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Cultivo y crecimiento de los microorganismos

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Cultivo y crecimiento
de los microorganismos
Raquel de los A. Junco Daz
Carlos M. Rodrguez Prez
INTRODUCCIN
Se denomina cultivo al proceso de propagar los microorganismos, proporcionndoles
las condiciones ambientales adecuadas.
Los microorganismos en fase de crecimiento realizan rplicas de s mismos y requieren
de los elementos que se encuentran en su composicin qumica. Se le deben brindar los
elementos nutritivos en una forma accesible desde el punto de vista metablico. Adems, los
microorganismos requieren energa metablica con el objetivo de sintetizar macromolculas
y conservar los gradientes qumicos esenciales a travs de sus membranas.
Durante el crecimiento se deben regular los factores nutricionales (carbono, nitrgeno,
azufre y fsforo, elementos trazas y vitaminas) y los factores fsicos (pH, temperatura, oxge-
no, humedad, presin hidrosttica, presin osmtica y radiacin).
REQUERIMIENTOS PARA EL CRECIMIENTO
El peso seco de los microorganismos consiste en materia orgnica que contiene carbo-
no, hidrgeno, nitrgeno, oxgeno, fsforo y azufre. Se requieren, adems, iones inorgnicos
como potasio, sodio, hierro, magnesio, calcio y cloruro para facilitar la catlisis enzimtica y
conservar los gradientes qumicos a travs de la membrana celular.
La materia orgnica se encuentra en macromolculas formadas por enlaces anhdridos
entre los bloques estructurales. Para la sntesis de los enlaces anhdridos se requiere la
energa qumica proporcionada por los dos enlaces fosfodiestricos del ATP (trifosfato de
adenosina). Para conservar una composicin citoplsmica relativamente constante, se nece-
sita una energa adicional derivada de la fuerza motriz protnica que es la energa potencial
que se puede liberar al pasar un protn a travs de una membrana. En los organismos
eucariotas la membrana puede ser parte de la mitocondria o del cloroplasto; mientras que en
los organismos procariotas la membrana es la membrana citoplsmica de la clula.
Durante el crecimiento, un microorganismo requiere todos los elementos de su materia
orgnica y el complemento total de iones necesarios para la energtica y la catlisis. Adems,
debe haber una fuente de energa que establezca la fuerza motriz protnica y que permita la
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sntesis macromolecular. Los microorganismos varan ampliamente en cuanto a sus deman-
das nutricionales y sus fuentes de energa metablica.
FUENTES DE ENERGA METABLICA
Los tres modos principales de generar energa metablica son: fermentacin, respira-
cin y fotosntesis. Los microorganismos, para poder crecer, deben utilizar, por lo menos,
uno de estos mecanismos, cuya descripcin se refiere en el Captulo 6.
NUTRICIN
La nutricin es la provisin de nutrientes para el crecimiento de un organismo. Los
nutrientes de los medios de cultivo deben contener todos los elementos necesarios para la
sntesis biolgica de los microorganismos e incluyen carbono, nitrgeno, azufre, fsforo,
elementos trazas y vitaminas.
FACTORES NUTRICIONALES
FUENTE DE CARBONO
La mayora de las bacterias utilizan compuestos de carbono como fuente de energa y
otras, para la sntesis de elementos celulares. Los organismos fotosintticos reducen el
dixido de carbono (CO
2
) a glucosa y otras molculas orgnicas. Los organismos auttrofos
emplean nutrientes completamente inorgnicos; mientras que los hetertrofos requieren
nutrientes orgnicos. Ambos organismos, auttrofos y hetertrofos, obtienen la energa a
partir de la glucosa por gliclisis, fermentacin y el ciclo de Krebs. Ellos, adems, sintetizan
algunos componentes celulares a partir de intermediarios formados por medio de estas vas.
FUENTE DE NITRGENO
Todos los organismos, incluyendo los microorganismos, necesitan nitrgeno para sin-
tetizar enzimas, protenas y cidos nucleicos. Algunos microorganismos obtienen el nitrge-
no a partir de fuentes inorgnicas y otros adquieren la energa mediante el metabolismo de
sustancias que contienen nitrgeno inorgnico. Los procesos por los cuales las protenas y
los cidos nucleicos son sintetizados, estn directamente relacionados con la informacin
gentica contenida en la clula. El producto final de todas las vas de asimilacin del nitrge-
no es la forma ms reducida del elemento, el ion amonio (NH
4
+
).
Muchos microorganismos poseen capacidad para asimilar el nitrato (NO
3

) y el nitrito
(NO
2

) de manera reductiva al convertir a estos iones en amonaco (NH


3
). Estas vas de
asimilacin difieren de las vas empleadas para la desasimilacin de nitrato y nitrito. Emplean
las vas desasimilatorias los microorganismos que recurren a los iones como aceptores
finales de electrones en la respiracin; este proceso se llama desnitrificacin y su producto
es el gas nitrgeno (N
2
) que vuelve a la atmsfera.
La capacidad para asimilar N
2
de manera reductiva por medio del NH
3
se nombra fijacin
del nitrgeno, y es una propiedad nica de los procariotas, siendo pocas las bacterias que
poseen esta capacidad metablica. El proceso requiere gran cantidad de energa metablica
y se inactiva con facilidad por accin del oxgeno.
La mayor parte de los microorganismos pueden recurrir al NH
4
+
como nica fuente de
nitrgeno, y muchos otros poseen capacidad para producir este ion a partir de las aminas
(R- NH
2
).
AZUFRE Y FSFORO
Adems del carbono y el nitrgeno, los microorganismos necesitan un suministro de
ciertos minerales, especialmente azufre y fsforo, los cuales son componentes celulares
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importantes. Ellos obtienen el azufre a partir de las sales inorgnicas de sulfato y de los
aminocidos que contienen azufre, y lo utilizan en la elaboracin de protenas, coenzimas y
otros componentes celulares. El fsforo es adquirido, principalmente, mediante iones fosfato
inorgnico (PO
4
3
) y lo emplean para sintetizar ATP, fosfolpidos y cidos nucleicos.
ELEMENTOS TRAZAS
Muchos microorganismos requieren una variedad de elementos trazas, usualmente en la
forma de iones. Todos los organismos necesitan cierta cantidad de sodio y cloro, y los
halfilos lo requieren en grandes cantidades. Potasio, zinc y manganeso son usados para
activar ciertas enzimas. El cobalto es necesario a los organismos que sintetizan vitamina B
12
.
El hierro es importante para la sntesis de compuestos que contienen el ncleo heme y para
ciertas enzimas. Las bacterias grampositivas requieren calcio para la sntesis de las paredes
celulares y los organismos formadores de esporas, para la sntesis de las paredes de la
espora.
VITAMINAS
Las vitaminas necesarias para algunos microorganismos incluyen inositol, cido flico,
vitamina B
12
y vitamina K. Los microorganismos patgenos humanos requieren a menudo
una variedad de vitaminas y por esta razn son capaces de crecer solamente cuando pueden
obtener esas sustancias a partir del organismo hospedero. El desarrollo de tales organismos
en el laboratorio necesita un medio complejo el cual contenga todos los nutrientes que
normalmente obtiene de sus hospederos.
FACTORES AMBIENTALES QUE AFECTAN
EL CRECIMIENTO
El crecimiento microbiano puede estar influido por una variedad de factores, tanto
fsicos como nutricionales. Los factores fsicos incluyen: la concentracin de iones hidrge-
no (pH), la temperatura, la concentracin de oxgeno, la humedad, la presin hidrosttica, la
presin osmtica y la radiacin. Los factores nutricionales comprenden: la disponibilidad de
carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y otros minerales, y en algunos casos vitaminas.
FACTORES NUTRICIONALES
En las pginas anteriores se describieron los nutrientes necesarios para el cultivo de los
microorganismos.
Para realizar estudios sobre metabolismo microbiano, por lo general es necesario prepa-
rar medios completamente sintticos en los cuales las caractersticas y la concentracin de
cada ingrediente sean exactamente conocidas.
La mayora de los microorganismos de vida libre crecen bien en extracto de levaduras,
mientras que las formas parsitas pueden requerir sustancias especiales que se encuentran
nicamente en la sangre o en extractos de tejidos animales.
Para muchos organismos, un solo compuesto (como un aminocido) puede servir como
fuente de energa, de carbono y de nitrgeno; otros requieren un compuesto diferente para
cada una de ellas.
FACTORES FSICOS
Concentracin de iones hidrgeno (pH)
La acidez o alcalinidad de un medio es expresada en trminos de pH. Los microorganismos
tienen un pH ptimo en el cual se obtiene el mejor crecimiento. Comnmente, el pH ptimo
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es neutro (pH 7), y la mayora de los microorganismos no se desarrollan a una unidad de pH
por encima o por debajo de su pH ptimo.
Las bacterias son clasificadas como acidfilas, neutrfilas y alcalinfilas de acuerdo
con las condiciones de acidez o alcalinidad que ellas puedan tolerar. Las bacterias acidfilas
se desarrollan en un rango que va desde pH 0,0 hasta 5,4. Las bacterias neutrfilas crecen en
un rango de pH 5,4 hasta 8,5; incluyndose en este grupo a la mayora de las bacterias que
causan enfermedades en el hombre. Las bacterias alcalinfilas se desarrollan entre un pH 7,0
hasta 11,5. Vibrio cholerae, agente causal del clera, se desarrolla mejor a un pH cercano a 9.
Temperatura
La mayora de las bacterias se desarrollan a un rango de temperatura por encima de 30 C,
pero las temperaturas mnimas y mximas varan considerablemente para las diferentes espe-
cies. Las bacterias pueden ser clasificadas, de acuerdo con el rango de temperatura al cual se
desarrollan, en psicrfilas, mesfilas y termfilas; y a su vez subclasificadas como obligadas
o facultativas. Obligada significa que el organismo debe tener las condiciones ambientales
especficas, y facultativa que el organismo es capaz de tolerar las condiciones ambientales,
pero puede desarrollarse, adems, en otro ambiente.
Las bacterias psicrfilas se desarrollan mejor entre 15 y 20 C, y pueden ser subdividi-
das en psicrfilas obligadas cuando no crecen por encima de 20 C y psicrfilas facultativas
cuando son capaces de crecer por debajo y por encima de 20 C.
Las bacterias mesfilas incluyen a la mayora de las bacterias y se desarrollan en un
rango de temperatura entre 30 y 37 C. Las bacterias patgenas al hombre estn incluidas en
esta categora y la mayora de ellas crecen mejor a una temperatura cercana al cuerpo humano
(37 C).
Las bacterias termfilas se desarrollan mejor a temperaturas entre 50 y 60 C.
Concentracin de oxgeno
Las bacterias, especialmente las hetertrofas, pueden ser divididas en aerobias, que
requieren oxgeno para crecer, y anaerobias, las cuales no lo requieren. Los microorganismos
aerobios obligados, tales como Pseudomonas, que causa muchas infecciones adquiridas en
el hospital, se desarrollan en presencia de oxgeno libre; mientras que los anaerobios obliga-
dos, tales como Bacteroides, mueren en presencia de oxgeno libre. Entre estos extremos se
encuentran los microorganismos microaeroflicos que se desarrollan mejor en presencia de
una pequea cantidad de oxgeno libre. Los microorganismos anaerobios facultativos son
capaces de desarrollarse en ausencia y en presencia de oxgeno. Bacillus y Staphylococcus
son anaerobios facultativos y se encuentran en el tracto intestinal y urinario donde slo est
disponible una pequea cantidad de oxgeno.
Humedad
Generalmente todas las clulas con un metabolismo activo requieren agua del ambiente.
A diferencia de los organismos superiores, los organismos unicelulares estn expuestos
directamente a su ambiente. La mayora de las clulas vegetativas slo pueden vivir pocas
horas sin humedad; slo las esporas y los organismos formadores de esporas pueden existir
en un ambiente seco.
Presin hidrosttica
Las bacterias que viven a altas presiones mueren si son mantenidas en el laboratorio
pocas horas en condiciones de presin atmosfrica estndar.
Presin osmtica
La mayora de las bacterias pueden tolerar un rango amplio de concentraciones de
sustancias disueltas. Su membrana celular contiene un sistema enzimtico llamado permeasas
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que regulan el movimiento de las sustancias disueltas a travs de las membranas. Si la
concentracin fuera de la clula se torna demasiado alta, la prdida de agua puede inhibir o
detener el crecimiento celular.
Ciertas bacterias llamadas haloflicas requieren de una moderada a gran cantidad de sal
y se hallan en el ocano donde la concentracin de sal (3,5 %) es ptima para su
crecimiento.
Radiacin
La energa radiante, particularmente la luz ultravioleta, puede causar mutaciones y even-
tualmente ocasionar la muerte de los organismos. Sin embargo, algunos microorganismos
tienen pigmentos que los protegen de la radiacin y ayudan a prevenir el dao del ADN.
Otros poseen sistemas enzimticos que pueden reparar algunos tipos de daos del ADN.
MTODOS DE CULTIVO
Debido al pequeo tamao de los microorganismos, la informacin que puede obtenerse
acerca de sus propiedades a partir del examen de los individuos es limitada; en la mayora de
los casos se estudian poblaciones que contienen millones o miles de millones de individuos.
Estas poblaciones se obtienen al hacer crecer los microorganismos bajo condiciones ms o
menos bien definidas, como cultivos.
Un cultivo que contiene solamente una clase de microorganismo se conoce como culti-
vo puro; el que comprende ms de una clase de microorganismo se denomina cultivo mixto.
En el estudio de los microorganismos es importante tener presente dos aspectos funda-
mentales: el cultivo, procedimiento mediante el cual se promueve el crecimiento de los
microorganismos al brindarles las condiciones ambientales adecuadas, y el aislamiento de
un organismo en cultivo puro, mediante la aplicacin de tcnicas de laboratorio para separar-
lo de las poblaciones mixtas.
Estas dos operaciones son bsicamente iguales para el estudio de los virus, las bacte-
rias, los hongos, los helmintos y los protozoos.
AISLAMIENTO DE UN ORGANISMO EN CULTIVO PURO
Para estudiar las propiedades de un organismo, es necesario no slo su aislamiento a
partir de una poblacin microbiana natural mixta, sino tambin su mantenimiento y el de su
descendencia en estado aislado, en un ambiente artificial en el que se impida el acceso de
otros microorganismos. Para esto se cuenta con varios mtodos:
Siembra en placa. La manera ms fcil de obtener cultivos puros de los microorganismos
que forman colonias sobre los medios slidos, se lleva a cabo mediante la separacin e
inmovilizacin de los organismos individuales sobre o dentro de un medio nutritivo solidifi-
cado; cada clula crecer dando una colonia aislada cuya transferencia puede hacerse fcil-
mente. La sustancia solidificante ideal para la mayor parte de los medios de cultivo
microbiolgicos es el agar, un polisacrido cido extrado de ciertas algas rojas. En una
concentracin de 1,5-2 %, en suspensin acuosa, se disuelve a 100 C formando una solu-
cin clara que solidifica a 45 C, la cual no volver a licuarse hasta temperaturas mayores
de 80 C, de manera que cualquier temperatura empleada para la incubacin posterior puede
ser usada. La siembra por estra es el mtodo ms til de sembrar en placa y se realiza
empleando un asa de alambre estril que se introduce en la suspensin original para luego
hacer una serie de estras paralelas, no superpuestas, sobre una placa de agar. Al ir avanzan-
do la estra, el inculo va disminuyendo hasta obtener colonias bien aisladas sobre el agar.
Alternativamente, los aislamientos pueden hacerse con placas sembradas por vertido, para
ello una suspensin del microorganismo se mezcla con el medio de cultivo que contiene agar
fundido el cual se vaca en placas de Petri estriles; cuando el agar se solidifica, las clulas se
inmovilizan y se desarrollan dando colonias aisladas.
Dilucin. Los mtodos de siembra en placa por lo general son satisfactorios para el
aislamiento de bacterias y hongos. Sin embargo, muchos protozoos son slo cultivables en
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medio lquido. El mtodo ms sencillo de aislamiento en medios lquidos es el mtodo de las
diluciones. Con una suspensin del microorganismo, se realiza una dilucin en serie utilizan-
do un medio estril y se inocula un gran nmero de tubos con el medio de cultivo, con partes
alcuotas de cada una de las diluciones sucesivas. Como resultado de esto, si un tubo
muestra algn crecimiento subsiguiente, existe una elevada probabilidad de que este creci-
miento sea el resultado de la introduccin de un solo organismo.
Cuando no puede aplicarse ni el mtodo de siembra en placa ni el de las diluciones, una
alternativa consiste en recurrir al aislamiento microscpicamente controlado, de un solo
organismo a partir de una poblacin mixta.
CULTIVO DE VIRUS
Muchos virus pueden desarrollarse en cultivos celulares o en huevos frtiles en condi-
ciones estrictamente controladas. La disponibilidad de clulas desarrolladas in vitro ha
facilitado la identificacin y el cultivo de virus recin aislados y la caracterizacin de los que
ya se conocan. Hay tres tipos bsicos de cultivo celular:
1. Los cultivos primarios se efectan mediante dispersin de clulas de tejidos huspedes
recin extirpados. En general no pueden crecer ms all de unos cuantos pasos en culti-
vo, como cultivos secundarios.
2. Las lneas celulares diploides son cultivos secundarios que han experimentado un cam-
bio el cual permite su cultivo limitado, pero que retienen su patrn cromosmico normal.
3. Las lneas celulares continuas son cultivos capaces de crecimiento ms prolongado, quiz
indefinido, y que se han obtenido de lneas celulares diploides o de tejidos malignos.
El tipo de cultivo celular que se use para cultivar virus depende de la sensibilidad de las
clulas a un virus particular.
CULTIVO DE HONGOS
La mayor parte de los hongos existen en la naturaleza y proliferan con facilidad en
presencia de fuentes simples de nitrgeno y carbohidratos. Los cultivos para hongos se
hacen comnmente en juegos de pares, uno incubado entre 25 a 30 C y el otro entre 35 a 37 C.
CRECIMIENTO MICROBIANO
Se define como crecimiento al aumento ordenado de todos los componentes qumicos
de un organismo. El aumento de masa (tamao) no resulta un crecimiento verdadero, ya que
las clulas pueden estar incrementando sus reservas, captando agua, etctera.
Las bacterias que se adaptan a un medio adecuado se encuentran en un estado de
crecimiento equilibrado donde la duplicacin de la biomasa representa la duplicacin de
todas las dems propiedades medibles como son el ARN, ADN, protenas y el agua intracelular.
La existencia de este crecimiento equilibrado es de gran ayuda a la hora de medir el crecimien-
to bacteriano pues, como todos los componentes poseen la misma velocidad de crecimiento,
basta medir uno solo de ellos para determinar la misma.
La multiplicacin celular es una consecuencia del crecimiento, esta conduce al aumento
en nmero de individuos originando una poblacin o cultivo.
EXPRESIN MATEMTICA DEL CRECIMIENTO
En un crecimiento equilibrado, la velocidad de aumento de bacterias en un tiempo
determinado es directamente proporcional al nmero o masa de bacterias presentes en ese
tiempo.
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(masa de clulas) = velocidad de aumento celular
Por lo que:
= constante de velocidad de crecimiento
Pero tambin:
d N
N = donde:
d t N = # de clulas mL
d X
X = donde:
d t X = masa celular mL
d Z
Z = donde:
d t Z = cantidad de cualquier componente celular mL
El valor de es suficiente para definir la velocidad de crecimiento de un cultivo.
CURVA DE CRECIMIENTO
Xo
Medio irrestrictivo de inicio
Transcurrido un tiempo:
nutrientes
produccin de sustancias txicas -
competencia por el oxgeno -
# de clulas -
-
aparicin de mutantes -
# de clulas
Xo
I
II
III
IV
V
VI
t
Descripcin de las fases o etapas de la curva de crecimiento
Fase I: Fase lag o de retraso Vc = 0
Adaptacin a un medio ambiente de clulas empobrecidas del arsenal metablico
(enzimas) y de sustratos como resultado de las condiciones desfavorables al final del culti-
vo. Existe un cese parcial de las funciones metablicas. Formacin de enzimas y metabolitos
intermediarios necesarios para la reanimacin del crecimiento.
Fase II: Fase de aceleracin positiva Vc = Creciente
Las clulas disminuyen de tamao, comienzan a utilizarse las reservas, aparecen nuevas
funciones.
Fase III: Fase exponencial o de crecimiento logartmico Vc = Constante
Proceso de catlisis que conlleva al aumento en forma exponencial de la masa bacteriana.
Existe un equilibrio de flujo de material. Este proceso se mantiene hasta que:
1. Se agoten los nutrientes (fundamentalmente oxgeno en los aerobios).
2. Se acumulen muchas sustancias txicas que inhiban el crecimiento.
3. Se pongan de manifiesto las propiedades ms importantes de la clula.
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Fase IV: Fase de desaceleracin o retardo Vc = Decreciente
Estadio de deficiencia. Las clulas viven del metabolismo endgeno, disminuye la velo-
cidad de crecimiento.
Fase V: Fase estacionaria mxima Vc = 0
Cese completo del crecimiento por agotamiento de nutrientes y acmulo de sustancias
txicas. Prdida lenta de clulas por muerte compensada debido a la formacin de clulas
nuevas mediante su crecimiento y divisin.
Fase VI: Fase de declinacin o muerte Vc = Negativa (muerte)
Aumento de la tasa de mortalidad hasta un nivel sostenido. Persiste un nmero peque-
o de sobrevivientes por meses o aos a expensas de los nutrientes de las que mueren. La
clula pierde toda capacidad para los procesos degradativos.
MEDICIN DEL CRECIMIENTO
Para determinar la velocidad del crecimiento microbiano puede utilizarse:
1. La medida de la masa celular.
2. La medida del nmero de clulas.
Prediccin de la masa celular
1. Se efecta determinando el peso seco de las bacterias en un volumen fijo del cultivo, pero
requiere mucho tiempo y es poco sensible.
2. Por absorbancia: cantidad de luz refractada por una suspensin celular; se define como el
logaritmo del cociente entre intensidad de luz incidente (Io) sobre la transmitida (I):
Io
A = log
I
Esta se mide por espectrofotometra o con un nefelmetro.
Medicin del nmero de clulas
1. Se realiza en cmaras de recuento mediante microscopia.
2. Mediante el contador electrnico de Coulter.
3. Por recuento en placa: diluciones de una poblacin bacteriana son sembradas en medios
convenientes, se cuenta el nmero de colonias crecidas despus de la incubacin y se
multiplica el nmero de colonias por el factor de dilucin; es llamado recuento viable y
resulta el mtodo ms sensible para la determinacin del nmero de bacterias.
CRECIMIENTO SINCRNICO
Hasta ahora se ha descrito el modelo de crecimiento poblacional. Para lograr informa-
cin sobre el crecimiento de bacterias individuales debe recurrirse a los cultivos sincrnicos,
clulas que se encuentren todas en la misma etapa del ciclo de multiplicacin. Estos cultivos
pueden lograrse mediante tcnicas:
1. Inducidas: por manipulacin de las condiciones ambientales (cambios de temperaturas o
suministrando nutrientes en la fase estacionaria).
2. Seleccionadas: separacin fsica de clulas (filtracin diferencial o centrifugacin).
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CULTIVO CONTINUO DE LOS MICROORGANISMOS
(MANTENIMIENTO DE LA FASE EXPONENCIAL)
Los cultivos que han permitido el estudio de la curva de crecimiento bacteriano son
discontinuos o cultivos batch, donde los nutrientes no se renuevan y la fase exponencial se
manifiesta durante unas pocas generaciones; precisamente esto se puede lograr mediante
un sistema de cultivo continuo, aadiendo medio fresco constantemente y eliminando el
exceso, de manera que el volumen del recipiente se mantenga constante. La velocidad de
adicin de medio fresco determina la velocidad del cultivo; este sistema se encuentra
autorregulado por la adicin de uno de los nutrientes esenciales al microorganismo.
Esto se controla con :
1. Quimiostatos: la velocidad de crecimiento est ajustada por la velocidad de flujo.
2. Turbidostatos: controla el flujo y la velocidad de crecimiento mediante un dispositivo
ptico que mide la absorbancia.
Aplicacin
1. Son una fuente constante de clulas en fase exponencial de crecimiento.
2. Permiten el crecimiento continuo con una concentracin muy baja del sustrato.
Esto ha permitido, entre otros, estudios tales como: la medida precisa de la frecuencia de
mutaciones en las bacterias, cambios evolutivos en las poblaciones bacterianas y cintica de
induccin de una enzima inducible a concentraciones muy bajas del inductor.
RESUMEN
El cultivo es el procedimiento mediante el cual se promueve el crecimiento de los
microorganismos, al proporcionarles las condiciones ambientales adecuadas: nutrientes,
pH, temperatura, aereacin, humedad, presin hidrosttica, presin osmtica y radiacin.
La provisin de nutrientes para el crecimiento de un organismo se denomina nutricin y
los nutrientes, de acuerdo con su papel en el metabolismo, se clasifican de la siguiente forma:
fuente de carbono, fuente de nitrgeno, azufre y fsforo, elementos trazas y vitaminas.
El crecimiento de los microorganismos puede estar influido por diferentes factores,
tanto nutricionales como fsicos. Adems, debe haber una fuente de energa que establezca
la fuerza motriz protnica y que permita la sntesis macromolecular. Los modos principales de
generar energa metablica son: fermentacin, respiracin y fotosntesis.
Para estudiar los microorganismos hay que tener presente dos aspectos fundamentales:
el cultivo y el aislamiento del organismo en cultivo puro. Ambos aspectos son bsicamente
iguales para el estudio de los virus, las bacterias, los hongos, los helmintos y los protozoos.
El crecimiento se describe como el aumento ordenado de todos los componentes qumi-
cos de un organismo, puede representarse mediante una expresin matemtica y se expresa
mediante una curva, la curva de crecimiento, que consta de los siguientes pasos:
Fase I Vc = 0
Fase II Vc creciente
Fase III Vc constante
Fase IV Vc decreciente
Fase V Vc = 0
Fase VI Vc negativa
Esta velocidad de crecimiento poblacional puede medirse mediante:
Masa celular (peso seco y absorbancia).
Nmero de clulas (microscopia, contador de Coulter, recuento en placa).
El crecimiento individual se puede realizar recurriendo a crecimientos sincrnicos (indu-
cidos o seleccionados), esto se logra mediante cultivos continuos (aadir medio fresco de
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forma continua) y controlado por quimiostatos y turbidostatos, su aplicacin es muy til;
por ejemplo: son fuente constante de clulas en fase exponencial y con una baja concentra-
cin de sustrato puede alcanzarse, lo que permite estudiar la frecuencia de mutaciones,
cambios evolutivos y cintica de induccin de una enzima a concentraciones bajas del
inductor.
BIBLIOGRAFA
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