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UNIVERSIDAD

UNIVERSIDAD
VERACRUZANA
FACULTA DE Q.F.B.

LABORATORIO DE
HEMATOLOGA.
PRCTICA NO. 13
CUANTIFICACIN DE
HEMOGLOBINA FETAL
EQUIPO 5.

OBJETIVO
Que el alumno aprenda a

medir correctamente la Hb
fetal en muestras de sangre,
as como conocer la utilidad
de la medicin de la misma.

FUNDAMENTO
Cada eritrocito contiene molculas de Hb.
En el ltimo trimestre de la gestacin el subtipo HbF, est

formada por globinas (2 alfa y 2 gama) y 4 grupos hemo; que


es mas afn al oxgeno que la HbA, porque in tero el feto no
tiene pulmones funcionales y sus glbulos rojos toman el
oxigeno del intercambio gaseoso realizado en la placenta

Entre el 97-98,5% de O2 se

une al grupo hemo de la


hemoglobina
formando
(oxihemoglobina), solo un
1,5 % de oxigeno circula
disuelto en el plasma.
La cantidad de hemoglobina

de todos los eritrocitos


determina la cantidad de
oxgeno
que
puede
transportar,
o
bien
se
deduce que la cantidad de
oxigeno que se transporta
depende de la cantidad de
eritrocitos en la sangre.

En las personas los niveles

normales
de hemoglobina
estn entre los 12 y 17 g/ por
cada decilitro de sangre y la
hemoglobina corresponde al
subtipo postnatal A (A= del
adulto o HbA)
En el recin nacido o neonato

tiene entre 12 y 17 g/ por


cada decilitro de sangre, y la
Hb corresponde al subtipo
HbFes que es la hemoglobina
normal del feto y del recin
nacido, la cual en su mayor
parte se degrada en los
primeros das de vida, siendo
sustituida por la HbA. Sin
embargo, un sujeto normal
produce
cantidades
pequeas de Hb F durante
toda su vida.

La

Hb F, a diferencia de la Hb A, resiste a la
desnaturalizacin por lcalis. Su cuantificacin
se basa en alcalinizar una muestra problema de
hemolisado y neutralizndola, la hemoglobina
desnaturalizada se precipita con sulfato de
amonio y se filtra, obteniendo una solucin que
contendr solo la hemoglobina resistente a la
accin del lcali y que puede ser medida
fotocolorimtricamente y expresada como un
porcentaje de hemoglobina total.

TCNICA
1-2

Colocar en un tubo de ensayo de 13 x 100 mm, 1.6 de KOH.


Agregar 0.1 ml de hemolisado, echando a andar el cronmetro al
mismo tiempo.

3-4

De inmediato, agitar continua y vigorosamente el tubo, por 20


segundos.
Exactamente un minuto despus de haber agregado el hemolisado,
aadir 3.4 ml de la solucin de sulfato de amonio saturado.

5-6

Agitar energticamente y filtrar con papel de Whatman. El filtrado


obtenido contendr la hemoglobina fetal.
Preparar una solucin de hemoglobina total poniendo en un tubo
5ml de agua destilada, y con pipeta Sahli agregarle 0.02ml del mismo
hemolisado.

7-8
9

En un espectrofotmetro a 540nm,
leer las densidades pticas de cada
tubo usando agua destilada como
blanco.

Realizar los clculos:


% de HB-F = (D.O. del Filtrado/ D.O.
de HB total) x 0.203 x100

TABLA CON VALORES DE REFERENCIA


DE HEMOGLOBINA FETAL.
EDAD

Hb FETAL

Recin nacido

70-90%

1 mes

50-75%

2 meses

25-60%

3 meses

10-35%

6 meses

6-8%

1 ao

1-2%

Adulto

0-2%

GUA DE ESTUDIO
1.-

Cul es la
hemoglobina A?

diferencia

entre

la

hemoglobina

fetal

la

La

hemoglobina fetal tiene una mayor captacin de oxigeno que la


hemoglobina A, por su conformacin, es decir la hemoglobina fetal tiene dos
cadenas alfa y dos cadenas gamma y la hemoglobina A cuenta con dos
cadenas alfa y dos cadenas beta, esto hace que esta ltima tenga una
menor afinidad por el oxgeno.

2.- En qu casos se encuentran valores elevados de hemoglobina

fetal en un adulto?
La hemoglobina fetal se caracteriza por la supresin de la actividad del

complejo gentico estructural beta y delta, la cadena gamma contina


producindose en cantidad creciente a lo largo de la vida para compensar la
falta de las cadenas beta y delta. Se han descrito varios tipos diferentes de
Hb-F, el tipo negro: en donde las cadenas G-gamma y A-gamma se producen
en cantidades casi iguales, la forma griega: en la que la mayor parte de la
Hb-F la forman cadenas A-gamma

3.-

Qu otro mtodo
hemoglobina fetal?

puede

utilizarse

para

determinar

Los mtodos de identificacin pueden ser por frotis en donde se muestra

anisocitosis y clulas diana, la prueba del metabisulfito sdico, la cual es


positiva y la electroforesis de hemoglobina en donde se encuentra HbS, HbF
y HbA2 con valores de HbF de alrededor de 15-35%.
4.- Cules pueden ser los factores de error en esta determinacin?
La temperatura, el pH y la concentracin del hemolizado son condiciones

crticas en estos tipos de determinacin, lo cual exige estricto control de


calidad en la preparacin de los reactivos y en las condiciones de la prueba.
Por ejemplo, la microtcnica de Serjeant involucra un control exacto de la
temperatura (25C), circunstancia que dificulta su aplicacin en reas
tropicales. La microtcnica de Schroeder elimina el crtico control de
temperatura, siendo una tcnica sencilla de realizar y que utiliza los
reactivos de la tcnica de Betke. Adems tiene la ventaja de que requiere
hemolizados libres de impurezas plasmticas (protenas), ya que usa
glbulos rojos lavados. Estas impurezas proteicas en otros mtodos tienden
a elevar los niveles de Hb F.

REFERENCIAS
Argelles, G. Fundamentos de Hematologa. 2003.

Mxico: Editorial Mdica Panamericana

(2016). Retrieved 1 October 2016, from

http://morfofisiologia.co/lecturas/semana6/morfo2/HEMO
GLOBINA%20FETAL.pdf

PREPARACIN
DE
HEMOLISADOS

OBJETIVO
Que el alumno aprenda a

preparar hemolisados a
partir de la sangre total y
conozca su utilidad en el
laboratorio.

FUNDAMENTO
Cuando solo se analizar la Hb de los eritrocitos, es

necesario eliminar los contaminantes. Para ello se


lavan y posteriormente se lisan con sustancias que por
densidad nos permitan separar los restos celulares de la
solucin de Hb, a esta solucin se le denomina
hemolisado.

(Tetracloruro de carbono)

TCNICA
Centrifugar la sangre
en EDTA por 5 min a
3000 rpm

Lavar el paquete
eritrocitario 3 veces
con solucin salina
isotnica

Retirar el sobrenadante

Agregar agua destilada


en la misma cantidad
que el paquete de
eritrocitos y agregar 1
ml de tetracloruro de
carbono

Agitar en el vortex
vigorosamente para
producir hemolisis

Centrifugar por 10 min


a 1000 rpm

Con pipeta pasteura


separar y conservar el
hemolisado que
queda como
sobrenadante ,
cuidado de tomar del
estroma

El hemolisado puede
conservarse en en
congelacin

VALORES DE REFERENCIA
No existen

NOTA:
Se considera el mtodo ms prctico debido a que se

puede separar fcilmente lo solucin de Hb sin


contaminante con el estroma, ya que con este mtodo
queda en la interfase y no en la superficie, como sucede
con otros mtodos.