Metabolismo secundario

Castillo Neri Yolotzin

Resumen

Los metabolitos secundarios son sustancias producidas por procesos metabólicos

secundarios, es decir, no controlados directamente por los procesos por los cuales
se percibió la supervivencia y el crecimiento de la planta, pero cumplen funciones
como protección contra patógenos, altas temperaturas y regulación del sistema
circulatorio celular. En la práctica, una solución de extracto vegetal se somete a
varias pruebas cualitativas que permiten determinar la presencia de metabolitos
secundarios como terpenos, alcaloides, flavonoides y glucósidos. Además, se
observa el efecto que tienen como inhibidores del crecimiento y desarrollo
bacteriano. Nuestros resultados fueron positivos solo en la prueba de alcaloides y
glucósidos, mientras que la prueba de inhibición no se pudo realizar correctamente
debido a un error en el momento del proceso que no permitió que la bacteria se
desarrollara como se esperaba.

Introducción

El metabolismo es el conjunto de reacciones químicas que realizan las células de los seres
vivos para sintetizar sustancias complejas a partir de otras más simples, o para degradar las
complejas y obtener las simples. Las plantas, organismos autótrofos, además del
metabolismo primario presente en todos los seres vivos, poseen un metabolismo secundario
que les permite producir y acumular compuestos de naturaleza química diversa. Estos
compuestos derivados del metabolismo secundario se denominan metabolitos secundarios,
se distribuyen diferencialmente entre grupos taxonómicos, presentan propiedades
biológicas, muchos desempeñan funciones ecológicas y se caracterizan por sus diferentes
usos y aplicaciones como medicamentos, insecticidas, herbicidas, perfumes o colorantes,
entre otros. Reciben también la denominación de productos naturales
El metabolismo primario incluye a los procesos metabólicos y fisiológicos que la planta debe
llevar a cabo para su propia supervivencia y crecimiento, ya que estos dependen
directamente del metabolismo primario, que incluye procesos como la fotosíntesis,
transaminación, glucólisis y síntesis de proteínas, aminoácidos y enzimas entre otros. Por
otro lado, el metabolismo secundario produce sustancias que no participan directamente en
ninguno de los procesos anteriormente mencionados, por lo que se intuye que no son
vitales para la supervivencia de la planta.
A las sustancias producidas por los procesos metabólicos secundarios se les conoce como
metabolitos secundarios, y están directamente relacionadas con el metabolismo primario,
que provee a estos procesos metabólicos moléculas que sirven como precursores para la
producción de metabolitos secundarios, los principales precursores usados en las vías
metabólicas secundarias son: acetato, ácido shikímico y aminoácidos. Todos estos
precursores sirven para la síntesis de metabolitos secundarios específicos, los cuales se
clasifican principalmente en terpenos, alcaloides, flavonoides y glucósidos entre otros.
Los metabolitos secundarios cumplen con funciones específicas, tales como la protección
ante parásitos, plagas e incluso altas temperaturas y regulación del ciclo celular entre otras,
además, estos metabolitos también influyen en el color, sabor, aroma y crecimiento de las
plantas. Todos estos compuestos que dan estas características a las plantas pueden estar o
no presentes en ellas, y todas ellas influyen en mayor o menor medida en la capacidad de
supervivencia de la planta, además de ser utilizados por el hombre en distintas industrias y
procesos.
Para la determinación e identificación de metabolitos secundarios se utilizan extractos de
plantas que son sometidos a técnicas colorimétricas para así determinar cualitativamente la
presencia o ausencia de estos compuestos en la planta. Para cada uno de los grupos de
metabolitos secundarios se utiliza una técnica cualitativa distinta: Los alcaloides se
determinan realizando la prueba de Draguendorff, los terpenos mediante la prueba de
Liberman-Burchard, los flavonoides utilizando la prueba de Shinoda y, finalmente, la
presencia de glucósidos se determina mediante la prueba de Molish. Cada una de estas se
realiza utilizando distintos reactivos y técnicas.

El objetivo de esta práctica es determinar a través de pruebas químicas preliminares la

presencia de grupos de metabolitos secundarios en el extracto hexánico de hoja de planta,
además, analizar el efecto del extracto de la planta sobre el crecimiento de Escherichia coli.

Metodología

 Determinación de los grupos de metabolitos secundarios.

Se preparó una solución del extracto y se tomó 1 ml para colocarlo en cada uno de los cinco
tubos de ensayo, posteriormente se agregó el reactivo correspondiente a cada tubo: Al
primer tubo, el control, sólo se le agregó 1ml del extracto. Para el segundo tubo, de los
Terpenos, el extracto se disolvió en 1 ml de cloroformo, se agitó un minuto y se dejó
reposar, la prueba será positiva si se observa un cambio de coloración azul/verdoso o rojizo.
En el tercer tubo correspondiente a los Alcaloides, se añadió una gota de ácido clorhídrico
al tubo de ensayo correspondiente y dos gotas del reactivo Draguendorff, la prueba será
positiva si se observa una coloración naranja-marrón. En el cuarto tubo, de los Flavonoides,
se le agregó al extracto un trocito de viruta de magnesio y dos gotas de ácido clorhídrico
concentrado, la prueba será positiva si se observa una coloración verde o naranja.
Finalmente, para el quinto tubo que corresponde a los Glucósidos, se agregó 1 ml de
metanol para posteriormente agregar dos gotas de Mölish, se colocó el tubo en un baño de
agua helada y se añadió 1 ml de H2SO4 concentrado, la prueba será positiva si se observa
una coloración violeta.

 Determinación de la actividad biológica de un extracto de planta

Se preparó un agar nutritivo del cual se utilizaron 2g y se suspendieron en 90 ml de agua
purificada, se agitó hasta diluirse y se esterilizó en la autoclave a 121ºC a 15 lb de presión
por 15 minutos para posteriormente enfriar a 45 – 50ºC. Se colocaron 25 ml del medio en
cada una de las tres cajas Petri y se esperó hasta que solidificaran. Se utilizaron perlas
estériles para distribuir 2 ml de cultivo líquido de Escherichia coli GM2163 y se impregnaron
los discos de papel filtro con distintas cantidades del extracto del frasco 1 (20, 40, 60 y 80
ml) además del control positivo, que se impregnó con 20 ml de violeta de genciana. Los
discos se dejaron secar por 10 min antes de colocarlos en la caja y se colocaron 5 en cada
una. separándolos de manera que se alejen lo más posible entre ellos y del borde de la
caja, estas se incubaron por 24 horas a 37 °C y se realizaron observaciones al pasar 18
horas, además, al finalizar el tiempo de incubación se determinará la presencia de un halo
de inhibición, del cual se medirá el diámetro de presentarse este.

Resultados

En la imagen se observan las 5 soluciones junto al tubo control, en ellas, se logra observar
claramente el resultado positivo en la prueba correspondiente a los Alcaloides, además de
un ligero cambio en el quinto tubo, correspondiente a los glucósidos.

Discusión
Durante la elaboración se tuvieron múltiples fallas de ejecución, principalmente la
preparación del extracto, ya que este no tuvo el suficiente reposo, por lo que se trabajó con
un extracto diferente, sin embargo, en las pruebas de los metabolismos secundarios, las
pruebas no tuvieron mucho éxito, en el tubo 2 que era el grupo del terpeno no se presentó
un cambio de coloración al azul-verdoso o rojo-naranja. Lo que nos indica que este fue
negativo a la prueba, no obstante, los terpenos constituyen el grupo más numeroso de
metabolitos secundarios ya que son de gran importancia para el crecimiento; en cuanto al
tubo número 3 donde se encontraba la prueba del grupo de los alcaloides, este sí salió
positivo ya que presentó un tono naranja con tendencia marrón, por lo que si hay un grupo
de metabolismo secundario en los alcaloides. Por otro lado, en el tubo 4 la prueba de
flavonoides de igual forma no tornó un color naranja o verde, en general no presentó cambio
por lo que se da como negativa a la prueba. Y por último en el tubo 5 se observó un tenue
anillo que resulta positivo para la prueba de glucósidos.

Conclusión
Se logró identificar la presencia de metabolitos secundarios, específicamente la presencia
de Alcaloides, gracias a la prueba de Dragendorff, además la prueba encargada de la
detección de glucósidos también arrojó un resultado positivo. Por otro lado, el halo de
inhibición fue imposible de identificar debido a que la bacteria no se desarrolló
correctamente y no formó ningún patrón, esto pudo ocurrir gracias al mal manejo de los
materiales o a la contaminación del medio.

Bibliografía
 Ávalos & Pérez, E. P. U. (2007). Metabolismo secundario de plantas. REDUCA, 2(3).

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 Adolfo Ávalos García. Elena Pérez-Urria Carril. (enero, 2009). Metabolismo secundario de plantas. Departamento de Biología

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https://eprints.ucm.es/id/eprint/9603/1/Metabolismo_secundario_de_plantas.pdf