NUTRICION MICROBIANA

I.- NUTRICION DE LOS MICROORGANISMOS

La gran meta que tiene un microorganismo es crecer y dividirse; para ello necesita duplicar el material
que posee. Las células utilizan elementos químicos que provienen del medio ambiente para
transformarlos en los constituyentes característicos que componen dicha célula.
Estos compuestos químicos se llaman nutrientes y el proceso por el cual una célula transforma estos
nutrientes en sus componentes celulares se denomina anabolismo o biosíntesis.
La biosíntesis es un proceso que requiere energía. Esta energía se obtiene del medio ambiente. Las
células pueden utilizar tres tipos distintos de fuentes de energía:
 Luz.
 Compuestos orgánicos
 Compuestos inorgánicos.

Aunque algunos organismos obtienen su energía de la luz, la mayor parte lo hacen a través de
compuestos químicos. Cuando estos compuestos químicos se rompen originando compuestos más
simples se libera energía y a este proceso se le denomina catabolismo.
El resultado colectivo de las reacciones anabólicas y catabólicas es el metabolismo.
Cuando los microorganismos se separan de su hábitat (donde adquieren los nutrientes) y se cultivan
en laboratorios o industrias se deben usar medios de cultivo que contengan los elementos químicos
necesarios para su crecimiento.

II.- NUTRIENTES
Los nutrientes que requiere una célula para su crecimiento se pueden clasificar en los siguientes
grupos:
1.- Macronutrientes: carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno.
2.- Micronutrientes: fósforo, potasio, azufre, magnesio.
3.- Vitaminas y hormonas
4.- Elementos traza: zinc, cobre, manganeso, molibdeno, cobalto.

1.- MACRONUTRIENTES
Carbono. Todos los organismos necesitan carbono en alguna de sus formas. El carbono forma el
esqueleto de los tres más importantes nutrientes (carbohidratos, lípidos y proteínas) que se utilizan
para la obtención de energía así como material celular. Los microorganismos que utilizan compuestos
orgánicos como fuente de carbono se llaman heterotrofos y aquellos que utilizan el CO2 como fuente
de carbono se llaman autotrofos.

Hidrógeno y Oxígeno. El hidrógeno y oxígeno forman parte de muchos compuestos orgánicos. Se

encuentran en el H2O, como componentes de nutrientes y en la atmósfera. Además el O2 se utiliza en
la respiración aeróbica como aceptor terminal de electrones.

Nitrógeno. Todos los organismos requieren nitrógeno. El nitrógeno es metabolizado y entra a formar
parte de las proteínas, ácidos nucleicos y polímeros de la pared celular. Las fuentes de nitrógeno que
pueden ser utilizadas por diferentes organismos incluyen el N2 atmosférico en algunos procariotas,
otros utilizan compuestos inorgánicos como nitratos, nitritos o sales de amonio, mientras que otros
requieren compuestos nitrogenados orgánicos como son los aminoácidos o péptidos.

2.- MICRONUTRIENTES
Fósforo. El fósforo es esencial para la síntesis de ácidos nucleicos y ATP; también forma parte de los
fosfolípidos y polímeros de la pared celular. El fósforo se suministra normalmente como fosfato
inorgánico; alternativamente se puede utilizar fosfato orgánico como son los glicerofosfatos y
fosfolípidos.
Potasio. El ión potasio actúa como coenzima y probablemente como catión en la estructura de RNA y
otras estructuras aniónicas celulares.
Azufre. El azufre es necesario para la biosíntesis de los aminoácidos cisteina, cistina y metionina.
También forma parte de coenzimas como biotina, coenzima A y ferredoxina. El azufre se suministra
en forma inorgánica como sulfato u orgánica como cistina, cisteina y metionina.

Magnesio. Se utiliza como cofactor de reacciones enzimáticas donde actúa el ATP.

3.- VITAMINAS Y HORMONAS

Las vitaminas se clasifican en dos grupos, hidrosolubles y liposolubles. Dentro de éstas últimas la
vitamina A, D y E no son necesarias para el crecimiento de las bacterias. Todas las vitaminas
hidrosolubles, excepto el ácido ascórbico, son necesarias para el crecimiento de bacterias. La mayor
parte de las vitaminas hidrosolubles son componentes de coenzimas. En los medios indefinidos se
utiliza como fuente de vitaminas el extracto de levaduras.

4.- ELEMENTOS TRAZA

En general los requerimientos de elementos traza se conocen sólo cualitativamente ya que es difícil
demostrar su requerimiento debido a que las cantidades necesarias se suelen encontrar a menudo
como contaminantes en otros constituyentes del medio. Son necesarios para activar algunas enzimas;
por ejemplo, el ion molybdenum (Mo6+) se necesita en la nitrogenasa que es el enzima que cataliza la
conversión del nitrógeno atmosférico en amoníaco en la fijación biológica de nitrógeno.

III.- PERMEABILIDAD Y TRANSPORTE

La membrana citoplásmica controla el paso de los nutrientes dentro de la célula, así como hacia fuera
de la célula. Existen 4 mecanismos que regulan el transporte de nutrientes:

1.- DIFUSION PASIVA

Las moléculas de H2O y algunos nutrientes liposolubles pasan libremente a través de la membrana
hasta equilibrar concentraciones. No hay consumo de energía.

2.- DIFUSION FACILITADA

Los nutrientes se unen a una proteína transportadora para atravesar la membrana pasando de mayor
a menor concentración. No hay consumo de energía.

3.- TRANSPORTE ACTIVO

La mayor parte de los nutrientes son transportados mediante este mecanismo. Este proceso permite
concentrar altos niveles de nutrientes necesarios para las actividades metabólicas dentro de la célula.
Hay consumo de energía. El ATP distorsiona el sitio de unión de la proteína transportadora
dificultando a la molécula salir de la célula.

4.- TRANSPORTE POR TRANSLOCACION DE GRUPO

En este tipo la proteína transportadora es un enzima que añade un grupo fosfato del ácido
fosfoenolpirúvico al nutriente durante el transporte. Este nutriente alterado ya no es capaz de unirse
a la proteína transportadora por lo que se acumula dentro de la célula.

MEDIO DE CULTIVO

CONCEPTO
Los medios de cultivo son soluciones acuosas donde se desarrollan los microorganismos. El desarrollo
de los microorganismos solo ocurre en presencia de los nutrientes requeridos (que dependen del
microorganismo particular).

NUTRIENTES

Los nutrientes son las sustancias necesarias para la síntesis de material celular y la obtención de
energía. Estos nutrientes son orgánicos e inorgánicos (solo las organismos litotrofos pueden crecer en
soluciones exentas de nutrientes orgánicos).
La diversidad del mundo microbiano hace que los medios de cultivo sean muy variados, tanto como
determinen los requerimientos nutricionales de los microorganismos. Para el cultivo de bacterias
heterótrofas todos los medios contienen como componentes principales: agua, sustancias orgánicas y
sustancias inorgánicas.

OTROS COMPONENTES

Algunos medios de cultivo incorporan sustancias con finalidades más concretas, como los factores de
crecimiento, colorantes, tampones, agentes solidificantes, etc.

COMPONENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los componentes de un medio de cultivo dependen del microorganismo que se pretende cultivar y de
la finalidad del cultivo. A continuación se describe que es general la necesidad de utilizar: agua,
sustancias orgánicas y sustancias inorgánicas. Los medios de cultivo sólidos llevan además un agente
solidificante

AGUA.

Suele utilizarse destilada. En ocasiones específicas puede utilizarse agua corriente, pero debe evitarse
porque ciertos cationes (como Ca2+ o Mg2+) pueden formar sales insolubles con otros componentes
del medio (como los fosfatos) sobre todo, durante la esterilización.
SUSTANCIAS ORGÁNICAS.

Se pueden utilizar sustancias puras o mezclas de sustancias orgánicas Como sustancias puras más
comunes se encuentran los azúcares: Frecuentemente son utilizados como fuente de carbono y
energía por los microorganismos. Entre ellos, es común el empleo de monosacáridos como la glucosa,
disacáridos como la lactosa y polisacáridos como el almidón. Ciertas bacterias no pueden utilizar los
carbohidratos como nutrientes y se emplean otras sustancias puras (aminoácidos, ácidos grasos) o
mezclas de sustancias orgánicas.

Cuando los requerimientos nutricionales de los microorganismos son complejos o se pretende un

crecimiento rápido se utilizan mezclas de sustancias orgánicas. Las mezclas de sustancias orgánicas
más comunes en la preparación de los medios de cultivo son las peptonas, el extracto de carne y el
extracto de levadura

PEPTONAS: mezclas de aminoácidos y péptidos. Resultan de la hidrólisis de proteínas o materiales

proteicos (carne, vegetales, caseína, o gelatina).

EXTRACTO DE CARNE: concentrado de componentes hidrosolubles de la carne.

EXTRACTO DE LEVADURA: Se obtiene por hidrólisis ácida o enzimática de levaduras

Las peptonas y los extractos de carne y de levadura se utilizan preferentemente como fuente de
nitrógeno, fósforo y azufre orgánicos. Algunos de sus componentes se pueden utilizar como factores
orgánicos de crecimiento o como fuente de carbono y energía.

SUSTANCIAS INORGÁNICAS (SALES MINERALES)

Sus funciones en un medio de cultivo pueden ser poco específicas, (como el NaCl para ajustar la
osmolaridad del medio) o pueden ser requeridas específicamente en el metabolismo (como las sales
de K+, Mg2+, Ca2+, Fe3+, etc.).

Quizá los requerimientos minerales mas obvios son los de fósforo (necesario para la síntesis de ácidos
nucleicos y fosfolípidos), de azufre (aminoácidos cisteina y metionina) o nitrógeno (el segundo
elemento tras el carbono entre los que forman la célula). Aunque se pueden utilizar fuentes
orgánicas, es común usar como fuente de fósforo un fosfato, la de azufre como un sulfato y la de
nitrógeno como nitrato o una sal de amonio.

MICRONUTRIENTES

Ciertos micronutrientes (los nutrientes necesarios en pequeñas cantidades) son esenciales para el
funcionamiento de varias enzimas, y deben estar incluidos en el medio de cultivo. Su requerimiento
en muy baja cantidad determina que frecuentemente no sea necesario añadirlos expresamente: es
suficiente su presencia como contaminantes de otros componentes. No obstante si se utilizan
componentes y agua de pureza muy altas los medios de cultivo pueden ser deficientes en
micronutrientes

AGENTES SOLIDIFICANTES; AGAR-AGAR

Se añaden para preparar medios de cultivo sólidos y semisólidos. El agar-agar es el agente

solidificante más común. El agar-agar es un polisacarido de galactosa y galactomanano que se
obtiene de las algas rojas (Echema, Gelidium, Gracilaria). Contiene un 70% de agarosa y un 30% de
agaropectina. El agar-agar es el agente solidificante más utilizado. Su composición química es
indefinida y solidifica con mayor dificultad a medida que desciende el pH. Es insoluble en agua fría,
pero se funde y solubiliza en agua hirviendo y solidifica a 45 ºC. Forma geles transparentes muy
estables y es degradado por muy pocas bacterias.

GEL DE SÍLICE

Para el cultivo de bacterias autótrofas estrictas y para la elaboración de medios de cultivo definidos se
utiliza gel de sílice o silicogel, silicato de sodio o potasio (usado al 10%). Se utiliza poco. Sus
inconvenientes mas importantes son la dificultad para su incorporación a los medios de cultivo, que
solidifica a pH ácido y su coste.

VARIEDAD DE MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo que se utilizan el laboratorio dependen del microorganismo que se pretende
cultivar y de la finalidad de su cultivo. Puede hacerse una descripción global de los mismos
atendiendo a su composición química, a su estado físico y la finalidad del cultivo. Como la distribución
se hace atendiendo a diferentes criterios un medio de cultivo puede incluirse en más de una
categoría.

COMPOSICIÓN: DEFINIDOS/INDEFINIDOS

SEGÚN SU COMPOSICIÓN QUÍMICA. Para preparar los medios de cultivo definidos o sintéticos (ej el
medio de Koser para la utilización del citrato) se utilizan componentes de alta pureza, por lo que se
conoce su composición química (cualitativa y cuantitativamente).

Cuando no es decisivo conocer la composición exacta del medio de cultivo se utilizan medios
indefinidos, naturales o complejos, como el Agar nutritivo preparados con mezclas de nutrientes
como peptonas, extracto de carne, extracto de levadura, agar-agar, etc.

ESTADO FÍSICO: LÍQUIDOS/ SÓLIDOS/ SEMISÓLIDOS

SEGÚN SU ESTADO FÍSICO . Los medios de cultivo sólidos (como el TSA) contienen el agente
solidificante (generalmente agar al 1,5-2%) y los medios de cultivo líquidos (como el agua de
peptona) no llevan adicionados agentes solidificantes; los medios de cultivo semisólidos (como el
Agar de Hugh-Leiffson contienen el agente solidificante en menor concentración que los sólidos.

FINALIDAD: ORDINARIOS/ ENRIQUECIDOS/ DIFERENCIALES/, SELECTIVOS/DE ENRIQUECIMIENTO

SEGÚN SU FINALIDAD Cuando se cultivan microorganismos que requieren nutrientes comunes, se

utilizan medios de cultivo ordinarios (como el Agua de peptona): sus nutrientes permiten el
crecimiento de gran número de microorganismos, pero no de los que requieren nutrientes
particulares. Las bacterias más exigentes nutricionalmente se cultivan en medios enriquecidos (como
Agar chocolate que es Agar nutritivo añadido del 10% de sangre calentada –hemolizada-): Contienen
los nutrientes ausentes de los medios ordinarios, como por ejemplo factores orgánicos de
crecimiento.

Cuando se pretende que el propio cultivo de la bacteria diferencie entre distintos tipos de bacterias se
utilizan Medios de cultivo diferenciales (ej. Medio para la fermentación de la lactosa): algún
componente del medio proporciona un cambio visible del cultivo si existen ciertas bacterias (en el
caso de la lactosa la acumulación de ácidos).

Puede favorecerse la probabilidad de seleccionar cierta bacteria específica de una mezcla de ellas
utilizando medios de cultivo selectivos o realizando un enriquecimiento de la bacteria que se
pretende seleccionar, en detrimento de otras bacterias de la mezcla. Los Medios de cultivo selectivos
(como el Agar Mac Conkey) son medios sólidos que contienen sustancias que inhiben el crecimiento
de algunas bacterias, pero permite el de otras. El Agar Mac Conkey contiene sales biliares
antibacterianas pero permiten el crecimiento de las Enterobacterias cuyo hábitat natural (el intestino)
contiene tales sales antibacterianas. El resultado es el crecimiento selectivo de las bacterias que
resisten las sales biliares, entre ellas las enterobacterias. El efecto antibacteriano selectivo de algunos
medios de cultivo permite su utilización sin aplicar la esterilización convencional

Los cultivos de enriquecimiento se realizan en medios líquidos (medios de cultivo de

enriquecimiento), con alguna propiedad física o química que favorecen el desarrollo de un
determinado tipo bacteriano, o se incuban bajo condiciones especiales: el desarrollo de los
microorganismos celulolíticos se favorece en un medio de cultivo que contiene celulosa como único
sustrato orgánico. Otros microorganismos no podrán crecer tan eficientemente. Vibrio cholerae es
una bacteria que tolera el pH alcalino, por lo que el Agua de peptona-alcalina (pH 11) permite el
enriquecimiento de Vibrio cholerae de una muestra de heces

TIPOS DE MEDIO DE CULTIVO

Existen diferentes tipos de medios de cultivos que son importantes ya que permiten el crecimiento y
desarrollo de microorganismos utilizados en laboratorios clínicos e industriales, especialmente en el
área de microbiología, por eso aquí te presentamos los tipos de medios de cultivo que puedes utilizar
en tu laboratorio.

Un medio de cultivo se refiere al conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y algunos otros

componentes que ayudan a crear las condiciones necesarias para el desarrollo de microorganismos.
Estos tienen una gran diversidad metabólica por lo que existen también diversos medios de cultivo, ya
que no podemos tener un medio de cultivo universal que englobe y cubra las necesidades de cada
uno de los microorganismos existentes.
A continuación, podrás encontrar los constituyentes habituales de los medios de cultivo:

AGAR.

Se suele utilizar como un agente gelificante en los medios de cultivo para dar solidez. Como
componente principal dominante en el agar bacteriológico tenemos un polisacárido que se suele
extraer de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que, a excepción de algunos
microorganismos marinos, no se utiliza como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se licua alrededor de
los 100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de su grado de pureza.

EXTRACTOS.

Su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales o vegetales son extraídos con agua
y calor y posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos preparados
deshidratados son a menudo empleados en la elaboración de los medios de cultivo. Los más utilizados
son el extracto de carne, de levadura y el de malta.

PEPTONAS.

Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales minerales, que se obtienen por
digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja caseína carne, etc.). Las
peptonas son muy ricas en péptidos y aminoácidos, pero pueden ser deficientes en determinadas
vitaminas y sales minerales.

FLUIDOS CORPORALES.

Con frecuencia es necesario añadir a los medios de cultivo de algunos patógenos sustancias como
sangre completa, sangre desfibrilada, plasma o suero sanguíneo, sobre todo para conseguir el primer
aislamiento a partir del hospedador. La sangre no puede ser esterilizada, y por tanto debe de ser
obtenida en condiciones asépticas directamente de un animal sano, y adicionada al medio de cultivo
después de que este haya sido auto clavado. Los fluidos corporales no solo aportan factores de
crecimiento sino que también aportan sustancias que neutralizan a inhibidores del crecimiento de
algunas bacterias.

SISTEMAS AMORTIGUADORES.
Para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano a veces, es necesario añadir
algunos componentes al medio de cultivo.

INDICADORES DE PH.

Con el objeto de poder detectar variaciones en el pH debido a fermentaciones u otros procesos, se

hace necesario a veces añadir indicadores ácido-base que nos lo indiquen.

AGENTES REDUCTORES.
Con el objetivo de crear en los medios de cultivo condiciones que permitan el desarrollo de los
gérmenes microaerófilos ò anaerobios se añaden estos agentes reductores siendo, los más
empleados la entre otros.

AGENTES SELECTIVOS.
La adición de determinadas sustancias a un medio de cultivo puede convertirlo en selectivo. Así, por
ejemplo, la adición de cristal violeta, sales biliares, azida sódica, telurio potásico, antibióticos, etc., a la
concentración adecuada hará que actúen como agentes selectivos frente a determinados
microorganismos.

Conociendo cada uno de los componentes de los medios de cultivo también debemos saber que
existen cuatro categorías en donde podemos englobar a los medios de cultivo.

GENERALES.
Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran variedad de microorganismos.

MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO.
Son aquellos que favorecen el crecimiento de un determinado tipo de microorganismo sin llegar a
inhibir totalmente el crecimiento de los demás.

MEDIOS SELECTIVOS.
Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos determinado, inhibiendo el
desarrollo de los demás.

MEDIOS DIFERENCIALES.
Son aquellos en los que se pone de manifiesto propiedades que un determinado tipo de
microorganismos posee.