Wuolah Free 5 OMGvegetales

5-OMGvegetales.
pdf
biotec99
Mejora Genética
3º Grado en Biotecnología
Facultad de Ciencias
Universidad de Cádiz
Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
Tema 5: Organismos vegetales modificados genéticamente
1 INTRODUCCIÓN
Desde la aparición de la agricultura la sociedad se centró en la selección de plantas con el
objetivo de:
-Aumentar el rendimiento en alimentos
-Obtención de medicinas, colorantes, especias…
-Mejorar semillas
-Cruzamientos para la obtención de plantas híbridas
En el siglo XX, aparecieron las técnicas que empleaban ADN recombinante, dando lugar a la
ingeniería genética. La ingeniería genética permite el acceso y la manipulación directa de los
genes. Generalmente sirve para introducir en una planta genes procedentes de otras especies

vegetales, animales, microorganismos y virus.
Una planta transgénica posee un gen ajeno o exógeno, llamado transgén, que se introduce en
ella a nivel de laboratorio.
Los organismos transgénicos u organismos genéticamente modificados (OGM) son seres vivos a los
cuales se incorpora uno o más genes de otras especies, con la finalidad de conferirles
determinadas características que no poseían antes.
¿Cómo se crea una planta transgénica?
Se introduce un ADN foráneo en el genoma de sus células, el cual se expresa y confiere a la
planta un carácter o varios caracteres nuevos.
2 ETAPAS PARA LA FORMACIÓN DE UNA PLANTA TRANSGÉNICA

1. Identificar y extraer el gen de interés
2. Construcción de un transgén
3. Clonación del transgén en un vector
4. Introducción en el ADN del organismo al que se quiere transferir
5. Obtención de un individuo completo, es decir, un transgénico, con la nueva característica
2.1 EXTRACCIÓN DEL DNA DONANTE

Consiste en el aislamiento mediante PCR o enzimas de restricción del gen, su secuencia de ADN,
que codifica para la proteína que se desea expresar en la planta transgénica.
2.2 CONSTRUCCIÓN DE UN TRANSGÉN

Una vez extraído el ADN donante e identificado el gen de interés, se procede a la construcción
de un transgén, llamado cassette. Es la parte más importante del proceso, ya que el cassete
contiene todo lo necesario para que la transgénesis funcione.
El cassette contiene desde secuencias para controlar los mecanismos de integración en la célula
huésped hasta instrucciones para indicar en qué tejido debe expresarse el transgén, mediante
promotores específicos, para saber en qué cantidad debe expresare y cómo, es decir, si debe
expresarse de forma continua o constitutivamente, o solo en ciertos momentos del desarrollo de la
planta, en estados de estrés, etc.
a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-3986939
La parte más importante del cassete es el segmento de ADN que contiene la secuencia del gen
aislado de interés que se desea introducir en un organismo diferente. El resto de los elementos
principales son:
-Promotor
-Marcadores: selección y reporter
-Gen de terminación

Las secuencias de control y auxiliares se colocan flanqueando el gen de interés para poder
seguirle la pista, estos son los marcadores, y para conseguir su expresión en el lugar y momento
adecuado, para ello tenemos los promotores y las secuencias intensificadores y de terminación.
Los promotores inician la transcripción y controlan la expresión. La expresión del gen puede
controlarse en diferentes puntos:
-Expresión en toda la planta o solo en ciertos tejidos
-Expresión constitutiva o inducible por estímulos externos
-Expresión fuerte o débil, largo o corta
-Quiméricos con secuencias que refuerza su acción
Los genes reporter permiten visualizar la transcripción de la construcción, mediante diferentes
características que aportan una vez se expresa el transgén, como luminiscencia o coloración azul.
El cassette se coloca en un plásmido apropiado para su manejo y transferencia, que a su vez lleva
integrado uno o más genes marcadores. La presencia de dobles marcadores tiene como objetivo
poder seguir la pista por separado a las bacterias que llevan el plásmido y a las que, además,
llevan el gen que queremos ubicar en el cromosoma de la planta.
Los marcadores más usados son los de resistencia a antibióticos o herbicidas y los de luminiscencia.
**Diferencia entre gen reporter y gen marcador**
Los genes reporter son aquellos cuya expresión produce un fenotipo coloreado permitiendo ver
qué células o tejidos han incorporado la construcción, de esta forma no se tiene que esperar el
desarrollo de la planta adulta para ver si posee o no la construcción y podremos ver qué células
o tejidos tienen y expresan el transgén.
Los genes marcadores son genes de resistencia a antibióticos o componentes tóxicos para la
bacteria o planta, por lo que permiten seleccionar solo aquellas bacterias o plantas que han
asimilado la construcción, pero no se visualiza la expresión de esta.
Descarga la app de Wuolah desde tu store favorita

2.3 INTEGRACIÓN DEL TRANSGÉN EN UN VECTOR APROPIADO
Los pasos para llevar a cabo esta etapa son:
-Cortar un plásmido con la misma enzima de restricción
-Hibridar ambas moléculas, la del transgén o gen donante con el plásmido
-Estabilizar los extremos pegados con una ligasa
2.4 TRANSFERENCIA DE ADN Y OBTENCIÓN DE PLANTAS TRANSGÉNICAS

La transformación genética vegetal es el proceso de cambio del fenotipo de un organismo a través
de la introducción de ADN foráneo al genoma.
La mayoría de las técnicas parten del aislamiento de células, tejidos y órganos de plantas, su
transformación y el crecimiento de estos bajo condiciones in vitro.
2.5 CLASIFICACIÓN GENERAL DE TÉCNICAS DE TRANSFERENCIA DE ADN
2.5.1 Sistemas de transferencia de ADN basados en vectores biológicos

a. Transformación con Agrobacterium

Agrobacterium presenta 3 características que la hacen un caso único entre procariotas:
1. -Transfiere e integra un fragmento de ADN a células vegetales
2. -Los genes de este ADN, aún procediendo de una bacteria, son reconocidos por la planta
y se expresan
3. -Posee genes codificadores de las enzimas necesarias para metabolizar opinas. Estos
genes se encuentran en el plásmido Ti
Las dos especies más importantes de Agrobacterium son A. tumefaciens y A. rhizogenes.
i. Agrobacterium tumefaciens
Es una bacteria del suelo Gram negativa, que infecta a las plantas en puntos donde estas tienen
heridas y producen la enfermedad de las agallas en la corona.
La corona es la zona de transición entre la raíz y el tallo y las gallas son protuberancias tumorales
que se producen en los lugares de infección.
Hay un tipo de parasitismo que ocurre entre A. tumefaciens y muchas dicotiledóneas, en el que un
plásmido de la bacteria lleva algunos genes que se introducen en la planta y hace que esta
genere productos útiles para la bacteria. Como consecuencia de esta infección, se origina en la
planta el llamado tumor de la corona.
La transferencia genética basa en el plásmido Ti ha sido y es idónea para plantas dicotiledóneas.
Sin embargo, no tiene el mismo éxito en monocotiledóneas vegetales de mayor interés agrícola

como el trigo, el maíz, el arroz y el centeno.
El problema paree radicar en la dificultad de cultivar células de plantas monocotiledóneas en
general, y detectar células transformadas en particular, y no en una incompatibilidad biológica
más profunda.
-Monocotiledóneas: gramíneas, palmeras, azucenas, ajos, cebollas, lirios, orquídeas ..
-Dicotiledóneas: Leguminosas, Rosáceas, Rutáceas (cítricos)
PLÁSMIDO Ti
Una pequeña parte de la población de Agrobacterium que vive en el suelo alberga el plásmido
Ti, inductor de tumores.
El tamaño de este plásmido es de 150-200kb, de las cuales 20-23kb constituyen el T-DNA, es
decir, el ADN transferido que se integra en varios lugares del genoma de la planta huésped
aparentemente al azar.
Agrobacterium transfiere el ADN-t o ADN de transferencia al genoma de las células vegetales.
La integración y expresión de ciertos genes del ADN-T, que son oncogenes, hace que las células
transformadas se dividan y proliferen sin control y se formen los tumores.
El ADN-T induce la síntesis de unos compuestos raros nitrogenados, llamados opinas. Esto se lleva
a cabo mediante la enzima opina-sintetasa, codificada por el propio ADN-T y utilizando
aminoácidos básicos como sustrato.

El ADN-T está delimitado por repeticiones de 24 pb conocidas como bordes derecho e izquiero
del T-DNA.

Cuando se inserta en el genoma de la planta, se recortan estos extremos. El corte en el extremo
derecho del ADN-T es preciso y constante, pero el izquierdo puede variar en 100 nucleótidos.
El borde derecho es necesario para transferir e integrar el ADN al genoma de la planta. El DNA-
T que es integrado en el genoma de la planta tiene una unión precisa que posee 1-2pb del borde
derecho, pero la unión izquierda varía y puede tener hasta 100pb menos que la repetición
izquierda.
El plásmido Ti tiene dos tipos de genes:

a) Genes oncogénicos  síntesis de fitohormonas
a. Codifican enzimas presentes en la síntesis de auxinas y citoquininas responsables
de la formación de tumores.
b. Estas enzimas desestabilizan el equilibrio hormonal de la célula e inducen su
proliferación indiferenciada en la zona de herida.
b) Genes para la producción de opinas
a. Las opinas son aminoácidos particulares con esqueletos carbonados. Estos son
únicamente aprovechados por la bacteria como fuente vital de C y N. No se
producen en las células de las plantas que no estén infectadas.
→ Los plásmidos más estudiados son los Ti que sintetizan la nopalina sintetasa “nos”
o la octapina sintetasa “ocs”.
Luego encontramos la región vir que está formada por genes ubicados en una región de 35kb
del plásmido Ti fuera de la región del T-DNA. Estos genes son un conjunto de operones, estando
estructurados 25 genes en 7 operones, de forma que regulan la expresión de otros genes. Estos
operones de la región vir intervienen en la ruptura, transporte e integración del T-DNA.
Por otra parte, como en todo plásmido, encontramos un origen de replicación ori. Finalmente
encontramos el operón tra, con 21 genes implicados en la transferencia por conjugación.
Los promotores de los genes correspondientes a estas enzimas son de tipo eucariótico y también
lo son las señales de poliadenilación que se encuentran en los extremos 3’ de estos genes. Esto
indica que probablemente tengan origen eucariótico y que hayan quedado atrapados en el

plásmido.
En resumen, el plásmido Ti se encuentra formado por:
 Zona ADN-T: con un borde derecho, un borde izquierdo y genes que codifican
para fitohormonas como auxinas y citoquininas y para opinas.
 Operón Tra: 21 genes para la transferencia por conjugación
 Zona de catabolismo de opinas
 Origen de replicación
 Región vir: 25 genes en 7 operones que participan en la ruptura, transporte e
integración del T-DNA.
¿Cómo ocurre la transferencia del ADN-T?
Los componentes genéticos de Agrobacterium que son necesarios para la inefcción y transferencia
del ADN a las células vegetales son:
1. T-DNA
2. Región de virulencia o región vir
3. Genes de virulencia chv localizados en el cromosoma bacteriano
Las etapas de transferencia de este ADN-T son las siguientes:
1) Reconocimiento Agrobacterium-célula vegetal mediante los genes de virulencia (chv) en el
cromosoma bacteriano
2) Liberación de compuestos fenólicos por parte de la célula vegetal
3) El gen Vir A se expresa de forma constitutiva y la proteína Vir A es activada por los
compuestos fenólicos que libera la célula vegetal y así activa al gen Vir G.
4) La proteína Vir G activa otros genes de la región Vir.
5) Las proteínas VirD1 y VirD2 actúan conjuntamente para unir una endonucleasa y liberar
la cadena del ADN-T.
6) Luego se une la proteína VirE al T-DNA y se forma el complejo T que protege al DNA de
la degradación.

7) Proteínas codificadas en VirB y VirD4 forman un canal que posibilita la transferencia.
8) Las proteínas VirD2 y VirE2 permiten el reconocimiento molecular para le ingreso del T-
DNA al núcleo y luego se produce la integración al genoma vegetal.
El ADN de cadena sencilla se convierte en ADN de doble cadena, lo que parece que ocurre en la
célula receptora.
Es muy importante tener en cuenta que cualquier ADN entre los bordes derecho e izquierdo será
transferido al ADN de la célula vegetal.

Ventajas e inconvenientes del plásmido Ti
Las ventajas que presentan son:

 Los genes del T-DNA están flanqueados por señales 5’ y 3’, que permiten su expresión y
funcionamiento en células vegetales, aún siendo un plásmido bacteriano
 Sólo son necesarias las secuencias de los bordes de T-DNA apra la transformación y la
integración en la célula vegetal, de forma que cualquier secuencia de ADN comprendida
entre estos bordes será transferida al genoma de la planta.
Los inconvenientes que presentan son:

 Los genes onc tienen que ser eliminados para evitar tejido tumoral y regenerar plantas
normales.

 Sin tumores, las células transformadas son fenotípicamente indistinguibles de las células
normales, por lo que es necesario usar marcadores que permitan seleccionar las células
transformadas.
 Deben eliminarse los genes que codifican las opinas, ya que la planta desvía parte de
sus recursos para sintetizar estos compuestos y la producción final obtenida es menor.
 Los plásmidos Ti son grandes para los experimentos de recombinación de ADN, pudiendo
tener hasta más de 20kb, por lo que los fragmentos de ADN que no son necesarios para
la clonación se eliminan y se produce el desarme del plásmido Ti.
SISTEMAS DE VECTORES DERIVADOS DEL PLÁSMIDO Ti
Están formados por los siguientes componentes:
1) Un gen marcador seleccionable, como la neomicina fosfotransferasa, que confiere
resistencia a la kanamicina a las células vegetales transformadas.
2) Un origen de replicación que permita al plásmido replicarse en E. coli. En algunos vectores
también se ha añadido un origen de replicación que funcione en A. tumefaciens.

3) Secuencia del borde derecho del T-DNA como mínimo, aunque algunos vectores también
incluyen la izquierda.
4) Polylinker para facilitar la inserción del gen clonado.
5) Gen marcador bacteriano para seleccionar las células de las bacterias que han
incorporado el vector.
6) El gen o genes de interés y promotores necesarios para su expresión en la planta.
La adición de estos elementos es lo que se conoce con el nombre de armado del nuevo plásmido.
Entre los sistemas de vectores derivados del plásmido Ti encontramos:
 Sistema de vector binario: Los nuevos genes son clonados en un plásmido que contiene T-
DNA no oncogénico y este plásmido es posteriormente introducido en una variedad de
Agrobacterium que posee un plásmido Ti con una región vir intacta pero que carece de
T-DNA.
 Sistema de vector cointegrado: Se introducen nuevos genes en un plásmido Ti no oncogénico
mediante recombinación homóloga.
En cualquiera de los dos casos, el ADN de interés primero se clona en E. coli y posteriormente se
transfiere a Agrobacterium por conjugación o electroporación.
En resumen, en el sistema de vector binario se usan dos plásmidos “complementarios” entre ellos,
uno básicamente con el transgén y otro con elementos para la integración en planta, pero ambos
vectores separados. El otro sistema es el de vectores cointegrados , donde se fusionan dos
plásmidos para dar lugar a uno solo de gran tamaño.
El vector binario está formado por orígenes de replicación para E. coli como para A. tumefaciens,
o en su defecto, un origen de replicación de amplio rango, y también posee un gen marcador
seleccionable tanto para E. coli como para A.tumefaciens. Tanto el marcador como los genes que
se desean expresar en la plantan van insertados entre los bordes derecho e izquierdo.
Este vector binario contiene el plásmido Ti llamado ayudante o helper que contiene los genes vir
necesarios para que la transferencia la genoma vegetal pueda ocurrir y también contiene el gen
de interés y el gen marcador seleccionable entre los bordes del T-DNA.
Es el sistema más usado actualmente y todos los pasos de clonaje se realizan en E. coli antes de
que el vector sea introducido en A. tumefaciens.
Por otra parte, el sistema de vector cointegrado está formado por dos vectores o plásmidos. El
primer plásmido es el vector cointegrado, que posee un origen replicable de E. coli, un marcador
seleccionable de E. coli y A. tumefaciens, otro marcador seleccionable para las células vegetales,
un gen de interés, el borde derecho del T-DNA y una secuencia de ADN homologa respecto al
segmento del plásmido Ti desarmado. El segundo plásmido es el plásmido desarmado Ti, que
posee el borde izquiero del T-DNA, el cluster de genes vir, un origen de replicación para A
tumefaciens y carece del bordee derecho del T-DNA y de los genes onc.
El vector cointegrado tiene que integrarse en este plásmido Ti desarmado para formar un
plásmido Ti recombinante. De esta forma se origina un único vector de gran tamaño, lo que
dificulta su manipulación in vitro.

TÉCNICAS DE TRANSFORMACIÓN CON AGROBACTREIUM
Hay dos técnicas principales:
→ Discos de hoja
El procedimiento es el siguiente:
1. El disco de hoja es el explanto
2. Inocular en un cultivo de Agrobacterium sumergiendo los explantos en el cultivo
bacteriano.
3. Extraer explantos y transferir a un medio de cultivo de tejidos vegetales durante varios
días  Cocultivo
4. Traspasar explantos a un medio de regeneración de brotes: hormonas adecuadas para
inducir la formación de dichos brotes (auxinas y citoquininas); antibiótico para controlar
el crecimiento de Agrobacterium; antibiótico de selección, kanamicina, que permite
regenerar plántulas enteras sólo a partir de las células transformadas.
5. Las plántulas regeneradas se escinden de los explantos y se transfieren a otro medio de
cultivo con el fin de inducir enraizamiento.
6. Cuando las plantas desarrollan raíces, se cultivan en macetas y aclimatan.

→ Infiltración al vacío
1. Puesta a punto en Arabipdosis
2. La planta erguida se sumerge en un cultivo fresco de Agrobacterium y se establece el
vacío.
3. La bacteria es succionada por la planta y se transforman las células germinales de los
órganos florales en desarrollo.
4. Las plantas transgénicas se seleccionan de las semillas resultantes de la autopolinización
de la planta tratada.
i. Agrobacterium rhizogenes
Es una bacteria patógena Gram negativa que produce la enfermedad de “raíces en cabellera”
o “hairy roots”, que produce la proliferación de raíces en el sitio de la infección por transferencia
de un T-DNA del plásmido Ri al genoma de la planta.
El T-DNA contiene genes que codifican para la síntesis de opinas y otros que a su vez codifican
para la síntesis de hormonas vegetales y su metabolismo, y otros genes que estimulan la división
celular en el sitio de infección.
A. rhizogenes se utiliza como vehículo para la transformación genética de plantas. Este sistema
vector cuenta con dos T-DNA:
-El de la bacteria con su plásmido Ri intacto, sin desarmar.
-Se introduce además otro plásmido donde se encuentran los genes quiméricos entre

bordes de T-DNA.
La región vir del plásmido Ri reconoce, procesa y transfiere a las células vegetales ambos T-DNA.
A partir de las raíces, se pueden regenerar plantas enteras, que también tendrán integrado en
todas sus células el T-DNA con los genes quiméricos.
El cultivo de las raíces vegetales transformadas por A. rhizogenes se hace en biorreactores y se
obtiene más cantidad del producto deseado, es decir, de biomasa.
Hay ciertos compuestos farmacológicos producidos por el cultivo de estas raíces, como el taxol,
usado como anticancerígeno.
Los inconvenientes que presenta este microorganismo es que:
-Su gama de huéspedes es más reducida que la de A. tumefaciens
-La expresión de los genes del T-DNA del plásmido Ri en las células vegetales da
fenotipos aberrantes en la parte aérea de muchas plantas
b. Vectores virales
La principal ventaja de usar vectores virales como sistema de transferencia de ADN es que pueden
infectar de forma sistémica plantas completas y. por tanto, permiten investigar la expresión génica
en los diferentes tejidos. Presenta varios inconvenientes como:
-No se integran en el genoma del huésped y la transmisión a través de la línea germinal,
por tanto, no es posible
-Existe un rango de hospedadores limitado
-Hay problemas de empaquetamiento según el tamaño del inserto en vectores virales
Por todo esto, los vectores virales no han satisfecho las expectativas sobre su uso en el campo de
la ingeniería genética de plantas.

Estos vectores virales se clasifican en virus de ADN y virus de ARN, aunque en general los virus de
ARN tienen su ciclo en el citoplasma mientras que los de ADN tienen la replicación asociada al
núcleo.
Los virus de ADN tienen mecanismos de regulación similares a los de la planta huésped y los de
ARN tienen mecanismos de regulación generalmente diferentes, por lo que son poco factibles.
Virus de ADN
Constituyen solo el 1-2% de los virus vegetales conocidos. Pueden subdividirse en dos grupos:
-Caulimovirus de doble cadena
-Geminivirus de cadena sencilla
De los caulimovirus, el más caracterizado es el virus del mosaico de la coliflor. Este virus posee un
genoma con DNA de doble cadena y un rango limitado de hospedadores, normalmente crucíferas
como la coliflor y el nabo.
Los geniminivirus presentan restricción al aumento de tamaño de su genoma. Hay genes foráneos
que aumentan el tamaño del genoma, por lo que los virus quiméricos tienden a eliminar este ADN
en un intento de recuperar su tamaño original.
2.5.2 Sistemas de transferencia directa de ADN

La transferencia génica medida por Agrobacterium no resulta efectiva en monocotiledóneas, como
los principales cereales (arroz, maíz y trigo). Por ello, se han desarrollado otros procedimientos

alternativos para la transferencia génica:
1) Bombardeo con microproyectiles  Transferencia por biobalística
2) Transferencia de ADN a protoplastos
3) Transferencia por microinyección
4) Macroinyección
5) Transferencia mediada por cationes divalentes y/o electroporación
6) Ultrasonidos
7) Transformación génica mediante láser
8) Transformación mediada por polen
2.5.2.1 Transformación mediante cañón de partículas: Biobalística

En un proyectil se sitúa una carga de microbolitas de oro o tungsteno que han absorbido el ADN
a transferir y estas bolitas penetran en las células y núcleos.
Es el método alternativo al plásmido Ti más importante para transferir DNA a plantas.
Actualmente el disparo se hace con helio a presión y una vez dentro de la célula, el DNA se separa
de las partículas y, en algunos casos, es integrado dentro del genoma de las plantas.
Esta técnica es empleada para transferir ADN exógeno a:
→ Suspensiones celulares de plantas
→ Cultivo de callos y todo tipo de explantos
→ Tejidos meristemáticos
→ Embriones inmaduros y polen
La transformación es más eficaz cuando se usa ADN linear en vez de circular, ya que los plásmidos
superiores a 10kB pueden ser fragmentados durante el bombardeo. Los inconvenientes que
representa son:
1) Algunos tejidos oponen una resistencia natural a la penetración de las partículas, dada
por cutículas endurecidas, paredes celulares lignificados o superficies vellosas.

2) Hay una baja relación entre el total de células sometidas al bombardeo y el número de
células que logran incorporar de manera permanente la información genética transferida.
2.5.2.2 Transferencia de ADN a protoplastos

El protoplasto es la parte de la célula vegetal que esta delimitada e incluida dentro de la pared
celular y que puede ser aislada por eliminación mecánica o enzimática de la pared celular. Es
capaz de regenerar la pared celular, crecer y dividirse.
La pared celular es la principal barrea para la captación de ADN, por ello la transferencia del
material genético se realiza a protoplastos.
Mediante métodos físicos y químicos se crean poros en la membrana y por mecanismos de
endocitosis se permitirá el paso de moléculas a través de la membrana.
El método químico más efectivo es el polietilenglicol o PEG en combinación con cationes divalentes
Ca++ o Mg++. Este PEG origina una alta presión osmótica y se crean vesículas endocíticas que
incorporan el complejo catión/DNA.

La alternativa al tratamiento con PEG para la transformación de protoplastos es la
electroporación. Los protoplastos se sumergen en un tampón con una gran conductividad y que
contiene el ADN. Se aplican pulsos cortos de alto voltaje que pasa a través de la solución,
causando la aparición de poros de forma reversible en la membrana, que van a permitir la
entrada de moléculas externas.
La técnica ha sido exitosa en petunias, maíz, trigo y arroz, pero en otras muchas especies de
cereales no se han podido obtener plantas transgénicas a partir de ellos.
Los inconvenientes de esta técnica es que en muchas especies la generación de plantas a partir
de cultivos de protoplastos no es eficiente.
2.5.2.3 Microinyección (saber ventajas/inconvenientes)

Es el método de transferencia genética más usado, sobre todo en mamíferos. Es uno de los dos
métodos, junto a la transformación mediada por láser, que permite la transferencia génica a una
célula concreta.
Este método está menos desarrollado en plantas por la presencia de la pared celular, que dificulta
la propia microinyección y la visualización del núcleo.
En plantas, la presencia de grandes vacuolas degrada por digestión el ADN si es transportado a
su interior antes de llegar al núcleo.
La microinyección en protoplastos en tabaco y alfalfa con plásmido de Agrobacterium es la más
usada.
2.5.2.4 Macroinyección
Es la transformación mediante la inyección de DNA en el interior de cavidades que contienen
meristemos u órganos sexuales de la planta.
Se produce un mayor y más íntimo contacto entre el DNA y la línea germinal.
La principal ventaja es que puede ser utilizada en todas las plantas sin necesidad de la
preparación de cultivos celulares o tisulares. El único inconveniente es que hay que utilizar una
gran cantidad de plásmido.
No hay evidencias de que sea una técnica reproducible para la transformación en todo tipo de
plantas.
2.5.2.5 Electroporación
Consiste en la aplicación de pulsos eléctricos cortos y de alto voltaje, creando poros temporales
para permitir la entrada de macromoléculas presentes en la solución extracelular.
Las células se sumergen en un tampón con plásmidos de DNA que incorporan al interior celular
mediante una transformación transitoria o estable.
Es un método sencillo pero su aplicación a protoplastos es difícil, como consecuencia de las
limitaciones técnicas que supone el cultivo y la regeneración de protoplastos.
Es más usado en polen y microsporas, que si son adecuadas para la electroporación y permiten
métodos de obtención de plantas transgénicas como la inducción de androgénesis in vitro y la
utilización del polen transgénico para la fertilización normal de las plantas.
2.5.2.6 Ultrasonidos
Se emplea ultrasonido con frecuencias superiores a 20 KHz, para generar permeabilidad en las
membranas, creando poros transitorios.
Las ventajas que presenta son:
• Simplicidad, velocidad y bajo coste.
• Versatilidad: transformación protoplastos, células en suspensión y tejidos.
El único inconveniente es que pueden causar daño en las células a causa de la elevada
temperatura que produce, lo que limita el uso de esta técnica.

2.5.2.7 Transformación génica mediante láser
Consiste en crear agujeros de dimensiones definidas en la pared y en la membrana celular,
permitiendo la entrada pasiva de DNA a través de ellos al interior de la célula.
Resulta muy útil para manipular componentes celulares y orgánulos, porque el rayo puede ser
dirigido directamente a esta área seleccionada.
La principal ventaja que presenta es que debido a la elevada precisión del método se puede
elegir exactamente las células que van a ser tratadas.
Presenta inconvenientes como el elevado coste del equipo y la gran habilidad necesaria para
manejar el láser.
2.5.2.8 Transformación mediada por polen

El objetivo del método es que el DNA sea transportado durante la fecundación al interior de los
óvulos, pues en este estado el DNA tiene más posibilidades de ser integrado.
En 1986, se consiguió obtener la transformación de maíz por polinización.
La magnetofección es el uso de partículas magnéticas portadoras de transgén a polen.
3 REGULACIÓN DE PRODUCTOS TRANSGÉNICOS

La normativa establece que se indique la presencia de OMG en un producto cuando al menos el
0.9% de uno de sus ingredientes sea OMG o proceda de un OMG.
Los alimentos antes de ser autorizados pasan por un proceso antes de llegar al consumidor, en el
que se les evalúa y se analizan varios puntos como los genes insertados y expresados, la toxicidad
y alergenicidad potencial, el impacto medioambiental, la composición e inocuidad, las
características nutricionales…

¿Pueden las bacterias transgénicas causar cáncer? Pueden aparecer bacterias transgénicas que
pudieran escapar del laboratorio e instalarse en el intestino humano e integrarse en algún
cromosoma de alguna célula haciéndola cancerosa.
El destino del ADN de un alimento transgénico que entra en nuestro aparato digestivo es digerirlo
igual que la carne o el pan. Al igual que la digestión de proteínas produce aminoácidos, el ADN,
transgénico o tradicional, se descompone en nucleótidos sin que ninguno lleva la marca de
“transgénico”.
 Principio de equivalencia sustancial
Consiste en admitir como equivalentes dos alimentos, uno de ellos el de partida y el otro su
“transgénico” cuando los análisis pertinentes indiquen, dentro de los márgenes estadísticamente
admisibles de variación, la igualdad de caracteres biológicos.
Significa que aquellos nuevos alimentos sustancialmente equivalentes a sus contrapartes naturales
no precisan de evaluaciones más rigurosas. Es decir que el alimento transgénico puede ser tratado
en lo que respecta a seguridad alimentaria igual que su homólogo convencional.
Esta analítica es criticada por los detractores, que imponen que la composición de los alimentos
va mucho más allá y no se conocen aquellos componentes infinitesimales que podrían tener un
papel vital en la prevención de graves enfermedades degenerativas.
También argumentan que la diferencia entre un alimento transgénico y su propio tradicional solo
radique en una toxina que produce el transgénico y que puede pasar inadvertida.

 Problemas frente a la resistencia adquirida a antibióticos
¿Puede ser que los genes de resistencia a antibióticos usados como marcadores en los vectores del
gen que queremos transferir puedan pasar de la planta transgénica a una bacteria cualquiera
que a su vez infecte el aparato digestivo humano? Esto se conoce como transferencia horizontal.
La probabilidad es nula y nunca se ha demostrado que esta pueda pasar.
También aspiramos e ingerimos a través del aire y alimentos bacterias que son un buen porcentaje
naturalmente resistentes a antibióticos, como lo son también parte de las que habitan nuestros
intestinos.
 Problemas sobre el impacto ambiental los plaguicidas y herbicidas

Si el agricultor siembra variedades transgénicas resistentes a plaguicidas o herbicidas, empleará
mayores dosis con consecuencias perjudiciales para el ambiente y para el hombre. Esto no es
consecuencia del producto transgénico si no de la falta de una buena práctica agrícola y un buen
control de la calidad.
También hay debate sobre el escape de genes de resistencia. Los detractores defienden que
plantas transgénicas que producen insecticidas podrían afectar además de las plagas a otros
insectos presentes en el medio e inofensivos. Esto daría lugar a un problema con el resto de los
animales implicados en la cadena trófica correspondiente al disminuir el alimento del resto de
alimentos.


Wuolah Free 5 OMGvegetales

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Wuolah Free 5 OMGvegetales

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

5-OMGvegetales.

Reservados todos los derechos.

Reservados todos los derechos.

2 ETAPAS PARA LA FORMACIÓN DE UNA PLANTA TRANSGÉNICA

2.1 EXTRACCIÓN DEL DNA DONANTE

2.2 CONSTRUCCIÓN DE UN TRANSGÉN

Reservados todos los derechos.

Descarga la app de Wuolah desde tu store favorita

Reservados todos los derechos.

2.5 CLASIFICACIÓN GENERAL DE TÉCNICAS DE TRANSFERENCIA DE ADN

2.5.1 Sistemas de transferencia de ADN basados en vectores biológicos

Descarga la app de Wuolah desde tu store favorita

Reservados todos los derechos.

Descarga la app de Wuolah desde tu store favorita

Reservados todos los derechos.

El plásmido Ti tiene dos tipos de genes:

Reservados todos los derechos.

Descarga la app de Wuolah desde tu store favorita

Descarga la app de Wuolah desde tu store favorita

Reservados todos los derechos.

Los inconvenientes que presentan son:

Descarga la app de Wuolah desde tu store favorita

Reservados todos los derechos.

Reservados todos los derechos.

Descarga la app de Wuolah desde tu store favorita

Reservados todos los derechos.

Descarga la app de Wuolah desde tu store favorita

2.5.2 Sistemas de transferencia directa de ADN

Reservados todos los derechos.

2.5.2.1 Transformación mediante cañón de partículas: Biobalística

Descarga la app de Wuolah desde tu store favorita

2.5.2.2 Transferencia de ADN a protoplastos

Reservados todos los derechos.

2.5.2.3 Microinyección (saber ventajas/inconvenientes)

Reservados todos los derechos.

2.5.2.8 Transformación mediada por polen

3 REGULACIÓN DE PRODUCTOS TRANSGÉNICOS

Descarga la app de Wuolah desde tu store favorita

 Principio de equivalencia sustancial

Reservados todos los derechos.

 Problemas sobre el impacto ambiental los plaguicidas y herbicidas

Descarga la app de Wuolah desde tu store favorita

También podría gustarte