PLANTAMEX S.A DE C.V.

INSTRUCTIVO

ELABORÓ: REVISÓ: APROBÓ:

NÚM. DE DOCUMENTO: INSTRUCTIVO: PRÓXIMA REVISIÓN:
NOMBRE Y PUESTO NOMBRE Y PUESTO NOMBRE Y PUESTO

Citlali Guevara González

Instructivo para la técnica de medio Marisol Cervantes Bobadilla
IIV-27 25.02.24 Auxiliar de Investigación de
envenenado. Coordinador de Investigación y Desarrollo
Campo

REVISIÓN: SECCIÓN APLICABLE DE LA NORMA: FECHA: FECHA: FECHA:

0 N/A 10.02.22 25.02.22

OBJETIVO: Definir los pasos a seguir para llevar a cabo la técnica de medio envenado.

ALCANCE: Aplica para evaluar la efectividad de extractos vegetales para el control de microorganismos fitopatógenos. También aplica para pruebas de compatibilidad de productos químicos-biológicos o biológicos-biológicos.

PASOS A SEGUIR: OPERACIÓN A REALIZAR FOTOS O FIGURAS

-Cajas Petri de vidrio

-Filtros de membrana 0.45 um (Whatman) -Agua estéril
-Jeringa de 5 o 10 mL -Alcohol al 70%
-Micropipeta de 1000 µl -Preparar medio de cultivo sólido acorde al microorganismo
Materiales y -Puntas de micropipeta de 1000 µl a usar en la prueba (PDA para hongos fitopatógenos y
reactivos -Tubos falcon de 50 o 15 mL estéril antagonistas, SDA para hongos entomopatógenos, AN para
-Agua estéril bacterias, LGI para Gluconacetobacter sp.)
-Sacabocados estéril de 7 mm -Extractos o agroquímicos a probar.
-Asa bacteriológica -Placa de medio sólido con el microorganismo a probar.

*Nota: Todo el material que se necesita debe de estar estéril, dia antes a 121°C por 15 minutos.

*Nota: Las soluciones del extracto o del agroquímico a

diferentes concentraciones, se pueden realizar un día antes
de la siembra del fitopatógeno y mantener en refrigeración.

Se trabaja con 3 concentraciones 100%, 50% y 25%. La

concentración al 25%, para simular desde las pruebas in
vitro las concentraciones a utilizar en campo.
PREPARACIÓN DE LAS
CONCENTRACIONES A Preparar tubos falcon de 15 o 50 ml con agua destilada, la
cantidad de agua va a depender de la concentración con la
UTILIZAR DEL
que se va a trabajar, y esterilizar a 121°C por 15 minutos.
EXTRACTO O DEL
Rotular los tubos con la acotación de la concentración
AGROQUÍMICO
correspondiente.

Se toma el volumen del extracto o del agroquímico a evaluar

y se añaden las cantidades correspondientes de microlitros o
mililitros para llegar a las concentraciones previamente
descritas, tomando en cuenta que el total de solución a
realizar va a ser de 10 ml, aforar a 10 ml. Posteriormente, la
solución, se filtra con jeringa y el filtro de 0.45 um. Agitar
vigorosamente durante 5 min y dejar reposando hasta su
posterior uso.

Preparar el medio de cultivo sólido correspondiente al

microorganismo a probar junto con las placas de petri de
vidrio que se necesiten y esterilizarlo a 121°C por 15 minutos.

Posteriormente, enfriar el medio durante 30 minutos

sumergiéndolo a la mitad con agua corriente. Antes de que el
medio de cultivo se gelifique, en una zona estéril tomar con
ayuda de la micropipeta 1 ml de solución de cada
concentración a utilizar y agregar en las placas petri de vidrio
PREPARACIÓN DE
recién sacadas de su empaque y rotuladas, realizar por
PLACAS
duplicado.
ENVENENADAS DE
Adicionar a la placa petri 1 ml del extracto o del agroquímico
AGAR
a diferentes concentraciones, posteriormente, verter
aproximadamente 20 ml de medio estéril. En el caso del
control negativo, agregar 1 mL de agua estéril.

Una vez que se vierte el medio de cultivo, mover en forma de

8 durante 30 segundos para homogenizar la mezcla.
Se dejan reposar dentro de la campana de flujo laminar
hasta que gelifique, y posteriormente, se dejan incubando
durante 24 horas para su posterior uso.

De la placa donde se tiene el microorganismo a utilizar, se

hace una perforación con ayuda del sacabocados de 7 mm,
dentro de una zona estéril y este "corcho de hongo" se
coloca en el centro de la placa que tiene el medio
correspondiente + extracto o agroquímico. Esta actividad se
realiza las veces necesarias para tener un corcho del hongo
dentro de todas las placas preparadas para el ensayo. Si se
usan bacterias, se siembran masivamente cruzando la estría
horizontal y vertical.
Las placas se incuban durante 7 días para hongos y 3 días
INOCULACIÓN DEL para bacterias. Tomar en cuenta las siguientes
PATÓGENO EN consideraciones:
PLACAS *Si se evalúa el principio activo de BioProtect (el cual es
ENVENENADAS hongo), sembrarlo por el método de estría cruzada, en medio
SDA envenenado.
*Si se evalua el ingrediente activo de Bio-Large, utilizar medio
LGI.
*Para los bioproductos: ProGPlant, Bio-Insect, Bio BS Pro,
utilizar agar nutritivo envenenado.
*Para Bio M fungi y Bio PMX Fungi utilizar medio PDA
envenenado.
*En general seguir la regla: Bacterias agar nutritivo, hongos
antagonistas y fitopatógenos PDA, hongos
entomopatógenos SDA.

Las copias impresas de este documento son consideradas COPIA NO CONTROLADA

a menos que cuenten con un sello de "DOCUMENTO CONTROLADO"
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OBJETIVO: Definir los pasos a seguir para llevar a cabo la técnica de medio envenado.

ALCANCE: Aplica para evaluar la efectividad de extractos vegetales para el control de microorganismos fitopatógenos. También aplica para pruebas de compatibilidad de productos químicos-biológicos o biológicos-biológicos.

PASOS A SEGUIR: OPERACIÓN A REALIZAR FOTOS O FIGURAS

Tabla de compatibilidad BIOPRODUCTOS PLANTAMEX

BIO M BIO PMX BIO PROTECTO M PUDRICIÓN PLANTA BIO-
Monitorear la prueba con bacterias al tercer día, y hongos FUNGI FUNGI RADYX SUELO M PLUS ROOT BioProtect BioBSpro INSECT Bio-large Pro-Gplant
monitorear al 1,3,5,y 7mo día. En el caso de la prueba de BIO M FUNGI C C NC NC C NC NC R C C
medio envenenado para evaluar la acción antifúngica de BIO PMX FUNGI C C NC NC C NC NC R C C
extractos naturales, ir midiendo el diámetro del hongo BIO RADYX C C NC NC C NC NC R C C
PROTECTO M SUELO NC NC NC NC NC C NC C C C
fitopatógeno y registralos en la bitácora de laboratorio y en el
PUDRICIÓN M PLUS NC NC NC C NC NC R R R R
FIV-XX. Registro de extractos vegetales con acción
PLANTA ROOT C C C NC NC NC NC R C C
fungicida.
BioProtect NC NC NC C NC NC C C R R
MONITOREO DE Si es prueba de compatibilidad, realizar una tabla de BioBSpro NC NC NC C R NC NC R R R
PRUEBA compatibilidad y llenar el formato FIV-XX. Formato reporte de BIO-INSECT R R R C R R C R R R
compatibilidad. C= compatibe, NC= no compatible y R=Se Bio-large C C C C R C R R C C
puede reducir la funcionalidad de alguno de los 2 productos. Pro-Gplant C C C C C C R R R C
Si el microorganismo correspondiente al ingrediente activo
del bioproducto crece en el medio envenenado se dice que
es C, si no, será NC, si crece pero en menor proporción que
en el control o hay crecimiento pero la morfología
macrocópica se ve afectada, será R.

Paro de proceso

Nota:

Equipo de Bata, guantes de nitrilo, guantes resistentes al calor y lentes.

seguridad:

Actividades de 5S: Matener todo el material en orden dentro de la campana de flujo laminar

Equipo y
herramienta a Campana de flujo Laminar
utilizar:

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