Facultad de ciencias

Escuela Profesional de Química

Permeabilidad de Membrana

Laboratorio de Bioquímica II

De La Cruz Tupa, Salvador

Cusco, Perú

2021
 Efectos de la Composición de los Lípidos sobre la Permeabilidad de una Monocapa
Lipidica.

Objetivo

- Construir una membrana o monocapa lipídica artificial y comprobar su permeabilidad

Fundamento teórico

La composición lipídica de una membrana tiene un efecto considerable en su permeabilidad.

En este experimento se usará una monocapa lipídica como modelo de membrana. Cuando se
coloca butanol sobre el agua se forma dos fases distintas; si adicionamos lípidos anfipáticos
estos se situarán en la interfase. La parte polar de la molécula se asociará con la fase acuosa
superior y la región hidrofóbica con la fase orgánica permeabilidad selectiva que resulta muy
importante por varias razones:

❖ Proteger la integridad de la célula

❖ Mantener las condiciones químicas de forma que el metabolismo celular pueda
llevarse a cabo
❖ Coordinar la actividad del conjunto de células que forman un organismo
pluricelular.
❖ Las membranas celulares son selectivamente permeables o semipermeables, pues
permiten el paso de determinadas moléculas o iones y restringen el de otros:
❖ Algunas moléculas no polares de pequeño tamaño (como el oxígeno y el nitrógeno
molecular), moléculas polares sin carga (como el agua o el dióxido de carbono) o
solubles en lípidos (ácidos grasos y alcoholes) pueden atravesar la membrana
libremente.
❖ Las moléculas con carga, como los ácidos orgánicos, aminoácidos y otros iones
(H+, Na+, Cl-, K+, etc.), no pueden atravesar la membrana y tienen que utilizar
proteínas de transporte específicas.

Ilustración 1 Permeabilidad celular

El azul de metileno es una molécula altamente coloreada y su paso através de la interfase
puede observarse fácilmente. A diferencias de las membranas biológicas este modelo no
contiene proteínas.
Este experimento proporcionará una información útil puesto que la difusión pasiva depende
de la composición de los lípidos de la membrana
Materiales y Reactivos
❖ Tubos de ensayo.
❖ Baguetas.
❖ Gradillas.
❖ Balanza analítica.
❖ Espectrofotómetro.
❖ Fosfolípidos (lecitina).
❖ Colesterol.
❖ Ácidos grasos neutros (ácido oleico).
❖ Solvente organico 1-butanol.
❖ Azul de metileno en butanol (0.25 g/L).
Parte Experimental
1. 3 tubos de ensayo diferentes, disolver 50 mg de colesterol, lecitina,aceite oliva en 1.00 mL
de butanol.
2. En otro tubo de ensayo disolver 25mg de colesterol y 25 mg de fosfolípido en 1.00 mL de
butanol.
3. Disolver una pequeña cantidad de azul de metileno en butanol.
4. Colocar 5.00 mL de agua en 5 tubos de ensayo.
5. Agregar los lípidos disueltos en butanol.
6. Agregue cuidadosamente por las paredes del tubo 2.00 mL de azul de metileno disuelto en
butanol.
7. Deje los tubos en reposo a temperatura ambiente por 1 – 2 horas.
Cálculos y Resultados
Blanco Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Muestra Muestra
1 2 3 4 5 1 2
Agua(d)ml 3,00 2,95 2,90 2,85 2,80 2,75

Sol. 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25

Estándar
0,25g/L
Solución 3,00 3,00
problema
Absorbancia 0 0,11 0,16 0,23 0,29 0,35 0,21 0,27
(665nm)
 Sol. Azul de
metileno en
butanol Absorbancia
25mg/dL (665nm)

0.05 0.11
0.1 0.16
0.15 0.23
0.2 0.29
0.25 0.35

Sol. Azul de metileno en butanol

25mg/dL vs Absorbancia (665nm)
0.4
0.35
0.3 y = 1.22x + 0.045
ABSORBANCIA

R² = 0.9981
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
SOL. AZUL DE METILENO EN BUTANOL

Muestra 1: Absorbancia= 0,21

𝑌=1,22𝑋+0,045
0,21=1,22 𝑋+0,045
𝑿=𝟎,𝟏𝟒𝒈/ 𝑳 𝒅𝒆 𝒂𝒛𝒖𝒍 𝒅𝒆 𝒎𝒆𝒕𝒊𝒍𝒆𝒏𝒐 𝒆𝒏 𝒃𝒖𝒕𝒂𝒏𝒐𝒍

Muestra 2: Absorbancia = 0,27

𝑌=1,22𝑋+0,045
0,27=1,22 𝑋+0,045
𝑿=𝟎,𝟏𝟖 𝒈/𝑳 𝒅𝒆 𝒂𝒛𝒖𝒍 𝒅𝒆 𝒎𝒆𝒕𝒊𝒍𝒆𝒏𝒐 𝒆𝒏 𝒃𝒖𝒕𝒂𝒏𝒐𝒍

2.Método fijo o método del factor

𝑚𝑔
𝐴𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑡𝑖𝑙𝑒𝑛𝑜 𝑒𝑛 𝑏𝑢𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 ( )
𝑑𝐿
 Muestra 1:
𝐴𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑡𝑖𝑙𝑒𝑛𝑜 𝑒𝑛 𝑏𝑢𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 (𝑔/𝐿) =0,21 𝑥0,25𝑔/𝐿/0,23
𝑨𝒛𝒖𝒍 𝒅𝒆 𝒎𝒆𝒕𝒊𝒍𝒆𝒏𝒐 𝒆𝒏 𝒃𝒖𝒕𝒂𝒏𝒐𝒍 (𝒈/𝑳) = 𝟎,𝟐𝟑 𝒈/𝑳
Muestra 2:
𝐴𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑡𝑖𝑙𝑒𝑛𝑜 𝑒𝑛 𝑏𝑢𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 (𝑔𝐿)=0,27 𝑥0,25𝑔/𝐿/0,23
𝑨𝒛𝒖𝒍 𝒅𝒆 𝒎𝒆𝒕𝒊𝒍𝒆𝒏𝒐 𝒆𝒏 𝒃𝒖𝒕𝒂𝒏𝒐𝒍 (𝒈/𝑳) = 𝟎,𝟐𝟗 𝒈/𝑳

Sol. Azul de
Absorbancia
metileno en
(665nm)
butanol 0,25g

0.0125 0.11
0.025 0.16
0.0375 0.23
0.05 0.29
0.0625 0.35

Cuarva de Calibracion Absor. Azul Bu.

0.4
0.35 y = 4.88x + 0.045
R² = 0.9981
0.3
Absorbancia

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07
Sol. Azul de Metileno

1. Método gráfico: Convirtiendo a gramos los Volúmenes agregados

Muestra 1: Absorbancia = 0,21

𝑌=4,88𝑋+0,045 0,21=4,88𝑋+0,045

𝑋=0,034𝑔 𝑑𝑒 𝑎𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑡𝑖𝑙𝑒𝑛𝑜 𝑒𝑛 𝑏𝑢𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙

 Muestra 2: Absorbancia = 0,27

𝑌=4,88𝑋+0,045
0,27=4,88𝑋+0,045
𝑋=0,046 𝑔 𝑑𝑒 𝑎𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑡𝑖𝑙𝑒𝑛𝑜 𝑒𝑛 𝑏𝑢𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙
Análisis e interpretación de datos
-Al observar los datos obtenidos de manera teórica la muestra de aceite obtiene un valor alto,
entonces podemos decir que hay mayor concentración de lípidos con respeto a los
fosfolípidos debido a la absortividad.

Conclusión
Se realizo los cálculos de manera teórica mediante su curva de calibración que el aceite de
oliva presenta una mayor concentración de lípidos con respecto a fosfolípidos. Por lo tanto,
se demostró que hay mayor concentración lipídica de la membrana de aceite de oliva.

Cuestionario
1. Explique el efecto de la composición de los lípidos sobre la permeabilidad de una
monocapa lipídica.
Los lípidos son compuestos que tienen partes hidrofílicas y hidrofobias por ente estos son
ligeramente solubles en diferentes solventes inorgánicos e orgánicos que se usan para su
identificación.
2. Compare los resultados obtenidos en los tubos que contienen membrana lipídica con
el blanco e interprete los resultados.
Hay obtener la curva de calibración y luego hacer los cálculos se observa mayores valores
con respecto al aceite de oliva, se confirma que el aceite de oliva tiene una mayor capacidad
de permeabilidad por su composición de lípidos en la membrana a comparación de la solución
de fosfolípidos.