. (b) Delgado
Sección de una endospora de T. sacchari. E, exosporium; OC, capa exterior de esporas; CI, interior
capa de esporas; CO, corteza; IM, membrana interna de la espora; C, núcleo.
0,1 micras
CI
CO
YO SOY
jefe
10 micras mi
(a) (B)
resistente al calor; pueden sobrevivir a 90°C durante 30 minutos. Ellos son

se forman dentro de las hifas y parecen tener una estructura típica de endosporas,
incluida la presencia de calcio y ácido dipicolínico. Ther moactinomyces vulgaris
(figura 23.11a) de pajares, grano
silos de almacenamiento y pilas de compost es un agente causante de la
pulmón, una enfermedad alérgica del sistema respiratorio en agricultura
trabajadores Recientemente se encontraron esporas de Thermoactinomyces vulgaris
recuperado del lodo de un lago de Minnesota y se encontró que era viable
después de unos 7.500 años de latencia.
Uno de los géneros más inusuales en este orden es Caryophanon.
Esta bacteria grampositiva es estrictamente aeróbica, catalasa positiva y móvil por
flagelos peritricos. Su hábitat normal es la vaca.
estiércol. La morfología del cariofanón es distintiva. celdas individuales
tienen forma de disco (1,5 a 2,0 m de ancho por 0,5 a 1,0 m de largo) y
se unen para formar filamentos llamados tricomas que son alrededor de 10 a 20
m de largo (figura 23.12).
La familia Staphylococcaceae contiene cuatro géneros, el más
importante de los cuales es el género Staphylococcus. miembros de este
género son cocos grampositivos, inmóviles, anaerobios facultativos
que suelen formar racimos irregulares (figura 23.13). Son catalasa positivas, oxidasa
negativas, fermentan glucosa y tienen ácido teicoico en sus paredes celulares. Los
estafilococos son normalmente
Figura 23.12 Morfología del cariofanón. Cariofán
asociado con la piel, las glándulas de la piel y las membranas mucosas de
animales de sangre caliente. latum en una cadena de tricomas. Tenga en cuenta el lado apilado de las celdas en forma de disco
Los estafilococos son responsables de muchas enfermedades humanas. S. al lado; contraste de fase (3.450).
epidermidis es un residente común de la piel que a veces es responsable de

endocarditis e infecciones de pacientes con resistencia reducida (p. ej., infecciones entre los patógenos resistentes a los antibióticos más amenazantes
de heridas, infecciones quirúrgicas, infecciones del tracto urinario). conocido. La vancomicina se considera el "fármaco de último recurso" y las
infecciones, perforaciones en el cuerpo). S. aureus es el humano más importante infecciones causadas por S. aureus resistente a la vancomicina generalmente
patógeno estafilocócico y causa furúnculos, abscesos, heridas en infecciones, no se puede tratar con antibioticoterapia. ¿Cómo fue que S. aureus
neumonía, síndrome de shock tóxico y otras enfermedades. evolucionar rápidamente la capacidad de derrotar a una amplia gama de antibióticos?
Cepas de Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina (MRSA; El análisis comparativo del genoma de las cepas de MRSA con las cepas de S.
anteriormente meticilina) y S. aureus resistente a la vancomicina son aureus sensibles a los antibióticos muestra que este microbio es muy hábil para
bajo paso libre de agua, iones y moléculas pequeñas. S. aureus

generalmente crece en las membranas nasales y la piel; también se encuentra
en el tracto gastrointestinal y urinario de animales de sangre caliente. Enfermedades
de contacto directo: enfermedades estafilocócicas (sección 38.3)
S. aureus es una de las principales causas de intoxicación alimentaria. Por
ejemplo, hace varios años en Texas, 1.364 niños de primaria estaban
enfermo por el pollo contaminado. Un trabajador del servicio de alimentos responsable
porque el deshuesado del pollo era la fuente más probable de contaminación. Después
de deshuesar el pollo, se enfrió a temperatura ambiente.
temperatura antes de su posterior procesamiento y refrigeración. Esto proporcionó
tiempo suficiente para que la bacteria creciera y produjera toxinas. Este caso no es
raro. Las aves de corral representan aproximadamente
una cuarta parte de todos los casos de intoxicación alimentaria bacteriana en los que el
se conoce la fuente de envenenamiento y debe cocinarse y manipularse
con cuidado.
(a)
Listeria, familia Listeriaceae, es otra de importancia médica
género en este orden. El género contiene bacilos cortos que son aeróbicos o
facultativos, catalasa positivos y móviles por peritrichous
flagelos Está ampliamente distribuido en la naturaleza, particularmente en la materia
en descomposición. Listeria monocytogenes es un patógeno de humanos y
otros animales y causa listeriosis, una importante infección alimentaria.
Enfermedades transmitidas por los alimentos y el agua: Listeriosis (sección 38.4)
Orden Lactobacillales
Muchos miembros del orden Lactobacillales producen ácido láctico
como su principal o único producto de fermentación y a veces son
denominadas colectivamente bacterias del ácido láctico (BAL). Estreptococo,
Enterococcus, Lactococcus, Lactobacillus y Leuconostoc son
todos los miembros de este grupo. Las bacterias del ácido láctico no producen esporas.
y generalmente inmóvil. Normalmente dependen de la fermentación del azúcar para
obtener energía. Carecen de citocromos y obtienen energía por
fosforilación a nivel de sustrato en lugar de por transporte de electrones
y fosforilación oxidativa. Nutricionalmente, son exigentes.
y muchas vitaminas, aminoácidos, purinas y pirimidinas deben
(B)
suministrarse debido a sus capacidades biosintéticas limitadas.
Las bacterias del ácido láctico generalmente se clasifican como anaerobias facultativas,
Figura 23.13 Estafilococo. (a) Staphylococcus aureus, pero algunos las clasifican como anaerobias aerotolerantes. La influencia de los factores
Frotis con tinción de Gram (X1.500). (b) Staphylococcus aureus cocos ambientales en el crecimiento: Concentración de oxígeno (sección 6.5);
dispuestos como racimos de uvas; electrón de exploración de color mejorado Fermentaciones (sección 9.7)
micrografía Cada celda tiene aproximadamente 1 m de diámetro.
El género más grande en este orden es Lactobacillus con alrededor
100 especies. Lactobacillus contiene bacilos que no producen esporas y, en ocasiones,
adquiriendo elementos genéticos de otras bacterias. De hecho, los elementos genéticos los cocobacilos que carecen de catalasa y citocromos suelen ser
grandes y móviles parecen codificar tanto la resistencia a los antibióticos anaerobios facultativos o microaerofílicos, producen ácido láctico como
factores y proteínas que aumentan la virulencia. Perspectivas de microbios su principal o único producto de fermentación, y tienen requerimientos nutricionales
genomas: análisis genómico de microbios patógenos (sección 15.8) complejos (figura 23.14). Los lactobacilos llevan a cabo una
Uno de los factores de virulencia producidos por S. aureus es la enzima coagulasa, fermentación homoláctica utilizando la vía de Embden-Meyerhof
que provoca la coagulación del plasma sanguíneo. Crecimiento y o una fermentación heteroláctica con la vía de las pentosas fosfato. Crecen de manera
patrones de hemólisis en agar sangre también son útiles para identificar óptima en condiciones ligeramente ácidas, cuando
estos estafilococos (figura 23.18). Se ha determinado la estructura de staphylococ cal el pH está entre 4,5 y 6,4. El género se encuentra en la superficie de las plantas.
-hemolisina. La toxina lisa una célula por y en productos lácteos, carne, agua, aguas residuales, cerveza, frutas y muchos
formando canales llenos de disolvente en su membrana plasmática. Los monómeros otros materiales. Los lactobacilos también son parte de la flora normal de
de toxinas solubles en agua se unen a la superficie celular y se asocian el cuerpo humano en la boca, el tracto intestinal y la vagina. Ellos
entre sí para formar poros. Los canales hidrofílicos entonces al por lo general no son patógenos.
clase bacilos 583
(a) Lactobacillus acidophilus (b) L. lactis c) L. bulgaricus
Figura 23.14 Lactobacillus. (a) L. acidophilus (1.000). (b) L. lactis. Tinción de Gram (1.000). c) L. bulgaricus; contraste de fase ( 600).
Lactobacillus es indispensable para la industria alimenticia y láctea. Los

lactobacilos se utilizan en la producción de alimentos vegetales fermentados 10 micras
(chucrut, encurtidos, ensilaje), bebidas (cerveza, vino,

jugos), pan de masa agria, queso suizo y otros quesos duros, yogur,
y salchicha. El yogur es probablemente el fermentado más popular.
producto lácteo en los Estados Unidos. En la producción comercial,
la leche sin grasa o baja en grasa se pasteuriza, se enfría a 43°C o menos,
inoculado con Streptococcus thermophilus y Lactobacillus
bulgaricus. S. thermophilus crece más rápidamente al principio y vuelve la leche
anóxica y débilmente ácida. L. bulgaricus entonces acidifica aún más la leche.
Actuando juntas, las dos especies
fermentar casi toda la lactosa a ácido láctico y dar sabor al yogur
con diacetilo (S. thermophilus) y acetaldehído (L. bulgari cus). Las frutas o los
sabores de frutas se pasteurizan por separado y luego
combinado con el yogur. Microbiología de los alimentos fermentados: Leches
fermentadas (sección 40.6)
Al menos una especie, L. plantarum, se vende comercialmente como
agente probiótico que puede proporcionar algunos beneficios para la salud
consumidor. Por otro lado, algunos lactobacilos también crean problemas. A Figura 23.15 Leuconostoc. Leuconostoc mesenteroides;
veces son responsables del deterioro de la cerveza, la leche, micrografía de contraste de fase.
y carne porque sus productos finales metabólicos aportan sabores y olores
indeseables.
Leuconostoc, familia Leuconostocaceae, contiene facultativo producción industrial de dextrano. Las especies de Leuconostoc están involucradas en
cocos grampositivos, que pueden ser alargados o elípticos y el deterioro de los alimentos y tolerar altas concentraciones de azúcar tan bien que
dispuestos en pares o cadenas (figura 23.15). Falta de leuconostocs crecen en almíbar y son un problema importante en las refinerías de azúcar.
catalasa y citocromos y llevan a cabo la fermentación heteroláctica convirtiendo Enterococcaceae (Enterococcus) y Streptococcaceae
la glucosa en D-lactato y etanol o ácido acético (Streptococcus, Lactococcus) son familias importantes de cocos quimioheterótrofos,
mediante la vía de la fosfocetolasa (figura 23.16). Ellos mesófilos, sin esporas, grampositivos. En
Se puede aislar de plantas, ensilaje y leche. El género se utiliza en práctica, a menudo se distinguen principalmente en función de las propiedades
la producción de vino, en la fermentación de vegetales como la col (chucrut; véase fenotípicas, como las relaciones de oxígeno, la disposición de las células,
la figura 40.19) y los pepinos (encurtidos), y la presencia de catalasa y citocromos, y peptidoglicano
en la fabricación de suero de leche, mantequilla y queso. L. mesen teroides estructura. El más importante de estos géneros es Streptococcus,
sintetiza dextranos a partir de sacarosa y es importante en que es facultativamente anaeróbico y catalasa negativo. los
Glucosa era, Enterococcus y Lactococcus. Algunas características principales de

atp estos tres géneros estrechamente relacionados se resumen en la tabla
23.4. La tabla 23.5 enumera algunas propiedades de géneros seleccionados.
ADP
Muchas características se utilizan para identificar estos cocos. Una de
sus características taxonómicas más importantes es la capacidad de lisar
Glucosa 6-fosfato
NAD+
eritrocitos cuando crecen en agar sangre, un medio de agar que contiene un
5% de sangre de oveja o caballo (figura 23.18). En - hemólisis, se forma
NADH + H+ una zona verdosa de hemólisis incompleta de 1 a 3 mm alrededor de la
colonia; -La hemólisis se caracteriza por una zona de aclaramiento o lisis
ácido 6-fosfoglucónico completa sin un cambio de color marcado. Además, a veces se observan
NAD+ otros patrones hemolíticos. Los estudios serológicos también son muy
importantes en la identificación porque estos géneros a menudo tienen
NADH + H+ CO2
antígenos de pared celular distintivos. Los antígenos polisacáridos y de ácido
teicoico que se encuentran en la pared celular o entre la pared y la membrana
Ribulosa 5-fosfato
plasmática se utilizan para identificar estos cocos, en particular los
estreptococos hemolíticos patógenos, mediante el sistema de agrupación
de Lancefield. Las pruebas bioquímicas y fisiológicas son esenciales en la
identificación (p. ej., preferencias de temperatura de crecimiento, patrones
Xilulosa 5-fosfato de fermentación de carbohidratos, producción de acetoína, reducción de la
leche de tornasol, tolerancia al cloruro de sodio y sales biliares, y la capacidad
de hidrolizar arginina, esculina, hipurato y almidón). La sensibilidad a la
bacitracina, las sulfonamidas y la optoquina (etilhidrocupreína) también se
usan para identificar especies particulares. Algunas de estas técnicas están
Gliceraldehído 3-fosfato Fosfato de acetilo
siendo reemplazadas por enfoques genéticos moleculares como la tipificación
2ADP NAD+
CoA
de secuencias multilocus (MSLT). Microbiología clínica e inmunología
Pi
2ATP NADH + H+ (capítulo 35); Técnicas para determinar la taxonomía y filogenia microbiana:
Características moleculares (sección 19.4)
piruvato Acetil-CoA
NADH + H+ NADH + H+ Los miembros de los tres géneros tienen una importancia práctica
considerable. Los estreptococos piógenos suelen ser patógenos y están
NAD+ NAD+ CoA asociados con la formación de pus (piogénico significa que produce pus).
lactato
La mayoría de las especies producen hemólisis en agar sangre y forman
acetaldehído
cadenas de células. El principal patógeno humano en este grupo es S.
NADH + H+
pyogenes, que causa faringitis estreptocócica, glomerulonefritis aguda y
NAD+ fiebre reumática. El hábitat normal de los estreptococos orales es la cavidad
oral y el tracto respiratorio superior de humanos y otros animales. En otros
Etanol aspectos, los estreptococos orales no son necesariamente similares. S.
pneumoniae es hemolítica y crece como pares de cocos (figuras 23.17c y
Figura 23.16 Fermentación heteroláctica y vía de la 23.18b). Se asocia con neumonía lobular y otitis media (inflamación del oído
fosfocetolasa. La vía de la fosfocetolasa convierte la glucosa en lactato, medio). S. mutans está asociado con la formación de caries dental. Los
etanol y CO2. enterococos como E. faecalis son residentes normales del tracto intestinal
de humanos y la mayoría de los otros animales. E. faecalis es un patógeno
oportunista que puede causar infecciones del tracto urinario y endocarditis.
Los estreptococos y sus parientes cercanos, los enterococos y los A diferencia de los estreptococos, los enterococos crecerán en cloruro de
lactococos, se presentan en pares o cadenas cuando se cultivan en medios sodio al 6,5%. Son agentes importantes en la transferencia horizontal de
líquidos (figura 23.17), no forman endosporas y, por lo general, no son móviles. genes de resistencia a los antibióticos. Los lactococos fermentan azúcares a
Todos fermentan azúcares con ácido láctico, pero sin gas, como producto ácido láctico y pueden crecer a 10°C pero no a 45°C. L. lactis se usa
principal, es decir, llevan a cabo la fermentación homoláctica. Algunas ampliamente en la producción de suero de leche y queso porque puede
especies son anaeróbicas en lugar de facultativas. cuajar la leche y agregar sabor a través de la síntesis de diacetilo y otros
El género Streptococcus es grande y complejo. Estas bacterias se han productos.
agrupado en tres grupos: estreptococos piógenos, estreptococos orales y
otros estreptococos. Muchas bacterias ubicadas originalmente dentro del Enfermedades transmitidas por el aire: enfermedades estreptocócicas (sección 38.1); Infecciones
género se han trasladado a otros dos géneros. dentales (sección 38.7); Microbiología de alimentos fermentados (sección 40.6)
clase bacilos 585
a) Streptococcus pyogenes (b) S. agalactiae c) S. pneumoniae
Figura 23.17 Estreptococo. (a) Streptococcus pyogenes (900). (b) Streptococcus agalactiae, la causa del estreptococo del grupo B
infecciones Tenga en cuenta las largas cadenas de células; Micrografía electrónica de barrido con color realzado (4.800). (c) Streptococcus pneumoniae (900).
Cuadro 23.4 Clasificación de los estreptococos, enterococos y lactococos

Características Estreptococo enterococo Lactococcus
Arreglo predominante (más común primero) cadenas, pares pares, cadenas Pares, cadenas cortas
Cápsula/capa de limo
Habitat Boca, vías respiratorias Tracto gastrointestinal Productos lácteos
Crecimiento a 45°C Variable
Crecimiento a 10°C Variable Generalmente
Crecimiento en caldo NaCl al 6,5% Variable
Crecimiento a pH 9,6 Variable
Hemólisis Grupo Por lo general (piógeno) u (oral) ,, Generalmente
serológico (Lancefield) Variable (A–O) Por lo general D Generalmente N
%mol GC 34–46 34–42 38–40
Especies representativas Estreptococos piógenos S. E. faecalis L. lactis
agalactiae S. E. faecium L. rafinolactis

pyogenes S. equi S. E. avium L. plantarum
dysgalactiae E. durans
Estreptococos orales E. gallinarum
S. gordonii
S. salvarius
Sanguis
S. oralis
S. pneumoniae
S. mitis
S. mutans
Otros estreptococos
S. bovis
S. termófilo
Cuadro 23.5 Propiedades de estreptococos y parientes seleccionados
Estreptococos piógenos S. Estreptococos orales enterococos lactococos
Características pyogenes S. pneumoniae S. sanguis S. mutans E. faecalis L. lactis
a
Crecimiento a 10°C
Crecimiento a 45°C D D
Crecimiento al 6,5 % de NaCl
Crecimiento a pH 9.6
Crecimiento con 40% de bilis D D
-hemólisis D
-hemólisis
hidrólisis de arginina D
hidrólisis de hipurato D
Mol% GC de ADN 35–39 30–39 40–46 36–38 34–38 39
Tamaño del genoma (Mb) 1.8 2.2 Dakota del Norte* 2.0 3.2 2.3
Modificado del Manual de Bacteriología Sistemática de Bergey, vol. 2, editado por PHA Sneath, et al. Derechos de autor © 1986 Williams y Wilkins, Baltimore, MD. Reimpreso con permiso.
a Símbolos: , 90% o más de cepas positivas; , 10% o menos de cepas positivas; d, 11–89% de las cepas son positivas.
*
Nd: No determinado; genoma aún no secuenciado
(a) (B) (C)
Figura 23.18 Patrones hemolíticos estreptocócicos y estafilocócicos. (a) Streptococcus pyogenes en agar sangre, ilustrando
-hemólisis. (b) Streptococcus pneumoniae en agar sangre, que ilustra -hemólisis. (c) Staphylococcus epidermidis en agar sangre sin
hemólisis.
5. Enumera las principales propiedades del género Lactobacillus. ¿Por qué es importante en
1. Enumere las principales propiedades del género Bacillus. ¿Qué impactos prácticos
las industrias alimentaria y láctea?
tiene en la sociedad? Defina cuerpo paraesporal.
6. Describa las principales características distintivas de los siguientes taxones: Strep
2. Describa brevemente el género Thermoactinomyces, con especial énfasis en
tococcus, Enterococcus, Lactococcus y Leuconostoc.
sus características únicas. ¿Qué enfermedad causa?
7. ¿Qué importancia práctica tiene Leuconostoc? ¿Qué son los ácidos lácticos?
3. ¿Qué es lo que distingue a la morfología de Caryophanon? ¿Puedes pensar en
¿bacterias?
una ventaja selectiva que puede conferir la morfología de Thermoactinomyces o
8. ¿Qué son -hemólisis, -hemólisis y el agrupamiento de Lancefield?
Caryophanon?
¿sistema?
4. Describa el género Staphylococcus. ¿Cómo se diferencia el patógeno S. aureus?
9. ¿Cuál es la diferencia entre los estreptococos piógenos y orales?
de los residentes comunes de la piel. epidermidis, y ¿dónde se encuentra normalmente?
Aprende más 587
Resumen
23.1 Introducción general C. Las heliobacterias son bacterias anaerobias fotosintéticas con bacterioclorofila g. Algunos
forman endosporas. D. La familia Veillonellaceae contiene cocos anaerobios que tiñen
un. Tradicionalmente, las bacterias grampositivas se clasificaban de acuerdo con características
como la forma general, la estructura de peptidoglicano, la posesión de endosporas y su gramnegativos.
respuesta a la tinción ácido-resistente. B. Según el análisis de ARNr 16S, las bacterias Algunos son parásitos de vertebrados.
grampositivas ahora se dividen en grupos de GC baja y GC alta; este sistema se utiliza en la

edición actual del Manual de Bergey. 23.5 Clase Bacilos
un. La clase Bacilli se divide en dos órdenes: Bacillales y Lactobacillales.

C. La segunda edición del Manual de Bergey ubica a los grampositivos de bajo GC en el filo B. El género Bacillus contiene bacilos grampositivos aerobios y facultativos, catalasa positivos,
Firmicutes, que contiene tres clases: Clostridia, Mollicutes y Bacilli (tablas 23.1–23.3 y figura formadores de endosporas, quimioheterótrofos, que suelen ser móviles y tienen flagelos
23.2). peritricos (figura 23.9). Las especies de Bacillus sintetizan antibióticos e insecticidas y
causan intoxicación alimentaria y ántrax.
23.2 Clase Mollicutes (Los micoplasmas) C. Thermoactinomyces es un termófilo grampositivo que forma un micelio y endosporas verdaderas
un. Los micoplasmas se tiñen de gramnegativos porque carecen de paredes celulares y no pueden (figura 23.11). Provoca reacciones alérgicas y conduce al pulmón del granjero.
sintetizar precursores de peptidoglucano. Muchas especies requieren esteroles para crecer.
Son una de las bacterias más pequeñas capaces de autorreproducirse y, por lo general, D. Los miembros del género Staphylococcus son cocos grampositivos, inmóviles y anaerobios
crecen en agar para dar a las colonias una apariencia de “huevo frito” (figura 23.4). facultativos que forman grupos irregulares (figura 23.13). Crecen en la piel y las membranas
mucosas de los animales de sangre caliente y algunos son patógenos humanos importantes.
23.3 Estructura de peptidoglicano y endosporas
un. La estructura del peptidoglicano a menudo difiere entre grupos en formas taxonómicamente mi. Varios géneros importantes como Lactobacillus, Listeria y Caryophanon contienen bacilos
útiles. La mayoría de las variaciones están en el aminoácido 3 de la subunidad peptídica o grampositivos regulares, sin esporas. Lactobacillus lleva a cabo la fermentación del ácido
en el puente interpeptídico (figura 23.5). B. Las endosporas resisten la desecación y el calor; láctico y se utiliza ampliamente en las industrias alimentaria y láctea. F. Leuconostoc lleva a
son utilizados por las bacterias para sobrevivir cabo la fermentación heteroláctica utilizando la vía de la fosfocetolasa (figura 23.16) y participa
duras condiciones, especialmente en el suelo (figura 23.6). en la producción de productos vegetales fermentados, suero de leche, mantequilla y queso.
23.4 Clase Clostridios gramo. Los géneros Streptococcus, Enterococcus y Lactococcus contienen cocos grampositivos
dispuestos en pares y cadenas que suelen ser facultativos y realizan fermentación homoláctica
un. Los miembros del género Clostridium son bacilos grampositivos anaerobios que forman
(tablas 23.4 y 23.5). Algunas especies importantes son el coco piógeno S. pyogenes, los
endosporas y no llevan a cabo la reducción disimilatoria del sulfato (figura 23.7).
estreptococos orales S. pneumoniae y S. mutans, el enterococo E. faecalis y el lactococo L.
Son responsables del botulismo, el tétanos, el deterioro de los alimentos y la putrefacción.
lactis (figura 23.17).
B. Desulfotomaculum es un género anaeróbico formador de endosporas que reduce el sulfato a
sulfuro durante la respiración anaeróbica (figura 23.8).
Términos clave
fermentación heteroláctica 583 Staphylococcus aureus resistente a la micoplasmas 572

-hemólisis 584
-hemólisis 584 bacterias del ácido láctico (BAL) 582 meticilina (MRSA) 581 cuerpo paraesporal 580
coagulasa 582 Sistema de agrupación Lancefield 584

3. Explicar la facilidad con la que se pueden aislar clostridios anaeróbicos del suelo y otros nichos
1. Muchas bacterias de bajo GC son parásitas. La dependencia de un host puede ser consecuencia
del bajo contenido de GC. Desarrolla este concepto. generalmente aeróbicos.
2. ¿Cómo se podría determinar si el genoma de M. genitalium es el más pequeño compatible con

una existencia de vida libre?
Aprende más
Amesz, J. 1995. Las heliobacterias, un nuevo grupo de bacterias fotosintéticas. J. Pho tochem. Himmelreich, R.; Hilbert, H.; Plagens, H.; Pirkl, E.; Li, B.-C.; y Hermann, R.
Fotobiol. B 30:89–96. 1996. Análisis de secuencia completa del genoma de la bacteria My coplasma pneumoniae.
Ácidos Nucleicos Res. 24(22):4420–49.
Cunningham, MW 2000. Patogénesis de las infecciones por estreptococos del grupo A: Clin.
Microbiol. Rev. 13(3):470–511. Holden, MT; Feil, EJ; et al., 2004. Genomas completos de dos cepas clínicas de Staphylo coccus
Vidrio, JI; Lefkowitz, EJ; Vidrio, JS; Heiner, CR; Chen, EY; y Casell, G. aureus : evidencia de la rápida evolución de la virulencia y la resistencia a los medicamentos.
proc. nacional Academia ciencia EE.UU. 101: 9786–91.
H. 2000. La secuencia completa del patógeno de la mucosa Ureaplasma ure alyticum.
Naturaleza 470: 757–62.
Holt, JG, editor en jefe. 1994. Manual de Bacteriología Determinativa de Bergey. Lambert, B. y Peferoen, M. 1992. Promesa insecticida de Bacillus thuringien sis: hechos y misterios
9ª ed. Baltimore, Maryland: Williams & Wilkins. sobre un bioplaguicida exitoso. biociencia
42(2):112–22.
Johnson, EA 2000. Clostridios. En Enciclopedia de microbiología, 2ª ed., vol. 1, j.
Lederberg, editor en jefe, 834–39. San Diego: Prensa Académica. Nicholson, WL; Munakata, N.; Horneck, G.; Melosh, HJ; y Setlow, pág. 2000.
Resistencia de las endosporas de Bacillus a ambientes terrestres y extraterrestres extremos.
Karlín, S.; Theriot, J.; y Mrazek, J. 2004. Análisis comparativo de expresión génica.
Micro. mol. Biol. 64(3):548–72 .
entre los genomas positivos para GC bajos. proc. nacional Academia ciencia EE.UU. 101: 6182–87.
Vreeland, RH; Rosenweig, WD; y Powers, DW 2000. Aislamiento de una bacteria halotolerante de
Kleerevezem, M., et al. 2003. Secuencia completa del genoma del plan Lactobacillus
Tarum WCFS1. proc. nacional Academia ciencia EE.UU. 100: 1990–95. 250 millones de años a partir de un cristal de sal primario. Naturaleza 407:
897–900.
Kunst, F., et al. 1997. La secuencia completa del genoma del bac grampositivo
terio Bacillus subtilis. Naturaleza 390:249–56.

24Bacterias:
El alto GC
Gram positivos
Frankia forma esporas inmóviles y es simbiótica con varias plantas superiores.

como alisos.
AVANCE
• El Manual de Bergey clasifica los actinomicetos y otros de alto GC 24.1 PROPIEDADES GENERALES
bacterias grampositivas que utilizan datos de ARNr 16S. Se colocan en el
DE LOS ACTINOMICETOS
phylum Actinobacteria, que es un grupo grande y complejo con
una clase y seis órdenes. Los actinomicetos son un grupo fascinante de microorganismos.
• La morfología y disposición de las esporas, la química de la pared celular, Son la fuente de la mayoría de los antibióticos que se utilizan en la medicina
y los tipos de azúcares presentes en los extractos celulares son particularmente hoy en día. También producen metabolitos que se utilizan como anticancerígenos.
importantes en la taxonomía de los actinomicetos y se utilizan para dividir estos medicamentos, antihelmínticos (por ejemplo, ivermectina, que se administra a
bacterias en diferentes grupos. perros para prevenir el gusano del corazón), y medicamentos que suprimen el sistema inmunológico
• Los actinomicetos tienen un impacto práctico considerable porque sistema en pacientes que han recibido trasplantes de órganos. Este aspecto
juegan un papel importante en la mineralización de la materia orgánica en el suelo práctico de los actinomicetos está muy ligado a su
y son la fuente principal de la mayoría de los antibióticos sintetizados naturalmente. modo de crecimiento. Como las mixobacterias, las bacterias prótesis,
Los géneros Corynebacterium, Mycobacterium y Nocardia
y varios otros microbios descritos en capítulos anteriores, el
incluyen patógenos humanos importantes.
los actinomicetos pasan por un ciclo de vida complejo. El ciclo de vida de
muchos actinomicetos incluye el desarrollo de filamentosos
células, llamadas hifas, y esporas. Cuando crecen en un sustrato sólido como
suelo o agar, los actinomicetos desarrollan una ramificación
describe las bacterias grampositivas de alto GC (figura 24.1). red de hifas. Las hifas crecen tanto en la superficie de la
Capítulo 24, el último de en
Se encuentran loselcapítulos
volumende estudio
4 de sobre bacterias,
la segunda edición dede sustrato y dentro de él para formar una densa estera de hifas denominada
Manual de Bergey. Muchas de estas bacterias se llaman actinomicetos. sustrato micelio. Los tabiques generalmente dividen las hifas en células largas.
Los actinomicetos son bacterias aerobias grampositivas, pero se distinguen (20 my más largos) que contienen varios nucleoides. En muchos micetos
porque tienen hifas filamentosas que se diferencian para producir esporas actino, las hifas del sustrato se diferencian en hifas que crecen hacia arriba
asexuales. Muchos se parecen mucho a los hongos en general. para formar un micelio aéreo que se extiende por encima del
morfología. Presumiblemente, esta semejanza resulta en parte de la adaptación sustrato. Es en este momento que los compuestos médicamente útiles son
a los mismos hábitats. En este capítulo, primero resumimos los formado. Debido a que la fisiología del actinomiceto ha cambiado
Características generales de los actinomicetos. Los representantes se de células vegetativas en crecimiento activo a este tipo de célula especial,
describen a continuación, con énfasis en la morfología, taxonomía, reproducción estos compuestos a menudo se denominan metabolitos secundarios.
e importancia general. Los actinomicetos[s., actinomiceto] Las hifas aéreas forman esporas de paredes delgadas tras la tabicación.
son un grupo diverso, pero comparten muchas propiedades. (figura 24.2). Estas esporas se consideran exosporas porque
no se desarrollan dentro de una célula madre como las endosporas de
Los actinomicetos son muy importantes desde el punto de vista médico. . . . Pueden ser una molestia, como cuando
descomponer los productos de caucho, crecer en el combustible de aviación, producir sustancias olorosas que contaminan el agua
o crecen en plantas de tratamiento de aguas residuales donde forman espesas espumas que obstruyen. . los . . A diferencia de,
actinomicetos son los productores de la mayoría de los antibióticos.

—HA Lechevalier y MP Lechevalier
590 Capítulo 24 Bacterias: los grampositivos de alto GC
Bacilo y Clostridium. Si las esporas están ubicadas en un rango de esporas, pueden particularmente resistentes al calor pero soportan bien la desecación, por lo que
llamarse esporangiosporas. Las esporas pueden tienen un valor adaptativo considerable. La mayoría de los actinomicetos no son
varían mucho en forma (figura 24.3). Como la formación de esporas en otros móviles, y las esporas se dispersan por el viento o se adhieren a los animales;
bacterias, la esporulación de actinomicetos suele ser en respuesta a la privación de de esta manera pueden encontrar un nuevo hábitat que les proporcione
nutrientes. Sin embargo, la mayoría de las esporas de actinomycete no son par nutrientes En los pocos géneros móviles, la motilidad se limita a las esporas
flageladas.
La composición de la pared celular de los actinomicetos varía mucho entre los
Crenarchaeota
arqueas diferentes grupos y tiene una importancia taxonómica considerable. cuatro
Euryarchaeota Los principales tipos de paredes celulares se pueden distinguir de acuerdo con tres
Aquificae características de la composición y estructura de los peptidoglicanos: el aminoácido
Thermatogae en la posición 3 de la cadena lateral del tetrapéptido, la presencia de glicina en los
cloroflexi puentes interpeptídicos y el contenido de azúcar de peptidoglucano (tabla 24.1;
Deinococcus-Thermus véase también la figura 23.5). Extractos de células enteras de actinomicetos con
Los tipos de pared II, III y IV también contienen azúcares característicos que son
Gram-positivos bajos en G + C útil en la identificación (tabla 24.2). Algunos otros taxonómicamente
propiedades valiosas son la morfología y el color del micelio
Gram-positivos de GC alto +
y esporangios, las características superficiales y la disposición de las esporas, la
porcentaje de GC en el ADN, la composición de fosfolípidos de la célula
membranas y resistencia al calor de las esporas. Por supuesto, las secuencias de
proteobacteria
ARNr 16S han resultado valiosas. Varios genomas de actinomicetos han
sido secuenciado incluyendo Mycobacterium tuberculosis, M. leprae,
Streptomyces coelicolor y S. avermitilis. La pared celular bacteriana
espiroquetas (sección 3.6); Peptidoglicano y estructura de endosporas (sección 23.3)
cianobacterias Los actinomicetos también tienen una gran importancia ecológica. Ellos
Planctomycetes y Chlamydiae son principalmente habitantes del suelo y están muy ampliamente distribuidos.
clorobi Pueden degradar una enorme cantidad y variedad de productos orgánicos.
Bacteroidetes compuestos y son extremadamente importantes en la mineralización de

materia orgánica. Aunque la mayoría de los actinomicetos son microorganismos de
vida libre, unos pocos son patógenos de humanos, otros animales y
Figura 24.1 Relaciones filogenéticas entre procariotas. Se destacan las
algunas plantas.
bacterias grampositivas de alto GC.
Cadena de
esporas
agar
superficie
Figura 24.2 Una colonia de actinomicetos. La sección transversal de una colonia de actinomicetos con hifas vivas (azul-verde) y muertas (blancas).
Se muestra el micelio sustrato y el micelio aéreo con cadenas de esporas.
Propiedades generales de los actinomicetos 591
0,5 micras
(B)
(a)
1,0 micras
(C)
Figura 24.3 Ejemplos de

Esporas de Actinomycete como se ve en el
Microscópio electrónico escaneando.
(a) Esporas de Pilimelia columellifera en ratón

pelo (520).(b) Micromonospora echinospora.
(c) Una cadena de esporas de estreptomicetos peludos.
(d) Microbispora rosea, esporas emparejadas en
5 micras
hifas.(e) Cadena de esporas aéreas de
Kitasatosporia setas.
(D) (mi)
Tabla 24.1 Tipos de pared celular de actinomicetos
diaminopimélico Glicina en
Tipo de pared celular isómero ácido Puente interpeptídico Azúcares Característicos Géneros representativos
I L, L NAa Nocardioides, Streptomyces

II meso N/A Micromonospora, Pilimelia, Actinoplanes
tercero meso N/A Actinomadura, Frankia
IV meso Arabinosa, galactosa Saccharomonospora, Nocardia
a
NA, ya sea no aplicable o sin azúcares de diagnóstico.
Ha sido claro durante algún tiempo que algunos de los fenotípicos bacterias con una composición de bases de ADN por encima de aproximadamente 50
rasgos utilizados tradicionalmente para determinar la taxonomía de los actinomicetos %mol GC). Todos se ubican en el filo Actinobacteria y
no siempre encaja con los datos de la secuencia del ARNr 16S. filogenético clasificados como se muestra en la figura 24.4. El filo es grande y muy
Los análisis basados en secuencias de ARNr 16S se utilizan para clasificar los complejo; contiene una clase (Actinobacteria), cinco subclases, seis órdenes, 14
bacterias grampositivas de alto GC (es decir, aquellas bacterias grampositivas subórdenes y 44 familias. en este sistema
Tabla 24.2 Patrones de azúcar de células enteras de actinomicetos
Tipos de patrón de azúcara Azúcares Característicos Géneros representativos
A Arabinosa, galactosa Nocardia, Rhodococcus, Saccharomonospora

B Maduroseb Actinomadura, Streptosporangium, Dermatophilus
C Ninguna Thermomonospora, Actinosynnema, Geodermatophilus
D Arabinosa, xilosa Micromonospora, actinoplanos
a
Los patrones de azúcar característicos están presentes solo en los tipos de pared II-IV, aquellos actinomicetos con ácido meso-diaminopimélico.
B
Madurose es 3-O-metil-D-galactosa.
Familias subórdenes Pedidos
Micromonosporaceae Micromonosporineae
Frankiaceae Acidothermaceae
Frankineae
Sporichthyaceae Geodermatophilaceae Microsphaeraceae
Pseudonocardineae Streptomicineae
Pseudonocardiaceae Streptomycetaceae Nocardiaceae Gordoniaceae
Corynebacterineae
Mycobacteriaceae Dietziaceae Tsukamurellaceae Corynebacteriaceae Intrasporangiaceae

Actinomycetales
Dermabacteraceae Jonesiaceae
Brevibacteriaceae
Dermatophilaceae Micrococcineae
Micrococcaceae Promicromonosporaceae Cellulomonadaceae
Microbacteriaceae Actinomycetaceae Actinomicinae
Propionibacterineae Streptosporangineae
Glycomycineae
Propionibacteriaceae Nocardioidaceae Streptosporangiaceae Thermomonosporaceae Nocardiopsaceae Glycomycetaceae Bifidobacteriaceae Acidimicrobiaceae Coriobacteriaceae
esferobacteráceas
Rubrobacteraceae Bifidobacteriales Acidimicrobiales Coriobacteriales Sphaerobacterales Rubrobacterales
5%
(a)
Figura 24.4 Clasificación del Phylum Actinobacteria. ( a ) Se muestran las relaciones filogenéticas entre órdenes, subórdenes y familias basadas en datos de rRNA
16S. La barra representa 5 sustituciones de nucleótidos por 100 nucleótidos. Fuente: (a) E. Stackebrandt, FA Rainey y NLWard-Rainey. Propuesta de un nuevo sistema de
clasificación jerárquica, Actinobacteria, classis nov. En t. Sistema J. Bacteriol.
47(2):479–491, 1997. Figura 3, pág. 482.
592
Suborden Micrococcineae 593
Corynebacterineae (Corynebacterium, Sporichthya polymorpha Geodermatophilus obscurus

micobacterias, nocardia ) frankia alni
griseo
Streptomyces rimosus Streptomyces
Streptosporangium roseum
Streptosporangineae (estreptosporangio, Agromyces mediolanus
Actinomadura, Thermomonospora ) Microbacterium arborescens
lúteo
Bifidobacteriaceae ( Bifidobacteria ) Dermatophilus congolensis Arthrobacter globiformis Micrococcus
Actinomyces bovis
Bifidobacterium longum
actinomicetoceas (Actinomyces ) Nocardioides simplex
Propionibacterium acnes
Propionibacterineae ( Propionibacterium ) Actinoplanes utahensis Dactylosporangium aurantiacum
Micromonosporaceae ( micromonospora, actinoplanos,

Nocardia asteroides Rhodococcus roseus Corynebacterium diphtheriae
Dactylosporangio, Pilimelia )
leprae
Mycobacterium tuberculosis Micobacterium
pseudonocardineae (Actinosynnema, Saccharopolyspora )
Figura 24.5 Relaciones filogenéticas entre seleccionados

estreptomicinas (Streptomyces, Streptoverticillium ) Bacterias Gram-positivas de alto GC. Las relaciones entre
se muestran algunas especies basadas en datos de secuencias de ARNr 16S.
Micrococcineae ( micrococo, Fuente: Proyecto de base de datos ribosomal.

Arthrobacter, Dermatophilus )
Frankineae ( Frankia, Geodermatophilus, Sporichthya )

24.2 SUBORDEN ACTINOMICINEAE
Acidimicrobiaceae (acidimicrobio ) Hay una familia con cinco géneros en el suborden Actino mycineae. Estos
incluyen Actinomyces, Actinobaculum, Arcanobacterium, Mobiluncus y
Coriobacteriaceae (coriobacteria ) Varibaculum. La mayoría son
bacilos grampositivos, no esporulados, de forma irregular con actividad aeróbica
Rubrobacteraceae ( Rubrobacter )
o metabolismo faculativo. Las varillas pueden ser rectas o ligeramente
(B)
curvos y generalmente tienen hinchazones, formas de maza u otras desviaciones
de la morfología normal en forma de bastón.
Figura 24.4 (continuación). (b) Relaciones filogenéticas
Los miembros del género Actinomyces son rectos o
entre los principales grupos de actinobacterias según los datos de 16S rRNA. Los
varillas ligeramente curvadas que varían considerablemente en forma o filamentos
géneros representativos se dan entre paréntesis. Cada tetraedro en el
delgados con verdadera ramificación (figura 24.6). Las varillas y los filamentos
árbol representa un grupo de organismos relacionados; sus bordes horizontales
puede tener extremos hinchados o golpeados. Son facultativos o
mostrar las ramas más cortas y más largas del grupo. Múltiple
anaerobios estrictos que requieren CO2 para un crecimiento óptimo. La célula
ramificación al mismo nivel indica que la ramificación relativa
Las paredes contienen lisina pero no ácido diaminopimélico ni glicina.
el orden de los grupos no se puede determinar a partir de los datos.
Las especies de Actinomyces son habitantes normales de las superficies mucosas.
de humanos y otros animales de sangre caliente; la cavidad oral es
su hábitat preferido. A. bovis causa mandíbulas protuberantes en el ganado. Actin
omyces es responsable de actinomicosis, infecciones oculares y
Las actinobacterias están compuestas por los actinomicetos y sus
enfermedad periodontal en humanos. El ser humano más importante
parientes de GC alta. La figura 24.5 muestra las relaciones filogenéticas entre
patógeno es A. israelii.
representantes seleccionados de la alta GC
grampositivos, y la tabla 24.3 resume las características de
algunos de los géneros discutidos en este capítulo. Técnicas para determinar la
24.3 SUBORDEN MICROCOCCINEAE
taxonomía y filogenia microbiana: Características moleculares (sección 19.4)
El suborden Micrococcineae tiene 14 familias y una amplia variedad
La mayoría de los géneros discutidos en la siguiente encuesta están en de géneros Dos de los géneros más conocidos son Micrococcus y
la subclase Actinobacteridae y orden Actinomycetales que artróbacter.
se divide en 10 subórdenes. La encuesta se centra en varios de El género Micrococcus contiene aerobios catalasa-positivos
estos subórdenes. El orden Bifidobacteriales también se describe brevemente. cocos que ocurren principalmente en pares, tétradas o grupos irregulares y son
generalmente inmóvil (figura 24.7). A diferencia de muchos otros actinomicetos,
Tabla 24.3 Características de Actinobacteria
Dimensiones (m) y Contenido de GC Oxígeno (% mol)

Género Morfología Relación Otras características distintivas
actinoplanos Micelio ramificado, no fragmentado 72–73 con poco crecimiento Aerobio Hifas a menudo dispuestas en
aéreo; se formaron esporangios; esporas móviles con empalizada; muy coloreado; paredes
flagelos polares 0,8–1,2 1,0–8,0; las células jóvenes son celulares de tipo II; se encuentra en el
suelo y en el material vegetal en descomposición
Arthrobacter 59–70 Aerobio Tiene un ciclo de crecimiento de cocos y bastoncillos;
bastoncillos irregulares, las células más viejas son metabolismo respiratorio; catalasa
pequeños cocos; generalmente inmóvil positiva; principalmente en suelo
Bifidobacteria 0,5–1,3 1,5–8; varillas de forma variada, 55–67 anaeróbico Las células pueden ser agrupadas o ramificadas,
generalmente curvo; inmóvil a menudo en pares en disposición en V;

fermentar carbohidratos a acetato
y lactato, pero sin CO2; catalasa
negativo
Corynebacterium 0,3–0,8 1,5–8,0; varillas rectas o ligeramente 51–63 Facultativamente Las celdas suelen estar dispuestas en forma de V.
curvas con extremos cónicos o en forma de anaeróbico formación o en empalizadas de

maza; inmóvil celdas paralelas; catalasa positiva
y fermentativo; metacromático
gránulos
Frankia 0,5–2,0 de diámetro; vegetativo 66–71 Aeróbico a Esporangiosporas inmóviles; normalmente
hifas con ramificación limitada a extensa microaerófilo fija nitrógeno; paredes celulares de tipo III;
y sin micelio aéreo; esporangios la mayoría de las cepas son simbióticas
multiloculares formados con plantas angiospermas e inducen
nódulos
micrococo 0,5–2,0 de diámetro; cocos en pares, 64–75 Aerobio Colonias generalmente amarillas o rojas;
tétradas o grupos irregulares; catalasa positiva con metabolismo
generalmente inmóvil respiratorio; principalmente en
piel de mamíferos y en el suelo
micobacteria 0,2–0,6 1,0–10; varillas rectas o ligeramente 62–70 Aerobio catalasa positiva; puede formar
curvas, a veces ramificadas; ácido rápido; filamentos que se fragmentan
inmóvil y no esporoso fácilmente; Las paredes tienen un alto contenido de lípidos.
contenido; en suelo y agua; algunos
parásito
nocardia 0,5 a 1,2 de diámetro; hifas vegetativas 64–72 Aerobio Hifas aéreas formadas; catalasa
rudimentarias a extensas que pueden positiva; pared celular tipo IV;
fragmentarse en formas cocoides y en ampliamente distribuido en el suelo
forma de varilla
Propionibacterium 0,5–0,8 1–5; 53–67 bastones pleomórficos inmóviles, pueden Anaeróbico a La fermentación produce propionato y
ser bifurcados o ramificados; sin esporas de 0,5 a 2,0 de aerotolerante acetato, ya menudo gas; catalasa
diámetro; vegetativo positiva
Streptomyces 69–78 Aerobio Forma colonias liquenoides o coriáceas

micelio extensamente ramificado; el discretas que a menudo están
micelio aéreo forma cadenas de tres a pigmentadas; usar muchos compuestos

muchas esporas orgánicos diferentes como nutrientes;
organismos del suelo
Micrococcus no sufre diferenciación morfológica. Las colonias de micrococos Arthrobacter crece en fase exponencial, las bacterias son bacilos ramificados
a menudo son amarillas, anaranjadas o rojas. Están muy extendidas en el irregulares que pueden reproducirse mediante un proceso llamado división
suelo, el agua y en la piel de los mamíferos, lo que puede ser su rápida. A medida que entran en la fase estacionaria, las células cambian a una
hábitat habitual. forma cocoide. Tras la transferencia a medio fresco, las células cocoides se
El género Arthrobacter contiene bacilos aerobios catalasa positivos. diferencian para formar bastoncillos en crecimiento activo. Aunque las artróbatas
con metabolismo respiratorio y lisina en su peptidoglicano. es lo más a menudo se aíslan de los peces, las aguas residuales y las superficies vegetales, su mayor parte
característica distintiva es un ciclo de crecimiento de cocos y bastones (figura 24.8). Cuándo hábitat importante es el suelo, donde constituyen un importante
Suborden Corynebacterineae 595
10 micras
10 micras
(a) (B)
(a)
10 micras
10 micras
(C) (D)
Figura 24.8 Ciclo de crecimiento de los cocos y los bastones. El ciclo bastoncillo-
coco de Arthrobacter globiformis cuando se cultiva a 25°C. (a) Los bacilos están
saliendo de los cocos 6 horas después de la inoculación. (b) Varillas después de 12
horas de incubación. (c) Bacterias después de 24 horas. ( d ) Células después de
alcanzar la fase estacionaria (incubación de 3 días). Las células utilizadas para la
inoculación se parecían a estos cocos en fase estacionaria.
(B)
componente de la flora microbiana. Están bien adaptados a este nicho

Figura 24.6 Representantes del Género Actinomyces. a) A. naeslundii; porque son muy resistentes a la desecación y la privación de nutrientes. Este
Tinción de Gram (1.000). (b) Actinomyces; micrografía electrónica de barrido género es inusualmente flexible desde el punto de vista nutricional e incluso
(18.000). Nótese la naturaleza filamentosa de la colonia. puede degradar algunos herbicidas y pesticidas.
El mecanismo de ruptura de la división se ha estudiado en Arthrobacter.
Estas bacterias tienen una pared celular de dos capas, y solo la capa interna
crece hacia adentro para generar una pared transversal que divide las
nuevas células. A continuación, la pared transversal completa o el tabique
se engruesan y ejercen tensión sobre la capa de la pared exterior, que aún
mantiene unidas las dos células. Eventualmente, el aumento de la tensión
rompe la capa exterior en su punto más débil y un movimiento de chasquido
rompe la capa exterior alrededor de la mayor parte de su circunferencia. Las
nuevas celdas ahora descansan en ángulo entre sí y se mantienen unidas
por la parte restante de la capa exterior que actúa como una bisagra.
Un tercer género en este suborden es Dermatophilus. Der matophilus
(tipo IIIB) también forma paquetes de esporas móviles con penachos de
flagelos, pero es un anaerobio facultativo y un parásito de los mamíferos
responsable de la infección de la piel por estreptotricosis.
24.4 SUBORDEN CORYNEBACTERINEAE

Este suborden contiene siete familias con varios géneros bien conocidos.
Figura 24.7 Micrococos. Micrococcus luteus, tinción de azul de Tres de los géneros más importantes son Corynebacterium, Mycobacterium
metileno (1.000). y Nocardia.
La familia Corynebacteriaceae tiene un género, Corynebac terium, que contiene

aerobios y facultativos, catalasa positivos,
varillas rectas a ligeramente curvas, a menudo con extremos cónicos. También se
ven formas en forma de maza. Las bacterias a menudo permanecen parcialmente
adheridas después de romper la división, lo que resulta en arreglos angulares de
las celdas, o una empalizada en la que se alinean filas de celdas
uno al lado del otro (figura 24.9). Las corinebacterias forman metacromáticas
gránulos, y sus paredes tienen ácido meso-diaminopimélico. Aunque algunas
especies son saprofitas inofensivas, muchas corinebacterias son patógenos de
plantas o animales. Por ejemplo, C. diphtheriae es
el agente causal de la difteria en humanos. Enfermedades transmitidas por el aire:
difteria (sección 38.1)
La familia Mycobacteriaceae contiene el género Mycobac terium, que se
compone de varillas ligeramente curvas o rectas que
a veces se ramifican o forman filamentos (figura 24.10). Los filamentos
micobacterianos difieren de los de los actinomicetos en que se fragmentan fácilmente
en bastoncillos y cuerpos cocoides. son aeróbicos y
Figura 24.10 Las micobacterias. Mycobacterium leprae.
catalasa positiva. Las micobacterias crecen muy lentamente y deben incubarse de 2
Tinción ácido-resistente (400). Tenga en cuenta las masas de micobacterias rojas dentro
a 40 días después de la inoculación de un complejo solidificado.
células huésped de color azul verdoso.
medio para formar una colonia visible. Sus paredes celulares tienen una muy alta
contenido de lípidos y contienen ceras con 60 a 90 de carbono micólico
ácidos. Estos son ácidos grasos complejos con un grupo hidroxilo en el Aunque algunas micobacterias son saprofitas de vida libre,
-carbono y una cadena alifática unida al -carbono (figura son mejor conocidos como patógenos animales. M. bovis causa tuberculosis en
24.11). La presencia de ácidos micólicos y otros lípidos fuera del bovinos, otros rumiantes y primates. Debido a que esta bacteria puede producir
La capa de peptidoglicano hace que las micobacterias sean resistentes a los ácidos (fucsina básica). tuberculosis en humanos, el ganado lechero se prueba
el colorante no se puede eliminar de la célula mediante un tratamiento con alcohol ácido). para la enfermedad anualmente; la pasteurización de la leche mata al patógeno.
La extracción de los lípidos de la pared con etanol alcalino destruye la resistencia a Antes de la generalización de la pasteurización de la leche, la leche contaminada se
los ácidos. Preparación y tinción de muestras: tinción diferencial (sección 2.3) una fuente problemática de transmisión. Actualmente, M. tuberculosis
es la principal fuente de tuberculosis en humanos. El otro mayor
la enfermedad humana micobacteriana es la lepra, causada por M. leprae.
Enfermedades transmitidas por el aire: Mycobacterium avium-M. intercelular y M. tuberculosis
infecciones pulmonares (sección 38.1); Perspectivas de los genomas microbianos: Genómica
análisis de microbios patógenos (sección 15.8)
La familia Nocardiaceae está compuesta por dos géneros, No cardia y
Rhodococcus. Estas bacterias desarrollan un sustrato
micelio que se rompe fácilmente en bastoncillos y elementos cocoides
(figura 24.12). También forman un micelio aéreo que asciende
por encima del sustrato y puede producir conidios. casi todos son
aerobios estrictos. La mayoría de las especies tienen peptidoglucano con ácido
meso- diaminopimélico y sin puente peptídico. La pared suele
contiene un carbohidrato compuesto de arabinosa y galactosa;
Los ácidos micólicos están presentes en Nocardia y Rhodococcus. Debido a que
estos géneros y otros relacionados se asemejan a los miembros del género
Nocardia (llamado así por Edmond Nocard [1850-1903], francés
bacteriólogo y patólogo veterinario), son colectivamente
llamadas nocardioformas.
Nocardia se distribuye en todo el mundo en suelo y hábitats acuáticos.

Las nocardias participan en la degradación de hidrocarburos y
ceras y pueden contribuir al biodeterioro de las juntas de goma en
tuberías de agua y alcantarillado. Aunque la mayoría son saprofitos de vida libre,
algunas especies, particularmente N. asteroides, son patógenos oportunistas
Figura 24.9 Corynebacterium diphtheriae. Nota la que causan nocardiosis en humanos y otros animales. personas con bajo
formas irregulares de células individuales, las asociaciones angulares de resistencia debido a otros problemas de salud, como personas con
pares de celdas y arreglos de empalizadas ( 1,000). Estos bacilos grampositivos VIH-SIDA, corren mayor riesgo. Los pulmones se infectan con mayor frecuencia, pero
no forman endosporas. el sistema nervioso central y otros órganos pueden ser invadidos.
Suborden Micromonosporineae 597
OH
R1 CH
R2C H
_ COOH
(a)
OH
COOH
(B)
OH
COOH
(C)
Figura 24.11 Estructura del ácido micólico. (a) La estructura genérica de los ácidos micólicos, una familia que incluye más de 500 tipos
diferentes. (b) Un ácido micólico con dos anillos de ciclopropano y (c) un ácido micólico insaturado.
1. Defina actinomiceto, sustrato de micelio, micelio aéreo y exospora.
Explique cómo estas estructuras confieren una ventaja de supervivencia.
2. Describir cómo se utilizan la estructura de la pared celular y el contenido de azúcar para clasificar
los actinomicetos. Incluya una breve descripción de los cuatro tipos principales de muros.
3. ¿Por qué los actinomicetos tienen tanto interés práctico?
4. Describa el filo Actinobacteria y su relación con los actinomicetos.
5. Describa las principales características de los siguientes géneros: Actinomyces, Mi
crococcus, Arthrobacter y Corynebacterium. Incluya comentarios sobre su hábitat normal
y su importancia.
6. ¿Qué es la división de ajuste? el ciclo de crecimiento de cocos y bastones?
7. Dar las propiedades distintivas del género Mycobacterium.
8. Enumere dos enfermedades micobacterianas humanas y sus agentes causales.
patógeno causa la tuberculosis en el ganado?
9. ¿Qué es un nocardioformo y cómo se puede distinguir el grupo de otros actinomicetos?
nocardia
10. ¿Dónde se encuentra Nocardia y qué problemas puede causar? Tenga en cuenta las
preocupaciones ambientales y de salud pública.

Figura 24.12 Nocardia. Asteroides de Nocardia, sustrato de micelio y micelio aéreo con
ilustración de conidios y micrografía óptica (1250).
24.5 SUBORDEN MICROMOSPORINEAE

El suborden Micromonosporineae contiene solo una familia, Micromonosporaceae. Los géneros
Rhodococcus está ampliamente distribuido en suelos y hábitats acuáticos. Tiene un interés incluyen Micromonospora, Dacty losporangium, Pilimelia y Actinoplanes. A menudo se hace referencia
considerable porque los miembros del género pueden degradar una enorme variedad de moléculas, colectivamente a la familia como los actinoplanetas [del griego actinos, un rayo o viga, y planos, un
como hidrocarburos de petróleo, detergentes, benceno, bifenilos policlorados (PCB) y varios pesticidas. vagabundo]. Tienen un extenso sustrato de micelio y son células de tipo IID. A menudo, las hifas están
Puede ser posible utilizar rodococos para eliminar el azufre de los combustibles, reduciendo así la muy coloreadas y se pueden producir pigmentos difusibles. Normalmente, un micelio aéreo está
contaminación del aire por las emisiones de óxido de azufre. ausente o es rudimentario. Las esporas son
dactilosporangio
(C)
actinoplanos
(a)
100 micras
5 micras
(B) (D)
Figura 24.13 Familia Micromonosporaceae. Morfología de los actinoplanetas. (a) Estructura de actinoplanos. (b) Micrografía electrónica de barrido
de esporangios maduros de Actinoplanes. ( c ) Estructura de Dactylosporangium. (d) Una colonia de Dactylosporangium cubierta de esporangios.
generalmente formado dentro de un esporangio elevado por encima de la superficie de 24.6 SUBORDEN PROPIONIBACTERINEAE
el sustrato al final de una hifa especial llamada esporangioforo. Las esporas
pueden ser móviles o inmóviles. Estas bacterias varían en la disposición y Este suborden contiene dos familias y 14 géneros. el género
desarrollo de sus esporas. Propionibacterium contiene pleomórficos, inmóviles, sin esporas
Algunos géneros (Actinoplanes, Pilimelia) tienen esporangios esféricos, varillas que a menudo tienen forma de maza con un extremo cónico y el otro
cilíndricos o irregulares con unos cuantos miles de esporas. extremo redondeado. Las células también pueden ser cocoides o ramificadas. Ellos pueden ser
por esporangio (figura 24.3a y figura 24.13). el esporangio solos, en cadenas cortas o en grupos. El género es facultativamente
se desarrolla sobre el sustrato en la punta de un esporangióforo; los anaeróbico o aerotolerante; el lactato y los azúcares se fermentan para
las esporas están dispuestas en cadenas enrolladas o paralelas (figura 24.14). producir grandes cantidades de ácidos propiónico y acético y, a menudo,
Dactylosporangium formas en forma de maza, dedo o piriforme dióxido de carbono. Propionibacterium suele ser catalasa positivo. los
esporangios con una a seis esporas (figura 24.13c,d). La espora de Micromono género se encuentra creciendo en la piel y en el tracto digestivo de
tiene esporas individuales, que a menudo se presentan en grupos ramificados. animales y en productos lácteos como el queso. Propionibacterium
de esporóforos (figura 24.3b). contribuye sustancialmente a la producción de queso suizo. P. ac nes participa
Los actinoplanetas crecen en casi todos los hábitats del suelo, desde en el desarrollo del olor corporal y el acné vulgar. Microbiología de alimentos
desde la basura del bosque hasta la arena de la playa. También florecen en fermentados (sección 40.6)
agua dulce, particularmente en arroyos y ríos (probablemente debido a

abundante oxígeno y restos vegetales). Algunos han sido aislados
del océano Las especies que habitan en el suelo pueden tener un papel
24.7 SUBORDEN STREPTOMYCINEAE
importante en la descomposición del material vegetal y animal. Pil imelia crece
en asociación con la queratina. Micromonospora El suborden Streptomycineae tiene una sola familia, Streptomy cetaceae, y
degrada activamente la quitina y la celulosa, y produce antibióticos tres géneros, el más importante de los cuales es Strep tomyces. Estas
como la gentamicina. bacterias tienen hifas aéreas que se dividen en una sola
Suborden Streptomicineae 599
Figura 24.14 Desarrollo de esporangios en un actinoplaneta. El esporangio en desarrollo se muestra en púrpura con más maduros
etapas a la derecha.
plano para formar cadenas de 3 a 50 o más esporas inmóviles con textura superficial a la ciencia y la salud pública. La estreptomicina fue el primer fármaco que combatió
que varía de suave a espinosa y verrugosa (figura eficazmente la tuberculosis y en 1952 Waksman obtuvo el
24.3e; figuras 24.15 y 24.16). Todos tienen una pared celular tipo I y una Premio Nobel. Además, este descubrimiento desencadenó una búsqueda masiva
Contenido de GC de 69 a 78%. Los filamentos crecen por extensión de la punta. que resultó en el aislamiento de nuevas especies de Streptomyces que producen
y no por fragmentación. Miembros de esta familia y similares otros compuestos de importancia medicinal. De hecho, desde entonces,
Las bacterias a menudo se denominan estreptomicetos [del griego streptos, doblado o Se ha descubierto que los estreptomicetos producen más de 10.000 compuestos
torcido, y myces, hongo]. bioactivos. Cientos de estos productos naturales ahora se utilizan
Streptomyces es un género grande; hay alrededor de 150 especies. en medicina e industria; alrededor de dos tercios de los antimicrobianos
Los miembros del género son aerobios estrictos, tienen pared celular tipo I y Los agentes utilizados en medicina humana y veterinaria se derivan de
forman cadenas de esporas inmóviles (figura 24.15c y 24.16). los los estreptomicetos. Los ejemplos incluyen anfotericina B, cloramfenicol, eritromicina,
de tres a muchas esporas en cada cadena a menudo están pigmentadas y pueden neomicina, nistatina y tetraciclina.
ser de textura suave, peluda o espinosa. Las especies de Streptomyces se Algunas especies de Streptomyces producen más de un antibiótico. Una bacteria
determinan mediante una combinación de características morfológicas y fisiológicas, productora de tibióticos tiene genes que codifican proteínas que
entre las que se incluyen las siguientes: el color de la antena hacerlos resistentes a tales compuestos. Quimioterapia antimicrobiana (capítulo 34)
sustrato y micelio, disposición de las esporas, características de la superficie de las
esporas individuales, uso de carbohidratos, producción de antibióticos, melanina El genoma de Streptomyces coelicolor, que produce cuatro
síntesis, reducción de nitratos e hidrólisis de urea y ácido hipúrico. antibióticos y sirve como especie modelo para la investigación, ha sido secuenciada.
Con 8,67 Mbp, es uno de los genomas procarióticos más grandes.
Los estreptomicetos son muy importantes, tanto ecológica como médicamente. Su gran número de genes (7.825) sin duda refleja el número de
El hábitat natural de la mayoría de los estreptomicetos es el suelo, donde proteínas requeridas para pasar por un ciclo de vida complejo. Muchos genes son
pueden constituir del 1 al 20% de la población cultivable. En dedicado a la regulación, con unas asombrosas 65 subunidades sigma de ARN
De hecho, el olor a tierra húmeda es en gran parte el resultado de la producción de polimerasa predichas y más de 50 sistemas reguladores de dos componentes. La
capacidad de explotar una variedad de nutrientes del suelo también es
sustancias volátiles como la geosmina por parte de los estreptomicetos. Los estreptomicetos juegan
un papel importante en la mineralización. Son flexibles nutricionalmente y demostrado por la presencia de un gran número de transportadores ABC, el sistema
puede degradar aeróbicamente sustancias resistentes como pectina, lignina, de translocación de proteínas Sec y enzimas degradantes secretadas. Finalmente,
quitina, queratina, látex, agar y compuestos aromáticos. estreptomicetos se descubrieron genes que se cree que
son mejor conocidos por su síntesis de una amplia gama de antibióticos. codifican 18 metabolitos secundarios adicionales. Secreción de proteínas en
El descubrimiento de Stanley Waksman de que S. griseus (figura 24.17a) procariotas (sección 3.8); Regulación del inicio de la transcripción: Bicomponente
produce estreptomicina fue una contribución de enorme importancia sistemas regulatorios (sección 12.2); Sistemas regulatorios globales (sección 12.5)
0,25 micras
(a)
(a)
0,5 micras
(B)
10 micras
(B)
0,25 micras
(C)
Figura 24.16 Cadenas de esporas de estreptomicetos. (a) Esporas

lisas de S. niveus; micrografía electrónica de barrido. (b) Esporas
10 micras
espinosas de S. viridochromogenes. (c) Esporas verrugosas de S. pulcher.
(C)
Figura 24.15 Desarrollo de Streptomyces. (a) El crecimiento de Aunque la mayoría de los estreptomicetos son saprofitos no
Streptomyces coelicolor en un sustrato sólido da como resultado la formación patógenos, algunos están asociados con enfermedades de plantas y animales.
de hifas vegetativas que se diferencian en hifas aéreas para formar un Streptomyces scabies causa la enfermedad de la sarna en papas y
micelio aéreo, que imparte una apariencia blanca y borrosa a la superficie remolachas (figura 24.17b). S. somaliensis es el único estreptomiceto
de la colonia. El fondo azul es causado por la difusión de el antibiótico que se sabe que es patógeno para los humanos. Se asocia con
poliquétido pigmentado actinorrodina en el agar. (b) Las hifas vegetativas actinomyce toma, una infección de los tejidos subcutáneos que produce
de S. coelicolor son rectas con ramas. (c) Cadenas de esporas de S. lesiones y provoca hinchazón, abscesos e incluso destrucción ósea si
coelicolor que eventualmente se desprenderán y se liberarán al medio no se trata. S. albus y otras especies se han aislado de pacientes con
ambiente. diversas dolencias y pueden ser patógenas.
Suborden Frankineae 601
(a)
(a) Actinomadura madurae
(B)
Figura 24.17 Estreptomicetos de importancia práctica. (a)

Streptomyces griseus. Colonias del actinomiceto que produce
estreptomicina. (b) S. scabies creciendo en una papa.
(B) estreptosporangio
24.8 SUBORDEN STREPTOSPORANGINEAE

El suborden Streptosporangineae contiene tres familias y 16 géneros. La
familia incluye los maduromicetos, que tienen paredes celulares de tipo III
y el derivado del azúcar madurosa (3-O metil-D-galactosa) en
homogeneizados de células enteras. Su contenido de GC es de 64 a 74%
en moles. Las hifas aéreas tienen pares o cadenas cortas de esporas y
las hifas del sustrato están ramificadas (figura 24.18).
Algunos géneros forman esporangios; las esporas no son resistentes al
calor. Al igual que S. somaliensis, Actinomadura es otro actinomiceto
asociado con la enfermedad actinomicetoma. Thermomonospora produce
10 micras
esporas individuales en el micelio aéreo o en el micelio aéreo y del
sustrato. Se ha aislado de hábitats de temperatura moderadamente alta,
como pilas de compost y heno; puede crecer de 40 a 48°C.
Figura 24.18 Maduromicetos. (a) Morfología de Actinomadura
madurae; ilustración y micrografía electrónica de una cadena de
esporas (16.500). (b) morfología de Streptosporangium; ilustración y
24.9 SUBORDEN FRANKINEAE micrografía de S. album en agar avena con esporangios e hifas; SEM.
El suborden Frankineae incluye los géneros Frankia y Geo dermatophilus.

Ambos forman esporangios multiloculares, caracterizados por grupos de
esporas cuando una hifa se divide tanto transversal como longitudinalmente.
(Multilocular significa que tiene muchas células o compartimentos). Tienen Las raíces de las plantas infectadas desarrollan nódulos que fijan
paredes celulares de tipo III (tabla 24.1), aunque los patrones de azúcar nitrógeno de manera tan eficiente que una planta como un aliso puede
del extracto celular difieren. El contenido de GC varía de 57 a 75% en crecer en ausencia de nitrógeno combinado (p. ej., NO 3) cuando nodula.
moles. Geodermatophilus (tipo IIIC) tiene esporas móviles y es un Dentro de las células del nódulo, Frankia forma hifas ramificadas con
organismo aeróbico del suelo. Frankia (tipo IIID) forma esporas inmóviles vesículas globulares en sus extremos (figura 24.19c). Estas vesículas
en un cuerpo esporógeno (figura 24.19). Crece en asociación simbiótica pueden ser los sitios de fijación de nitrógeno. El proceso de fijación de
con las raíces de al menos ocho familias de plantas no leguminosas nitrógeno se asemeja al de Rhizobium en que es sensible al oxígeno y
superiores (p. ej., alisos) y es un microaerófilo que puede fijar nitrógeno requiere molibdeno y cobalto. Microorganismos asociados a plantas
atmosférico. vasculares: Fijación de nitrógeno (sección 29.5)
(a) (B) (C)
Figura 24.19 Frankia. (a) Una micrografía de contraste de interferencia que muestra hifas, esporangios multiloculares y esporas. (b) Una
micrografía electrónica de barrido coloreada de un esporangio rodeado de hifas. (c) Un nódulo del aliso Alnus rubra que muestra células llenas
de vesículas de Frankia. Microscopía electrónica de barrido.
Otro género de este suborden, Sporichthya, es uno de los actinomicetos más extraños.
Carece de sustrato micelio. Las hifas permanecen adheridas al sustrato mediante fijaciones y
crecen hacia arriba para formar micelios aéreos que liberan esporas móviles y flageladas en
presencia de agua.
24.10 ORDEN BIFIDOBACTERIALES

El orden Bifidobacteriales tiene una familia, Bifidobacteriaceae, y 10 géneros (cinco de los cuales
tienen afiliación desconocida). Falcivib rio y Gardnerella se encuentran en el aparato genital/
urinario humano; Se cree que Gardnerella es una de las principales causas de vaginitis bacteriana.
Bifidobacterium es probablemente el género mejor estudiado. Las bifidobacterias son bacilos
grampositivos, inmóviles y sin esporas, de formas variadas, ligeramente curvados y en forma de
maza; a menudo están ramificados (figura 24.20). Las varillas pueden ser individuales o en racimos
y pares en forma de V. Bifidobacterium es anaeróbico y fermenta activamente carbohidratos para Figura 24.20 Bifidobacteria. Bifidobacterium bifidum; microfotografía de contraste de fase
producir ácidos acético y láctico, pero no dióxido de carbono. Se encuentra en la boca y el tracto (1.500).
intestinal de los vertebrados de sangre caliente, en las aguas residuales y en los insectos. B.
bifidum es un colonizador pionero del tracto intestinal humano, particularmente cuando los bebés
son amamantados. Se han informado algunas infecciones por Bifidobacterium en humanos, pero el
3. Describir las principales propiedades del género Streptomyces.
género no parece ser una causa importante de enfermedad. Enfermedades de contacto directo:
4. Describe tres formas en las que Streptomyces tiene importancia ecológica. ¿Por qué?
Enfermedades de transmisión sexual (sección 38.3)
¿Crees que Streptomyces spp. producir antibióticos?
5. Describa brevemente los géneros del suborden Streptosporangineae. ¿Qué es
madurose? ¿Por qué es importante Actinomadura?
6. Describa Frankia y discuta su importancia.
7. Caracterizar el género Bifidobacterium. ¿Dónde se encuentra y por qué?

1. Dar las propiedades distintivas de los actinoplanetas.
¿significativo?
2. Describa el género Propionibacterium y comente su importancia práctica.
Resumen
24.1 Propiedades generales de los actinomicetos 24.5 Suborden Micromonosporineae
un. Los actinomicetos son bacterias aerobias grampositivas que forman hifas ramificadas, un. El suborden Micromonosporineae tiene géneros que incluyen Micromonospora y Actinoplanes.
generalmente no fragmentadas, y esporas asexuales (figura 24.2). B. Las esporas Estos actinomicetos tienen un extenso sustrato de micelio y forman esporangios aéreos
asexuales que se encuentran en el micelio aéreo se denominan esporas si se encuentran en la especiales (figura 24.14). Están presentes en el suelo, el agua dulce y el océano. Las
punta de las hifas o esporangiosporas si se encuentran dentro de los esporangios. C. Los formas del suelo son probablemente importantes en la descomposición.
actinomicetos tienen varios tipos claramente diferentes de paredes celulares y, a menudo,

también varían en cuanto a los azúcares presentes en los extractos celulares. Propiedades
como el color y la morfología también son taxonómicamente útiles (tablas 24.1, 24.2 y 24.3). 24.6 Suborden Propionibacterineae
un. El género Propionibacterium pertenece al suborden Propionibacterineae. Los miembros de

D. La segunda edición del Manual de Bergey clasifica filogenéticamente las bacterias de alto este género son habitantes comunes de la piel y del intestino y son importantes en la
GC utilizando datos de ARNr 16S. El filo Actinobacteria contiene los actinomicetos y sus fabricación de queso y en el desarrollo del acné vulgar.
parientes de alto GC (figura 24.4).
24.7 Suborden Streptomicineae
24.2 Suborden Actinomicineae un. El suborden Streptomyneae incluye el género Streptomyces. Los miembros de este género
un. El suborden Actinomicineae contiene el género Actinomyces, cuyos miembros son bacilos sin tienen paredes celulares tipo I e hifas aéreas que contienen cadenas de 3 a 50 o más
esporas de forma irregular que pueden causar enfermedades en el ganado y los seres esporas inmóviles (figuras 24.15 y 24.16).
humanos (figura 24.6). B. Los estreptomicetos son importantes en la degradación de materia orgánica más resistente
en el suelo y producen muchos antibióticos útiles. Unos pocos causan enfermedades en
24.3 Suborden Micrococcineae plantas y animales.
un. El suborden Micrococcineae incluye los géneros Micrococcus, Arthrobacter y Dermatophilus.

Arthrobacter tiene un ciclo de crecimiento inusual de cocos y bacilos y lleva a cabo una 24.8 Suborden Streptosporangineae
división rápida (figuras 24.7 y 24.8). un. Muchos géneros del suborden Streptosporangineae tienen paredes celulares derivadas del
azúcar madurosa y tipo III.
24.4 Suborden Corynebacterineae
24.9 Suborden Frankineae
un. Los géneros Corynebacterium, Mycobacterium y Nocardia se ubican en el suborden
Corynebacterineae. Las micobacterias forman bastones o filamentos que se fragmentan un. Los géneros Frankia y Geodermatophilus se ubican en el suborden Frank ineae. Producen
fácilmente. Sus paredes celulares tienen un alto contenido de lípidos y ácidos micólicos; la grupos de esporas en las puntas de las hifas y tienen paredes celulares de tipo III. Frankia
presencia de estos lípidos los hace resistentes a los ácidos (figuras 24.9–24.11). Los crece en asociación simbiótica con plantas no leguminosas y fija nitrógeno (figura 24.19).
géneros Corynebacterium y Mycobacterium contienen varios patógenos humanos muy
importantes.
B. Los actinomicetos nocardioformes tienen hifas que se fragmentan fácilmente en bastoncillos y 24.10 Orden Bifidobacteriales
elementos cocoides y, a menudo, forman micelios aéreos con esporas (figura 24.12).
un. El género Bifidobacterium se ubica en el orden Bifidobacteriales. Esta varilla anaeróbica
irregular es uno de los primeros colonizadores del tracto intestinal en los bebés lactantes.
Términos clave
acidorresistente 596 micelio aéreo 589 ácidos micólicos 596 esporangiosporas 590
actinobacteria 593 geosmina 599 hifa(e) nocardioformas 596 estreptomicetos 599
actinomiceto 589 589 madurosa 601 metabolito secundario 589 sustrato micelio 589
actinomicetoma 600 división de rotura 594

1. A pesar de que estos son organismos de "GC alto", hay regiones del genoma que deben ser 3. Se estudia Streptomyces coelicolor como sistema modelo para la diferenciación celular.
más ricas en AT. Sugiera algunas de esas regiones y explique por qué deben ser más ricas Algunos de los genes involucrados en la esporulación contienen un codón raro que no se usa
en AT. en los genes vegetativos. Sugiera cómo Streptomyces podría usar el codón raro para regular
la esporulación.
2. Elige dos especies diferentes del filo Actinobacteria e investiga su fisiología y ecología.
Compara y contrasta estos dos organismos. ¿Puedes determinar por qué tener un alto 4. Supón que descubriste una planta nodulada que podría fijar el nitrógeno atmosférico. ¿Cómo
contenido genómico de GC podría conferir una ventaja evolutiva? podría demostrar que un simbionte bacteriano estuvo involucrado y que Frankia , en lugar de
Rhizobium , fue el responsable?
Aprende más
Anderson, AS y Wellington, EMH 2001. La taxonomía de Streptomyces y géneros GB; Parkhill, J.; y Hopwood, DA 2002. Secuencia completa del genoma del
relacionados. En t. Sistema J. Evol. Microbiol. 51: 797–814. actinomiceto modelo Streptomyces coelicolor A3(2). Naturaleza 417: 141–47.
Beaman, BL; Saubolle, MA; y Wallace RJ 1995. Nocardia, Rhodococcus, Streptomyces, Clawson, ML; Bourret, A.; y Benson, DR 2004. Evaluación de la filogenia de la simbiosis
Oerskovia y otros actinomicetos aeróbicos de importancia médica. En Manual of de los nódulos de la raíz fijadora de nitrógeno de la planta Frankia-actinorhizal con
Clinical Microbiology, 6.ª ed., PR Murray, editor en jefe, 379–99. Washington, DC: las secuencias del gen Frankia 16S rRNA y glutamina sintetasa. mol. Filógeno. Evol.
Sociedad Estadounidense de Microbiología. 31: 131–38.
Benson, DR y Silvester, WB 1993. Biología de las cepas de Frankia , simbiontes de Dyson, P. 2000. Genética de Streptomyces . En Enciclopedia de microbiología, 2ª ed., vol.
actinomicetos de plantas actinorizales. Microbiol. 57(2): 293–319 . 4, J. Lederberg, editor en jefe, 451–66. San Diego: Prensa Académica.
Bentley, Dakota del Sur; Chater, KF; Cerdeño-Tárraga, A.-M.; Challis, GL; tomson, n. Parenti, F. y Coronelli, C. 1979. Miembros del género Actinoplanes y sus
R.; James, KD; Harris, DE; Codorniz, MA; Kieser, H.; Harper, D.; Bateman, A.; antibióticos año Rev. Microbiol. 33:389–411.
Marrón, S.; Chandra, G.; Chen, CW; Collins, M.; Cronin, A.; Fraser, A.; Goble, A.; Stackebrandt, E.; Rainey, FA; y Ward-Rainey, NL 1997. Propuesta para un nuevo sistema
Hidalgo, J.; Hornsby, T.; Howardth, S.; Huang, C.-H.; Kieser, T.; Larke, L.; Murphy, de clasificación jerárquica. Actinobacteria classis nov. En t. Sistema J. Bacteria riol.
L.; Oliver, K.; O'Neil, S.; Rabbinowitsch, E.; Rajandream, M.-A.; Rutherford, K.; Rutter, 47(2):479–91.
S.; Segger, K.; Saunders, D.; Sharp, S.; Cuadrados, R.; Cuadrados, S.; Taylor, K.;
Warren, T.; Wietzorrek, A.; Woodward, J.; barril,

25Los protistas
Esta es una micrografía electrónica de barrido (2160) del protozán Naegleria

fowleri. Tres N. fowleri de un cultivo axénico, atacando y comenzando a
devorar o engullir una cuarta ameba, presumiblemente muerta, con sus amebastomas
(estructuras similares a ventosas que funcionan en la fagocitosis). Esta ameba es la principal
causa de la enfermedad en humanos llamada meningoencefalitis amebiana primaria.
AVANCE
• Los protistas son una colección polifilética de organismos. La mayoría son unicelulares y esquema de cinco reinos, es una agrupación artificial de más de 64.000
carecen del nivel de organización tisular que se observa en los eucariotas superiores. diferentes formas de vida unicelulares que carecen de desarrollo evolutivo común.
• Los protistas son ubicuos: se encuentran dondequiera que haya suficiente humedad. Son herencia; es decir, son polifiléticos (figura 25.1). De hecho,
miembros prominentes de las comunidades de tónicos de tablones marinos donde los protistas están unificados solo por lo que les falta: ausente está el nivel
contribuyen tanto a la cantidad de de organización tisular que se encuentra en hongos, plantas y animales. los
CO2 fijado así como el reciclaje de nutrientes. Los protistas acuáticos y terrestres término protozoos [s., protozoario; griego protos, primero, y zoon, animal] se
también son importantes en la regeneración de nutrientes. ha referido tradicionalmente a los protistas quimioorganotróficos,
• Los protistas pueden ser fotoautotróficos, quimioorganotróficos o y la protozoología generalmente se refiere al estudio de los protozoos. los
mixotróficos. Pueden asimilar nutrientes orgánicos por saprotrofia El término algas se puede utilizar para describir protistas fotosintéticos. "Al
u holotrofia, alimentándose de bacterias y otras formas de partículas de gae" se usó originalmente para referirse a todas las "plantas acuáticas simples".
carbón. Muchos protistas viven en asociación con otros organismos como
pero este término no tiene utilidad filogenética. El estudio de los protistas
mutualistas, comensales o parásitos.
fotosintéticos (algas) a menudo se denomina ficología y es el
• Los protistas suelen reproducirse asexualmente por fisión binaria; algunos bajo dergo de ámbito de botánicos y protistólogos. El estudio de todos los protistas,
fisión múltiple o gemación. Muchos también tienen ciclos sexuales.
independientemente de su tipo metabólico, se denomina protistología.
que implican la meiosis y la fusión de gametos o núcleos gaméticos,
Durante muchos años los protozoos se clasificaron en cuatro grandes
resultando en un cigoto diploide. El cigoto es a menudo una célula en reposo, resistente
grupos según su medio de locomoción: flagelados (Masti gophora), ciliados
y de paredes gruesas llamada quiste.
(Infusoria o Ciliophora), amebas (Sarcodina),
• Todos los protistas tienen uno o más núcleos; algunos tienen un macronúcleo
y formas estacionarias (Sporozoa). Aunque los no protistólogos todavía
y un micronúcleo. El metabolismo energético se produce en las mitocondrias,
use estos términos, estas divisiones no tienen nada que ver con las relaciones
hidrogenosomas y cloroplastos, aunque algunos protistas carecen
evolutivas y deben evitarse. Ahora se acuerda que el antiguo
estos organelos.
Es mejor abandonar el sistema de clasificación, pero durante muchos años hubo
• La sistemática y clasificación taxonómica de los protistas son ar
hubo poco acuerdo sobre lo que debería tomar su lugar. Recientes análisis
facilidades de investigación activa y debate.
morfológicos, bioquímicos y filogenéticos han resultado
en el desarrollo de un sistema de clasificación de alto nivel para los
eucariotas. Este esquema, propuesto por la Sociedad Internacional
of Protistologists, se introduce en el capítulo 19 (ver tabla 19.9) y
protistas. Introducimos protistas de uso médico y ecológico. se sigue aquí. Sin embargo, primero presentamos algunos de los principales
El capítulo 25 presenta
significado las principales
y seguir características
la clasificación biológicas del
de nivel superior elementos ecológicos, morfológicos y fisiológicos que describen la mayoría
esquema de eucariotas propuesto por la Sociedad Internacional de protistas.
Protistólogos. El reino Protista, tal como lo define Whittaker
Y una vista agradable que son de hecho. Sus formas van desde lágrimas hasta campanas, barriles, copas,
cornucopias, estrellas, copos de nieve y soles radiantes, hasta las amebas comunes, que no tienen forma real en
todos. Algunos viven en canastas que parecen hechas de filigrana de marfil exquisitamente tallada. Otros usan
pedacitos de sílice coloreados para hacerse brillantes cúpulas de mosaico. Algunos incluso forman elegantes y transparentes
recipientes en forma de jarrones o copas de vino de cristal fino en los que hacen sus hogares.
—Helena Curtis
606 Capítulo 25 Los protistas
bacterias
Planctomyces
clorobio Flexibacter
Flavobacteria
leptonema
Clostridium
Bacilo
heliobacteria
Arthrobacter
pOPS19 Arqueoglobo
Haloferax
cloroflexo Metanospirillum
opistokonta
Termo
(Hongos) Coprinus termotoga Médico de Marina. 1 temperatura baja
pOPS66
Aquifex
gp. 1 temperatura baja
(Metazoos) Homo Raíz PSL
EM17 22 PSL gp. 2 baja temperatura
Archaeplastida (Plantas) Zea 12
Sulfolobus
(Cryptophyceae) Cryptomonas
(Estramenopile) Achlya pirodictio
arqueas
(Estramenopile) Costaria Giardia (Fornicata)
Cromalveolata Tricomonas (Parabasalia)
Archaeplastida (Rhodophyceae) Porphyra
0.1 cambios por sitio
Excavata
Hongos—Opsthokonta
eucaria
Figura 25.1 Árbol filogenético universal, destacando protistas. La evidencia filogenética molecular reciente en combinación con datos
morfológicos y bioquímicos ha dado como resultado el establecimiento de supergrupos entre los Eucarya (cada supergrupo está resaltado con
un color diferente). Este nuevo esquema de clasificación de orden superior no es del todo congruente con la ubicación de los protistas en el Árbol
Universal de la Vida; el último se basa completamente en el análisis de SSU rRNA. No obstante, demuestra que los protistas son un grupo altamente
polifilético. Debido a que los protistas no son un grupo monofilético, el término "protista" no puede usarse para representar historias evolutivas. En
cambio, el término “protista”, como se usa en este capítulo, denota un grupo de organismos eucarióticos que comparten algunas características
morfológicas, reproductivas, ecológicas y bioquímicas.
25.1 DISTRIBUCIÓN facilidades en humanos y animales domésticos (tabla 25.1). Finalmente,

los protistas son útiles en la investigación bioquímica y biológica molecular.
Los protistas crecen en una amplia variedad de hábitats húmedos. La No solo muestran una sorprendente variedad de adaptaciones únicas,
humedad es absolutamente necesaria para su existencia porque son sino que muchas vías bioquímicas utilizadas por los protistas se
susceptibles a la desecación. La mayoría de los protistas son de vida libre encuentran en otros eucariotas, lo que los convierte en organismos modelo útiles.
y habitan en ambientes marinos o de agua dulce. Muchas formas otróficas
de quimioórganos terrestres se pueden encontrar en la materia orgánica
en descomposición y en el suelo, donde son importantes para reciclar los
25.2 NUTRICIÓN
elementos esenciales nitrógeno y fósforo. Otros son planctónicos: flotan
libres en lagos y océanos. Los microbios planctónicos (tanto procarióticos Los protistas fotosintéticos son exclusivamente aerobios. Al igual que las
como eucarióticos) son responsables de la mayoría del ciclo de nutrientes cianobacterias y las plantas, poseen los fotosistemas I y II y realizan la
que ocurre en estos ecosistemas. fotosíntesis oxigénica. La mayoría de las formas fotosintéticas son
Cada grupo principal de protistas incluye especies que viven en fotoautótrofas, obtienen energía de la luz y fijan CO2 para satisfacer sus
asociación con otros organismos. Por ejemplo, algunos protistas necesidades de carbono. Sin embargo, algunos son fotoheterótrofos y
fotosintéticos se asocian con hongos para formar líquenes, mientras que utilizan carbono orgánico en lugar de CO2. Los protistas quimioheterótrofos
otros viven con corales donde proporcionan carbono fijo al animal coralino. pueden ser holozoicos o saprozoicos. En la nutrición holozoica, los
Otros miles son parásitos y causan enfermedades importantes. nutrientes sólidos como las bacterias son adquiridos por fago
Morfología 607
Cuadro 25.1 Protistas patógenos que causan las principales enfermedades de los animales domésticos
Súper grupo Sitio preferido de

(subrango) Género Anfitrión infección Enfermedad
Amoebozoa Entamoeba Mamíferos Intestino amebiasis
yodamoeba Cerdo Intestino Enteritis
Cromalveolata Babesia Vacas Células de sangre babesiosis
(Apicomplexa) therilería Bovinos, ovinos, caprinos Células de sangre terileriasis
sarcocistis Mamíferos, aves Músculos sarcosporidiosis
taxoplasma gatos Intestino toxoplasmosis
Isospora Perros Intestino coccidiosis
Eimería Bovinos, gatos, pollos, cerdos Intestino coccidiosis
Plasmodio Muchos animales glóbulos rojos, hígado Malaria
leucocitozoo Aves Bazo, pulmones, sangre Leucocitozoonosis
criptosporidio Mamíferos Intestino Criptosporidiosis
(Ciliófora) balantidio Cerdo Intestino grueso balantidiasis
Excavata Leishmania Perros, gatos, caballos, ovejas, ganado Bazo, médula ósea, leishmaniosis
(Kinetoplasta) membranas mucosas
tripanosoma La mayoría de los animales Sangre la enfermedad de Chagas
Enfermedad del sueño
(Parabasalia) tricomonas caballos, ganado Tracto genital Tricomoniasis

(aborto)
Histomonas Aves Intestino enfermedad de la espinilla
(Fornicata) Giardia Mamíferos Intestino giardiasis
citosis y la subsiguiente formación de vacuolas fagocíticas (fig ure 25.2). En la Dado que los protistas son células eucariotas, en muchos aspectos su
nutrición saprozoica, los nutrientes solubles como la morfología y la fisiología son las mismas que las células de plantas y animales
Los aminoácidos y los azúcares atraviesan la membrana plasmática por endocitosis, multicelulares. Sin embargo, debido a que toda la vida es variada
difusión o transporte mediado por transportadores (difusión facilitada). las funciones deben realizarse dentro de una sola célula, la complejidad
o transporte activo). Los mecanismos por los cuales los nutrientes solubles surge a nivel de orgánulos especializados en lugar de en el tejido
se asimilan a veces se denominan colectivamente osmotrofia. nivel. Los protistas deben permanecer relativamente pequeños porque sin
Es difícil clasificar las estrategias nutricionales de algunos protistas. Ciertos multicelularidad para facilitar el intercambio de nutrientes y metabolitos,
protistas pueden obtener energía a través de la oxidación de sustratos orgánicos necesitan una alta relación entre la superficie celular y el volumen intracelular. Esta
pero asimilan compuestos orgánicos de carbono. Algunos se debe a que la distancia desde la membrana celular hasta el centro de la
usar simultáneamente formas orgánicas e inorgánicas de carbono; la célula no puede exceder la distancia que una molécula puede difundir. Incluso el
esto a veces se denomina mixotrofia. Esta flexibilidad metabólica es claramente Las algas más grandes (las algas marinas) son largas, delgadas y, a menudo, aplanadas.
evidente en aquellas formas como los dinoflagelados que estas son formas que maximizan la relación superficie-volumen.
puede realizar la fotosíntesis y la alimentación holozoica al mismo tiempo. La membrana de la célula protista, llamada plasmalema, es idéntica a la de los
organismos multicelulares. En algunos protistas, el citoplasma inmediatamente
debajo del plasmalema se divide en un
25.3 MORFOLOGÍA
región gelatinosa externa llamada ectoplasma, y un líquido interno
Antes de describir características morfológicas específicas, es útil región, el endoplasma. El ectoplasma imparte rigidez a la célula.
para definir los términos ameba y ciliado. Más viejo, ahora desacreditado cuerpo. El plasmalema y las estructuras inmediatamente debajo de él.
Los esquemas de clasificación colocaron a todos los protistas ameboides y ciliados en se denominan película. Una o más vacuolas suelen estar presentes.
la “Sarcodina” y la “Infusoria”, respectivamente. Si bien estos términos en el citoplasma de los protozoos. Se diferencian en vacuolas contráctiles, secretoras
pueden seguir siendo útiles para describir protistas que demuestran motilidad de y alimenticias. Las vacuolas contráctiles funcionan como orgánulos osmorreguladores
ameboide y ciliado, no describen monofilético en aquellos protistas que viven en
grupos Por lo tanto, en este capítulo, "amebas" y "ciliados" no son ambientes hipotónicos, como lagos de agua dulce. El equilibrio osmótico se mantiene
términos taxonómicos, más bien, son adjetivos, al igual que nosotros mediante la expulsión continua de agua. La mayoría marina
podría describir arqueas flageladas o bacterias vibroides. y las especies parásitas son isotónicas a su entorno y carecen
608 Capítulo 25 Los protistas
acetil-CoA a acetato produce un ATP (ver figura 19.4). Debido a que los hidrogenosomas
carecen de un ciclo completo de ácido tricarboxílico, el acetato
debe ser excretado. Los productos finales de fermentación pueden consumirse
por procariotas simbiontes que viven dentro del protista. En algunos casos,
Las arqueas metanogénicas consumen CO2 y H2 y generan
metano. La evidencia reciente sugiere que los hidrogenosomas y
las mitocondrias evolucionaron a partir del mismo derivado endosimbióticamente
Ameba leidiopsis orgánulo. Los protistas fotosintéticos tienen cloroplastos con membranas lacoideas.
Un área proteica densa, el pirenoide,
que se asocia con la síntesis y el almacenamiento de almidón, puede
estar presente en los cloroplastos. Evolución microbiana (sección 19.1)
Muchos protistas presentan cilios o flagelos en algún punto de su
ciclo vital. Su formación está asociada con un organelo basal parecido a un cuerpo
llamado cinetosoma, que es similar en estructura al
centríolo. Además de ayudar en la motilidad, estos orgánulos pueden
utilizarse para generar corrientes de agua para la alimentación y la respiración. Debido
a que no existe una diferencia morfológica precisa entre flagelos y cilios, algunos
científicos prefieren llamarlos a ambos.
didinio undulipodia (que significa “pie ondulado”). Cilios y flagelos (sección 4.10)
podofria Codonosiga
Figura 25.2 Métodos de alimentación holozoicos entre los 1. ¿En qué se diferencian los términos protozoos y algas del término protista?
2. ¿En qué hábitats se pueden encontrar los protistas?
Protistas. La ameba usa seudópodos para rodear a las bacterias. Leidy opsis vive
en las entrañas de las termitas, donde utiliza pseudópodos para 3. ¿Qué papeles juegan los protistas en la estructura trófica de sus comunidades y
en los organismos con los que se asocian?
atrapar partículas de madera. El ciliado Didinium come solo Paramecium
4. ¿Qué es un hidrogenosoma? ¿En qué se diferencia de una mitocondria?
(un ciliado más grande) a través de un citostoma temporal. Usos de Podophyra
5. Traza la ruta de un alimento desde la vacuola fagocítica hasta el citoprocto.
tentáculos para adherirse primero a su presa y luego succionar el citoplasma de la presa
en su cuerpo donde se digiere en las vacuolas de alimentos. El protista sésil
Codonosiga tiene un collar de microvellosidades; los flagelos ayudan a barrer la comida
partículas suspendidas en agua en el collar. A pesar de esta variedad, todos

estos métodos de alimentación se consideran formas de pseudópodos.
25.4 ENCUSTAMIENTO Y EXCUSTAMIENTO
Muchos protistas son capaces de enquistarse. Durante el enquistamiento, el
organismo se desdiferencia (se vuelve más simple en morfología) y
tales vacuolas. Las vacuolas fagocíticas son conspicuas en el holozoico.
se convierte en una etapa de reposo llamada quiste. El quiste está latente
y especies parasitarias y son los sitios de digestión de los alimentos. En algunos
forma marcada por la presencia de una pared celular y por una actividad metabólica
organismos, pueden ocurrir en cualquier parte de la superficie celular, mientras que
muy baja. La formación de quistes es particularmente común entre
otros tienen una estructura especializada para la fagocitosis llamada citostoma (boca
acuáticos, protistas de vida libre y formas parásitas. Los quistes sirven tres
celular). Cuando comienza la digestión, la vacuola fagocítica es ácida, pero a medida
funciones principales: (1) protegen contra cambios adversos en el
que avanza, el pH vacuolar
medio ambiente, tales como deficiencia de nutrientes, desecación, adversidad
aumenta y la membrana forma pequeñas vesículas. Estos pellizcan
pH y baja presión parcial de O2; (2) son sitios para nucleares
y transportan nutrientes por todo el citoplasma. el no digerido
reorganización y división celular (quistes reproductivos); y (3) ellos
el contenido de la vacuola fagocítica original es expulsado del
servir como un medio de transferencia entre huéspedes en especies parásitas. Aunque
célula ya sea en un sitio aleatorio en la membrana celular (como es el caso
el estímulo exacto para el desenquistamiento (escape de los quistes)
con amebas) o en una posición designada llamada citoprocto.
se desconoce, generalmente se desencadena por un retorno a las condiciones
Organelos de las vías biosintético-secretora y endocítica (sección 4.4)
ambientales favorables. Por ejemplo, quistes de especies parásitas
Se observan varios orgánulos de conservación de energía en los protistas.
exquistan después de la ingestión por el huésped y forman la forma vegetativa
La mayoría de las formas quimioorganotróficas aeróbicas tienen mitocondrias con
llamado trofozoíto.
crestas que se caracterizan por su apariencia física: son
puede ser discoide, tubular o lamelar; La morfología de las crestas tiene valor fiscal.
La mayoría de los protistas anaeróbicos (como Tricho nympha, que vive en el intestino
25.5 REPRODUCCIÓN
de las termitas) carecen de mitocondrias y
citocromos y tienen un ciclo de ácido tricarboxílico incompleto. La mayoría de los protistas se reproducen asexualmente y algunos también realizan actividades sexuales.
Sin embargo, algunos tienen pequeños orgánulos unidos a la membrana denominados reproducción. El método más común de reproducción asexual.
hidrogenosomas. Dentro de estos orgánulos, el piruvato derivado de es fisión binaria. Durante este proceso, el núcleo primero sufre
La glucólisis se oxida y se descarboxila para formar CO2, H2 y mitosis, luego el citoplasma se divide por citocinesis para formar dos
la molécula de alta energía acetil-CoA. La conversión de cada individuos idénticos (figura 25.3). La fisión múltiple también es com
Clasificación de protistas 609
con un único nucléolo asociado a un cromosoma. Finalmente,

los Ciliophora tienen dos tipos de núcleos: un gran macronúcleo
con nucléolos distintos y cromatina condensada y una más pequeña,
micronúcleo diploide con cromatina dispersa pero sin núcleos. Los macronúcleos
(a) Arcella están involucrados en actividades tróficas y procesos de regeneración, mientras
que los micronúcleos están involucrados solo en procesos genéticos.
recombinación durante la reproducción sexual y la regeneración de
el macronúcleo.
1. ¿Qué funciones cumplen los quistes para un protista típico? ¿Qué causa que ocurra el
desenquistamiento?
2. ¿Qué es un gamonte? ¿Cuál es la diferencia entre anisogamia y singamia?

(b) Euglifa
3. ¿En qué se diferencia la conjugación de la autogamia?
4. Describir los núcleos vesicular, ovular y cromosómico. ¿Cuál es más como el
núcleos que se encuentran en los eucariotas superiores?
25.6 CLASIFICACIÓN DE PROTISTAS

(c) Tripanosoma (d) Euglena
Desde que Antony van Leeuwenhoek describió el primer “animálculo” protozoario
en 1674, la clasificación taxonómica de estos
Figura 25.3 Fisión binaria en protistas. (a) Los dos núcleos de
microbios ha permanecido en flujo. Durante el siglo XX se utilizaron esquemas de
la ameba testada (sin cáscara) Arcella se divide como parte de su citoplasma
clasificación basados en la morfología funcional más que en las relaciones
se extruye y se secreta una nueva prueba para la célula hija. (b) En
evolutivas. La aplicación de moléculas
otra ameba testada, Euglypha, la secreción de nuevas plaquetas es
técnicas está proporcionando nuevos conocimientos sobre la sistemática protista y,
comenzado antes de que el citoplasma comience a salir de la abertura.
el núcleo se divide mientras que las plaquetas se utilizan para construir la prueba para
en la mayoría de los casos, análisis morfológicos y bioquímicos modernos
están de acuerdo con los datos filogenéticos moleculares. La publicación de 2005
la célula hija. Para muchos protistas, todos los orgánulos deben replicarse.
de la Sociedad Internacional de Protistólogos de un nivel superior
antes de que la célula se divida. Este es el caso de (c) Trypanosoma y (d)
esquema de clasificación de todos los eucariotas con énfasis en el
Euglena.
protists proporciona un consenso necesario desde hace mucho tiempo (tabla 25.2). Tenga en cuenta que
este esquema no utiliza designaciones de rango jerárquico formales
mon, como está en ciernes. Algunos protistas fotosintéticos filamentosos como la clase y el orden, lo que refleja el hecho de que la taxonomía protista
sigue siendo un área de investigación activa.
someterse a fragmentación para que cada pieza del filamento roto
crece de forma independiente.
La mayoría de los protistas también experimentan reproducción sexual en algún momento.
Súper Grupo Excavata
en su ciclo de vida. Las células protistas que producen gametos se denominan
montes ga. La fusión de gametos haploides se denomina singamia. Entre La Excavata incluye algunos de los más primitivos, o profundamente
protistas, la singamia puede implicar la fusión de dos morfológicamente ramificación, eucariotas (figura 25.1). La mayoría posee un citostoma
gametos similares (isogamia) o la fusión de tipos morfológicamente diferentes caracterizado por una ranura de alimentación de suspensión. este aparato
(anisogamia). La meiosis puede ocurrir ya sea antes de la cuenta con un flagelo dirigido posteriormente para generar una corriente que
formación y unión de gametos, como en la mayoría de los animales, o justo después permite la captura de pequeñas partículas de una corriente de alimentación.
fertilización, como también es el caso de las plantas inferiores. Además, el Se presume que aquellos que carecen de esta característica morfológica tienen
el intercambio de material nuclear puede ocurrir de la manera habitual: tenido en algún momento durante su evolución, es decir, es
entre dos individuos diferentes (conjugación) , o por el desarrollo de un núcleo Se cree que se perdió secundariamente.
genéticamente distinto dentro de un solo
individuo (autogamia). Fornicata
Con este nivel de complejidad reproductiva, quizás no sea Siempre curioso, Anton van Leeuwenhoek describió la Giardia intesti nalis (figura
sorprende que los núcleos entre los protistas muestren una diversidad considerable. 25.4) a partir de sus propias heces diarreicas. Más de 300 años
Más comúnmente, un núcleo vesicular está presente. Esto es más tarde, esta especie sigue siendo un problema de salud pública. Hoy dia
caracterizado por un núcleo de 1 a 10 m de diámetro, esférico, con un nucléolo con mayor frecuencia infecta a los campistas y otras personas que, sin darse
distinto y cromosomas no condensados. cuenta, consumen agua contaminada. Miembros de la Fornicata
Los núcleos ovulares son hasta 10 veces más grandes y poseen muchos llevan flagelos y carecen de mitocondrias. A diferencia de Giardia, la mayoría son
nucléolos periféricos. Todavía otros tienen núcleos cromosómicos, en simbiontes inofensivos. Las pocas formas de vida libre son más a menudo
cual los cromosomas permanecen condensados a lo largo de la interfase que se encuentran en aguas muy contaminadas con nutrientes orgánicos (un
610
Rizaria Amoebozoa arqueplastos
opistokonta Súper
grupo
Cuadro
25.2
Clasificación
de
los
protistas
propuesta
por
la
Sociedad
Internacional
de
Protistólogosa
Poseer
pseudópodos
delgados
(filopodios) Motilidad
ameboide
con
lobopodios; Plastido
fotosintético
con
clorofila
a Durante
al
menos
una
etapa
del
ciclo
de
vida,
Funciones
unificadoras
desnudo
o
testado;
mitocondrias
con
crestas
tubulares;
generalmente
uninucleado,
aveces
multinucleado;
quistes las
células
tienen
un
cilio
posterior
único
sin
mastigonemas
(cinetosomas
o
centríolos
similares
a
pelos;
cuando
son
unicelulares,
las
mitocondrias
tienen
proyecciones
de
crestas
planas
en
los
flagelos);
poseer
común del
endosimbionte
cianobacteriano
ancestral,
plástido
perdido
más
tarde
en
algunos;
utiliza
almidón
como
producto
de
almacenamiento;
generalmente
tienen
una
pared
celular
hecha
de
celulosa
eumicetozoos pelomixa Mastigamoebidae Entamoebida Acanthamoebidae Flabelinea Rhodophycae mesomicetozoos
Cercozoa estereomixida tubulina cloroplastida glaucofita Choanomonada Primer
puesto
biciliados
y/
o
ameboides;
la
mayoría
tiene
mitocondrias
con
crestas
tubulares;
muchos Organismos
ameboides
que
producen
estructuras
similares
a
cuerpos
fructíferos;
tanto
mohos
mucilaginosos
celulares
como
acelulares.
Incluye
Dictyostelium,
Physarum,
Hemitichia
yStemonitis. Múltiples
cilios;
anaeróbico;
carecen
de
mitocondrias,
hidrogenosomas
yperoxisomas; Ameboide
con
varios
pseudópodos;
flagelo
único
que
se
proyecta
hacia
adelante;
único Sin
flagelos
ni
centríolos;
Carece
de
mitocondrias,
hidrogenosomas
yperoxisomas. Organismos
plasmodiales
ramificados
o
reticulados;
centrosoma
trilaminado.
Incluye Amibas
aplanadas
que
carecen
de
pseudópodos
tubulares;
motilidad
basada
en
actinomicosina Desnuda
o
testada
con
pseudópodos
tubulares;
carece
de
centrosomas;
motilidad
basada
en Pirenoide
a
menudo
dentro
del
plástido,
que
presenta
clorofilas
ayb
celulosa
; ficobiliproteínas
yotros
pigmentos;
incluye
flagelados
yno
El
plástido
es
una
cianela
que,
a
diferencia
de
los
cloroplastos,
tiene
peptidoglicano
entre Radialmente
simétrica;
fagotrófico
con
collar
de
microvellosidades
que
rodean
un
solo La
mayoría
tiene
mitocondrias
con
crestas
planas;
característica
de
una
omás
etapas
del
ciclo
de
vida
Glicocálix
fino;
subpseudópodos
prominentes
que
se
estrechan
hasta
convertirse
en
una
punta
roma
o
fina Faltan
etapas
flageladas,
cinetosoma
ycentríolos,
tilacoides
no
apilados; Descripción
general
Pelomixa
paulstris. Acanthamoeba,
Balamuthia
yProtacanthamoeba. Podostoma,
Sappinia
yThecamoeba. Nitella
yVolvox. flagelo;
las
mitocondrias
tienen
crestas
planas;
solitario
o
colonial.
Incluye
Monosiga,
Salpingoeca
yStenphanoeca.
ciclo
de
vida
polimórfico
con
etapas
multinucleadas;
algunos
son
simbiontes.
Incluye cinetosoma
ynúcleo,
aunque
algunos
multinucleados;
carece
de
mitocondrias; las
dos
membranas;
tilacoides
apilados
con
clorofila
ayespecies
o
etapas
del
ciclo
de
vida.
Incluye
Cyanophora,
Glaucocystis
yGloeochaeta. células
esféricas;
un
flagelo
posterior
oameboide;
algunos
tienen
estadios
parásitos,
no
flagelados
yendosporas;
algunos
tienen
etapas
tróficas
que
cuentan
con
una
pared
celular.
Incluye
Aphelidium,
Dermocystidium,
Ichthyophonus
yNuclearia.
crear
envoltura;
cinetosomas
conectados
al
núcleo
con
citoesqueleto.
Incluye yMastigamoeba. Habita
en
ambientes
bajos
en
oxígeno
a
anóxicos
yricos
en
nutrientes.
Incluye
Mastigella Incluye
Entamoeba. en
el
citoesqueleto
de

Microbiología Español

Cargado por

Información del documento

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Microbiología Español

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Machine Translated by Google

Machine Translated by Google

Prescott, Harley y Klein

PRESCOTT, HARLEY Y LA MICROBIOLOGÍA DE KLEIN, SÉPTIMA EDICIÓN

Editorial: Colin Wheatley/ Janice Roerig-Blong

Diseñador: John Joran

Datos de catalogación en publicación de la Biblioteca del Congreso

Este texto está dedicado a nuestros mentores: John Waterbury, Richard

Parte I Introducción a la Microbiología 21 Bacterias: los deinococos y las no proteobacterias

4 Estructura y función de las células eucarióticas 79 25 Los Protistas 605

26 Los Hongos (Eumycota) 629

Parte II Nutrición Microbiana, Crecimiento,

Parte III Metabolismo Microbiano 30 interacciones microbianas 717

8 Metabolismo: energía, enzimas y regulación 167

191 Parte IX Resistencia no específica (innata)

32 Inmunidad específica (adaptativa) 773

12 Genética Microbiana: Regulación de la Expresión Génica 291 34 Quimioterapia antimicrobiana 835

36 La epidemiología de las enfermedades infecciosas 885

Parte VI Los Virus Parte XI Microbiología Alimentaria e Industrial

18 Los Virus: Virus Eucarióticos y Otros Acelulares

Acerca de los autores xi 4.7 Cloroplastos ÿ 90

3.1 Descripción general de la estructura de las células procarióticas 39

3.10 Quimiotaxis 3.11 La 71 149

Parte III Metabolismo Microbiano ÿ Cositas microbianas 11.2:

11.7 El código genético 275

9 Metabolismo: liberación y conservación de energía 191 13 Genética Microbiana: Mecanismos

autótrofos 10.4 Síntesis de azúcares y polisacáridos 228 recombinante 366

11 Genética Microbiana: Estructura Genética, 15 Genómica microbiana 383

Parte VI Los Virus 20 Las arqueas 503

26.2 Importancia 26.3 630

Suelos, plantas y nutrientes 689

29.8 Microorganismos del suelo y salud humana 711

849 Enfermedad 38.3: estafilococos resistentes a los antibióticos ÿ 972

36 La epidemiología de las enfermedades infecciosas 885 Parte XI Microbiología Alimentaria e Industrial

41.8 Microbios como productos 1082

Apéndice I Una revisión de la química

Apéndice II Metabólico Común

Sobre los autores

años, ha impartido cursos de microbiología general, genética, biología, genética

9 El malato se oxida, NADHH _

5 El último carbono de la glucosa se

Integración Temática CAMBIOS A LA SÉPTIMA EDICIÓN

ciones de Microbiología puede notar que, además de las preguntas que

Giardia Capítulo 1: Introducción ampliada a los tres dominios de la vida y los

Escritura para la comprensión de los estudiantes

Nuestro objetivo como nuevo equipo de autores era conservar el estilo de

Programa de arte significativamente mejorado El

Parte IV se trasladó al capítulo 41, Microbiología aplicada e industrial.

describir los principales pasos involucrados en la construcción de cuerpo humano es un ecosistema.

moléculas de ADN recombinante con énfasis en que

Parte VII Parte X

2. Defina resolución, apertura numérica, distancia de trabajo y fluorocromo. Fijación

observación. Por lo general, un microorganismo muere y se adhiere firmemente al portaobjetos del

de células (un frotis) se calienta suavemente a medida que se pasa un portaobjetos

El ARN antisentido puede unirse al ARNm y

La unión de un metabolito a un ribointerruptor en el Proteína

Proteína funcional (B)

en esta edición, que describe temas críticos.

Resúmenes de los capítulos

numerados y brindan una instantánea de los conceptos importantes de

colorantes ácidos tinción diferencial 26 tinción Tinción de Gram 26 resolución 18

distancia focal 18 punto focal 18 18 de subplatina 18 microscopio electrónico

grupos de cromóforos 26 grabado por congelación 30 parfocal 18 de transmisión

microscopio láser de barrido confocal microscopio de contraste de fase 21