TEMA 1

CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LAS TÉCNICAS

INMUNOLÓGICAS

1. La respuesta inmunitaria
1.1. Órganos y tejidos
1.2. Células del sistema inmune
1.3. Ag (Inmunógenos)
1.4. Ac
1.5. Mecanismos inespecíficos
1.6. Mecanismos específicos
2. Dinámica de la respuesta humoral
3. Diagnóstico y seguimiento de las enfermedades infecciosas
4. Técnicas inmunológicas
4.1. Obtención de Ag
4.2. Obtención de Ac
4.3. Fundamentos de las técnicas
 1. LA RESPUESTA INMUNITARIA

El sistema inmunitario es el conjunto de órganos, células, moléculas y mecanismos que

protegen al organismo de agentes infecciosos o de células propias infectadas y/o alteradas.

Componentes del sistema inmune:

- Células: Linfocitos, macrófagos y granulocitos

- Moléculas solubles – Ac
- Órganos

1.1 Órganos y tejidos

Órganos linfoides:

- Primarios: (A.)Médula ósea y (B.)timo

- Secundarios: Adenoides, (E.)amígdalas, placas de Peyes,(C.) ganglios linfáticos y
(D.)bazo.
 PRIMARIOS: Aquellos en los que las células linfoides experimentan un proceso de
proliferación y diferenciación que no requiere la presencia de Ag extraños y aprenden
a distinguir lo propio de lo ajeno.
 SECUNDARIOS: En estos órganos los linfocitos T y B maduros toman contacto con el
Ag. De esta forma se activan y proliferan dando lugar a subproducciones afectadas y
células de memoria.

A. Médula ósea: Sistema principal donde se desarrolla la hematopoyesis. Existen dos

tipos:
o M.O. roja (hematopoyética): Es donde tiene lugar la formación de células
sanguíneas.
o M.O. amarilla: Se localiza en la parte más interna de los huesos anchos y en la
epífisis de los huesos largos. Los linfocitos B se forman y maduran. Los
linfocitos T se forman y maduran en el timo.

B. Timo: Se desarrolla hasta la pubertad y luego se atrofia hasta desaparecer. En él se

realiza el proceso de diferenciación, especificidad y funcionalidad de los Linfocitos T.

C. Ganglios linfáticos: Se forman por el engrosamiento de o unión de 2 o más vasos

linfáticos. Son abundantes en íngles, abdomen, tórax, axilas y cuello.
Contienen linfocitos T y B que realizan su maduración final.

D. Bazo: Pequeño órgano situado en el hipocondrio izquierdo, por detrás del estómago.
Se distingue:
- Pulpa blanca  Tejido linfoide.
- Zona marginal  Filtrado y selección de células deterioradas.
- Pulpa roja  Zona selectiva en el filtrado y eliminación de hematíes.
Si se extirpa el hígado, el bazo comienza a tomar sus funciones.

E. Amígdalas: Agregados de folículos linfoides encapsulados de manera incompleta.

3 tipos:
o Palatinas Forman el anillo linfático de
o Faríngeas o adenoides Waldeyer
o Linguales
Su función es importante frente a Ag inhalados o ingeridos.

F. Tejido linfoide asociado a mucosas (MALT): En varias regiones corporales. Tejido

linfoide no encapsulado. Está presente en el intestino (GALT), en el árbol bronquial
(BALT) y en las mucosas urogenitales.
1.2. Células del sistema inmunitario

- Linfocitos (B, T, Células Natural Killers)

Linfocitos B:

Participan en la respuesta inmunitaria adquirida o específica de tipo humoral. Los LB maduros

expresan el BCR (receptor de linfocitos B) capaz de reconocer el antígeno directamente sin
intervención de otra célula.

Presentan en su superficie:

- IF: CD9, CD29, CD21, CD22, CD24, CD38

- Receptores de la región Fc de Ig(FcR) -> región del anticuerpo que no se une al antígeno
- Moléculas de clase II del MHC (complejo mayor de histocompatibilidad)

Dan lugar a células plasmáticas y LB de memoria.

Los receptores de los linfocitos B están formados por:

- Inmunoglobulina  Ig Mm (monomérica)
- 2 Cadenas Ig α
- 2 Cadenas Ig β

Linfocitos T:

Se llaman así debido a que maduran en el Timo. Varios tipos:

- Linfocitos Tc (citotóxicos)(CD8+): Destruyen células infectadas y producen sustancias que

atraen a los macrófagos.
- Linfocitos Th (cooperaivos/colaboradores)(CD4 / T4): Desencadenan la producción de
anticuerpos por los linfocitos B y la activación de los Tc.
Tras el reconocimiento y activación de los LT, estos se diferencian como LTh efectores en
diferentes subpoblaciones, cada una de las cuales tiene un parón específico de
producción de citoquinas. Las primeras son:
 LTh1: responde a patógenos intracelulares
 LTh2: responde a patógenos extracelulares
 LTh17: responde a hongos
- Linfocitos Ts (supresores): ‘’Desconectan’’ o suprimen la respuesta inmunitaria.

Todos los LT maduros presentan en su superficie los marcadores de membrana CD2, CD3 y
CD7.

Los LTh expresan CD4 y los LTc expresan CD8+.

También expresan receptores de antígenos específicos  TCR.

Estos receptores reconocen Ag extraños pero solo si van unidos a una molécula MHC (Clase I
en caso de LTc y de clase II en caso de LTh).
Células Natural Killer:

Interviene en la respuesta inmunitaria celular innata o inespecífica. Carecen de los marcadores

de membrana de los linfocitos T y B.

Poseen CD16, CD56 y CD57.

Función  Lisis de células tumorales y células infectadas.

-Monocitos

Se diferencian en los tejidos, formando macrófagos (principales células fagocíticas del SI).

-Granulocitos

- Neutrófilos: Destruyen bacterias por fagocitosis.

- Eosinófilos: Función antiparasitaria, regulan las reacciones alérgicas y fagocíticas.

- Basófilos: En los gránulos citoplasmáticos existe histamina (vasodilatador) y heparina

(Anticoagulante). Se encargan de las reacciones de hipersensibilidad y en la inmunidad
contra parásitos.

-Células dendríticas

Se originan en los monocitos y macrófagos, actúan principalmente como células presentadoras

de antígeno. Existen distintas líneas.

1.3. Antígenos (Ag) o Inmunógenos

Compuestos de diversa naturaleza química provenientes del medio ambiente o que se han
generado dentro del propio cuerpo humano. Son capaces de inducir una respuesta
inmunitaria.

Los Epítopos/Determinantes antigénicos son fragmentos de la molécula del antígeno,

generalmente estructuras de superficie, reconocidos específicamente por los anticuerpos.

Un Ag puede poseer más de un epítopo, produciéndose Ac específicos para cada uno de ellos.

Factores que determinan el poder antigénico de una sustancia:

o Dosis
o Tamaño (suelen ser de tamaño grande)
o Estructura química  Polar
o Calidad de extraño (Existen parásitos que poseen moléculas similares a las de
nuestro organismo, que evitan ser detectados por los Ac)
o Proteínas > Carbohidratos > Lípidos > Ácidos nucleicos

1.4. Anticuerpos (Ac)

Son Inmunoglobulinas que poseen una capacidad para reconocer de una forma específica a
otras moléculas extrañas del organismo.

Son α-Globulinas e intervienen en el sistema inmunitario a dos niveles:

- Como parte del BCR presente en la membrana de los LB

- Como moléculas circulantes (Ac)

ESTRUCTURA (Cuatro cadenas protéicas):

 2 ligeras (L)
 2 pesadas (H)

Cada cadena ligera está unida a una pesada por un puente disulfuro. Las dos cadenas pesadas
están unidas entre sí por puentes disulfuro también.

Se organizan formando una Y. La región bisagra es la zona donde confluyen los tres brazos de
la Y. Aportan movilidad a la molécula.

Dentro de cada cadena se pueden distinguir distintas regiones. La ligera tiene una región
variable (VL) y otra constante (CL). Las pesadas solo tienen una región variable (V H) y 3 o 4
constantes (CH).

Dentro de las regiones variables hay segmentos polipeptídicos cortos cuya secuencia de
aminoácidos es aún más variable que el resto. A estas regiones se las denomina regiones
hipervariables o regiones determinantes de la complementariedad (CDR).
La porción de las regiones hipervariables que entra en contacto con el antígeno se denomina
paratopo, y es la zona que se une al epítopo.

Mediante una molécula proteolítica, la Papaína, se rompe la molécula del Ac en tres

fragmentos:

 2 Fragmentos Fab: Interaccionan con el Ag.

 Fragmento Fc: Activan el complemento, recubren patógenos..

Fragmentos Fab

Fragmento Fc

- CLASES DE INMUNOGLOBULINAS

Ig M: Son los primeros que se producen. No tienen regiones bisagra, asique no se adaptan bien
a los Ag. Aparecen como antenas en los Linfocitos B. PENTAVALENTE.

Ig G: Se generan después que las Ig M. pueden atravesar la placenta y proteger al feto. Indican
que la infección es un proceso antiguo.

Ig A: También aparecen después que las Ig M. Presentes en saliva, moco, leche… debido a que
las secreciones evitan su degradación.
Ig D: Sustituyen a las Ig M y tienen más afinidad con estos. Son los receptores de los LB.

Ig E: Inmunoglobulina de alta afinidad. Se encargan de mediar en los procesos alérgicos y su

función principal es eliminar parásitos como gusanos.

1.5. Mecanismos inespecíficos de protección

Constituyen la inmunidad inespecífica, innata o natural

Barreras físicas y químicas

Células sanguíneas (neutrófilos, macrófagos, células NK)

Proteínas (interferón y complemento)

Son células citotóxicas; capaces de
reconocer a células infectadas por
virus, células cubiertas por Ac tipo
G (IgG) y a células tumorales a las
que atacan y destruyen. Las
reconocen por no tener el MHC
adecuado o tenerlo dañado.

Producen perforina, una proteína

que se inserta en la membrana de
las células atacadas, generando
agujeros por los que pasan
enzimas que destruyen la célula.
 La respuesta inflamatoria es parte
de la inmunidad innata y se
presenta cuando los tejidos son
lesionados por bacterias, traumas,
toxinas, calor o cualquier otra
causa.

Las sustancias químicas,

incluyendo la histamina,
serotonina.. son liberadas por el
tejido dañado y hacen que los
vasos sanguíneos derramen
líquido en los tejidos, lo que
deriva en una inflamación
localizada. Esto ayuda a delimitar
y aislar la sustancia extraña del
contacto con otros tejidos.

1.6. Mecanismos específicos de protección

Estos mecanismos se activan tras el reconocimiento de agentes concretos. Tienen por tanto la
característica de especificidad.
Los linfocitos T colaboradores activados se convierten en efectores con diversas funciones:

- Activan a los macrófagos para que resulten más efectivos en la destrucción de

microorganismos intracelulares.
- Colaboran con los Linfocitos T citotóxicos y con los Linfocitos B.

 Dinámica de la respuesta celular

Es ejercida por los linfocitos Tc. Su finalidad primordial es la eliminación de las células propias
infectadas por virus o por bacterias intracelulares y de las células neoplásicas.

Los linfocitos Tc se activan en los órganos linfoides secundarios por la interacción de los
linfocitos Tc con las células presentadoras de antígeno.

Los linfocitos T citotóxicos activados se especializan en la destrucción de células propias

infectadas por microorganismos intracelulares. Los LT citotóxicos efectúan un doble
reconocimiento:

- Reconocen al antígeno a través del receptor de célula T (TCR), que es específico para ese
antígeno.
- Reconocen a la célula propia por la presencia del CMH de clase I.

El reconocimiento del Ag por parte del Linfocito Tc desencadena la exposición en la membrana

de estos receptores de citoquinas. Una vez activados los LTc, destruyen la célula infectada. Las
células T activadas secretan:

- Perforina: Proteína que agujerea la membrana de la célula infectada. Las perforinas

provocan cambios en el equilibrio osmótico, con lo que se produce la lisis celular.
- También, las células T citotóxicas liberan enzimas hidrolíticas que provocan la muerte
celular de la célula infectada.
2. RESPUSTA INMUNE HUMORAL

Si un macrófago o una célula

emparentada fagocita a un
microoganismo, lo degrada,
presentando Antígenos unidos al
MHC-II (del macrófago) en la
superficie de su membrana.
RESUMEN DEL PROCESO:
2.1 Actuación de los Ag-Ac
3. DIAGNÓSTICO Y SEGUIMIENTO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS

Se efectúa en dos fases:

- 1: Diagnóstico de presunción o sospecha: estudio de las manifestaciones clínicas y

antecedentes epidemiológicos.
- 2: Diagnóstico de certeza o confirmación: se basa en el hallazgo del agente etiológico en
muestra biológica o en la respuesta en el S.I.

 Diagnóstico serológico de las enfermedades infecciosas.

El diagnóstico de certeza se puede realizar mediante:

- Identificación del agente patógeno

- Detección de Ag o Ac a través de técnicas de inmunodiagnóstico

Las técnicas de inmunodiagnóstico se pueden aplicar a distintas muestras biológicas, pero la

más frecuente es el suero. Por este motivo se habla de diagnóstico serológico.

Generalmente se detectan Ac . Se puede hacer un seguimiento de los niveles séricos de Ac y de

su dinámica a lo largo de la infección. También se pueden detectar diferentes clases de Ig, lo
que es importante para conocer la fase de la enfermedad.

La detección de IgM indica que la infección está en fase aguda, mientras que la IgG demuestra
una fase más avanzada de la infección.

 Respuesta primaria y secundaria

Respuesta primaria: Se produce la primera vez que se entra en contacto con el Ag. Se
producen AC IgM en dosis moderadas.

Respuesta secundaria: Si se repite el ataque, se desencadena la respuesta más rápidamente y

se producen más Ac de tipo IgG. También dura más tiempo y su declive es también más lento.

La dinámica de estas respuestas depende de estos factores:

o Dinámica del suero: En fase de latencia, la respuesta secundaria se acorta y se

prolonga la fase de meseta, así como la fase de disminución.
o Nivel de Ac: Mayor.
o Isotipo del Ac: En la respuesta primaria se produce IgM y en la secundaria
IgG.
o Afinidad de los Ac: Es mayor en la respuesta secundaria.
- En recién nacidos, la determinación de IgM en suero indica respuesta activa del sistema
inmune.
- Generalmente se cuantifican las principales Ig (G, M, A). La IgE requiere técnicas más
sensibles. La determinación de IgD no tiene utilidad clínica.
*IMPORTANTE*: DESPUÉS DEL PRIMER CONTACTO, EL PICO QUE INDICA LAS IgG ES MÁS ALTO
Y ASCIENDE MÁS RÁPIDO. TAMBIÉN DURA MÁS SU PRESENCIA.

4. TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS

Se basan en la detección de los inmunocomplejos que se forman in vitro gracias a las

propiedades de los Ac de unirse específicamente al Ag que desencadenó su producción en el
organismo.

La producción in vitro de las reacciones de Ag-Ac implica la necesidad de disponer de Ag y Ac

en el laboratorio.

4.1 Obtención de los Antígenos

Mediante purificación de Ag concretos, liberación de proteínas. Se utilizan para cultivos de

Antígenos secretados o de excreción-secreción y para ingeniería genética.

4.2 Obtención de Anticuerpos

La capacidad del sistema inmunológico de producir Ac capaces de unirse específicamente a Ag

se puede aprovechar para la detección de moléculas de interés.

Muchas aplicaciones de investigación y diagnóstico. Los Ac se pueden purificar, marcar y

detectar de manera reproducible mediante técnicas estandarizadas.
 - Tipos de Anticuerpos

a) Ac heterófilos: En la naturaleza existen Ag que, aunque difieren de su procedencia, son

semejantes estructuralmente. Los Ac que se producen en respuesta a éstos Ag se
denominan heterófilos. Son IgM y se caracterizan por aglutinar eritrocitos (en pruebas
con hematíes de carnero).

b) Ac policlonales: Un solo Ag puede presentar diferentes epítopos en su estructura, por

lo que pueden activarse distintos clones de Linfocitos B, que producen diferentes Ac.
Cada uno presenta diferente especificidad frente a un epítopo concreto del Ag. Por
tanto, el suero tendrá diferentes Ac que se denominan policlonales.
Se obtienen en animales. Se les administran Ag (100-500 µg para conejos y 10-100 µg
para ratón) junto con un adyuvante* para producir inmunización primaria. Se espera
de uno a seis meses para generar una buena memoria inmunológica.
*Adyuvante  Sustancia que se utiliza para ayudar a reforzar la respuesta inmunitaria.
Adyuvante de Freud: Aceite mineral + microbacterias muertas.

c) Ac monoclonales: Son Ac de un único clon de Linfocitos B. La técnica de obtención fue

desarrollada en 1975 por Köhler y Milstein, desarrollando la técnica de genereación de
hibridomas. Éstos se producen mediante la fusión de las células del bazo secretoras de
Ac procedentes de animales inmunizados con líneas celulares de mieloma.
Los hibridomas pueden crecer en cultivo (in vitro) para la recogida de Ac del
sobrenadante o en la cavidad peritoneal de un ratón (in vivo).

4.3 Fundamentos de las técnicas inmunológicas

La formación de inmunocomplejos es la base de éstas técnicas.

Pueden detectar:

- Reacciones de aglutinación: Cada Ac se une a varios Ag y cada uno de éstos a varios Ac.
Se forma una red de Ag-Ac que provoca una aglutinación en el medio.
- Reacciones de precipitación: Se forman complejos Ag-Ac demasiado grandes para estar
disuelto en el medio y precipitan.
- Técnicas de fijación del complemento: Se utilizan hematíes que se lisan o no, lo que hace
que se cambie el color del medio.
- Detección mediante marcadores: La formación del complejo Ag-Ac no induce cambios
físicos, por lo que se usan marcadores que se unen previamente de forma covalente a
uno de los componentes de la reacción.
CLASIFICACIÓN:

Técnicas directas (Primarias)  Inmunofluorescencia, inmunoenzimáticas,

radioinmunoanálisis, test de inmunocromatografía, Western blot…

Técnicas indirectas (Secundarias)  SE basan en la detección de cambios físicos en el medio

producidos por la unión Ag-Ac. Son: Aglutinación, precipitación y fijación del complemento.