UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

FACULTAD DE CIENCIAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

PRÁCTICA N° 3

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES BUFFERS

Integrantes:

1- Gonzales Arias, Aylin Judith

2- Huaman Jimenez, Jackeline Diana

3- Saturio Salvatierra, Rosa Milagros Jasmin

Grupo : Miércoles 8:00-10:00 am.

Fecha de la práctica : 04/09/19

Fecha de entrega de informe : 11/09/19

2019-II
1. INTRODUCCIÓN

En química es frecuente que necesitemos mantener la concentración de una

determinada especie en los alrededores de un valor específico. Para lograr
este propósito se utilizan las soluciones conocidas como buffer,
amortiguadoras, reguladoras o tampones.
Los buffers son soluciones amortiguadoras, que se opone a los cambios de pH
cuando se agrega un ácido o una base. Tales experimentos se usan en
muchos experimentos bioquímicos en los cuales se necesita controlar el pH
(Plummer, 1981).
De la ecuación de Henderson-Hasselbach se puede deducir que el pH de una
solución amortiguadora depende de dos valores; uno es el valor del pKa y el
otro es la relación de sal-ácido. Esta proporción se considera igual a las
cantidades de sal a ácido mezcladas en un intervalo de pH entre 4 y 10 donde
la concentración de hidrogeniones e hidroxilos es muy baja y se puede ignorar
(Plummer, 1981).
Tenemos un ejemplo, amortiguadores de acetato, que está compuesto de
ácido acético y acetato de sodio.

CH3COOH CH3COO- + H

CH3COONa CH3COO- + Na

Debido a que el ácido acético está débilmente disociado, la concentración de

ácido será casi la misma que se agregó a la mezcla; en la misma forma la
concentración de iones acetato puede ser considerada como igual a la
concentración de acetato de sodio añadido a la mezcla, ya que la sal estará
completamente disociada.

pH = pka + Log [sal]/[ácido]

2. RESULTADOS:

 Buffer acetato 1 (pKa = 4.74) de pH 5 y de concentración 0.02 M, a partir de ácido acético

0.2 M y acetato de sodio 0.2 M.
[𝑆𝑎𝑙]
pH = pKa + log [Ácido] + [Sal] = 0.02
[Á𝑐𝑖𝑑𝑜]
[𝑆𝑎𝑙]
5 = 4.74 + log [Á𝑐𝑖𝑑𝑜] 2.8197 [Ácido] = 0.02

1.8197 [A] = [S] [A] = 7.0929x10-3

[S] = 0.0129
Para el ácido Para la sal
7.0929x10-3 mol →1000 mL 0.0129 mol →1000 mL
XA mol →100 mL XS mol →100 mL
-4
XA = 7.0929x10 XS= 1.29 x10-3
0.2 mol →1000 mL 0.2 mol →1000 mL
7.0929x10 → YA mL
-4
1.29x10 mol →YS mL
-3

YA = 3.5464 mL YS = 6.45 mL

 Buffer acetato 2 (pKa = 4.74) de pH 5 y de concentración 0.02 M, a partir de ácido acético

0.2 M e hidróxido de sodio en pastillas (PM =40).
[𝑆𝑎𝑙]
pH = pKa + log [Á𝑐𝑖𝑑𝑜] [Ácido] + [Sal] = 0.02
[𝑆𝑎𝑙]
5 = 4.74 + log 2,8197 [Ácido] = 0.02 → [A] = 7.0929x10-3 M
[Á𝑐𝑖𝑑𝑜]

1.8197 [A] = [S] [S] = 0.0129 M

Para el ácido Para la sal

7.0929x10-3 mol →1000 mL 0.0129 mol →1000 mL
XA mol →100 mL XS mol →100 mL
-4
XA = 7.0929x10 XS= 1.29 x10-3

CH3COOH + NaOH → CH3COONa + CH3COOH

7.0929x10-4 + 1.29 x10-3
1.9992 x10-3 B B
m (g)
0.02 mol →1L MNaOH = ̅
M x V(L)
m (g)
1.9992 x10-3 mol → YA+S L 0.01 =
40 x 0.0999
YA+S = 0.0999 L 0.0399 g = m

 Buffer acetato 3 (pKa = 7.2) de pH 7.4, y de concentración 0.05 M, a partir de fosfato

monobásico (PM = 136.086) y fosfato dibásico 0.1 M.
[𝑆𝑎𝑙]
pH = pKa + log [Ácido] + [Sal] = 0.05
[Á𝑐𝑖𝑑𝑜]
[𝑆𝑎𝑙]
7.4 = 7.2 + log [Á𝑐𝑖𝑑𝑜] 2.5848[Ácido] = 0.05 → [A] = 0.0193 M

1.5848[A] = [S] [S] = 0.0306 M

Para el ácido Para la sal

0.0193 mol →1000 mL 0.0306 mol →1000 mL
XA mol →100 mL XS mol →100 mL
-3
XA = 1.93x10 mol XS= 3.06 x10-3
1 mol →136.086 g 0.1 mol →1000 mL
1.93x10-3 mol → YA g 3.06 x10-3mol →YS mL
YA = 0.2626 g YS = 30.6 mL

3. DISCUSIÓN

En un vaso de precipitado, se mezclará los componentes respectivos en cada solución buffer.

Primero se agregará agua hasta un volumen de 80 mL y luego se mezclará con los componentes.
Después se medirá el pH y de ser necesario de ajustará este usando HCl 0.01 M o NaOH 0.01
M. finalmente se transfiere la solución a una fiola de 100 mL, se enrasa y se homogeniza por
inversión.

Buffer Acetato 1:
En los métodos operativos, se usó la ecuación de Henderson-Hasselbach, para luego
reemplazarlo en la concentración molar del buffer, teniendo como resultado la concentración de
moles por litro de sal y ácido, para luego llevarlo a 100 mL, hallando así la concentración molar
de cada componente.
Este buffer es una solución reguladora que está conformada por ácido acético (ácido débil) y
acetato de sodio (sal o base conjugada), es considerada acida y es de uso frecuente en los
laboratorios de química. (C.K. Mathews 2002).

Buffer Acetato 2:
Al preparar el buffer con acetato de sodio y ácido acético, se observó inicialmente en el
potenciómetro valores de pH de 4.74. Estos resultados mostraban un estado muy ácido, con lo
cual se debió agregar pequeñas cantidades de NaOH 0.01 M, logrando así que hacienda hasta un
pH de 5. Al agregarle una base fuerte, el ácido acético reacciona con los H+ , logrando aumentar
el pH.
A este fenómeno se le conoce como capacidad amortiguadora, la cual es el número de moles de
OH- o H+ que se requiere para producir un cambio de una unidad de pH, en un litro de
disolución amortiguadora. (C.K. Mathews 2002).
Buffer Fosfato 3:
Se nos proporcionó 0.2425 g de fosfato monobásico. Por el método operativo se halló la
cantidad teórica aproximada de 0.2626 g. Los resultaron también nos proporcionaron la
cantidad de 30.6 mL de fosfato dibásico que se debió agregar. Luego de medir el pH, se observó
un resultado por debajo de 7.4 con cual se debió agregar aproximadamente 0.013 mL de HCl
0.1 M, reaccionando aquí el fosfato dibásico, para finalmente llegar al pH de 7.4

Los organismos deben mantener el pH dentro de las células y en la mayoría de los líquidos
corporales dentro del estrecho margen de pH de entre 6.5 y 8.0.

Uno de los sistemas de gran relevancia es el buffer fosfato conformado por el H2P𝑂4− y HP𝑂42−
con un pKa de 6.8, que en conjunto con con el pH fisiológico de 7.4, muestran que la
concentración de 𝐻𝑃𝑂42− es 4 veces mayor a la de H2P𝑂4− . Siendo un amortiguador muy eficaz
para ácidos.
Además se sabe que concentración de fosfato en la sangre es baja (2 mEq/L) por lo que tiene
escasa capacidad de tamponar si lo comparamos con otros tampones (ej. el bicarbonato). Por
otro lado desempeña un importante control de pH intracelualr, pues el fosfato abunda en las
células. (C.K. Mathews 2002).
4. CONCLUSIONES

Las soluciones buffers se pueden hacer tanto por mezclas de solutos en estado
sólido con otra en líquido o entre dos líquidos.
Son soluciones que tienen un ácido y su base conjugada del mismo, cuyo pH
sufre una pequeña variación al adicionar ácidos o bases fuertes, se le conoce
principalmente como buffer, pero también pueden ser llamadas tampón,
amortiguador, etc. Son de gran importancia en procesos fisiológicos y químicos
por su gran poder de amortiguación el cual evita el cambio brusco del pH.

5. BILIOGRAFÍA

 C.K. Mathews, K.E. Van Holde y K.G. Ahern (2002) Bioquímica. España: Pearson
Educación.
 Plummer D, Barrera L. Bioquímica práctica. Mc-Graww Hill.1981.
 Bolaños V. Química Analítica Cualitativa. Universidad Autonoma del Estado de
México. 2003.
 Donald Voet, J. G. (2007. Edición 2°.). Fundamentos de bioquímica. Madrid-
España.: Editorial Médica Panamericana.

6. CUESTIONARIO

1. Si representamos un sistema amortiguador como:

HA↔ H+ + A-
A medida que aumenta el pH:
a) ¿Aumenta el H+ o el OH-?
Disminuye la cantidad de H+ , entonces habrá mayor cantidad de OH-.

b) ¿Qué componente de este buffer resiste el cambio?

Al aumentar el pH, los iones OH- reaccionaran con los H+ del ácido, desplazando el equilibrio
hacia la derecha. Por lo tanto es el ácido quien resiste el cambio.

c) Y a medida que el pH disminuye, ¿Qué componente resiste el cambio?

Al disminuir el pH, los H+ reaccionaran con la base conjugada, formando na mayor cantidad de
ácido y desplazando el equilibrio hacia la izquierda

2. Calcule la proporción de iones H2PO4- que se disocian a pH 7.9 (pKa2 =7.2)

H2PO4- ↔ HPO4-2 + H+
[𝑆]
pH = pKa + log[𝐴]
 [𝑆]
7.9 = 7.2 + log [𝐴]
[S] 5.0118
[A]
=
1
Iones disociados 5.012
= = 0.834
iones totales 6.012

3. Calcule la proporción de H2PO4- que se disocia a pH 5.2 (pKa2 =7.2)

[S]
pH = pKa + log[A]
[S]
5.2 = 7.2 + [A]
[S] 0.01
[A]
=
1
Iones disociados 0.01
= = 9.9009 × 10−3
iones totales 1.01

4. Se dan las siguientes soluciones madre: NaCl 1 M, Na2HPO4 100 mM y NaH2PO4 100
mM. ¿Qué cantidad de soluciones madre y de agua destilada emplearía para producir un
litro de solución experimental de NaCl 120 mM tamponada en 3 mM en total de iones
fosfato, con un pH 7.5? ( pKa1 =2.3 ; pKa2 =7.2 ; pKa3 =12.4 )
[S]
pH = pKa + log [A] [Buffer] = 3mM = [S] + [A]
[S]
7.5 = 7.2 + log [A] 3 mM = 2.9952 [A]
1.9952[A] = [S] → [A] = 1.0016 mM
→ [S] = 1.9983 mM

Para el ácido Para la sal

[A] = NaH2PO4 100 mM [S] = Na2HPO4 100 mM
100 mmol →1000 mL 100 mmol →1000 mL
1.0016 m mol → XA mL 1.9983 mmol → XS mL
XA = 10.016 mL < > 0.0100 L XS= 19.983 mL < > 0.0199 L

Para el NaCl 1M
1mol → 1L
120 mmol → XNaCl mL
XNaCl =120 mL < > 0.12 L

La solución experimental tendrá un volumen de 1 L , en la cual estará contenida: 0.0100 L de

NaH2PO4 , 0.0199 L de Na2HPO4 , 0.12 L de NaCl , y el resto por agua destilada

VA + VS + VNaCl + VH2O =1L

0.0100 L + 0.0199 L + 0.12 L + VH2O =1 L
Volumen de agua destilada = 0.8501 L
5. Se prepara un tampón mezclando 500mL de Na2HPO4 0.5 M y 500 mL de Na2HPO4
0.2M:

a) Calcule el pH

Para el ácido Para la sal

Na2HPO4 Na2HPO4
0.2 mol →1000 mL 0.5 mol →1000 mL
XA mol →500 mL XS mol →500 mL
XA = 0.1 mol XS= 0.25 mol

[S]
pH = pKa + log [A]

[0.25]
pH = 7.2 +log = 7.5979
[0.1]

b) Calcular el cambio de pH si se añaden 10 mL de HCl 1M :

HCl → H+ + Cl-
1 mol → 1000 mL
XH+ → 10 mL
XH+ = 0.01 mol

Al adicionar HCl, los iones H+ del ácido reaccionaran con la base conjugada, formando así
mayor cantidad de ácido y el equilibrio se desplaza hacia la izquierda.

H2PO-4 ↔ HPO4-2 + H+
Inicio : 0.1 0.25

Proceso : 0.1+0.01 0.25-0.01

Final : 0.11 0.24

[S]
pH = pKa + log [A]
[0.24]
pH = 7.2 +log
[0.11]
pH = 7.2 +0.34
pH = 7.5388

6. ¿Cuál es la composición de un amortiguador fosfato 0.05 molar de pH 7.5 expresado en

g/L de sales sódicas anhidras?

Sales anhidras

-NaH2PO4
-Na2HPO4
H2PO4- ↔ HPO4-2 + H+
 [𝑆]
pH = pKa + log [𝐴] [𝑆] + [𝐴] = 0.05 M
[𝑆]
7.5 = 7.2 + log [𝐴] 2.9952[𝐴] = 0.05M
1.9952[𝐴] = [𝑆] [𝐴] = 0.0167 M
[𝑆] = 0.0331 M

NaH2PO4 (PM= 119.98 g) NaH2PO4 ( PM= 142 g)

mol 119.98 g g mol 142 g g
0.0331 x = 2.0036 L
0.0167 x = 4.7002 L
L 1 mol L 1 mol

7. ¿Qué pH tiene una solución que resulta de mezclar 58 mL de ácido cianhídrico 0.1 M
con 22 mL de cianuro de sodio 0.08 M si la constante de acidez es Ka =7.2× 𝟏𝟎−𝟏𝟎 ?

Ácido cianhídrico Cianuro de sodio

0.1 mol →1000 mL 0.08 mol →1000 mL
X1 mol → 58mL X2 mol → 22 mL
X1 = 5.8x10-3 X2 = 1.76x10-3
[S]
pH = pKa + log [A]
[1.76x10−3 ]
pH = -log (7.2× 10−10) + log
[5.8x10−3 ]
pH = 8.6247