Nutrición

microbiana
Toda la naturaleza es, como se
ha dicho, una conjugación
activa y pasiva del verbo
comer
-William Ralph Inge
 Metabolismo
Conjunto de reacciones catabólicas y anabólicas
• Catabolismo:
Conjunto de procesos que participan en la degradación
de compuestos en productos más pequeños; las
reacciones enzimáticas que toman parte de denominan
reacciones catabólicas.

• Anabolismo:
Reacciones mediante las cuales los m.o. construyen o
sintetizan sustancias químicas complejas a partir de
moléculas simples; las reacciones enzimáticas que toman
parte se denominan reacciones biosintéticas y requieren
energía. El ATP formado en las reacciones catabólicas es
empleado en el anabolismo.
 Nutrición
A las sustancias en el medio ambiente utilizadas por los
organismos para el catabolismo y el anabolismo, se les
llama nutrientes.

Dicho de otro modo, para obtener energía y elaborar

nuevos componentes celulares, los organismos tienen
que disponer de materias primas o nutrientes.

Nutrientes:
Son sustancias que se emplean en la biosíntesis y
producción de energía.
Son necesarios para el crecimiento microbiano
Requerimentos de nutrientes
comunes

• Macroelementos.
• Microelementos (llamados
también oligoelementos).
 Macronutrientes o
macroelementos
• Son captados por los m.o. en cantidades
relativamente grandes.

• Más del 95% del peso seco de la célula

microbiana esta constituido por C, O, H,
N, S, P, K, Ca, Mg y Fe.
• C, O, H, N, S y P.
Son componentes de carbohidratos, lípidos, proteínas y
ácidos nucleícos. Son necesarios en cantidades de g/L
de medio de cultivo.

• Carbono.
Fuente de energía y/o compuestos para biosíntesis

• Nitrógeno y azufre*.
Se encuentran en las células en forma reducida como
grupos amino y sulfhidrilo; generalmente en forma
reducida, aunque algunos m.o. los asimilan en forma
oxidada. Sulfatos, nitratos, peptonas (N y S) y cisteina.
Fijación de N2 (N2 NH3)
• K, Ca, Mg y Fe: se encuentran en la célula en forma de
cationes, desempeñando varias funciones. Se utilizan en
cantidades de mg.

– K+: necesario para actividad de enzimas, entre

ellas algunas que participan en la síntesis de
proteínas.
– Ca2+: contribuye a la termorresistencia de
endosporas.
– Mg2+: actúa como cofactor de muchas enzimas,
forma complejos con el ATP y estabiliza los
ribosomas y las membranas celulares.
– Fe2+ y Fe3+: Forma parte de los citocromos y es
cofactor de enzimas y de proteínas
transportadoras de electrones.
 Requerimientos de N, P y S
Se deben incorporar en grandes cantidades. Aunque pueden
adquirirse a partir de los mismos nutrientes que aportan C, los
m.o. suelen emplear también fuentes inorgánicas.

• N: necesario para sintetizar a.a., purinas,

pirimidinas, algunos CHTOS y lípidos.
• P: presente en ácidos nucleicos, fosfolípidos,
nucleótidos como ATP, varios cofactores,
algunas proteínas y otros componentes celulares.
• S: necesario para la síntesis de sustancias como
los a.a. cisteína y metionina, algunos CHTOS,
biotina y tiamina.
 Micronutrientes o
microelementos u oligoelementos
• Son aquellos que se requieren en cantidades tan pequeñas,
que los contaminantes presentes en agua, en los recipientes
para el cultivo y en los componentes habituales del medio
son a menudo suficientes.

• Normalmente son parte de enzimas y cofactores; facilitan la

catálisis de reacciones y mantenimiento de la estructura de
proteínas.

• Mn, Zn, Co, Mo, Ni y Cu deben estar disponibles en

cantidades de g.
• Zn2+: se localiza en el centro activo de
algunas enzimas.
• Mn2+: facilita a muchas enzimas la
catálisis de la transferencia de los
grupos fosfato.
• Mo2+: necesario para fijar nitrógeno.
• Co2+: componente de la vitamina B12.
• Cu2+: tiene funciones en algunas
enzimas de óxido-reducción.
 Factores de crecimiento
Son sustancias precursoras de ciertos constituyentes
orgánicos de la célula que el m.o. es incapaz de
sintetizar; generalmente se requieren en pequeñas
concentraciones. Existen tres clases principales:

1. Aminoácidos síntesis de proteínas

2. Purinas y pirimidinas síntesis de ácidos nucleicos
3. Vitaminas normalmente forman la totalidad o parte
de los cofactores enzimáticos; constituyen grupos
prostéticos o centros activos de ciertas enzimas.
Elemento Funciones fisiológicas
Hidrógeno Constituyente de agua celular, materiales celulares orgánicos
Oxígeno Constituyente de agua celular, materiales celulares orgánicos;
como O2, aceptor de electrones en la respiración de los aerobios
Carbono Constituyente de materiales celulares orgánicos
Nitrógeno Constituyente de proteínas, ácidos nucleicos, coenzimas
Azufre Constituyente de proteínas (como aminoácidos cisteína y
metionina), de algunas coenzimas (por ejemplo, CoA,
cocarboxilasa).
Fósforo Constituyente de ácidos nucleicos, fosfolípidos, coenzimas
Potasio Uno de los principales cationes inorgánicos de las células,
cofactor de algunas enzimas.
Magnesio Importante catión celular, cofactor inorgánico en muchas
reacciones enzimáticas, incluyendo aquellas que requieren ATP;
funciona uniendo las enzimas a los sustratos; constituyente de las
clorofilas.
Manganeso Cofactor inorgánico de varias enzimas, a veces remplazando al
Mg.
Calcio Importante catión celular, cofactor de algunas enzimas (por
ejemplo proteasas)
Hierro Constituyente de citocromos y otras hemo o no hemoproteínas;
cofactor de cierto número de enzimas.
Cobalto Constituyente de la vitamina B12 y de sus coenzimas derivados.
Cobre, zinc, níquel, Constituyentes inorgánicos de enzimas especiales.
molibdeno
 Requerimentos de C, H y O
• Las necesidades de C, H y O suelen
cubrirse simultáneamente.

• El carbono es necesario para construir el

esqueleto de todas las moléculas
orgánicas; las moléculas que sirven como
fuente de C aportan también átomos de H
y O, excepto el CO2.
 Clasificación por requerimientos
nutricionales
(Fuente de carbono)
• Autótrofos:
Son m.o. que pueden utilizar CO2 como principal y única
fuente de carbono.

• Heterótrofos:
Son organismos que utilizan moléculas orgánicas
preformadas y reducidas como fuentes de carbono. La
mayoría usan nutrientes orgánicos como fuente tanto de C
como de energía. Este grupo incluye a todos los animales,
hongos, protozoarios y la mayoría de las bacterias.
 Requerimientos nutricionales
debidas a mutaciones.
Las necesidades nutricionales de los m.o. varían según las especies;
pueden cambiar en una misma especie debido a mutaciones.

• Protótrofo:
Es un m.o. que precisa de los mismos nutrientes que la
mayoría de los miembros de su especie.

• Auxótrofo:
Es un m.o. mutado que carece de la capacidad para sintetizar
un nutriente esencial y por ello, debe obtenerlo, o a su
precursor, del medio.
 Requerimientos de energía
de los m.o.
• Todos los organismos requieren fuentes
de energía, H y e- para poder crecer.

• Existen únicamente dos fuentes de

energía disponibles para los organismos:
– Energía lumínica captada durante la
fotosíntesis.
– Energía derivada de la oxidación de
moléculas orgánicas e inorgánicas.
 Clasificación energética de m.o.
• Quimiótrofos:
Obtienen la energía a partir de la oxidación de
compuestos químicos (orgánicos o inorgánicos).
– Quimioautótrofos.
– Quimioheterótrofos.

• Fotótrofos (o fotosintéticos):
Emplean la luz como fuente de energía.
– Fotoautótrofos.
– Fotoheterótrofos.
• Litótrofos:
(“que comen roca”) obtienen su energía de la
oxidación de compuestos inorgánicos como
el azufre elemental (S0), el ión amonio (NH4+),
el hierro ferroso (Fe2+) o el H2.

• Organótrofos:
Obtienen electrones o hidrógeno a partir de
compuestos orgánicos.
 Fuentes de carbono, energía e hidrógeno/electrones

Fuentes de carbono
Autótrofos CO2 como única o principal fuente de
carbono.
Heterótrofos Moléculas orgánicas preformadas,
reducidas, a partir de otros organismos.
Fuentes de energía
Fotótrofos Luz.
Quimiótrofos Oxidación de compuestos orgánicos o
inorgánicos.
Fuentes de hidrógeno o electrones
Litótrofos Moléculas inorgánicas reducidas.
Organótrofos Moléculas orgánicas.
Clasificación Fuente de carbono Fuente de energía

Autótrofos CO2 -------

Heterótrofos Compuestos --------

orgánicos
Quimiótrofos --------- Compuestos químicos

Quimiolitótrofos _______ Compuestos químicos

inorgánicos
Quimiorganótrofos _______ Compuestos químicos
orgánicos
Quimioautótrofos CO2 Compuestos químicos

Fotótrofos _______ Luz

Fotoautótrofos CO2 Luz

Fotoheterótrofos Compuestos Luz

orgánicos
Quimioheterótrofos Compuestos Compuestos químicos
orgánicos
 Composición típica de compuestos
orgánicos e inorgánicos de m.o.
Compuesto Bacteria Levaduras Hongos
(% base seca) (% base seca) (% base seca)

Promedio Promedio Promedio

Carbono 48 46-52 48 46-52 48 45-55
Nitrógeno 12.5 10-14 7.5 6-8.5 6 4-7
Proteínas 55 50-60 40 35-45 32 25-40
Carbohidratos 9 6-15 38 30-45 49 40-55
Lípidos 7 5-10 8 5-10 8 5-10
Acidos nucleicos 23 15-25 8 5-10 5 2-8
Cenizas 6 4-10 6 4-10 6 4-10
Composición típica de compuestos
orgánicos e inorgánicos de m.o.
Constituyentes inorgánicos
g/100 g en peso seco
Elemento Bacteria Hongos Levaduras
Fósforo 2-3 0.4-4.5 0.8-2.6
Azufre 0.2-1.0 0.1-0.5 0.01-0.24
Potasio 1-4.5 0.2-2.5 1-4
Magnesio 0.1-0.5 0.1-0.3 0.1-0.5
Sodio 0.5-1 0.02-0.5 0.01-0.1
Calcio 0.01-1.1 0.1-1.4 0.1-0.3
Fierro 0.02-0.2 0.1-0.2 0.01-0.5
Cobre 0.01-0.02 --------- 0.002-0.01
Manganeso 0.001-0.01 --------- 0.0005-0.007
Molibdeno -------- --------- 0.0001-0.0002
Total Cenizas 7-12 2-8 5-10
 Células
Sustratos
X
S1
Productos
S2
P1
Sn
P2
Pn
• Producto:
Compuesto químico diferente de material
celular que es liberado al medio.

• Sustrato:
Compuestos que son consumidos a partir del
medio como resultado de crecimiento
celular o formación de producto.
Factores que limitan la formulación de
medios de cultivo:
cultivo

– Algunos elementos del sustrato liberados

como productos no asimilados a material
celular.
– Velocidades limitantes y estequiometría,
deben considerarse los rendimientos.
– Nutrientes específicos que pudieran ser
limitantes, o productos específicos que
pueden ser inhibitorios.
Factores que limitan la formulación de
medios de cultivo:
cultivo

– Factores ambientales.
– Factores de crecimiento.
 Crecimiento microbiano: Descripción química

ACaHbOc + BO2 + DNH3 MCaHbOc Nd+ PCO2

+ QH2O C

donde: A, B, D, P y Q son moles.

CaHbOc fuente carbono-energía.
M son moles de una unidad celular, CaHbOc Nd
Datos de composición celular

• Bacterias
C0.53 ; N0.12 ; O0.19 ; H0.07

• Levaduras
C0.47 ; N0.075 ; O0.31 ; H0.065
aCHxOy + bO2 + cNH3 CHO N+ dCO2 + eH2O

C: a=1+d
H: ax + 3c =  + 2e
O: ay + 2b =  + 2d + e
N: c=
RQ = moles de CO2 / moles de O2 = d/b
Rendimiento biomasa sustrato
(YX/S)

YX/S = X Biomasa producida (Xf – X0)

s Sustrato consumido (S0 – Sf)

Medios de Cultivo
• Aunque todos los m.o. necesitan fuentes de energía,
C, N, P, S y varios minerales, la composición precisa
de un medio de cultivo adecuado dependerá de la
especie que se quiere cultivar.

• Un medio se utiliza frecuentemente para seleccionar

y cultivar m.o. específicos, o para facilitar la
identificación de una especie en particular.

• De acuerdo al estado físico, los medios de cultivo se

clasifican en sólidos y líquidos.
 Medio sintético o definido
• Son medios en que se conocen todos los
componentes.

• Los medios definidos se emplean

ampliamente en investigación ya que con
frecuencia se requiere conocer qué está
metabolizando el m.o. en estudio.
Medio BG-11 para cianobacterias
Cantidad (g/L)
NaNO3 1.5
K2HPO4.3H2O 0.04
MgSO4.7H2O 0.075
CaCl2.2H2O 0.036
Ácido cítrico 0.006
Citrato amónico férrico 0.006
Na2CO3 0.02
EDTA (sal de Na2Mg) 0.001
Solución de metales traza 1 mL/L
 Medios complejos
• Contienen algunos ingredientes cuya
composición química se desconoce. Son
medios suficientemente ricos para
satisfacer las necesidades nutricionales de
diversos microorganismos.

• De gran utilidad cuando se desconoce los

requerimientos nutricionales de un m.o.
en particular.
 Los medios complejos contienen peptonas,
extracto de carne y de levadura.

• Peptonas: hidrolizados de proteínas obtenidos de la

digestión parcial de carne, caseína, harina de soya y
otras proteínas. Sirven como fuente de C, N y energía.

• Extracto de carne: contiene a.a., péptidos,

nucleótidos, ácidos orgánicos, vitaminas y minerales.

• Extracto de levadura (de cerveza): fuente de

vitaminas del complejo B, y de compuestos de N y C.
 Agar MacConkey
Cantidad (g/L)
Peptona de gelatina 17.0
Peptona de caseína 1.5
Peptona de carne 1.5
Lactosa 10.0
Sales biliares 1.5
Cloruro sódico 5.0
Rojo neutro 0.03
Cristal violeta 0.001
Agar 13.5
Tipos de medio

• Selectivos.
• Diferenciales
 Medios selectivos
Contienen sustancias específicas que favorecen el crecimiento
de un tipo particular de m.o.
Las sales biliares o colorantes como la fucsina y el cristal
violeta favorecen el crecimiento de Gram(-), inhibiendo el
desarrollo de Gram(+).
Agar Salmonella-Shigella (SS), adicionado con sales biliares para inhibir
coliformes. Se producen colonias incoloras por la incapacidad de
fermentar lactosa.

Agar sulfito de bismuto (BS). Para aislar Salmonella typhi; colonias negras
con tono metálico.

Agar sal manitol (MS), adicionado con 7.5% de sal. Se usa para aislar
estafilococos.
 Medios diferenciales
Contienen productos químicos para dar lugar a una alteración visible del
medio de cultivo

Diferencian entre grupos distintos de bacterias e incluso permiten una

identificación tentativa de m.o. según las características biológicas.
Ejemplo: agar sangre.

Agar Eosina azul de metileno (EMB). Contiene lactosa, sales y colorantes (eosina
y azul de metileno), para diferenciar entre fermentadores y no fermentadores de
lactosa. Ej. E. coli (fermentador) produce colonias oscuras o con brillo metálico.

Agar McConkey. Adicionado con sales biliares y cristal violeta. Para selección y
recuperación de Enterobacteriaceae y bacterias Gram(-). Bacterias fermentadoras de
lactosa producen colonias rojas.

Agar entérico de Hektoen. Adicionado con elevada concentración de sales

biliares como inhibidor. Para aumentar el rendimiento de Salmonella y Shigella.
 Formulación de medios de
cultivo
• Consiste en la formulación cuantitativa del
medio, tomando en cuenta todos los elementos o
nutrientes requeridos.

• Los macronutrientes son los que controlan la

velocidad de crecimiento.

• Los medios de cultivo deben prepararse con una

formulación balanceada cualitativa y
cuantitativa.
DISEÑO CUALITATIVO DEL MEDIOS DE CULTIVO :
DEFINICION QUIMICA
La definición del medio debe vincularse con los tipos microbianos:

Heterótrofos (simples) Autotótrofo

Glucosa Amoniaco
Sulfato de amonio Sales de sulfato
Fosfato monobásico de K Sales de fosfato
NaCl NaCl
CaCl2 Cationes (Cu, Mo…)
 FORMULACION Y BALANCEO DEL
MEDIO
Determinación de las concentraciones de los sustratos limitantes

La relación C/N como criterio de “balanceo”

C/N Tipo de Medio

____________________________________________
Proteína microbiana 18 Orgaheterotrófico
Respiración 2-80 Litoautotrófico
(desasimilativo)
___________________________________________ _
 Rendimiento biomasa sustrato
(YX/S)

YX/S = X Biomasa producida (Xf – X0)

s
Sustrato consumido (S0 – Sf)

Rendimiento de biomasa producida por fuente de

carbono consumida
M.o. aerobio = 0.5 biomasa
M.o. anaerobio = 0.1 biomasa
 Rendimiento = Y = 0.5
50% Biomasa + 50% producción
m.o. aerobio de metabolitos y mantenimiento
celular.

Sustrato (S0)

m.o. anaerobio Rendimiento = Y = 0.1

10% Biomasa + 90% producción
de metabolitos y mantenimiento
celular.
 Composición celular

• Cantidad de C = 50%
• Cantidad de N = 8%
• Cantidad de P = 5%
• Cantidad de S = 3%

El hidrógeno y el oxígeno constituyen el agua

 Ejercicio 1
Diseñar un medio de cultivo para un m.o.
heterótrofo simple anaerobio.
Fuente de C: glucosa
Fuente de N: cloruro de amonio, NH4Cl
Fuente de S: sulfato de magnesio, MgSO4
Fuente de P: fosfato ácido de potasio, KH2PO4

La célula bacteriana tiene 50% C, 8% N, 5% P y 3% S.

¿Qué cantidad de cada uno de los compuestos se tiene

que añadir a 1 L de agua para producir 20 g/L de
biomasa?
 Solución
Glucosa
20 g biomasa 0.5 g C 180 g Glucosa = 25 g/L
L g biomasa 72 g C

NH4Cl
20 g biomasa 0.08 g C 53.5 g NH4Cl = 6.1 g/L
L g biomasa 14 g N

MgSO4
20 g biomasa 0.03 g C 120.3 g MgSO4 = 2.25 g/L
L g biomasa 32 g S

KH2PO4
20 g biomasa 0.05 g C 136 g KH2PO4 = 4.42 g/L
L g biomasa 30.9 g P
 Rendimiento
Glucosa
20 g biomasa 0.5 g C 180 g Glucosa = 25 g/L
L g biomasa 72 g C

25 g Glucosa 10% biomasa (anaerobio)

x 100% biomasa
x = 250 g Glucosa

Si el m.o. fuera aerobio, entonces se requieren 50 g Glucosa

 Ejercicio 2
Formular y diseñar un medio de cultivo para
una bacteria mesofílica, heterótrofa simple y
anaerobia estricta, basado en 100 g/L de fuente
de carbono.
¿Cuántos g/L de biomasa se producirán en 1 L
de medio diseñado?
Heterótrofa simple, anaerobia estricta.
Fuente de C: glucosa
Fuente de N: cloruro de amonio, NH4Cl
Fuente de S: sulfato de magnesio, MgSO4
Fuente de P: fosfato de potasio, K2HPO4