INSTITUTO DE EDUCACIN SUPERIOR TECNOLGICO PBLICO

TRUJILLO

MTODOS Y TCNICAS DEL ESTUDIO MICROBIOLGICO II

PROFESOR:

BLGO. MBLGO. FREDDY VALLEJO LEN

ALUMNO (A):

TEMA:

DETERMINACIN DEL ANTGENO DE SUPERFICIE DEL VIRUS DE

LA HEPATITIS B Y DETECCIN ANTICUERPOS VIH POR
INMUNOCROMATOGRAFA

LABORATORIO CLNICO IV

TRUJILLO PER

2017
I. INTRODUCCIN:

La hepatitis B es una enfermedad viral del hgado causada por el virus de la hepatitis B
(HBV). Puede cursar en forma asintomtica, o como un proceso agudo o crnico. En los
casos ms graves puede derivar en cirrosis heptica y carcinoma hepatocelular primario.
Se transmite principalmente por contacto parenteral, percutneo, o sexual. Tambin se ha
observado transmisin perinatal y horizontal.
El HBV est constituido por una nucleocpside que contiene el ADN asociado a
protenas core y una envoltura cuyo principal componente es una protena conocida como
antgeno de superficie (HBsAg). El HBsAg generalmente aparece 6 semanas despus de
la exposicin al HBV y persiste durante 4-14 semanas. Est presente durante el periodo
de incubacin, antes de la aparicin de la enfermedad clnica y puede ser detectado en
sangre 2 a 8 semanas antes de la aparicin de ictericia o de evidencias bioqumicas de
disfuncin heptica.
As, el HBsAg es un primer indicador de infeccin por el HBV. La hepatitis B crnica se
define como la presencia del HBsAg en sangre durante ms de 6 meses.
El diagnstico definitivo de la infeccin por el VIH slo puede establecerse por mtodos
de laboratorio, ya que en ningn caso las manifestaciones clnicas son lo suficientemente
especficas. Los mtodos directos detectan al propio virus o alguno de sus componentes,
como protenas o cidos nucleicos, mientras que los indirectos reconocen los anticuerpos
especficos producidos por el sistema inmunitario como respuesta a la infeccin vrica.
La deteccin por mtodos directos o indirectos del VIH ha permitido no solo reconocer a
las personas infectadas y establecer medidas preventivas adecuadas, sino que adems
constituye una ayuda esencial en el seguimiento de los pacientes para conocer el
pronstico de la enfermedad y la eficacia del tratamiento utilizado.
La deteccin de anticuerpos especficos anti-VIH es la forma habitual de diagnosticar
una infeccin por VIH. Los mtodos se dividen en: a) pruebas de screening, diseadas
con un mximo de sensibilidad para detectar todas las muestras positivas, y b) pruebas
confirmatorias, caracterizadas por su especificidad y que permiten asegurar la positividad
de una muestra previamente reactiva con un test de screening. Ambos ensayos realizados
de forma secuencial obtienen resultados excelentes en cuanto a exactitud y
reproducibilidad y tienen ms del 99% y 95% de sensibilidad y especificidad
respectivamente.
Los mtodos directos, para diagnstico de VIH estn basados en la deteccin del virus o
alguno de sus componentes. Incluye el cultivo vrico, la determinacin de antgeno p24
en plasma o suero y la demostracin de genoma vrico mediante tcnicas moleculares.
La deteccin del HBsAg es importante para el diagnstico de las hepatitis agudas y
crnicas, el control de portadores en bancos de sangre y unidades de dilisis, de
trasplantados y gestantes y para el control de preparados de sangre y derivados
destinados a transfusiones.
Los objetivos de la presente prctica son:
Interpretar el fundamento de una prueba inmunolgica para determinar la presencia
del antgeno de superficie del virus de la hepatitis B (HBsAg).
Determinar el interpretar la presencia o ausencia del HBsAg en una muestra
biolgica.
Conocer el fundamento de la inmunocromatografa como prueba rpida en el
serodiagnstico de VIH.
Realizar e interpretar el resultado de una prueba de serodiagnstico para VIH.
II. MATERIAL Y MTODOS:

2.1. Materiales:
2.1.1. Materiales biolgico:
Muestras de sangre venosa.
Suero, plasma o sangre total.
2.1.2. Materiales de laboratorio:
Algodn
Alcohol
Tubos de ensayo 13 x 100 mm
Gradilla
Gotero
Ligadura
Esparadrapo
Puntas de micropipetas descartables.
Aguja descartable N 20 o 21
Pipetas descartables.
2.1.3. Reactivos:
Dispositivo de prueba SD BIOLINE HBsAg WB
Dispositivos de pruebas inmunocromatogrfico sellados individualmente
en bolsas (antgenos recombianates de Escherichia coli de los virus VIH-1
gp41 y p24 y VIH-2 gp36, anti VIH de cabra)
Diluyente: Tampn TRIS 50 mmol/L, azida de sodio 0,02%.
2.1.4. Equipos de laboratorio:
Centrifuga
Cronmetro.
Micropipetas y puntas

2.2. Procedimiento:
2.2.1. Experimento # 01: Deteccin del Antgeno de Superficie del Virus de la
HepatitisB:
- Extraer por puncin venosa 5 mL y centrifugar a 3500 rpm por 5 minutos
para obtener suero o plasma sanguneo.
- Si las muestras no son inmediatamente probadas, deben conservarse en
refrigeracin a 2 8 C (se puede congelar hasta por 3 das).
- Las muestras con turbias dan resultados inciertos, por lo que deber de
clarificarse.
- Quitar la placa de la bolsa de aluminio, colquelo sobre una superficie plana
y seca.
- Aadir 100 L de la muestra en el pocillo S.
- Como la prueba empieza a trabajar, usted ver mover el color prpura a
travs de la ventana de resultados en el centro del dispositivo de prueba.
- Interpretar los resultados de la prueba despus de 20 minutos.
- Un resultado positivo no cambiar una vez que se ha establecido en 20
minutos.
- Sin embargo, con el fin de prevenir cualquier resultado incorrecto, el
resultado de la prueba no debe ser interpretado despus de 30 minutos.
Resultados:
- Negativo: la presencia de solamente una banda de color purpura dentro de la
ventana de resultado indica resultado negativo (lnea C).
 - Positivo: la presencia de dos bandas (lnea C y T) dentro de la ventana de
resultado, no importa que banda aparece primero, indica resultado positivo.
- Invlido: Despus d realizar la prueba y no es visible el color purpura
dentro de la ventana de resultado, el resultado es considerado invlido. Las
instrucciones no han sido seguidas correctamente o la prueba puede estar
deteriorada. Se recomienda que se repita el examen.
2.2.2. Experimento # 02: Deteccin de anticuerpos contra virus 1 y 2 de la
inmunodeficiencia humana por inmunocromatografa
- Antes de comenzar el ensayo, las muestras, los dispositivos de las pruebas y
el diluyente deben llevarse a temperatura ambiente (15 25C).
- Remover el dispositivo de la prueba de su bolsa.
- Rotular el dispositivo para identificar el paciente
- Sosteniendo la pipeta descartable u otra pipeta verticalmente deposite 20 uL
de sangre o 20 uL de suero o plasma en la ventana de la muestra (S) en la
parte inferior del dispositivo.
- Aada 3 gotas (aproximadamente 120 uL) del diluyente a la ventana de la
muestra.
- Lea los resultados dentro de los 5 a 20 minutos. Las muestras muy reactivas
producirn una lnea de prueba ya despus de algunos minutos. Las
muestras de baja reactividad pueden requerir un periodo ms largo de
incubacin mximo de 20 minutos.
III. RESULTADOS:
IV. DISCUSIN:
V. CONCLUSIONES:
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

6.1. BALCELLS, A. 1984. La Clnica y el Laboratorio. 13. Edicin. Editorial Marn

S.A. Zaragoza. Espaa.

6.2. CARRILLO, J. 1982. Hematologa, 2 Edicin. Editorial Interamericana. Mxico

D.F. Mxico.

6.3. CIRSAT, F. 1987. Diagnostico Hematolgico de Laboratorio Clnico. Tomo II.

2. Edicin. Editorial Interamericana. Mxico D.F. Mxico.

6.4. FISHER, A. 1985. Laboratorio de Anlisis Clnicos, 8 Edicin. Editorial El

Ateneo. Buenos Aires. Argentina.

6.5. GUERCI, A. 1989. Laboratorio Mtodos de Anlisis Clnicos y su Interpretacin.

4 Edicin. Editorial El Ateneo. Buenas Aires. Argentina.

6.6. KRUPP, M. 1983. Manual de Diagnstico Clnico de Laboratorio, 8 Edicin.

Editorial El Manual Moderno, Mxico D.F. Mxico.

6.7. LYNCH, M. 1987 Mtodos de Laboratorio. Vol. 1. 2 Edicin. Editorial

Interamericana S.A. Mxico D.F.

6.8. OPS. 1983. Manual de Tcnicas Bsicas para un Laboratorio de Salud. Publicacin
Cientfica N 439. Washington. USA.

6.9. RAMIREZ, R. 1988 Mtodos Prcticos de Laboratorio Clnico Bsico 2da.

Edicin. Lima.

6.10. www.biokitdemaracaibo.com/tecnicas/tests_control.../1i-hivp.pdf
VII.CUESTIONARIO:

1. Qu exmenes de laboratorio se realizan a un paciente con hepatitis B?

2. Cul mtodo consideras es mejor usarlo en el banco de sangre para detectar HBsAg
en suero: inmunocromatografa o ELISA? Por qu?

3. En qu consiste la vacuna para la hepatitis B?

4. Cul es el fundamento de la inmunocromatografa?

5. Cul es el fundamento de un ELISA para detectar anticuerpos contra el VIH?

6. Qu es una prueba de Screening para VIH?

7. Qu es una prueba de confirmacin para VIH, y cules son?

8. A qu se denomina sensibilidad, especificidad y valor predictivo de una prueba

inmunolgica? D ejemplos

9. En qu momento est recomendado hacerse una prueba de inmunolgica para

deteccin de anticuerpos anti-VIH?

10. En qu se fundamenta la inmunoelectrotransferencia para el diagnostico de VIH?

 ANEXOS

HEXAGON
Prueba rpida inmunocromatogrfica de 3ageneracin para la deteccin de anticuerposcontra los virus 1 y 2 de
lainmunodeficiencia humana
Fundamento:
HEXAGON HIV es un ensayo de 3a generacin basado en un mtodoinmunocromatogrfico.El ensayo
emplea antgenos recombinantes representando las regionesinmunodominantes de las protenas de la envoltura
de los virus VIH-1 y VIH-2. Antgenos de captura gp41 y p24 del VIH-1 son fijados sobre la membranaen la
lnea de prueba A, y el antgeno de captura gp36 del VIH-2 esinmovilizado en la lnea de prueba B. Los
mismos antgenos, marcados conun colorante, se encuentran en el velln de conjugado del dispositivo. Una
regin angosta de la tira reactiva, sensibilizada con anticuerpos anti-VIH,sirve de lnea de control C.
Cuando la muestra migra a travs del velln de conjugado los anticuerposanti-VIH-1 o anti-VIH-2 especficos
a las antgenos recombinantes se liganespecficamente al conjugado coloreado, formando inmunocomplejos
los queson inmovilizados por las antgenos de captura recombinantes fijadas en laslneas de prueba A y B,
produciendo all lneas roja violetas. El excedente delconjugado se fija en la lnea de control C que indica el
funcionamiento correcto dela prueba.
Interpretacin:
Negativo (fig. 1)
Slo la lnea de control roja
violeta (C) aparece en la parte
superior de laventana
rectangular indicando la
realizacin apropiada del ensayo
y elfuncionamiento correcto de
los reactivos.
Positivo (fig. 2,3 y 4))
Una o dos lneas de prueba roja violetas apareciendo debajo de C indican unresultado positivo para anticuerpos
del VIH-1 (lnea en A) o del VIH-2 (lneaen B) en la muestra.An una lnea dbil debe interpretarse como
resultado reactivo. Intensidadesdiferentes entre la lnea de control y las lneas de prueba pueden ocurrir,
perostas son irrelevantes para la interpretacin.
No vlido (fig. 5)
Si aparece ninguna lnea de control (C), aun si aparece una lnea de prueba,repita la prueba con un nuevo test,
siguiendo cuidadosamente elprocedimiento.

SD HBSAG WB
Principios de la prueba:
Es un inmunoensayo sndwich de doble anticuerpo. Los complejos anticuerposconjugados oro coloidal Anti-
HBsAg son inmovilizados en el dispositivo de prueba. Al agregarse la muestra,esto migra mediante difusin
capilar a travs de la tira, rehidratando el complejo conjugado oro coloidal. Siest presente, el HBsAg
reacciona con el conjugado coloidal formando partculas. Estas partculas continuarnmigrando a lo largo de la
tira hasta la Zona de Prueba (T) donde son capturados por los anticuerpos anti-HBsAg inmovilizados ah y
generando una lnea roja visible. Ante la ausencia del HBsAg en la muestra, nose manifiesta la lnea roja en la
Zona de Prueba (T). El conjugado coloidal contina migrando solo, hasta sercapturados en la Zona de Control
(C) mediante la accin del anticuerpo cabra anti-ratn IgG inmovilizado,generando una lnea roja, lo cual
indica la validez de la prueba.
Interpretacin de resultados: