Algunos atributos importantes del

el proceso ascendente

Impacto en los circuitos metabólicos

Las células son la materia prima más compleja e impredecibles utilizada en el proceso upstream,
debido a su intrincado circuito metabólico.

Por lo tanto, la vinculación de los parámetros de control del proceso con el comportamiento
metabólico es esencial para progresar en el campo del diseño de procesos de optimización basada
en la respuesta metabólica de dos parámetros importantes:

Como son:

- el suministro de nutrientes

- el entorno externo de la célula

Los aminoácidos constituyen uno de los grupos de nutrientes esenciales, ya que aportan bloques
de nitrógeno para la para la construcción de proteínas y la energía para la actividad celular.

La capacidad de recambio metabólico de las células CHO en respuesta a su entorno externo es

inmensa. Uno de los factores definitorios que influyen en el rendimiento celular es el pH del
entorno externo de la célula y se utilizan varias estrategias para controlar el pH. -siendo el tipo y la
fuerza del tampón dos de los factores determinantes- y pueden utilizarse para influir en la síntesis
de lactato y, por tanto, en la salud general de la célula.
Líneas celulares estables: un reto importante

para el crecimiento de las líneas celulares

Establecer la estabilidad de las líneas celulares que se utilizan para la producción de anticuerpos es
una parte importante del desarrollo previo.

La estabilidad indica convencionalmente la capacidad de producción de anticuerpos de las células.

Esto se comprueba verificando periódicamente su capacidad de producción de anticuerpos a
medida que las células envejecen (la edad de las células se mide en términos de número de
generaciones).

Esto proporciona un límite dentro del cual las células pueden ser utilizadas en función del tiempo
que siguen siendo productivas.

Y estas pierden algo más que su capacidad de producción de anticuerpos

con el envejecimiento. Como la perdida de su capacidad de producción de anticuerpos o sus

funciones fisiologicas

o como la pérdida progresiva de las funciones fisiológicas que realizan las células. Las células CHO,
que se utilizan como fábricas para producir mAbs, cambian con el envejecimiento en condiciones
de subcultivo y proceso prolongadas.

Las causas y los efectos pueden ser una reducción del crecimiento celular, la productividad o la
salud y el metabolismo celular;

las causas pueden ser el estrés ambiental de las células, como los aditivos, la acumulación de
residuos, la genética o el desgaste.

Los atributos de calidad del producto son vitales para la fabricación de mAbs, ya que determinan la
eficacia del fármaco.
 El deterioro de la salud de la célula también afecta a la calidad, provocando cambios y dificultando
su calidad, lo que da como resultadoun cambio en la fisiología celular, lo que finalmente conduce a
la fragmentación de los anticuerpos.

Some important attributes of

the upstream process

Impact on metabolic circuitry

Cells are the most complex and unpredictable

raw materials used in the 5upstream process,

owing to their intricate metabolic circuitry.

Linking process control parameters to metabolic

behaviour is therefore essential to progress in the field of process desing. the focus lies on

metabolic response-based optimisation of two

important parameters:

- nutrient supply

- the cell's external environment

Amino acids form one of the most essential

nutrient groups, supplying nitrogen blocks for

protein building and energy for cellular activity.

The metabolic rewiring capacity of CHO cells in response to their external environment is
immense. One of the defining factors that impacts cell performance is the pH of the cell’s external
environment and various strategies are used to control pH - with buffer typer and strength being
two of the determining factors – and they can be used to influence lactate synthesis and hence
overall cell health.

Stable cell lines – a major challenge

for upstream development

Establishing the stability of those cell lines being used for antibody production forms an

important part of upstream development.

Stability conventionally indicates the antibody-production capability of cells. This is tested by

periodically checking their antibody-production

capability as the cells age (cell age is measured in terms of generation number).

This provides a limit within which cells can be used based on how long they remain productive.

Cells lose more than just their antibody production capability

with ageing.

Ageing can generally be termed

as a system’s deterioration with time; or as the progressive loss of physiological functions

performed by cells. CHO cells, which are used as factories to produce mAbs, change with

ageing over prolonged subculture and process conditions.

The causes and effects may be a reduction in cell growth, productivity or cell health and

metabolism; the causes could be environmental stress to cells such as additives, waste
accumulation, effects of free radical, genetics or wear and tear.

Product quality attributes are vital to the manufacture of mAbs as these determine the efficacy of
the drug. The deteriorating health of cell also affects quality, resulting in change and hampers their
quality, resulting in change

in cell physiology, which eventually leads to

antibody fragmentation.