“Año del Fortalecimiento de la Soberanía Nacional”

UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

ESCUELA DE MEDICINA HUMANA

INFORME DE LABORATORIO N° 6

DOCENTE:

➔ ENRIQUE MARTIN ALVA

CURSO: BIOQUÍMICA Y NUTRICIÓN HUMANA

TURNO: LUNES 2:20 - 6:00 PM

INTEGRANTES:

➔ MUÑOZ JUSTINIANO, YASIRET ESTER

➔ ORBEGOSO GAMONAL, MARTHA
➔ PAZ CONTRERAS JHENNIFER
➔ MONTOYA DAVILA, ABBI
➔ SANCHEZ BARTUREN, SAULO
➔ MEJÍA, CARLOS
➔ ROBLES LACHIRA, ADRIAN
 INFORME DE LABORATORIO SEMANA 5
CUANTIFICACIÓN DE HEMOGLOBINA, BILIRRUBINA Y ÁCIDO ÚRICO
A. CUANTIFICACIÓN DE HEMOGLOBINA:
1. INTRODUCCIÓN
La hemoglobina es la molécula que transporta el oxígeno de los pulmones a los tejidos y se
encuentra en los hematíes, formados en la médula ósea. Está formada por cuatro subunidades, en el
adulto dos alfas y dos betas. Cada subunidad está formada por una cadena de globina que tiene un
núcleo heme con Fe ++.
La disminución de la concentración de hemoglobina constituye la anemia. La OMS ha establecido
como criterio de anemia <13 g/dl en varones, <12 g/dl en mujeres, <11 g/dl en gestantes. En niños
está en función de la edad.
La anemia tiene diversas causas: menor formación por razones nutricionales (deficiencia de hierro,
de vitamina B12, de ácido fólico) o deficiencia de la médula ósea (aplasia), hemólisis por problemas
del glóbulo rojo (hemoglobinopatías, esferocitosis, etc.) o por presencia de anticuerpos (anemia
hemolítica autoinmune, eritroblastosis fetal, etc.) o por hemorragia.

2. MUESTRA
Sangre total. Volumen de la muestra de solo 8 o 10 µl.

3. REACTIVOS
A. MATERIALES
· Micro cubeta compatible con el hemoglobinómetro.
· Torundas de algodón.
· Guantes no estériles.
· Alcohol
B. EQUIPO
· Hemoglobinómetro

4. PROCEDIMIENTO
· Una vez que se retire la lanceta retráctil de la zona de punción, esperar que fluya o se
forme espontáneamente la primera gota, sin presionar el dedo.
· Si la gota no se forma espontáneamente, estirar ligeramente la piel del dedo hacia
ambos lados de la punción, evitar la presión ya que puede ocasionar “ordeño”
involuntario y puede ocasionar hemólisis por lo tanto error en los resultados.
· Limpiar las dos primeras gotas de sangre con una torunda de algodón limpia y seca.
Estas gotas de sangre contienen líquido intersticial y pueden dar resultados falsos.
· Sostener la microcubeta de la zona distal opuesta a la zona de reacción. En este paso
y en relación a la micro cubeta se debe tener en cuenta lo siguiente:
- Observar la integridad de la microcubeta, coloración y homogeneidad del
reactivo. Descartar si esta tiene coloración anaranjada o presenta grumos
dentro de la zona de reacción.
- Mantener la tapa del contenedor cerrada, para evitar la exposición
innecesaria de las microcubetas al aire, a la humedad y al calor,
 especialmente en climas húmedos, de esta manera se evita la oxidación de
los reactivos.
- Descartar la microcubeta que haya estado expuesta por más de 15 minutos
fuera de su envase original.

5. RESULTADOS
Estudiante mujer de 21 años, nacida en Trujillo. Lectura del equipo: 13.5 g/dl
Estudiante mujer de 18 años, nacida en Trujillo. Lectura del equipo: 16 g/dl

6. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Ambas estudiantes están dentro de los valores normales de hemoglobina, ya que van desde 12 a 14
g/dl (mujeres).

7. VALORES DE REFERENCIA
a) VARONES: 14 a 16 g/dl
b) MUJERES: 12 a 14 g/dl a nivel del mar.

8. CUESTIONARIO
1) Haga un esquema de la síntesis de la hemoglobina
 2) ¿Cómo se clasifican las anemias?

3) ¿En una anemia por deficiencia de hierro cuáles son los exámenes bioquímicos que se
solicitan?
● Un conteo de reticulocitos para ver si su médula ósea está produciendo glóbulos rojos a una
tasa acelerada (esto es señal de la pérdida previa de sangre).
● Mediciones de hierro y ferritina en el suero para evaluar la cantidad de hierro en su sangre y
su cuerpo.
● Un frotis de sangre periférica para ver si sus glóbulos rojos tienen una forma normal.
● Una electroforesis de hemoglobina para evaluar la hemoglobina anormal que se presenta en
la talasemia y en la anemia falciforme.
● Una prueba de fragilidad osmótica para ver si sus glóbulos rojos son más frágiles de lo
normal.

4) ¿Qué es una anemia megaloblástica y cuáles son sus causas?

Se debe al déficit de ácido fólico o Vitamina B12

CAUSAS:
Mala absorción de folato
Enfermedades digestivas
Eritropoyesis ineficaz

5) ¿Cómo se corrige el efecto de la altura sobre la concentración de hemoglobina?

Los valores de hemoglobina, en personas que viven en niveles altos sobre el nivel del
mar, presentan una concentración mayor. Para determinar si el paciente presenta
anemia, es un factor de correlación, determinado según la altura, para identificar si los
niveles de hemoglobina se encuentran en su rango normal. La eritropoyetina es una
proteína que estimula la producción de eritrocitos. Esta es segregada en mayor cantidad,
cuando hay presencia de hipoxia.

Nos podemos guiar con esa tabla, solo restamos o sumamos, por ejemplo 13.5 (hb) + 1.8 =
15.3 o 13.5 (hb) - 1.8 = 11.7

6) ¿Cuáles son las hemoglobinas embrionarias y fetales?

Hb Fetal: α2 γ2
Durante la etapa embrionaria, aproximadamente durante los dos primeros meses de
gestación, la hemoglobina más abundante es la hemoglobina Gower 1, un tipo de
hemoglobina exclusiva de esta etapa. También aparecen bajas cantidades de HbE Gower
2 y HbE Portland 1 y 2. En los 7 meses siguientes, a lo largo de toda la vida fetal, la
hemoglobina más abundante es la HbF. También aparecen cantidades bajas de
hemoglobinas embrionarias Gower 1 y Portland 1 y 2. En el momento del parto la
hemoglobina fetal representa desde el 50 hasta el 95% de la hemoglobina total.
 7) ¿Cuáles son las hemoglobinas del adulto y cómo se diferencian?
- Hemoglobina A. Este es el tipo más común de hemoglobina que se encuentra
normalmente en los adultos. Algunas enfermedades, como las formas graves de
talasemia , pueden hacer que los niveles de hemoglobina A sean bajos y que los
niveles de hemoglobina F sean altos.
- Hemoglobina A2. Es un tipo normal de hemoglobina que se encuentra en pequeñas
cantidades en los adultos.

La función principal de la hemoglobina es el transporte de oxígeno, y para ello tanto la HbA como la
HbF deben tener la afinidad adecuada por el oxígeno que les permita captarlo y liberarlo según sea
necesario. El feto en desarrollo no respira aire por si mismo; depende totalmente del oxígeno
presente en la sangre de la madre. La HbF tiene una afinidad por el oxígeno mayor que la HbA, lo que
permite la transferencia de oxígeno desde la madre al feto. Tras el nacimiento, cuando los pulmones
entran en funcionamiento, los niveles de hemoglobina fetal caen rápidamente y aumentan los de
HbA, que tiene mejores características para entregar oxígeno a los tejidos.
9. CONCLUSIÓN

El análisis de hemoglobina mide los niveles de hemoglobina en la sangre. La hemoglobina es una

proteína de los glóbulos rojos que lleva oxígeno de los pulmones al resto del cuerpo. Los niveles
anormales de hemoglobina podrían ser signo de un trastorno de la sangre.

B. CUANTIFICACIÓN DE BILIRRUBINA:
1. INTRODUCCIÓN
Producto del catabolismo de la hemoglobina (70 a 90%) y de otras hemoproteínas.
Puede ser:
a. BILIRRUBINA INDIRECTA:
Es la recién formada. Requiere un solvente para unirse al reactivo de van der Bergh. Se
transporta unida a la albúmina, no se elimina por la orina. Captada por el hepatocito a través
de un sistema aún no dilucidado. En el citosol se une a algunas de las
glutatión-5-transferasas. y al conjugarse con dos ácidos glucurónico se convierte en directa.
b. BILIRRUBINA DIRECTA O CONJUGADA:
Con una o dos moléculas de ácido glucurónico por acción de la UDP-glucuronil transferasa
formando respectivamente mono o diglucurónidos de bilirrubina. Es excretada a través de la
membrana plasmática de los canalículos, pasando a los propios conductos biliares a través
de un transporte que requiere ATP donde participa MRP2 o proteína ligada a la multidrogo
resistencia-2. La bilirrubina directa es eliminada por la bilis hacia el intestino donde es
convertida en estercobilinógeno y luego a estercobilina dando el color a las heces. La
bilirrubina directa es soluble y si aumenta se elimina por la orina.
c. BILIRRUBINA TOTAL:
Suma de directa e indirecta.

2. FUNDAMENTO DEL MÉTODO

La bilirrubina reacciona específicamente con el ácido sulfanílico diazotado (reacción de Ehrlich)
produciendo un pigmento color rojo-violáceo (azobilirrubina) que se mide fotocolorimétricamente a
530 nm. Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona directamente con el diazorreactivo, la
bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la presencia de un desarrollador acuoso (Reactivo A)
que posibilite su reacción. De forma tal que, para que reaccione la bilirrubina total (conjugada y no
conjugada) presente en la muestra, debe agregarse benzoato de cafeína al medio de reacción.

3. REACTIVOS
Reactivo A: solución acuosa de benzoato de cafeína 0,13 mol/l, tamponada y estabilizada.
Reactivo B: solución de ácido sulfanílico 29 mmol/l y ácido clorhídrico 0,17 mol/l.
Reactivo C: solución de nitrito de sodio 0,07 mol.
Diazorreactivo: de acuerdo al volumen de trabajo, mezclar
(1 parte de Reactivo C con 21 partes de Reactivo B. Rotular y fechar.)

4. PROCEDIMIENTOS
Preparar el siguiente sistema
 MUESTRA BLANCO DIRECTA TOTAL

Suero 200 ul 200 ul 200 ul

Agua destilada 2.5 ml 2.5 ml -

Reactivo A - - 2.5 ml

Reactivo B 200 ul - -

Diazoreactivo - 200 ul 200 ul

Mezclar de inmediato cada tubo por inversión. Luego de 5 minutos, leer en espectrofotómetro a 530
nm o en fotocolorímetro con filtro verde (520-550 nm), llevando el aparato a cero con agua
destilada. Las lecturas pueden efectuarse entre 4 y 15 minutos, excepto para la bilirrubina directa
que debe leerse a los 5 minutos exactos. Si se lee antes, habrá subvaloración de los resultados por
reacción incompleta. Si se lee después, habrá sobrevaloración porque comienza a reaccionar la
bilirrubina libre.
El equipo ha sido previamente calibrado con un estándar de bilirrubina de 10 mg/dl.

5. RESULTADOS

6. INTERPRETACIÓN
- Bilirrubina total = 0.41 (dentro de los valores normales)
- Bilirrubina directa = 0.22 (dentro de los valores normales)
- Bilirrubina indirecta = BT - BD = 0.19

7. VALORES DE REFERENCIA
Bilirrubina en suero o plasma
· ADULTOS:
DIRECTA: Hasta 0.2 mg/dl
TOTAL: Hasta 1 mg/dl
· RECIÉN NACIDOS:

NACIDOS A TÉRMINO PREMATUROS

Sangre de cordón 2.5 mg/dl

Hasta las 24 horas 6.0 mg/dl 8 mg/dl

Hasta las 48 horas 7.5 mg/dl 12 mg/dl

Del 3º al 5º día 12 mg/dl 24 mg/dl

8. CUESTIONARIO
1) Haga un esquema de la síntesis y metabolismo de la bilirrubina

2) ¿Por qué se llama bilirrubina directa?

Debido a que actúa de forma directa
 3) ¿Por qué se llama bilirrubina indirecta?
Va en compañía de la albúmina para poder ingresar al hígado
4) ¿Cuál es el rol del reactivo A?
Poder separar a la albúmina de la bilirrubina indirecta
5) ¿Con qué reactivo se une la bilirrubina para dar color?
La bilirrubina reacciona específicamente con el ácido sulfanílico diazotado
produciendo un pigmento color rojo-violáceo (azobilirrubina) que se mide foto
colorimétricamente a 530 nm.
6) Haga un cuadro de clasificación de la hiperbilirrubinemia con ejemplos de los tipos

7) ¿Qué es la ictericia?
Es una coloración amarilla en la piel, las membranas mucosas o los ojos. El color amarillo proviene de
la bilirrubina, un subproducto de los glóbulos rojos viejos. La ictericia es un signo de otras
enfermedades.

CONCLUSIÓN
La determinación de la bilirrubina se considera tradicionalmente como un marcador de disfunción
hepática, aunque se requiere de otras pruebas para mejorar el diagnóstico. En la determinación de la
bilirrubina debe considerarse la presencia de algunos factores interferentes: lipemia y hemólisis.

C. CUANTIFICACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO:

1. INTRODUCCIÓN

El ácido úrico es el producto del catabolismo de las purinas, bases de los ácidos nucleicos. Se
sintetiza en el hígado y en el intestino delgado por acción de la xantino oxidasa. Su producción varía
en función del contenido de purinas del alimento y de las síntesis de novo, de recuperación y
degradación de las purinas. Es eliminado por los riñones 66 a 75% El incremento de ácido úrico en
sangre o hiperuricemia, conforme incrementa su valor se asocia a artritis gotosa o urolitiasias (gota),
de hecho la principal complicación de la hiperuricemia es la artritis gotosa, cuando el ácido úrico es
>9 mg/dl la frecuencia de gota es de 4.9% La gota es una enfermedad metabólica que afecta más a
varones adultos en la etapa media de la vida o de edad avanzada y a mujeres postmenopáusicas; se
caracteriza por episodios de artritis aguda o crónica por depósito de cristales de urato monosódico
en la articulaciones y por tofos en el tejido conjuntivo, litiasis urinaria, nefropatía por urato e
insuficiencia renal.

2. MUESTRA:

- Suero

3. FUNDAMENTO DE MÉTODO
El esquema de reacción es el siguiente:
UOD
ácido úrico + 2 H2 O + O2 alantoína + H2 O2 + CO2
POD
2 H2 O2 + 4-AF + 3,5-DHS quinonimina roja.

4. REACTIVOS

➔ S. Standard: solución de ácido úrico 10 mg/dl.

➔ Reactivo A: viales conteniendo uricasa (UOD), peroxidasa (POD), 4-aminofenazona (4-AF) y

ferrocianuro de potasio.

➔ Reactivo B: solución de diclorohidroxibenceno sulfónico (DHS) en buffer fosfatos pH 7,4.

5. PROCEDIMIENTOS

TÉCNICA CON REACTIVOS SEPARADOS

En tres tubos o cubetas espectrofotométricas marcadas B (Blanco), S (Standard) y D

(Desconocido), colocar: B

B S D

Standard - 20 ul -
 Muestra - - 20 ul

Reactivo de 1 ml 1 ml 1 ml
Trabajo

Mezclar suavemente e incubar 5 minutos en baño de agua a 37o C o 20 minutos a temperatura

ambiente (18-25o C). Retirar, enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm o en fotocolorímetro con
filtro verde (490-530 nm), llevando el aparato a cero con el Blanco.

Estabilidad de la mezcla de reacción final

El color de reacción final es estable 30 minutos, por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de
ese lapso.

6. RESULTADOS

7. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Según el valor dado, podemos decir que se encuentra dentro de lo normal.

8. VALORES DE REFERENCIA DEL MÉTODO ENZIMÁTICO

➔ Hombres: 3,5-7,2 mg/dl

➔ Mujeres: 2,6-6,0 mg/dl

9. CUESTIONARIO

1) ¿Cuáles son las características de los cristales de ácido úrico en la orina?

La presencia de cristales de ácido úrico en la orina es habitualmente normal,

que puede suceder por nuestra dieta, baja ingesta de agua y someterse a
cambios de temperatura. Sin embargo, cuando la concentración de estos
cristales es elevada en la orina, es un indicio para poder dar un diagnóstico de
alguna enfermedad, por ejemplo: cálculos renales. Los cálculos renales pueden
ser tan diminutos como un granito de arena o tan grandes como una perla.
Incluso algunas piedras pueden tener el tamaño de una pelota de golf. La
superficie de la piedra puede ser lisa o con picos. Por lo general son de color
amarillo o marrón.

2) ¿Qué es la gota?

Es la enfermedad que se produce por la formación de cristales de una sal

del ácido úrico (urato de sodio) en los tejidos, más frecuentemente en las

articulaciones.
 3) ¿Qué dieta debe seguir un paciente con hiperuricemia?

Se recomienda evitar toda carne de vacuno, cerdo, cordero y ave, así

como sus jugos,extractos, vísceras y embutidos. Evitar todos los tipos
de pescado y de bebidas alcohólicas y carbonatadas. Tampoco se
recomienda el consumo de legumbres, espinacas y frutas muy dulces
como el plátano o la uva.

4) ¿Cuál es la base genética de la hiperuricemia?

5) ¿Cuáles son las causas de la hiperuricemia?

- Hiperuricemia primaria. Aumento en la producción de ácido úrico por la

degradación de purinas. Los niveles aumentan porque los riñones no pueden

eliminar eficientemente el ácido úrico de la sangre.

- Hiperuricemia secundaria. Muerte celular por ciertos cánceres o agentes

quimioterapéuticos.

6) ¿Qué es gota primaria y la gota secundaria?

- Gota primaria: Corresponde a la inmensa mayoría de los casos y no existe otra enfermedad
que sea la causa del problema. Pueden establecerse dos situaciones:
1. Por aumento de la producción de ácido úrico. El defecto exacto suele ser desconocido (idiopático)
si bien se conocen algunos fallos enzimáticos que la ocasionan, como la hiperactividad de la enzima
fosforribosil-pirofosfato sintetasa.
2. Por disminución en la eliminación de ácido úrico por el riñón. Existe un defecto renal que ocasiona
menor secreción de ácido úrico por los túbulos renales.
 - Gota secundaria: Recibe este nombre la gota originada por otra enfermedad o motivo,
pueden distinguirse varias causas:
➔ Aumento de la producción de ácido úrico. Como ocurre en la policitemia, leucemia, mieloma
múltiple, anemia hemolítica, psoriasis extensas y tumores malignos. Muchas de ellas son
debidas a aumento de la actividad de la médula ósea e intenso recambio celular con
catabolismo aumentado de moléculas de ADN.
➔ Disminución en la eliminación de ácido úrico por el riñón. Tiene lugar en la insuficiencia
renal, riñón poliquístico, hipotiroidismo, diabetes insípida y deshidratación, entre otras.
➔ Originada por medicamentos. Como los diuréticos, etambutol, ácido nicotínico y algunos
quimioterápicos empleados para el tratamiento del cáncer.

CONCLUSIÓN
La prueba de ácido úrico se usa generalmente para: Diagnosticar gota. Encontrar la causa de cálculos
renales frecuentes. Controlar el nivel de ácido úrico en personas que se someten a ciertos
tratamientos de cáncer.

10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1) Kasper D , Fauci A, Hauser S, Longo D, Jameson L, Loscalzo J. Ed, Harrison, Principios de

Medicina Interna, Ed19 ed, 2016, McGraw Hill Interamericana Ed, Mexico, pg 2232-2237.

2) RodwelL V, Bender D, Botham K, Kennelly P, Weil P.Harper. Bioquímica Ilustrada.

3) Simulador virtual y diapositivas de Dr Enrique Marti. Disponible en:

https://docs.google.com/presentation/d/1fLUjwP96fByti3EOTQpGVwcUdarY1c2f/edit#sli
de=id.p18
https://docs.google.com/presentation/d/1Lpa0o3FVBMNIX5XY-L1BZ70toQdgh5e9/edit#
slide=id.p11

4) Vademecum Wiener Lab, Rosario Argentina.

5) Jordán T. MINSA Guía Técnica: Procedimiento para la determinación de la hemoglobina

mediante hemoglobinómetro portátil , Lima 2013
https://web.ins.gob.pe/sites/default/files/Archivos/cenan/van/tecnica_vigilancia_nutrici
onal/bioquimica/Determinaci%C3%B3n_hemoglobina_mediante_hemoglobin%C3%B3m
etro_portatil.pdf.
 ANEXO
CUANTIFICACIÓN DE LA HEMOGLOBINA

PROCEDIMIENTO:

RESULTADO: