Universidad Autónoma de Ciudad Juárez 

Instituto de Ciencias Biomédicas 

Departamento de Ciencias Químico-Biológicas 
Licenciatura en Química - Químico farmacéutico biólogo  
   

 
   
Laboratorio de Microbiología I
Grupo A-L1 

 
Practica 2. Técnicas de inoculación y aislamiento de
bacterias.
  
 

Introducción
La microbiología es el estudio de los microrganismos, uni o pluricelulares y es fundamental
para el desarrollo de las ciencias, pues sin esto, muchas de los medicamentos, comidas e
incluso tratamientos no existirían. Como ya sabemos para poder lograr este estudio es
fundamental el microscopio, del cual existen diferentes tipos para, precisamente, facilitar el
estudio. Los microorganismos tienen una gran sencillez en su estructura y organización, los
hay sin estructura celular, como los virus, pero la mayoría de ellos son unicelulares, aunque
algunos son pluricelulares formados por varias células, las cuales apenas tienen diversidad
funcional (Olivas, E. 2017). Las bacterias son pertenecientes al dominio bacteria, antes
llamado eubacteria, son células procariotas que presentan una estructura formada por una
pared celular con peptidoglicano, el de algunas más grueso que el de otras, son sensibles a
antibióticos antibacterianos y presentan RNAr y RNAt diferentes a las archea y eukarya,
tiene apéndices, puede llegar a formar flagelos y pili, la pared celular, anteriormente
mencionada, forma parte de la envoltura, junto con una membrana plasmática y la capsula.
Dentro de la región citoplasmática contiene el genoma celular (ADN) y ribosomas, son
células pequeñas que miden de 1.1-1.5 µm de grosor y de 2-6 µm de largo (Angulo, A. et
al. 2012), se pueden encontrar a las bacterias se clasifican por sus formas y agrupaciones,
en la figura 1, se muestran algunas de las más comunes.
Figura 1. forma y agrupación de las bacterias más comunes.

Para el estudio de las bacterias es necesario crear cultivos, de donde se puedan desarrollar y
crecer lo suficiente tanto e tamaño como en población, además de eliminar la posibilidad de
que en la muestra que se tome haya más de un tipo de microorganismo y el estudio se
complique, por ello los cultivos también sirven para su aislamiento (Teleno, R. 2019). El
lugar donde crecen y se desarrollan los microrganismos es un medio donde se les provee
los nutrientes necesarios para aun crecimiento apropiado, a estos se les denomina medios de
cultivo, estos medios son ricos en proteínas para estimular el crecimiento de las colonias
bacterianas (Olivas, E. 2017). Existen diferentes tipos de medios de cultivo, las baces o
constituyentes más habituales para estos son:
 Agar: es un agente gelificante que se usa con la finalidad de dar solidez a los
medios de cultivo, un agar bacteriólogo está conformado principalmente por
polisacáridos obtenidos de algunas algas marinas. Un gel de agar contiene del 1 al
2%, es licuado a 100ºC y puede solidificar a los 40ºC, esto depende de su grado de
pureza.
 Extractos: La preparación de estos consiste en ciertos órganos o tejidos animales o
vegetales, son extraídos con agua y calor y son procesados hasta una forma final de
polvo o pasta. Los extractos más utilizados para los medios de cultivo son de carne,
levadura o de malta.
 Peptonas: Formado por mezclas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales
minerales obtenidos de digestiones enzimáticas.
 Fluidos corporales: Para mejoramiento del medio de cultivo, en ciertas ocasiones
se es necesario añadir algunas sustancias como sangre completa o desfibrada,
plasma o suero sanguíneo, esto para poder conseguir el aislamiento de las bacterias.
Los fluidos además de ayudar con el crecimiento del microorganismo, también
apoya con la neutralización de inhibidores de bacterias.
 Sistemas amortiguadores: Para mantener el pH dentro del rango optimo del
crecimiento bacteriano a veces, es necesario añadir algunos componentes al medio
de cultivo. Debido a que la mayoría de las bacterias son neutrófilos, se suelen
emplear sales del tipo de los fosfatos bisodicos ò bipotásicos u otras sustancias
como las peptonas para prevenir la desviación del pH.
 Agentes selectivos: La adición de determinadas sustancias a un medio de cultivo
puede convertirlo en selectivo. Así, por ejemplo, la adición de cristal violeta, sales
biliares, azida sódica, telurio potásico, antibióticos, etc., a la concentración
adecuada hará que actúen como agentes selectivos frene a determinados
microorganismos.
Tipos de medios de cultivo algunos de estos son:
 Medios generales: periten el crecimiento de una amplia variedad de
microorganismos
 Cultivos sintéticos: se conoce la composición química exacta de estos medios de
cultivo
 Medios de enriquecimiento: Estos medios de cultivo favorecen al crecimiento de
determinados microorganismos, sin llegar a inhibir el crecimiento de otros.
 Medios de cultivo complejos: en estos medios hay por lo menos un componente de
composición desconocido.
 Medios selectivos: estos permiten el crecimiento de determinados
macroorganismos, inhibiendo el crecimiento de otros microorganismos.
 Medios líquidos y sólidos: cualquier medio líquido se pueden transformar en
sólido, mediante la adición de agar, lo que significa que conservan la misma
fórmula química nutritiva.
 Medios con antibióticos: Los medios con antibióticos son inhibitorios para unos
organismos, permitiendo el aislamiento de otros, a partir de una población mixta
 Bacterias no cultivables: Como su nombre lo indica, las bacterias no cultivables no
se pueden cultivar en ninguno de los medios conocidos hasta ahora, tales como
Rickettsia, Chlamydia, Mycobacterium leprae y Treponema palidum
Objetivo
 Desarrollar las técnicas comunes de inoculación en medios de cultivo y las técnicas
de aislamiento. Comprensión del fundamento en cada caso.

Materiales y métodos
Lo que se realizó en esta práctica s es aislamiento de bacterias en un medio de cultivo
sólido. Se proporciono el agar nutritivo ya preparado, por lo que el inicio de la practica fue
el comenzar eligiendo una bacteria a cultivar, para después pasar a sembrar la bacteria en el
agar.
Se comienza con la instalación de la manguera de gas para el mechero, después de
encenderlo se esteriliza el asa, se coloca en la parte superior de la llama, donde el calor es
mas intenso, se deja hasta el rojo vivo, cuidando que toda el asa quede esterilizada, se aleja
del fuego para enfriar, siempre manteniendo en el área de esterilidad, después con la otra
mano, se abre el tubo donde se encuentra la muestra, se esteriliza la boca del recipiente y se
procede a tomar la muestra, vigilando que solo el alambre del asa entre, una vez tomada la
muestra, se vuelve a esterilizar la boca del recipiente y se cierra, todo esto se sigue
haciendo dentro del área de esterilidad. Teniendo la muestra en el asa, se toma la caja Petri
y con la misma mano y e un solo movimiento se abre la caja Petri y se comienza el estriado,
una vez hecho se cierra la caja y se vuelve a esterilizar el asa, hay que cuidar donde termina
el ultimo estriado. Cuando el asa este templada, se gira la caja Petri y se vuelve a abrir y del
ultimo estriado se toma y se realiza un nuevo estriado, repetimos este proceso dos veces
más, para el cuarto y último estriado solo harán tres líneas intentando terminar en el centro
de la caja Petri, recordando que todo este proceso se hace dentro del área de esterilidad. En
la figura 2 podemos ver una visualización del proceso.
Figura 2. Ejemplo del proceso de esterilización del asa y estriado.

Resultados y discusión
Tabla 1. Resultado de los cultivos de bacterias pasados las 72hrs.
Nombre de descripción del cultivo Fotografía
 bacteria

 Aislado chico
 Color blanco lechoso
 Opaco
Straphyloscocus
 No brilloso
aureus
 Bordes irregulares
definidos
 No presenta relieve

 Color amarillo
 Aislado chico
 Opaco
 No brilloso
Pseudomonas  Bordes irregulares y
aeroginosa definidos
 Pigmentación verde
 No presenta relieve
 Crecimiento hacia
abajo

 Colonias medianas
 Es de pigmentación
amarilla pero se torna
Serratia M. rosa algunas zonas
arscences  Opaco
 Bordes irregulares y
definidos
 Con relieve
  Colonias medianas
 No transparente
 Opaco
 No relieve
Basillus subtilis
 Colonias aisladas
 Bordes
medianamente
regulares

 No transparencia
 Opaca
 No relieve
 Pigmentcion entre
Escherichia coli
amarillo y blanco
lechoso
 Colonia grande
(máximo 1cm)

El estriado se puede realizar de diferentes maneras, hay distintas técnicas de estriado los
cuales favorecen de una mejor manera al tipo de cultivo o estudio que deseamos obtener.
En el caso de e estriado que se realizo es el estriado por cuadrantes, con la finalidad de
obtener una bacteria pura en el centro del cultivo. Como se puede observar en la taba 1, en
la bacteria de Straphyloscocus aureus el cultivo se presenta muy poco en el inicio, esto es
por falta de practica y técnica. Se considera que se tomo la muestra aun con el asa muy
caliente lo que hizo que las bacterias murieran, por ello la colonia de bacterias es diminuta
casi imperceptible. Caso contrario que podemos ver en el estriado de la bacteria
Escherichia coli, donde se distingue claramente el estriado y el crecimiento de las bacterias.
Un estriado adecuado es fundamental para el estudio de las bacterias, pues nos da mucha
información con respecto a su crecimiento y desarrollo.
Conclusión
Hecho lo anterior, se entiende a primer instancia la importancia de poder manejar las
técnicas del sembrado de un cultivo, pues con un mal cultivo no se puede hacer los
procesos pertinentes para el estudio de la bacteria, es importante entender la forma, los
tiempos y las posiciones en que se debe hacer el estriado, además de conocer el tipo de agar
que es mejor para nuestra bacteria. A grandes rasgos se puede decir que se cumplió el
objetivo, sin embargo, los resultados no fueron loes esperados.

Bibliografías
Clodynel, M. (2013). Siembra en estrías. https://es.slideshare.net/Maria_Clodynel/siembra-
en-estrias
García, Q., Ramírez, J., Ramos, F., Rangel, H., Rascón, L., Reyes, L., Ríos, S. (2014).
Técnicas y métodos de estriado en la caja y tubo (medios de cultivo).
http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com/2014/10/tecnicas-y-metodos-de-
estriado-en-caja.html
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO. [Archivo PDF].
https://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf
Taleno, R. (2019). MÉTODOS DE SIEMBRA. INTRODUCCIÓN PARA PODER
ESTUDIAR DEBIDAMENTE LOS MICROORGANISMOS, SE NECESITA COMO
REQUISITO PREVIO PODER CULTIVARLO EN CONDICIONES.
https://slideplayer.es/slide/16112040/
Olivas, E. (2017). MANUAL DE PRÁCTICAS: LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA.
[Archivo Word].