METODO GENERAL PARA ESTUDIO DE CARBOHIDRATOS

REACCIÓN DEL ÁCIDO PERYÓDICO DE SCHIFF (MÉTODO DE P.A.S)

Reactivo Schiff Reduce el grupo cromóforo (grupo quinoide) de la p – rosanilina (colorante
trifeniltriaminometano) ,fácilmente por sulfito de sodio (HSO3Na) y por SO2. Molécula
colorante pasa de básica a ácida.
Objetivo PAS + Mostrar glucógenos y sus derivados: Glucógeno, glucoproteínas, mucina neutra,
glucolípidos, glucocálix, glándulas mucosas.
Fijador Rutina: formol
ideal: fijadores alcohólicos (ácido acético – alcohol, Bouin)
Fundamento P.A.S

1. acido periódico:
forma grupos
aldehído

2. Schiff: detecta
grupos aldehidos

Controles L. testigo: digestión con amilasa salival que degradan el almidón, glucogeno y maltosa
L. patron: intestino
RESULTADOS: P.A.S. positivas de color rojo magenta, núcleos de color azul (se usa H-E al inicio)
USOS Histoplasmosis, candidiasis, Leucemia aguda mieloblástica

METODO DIFERENCIAL PARA ESTUDIO DE CARBOHIDRATOS

Coloración histoquímica

COLORACIÓN DE CARMÍN DE BEST

SOLUCION Denominado grana cochinilla, rojo natural 4. Se obtiene de hembras desecadas del
CARMIN Dactylopius coccus costa (cochinilla).
OBJETIVO Mostrar glucógenos.
FIJADOR Rutina: formol
ideal: fijadores alcohólicos (ácido acético alcohol, Bouin), xq el carbo es insoluble en alchol
FUNDAMENTO coloración empírico
CONTROLES L. testigo: digestión con amilasa salival  que degradan el almidón, glucogeno y maltosa
RESULTADOS glucógeno: rojo; la lámina digerida con amilasa salival:no coloración, núcleos: azul
USOS Histoplasmosis, candidiasis,
COLORACIÓN HISTOQUIMICA:

Colorantes catiónicos para glucosaminoglicanos ácidos

Posee amino azúcares; tienen carga negativa, fuertemente ácidos, viscoso,

MÉTODO DEL AZUL ALCIANO (Alcian Blue)

SOLUCION Diferenciadora: sulfatados a ph 0.5-1 de solución y a Ph2.5 glucosaminoglucanos acidos
OBJETIVO glucosaminoglicanos ácidos sulfatados y glucosaminoglicanos ácidos no sulfatados
FIJADOR Rutina: formol
ideal: Carnoy (alcoholico)
FUNDAMENTO azul Alciano colorante que pertenece al grupo de ftalocianinas o pigmentos pirrólicos,
con principio coloreador es la ftalocianina de cobre.
CONTROLES L. patrón: glucosaminoglicanos ácidos traquea; glucosaminoglicanos neutros, mucosa
gástrica
RESULTADOS glucosaminoglicanos ácidos sulfatados: azul verdoso a ph1
glucosaminoglicanos ácidos no sulfatados y sulfatados (p.e sialomucinas): azul verdoso
USOS mastocitos

Coloración metacromática para glucosaminoglicanos ácidos sulfatados

color en el tejido (rojo violáceo o rojo) diferente al color del

colorante (azul) empleado.

METACROMASIA con Azul de metileno

SOLUCION Diferenciadora: sulfatados a ph 1.5 de solución y a Ph 3glucosaminoglucanos acidos
OBJETIVO glucosaminoglicanos ácidos sulfatados
FIJADOR Rutina: formol
CONTROLES L. patrón: glucosaminoglicanos ácidos traquea
RESULTADOS metacromasia : azul por ejemplo núcleos
metacromasia : azul violáceo p.e glucosaminoglucanos ácidos no sulfatados a pH= 3
metacromasia : rojo violáceo p.e glucosaminoglucanos ácidos sulfatados a pH=1.5
metacromasia : rojo, por ejemplo hongos
USOS Mastocitos (mastocitoma)
 REACCIÓN HISTOQUIMICA
REACCIÓN DEL HIERRO COLOIDAL DE HALE
OBJETIVO glucosaminoglicanos ácidos
FIJADOR Rutina: formol
Ideal: base de dicromatos y los metálicos (como el subacetato de plomo)
FUNDAMENTO Los grupos aniónicos de los glucosaminoglicanos ácidos: radicales sulfatos (-SO4) y
carboxilo (-COOH), poseen gran afinidad por iones metálicos como el hierro, que está
en forma de hierro coloidal. Este hierro ligado así, es posteriormente reconocido por el
método de Perls (azul de Prusia)
CONTROLES L. patrón: glucosaminoglicanos ácidos traquea
RESULTADOS glucosaminoglicanos ácidos sulfatados y no sulfatados: azul turquesa intenso (azul de
Prusia)
USOS Criptococosis en cerebro

LECTINAS PARA MOLECULAS DE CARBOHIDRATOS

Proteínas o glicoproteínas de origen no inmune. Su enlace es específico y reversible y selectivo para carbohidratos

Panel de reacción de lectinas específicas en estudio de endometrio

lectina PNA evidenciada por reacción enzimática para peroxidasa en acumulación de CHO en
traquea. En colon se puede ver lectina-fluorocromo

Si L-fucosa es positivo, se tiene mal pronóstico para cáncer endocervical

 Demostración de carbohidratos

HISTOQUIMICA DE ACIDOS NUCLEICOS

Azúcar Desoxirribosa o ribosa
Nucleósido Base Nitrogenada Purinas: Adenina Guanina
CONFORMACIÓ
Pirimidinas: citosina, timina, uracilo
N
Ácido
Fosfórico

METODO HISTOQUIMICO ESPECÍFICO PARA ADN

REACCIÓN FEULGEN
SOLUCION Usa Schiff. Y acido clorhidrico (hidrolisis)
OBJETIVO Ácido Desoxirribonucleico
FIJADOR Rutina: formol, cortes por congelación
Ideal: líquidos a base de alcohol y ácido acético, el fijador de Carnoy, Zenker
FUNDAMENTO formación de grupos aldehídos -CHO (con distancia 1 a 1.1 nm) es por acción de
1°.-Hidrólisis ácida hidrólisis ácida suave con HCl 1 N que libera bases purínicas del ADN con la. El segundo
2°.- Schiff color paso es el reconocimiento de estos grupos por el reactivo de Schiff
magenta
CONTROLES L. blanco
RESULTADOS ácido desoxirribonucleico: color rojo púrpura y el citoplasma de color verde. Intensidad
de color proporcional a la concentración de sustancia.
 COLORACIÓN DEL VERDE DE METILO PIRONINA (Unna-Pappenhein)
OBJETIVO Ácido desoxirribonucleico y ácido ribonucleico
FIJADOR Rutina: formol, cortes por congelación
Ideal: Carnoy
FUNDAMENTO Tanto al verde de metilo (un trifenil metano) como la pironina (un xanteno), son
colorantes básicos y varían según el pH de la solución colorante. A pH 9, la pironina
tiene poca actividad y solo colorea el verde de metilo. A pH de 4,8 se produce una
coloración selectiva, el verde de metilo colorea ADN mientras que la pironina tiñe al
ARN.
CONTROLES lámina testigo: sometidas a digestión enzimática (DNAasa y RNAasa)
RESULTADOS ácido desoxirribonucleico: núcleo se observa verde
ácido ribonucleico: ergastoplasma se observa de color rojo a rosado

HISTOQUIMICA DE AMILOIDES
Proteína patológica, Fibrillas no ramificadas cruzada con plegamiento lo que le
da apariencia polarscópica
 REACCIÓN CON ROJO CONGO
SOLUCION Recién preparado el Congo es mejor
OBJETIVO Demostración de Amiloide
FIJADOR Rutina: formol (disminuye la tinción, ya que los grupos oxidrilos del amiloide y los grupos
aldehídos del formol interactúan formando acetales y hemiacetales)
Ideal:alcoholicos
FUNDAMENT Este colorante diazoico se dispone paralelamente a las fibrillas de amiloide, luego sus
O grupos amino laterales se une por puentes de hidrógeno a los grupos oxidrilos de las
fibrillas del amiloide.
CONTROLES
RESULTADOS luz convencional: amiloide varían de color naranja a rojo (también hongos, f de
celulosa,etc)
luz polarizada: amiloide birrefringencia verde, dicroísmo (también hongos, f de
celulosa,etc)
Observacion: con permanganato de potasio puede diferenciar Amiloidosis Primaria (Amarilla) de
Amiloidosis Secundaria (Negativo al color Amarillo).

 Si se usa coloración metacromática: el cristal violeta presenta metacromasia y su

medio de montaje es acuoso
 Reacción PAS para su componente P
 Método de la inmunoperoxidasa: posee anticuerpos específicos

HISTOQUIMICA DE LIPIDOS
 GRASAS NEUTRAS

SIMPLES
CERAS

LIPIDOS Ácido: Esfingomielina

GLUCOLIPIDOS
Neutros: Cerebrósidos Gangliósidos

COMPUESTOS Ácidos Fosfatídicos

Acetal fosfátidos
FOSFOLIPIDOS Cefalinas

Lecitinas

LIPOPROTEINAS

MÉTODO DE COLORACIÓN CON SUDAN III O IV

OBJETIVO grasas neutras
FIJADOR Frescos o fijados el fijador de elección es el líquido de Baker (Formol-calcio)
INCLUSION Polietilenglicol del Carbowax (hidrosoluble)
MICROTOMÍA congelación o por criostato
FUNDAMENTO diazocolorantes tipo Sudan son colorantes indiferentes con la propiedad de solubilizarse
fácilmente en lípidos, y disolverse en poco solventes orgánicos (alcohol, acetona). Cuando
colorantes en solución alcohólica enfrenta a grasa, el colorante difunde (difusión) hacia su
interior porque aquí su grado de disolución es mayor, dando color. Simple fenómeno físico.
MONTAJE Gelatina glicerinada (hidrosoluble)
RESULTADOS grasas neutras se observan de color naranja a rojo
USOS Músculos con grasa

MÉTODO DE SUDÁN BLACK B (SUDAN NEGRO)

OBJETIVO Demostrar la presencia de fosfolípidos
FIJADOR Rutina: congelación o cristato
Ideal: Liquido de Baker (Formol-calcio)
INCLUSION Polietilenglicol del Carbowax (hidrosoluble)
MICROTOMÍA congelación o por criostato
FUNDAMENTO diazocolorantes tipo Sudan son colorantes indiferentes con la propiedad de solubilizarse
fácilmente en lípidos, y disolverse en poco solventes orgánicos (alcohol, acetona,
Etilenglicol, Trietilfosfato). Cuando colorantes en solución alcohólica enfrenta a grasa, el
colorante difunde (difusión) hacia su interior porque aquí su grado de disolución es mayor,
dando color. Simple fenómeno físico.
MONTAJE Gelatina glicerinada (hidrosoluble)
RESULTADOS fosfolípidos : color negro y los núcleos: color rojo
USOS Mielina, etc
 HISTOQUIMICA DE COMPONENTES INORGANICOS

C, H, O, N 96
% DEL PESO
CORPORAL

Rx
Quelación Coloraciones
químicas

Conversión
Sustitución

MÉTODO DE PERLS (Azul de Prusia)

OBJETIVO Demostración de hierro trivalente (bajo forma de hemosiderina, porque ferritina es poca
concentración). Hay hierro heminico=ferroso (Fe2) de animal y el vegetal Fe3
FIJADOR Rutina: formol
Ideal: formalina neutra al 10%
MICROTOMÍA Secciones de parafina
FUNDAMENTO El hierro que se encuentra almacenado en las células unido a proteínas, es liberado por la
acción del ácido clorhídrico; este hierro trivalente (no ligado al grupo hemo) enfrenta al
ferrocianuro de potasio o de sodio y forma in situ un complejo fuertemente coloreado de
azul turquesa, el ferrocianuro férrico; este precipita como sustancia amorfa o
microgranulosa que es atraído electrostáticamente por ciertas estructuras citoplasmáticas.
RESULTADOS hierro trivalente: azul turquesa (azul de Prusia)
OBSERVACIÓN Hemosiderina: forma parcialmente desnaturalizada de ferritina que se aglomera con
facilidad como unos gránulos pardo-amarillentos. Normal en bazo, médula ósea, higado
 MÉTODO DE VON KOSSA (Rx de sustitución)
OBJETIVO Demostración de depósitos insolubles de calcio por sustitución
FIJADOR Rutina: formol
Ideal: alcoholicos
MICROTOMÍA Secciones de parafina
FUNDAMENTO Este método demuestra la presencia de fosfatos y carbonatos insolubles, que son de calcio,
es un método específico para este elemento. Se basa en el reemplazo de la sal cálcica del
tejido (método de sustitución) por una sal de plata. Luego esta plata es reconocida por
reducción a plata metálica negra.
RESULTADOS Calcio: color negro o marrón oscuro
OBSERVACIÓN Cloruro de Oro puede acentuar la coloración
USOS En calcificaciones patológicas como: Distrofias, metastásicas y calcinosis

Para la demostración de Cobre se puede usar ácido rubeánico