Manual de Prácticas de Microbiología Médica

PRÁCTICA N° 43: NEUTRALIZACIÓN EN PLACA.

SOFÍA GONZÁLEZ COLLANTES.

OBJETIVO

El Alumno de Medicina conocerá las Pruebas para el diagnóstico serológico de las infecciones
virales, su utilidad y la Interpretación de los resultados obtenidos.

NEUTRALIZACION EN PLACA

INTRODUCCIÓN

1. Es una prueba de diagnóstico de laboratorio que se funda en la capacidad del anticuerpo de

neutralizar las propiedades infecciosas de los virus de la misma forma que una toxina es
neutralizada por su antitoxina.
2. La prueba de neutralización puede utilizarse con dos fines: para detectar las elevaciones de
anticuerpos específicos como una ayuda en el diagnóstico de la enfermedad, y para identificar
un agente desconocido después de su aislamiento
3. Cuando sólo existe un anticuerpo en el suero, tal neutralización tiene valor específico.
4. Se utilizan cultivo de células BHK21, que son células de riñón de hamster bebé
5. Se utiliza un gel de carboximetilcelulosa para cubrir el cultivo con la inoculación de virus y
suero
6. Como colorante se prepara una solución de azul de lactofenol naftofenol ? con colorante de
Stein
7. El colorante entra en las células sanas y no tiñe las muertas o invadidas por el virus.
8. Cada vez que se corre una prueba se utiliza:
− Un control sólo con virus que previamente se ha estandarizado para obtener 20 placas
(100 %).
− Un control positivo con virus conocido y suero de paciente con anticuerpo específico
conocido.
− Un control negativo con virus conocido y con suero de paciente sano (sin anticuerpos
11. La interpretación de la lectura de los resultados es:
− Positiva: Cuando no hay placas
− Negativa: Cuando hay placas.

PROCEDIMIENTO

- En las placas se cultivan células BHK21.

- Se agrega virus conocido (arbovirus) con suero del paciente a estudio.
- Se incuba por 2 horas.
- Se agrega una capa de carboximetilcelulosa.
- Se deja incubar por 7 a 10 días.
- Se le agrega el colorante Stein.
- Se procede a la lectura

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LECTURA:

Negativa

Positiva