PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

HONGOS / BACTERIAS

Pesar 40gr. de Suelo

 Pasar este suelo a un frasco con 200ml. de agua estéril, y agitar.

 Ya agitado tomar 1 ml. de ese suelo y pasarlo a un tubo de ensayo, el tubo debe de
contener 9 ml. de agua estéril, y agitar.

 De ese primer tubo de ensayo se deberá tomar 2 ml. de la dilución y posteriormente

pasar 1 ml. al siguiente tubo de ensayo, y el mililitro restante de la dilución se deberá
vaciar a 2 cajas petril, 0.5 ml. a 1 caja y el otro 0.5 ml. a la otra caja.

 Después debes agitar el segundo tubo de ahí tomaras 0.2 ml. de la dilución, 0.1 ml lo
pasas a 1 caja petril y el restante 0.1 ml. a la otra caja.

 Finalmente terminado el proceso se deberá vaciar el medio de cultivo Agar Dextroza Papa
(PDA). y el Agar de Miel de Maíz (AMM).

 Las bacterias se checaran a los 2 dias después de la siembra.

 Los hongos deberán de checarse dependiendo de la evolución de los patógenos a los 6, 8 o

12 días.

 Para el conteo de bacterias se deberá de observar al microscopio 4 campos por cada caja
al hazar, anotar que bacterias vas observando, después hacer la sumatoria de los 8,
multiplicarlo x 100 el resultado dividirlo entre 2, cada bacteria ya sea B. subtillis, B. sp o
Levaduras equivale a 100 es decir:
Cajas Petril

8 campos= sumatoria de bacteria, multiplicar x 100 / 2= resultado

  Para el conteo de Trichoderma es por criterio si el trichoderma cubre ¼ de ambas cajas
es equivalente a 7,500 ufc.

Ejemplo:

 Las colonias no precisamente deben estar juntas pueden estar dispersas por todo la caja
y tomar el criterio de la cantidad de ufc (Unidades Formadoras de Colonias)

Colonias de Trichoderma

7,500 # 7,500 = 15,000/2 = 7,500

Colonias de Trichoderma

15,000 # 15,000 = 30,000/2 = 15,000

Colonias de Trichoderma

30,000 # 30,000 = 60,000/2 = 30,000

 Si en dado caso aparecieran solo 1 colonia, 2 o 3 colonias esto equivaleria a 3,000 Ufc.
 Cada colonia equivale a 1,000
 MEDIOS DE CULTIVO

AGAR DEXTROZA PAPA (PDA), medio para hongos.

 39 gr. de PDA para / 1000 ml. de agua.

AGAR MIEL DE MAIZ (AMM), medio para bacterias.

 23 gr. de Agar Nutritivo/ 1000 ml. de agua.

Todo el material jeringas medio de cultivo, frascos con agua se deberán esterilizar en la olla
express, la olla deberá de subir hasta los 125 C. llegada a esa temperatura disminuir la flama y
mantenerla durante 15 minutos más.

PRUEBAS RAPIDAS

 Cuando te lleven plantas con algún daño en especifico ya sea tallo, hoja o raíz, lavar la
parte afectada con agua y jabón, posteriormente hacer algunos cortes de la parte afectada
volver a lavar con 10 ml. de agua estéril o de garrafón agregarle al agua 1 ml. de cloro o
alcohol, agitación contaste por 1 minuto de haber colocado los cortes en el agua.

 Después ya que se vaya a sembrar los cortes, se tendrá que quitar el excedente de agua de
los cortes con una servitoalla, obviamente ya tendrán que estar preparadas las cajas petril
con los medios sólidos PDA y AMM para colocar los cortes.

 Los resultados de los cortes para bacterias deberán de checarse a los 2 días de haberlos
sembrado, lo de hongos se checaran entre 6 a 8 días.

 Las Pseudomonas se verán de color amarillo, que al contacto con el haza bacteriológica
hace baba, otra forma de comprobar que la bacteria es patógena se deberá colocar una
gota de Hidróxido de Potasio (KOH) en la pata de la caja petril y mezclar la gota con la
bacteria detectada, este proceso es lo mismo para Ralstonia, solo que esta bacteria es de
color blanquecina – grisácea.

 Otra prueba rápida seria por medio de cámara humedad solo lavas la panta , hoja, tallo
etc, y lo pones en una servitoalla con humedad y lo metes a una bolsa sin excederte de
agua y checar a los 3 o 4 dias.

 Para el conteo de nematodos, cada nematodo equivale a 20,

en este caso se cuentan todos benéficos y patógenos.
 HONGOS COMUNES

 Fusarium oxysporum.

Fusarium spp. es parecido solo que más pequeñas las esporas y son redondas.

 Alternaria spp
 Botrytis


 Rhizoctonia
  Phythopthora

Este patógeno sale en el trampeo y se reporta como presencia (PR), o no presencia (NR).

 Trichoderma harzianum
EJEMPLO DE CONTEO DE PATOGENOS Y BENEFICOS
 Fusarium spp

Alternaria spp. Trichoderma harzianum

Fusarium spp
2 Colonias x 100 = 200/2 = 100

Alternaria spp. 3 colonias x 100 = 300/2 = 150

Trichoderma harzianum ¼ de caja aquivalente a 7,500

BACTERIAS COMUNES
  Bacillus subtillis

 Bacillus spp.

 Levaduras

Y todo el resto de bacterias opacas que se observen

serán levaduras es un poco difícil de contar
porque hay muchísimas por eso esas se cuentan
en un aproximado.