Manual de Prácticas de Microbiología Médica

PRÁCTICA N° 47: PRUEBA DE WESTERN BLOT PARA DIAGNÓSTICO DE VIH

OBJETIVO

Conocer el fundamento de la prueba de diagnóstico confirmatorio de infecciones.

INTRODUCCIÓN

- Prueba de anticuerpos empleada para confirmar un resultado positivo de una prueba de

detección del VIH. (La prueba de detección inicial suele ser un tipo diferente de prueba de
anticuerpos). La prueba de Western blot para el VIH se realiza con fines de confirmación.
- Es una técnica analítica usada para detectar proteínas específicas (anticuerpos esepcíficos)
en una muestra determinada.
- La prueba se basa en la separación de las proteínas (antígenos) obtenidas del VIH-1
procedentes del lisado del cultivo del virus y purificadas por centrifugación.
- La proteína viral así obtenida se coloca en un gel de poliacrilamida en forma de láminas
delgadas y luego se efectúa una electroforesis con la que las proteínas de menor peso
molecular (p17, p24) emigran más lejos en el gel mientras que las de mayor peso molecular
se mantienen cerca de su lugar de depósito.
- Después se transfieren a una tira de nitrocelulosa y se cortan en tiras de unos 5 mm de
ancho. Estas son las tiras que se exponen al suero humano diluido, después de una
incubación se lavan y se vuelven a incubar con una IgG antihumana marcada con una enzima
que con la exposición a un revelador enzimático producirá una banda coloreada en las zonas
correspondientes a los anticuerpos específicos que contenga la muestra
- Esta prueba detecta anticuerpos contra cada uno de estos antígenos
- La presencia o ausencia de estas bandas son la base para la interpretación de los resultados
del examen.
- Es una prueba de diagnóstico de alta sensibilidad y especificidad concluyente para el
diagnóstico del VIH
- Su resultado se informa como negativo o positivo a la infección

INTERPRETACION DEL WESTERN BLOT:

Criterios mínimos de positividad del Western blot

FDA Existencia por lo menos de tres bandas: p24, p31 y gp41 u otra glucoproteína

CDC Al menos dos bandas: p24, gp41 y gp160/120

CRSS Al menos una banda del core (gag/pol) y otra de envoltura (env)

OMS Al menos dos bandas de envoltura

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MATERIAL

Observar las láminas con resultados de prueba se Western Blot de pacientes e interprételas
Ver Atlas

Sustrato

Enzima

Anticuerpo anti IgG

Anticuerpo IgG anti VIH

Antígenos VIH separados

gp120 gp41 p24

REPRESENTACION DE LOS RESULTADOS DE WESTERN BLOT

A Resultado Positivo: Reactivo a todos los antígenos del VIH

B Controles: Negativa y Positiva
C Muestras: Negativa – Positiva - Indeterminada
- A B C

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RESULTADOS DE WESTERN BLOT

CONTROL POSITIVO
FUERTEC
CONTROL POSITIVO
DÉBIL
CONTROL NEGATIVO

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CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el fundamento de la Prueba de Western Blot?

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2. Utilidad de la prueba de Western Blot

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BIBLIOGRAFÍA

- Guia de Prácticas de Microbiologia Médica 2017.