DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA

CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

SANTO DOMINGO

PROYECTO DE GENÉTICA

TEMA:

Edición genética mediante CRISPR-Cas9 para el tratamiento del cáncer

AUTORES:

Chiriboga Benavides Jean Carlos

Fernández López Lina Salomé
Montero Cedeño Arnold Jasmany

CURSO:

4to Biotecnología “A”

Docente: Dra. Yulia Cajas M.Sc.

SANTO DOMINGO DE LOS TSÁCHILAS
2022-2023

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 1. INTRODUCCIÓN

Desde hace ya varios años se ha trabajado en métodos que permitan modificar el

genoma. Una de las técnicas actualmente más revolucionarias y con mayor aporte al desarrollo

de la ciencia genómica es el Sistema CRISPR/Cas (clustered regularly interspaced short

palindromic repeats). Es una técnica reconocida y usada a nivel mundial por su fácil manejo,

rapidez y además con un alto nivel de eficacia. (Lagunas F, s.f. y Gómez, L. et al. 2019).

El CRISPR-Cas9 tuvo sus inicios en el año 1987, cuando durante un estudio realizado

por un grupo de japoneses de la universidad de Osaka, Japón, descubrieron unas secuencias de

ADN repetidas que parecían no tener una función en específico. Más tarde en el año 1993, de

forma independiente, el investigador Juan Francisco Martínez Mojica junto con su grupo

reportaron el mismo hallazgo, pero en genomas de arqueas, en este caso las secuencias eran

repetitivas y palindrómicas separadas entre sí mediante unas secuencias espaciadores y

contaban con una secuencia líder en su inicio (Castillo, 2016).

De acuerdo con Jinek et al. (2012), en el año 2012, Jennifer Doudna y Emmanuelle

Charpentier lideraron un estudio junto a su equipo de investigadores, en que planteaban la

posibilidad de “modificar e implementar el complejo CRISPR-Cas para aplicarlo como

herramienta biotecnológica para la edición "programable" de genomas, que se pudiera cortar

de manera específica una cadena de ADN in vitro con fines terapéuticos”.

Según Cárdenas (2019), la técnica CRISPR puede ser comparada con un editor de texto

que corta y pega parte de un genoma. Esto permite, en muchos casos que se pueda eliminar,

modificar o reemplazar algún gen que no esté funcionando correctamente, y estas nuevas

secuencias introducidas pueden ser heredadas a los descendientes. “CRISPR es una curiosa

región del ADN de algunas bacterias que actúa como un mecanismo inmunitario frente a los

virus” (Capella, B. Et al., 2016).

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 En un estudio realizado por Guevara, F. et al. (2019), se menciona que el sistema

CRISPR, usado para la modificación del genoma de ciertas baterías infecciosas, permite que se

pueda reducir la actividad virulenta y además construir ciertas nucleadas CRISPR-Cas9

programables que sirvan como nuevos antimicrobianos, debido a la actual resistencia de ciertas

bacterias a los antibióticos comunes.

Otros estudios, como el realizado por Martínez, B. (2020), donde se menciona el uso de

CRISPR-Cas9 para el estudio genómico de ajolotes (reptiles que puede regenerar extremidades,

tejidos e incluso huesos de su cuerpo), se crea la especie genéticamente modificada que

permiten el estudio fenotípico de esa generación, con esto se plantea el reto de conocer cómo

se da el proceso de regeneración para después aplicarlo en otros animales a fin de mejorar su

condición de vida o curar enfermedades que afectan al genotipo provenientes del ADN.

Otro de los aspectos que se analizan al momento de incursionar en la ingeniería genética

y aplicar CRISPR es el factor económico que influye sobre la misma, el método CRISPR a

pesar de no ser el método pionero dentro de la edición genética ofrece grandes beneficios

económicos y es que CRISPR “permite modificar el genoma con una precisión sin precedentes,

y de forma mucho más sencilla y barata que cualquier otro método biotecnológico.” (Becú,

2017).

Teniendo en cuenta ya los aspectos que influyen en la aplicación de la técnica CRISPR

para fines medicinales o investigativos, a pesar de las múltiples trabas que se le ha impuesto a

esta tecnología, los avances cada día son más visibles desde la primera vez que se sintetizó una

bacteria en 2014 cuyo nombre fue expuesto como “Mycoplasma laboratorium 1” hasta las

investigaciones más recientes como la cura de enfermedades del mtDNA, luego esta

conformación adquirió el nombre de complejo CRISPR-Cas, y que se activa con la presencia

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de ADN foráneo de bacteriófagos o plásmidos invasivos, el cual reconoce y degrada (Mojica,

Díez-Villaseñor, García-Martínez J & Soria, 2005).

En varias investigaciones se menciona que CRISPR-Cas puede ser utilizado como un

método bastante eficaz para tratar el cáncer, descubriéndose, hasta el año 2017, más de 140

genes driver que producen cáncer, por lo que, mediante la identificación y secuenciación de las

mutaciones en un tumor, CRISPR sería una buena alternativa para reparar esta secuencia

dañada. (Gutiérrez y Salazar, 2017).

Ibáñez et al, (2021) mencionan en su investigación que se han diseñado ciertos

complejos proteicos que tienen la capacidad de reconocer la secuencia diana sin cortarla, es

decir se ha inhibido esta capacidad a la proteína Cas9 con el fin de usarse para dirigir a otras

proteínas que puedan modificar genes específicos para cambiar los patrones epigenéticos.

En una investigación realizada por Sempere, C. (2021), se obtuvieron resultados

prometedores en el tratamiento del cáncer usado CRISPR, en dicho estudio se crearon células

T con el gen alterado en ciertas proteínas que se encuentran en dichas células y que se conocen

como PD1, mediante CRISPR; estas fueron implantadas en personas con cáncer de pulmón, y

mediante esto se demostró primeramente la seguridad y viabilidad de la terapia, además se

obtuvo que en ciertos pacientes se logró obtener una enfermedad estable durante 8 semanas,

llegando a 76 semanas en uno de ellos.

Por otro lado, en una estudio que se realizó por Balon, K.; Sheriff, A.; Jacków, J.;

Łaczma ´nski, Ł. (2022) , se identificó promotores específicos del cáncer que controlan los

genes sobreexpresados en las células tumorales, en los cuales se puede usar la terapia génica

CRISPR/Cas9 para lograr la expresión selectiva de la proteína Cas9 y los genes dirigidos a

sgRNA (guía único ARN) necesarios para el crecimiento celular; en los resultados se encontró

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que estos promotores en tejidos sanos ejercen una actividad baja pero significativa que es

suficiente para afectar la especificidad de la terapia basada en CRISPR/Cas9, lo que da como

resultado el ensamblaje de la ribonucleoproteína CRISPR/Cas9 en tejidos sanos no cancerosos,

sin embargo se encontró que usando un método de construcción de un (Y lógico circuito de gen

puerta) usando dos promotores que controlan un gen de salida, se conduce a una apoptosis,

detención del crecimiento y motilidad de las células cancerosas, por lo que empleando

diferentes promotores específicos de tejido y además proporcionar genes efectores alternativos

permite dirigirse a prácticamente cualquier tumor con alta especificidad.

2. OBJETIVOS

2.1. Objetivo General

 Investigar la viabilidad del método de edición genética con CRISPR-Cas9 como

alternativa para el tratamiento del cáncer.

2.2. Investigar Objetivos específicos

 Contrastar información de diversas fuentes respecto a la bioética y regulaciones

ante la modificación genética como alternativa contra el cáncer.

 Identificar las ventajas que presenta el método CRISPR-Cas9 como terapia

genética para el cáncer frente a otros métodos.

 Detallar el método de edición genética mediante CRISPR-Cas9 utilizado en el

tratamiento contra el cáncer.

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 3. MARCO TEÓRICO

Esta sección comprende los antecedentes en donde se menciona el origen, las

aportaciones, funcionamiento y la conceptualización del método de edición genética a partir de

CRISPR-Cas9 y su aplicación en el tratamiento del cáncer. Así mismo se mencionan conceptos

importantes acerca de esta enfermedad, todo esto a fin de mantener un soporte teórico que

sustenta nuestro proyecto de investigación.

3.1. ¿Qué es el cáncer?

El cáncer es una enfermedad compleja de carácter multifacético, catalogada como

impredecible e incurable, esta enfermedad dada por cambios en las secuencias del ADN cobra

miles de vidas anualmente y que, en última instancia, “es una enfermedad del organismo, que

coopta los tipos de células normales (Figura 1) y las funciones de los tejidos, y elude los

sistemas de defensa del huésped” (Díaz et al., 2022)

Con cada vez mayor incidencia a nivel mundial el cáncer como enfermedad heterogénea

y dinámica representa un problema a nivel investigativo ya que remontarse a los orígenes del

mismo se torna todo un desafío al desconocerse los eventos que lo subyacen.

Figura 1. Célula cancerígena en la región mamaria.

Fuente: https://www.cancer.gov/espanol/cancer/naturaleza/que-es

Así mismo se ha venido trabajando en avances para contrarrestar el cáncer y su

peligrosidad al constituir la segunda causa de muerte a nivel mundial, diversos métodos de

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tratamiento ya existentes se discuten, dentro de los cuales CRISPR-CAS9 se hace presente, aun

así, es de importancia conocer los factores que inducen la enfermedad.

3.1.1. ¿Por qué se produce el cáncer?

Cuando se habla de cáncer no se habla solo de un tipo o de un origen, el cáncer como

enfermedad se presenta en diferentes áreas del cuerpo humano afectando a órganos específicos,

es esto uno de sus limitantes al momento de tratarlo.

Tabla 1. Diferentes tipos de cáncer

Tipos de cáncer Implicación

Genéticos (susceptibilidad hereditaria) poca importancia
Inducidos por carcinógenos químicos (pulmón,
poca importancia
colon…)
Inducidos por cambios hormonales (mama, próstata…) mediana importancia

Fuente: https://revistas.ucm.es/index.php/PSIC/article/download/PSIC0606130035A/15910

Se estima que uno de los principales factores asociados al aparecimiento de cáncer tiene

su origen en fallas hormonales (véase tabla 1), se ha descubierto también que estas fallas

hormonales están estrechamente ligadas al sistema inmunológico (véase tabla 2), así, se estima

como descuidos en los hábitos de vida de un paciente propenso a tener cáncer aumentan la

posibilidad de contraer la enfermedad (Cams et al., 2006).

Tabla 2. Relación entre el cáncer y el sistema inmunológico.

Estudio realizado Efecto sobre el sistema Fuente

inmunológico
Células esplénicas procedentes de Disminución de actividad NK. (Monjan,1977)
un ratón estresado por sonido.
Células esplénicas procedentes de Disminución de la capacidad (Glaser, 1985)
un ratón estresado por movimiento reparadora del ADN.
rotacional.
Ratas estresadas por shock Aumento del tamaño tumoral. (Eliyahu,1999)
eléctrico con tumores implantados.

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 Ratas estresadas por aislamiento Disminución de la inmunidad (Wu, 2000)
con tumores implantados. celular y aumento del tamaño
tumoral.

Aún después de analizar y describir a los cambios hormonales como inductores de la

actividad cancerígena, se necesita explicar como otros factores impulsan favorablemente el

surgimiento o reproducción de células cancerosas , dentro de esto, los factores genéticos

cumplen un importante papel, uno de los ejemplos más representativos es la influencia de

factores genéticos en el cáncer de mama, al respecto se han realizado algunos estudios los cuales

han revelado que de todos los casos estudiados se estima que alrededor de un 10 % de ellos se

deban a un origen genético. “Desde 1995, una gran proporción de casos hereditarios son

atribuibles a mutaciones en dos genes, BRCA1 y BRCA2 (10%). Las mujeres portadoras de

una mutación en estos genes tienen un riesgo de 80% de desarrollar cáncer de mama, de ovario

o ambos durante la vida” (Torres et al., 2009).

El gen BRCA1 fue nombrado por primera vez en 1991 por Mary-Claire King. Su grupo

lo asignó al cromosoma 17 después de analizar la relación de un gran grupo de familias con

casos de cáncer de mama detectado a edades tempranas, y fue así, posterior a estos estudios

como en 1994 se relacionó el cromosoma 13 con el gen BRCA2 El cáncer de mama en hombres

es una alteración rara que representa menos de 1% de todos los cánceres y causa 0.1% de las

muertes por cáncer entre los hombres. (Narod y Rodríguez, 2011)

El descubrimiento de los dos genes anteriormente mencionados dio paso a un frenesí de

investigaciones contra el cáncer, en especial el cáncer de mama. Aunque las pruebas genéticas

para el BRCA1 y el BRCA2 no sean evaluadas frecuentemente en Latinoamérica, países como

Estados Unidos, Canadá, y otros países de Europa Occidental, se unen bajo el objetivo de

evaluar pacientes que bajo alta probabilidad puedan tener cáncer de mama de origen hereditario.

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Y es que la capacidad de identificar estos genes dentro de pacientes con la enfermedad del

cáncer en etapa temprana aumenta las posibilidades de recuperación de las mismas.

3.2. ¿Qué es CRISPR-Cas9?

Se denomina CRISPR a una región de ADN presente en ciertas bacterias que funciona

como mecanismo de defensa contra los virus. Tienen la capacidad de detectar a los virus

invasores en la bacteria y desplegar sobre ellos un enzima especial que se encarga de

trocearlos obteniendo así fragmentos que son utilizados para inmunizar a la bacteria frente a

tales virus (Capella, 2016). La constitución del CRISPR-Cas9 comprende dos componentes

básicos: la enzima Cas9 y el CRISPR. El primer componente es una enzima que funciona

como tijeras moleculares ya que permite cortar y pegar cualquier molécula de ADN de

manera muy precisa y controlada (Morán, 2018). El segundo componente es una molécula de

ARN encargada de transmitir información biológica dentro del genoma. Tiene el papel de

guía de las tijeras moleculares, pues conduce a la enzima hasta la base de nucleótidos que

tiene que cortar. Al observar este comportamiento los científicos se dieron cuenta de que

podían lograr convertir moléculas de ARN en el equivalente a un GPS (global positioning

system) al igual que la naturaleza. Tras varios estudios obtuvieron versiones sintéticas de

ARN guía y aprendieron a programarlas para que cumplan su función en todo tipo de células.

Así, en cuanto ponían una enzima (tijeras genéticas) frente a una secuencia de ADN, esta

podía cortar y pegar nucleótidos, editando los genes y manipulando la función de estos de

forma que lograba modificar la secuencia del ADN de un organismo (Zhang et al., 2014).

Debido a que este método es sencillo, económico y eficaz muchos grupos han

empezado a realizar estudios y experimentos para su aplicación y mejora para hacerla más

provechosa. Un ejemplo de ello es un ratón que llevaba en todas sus células el “escalpelo

genético” Cas9, desarrollado por el equipo de Zhang para habilitar ampliamente la aplicación

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de Cas9 in vivo. Este ratón al haber sido modificado genéticamente “acelera toda la

investigación dirigida a conocer las causas genéticas de las enfermedades y los medios para

combatirlas, porque permite introducir en esos ratones manipulaciones genéticas y

experimentar con ellos con gran sencillez y poco coste” (Capella, 2016, p.225). Este avance

permite que un experimento que antes tardaba una década trabajando en conjunto con varios

investigadores ahora lo pueda realizar una sola persona y en poco tiempo. Incluso en el año

2015, Zhang volvió a hacer un descubrimiento, la enzima Cpf1, presente en algunas bacterias

y con la característica de ser más pequeña y fácil de transportar a células maduras, además de

ser más eficaz que el Cas9 (Zhang et al., 2015).

Hoy en día CRISPR-Cas9 se considera un gran avance revolucionario, aunque aún

falte mucho por saber y hacer. Debido a esto han surgido varias preocupaciones en relación

con la ética y la bioseguridad. Incluso en algunos países se ha restringido el uso de estas

técnicas o se ha prohibido su uso en humanos. Aunque existen grandes posibilidades de

desarrollo de avances en salud a partir del entendimiento de las enfermedades humanas

mediante la edición de genes, las agencias de financiación y organismos reguladores de la

investigación son reacios a apoyar esta tecnología por motivos éticos y sociales (Munawar &

Ahmad, 2021).

El principal temor de las personas es el hecho de que no se establezcan límites en el

uso de esta nueva tecnología, ya que puede utilizarse para alterar el genoma, cuyo resultado

puede ser nefasto e irreversible (Artigas et al., 2021). Esta nueva tecnología necesita que la

sociedad reflexione sobre, si quiere realmente cambiar la información genética para modelar

cómo han de ser sus descendientes. Capella (2016) señala que “desde que J. Robert

Oppenheimer se diera cuenta de que la bomba atómica que había creado para proteger al

mundo podía igualmente acabar con él, los científicos responsables de un descubrimiento no

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habían vuelto a tener la misma sensación de estar bajo sospecha por el uso que hagan con él”

(p. 225). Actualmente ocurre lo mismo con los descubridores de CRISPR-Cas9.

3.2.1. Componentes y mecanismo del sistema CRISPR/Cas

Basándose en el tipo de mecanismo molecular que emplean para el reconocimiento del

DNA y la forma en que se unen al mismo, los investigadores han logrado identificar seis tipos

distintos de sistemas CRISPR/Cas (I-VI) (Makarova et al., 2011). En nuestro caso solo nos

enfocaremos en el tipo II ya que es el más utilizado para realizar ediciones genéticas puesto

que, a diferencia de otros sistemas, este solo necesita de la enzima Cas9 (Mei et al., 2016). La

transcripción de los elementos del sistema CRISPR/Cas se realiza en una región promotora

localizada en el locus donde están codificados dichos elementos. Posteriormente se encuentra

la región CRISPR, compuesta por los elementos repetidos y de los espaciadores, estos últimos

encargados de codificar moléculas de RNA cortas (30-40 pares de bases) denominadas RNA

CRISPR (crRNA) las cuales guían a la proteína Cas a su sitio blanco. Por último, tenemos a los

genes encargados de la codificación de las proteínas Cas (Figura 2) (Chávez, 2020).

Figura 2. Fases del sistema inmune adaptativo bacteriano CRISPR/Cas.

Fuente: Modificado de Jiang & Marraffini, 2015.

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 En el caso de la proteína Cas9, el reconocimiento y escisión del DNA diana es guiado

por el sgRNA. Según Riveros et al. (2020), el sgRNA se forma por la unión de dos RNA:

crRNA y tracrRNA y forman un complejo con la proteína Cas9. Esta enzima posee los dominios

catalíticos RuvC y HNH, además del dominio de interacción con el PAM. Ambos dominios

catalíticos le permiten realizar dos cortes de doble hebra.

De acuerdo con Khan et al. (2018), para todos los tipos de sistema CRISPR/Cas el

mecanismo general de acción se divide en tres etapas: 1) adaptación, 2) expresión y maduración

e 3) interferencia.

4. METODOLOGÍA

En el presente proyecto se realizó una búsqueda bibliográfica exhaustiva de los estudios

publicados en distintas bases de datos como “Scopus”, “Google Scholar” y “Medline”. Además,

se revisaron varias revistas científicas de gran impacto internacional y prestigio tales como

“Science”, “Nature” y “Science direct”, y artículos con información importante proporcionados

por miembros del equipo de editores de la plataforma “SciElo”.

La metodología empleada en este estudio corresponde la realizada por un equipo de

investigadores liderado por Jennifer Doudna de la Universidad de California en Berkeley y

Emmanuelle Charpentier de la Universidad de Umea en el año 2012, el mismo que se basó en

implementar el complejo CRISPR-Cas para aplicarlo como herramienta biotecnológica para la

edición "programable" de genomas, que se pudiera cortar de manera específica una cadena de

ADN in vitro con fines terapéuticos (Jinek et al., 2012). Para esto fué necesario que los

investigadores diseñaran un protocolo con tres pasos básicos. El primero consiste en el diseño

y síntesis de una molécula de ARN de una solo hebra, conocida con el nombre de ARN guía,

la cual tiene la capacidad de unirse a la enzima Cas9, y cumple con las mismas características

moleculares de las secuencias CRISPR, es decir, que es capaz de reconocer y unirse a una

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secuencia específica del ADN o un gen que se quiera editar o corregir. Cuando el ARN guía ya

se encuentra unido al Cas9, se avanza al segundo paso en el cual se procede a introducir in vitro

el complejo CRISPR-Cas9 a la célula que se va a tratar, y una vez dentro, el complejo

reconocerá la posición exacta del genoma donde la enzima Cas9 debe cortar (Castillo, 2016).

Como tercer paso se da inicio a la activación de los mecanismos de reparación de la

célula, como consecuencia del corte que realizó la endonucleasa Cas9, esta acción puede

ocasionar la pérdida o adición de información genética en la región del genoma que se desea

editar. Las consecuencias podrían ser la inactivación del gen o un mal funcionamiento de la

proteína que codifica. Dado que se busca reemplazar las mutaciones cancerígenas, al último

paso se le pueden incorporar algunos cambios, que consisten en adicionar una molécula de

ADN molde homóloga de la región que se quiere editar y que esté libre de mutaciones

cancerígenas. Al activar el sistema de reparación por recombinación homóloga, el fragmento

de ADN previamente reconocido y tratado por el complejo CRISPR-Cas9 es reemplazado

(Gebler et al., 2016).

5. RESULTADOS

Los estudios en genética y biotecnología frente al cáncer presentaron a CRISPR-Cas9

como una excelente herramienta de edición genética, sin embargo, ciertas limitaciones en la

presente investigación requieren de una minuciosa atención y análisis.

Dentro de las investigaciones realizadas se advierte un riesgo latente en cuanto a la

rotura de doble hebra (DSB), misma que en malas prácticas mostraron deleciones equivocas

que no sean de interés científico aplicativo y que puedan resultar en cromotripsis lo que

incrementa las probabilidades de desarrollo de una pérdida de supresores tumorales alterando

así a la función normal de la célula (Katti et al.,2022).

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 El primer informe clínico que usó CRISPR para la terapia del cáncer se dio en un

Hospital de China, de la Universidad de Sichuan en Chengdu en 2016. En esta investigación de

fase I , no aleatorizado (NCT02793856), se evaluó la integridad de las células T modificadas

ex vivo con proteína de muerte celular programada 1 (PD-1) en el tratamiento del cáncer de

pulmón de células,. El regulador del punto de control inmunitario PD-1 es un receptor de células

T responsable de la inhibición de la activación de las células T, lo que regula la tolerancia

inmunitaria y disminuye las reacciones autoinmunes, pero también permite el escape

inmunitario de los cánceres. Los anticuerpos que neutralizan PD-1 o su ligando PD-L1 se

utilizaron con éxito para el tratamiento de cánceres de pulmón, entre otros. Los pacientes

inscritos en el ensayo de edición de genes brindan linfocitos de sangre periférica y la

deleción de PD-1 de las células T mediante CRISPR/Cas9. Los linfocitos editados se

seleccionan, expanden y posteriormente se vuelven a inocular a los pacientes. Se han registrado

otros cuatro ensayos que aplican el mismo concepto de inactivación de PD-1 para el tratamiento

de otros tipos de cáncer, incluido el cáncer de próstata, vejiga, esófago y células renales (Tabla

3). (Zhan et al., 2019)

Tabla 3. Ensayos clínicos apoyados en la inactivaciòn de PD-1

identificador Condición Fase Tratamiento

NCT03081715 Cáncer de esófago Yo Células T knockout para PD-1
NCT02863913 Cáncer de vejiga yo Células T knockout para PD-1
NCT02867345 Cáncer de próstata refractario yo Células T knockout para PD-1
a hormonas
NCT02867332 Carcinoma de células renales yo Células T knockout para PD-1
NCT02793856 Cáncer de pulmón de células yo Células T knockout para PD-1
no pequeñas
NCT03044743 Neoplasias malignas en yo/yo PD-1 nocaut EBV-CTL
estadio avanzado positivas
para EBV
NCT03166878 Linfoma/leucemia de células yo/yo CRISPR-Cas9 editó células CAR-T
B dirigidas a CD19

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NCT03057912 Neoplasia intraepitelial
cervical relacionada con el
VPH
NCT03399448 Mieloma múltiple, sarcoma
sinovial, liposarcoma
mixoide/de células redondas,
melanoma
NCT03398967 Linfoma/leucemia de células
B Cas9 dirigidas a CD19 y CD20 o
yo Gel CRISPR/Cas9-sg HPV E6/E7
para interrumpir el ADN del VPH
yo Células T autólogas dirigidas al
antígeno tumoral NY-ESO-1, editadas
con CRISPR-Cas9 para interrumpir
TCRα, TCRβ y PD-1 endógenos
(Células T NYCE)
yo/yo Células CAR-T editadas con CRISPR-
CD22

Fuente: www.clinicaltrials.gov

Así mismo gracias a los estudios que se han realizado junto a la nanotecnología se ha

logrado la inducción del ciclo celular y la muerte celular de líneas celulares de cáncer in vitro,

esto se logró gracias a la edición mediante CRISPR-CAS9 de un gen específico (sgPLK1 -

cLNP)

Para dar paso a la edición terapéutica del genoma en el cáncer, tras evaluar líneas de

células cancerosas de dos cánceres agresivos y difíciles de tratar: la línea de células 005 y OV8;

una línea celular de adenocarcinoma de ovario seroso de alto grado que es altamente resistente

a los medicamentos y metastatiza para formar ascitis. La incubación in vitro de GBM 005 u

OV8 con sgPLK1, pero no con sgGFP, los cLNP interrumpieron eficientemente el gen PLK1,

provocando una edición genómica del 84 y el 91 %, respectivamente (Figura 3) . La

interrupción de PLK1 también provocó fuertemente la detención del ciclo celular G2 -M 48

horas después del tratamiento y redujo la viabilidad celular 96 horas después del tratamiento en

5 -veces en GBM 005 y 10 veces en OV8, respectivamente. De manera similar, la tinción de

DAPI y/o anexina V aumentó después de la incubación con sgPLK1, pero no con sgGFP-cLNP.

Por lo tanto, sgPLK1-cLNP interrumpió de manera eficiente el gen objetivo y provocó la

detención del ciclo celular y la muerte de GBM 005 y OV8 in vitro (Rosenblum et al., 2020).

15
 Figura 3. Edición del gen PLK1

Fuente: https://www.science.org/doi/full/10.1126/sciadv.abc9450

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 6. BIBLIOGRAFÍA:

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