Factores que afectan la Actividad enzimática (α - amilasa)

Factors Affecting Enzyme Activity (α-amylase)

Andrés Felipe Carmona García*, Juliana Mesa Ospina*.
Microbiología Industrial y Ambiental
Docente: Juan Manuel Quiceno.
Universidad de Antioquia.

RESUMEN

La actividad enzimática puede verse afectada por diversos factores como la

temperatura, pH y concentración. Las enzimas tienen mejor funcionamiento
cuando está en rangos de energía y pH óptimos, por lo contrario, puede perder su
capacidad de unirse a un sustrato.
La α – amilasa es una enzima que cataliza la hidrólisis de los enlaces alfa –
glucosídicos de los polisacáridos alfa – glucosídicos de alto peso molecular, tales
como almidón y glucógeno liberando glucosa y maltosa. (Maureen, 2000)

Palabras clave

Enzimas, pH, temperatura, concentración

ABSTRACT INTRODUCCIÓN

Enzyme activity can be affected by Las enzimas son macromoléculas

various factors such as temperature,
pH and concentration. Enzymes
function best when in optimal energy
and pH ranges, otherwise they may
lose their ability to bind to a substrate.
α-Amylase is an enzyme that
catalyzes the hydrolysis of alpha-
glucosidic bonds in high molecular
weight alpha-glucosidic
polysaccharides, such as starch and
glycogen, releasing glucose and
maltose. (Maureen, 2000)
Keywords
Enzymes, pH, temperature,
concentration
protéicas las cuales su función es
catalizar reacciones químicas
realizando un cambio químico
específico sobre el sustrato sobre el
cual actúan. (Ramírez, 2014)
Se evidencia como en el estudio, la
actividad catalítica de la α – amilasa
se ve afectada por varios factores,
uno de ellos es la variación de pH, lo
cual transforma la estructura de la
misma enzima.
Obteniendo un pH extremo se da la
desnaturalización de las enzimas por
las modificaciones iónicas que
intervienen en la estabilidad de la
enzima. (Arroyo, 1998)

Ademas, otro factor que afecta la

actividad enzimática es la
temperatura, en el estudio se observó

*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental. Universidad de Antioquia, Seccional

Suroeste. Andes, Antioquia, Colombia.
altos niveles de esta lo cual hace que
la reacción se desnaturalice.
MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales
Tubos de Agua destilada.
ensayo.
Almidón Solución de α -
amilasa
KI 1% PBS - Calcio
TCA 20% KBr 1%
Glucosa KCl 1%
Buffer Reactivo de
Benedict
Nevera Baño María
A. Demostración de la actividad
hidrolítica enzimática α - solución de almidón al 1% y
amilasa.
En una serie de tubos de ensayo
(A. control negativo, B. 10
segundos, C. 5 minutos, D. 10
minutos, E. 15 minutos, F. 20
minutos, G. control positivo) se le
agregaron (B – F) 2 mL de
almidón soluble al 1% y 2 mL de
solución α – amilasa para cada
uno. Al control negativo se le
agregó 2 mL de almidón soluble al
1% y 2 mL de agua destilada; al
control positivo se le agregó 2 mL
de glucosa al 1%. Se agitaron e
incubaron al tiempo indicado (B –
F) y 20 minutos para los tubos de
control (A y G). Luego de la
incubación se le agregaron 5
gotas del reactivo Benedict, se
agitó e incubó a 95°C por 2
minutos.
B. Efecto de la concentración de
enzima sobre la actividad de la
α - amilasa.
*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental. Universidad de Antioquia, Seccional
Suroeste. Andes, Antioquia, Colombia.
Se prepararon 5 tubos de ensayo.
 Tubo A: 2 mL de solución
de almidón al 1% y 1 mL de
Buffer PBS- Calcio.
 Tubo B: 1:1 de la solución
de almidón al 1% y 1 mL de
solución de α – amilasa
 Tubo C: 1:5 de la solución
de almidón al 1% y 1 mL de
solución de α – amilasa
 Tubo D: 1:25 de la solución
de almidón al 1% y 1 mL de
solución de α – amilasa
 Tubo E: 1:125 de la
solución de almidón al 1% y
1 mL de solución de α –
amilasa
 Tubo F: 1:625 de la
1 mL de solución de α –
amilasa
Se agitaron e incubaron a 70°C por
10 minutos, luego se le agregaron 5
gotas de reactivo de Benedict y se
agitó e incubó a 90°C por 2 minutos.
C. Efecto de la temperatura sobre
la actividad enzimática de α -
amilasa.
Se rotularon 5 tubos de ensayo de
la siguiente forma:
 Tubo A: 4°C Nevera
 Tubo B: 25°C Ambiente
 Tubo C: 37°C Baño María
 Tubo D: 70°C Baño María
 Tubo E: 95°C Baño María
A cada tubo se le agregaron 2 mL de
almidón soluble al 1% y 2 mL de
solución de α – amilasa, luego se
agitaron y se expusieron por 10
minutos a la temperatura que le
correspondía, luego de este tiempo
se le agregó 5 gotas de reactivo de
Benedict, se agitó y se incubó a 95° C
por dos minutos.
D. Efecto del pH sobre la actividad
enzimática de la α - amilasa.
Se prepararon 5 tubos de ensayo
 Tubo A: 1 mL de la solución
de almidón 2% y 3 mL
buffer PBS – Calcio pH 1,5
 Tubo B: 1 mL de solución
de almidón al 2% y 3 mL
buffer PBS – Calcio pH 3,5
 Tubo C: 1 mL de la
solución de almidón 2% y 3
mL buffer PBS – Calcio pH
5,5
 Tubo D: 1 mL de la
solución de almidón 2% y 3
mL buffer PBS – Calcio pH
7,5
 Tubo E: 1 mL de la solución
de almidón 2% y 3 mL
buffer PBS – Calcio pH 9,5
Se agitó e incubó a 70°C por 10
minutos, se le agregaron 5 gotas de
reactivo Benedict, se agitó y se
incubó a 95°C por 2 minutos.
E. Efectos del KBr y TCA sobre la
actividad de la α - amilasa.
Se prepararon 3 tubos de ensayo
 Tubo A: 2 mL de la solución
de almidón al 1% y 1 mL de
buffer PBS – Calcio
 Tubo B: 2 mL de solución
de almidón al 1% y 1 mL de
solución de KBr al 1%
 Tubo C: 2 mL de solución
de almidón al 1% y 1 mL de
solución de TCA al 1%
*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental. Universidad de Antioquia, Seccional
Suroeste. Andes, Antioquia, Colombia.
A cada tubo se le agregó 1 mL de
solución α – amilasa, se agitó e
incubó a 70°C por 10 minutos y luego
se le agregaron 5 gotas de reactivo
Benedict, se agitó e incubó a 95°C
por 2 minutos.
RESULTADOS
A. Demostración de la actividad
hidrolítica enzimática α -
amilasa.
Cada tubo tiene 2 mL de
almidón soluble al 1% y 2
mL de solución de α –
amilasa mas 5 gotas de
reactivo Benedict
El tubo A.G es el control
positivo se le agregó 2 mL
de glucosa al 1% y 2 mL de
agua destilada.
Los tubos A.C Y A.B se le
agregó a cada tubo 2 mL de
almidón soluble al 1% y 2
mL de solución de α –
amilasa más 5 gotas de
reactivo Benedict y al tubo
A.A que es el control
negativo se le agregó 2 mL
de almidón soluble al 1% y 2
mL de agua destilada
 Los resultados obtenidos: el
control negativo con una
coloración azul y el control
positivo con una coloración
naranja
Se pudo observar que en el
control negativo y en 10
segundos fue un resultado
inhibidor, mientras que en las
demás un resultado de
cofactor dando unos más que
otros como en el control
positivo.
B. Efecto de la concentración
de enzima sobre la actividad
de la α - amilasa.
Tubo B.B 1:1 presencia de
azúcares; tubos B.A y B.C
*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental. Universidad de Antioquia, Seccional
Suroeste. Andes, Antioquia, Colombia.
En el tubo 1:1 al aplicarle el
reactivo Benedict viró un poco
a color verde azulado lo que se
da cuenta que aún hay
presencia de azúcares y la
enzima no alcanza a inhibir, en
buffer PBS -Calcio, 1:5, 1:25,
1:125, 1:625 viro a naranja lo
que significa que hay
presencia de glucosa.
C. Efecto de la temperatura
sobre la actividad enzimática
de α - amilasa.
C.A: Temperatura de 4°C –
Nevera, C.B: Temperatura
de 25°C – Ambiente, C.C:
Temperatura de 37°C.
A cada tubo se le agregó 2
mL de almidón soluble al 1%
y 2 mL de solución de α -
amilasa

A cada tubo se le agregó 2
mL de almidón soluble al 1%
y 2 mL de solución de α -
amilasa
Los resultados de la
temperatura extrema hicieron
que la amilasa disminuyera su
acción y se inhibe totalmente y
por esto se desnaturaliza como
es en el caso de la
temperatura a 70°C y 95°C, en
una temperatura ambiente
(25°C) la enzima presentó
mejor funcionamiento y a una
temperatura de 4°C (nevera) la
enzima se inhibió y se
desnaturalizó.
D. Efecto del pH sobre la
actividad enzimática de la α -
amilasa.
A cada tubo se le agrego 1
mL de solución de almidón al
2% y 3 mL de buffer PBS –
Calcio con diferentes pH:
D.A pH 1.5, D.B pH 3.5, D.C
*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental. Universidad de Antioquia, Seccional
Suroeste. Andes, Antioquia, Colombia.
pH 5.5, D.D ph 7.5, D.E ph
9.5
Se pudo observar que en el pH
1.5 hubo inhibición por lo tanto
la coloración azul, de igual
forma al aplicarle el reactivo de
Benedict no encontró azúcares
reductores en este caso el pH
influye ya que está por debajo
del pH óptimo; en los pH 3.5,
5.5, 7.5 y 9.5 viró a color
naranja y en el pH 7.5 viró a
color amarillo después de
aplicarle el reactivo Benedict y
llevarlo a baño maría a una
temperatura de 90°C, lo que
quiere decir que la α – amilasa
se desnaturalizó y en ella
habrá glucosa.
E. Efectos del KBr y TCA sobre
la actividad de la α - amilasa.
A cada tubo se le agrego 2
mL de la solución de almidón
al 1% y 1 mL de buffer PBS
– Calcio, KBr al 1%, TCA al
1% a los tubos E.A, E.B, E.C
respectivamente.
En el TCA hubo inhibición
después de aplicar el reactivo
Benedict, no se encontraron
azúcares reductores en
 cambio en buffer PBS- Calcio La temperatura influye
contiene la enzima α – amilasa sobre la actividad
y al aplicarle el reactivo cambió enzimática mientras
a color naranja lo cual contiene aumenta o disminuye
azúcares reductores. drásticamente, la actividad
llega hasta el punto de
ANÁLISIS DE RESULTADOS empezar a desnaturalizarse
porque se pasa de la
A. Demostración de la temperatura óptima.
actividad hidrolítica
enzimática α - amilasa. D. Efecto del pH sobre la
actividad enzimática de la
El tiempo influye en la α - amilasa.
actividad enzimática α –
amilasa potenciándola Su pH influye cuando las
hasta que la enzima desviaciones de pocas
alcance su punto óptimo y décimas de pH óptimo
se empiece a pueden afectar
desnaturalizar. drásticamente en la
actividad de la enzima ya
B. Efecto de la que el pH de α – amilasa
concentración de enzima es de 6.7 y 7.2.
sobre la actividad de la α
- amilasa. E. Efectos del KBr y TCA
sobre la actividad de la α
La concentración de la - amilasa.
enzima influye; si la
concentración de α – Estas sales afectan de
amilasa es mayor entonces manera:
va a descomponer el El Bromuro de Potasio al
sustrato y es así como la tener un pH neutro será
cantidad del color depende considerado como cofactor
de la cantidad del azúcar para la actividad enzimática
disponible, la actividad ya que no modifica la
enzimática aumenta hasta estructura de la enzima.
alcanzar la velocidad
máxima, punto donde se El TCA al tener un pH
satura la enzima debido a básico modifica la
que las enzimas tienen estructura de la α – amilasa
todos sus sitios activos provocando la inhibición de
ocupados. la actividad enzimática.

C. Efecto de la temperatura BIBLIOGRAFÍA

sobre la actividad
enzimática de α - amilasa. 1. RAMÍREZ Ramírez,
Joaquín, Marcela Ayala
Aceves "Enzimas: ¿qué
*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental. Universidad de Antioquia, Seccional
Suroeste. Andes, Antioquia, Colombia.
 son y cómo funcionan?"
Revista Digital
Universitaria [en línea].
1 de noviembre de
2014, Vol. 15, No.11
[Consultada:].
Disponible en Internet:
http://www.revista.unam
.mx/vol.15/num12/art91/
index.html
ISSN: 1607-6079.

2. Maureen Barlow Pugh,

ed. (2000). Stedman's
Medical Dictionary (27th
edición). Baltimore,
Maryland, USA:
Lippincott Williams &
Wilkins.
p. 65. ISBN 978-0-683-
40007-6.

3. ARROYOD. M. (1998).
Inmovilización de
enzimas. Fundamentos,
métodos y aplicaciones.
Ars Pharmaceutica
(Internet), 39(2), 23-39.
Recuperado a partir de
https://revistaseug.ugr.e
s/index.php/ars/article/vi
ew/6008

*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental. Universidad de Antioquia, Seccional

Suroeste. Andes, Antioquia, Colombia.