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RESEÑAS

SARS — COMENZANDO A
ENTENDER UN NUEVO VIRUS
Konrad Stadler*, Vega Masignani*, Markus Eickmann‡ , Stephan Becker‡,
Sergio Abrignani*, Hans-Dieter Klenk‡ y Rino Rappuoli*
La epidemia de 114 días del síndrome respiratorio agudo severo (SARS) arrasó 29 países, afectó
a 8.098 personas, dejó 774 muertos y casi paralizó la economía asiática. Las medidas de cuarentena
agresivas, posiblemente ayudadas por el aumento de las temperaturas del verano, terminaron con
éxito la primera erupción del SARS y proporcionaron al menos un descanso temporal, lo que nos
permite consolidar lo que hemos aprendido hasta ahora y planificar para el futuro. Aquí, revisamos la
genómica del coronavirus del SARS (SARS-CoV), su filogenia, estructura antigénica, respuesta inmune
y posibles intervenciones terapéuticas en caso de que la epidemia del SARS vuelva a estallar.

*IRIS, Chiron Srl, Via
Fiorentina 1, 53100 Siena,
Italia. ‡ Instituto de
Virología, Universidad de
Marburg, 35037 Marburg, Alemania.
Correspondencia a RR
e-mail:
rino_rappuoli@chiron.com
doi:10.1038/nrmicro775
Una nueva enfermedad infecciosa, conocida como síndrome
respiratorio agudo severo (SRAS), apareció en la provincia
de Guangdong, en el sur de China, en 2002. Se caracteriza
principalmente por síntomas similares a los de la gripe, como
fiebre alta que supera los 38 °C o 100,4 °F, mialgia , disnea
seca no productiva, linfopenia e infiltrado en la radiografía de
tórax. En el 38% de todos los casos, la neumonía resultante
condujo a problemas respiratorios agudos que requirieron
respiradores artificiales1 . La tasa de mortalidad general fue
de alrededor del 10 %, pero varió profundamente con la
edad; aunque el SRAS afectó a relativamente pocos niños y,
en general, pareció ser más leve en el grupo de edad
pediátrica, la tasa de mortalidad en los ancianos llegó al 50 %2–4 .de la OMS que había sido llamado a Hanoi, fue el primero
Aunque no se dispone de información precisa sobre el
origen preciso de la enfermedad, el Ministerio de Salud de
China notificó un brote de neumonía inexplicable a la
Organización Mundial de la Salud (OMS) el 11 de febrero de
2003. Durante el período comprendido entre el 16 de
noviembre de 2002 y el 9 de febrero de 2003 , 305 casos y
cinco muertes por neumonía atípica, que originalmente se
pensó que era causada por Chlamydia pneumoniae,
ocurrieron en la provincia de Guangdong , en el sur de
China5 . Un médico chino
que había estado tratando pacientes en Guangdong propagó
la infección fuera de China continental cuando viajó a Hong
Kong el 21 de febrero de 2003. Allí, mientras residía en el
noveno piso del Hotel Metropole, el paciente desarrolló
síntomas y fue
trasladado al hospital el 22 de febrero donde murió al día
siguiente. Posteriormente, diez huéspedes del hotel
infectados secundariamente (ocho del noveno piso y dos de
los pisos undécimo y catorce) abordaron aviones y llevaron
la infección a Singapur, Vietnam, Canadá y Estados Unidos,
convirtiendo al SARS en la primera epidemia transmitida por
viaje aéreo.
Cuando la epidemia finalmente disminuyó después de más
de 100 días, la OMS contabilizó un número acumulado de
8.098 casos probables de SARS y 774 muertes en todo el
mundo, en un área geográfica que abarcaba 29 países6 .
Carlo Urbani, un experto en enfermedades infecciosas
en darse cuenta de que el médico chino en Hong Kong
padecía una enfermedad previamente desconocida y alertó
a las autoridades. Tras una colaboración sin precedentes
entre laboratorios y científicos de todo el mundo, se aisló un
coronavirus no identificado previamente a partir de células
FRhK-4 y Vero E6 que se inocularon con muestras clínicas
(nasofaríngeas, orofaríngeas y de esputo) de pacientes1,7,8.
La asociación del virus con la enfermedad se confirmó
cuando los macacos que fueron inoculados con el virus
desarrollaron síntomas similares a los observados en casos
humanos de SARS9,10. Es probable que los científicos de la
Academia China de Ciencias Médicas Militares hayan
observado lo que parecían ser partículas de coronavirus en
una micrografía electrónica el 26 de febrero de 2003. Sin
embargo, con

RESEÑAS DE LA NATURALEZA | MICROBIOLOGÍA VOLUMEN 1 | DICIEMBRE 2003 | 209

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a b Proteína nucleocápside (N)

Glicoproteína
de membrana (M)

Proteína de pico (S)

Proteína de
envoltura (E)

100nm ARN

Figura 1 | Morfología del coronavirus del SARS. un | Micrografía electrónica del virus que se cultivó en células Vero (Imagen cortesía de la
Dra. L. Kolesnikova, Instituto de Virología, Marburg, Alemania). Grandes protuberancias en forma de maza que consisten en proteína de espiga
forman una corona en forma de corona que le da su nombre al virus. segundo | Representación esquemática del virus. Una bicapa lipídica que
comprende la proteína espiga, la glicoproteína de membrana y la proteína de la envoltura encubre la nucleocápside helicoidal, que consiste en la
proteína de la nucleocápside que está asociada con el ARN viral. En el caso de los coronavirus, la envoltura lipídica se deriva de las membranas intracelulares.

solo unas pocas muestras disponibles para el análisis, no se
sintieron lo suficientemente seguros como para desafiar a las
autoridades y no publicaron sus hallazgos.
El contacto cercano con pacientes muy enfermos facilita la
transmisión del virus de persona a persona; aparentemente, el
SARS-CoV se propaga en gotitas, pero su eficacia de infección
parece ser baja, con un índice de infectividad de aproximadamente
3 (REFS 11,12). En algunos casos, sin embargo, una sola persona
puede infectar a un gran número de personas pero, hasta el
momento, no existe una explicación satisfactoria para este llamado
fenómeno 'superpropagador'2 .
Se aisló un virus con una homología cercana al SARS-CoV
de civetas de palma y perros mapaches, que se consideran
manjares en el sur de China, lo que indica que el virus podría
haber saltado recientemente de estos mamíferos al hombre13.
Sin embargo, una segunda búsqueda realizada por otro grupo no
logró revelar ningún rastro de SARS-CoV en más de 60 especies
animales, incluidas 76 civetas de palma14 .
Aunque es poco probable, no se puede excluir formalmente la
posibilidad de que los humanos infectaran a estos animales con
SARS positivo. Mientras tanto, se han secuenciado más de 30
aislamientos diferentes de SARS-CoV, lo que con suerte nos
permitirá rastrear la cadena de transmisión hasta su origen.
La epidemia de SARS, que causó pánico global y un enorme
daño económico a la economía asiática, fue contenida
principalmente por medidas agresivas de cuarentena.
Factores benéficos adicionales podrían incluir la atenuación del
virus luego de un paso prolongado a través de la población
humana, o el inicio del verano, ya que las temperaturas más altas
generalmente reducen la incidencia de al menos algunas
infecciones respiratorias.
Un reservorio natural del virus podría servir como plataforma
de lanzamiento para otro brote de SARS durante la próxima
temporada de invierno y primavera. Sin embargo, si tenemos
suerte, la capacidad de este virus para cruzar la barrera de las
especies podría ser el resultado de una rara serie de eventos que
es poco probable que se repitan. Un estudio serológico
retrospectivo no detectó anticuerpos anti-SARS-CoV en un paciente normal. población,
codificadas por virus, a saber, las
lo que indica que este brote es la primera introducción de SARS-
CoV en la población humana. En la actualidad, las infecciones
accidentales de los investigadores que manipulan el patógeno
parecen representar el mayor riesgo de una nueva propagación
del virus, como ha demostrado un caso reciente en Singapur15.
Por ahora, la transmisión de esta enfermedad infecciosa emergente
se ha detenido, pero no hay información sobre cuándo, o si, el
SARS-CoV resurgirá en la población humana.
Los coronavirus y sus genomas Los
coronavirus recibieron su nombre por su apariencia similar a la
corona solis en el microscopio electrónico, que es causada por
los peplómeros en forma de maza que irradian hacia afuera desde
la envoltura viral (FIG. 1a). La cápside esférica contiene un
genoma de ARN de cadena positiva de aproximadamente 30 kb,
el más grande de su tipo. Los coronavirus se han subdividido en
tres grupos según sus propiedades serológicas y genéticas16. Su
amplia gama de huéspedes se extiende desde el hombre hasta el
pavo; donde típicamente se asocian con enfermedades
respiratorias, entéricas, hepáticas y del sistema nervioso central.
En el hombre, causan principalmente infecciones del tracto
respiratorio superior y son responsables de una gran proporción
de todos los resfriados comunes.
El análisis de secuencia reveló la organización del genoma
base 29,740 (aislado de FRA; GenBank acc.no. AY310120; ver
SARS coronavirus FRA en los enlaces en línea) del SARS-CoV
(FIG. 2) para mostrar los rasgos característicos de los coronavirus
17–20 ( FIG. 3). Los nucleótidos 1–72 contienen una secuencia
líder de ARN predicha que precede a una región no traducida
(UTR) que abarca 192 nucleótidos.
Dos marcos de lectura abiertos superpuestos (ORF1a y ORF1b),
que abarcan aproximadamente dos tercios del genoma (nucleótidos
265–21485), se encuentran aguas abajo de la UTR. Una lectura
traslacional mediante un mecanismo de cambio de marco
ribosómico ÿ1 permite la traducción de los marcos de lectura
superpuestos en una sola poliproteína20. Las proteinasas

210 | DICIEMBRE 2003 | VOLÚMEN 1 www.nature.com/reviews/micro

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Región de replicasa región estructural

Identidad de
aminoácidos 13,393 cambio de
marco ribosomal
0–30%
ORF1a ORF1b

31-40%
3a 8a norte

41–50% L
Nsp1 Nsp3 Nsp5 Nsp8 Nsp12 Nsp13 Nsp14 Nsp16 S mi METRO 6
Tracto
Nsp2 Nsp4 poli(A)
Nsp6 Nsp9 nsp15 3b 7b 9b
51–60%
Nsp7 Nsp10 7a 8b
PLpro nsp11 helicasa
61-70% Pico Membrana

3CLpro ARN polimerasa Sobre nucleocápside

Figura 2 | Estructura del genoma del coronavirus SARS. Las regiones estructurales y de replicasa se muestran junto con los productos de
escisión previstos en ORF1a y ORF1b. También se indican la posición de la secuencia líder (L), el tracto 3' poli(A) y el sitio de cambio de marco
ribosómico entre ORF1a y ORF1b. Cada caja representa un producto proteico (Nsp, proteína no estructural). Los colores indican el nivel de
identidad de aminoácidos con la proteína de mejor coincidencia de otros coronavirus (TABLA 2). Los genes accesorios del SARS-CoV son blancos.
Los círculos rellenos indican las posiciones de las nueve secuencias reguladoras de la transcripción (TRS) que son específicas del SARS-CoV
(5ÿACGAAC3ÿ).

La cisteína proteasa similar a la papaína (PLpro) y la cisteína
proteasa similar a la 3C (3CLpro), escinden la poliproteína en
polipéptidos individuales, que proporcionan todas las proteínas
necesarias para la replicación y la transcripción20,21 .
Mientras que los coronavirus del grupo 2 contienen dos
PLpros parálogos (PL1pro y PL2pro), solo uno se encuentra
en el ORF1a del genoma del SARS-CoV. ORF1b codifica
una helicasa con actividades de desenrollado dúplex de
ATPasa y ADN (y posiblemente también ARN), al menos
cuando se expresa en Escherichia coli 20. El análisis
computacional predijo que el extremo carboxi de ORF1b
codifica una metiltransferasa cap-1 de ARNm22. Alguno
se pueden hacer suposiciones sobre la función de las
proteínas restantes por analogía con otros coronavirus,
aunque nuestro conocimiento sobre las funciones biológicas
de estas proteínas también es incompleto (consulte la TABLA
1 para obtener información sobre las proteínas codificadas).
Junto con los factores del huésped, algunas de estas
proteínas podrían formar la maquinaria de replicación-
transcripción viral que está asociada con las estructuras
membranosas en las células infectadas23,24 . (Las
características peculiares del ciclo de replicación de los
coronavirus se describen en el CUADRO 1.) La parte 3'
restante del genoma codifica cuatro proteínas estructurales que están dispu

[UCU(C,A)AACU]
Grupo 1 L ORF1ab S 3a ME norte

HCoV-229E
tracto
poli(A)
3b

[UCUAAC]

Grupo 2 L ORF1ab 2a ÉL S 5a METRO norte

MHV
4
tracto
mi poli(A)

CU(U,G)AACA]

Grupo 3 L ORF1ab S 3a mi METRO 5a norte

IBV
tracto
poli(A)
3b 5b

[ACGAAC]
SARS-CoV L ORF1ab S 3a METRO 7a 8a norte

mi 6 tracto
poli(A)
3b 7b 8b 9b

Figura 3 | Comparación de las estructuras del genoma del coronavirus. Organización del genoma de coronavirus representantes del grupo
1 (coronavirus humano 229E, HCoV-229E), grupo 2 (virus de la hepatitis del ratón, MHV) y grupo 3 (virus de la bronquitis infecciosa aviar, IBV;
SARS-CoV). Los recuadros rojos representan los genes accesorios. Se indican las posiciones de la secuencia líder (L) y el tracto poli(A); los
círculos de diferentes colores representan secuencias reguladoras de la transcripción (TRS) específicas de grupo.

RESEÑAS DE LA NATURALEZA | MICROBIOLOGÍA VOLUMEN 1 | DICIEMBRE 2003 | 211

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coronavirus: S, proteína espiga; E, proteína de envoltura; METRO, Finalmente, en el extremo 3ÿ del genoma, un segundo 340-
glicoproteína de membrana; y N, proteína de nucleocápside. nucleótido UTR, que es seguido por un tracto poli(A),
Además, la región proteica estructural del fue encontrado. Esta UTR 3ÿ contiene un nucleótido de 32

El genoma del SARS-CoV contiene varios genes que codifican
proteínas no estructurales adicionales que se conocen como
'genes accesorios' (FIG. 3). Algunas de estas moléculas parecen
ser prescindible para la viabilidad del virus tanto in vitro
e in vivo; su eliminación crea virus atenuados25–27. Estos genes
accesorios difieren significativamente
entre los tres grupos de coronavirus, también están
denominados genes específicos de grupo. El SARS-CoV ha
ocho ORF predichos de función desconocida en este
región del genoma. Carece de la hemaglutinina
gen de la esterasa (HE), que está codificado por casi todos los
los virus del grupo 2.
motivo stem-loop II-like motif (s2m), que también tiene
reportado en astrovirus, en un rinovirus equino
y el virus de la bronquitis infecciosa aviar (IBV)28. un tipico
característica de los coronavirus es la presencia de una secuencia
reguladora de la transcripción (TRS) que es importante en
Transcripción y regulación de ARN (FIGS 2 y 3). Este
el motivo corto generalmente se encuentra en el extremo 3 ' del líder
RNA y, con algunas excepciones, precede a cada ORF29 traducido.
Cuando Thiel y sus colegas20 aislaron una
ARN genómico y ocho subgenómicos del FRA
y secuenciaron sus extremos 5ÿ , identificaron una secuencia
conservada (5ÿACGAAC3ÿ) que estaba ubicada en

Tabla 1 | Proteínas SARS-CoV predichas

Proteínas ORF SARS-CoV Longitud Posición en la poliproteína funcional y estructural
(aminoácidos) predicciones
Región de replicasa
ORF1a Nsp1 180 1M–180G ?

Nsp2 638 181A–818G ?

Nsp3 (PLpro) 1922 819A–2740G Proteasa de cisteína similar a la papaína: escisión de

Nsp1–Nsp4, adenosina difosfato-ribosa 1-fosfatasa
(ADRP), 2 TMD

Nsp4 500 2741K–3240Q 3 TMD

Nsp5 (3CLpro) 306 3241S–3546Q Escisión de proteasa de cisteína similar a 3C de

Nsp4–Nsp16

Nsp6 290 3547G–3836Q 5 TMD

Nsp7 83 3837S–3919Q ?

Nsp8 198 3920A–4117Q ?

Nsp9 113 4118N–4230Q ?

Nsp10 139 4231A–4369Q Dominio similar al factor de crecimiento

nsp11 13 4370S–4382V ?

ORF1b Nsp12 (RdRp) 932 4370S–5301Q ARN polimerasa dependiente de ARN

Nsp13 (Helicasa) 601 5302A–5902Q Helicasa, dominio de unión a zinc, NTPasa

nsp14 527 Exonucleasa 5903A–6429Q (homólogo de ExoN)

nsp15 346 6430S–6775Q EndoRNAse (homólogo de XendoU)

nsp16 298 6776A–7073N ARNm cap-1 metiltransferasa

región estructural
Proteína ORF2 Spike (S) 1255 1 TMD, ÿ12 sitios de N-glicosilación
¿ORF3a? 274 2 TMD, 1 sitio de N-glicosilación,
10 sitios de O-glicosilación
¿ORF3b? 154 ?

ORF4 Proteína de envoltura (E) 76 1 TMD, 2 sitios de N-glicosilación

Proteína de membrana ORF5 (M) 221 3 TMD, 1 sitio de N-glicosilación

¿ORF6? 63 1 DTM

¿ORF7a? 122 1 DTM

ORF7b? 44 1 DTM

¿ORF8a? 39 Asociado a membrana

¿ORF8b? 84 1 sitio de N-glicosilación

ORF9a Nucleocápsida (N) proteína 422

¿ORF9b? 98 1 sitio de O-glicosilación
Los análisis se basan en la secuencia del aislado SARS-CoV FRA (número de acceso de GenBank AY310120). Dominios transmembrana
(TMD) se predijeron utilizando el programa PSORT (el umbral es inferior a -2); los sitios de glicosilación se predijeron utilizando el servidor NetNGlyc
(ver NetNGlyc en los enlaces en línea). La información sobre las predicciones funcionales se ha tomado de REFS 20,33. Nsp, proteína no estructural.

212 | DICIEMBRE 2003 | VOLÚMEN 1 www.nature.com/reviews/micro

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Caja 1 | Ciclo de vida de los coronavirus

Los coronavirus contienen los genomas de ARN más grandes descritos hasta ahora: la molécula de ARN monocatenario de
sentido positivo tiene una tapa de 5 ' y una cola de poli (A) de 3' . El ciclo de vida de un coronavirus comienza cuando la proteína
espiga (S), que forma la corona distintiva del mismo nombre que se observa en los coronavirus, interactúa con un receptor a través de su dominio
La entrada, que probablemente está mediada por el dominio S2, se produce por fusión de membranas. Luego, el genoma
de ARN se libera en el citoplasma donde tiene lugar la replicación. La maquinaria de traducción del huésped traduce los
marcos de lectura abiertos superpuestos ORF1a y ORF1b mediante un mecanismo de cambio de marco ribosómico para producir una sola polipro

Adjunto y entrada

Lanzamiento viral

decapado

ARN genómico (+ve)

5ÿ
3ÿ
Traducción de ORF1a y exocitosis
ORF1b

Vesícula

Complejo de
replicación viral

Transcripción
Replicación
3ÿ
5ÿ(–ve)

Traducción aparato de Golgi

5ÿ S
5ÿ NSP
5ÿ mi
5ÿ METRO

5ÿ NSP
5ÿ NSP
5ÿ NSP
Urgencias ásperas
5ÿ norte

5ÿ
3ÿ(+v)

La escisión por proteinasas codificadas por virus produce los componentes necesarios para ensamblar el complejo de
replicación viral, que sintetiza ARN de cadena negativa de longitud completa. Además, una estrategia de transcripción discontinua
durante la síntesis de cadena negativa produce un conjunto anidado de ARN subgenómicos de sentido negativo. En este proceso,
es importante la secuencia reguladora de la transcripción (TRS), que está presente en el extremo 3ÿ de la secuencia líder y, con
algunas excepciones, aguas arriba de cada gen traducido. Se postula para fusionar los extremos 3' de las hebras negativas
subgenómicas nacientes con la secuencia líder antisentido. Estas cadenas negativas sintetizadas discontinuamente actúan luego
como moldes para la síntesis de ARNm de sentido positivo. Una hipótesis alternativa propone que estas moléculas de ARNm se
generan por transcripción discontinua durante la síntesis de cadena positiva (la figura muestra los productos de ARNm de sentido
positivo). En casi todos los casos, solo se traduce el ORF de más de 5ÿ . La proteína de la nucleocápside (N) y el ARN genómico
se ensamblan en el citoplasma para formar la nucleocápside helicoidal. Esta estructura central adquiere su envoltura brotando a
través de las membranas intracelulares entre el retículo endoplásmico (RE) y el aparato de Golgi. Las proteínas de membrana (M),
envoltura (E) y S, todas las cuales serán acomodadas por la bicapa lipídica, se transportan a través del RE al compartimento de
gemación, donde la nucleocápside probablemente interactúa con la proteína M para desencadenar el ensamblaje. Durante el
transporte del virus a través del aparato de Golgi, los restos de azúcar se modifican y en algunos coronavirus, pero no en todos,
la proteína S se escinde en los dominios S1 y S2. Cualquier proteína S que no se incorpore a los viriones se transporta a la
superficie celular. Finalmente, el virus se libera de la célula huésped mediante la fusión de vesículas que contienen viriones con
la membrana plasmática. La secuencia líder común en el extremo 5' de cada ARNm se muestra en rojo.

RESEÑAS DE LA NATURALEZA | MICROBIOLOGÍA VOLUMEN 1 | DICIEMBRE 2003 | 213

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Tabla 2 | Homologías de proteínas entre el SARS-CoV y otros coronavirus

Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3
Proteínas del SARS-CoV HCoV-229E TGV PEDV MHV BCoV IBV

Nsp1 <20,0 <20,0 <20,0 27,0 <20,0 <20,0

Nsp2 <20,0 23.0 23.0 <20,0 20.0 <20,0

Nsp3 (PLpro) 25.1 26,6* 24,1* 26.2 26,8 23.3

Nsp4 26,8 26,0 28.4 43.1 42.4 28.5

Nsp5 (3CLpro) 40.4 43.8 44.6 50.0 48.4 41.0

Nsp6 30.0 27,0 29.4 34.2 35.5 28.5

Nsp7 38.6 42.2 39.8 47.5 46.1 37.3

Nsp8 48.2 42,9 43,9 46,8 47.3 38.7

Nsp9 45.1 38,9 45.1 45.1 46,9 39.8

Nsp10 53.8 54.5 56.1 56.2 55.4 58.3

– – – – – –
nsp11

Nsp12 (RdRp) 59.8 59.6 60.0 67.3 66,9 62.4

Nsp13 (Helicasa) 60.7 62.0 62.3 67.2 68.6 58,9

nsp14 52.3 53.7 52.3 57.6 57.6 52.0

nsp15 43.1 43.0 45.4 45,9 45,0 40.2

Nsp16 (metiltransferasa) 56.4 54.4 55.3 63.0 65,0 53.4

Proteína de pico (S) 28.8 31,0* 30.3 31.1 31.0 32,7*

Proteína de envoltura (E) 33,0* 27,9 20.0 23.0 26.5 23.2

Glicoproteína de membrana (M) 30.6 32.5 34.8 40.8 41,9 32.5

Proteína nucleocápside (N) 26,9 30.1 29.5 37.3 37.4 31.5

Los números indican la identidad de aminoácidos entre las proteínas del SARS-CoV pronosticadas y los productos génicos correspondientes de otros
coronavirus (en porcentaje). Los pares más conservados están en negrita; más pares de variables están en cursiva. Se utilizó el programa FASTA para
comparación de secuencias. Los asteriscos indican que la alineación se obtuvo usando solo un fragmento de la proteína completa. Nsp, no estructural
proteína.

frente a nueve ORF predichos, y que se ajustaba al
descripción de un TRS (FIGS 2 y 3). Por el contrario, Marra
et al.17 y Rota et al.18 propusieron diferentes TRS
(5ÿCUAAAC3ÿ y 5ÿAAACGAAC3ÿ, respectivamente), pero
estas secuencias no preceden a todos los genes predichos y
ninguna evidencia experimental de su función ha sido
previsto. Aunque la organización general de la
El genoma del SARS-CoV es similar al de otros coronavirus
(FIG. 3), la conservación de aminoácidos del codificado
aislado humano GZ01, una cepa que se originó a partir de
Guangdong. Aunque todos los demás SARS-CoV humanos
los genomas carecen de un tramo de 29 nucleótidos en el extremo 3 '
dominio de ORF8a, esta secuencia está presente en el GZ01
aislar. El segmento adicional de 29 nucleótidos en este
cepa fusiona ORF8a y ORF8b en un solo ORF,
conocido como ORF8*, que codifica una proteína de 122 aminoácidos.
Cepas similares al SARS-CoV aisladas de mamíferos
en China contienen el mismo segmento de 29 nucleótidos13. Esta

proteínas suele ser bajo (FIG. 2; TABLA 2). observación plantea la

intrigante hipótesis de que la eliminación de 29 nucleótidos
Aislados clínicos que se ha observado en la mayoría de los aislamientos humanos podría

Ayudado por el trabajo preliminar establecido por generaciones anteriores
de los investigadores del coronavirus, la epidemia de SARS ha sido
el primer brote de enfermedad infecciosa en beneficiarse plenamente de
las tecnologías revolucionarias de la era posgenómica.
Menos de 1 mes después de la identificación inicial de la
virus como el agente infeccioso del SARS, dos independientes
Se habían obtenido las secuencias del genoma del virus17,18 .
En 3 meses, las secuencias genómicas de 20 aislamientos clínicos
independientes estuvieron disponibles en el
Base de datos GenBank (ver CUADRO 2 para más detalles). Comparativo
análisis de estos aislamientos reveló más del 99%
conservación de secuencias. Las pocas diferencias, sin embargo,
han permitido una organización sencilla de todos los virales
se aísla en dos familias: las que se originan en China continental y
Hong Kong y las que se originan en
el caso índice en el hotel de Hong Kong30 (FIG. 4). Quizás
la observación más interesante se hizo en el
han aumentado la aptitud del virus en huéspedes humanos
y permitió la propagación a la población humana.
Al carecer de un mecanismo de corrección de pruebas, los virus de ARN
se caracterizan generalmente por una alta mutabilidad. los
la alta tasa de mutación da como resultado una evolución continua
especies virales, que permiten que el virus escape del huésped
defensas Además, los coronavirus tienen una alta frecuencia de
recombinación de ARN que tiene la teoría
potencial de acelerar la aparición de nuevos virus
especies29. Debido al número limitado de secuencias
aislamientos, sin embargo, es demasiado pronto para sacar cualquier
conclusiones sobre la tasa de mutación del SARS CoV. Los cambios
de aminoácidos más interesantes que
Hasta ahora se han informado dos sustituciones recurrentes de
aminoácidos no conservativas (Gly a Asp y
Ile a Thr) en el dominio antigénico S1 de la proteína espiga30. Gly
e Ile se pueden encontrar en Hong Kong

214 | DICIEMBRE 2003 | VOLÚMEN 1 www.nature.com/reviews/micro

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Análisis filogenético
Caja 2 | Secuenciación del genoma del SARS-CoV
La pregunta más importante después de la identificación
En febrero de 2003, Carlo Urbani fue el primero en reconocer el SARS-CoV como una entidad distinta. del SARS-CoV era si representa un grupo completamente nuevo, una
Inmediatamente, se puso en práctica la tecnología posgenómica y, con una rapidez sin precedentes, variante de uno de los tres conocidos
el Centro Canadiense de Ciencias del Genoma, los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades grupos o una combinación de estos grupos. filogenético
y nuestro grupo obtuvo tres secuencias independientes del genoma del virus del SARS en menos análisis basado en los primeros 300 y 405 disponibles
que un mes. A principios de agosto de 2003, se habían depositado 31 secuencias en el
nucleótidos del gen de la polimerasa altamente conservado7,31
base de datos GenBank y estuvieron a disposición de la comunidad científica. Los 31 secuenciados indicó que el SARS-CoV era distinto de los tres
aislados provienen de China (10 cepas), Singapur (5 cepas), Taiwán (12 cepas),
grupos conocidos. Marra y Rota también llegaron al mismo
Vietnam (1 cepa), Alemania (1 cepa), Italia (1 cepa) y Canadá (1 cepa), y son
conclusión17,18 , y propuso que el SARS-CoV se coloque
derivados de pacientes que representan contactos primarios y secundarios.
en su propio grupo (FIG. 5a). Snijder et al. usó árboles filogenéticos
enraizados para recrear la evolución del coronavirus y
Nombre de la cepa lugar de aislamiento Número de acceso
incluyeron el torovirus equino (EToV) como un grupo externo. Sus
TOR2 Canadá AY274119
análisis de ORF1b, la región más conservada en el
Urbanos Vietnam AY278741 El genoma del SARS-CoV indica que el SARS-CoV representa una
CUHK-Su10 Hong Kong AY282752 escisión temprana del grupo 2 (REF. 32). Nuestro oratorio de

HKU-39849 Hong Kong AY278491 laboratorio adoptó un enfoque diferente para comprender el
Filogénesis del SARS-CoV. razonando que
SIN2500 Singapur AY283794
mayor variabilidad de la secuencia debe contener más
SIN2677 Singapur AY283795
información, analizamos proteínas menos conservadas, como
SIN2679 Singapur AY283796
como PLpro, proteína espiga, glicoproteína de membrana
SIN2748 Singapur AY283797 y proteína de la nucleocápside. Para cada proteína, un consenso
SIN2774 Singapur AY283798 Se generó una secuencia para los tres grupos conocidos.
TW1 Taiwán AY291451 de coronavirus. En todos los casos, el SARS-CoV mostró una

TWC Taiwán AY321118 relación estadísticamente significativa con el grupo 2

coronavirus (FIG. 5b), lo que indicó que es más
ZJ01 Porcelana AY297028
estrechamente relacionado con los miembros del grupo 2 y podría compartir un
HSR1 Italia AY323977
ancestro común con ellos. Además, esta conclusión es corroborada
FRA Alemania AY291315 y AY310120*
por la sorprendente observación de que 19
GZ01 Guangdong AY278489 de 20 residuos de cisteína en el dominio S1 del
CUHK-W1 Hong Kong AY278554 La proteína espiga del SARS-CoV se conserva espacialmente cuando

BJ01 AY278488 en comparación con la secuencia consenso del grupo 2,

Beijing
mientras que sólo se conservan 5 cisteínas cuando se comparan con
BJ02 Beijing AY278487
las secuencias consenso del grupo 1 o 3 (Figura 6).
BJ03 Beijing AY278490
Este análisis respalda la conclusión de que el virus SARS CoV se
BJ04 Beijing AY279354
separó temprano de otros virus del grupo 2 y
TC1 Taiwán AY338174 ha evolucionado de forma independiente durante un largo período de tiempo.

TC2 Taiwán AY338175

TC3 Taiwán AY348314 Dianas proteicas

TW1 Taiwán AY291451 Aunque se sabe muy poco sobre el SARS-CoV
proteínas en sí mismas, las homologías con proteínas conocidas del
TWC Taiwán AY321118
coronavirus pueden usarse para predecir las características de
TWH Taiwán AP006557
varias proteínas del SARS-CoV que podrían ser interesantes
TWJ Taiwán AP006558 dianas para medicamentos antivirales o vacunas. enzimas virales
TWK Taiwán AP006559 que son esenciales para la replicación del virus son los más
TWS Taiwán AP006560 candidatos atractivos para el desarrollo de pequeñas

TWY Taiwán AP006561 moléculas antivirales, mientras que algunas de las proteínas
estructurales representan objetivos obvios para el desarrollo de vacunas.
ZMY1 Guangdong AY351680
Sobre la base de las estructuras cristalinas de rayos X de
*Las dos secuencias muestran una identidad del 100 % a nivel de nucleótidos.
3CLpro de gastroenteritis transmisible coronavirus
(TGV)33 y coronavirus humano 229E, un modelo tridimensional de la
proteína correspondiente del virus del SARS
grupo de casos índice, mientras que Asp y Thr se encuentran en ha sido propuesto34. El modelo se puede utilizar para reducir
el continente aísla. Otra sustitución no conservativa (Gly a Arg) en el el número de compuestos a ser probados para encontrar un
dominio S1 solo se encuentra inhibidor eficaz de la proteasa. De hecho, una forma activa de
en las cepas GZ01 y BJ02. Es tentador especular esta proteasa ya ha sido expresada en E.coli,
que estas mutaciones representan adaptaciones al nuevo huésped o que se puede utilizar inmediatamente para la detección de drogas.
su respuesta inmune. Se puede obtener información adicional sobre La helicasa, que ya está disponible en recombinante
los estudios de variabilidad en curso. formulario, representa otro objetivo atractivo para las pantallas de
directamente del SARS Coronavirus Resource (ver alto rendimiento20 . PLpro es otro candidato potencial para fármacos
Enlaces en línea). antivirales, aunque no hay homólogos.

RESEÑAS DE LA NATURALEZA | MICROBIOLOGÍA VOLUMEN 1 | DICIEMBRE 2003 | 215

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RESEÑAS

TOR2 BJ04 CUHK-W1 Proteína pico CoV39. Todos los coronavirus del grupo 1
HSR1 pueden utilizar APN como receptor 40, mientras que el virus
TW1 BJ03
ZJ01 de la hepatitis de ratón (MHV) del grupo 2 utiliza glicoproteínas
SIN2500 BJ01
SIN2679 pertenecientes a la familia de antígenos carcinoembrionarios
FRA
HKU-39849 BJ02 como receptores en sus células diana41. Queda por
CUHK-Su10 TWC demostrar si el dominio de unión de hAPN es el receptor in
Urbanos GZ01
vivo . El dominio S1 que sobresale es adyacente al dominio
SIN2774
S2, que consta de un tallo, una región transmembrana y una
SIN2748 cola citoplásmica corta. De manera análoga a otras proteínas
SIN2677
S del coronavirus, la proteína de punta del SARS-CoV
Figura 4 | Relación molecular de 20 genomas del SARS.
contiene dos repeticiones de heptada que se ubican en el
El árbol sin raíces se obtuvo a través de la alineación de las
dominio S2. Se propone que estas repeticiones podrían
secuencias del genoma completo considerando solo las variantes de
secuencia que ocurrieron al menos dos veces. El análisis se realizó desencadenar la fusión de la envoltura viral con la membrana
utilizando el criterio de máxima verosimilitud implementado en el paquete celular, como se ha demostrado recientemente para MHV42.
Phylip . En algunos virus del grupo 2 y del grupo 3, la espiga se
escinde durante la maduración en dos subunidades, S1 y
S2, que permanecen unidas de forma no covalente. El papel
Las estructuras están disponibles. Dado su papel fundamental en la exacto de este proceso de escisión no está claro, ya que no
biología del virus, la ARN polimerasa dependiente de ARN (RdRp) parece influir en la infectividad; sin embargo, puede mejorar
ocupa un lugar destacado en la lista de objetivos prometedores. la actividad de fusión43–47. El SARS-CoV maduro parece
De los diferentes posibles objetivos de la vacuna, la contener proteína espiga no escindida, pero no se puede
glicoproteína S es el candidato más atractivo para la excluir la escisión después de unirse a la célula diana. Para
explotación. Esta proteína forma las grandes proyecciones concluir, la proteína espiga es un objetivo para el desarrollo
superficiales que son características de los coronavirus (FIG. de agentes que bloquean la unión del virus a su receptor
1), y que muy probablemente estén compuestas por celular y es el sitio de acoplamiento para los péptidos que
homotrímeros. La proteína de 1255 aminoácidos fuertemente podrían inhibir la fusión. Se han identificado varios objetivos
glicosilada35 contiene una cabeza bulbosa amino terminal adicionales para estudios adicionales. Primero, la proteína E
(S1), que comprende el dominio de unión al receptor y de 76 aminoácidos: el análisis por computadora ha predicho
también se cree que es responsable del tropismo del virus un dominio transmembrana largo cerca del extremo N-
en el huésped y el tejido36–38 . Sobre la base de la terminal y dos sitios de glicosilación N-terminal con un nivel
bioinformática y los métodos de modelado molecular, Yu et muy bajo de similitud de aminoácidos con otros coronavirus.
al. propuso un sitio de unión putativo de aminopeptidasa N En segundo lugar, la glicoproteína M, que es un polipéptido
humana (hAPN) en el dominio S1 del SARS de 221 residuos que consta de un ectodominio N-terminal
corto con un sitio de N-glucosilación, tres segmentos
transmembrana y un C-terminal ubicado en el lado interior
a b de la envoltura viral, y que se parece mucho a las
SDAV
SARS-CoV glicoproteínas M de otros virus del grupo 2. En tercer lugar,
MHV BCoV MHV
SARS-CoV Contras de G2 la proteína N, que es una fosfoproteína de 397 residuos de
PHEV
longitud que interactúa con el ARN genómico viral para
100 OC43
97 formar la nucleocápside helicoidal, y que tiene un bajo nivel
Grupo 2 de conservación con otros coronavirus.
TVC
Grupo 2
100
IBV TGV IBV
95 El futuro de la prevención y el tratamiento Con
Grupo 3 FIPV Grupo 3
la notable excepción del ÿ-interferón, del que se ha informado
CCV que interfiere con la replicación del virus del SARS in vitro48,
no se dispone de ningún, fármaco oa
detección vacuna con licencia.
gran escala de La
PEDV Contras de G1
HCoV-229E HCoV-229E antivirales existentes o grandes bibliotecas químicas en
Grupo 1 Grupo 1
busca de posibles inhibidores de la replicación no ha tenido
mucho éxito. Actualmente, la única sustancia prometedora
Figura 5 | Relación entre el SARS-CoV y otros coronavirus utilizando diferentes estrategias
es la glicirricina, un componente de las raíces de regaliz, que
filogenéticas. un | Árbol sin enraizar obtenido comparando la secuencia de la proteína polimerasa bien
también tiene actividad contra el VIH.
conservada. Según este enfoque, el SARS-CoV pertenece a un nuevo grupo.
El árbol se ha construido utilizando las secuencias proteicas de la ARN polimerasa dependiente de Este compuesto fue identificado durante un experimento a
ARN de los siguientes coronavirus: virus de la diarrea epidémica porcina (PEDV), coronavirus humano pequeña escala que involucró solo una pequeña cantidad de
229E (HCoV-229E), coronavirus canino (CCV), virus de la peritonitis infecciosa felina (FIPV ), virus de la compuestos antivirales conocidos49. El desarrollo de
gastroenteritis transmisible (TGV), virus de la hepatitis del ratón (MHV), coronavirus bovino (BCoV), virus de la ensayos que se basan en la actividad de las enzimas virales
sialoacrioadenitis de las ratas (SDAV), coronavirus humano OC43 (OC43), virus de la encefalomielitis
y que son susceptibles de detección de alto rendimiento de
hemaglutinante porcina (PHEV), coronavirus del pavo (TCV) ), virus de la bronquitis infecciosa aviar (IBV) y
bibliotecas químicas nuevas y existentes, probablemente
SARS-CoV. segundo | Árbol obtenido a partir de la secuencia del dominio S1 de la proteína espiga. El
alineamiento de secuencias múltiples se construyó utilizando secuencias de consenso generadas a partir de
identificará compuestos efectivos en un futuro próximo. Sin
coronavirus del grupo 1 y del grupo 2 (contras G1 y contras G2), la secuencia de IBV (grupo 3) y de SARS-CoV. embargo, a menos que estos compuestos putativos ya estén
El algoritmo de unión de vecinos se utilizó para construir el árbol51 . autorizados o sean productos existentes en etapas avanzadas
Los números representan el resultado de un análisis de arranque realizado con 100 repeticiones. de desarrollo, no estarán disponibles para tratar pacientes en el futuro.

216 | DICIEMBRE 2003 | VOLÚMEN 1 www.nature.com/reviews/micro

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RESEÑAS

Contras de G3

Contras de G1

SARS-CoV

Contras de G2

Figura 6 | El dominio S1 del pico SARS-CoV está relacionado estructuralmente con los coronavirus del grupo 2. Representación esquemática
de las posiciones de cisteína en los dominios S1 de los coronavirus de los grupos 1, 2 y 3, en comparación con la proteína de punta del SARS-CoV. Las
barras horizontales representan las secuencias de aminoácidos de S1 (en el caso de SARS-CoV e IBV) o los perfiles de consenso (generados a partir
del grupo 1, (G1 cons) y del grupo 2 (G2 cons)). Las barras están dibujadas a escala. Las posiciones relativas de cisteína se indican mediante barras rectangulares.
Solo se informan las cisteínas que se conservan dentro de cada consenso. Las líneas de colores conectan las cisteínas que se conservan entre
el dominio SARS-CoV S1 y la secuencia de consenso generada a partir de las secuencias del grupo 1 (verde), grupo 2 (rojo) y IBV S1 (azul).

futuro cercano. Las proteínas celulares que son esenciales para la
replicación del virus tampoco deben pasarse por alto como posibles
objetivos: las nuevas tecnologías, como los ARN de interferencia
pequeños (siRNA) de doble cadena, tienen un potencial futuro
considerable, pero aún están plagados de dificultades prácticas. En la
actualidad, los investigadores están trabajando en el desarrollo de
sistemas de entrega eficaces para siRNA.
Y tras la conclusión exitosa de esta investigación, aún deberán demostrar
su potencial en modelos animales de infección.
También es probable que los anticuerpos que pueden neutralizar la
infección viral sean una forma efectiva de prevenir y curar esta
enfermedad. La inmunoterapia pasiva utilizando sueros de pacientes
convalecientes se propuso inicialmente como tratamiento para la
enfermedad. Dada la excelente trayectoria de los anticuerpos
monoclonales humanos en el tratamiento del cáncer y las enfermedades
infecciosas, esta debería ser un área fructífera para el desarrollo
terapéutico. De hecho, se ha demostrado que los anticuerpos
monoclonales obtenidos de linfocitos B inmortalizados de pacientes
convalecientes de SARS neutralizan la infección por virus in vitro y
previenen la replicación del virus en un modelo de ratón de infección por
virus no replicantes, o vectores virales basados en adenovirus,
canarypox, vaccinia virus Ankara modificado (MVA) o alfavirus. En
particular, el desarrollo de partículas similares a coronavirus que no se
replican y que imitan la estructura de los viriones nativos podría resultar
prometedor en la búsqueda de una vacuna exitosa, ya que muestran un
gran repertorio de sitios antigénicos y epítopos discontinuos. Sin
embargo, cada uno de estos enfoques, incluida la inmunoterapia pasiva,
debe evaluarse cuidadosamente, ya que algunas vacunas que se han
desarrollado contra el coronavirus felino en realidad exacerbaron la
enfermedad cuando los animales vacunados fueron desafiados con el
virus de tipo salvaje50 .
Es probable que pronto estén disponibles las vacunas de virus
muertos que están listas para ser probadas en los ensayos clínicos de Fase I.
En circunstancias normales, una vacuna tarda de 6 a 8 años en
desarrollarse clínicamente después de ingresar a los ensayos clínicos
de Fase I. Estos plazos podrían acortarse considerablemente si la carga
de la enfermedad y un estado de emergencia médica indujeran a las
agencias reguladoras a acelerar el proceso de aprobación.

SARS CoV (A. Lanzavecchia y RR, observaciones no publicadas).
Por supuesto, una vacuna segura y eficaz sería la solución ideal,
porque no solo evitaría la enfermedad en las personas vacunadas, sino
que también reduciría la propagación del virus. Aunque solo pasó un
corto período de tiempo desde que se identificó al SARS-CoV como el
agente infeccioso responsable de la epidemia, ya están disponibles
vacunas candidatas basadas en virus muertos. Aún debe demostrarse
su eficacia, pero nuestro laboratorio (y posiblemente otros) están en el
proceso de probar vacunas sobre la base del virus del SARS inactivado
en modelos preclínicos. Además del enfoque tradicional, se están
utilizando varias tecnologías más nuevas. Estos incluyen vacunas de
subunidades que contienen proteína de punta recombinante expresada
en células de mamífero o levadura, ya sea sola o en combinación con
otros antígenos del SARS-CoV. Alternativamente, estos antígenos
podrían administrarse mediante inmunización con ADN mediante
En conclusión, el desarrollo de estrategias terapéuticas frente a este
nuevo coronavirus parece posible con las tecnologías disponibles y no
es una meta inalcanzable al mismo nivel que el VIH o el virus de la
hepatitis C. Con suficiente tiempo y presión económica, es probable que
estén disponibles medicamentos antivirales, anticuerpos monoclonales
humanos, vacunas y siRNA que son activos contra el SARS-CoV. La
pregunta que queda es si tendremos tiempo para desarrollar terapias
efectivas antes de que surja otra epidemia en la población humana. Si
el SARS regresa este invierno, aún necesitaremos depender
principalmente de las medidas de cuarentena para contener la
enfermedad. Igualmente importante es el desarrollo de tecnologías que
permitan el diagnóstico rápido y sencillo del SARS.
Igual de preocupante, sin embargo, es un escenario en el que el
virus no resurja durante un par de años, haciendo que desaparezca el
incentivo económico para que las empresas inviertan en el SARS, por lo
que ninguna de las medidas anteriores habrá sido desarrollada e
implementada.

RESEÑAS DE LA NATURALEZA | MICROBIOLOGÍA VOLUMEN 1 | DICIEMBRE 2003 | 217

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RESEÑAS

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microbiológicos y la presentación clínica del SARS ARNm cap-1 metiltransferasa en el genoma del SARS. Especificidad del receptor y cambios conformacionales inducidos por el
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218 | DICIEMBRE 2003 | VOLÚMEN 1 www.nature.com/reviews/micro