ABSORCION y ADSORCION DE ANTICUERPOS

INTRODUCCION:

ADSORCION: Cuando Acs se unen a una célula blanco

ABSORCION: Cuando se remueven Acs de un suero

La absorción de Acs consiste en la extracción de los Acs de un suero, al permitirles la reacción con el Ag
específico presente en los GR intactos, GR formulados o estromas de GR.
Cuando los GR son separados del suero, el Ac permanece unido a ellos.
Los Acs pueden ser adsorvidos por células rojas in vivo o in vitro. Cuando se adsorven IgM al GR la
fase de sensibilización va seguida inmediatamente de una aglutinación, en cambio los Acs IgG solo
sensibilizan los GR en medio salino.

FUNDAMENTO:

Generalmente las técnicas de absorción se basan en remover o absorver Acs de un suero con GR
conocidos que no contengan Ags específicos contra ninguno de los Acs que se desea dejar en el suero y
en su posterior adsorción con GR conocidos que contengan Ags contra los Acs que se desea separar de
aquel para su posterior estudio a través del test de AI y/o identificación de Acs..

Cuando en un suero existe una aglutinina fría y un Ac IgG de tipo caliente, para absorver el Ac incompleto
(IgG) se empleará una temperatura de 37°C y GR apropiados, para absorver las aglutininas frías se usara
GR O y una temperatura de 4°C. Se debe tener en cuenta que los GR O que se usan para retirar las
aglutininas frías no contengan el Ag corresponde al Ac incompleto caliente, ya que un Ac IgG potente
reaccionar tanto a temperaturas bajas como a la temperatura optima de 37°C.
Para absorver Acs fríos (auto Acs fríos), puede emplearse suero y GR del propio paciente, cuando el titulo
de aglutininas es elevado generalmente hay que efectuar absorciones repetidas y en este caso se deben
lavar los GR varias veces en solución salina a 37°C. Mezclar un volumen de ese paquete de GR libres de
Acs con un volumen de suero y someter la mezcla a baja temperatura por 1-2 hrs., después de ese
tiempo probar el suero con GR apropiados a 4°C para asegurarse que la absorción fue completa.

El paciente con AHA o aquellos sensibilizados a muchos sistemas sanguíneos constituye un gran
problema en cuanto a la determinación e identificación de sus iso y autoAcs hecho que es importante si se
desea encontrarle sangre compatible, la que será transfundida.

UTILIDAD DE LA ABSORCION:

1.- Extraer anti A y anti B del sistema ABO de un suero que será usado como reactivo.

2.- Extraer autoaglutininas frías que podrían enmascarar la presencia de un isoAc específico.

3.- Como etapa preliminar en la preparación de eluados o eluídos.

4.- Aislar Acs de una mezcla para su posterior identificación. Ej. en pacientes con AHA se presentan
combinaciones de Acs, también en pacientes sensibilizados a varios sistemas sanguíneos
(politransfundidos) o embarazadas.

5.- Estudio de Ags por su habilidad para extraer Acs de un suero.

6.- Verificar la monoespecificidad de un suero.

SUERO B ABSORVIDO (Anti A1)

Esta basado en el hecho de que en el suero de personas del grupo B existirían 2 Acs: anti A y anti A1.
Los GR A1 y A1B reaccionan tanto con el anti A como con el anti A1, mientras que los GR A2 y los A2B
reaccionan solamente con el anti A.
El suero B absorvido (o anti A absorvido) se prepara con suero B que ha sido absorvido con GR A2.

PRECAUCIONES:

1. La temperatura a usar dependerá del Ac a absorver: IgG, IgM ya sea de tipo caliente o frío.

2. Incubación: El estado de equilibrio de la reacción se alcanza después de 30 - 60 min., a menos que se

use Liss.

3. Los GR a emplear deben ser preferentemente homocigotos.

4. Los GR a usar deben ser concentrados al máximo después de ser lavados rigurosamente, el PBS o el
suero fisiológico que quede después del ultimo lavado debe eliminarse completamente, se recomienda
colocar un trozo de papel filtro sobre los GR.

5. La centrifugación final es necesaria para evitar la disociación Ag-Ac. Se recomienda centrifugar a la

temperatura de incubación.

6. Cuando se adsorven IgG a los GR, realizar CD para verificar la adsorción.

7. Pretratando los GR con enzimas proteolíticas se puede facilitar la fijación de Acs, sin embargo tener en
cuenta que algunos Ags son destruidos por algunas enzimas por Ej.: M, N , Fya.

8. La relación suero-células depende de la afinidad y titulo del Ac a absover (lo usual es 1:1). Si los Acs
son muy débiles, el volumen de suero será mayor que el de GR, si es muy potente, convendrá diluir el
suero.

9. La absorción mejorara si el área de contacto entre células/ suero es amplia. Por esto se debe mezclar
constantemente o dejar reposar el tubo inclinado o acostado.

10. Probar si en el sobrenadante esta aun el Ac, si es así repetir la operación empleando una nueva muestra
de los mismos GR.