Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca

Facultad de Ciencias de la Salud

Bacteriología y Laboratorio Clínico
Bogotá, Marzo 2020
Juan Manuel Rativa Cruz

CARACTERÍSTICAS
COMPONENTES/ MACROSCÓPICAS/ POSIBLES
MEDIO FUNDAMENTO REVELADOR MICROSCÓPICAS MICROORGANISMOS

fue desarrollado para - Proteosa MACROSCÓPICAS Lactobacillus

permitir el crecimiento peptona N° 3
de lactobacilos y otras - Extracto de
bacterias ácido carne
lácticas. La proteosa - Extracto de
peptona, el extracto levadura.
de levadura y la - Glucosa.
glucosa constituyen la - Monoleato colonias redondas de
fuente nutritiva ya que de sorbitan. diferentes tamaños de
aportan nitrógeno, - Fosfato color blanco a
carbono, vitaminas y dipotásico. transparente.
minerales. El - Acetato de Las colonias
monoleato de sodio. presuntivas de
sorbitan, las sales de - Citrato de Lactobacillus crecen
sodio; magnesio y amonio. de color blanquecinas
manganeso proveen - Sulfato de y presentan una
cofactores para el manganeso. apariencia mucoide o
crecimiento bacteriano - Sulfato de cremosa en este agar.
y pueden inhibir el magnesio.
desarrollo de algunos - Agar.
microorganismos. El
citrato de amonio
actúa como agente
inhibidor del
crecimiento de
bacterias Gram
negativas. el agar es
A. MRS el agente solidificante.

El agar manitol de -Manitol.

Ashby se utiliza para -Fosfato de
el cultivo de dipotasio.
Especies de -Sulfato de
Azotobacter que magnesio.
pueden usar manitol y -Cloruro de
nitrógeno atmosférico sodio.
como fuente de -Sulfato de
A. Ashby carbono y potasio.
 nitrógeno, -Carbonato de
respectivamente. Calcio.
Además de tener la -Agar.
capacidad de arreglar
nitrógeno atmosférico,
Azotobacter también
puede
sintetizar sustancias
biológicamente
activas que
Mejorar la
germinación de
semillas y el
crecimiento de las
plantas.

Las endogluconasas -Carboximetilc MACROSPICAS Bacterias aerobias

actuan al azar sobre elulosa. mesofilas y termofilas :
los enlaces B-1,4 -Extracto de
glucosidicos y su levadura. Cellulomonas sp
actividad es con -Peptona Celluibrio sp.
frecuencia medida universal. Microsbispora bispora.
sobre celulosa soluble -Sulfato de Thermocellum.
con alto grado de amonio
polimerización, como -Cloruro de Bacterias anaerobias
es el caso de la calcio. Antes de agregar el mesófilas y termófilas:
carboximetilcelulosa -Fosfato indicador se verán
CMC. La accion de las monobásico colonias pequeñas de Acetivibrio
endoglucanasas sobre de potasio. tamaño variado. celbriolyticos.
este sustrato - fosfato Después se agrega el Bacteroides
celulósico se dibásico de indicador el cual nos succinogenes.
caracterizan por la potasio. ayuda a identificar la Ruminococcus albus.
disminución de la -Agar. capacidad que tiene Ruminococcus
viscosidad realizando estos microorganismos flavefaciens.
clivajes INDICADOR: para degradar la Clostridium
intramoleculares. rojo congo celulosa, thermocellum.

A. CMC

Este agar es usado -Peptona. MACROSCÓPICOS. Candida krusei,

para evaluar la -Extracto de Aspergillus spp.,
capacidad que tienen carne. Penicillium spp.
los microorganismos -Cloruro Rhizopus oryzae
para hidrolizar el sódico.
almidón por medio de -Almidón.
amilasas. -Agar.
Hay que tener en
REVELADOR: cuenta que se el
Lugol sembrado se hace en
A. Almidon 1%
 pozos este tiene la
característica principal,
que al agregar el
indicador después de
la incubación se
revelara un halo
incoloro en aquellas
cepas que logran
degradar el almidón.

La peptona -Cloranfenicol. MACROSCÓPICAS: Aspergillus flavus

bacteriológica -Sulfato aflatoxigénico.
proporciona la fuente magnésico. Aspergillus fumigatus
de nitrógeno, -Rosa de
vitaminas, minerales y bengala.
aminoácidos. La -Peptona.
dextrosa es el -Fosfato
carbohidrato potásico.
fermentable como
fuente de carbono y el color y la textura
energía. El fosfato de puede cambiar de
potasio es el tampón. acuerdo al
El sulfato de microorganismo que se
magnesio proporciona desarrolle, entre ellos
azufre y otros podemos encontrar
oligoelementos. El amarillo, verde,
rosa de bengala es un blancos, entre otros.
agente selectivo que Así mismo su textura
inhibe el crecimiento puede ser viscosa o
de bacterias y limita el polvorosa.
tamaño y la altura de
los hongos con
crecimiento rápido, lo
que permite el
desarrollo y la
detección de otras
A. Rosa levaduras de
bengala crecimiento más lento.

Este medio contiene - Nitrato MACROSCÓPICOS

sacarosa; este sódico.
carbohidrato sirve -Cloruro
como fuente de potásico.
carbono, en tanto que -Sulfato
el nitrato de sodio es magnésico.
la fuente de nitrógeno, -Sulfato
pero a diferencia de ferroso.
otros medios el -Fosfato
A. CZAPEK nitrógeno dipotásico.
 proporcionado es de -Sacarosa.
tipo inorgánico. -Agar.

Por este motivo el

medio Czapek se
considera selectivo,
debido a que solo
podrán desarrollarse
microorganismos
capaces de utilizar
compuestos
inorgánicos como
única fuente de
nitrógeno.

Como sustancia
reguladora de la
osmolaridad del medio
está el fosfato
bipotásico. Por su
parte, el sulfato de
magnesio, el cloruro
de potasio y el sulfato
ferroso aportan
minerales esenciales
para el crecimiento de
los microorganismos
saprófitos (de vida
libre). Con esta
fórmula se forma un
precipitado de fosfato
de magnesio.

Finalmente, el
agar-agar es el
compuesto que le
proporciona la
consistencia sólida al
medio y el agua es el
disolvente de todos
los componentes.

Es usado para evaluar -Peptona de MACROSCÓPICAS:

la capacidad que caseína. Streptococcus
tienen los -extracto de agalactiae.
microorganismos para levadura. streptococcus
degradar la caseína a -Dextrosa. dysgalactiae.
compuesto -Leche streptococcus uberis.
Los microorganismos
nitrogenados solubles, desnatada en Staphylococcus
que son capaces de
A. Leche a través de la enzima polvo (libre de aureus.
 caseinasa. antibióticos) degradar la caseína Mycobacterium
-Agar. crecer en colonias de tuberculosis.
color blanco y tienen
como particularidad
generar un halo
transparente, debido a
la degradación.

El fosfato existe tanto -Extracto de

en formas orgánicas levadura.
como inorgánicas en -Dextrosa.
el suelo. Materia -Fosfato de
orgánica derivada de calcio.
restos de plantas -Sulfato de
muertas y en amonio.
descomposición. -Cloruro de
Es rico en fuentes potasio.
orgánicas de fósforo. -Sulfato de
Sin embargo, las magnesio.
plantas pueden utilizar -Sulfato de
el fósforo del suelo manganeso.
solo en la -Sulfato
disponibilidad gratuita ferroso.
formar. Los fosfatos -Agar.
del suelo están
disponibles tanto por
las raíces de las
plantas como por los
microorganismos del
suelo. Por lo tanto, la
disolución de fosfato
Los organismos del
suelo juegan un papel
en la corrección de la
deficiencia de fósforo
de las plantas de
cultivo (1). El agar
Pikovskayas fue
modificado por
Sundara
Rao y Sinha (2) para
la detección de
bacterias
solubilizadoras de
fosfato del suelo.
El extracto de
levadura en el medio
proporciona nitrógeno
y otros nutrientes
A. Pikous necesarios para
 apoyar el crecimiento
bacteriano. La
dextrosa actúa como
un
fuente de energía.
Diferentes sales y
extracto de levadura
favorecen el
crecimiento de
organismos. Las
bacterias
solubilizadoras de
fosfato crecerán
en este medio y
forman una zona clara
alrededor de la
colonia, formada
debido a la
solubilización de
fosfato en las
proximidades de la
colonia.

El extracto de -Manitol. MACROSCÓPICAS:

levadura y el manitol -Fosfato
constituyen la fuente monopotásico.
nutritiva ya que -Fosfato
aportan carbono, dipotásico.
vitaminas y minerales. -Nitrato
como sustancia amónico.
reguladora de la -Extracto de
osmolaridad del medio levadura.
está el fosfato
dipotásico. El agar es
A. Rhizobium el agente solidificante.

es un medio de cultivo harina de MACROSCÓPICAS:

sólido, de bajo poder maíz,
nutricional, útil para el agar-agar y
sub-cultivo de ciertos agua.
hongos y para la
demostración de
clamidosporos en
cepas del complejo
Candida albicans. En
inglés se conoce
A. Arroz como Corn Meal Agar.

Medio selectivo para -K2HPO4 MACROSCÓPICAS:

A. Rojo congo aislar -MgSO4.7H2O staphylococcus
microorganismos -NaCl aureus.
fijadores de N2. -Extracto de
También es usado levadura klebsiella pneumoniae.
para determinar la -FeCl3.6H2O
capacidad que tienen -Ácido pseudomonas
los microorganismos metálico aeruginosa.
para la producción de
biofilm. REVELADOR:
Rojo Congo
1% y
NaCl 1M

- Halos.
Determinación de Nitrógeno por el método Kjeldahl
El método Kjeldahl se utiliza para la determinación del contenido de nitrógeno en muestras
orgánicas e inorgánicas. Desde hace más de 100 años se está utilizando el método Kjeldahl
para la determinación del nitrógeno en una amplia gama de muestras. La determinación del
nitrógeno Kjeldahl se realiza en alimentos y bebidas, carne, piensos, cereales y forrajes
para el cálculo del contenido en proteína. También se utiliza el método Kjeldahl para la
determinación de nitrógeno en aguas residuales, suelos y otras muestras. Es un método
oficial y descrito en múltiples normativas: AOAC, USEPA, ISO, DIN, Farmacopeas y
distintas Directivas Comunitarias. El método Kjeldahl consta de tres etapas:

1. Digestión El objetivo del procedimiento de digestión es romper todos los enlaces de

nitrógeno de la muestra y convertir todo el nitrógeno unido orgánicamente en iones amonio
(NH4 + ). El carbono orgánico y el hidrógeno forman dióxido de carbono y agua. En este
proceso la materia orgánica se carboniza dando lugar a la formación de una espuma negra.
Durante la digestión, la espuma se descompone y finalmente se convierte en un líquido
claro que indica que la reacción química ha terminado. Para ello, la muestra se mezcla con
ácido sulfúrico a temperaturas entre 350 y 380 °C. Cuánto más alta sea la temperatura, más
rápido será el proceso de digestión. La digestión también se puede acelerar con la adición
de sales y catalizadores. Se añade sulfato de potasio para aumentar el punto de ebullición
del ácido sulfúrico y se añaden catalizadores para aumentar la velocidad y la eficiencia del
procedimiento de digestión. También se pueden añadir agentes oxidantes para mejorar aún
más la velocidad. El tiempo de digestión depende de la estructura química de la muestra, la
temperatura, las cantidades de sal sulfato y de catalizador

Una vez la digestión ha finalizado, se deja enfriar la muestra a temperatura ambiente, se

diluye con agua y se trasvasa a la unidad de destilación.
Catalizadores Kjeldahl Los catalizadores están compuestos por más del 97% de una sal
que provoca un aumento en la temperatura de ebullición del ácido sulfúrico y del 1-3% de
un tipo de catalizador o una mezcla de catalizadores para aumentar la velocidad y la
eficiencia del procedimiento de digestión. Los catalizadores típicos son selenio o sales
metálicas de cobre o titanio. La selección de un determinado catalizador depende de
aspectos ecológicos y tóxicos o de razones más prácticas como el tiempo de reacción o la
formación de espuma y la pulverización. Por ejemplo, el catalizador que contiene selenio
reacciona más rápido pero es tóxico, mientras que un catalizador que contiene cobre es
más seguro para las personas y el medio ambiente, pero da un proceso de digestión más
lento. Un compromiso ideal es el catalizador mixto que consiste en cobre y sulfato de titanio.

Ácido y oxidante para la digestión En aplicaciones generales de alimentos y piensos, se

utiliza ácido sulfúrico al 98% para las digestiones. También se pueden añadir agentes
oxidantes para mejorar aún más la velocidad. El peróxido de hidrógeno es el más
ampliamente utilizado ya que acelera la descomposición del material orgánico y también
tiene una acción antiespumante para controlar la formación de espuma durante la digestión.
Sin embargo, es extremadamente reactivo y el riesgo de pérdidas de nitrógeno es bastante
alto. Si la formación de espuma es el único problema, es mejor usar 1-3 gotas de una
emulsión antiespumante comercial. Después de la digestión y antes de la neutralización del
ácido sulfúrico con hidróxido sódico concentrado, la muestra se deja enfriar a temperatura
ambiente y se diluye con agua destilada para evitar salpicaduras de la muestra. Además, si
las muestras se diluyen con 10-20 mL de agua justo después del enfriamiento, se puede
evitar la cristalización.
2. Destilación La muestra ácida se neutraliza por medio de una solución concentrada de
hidróxido sódico. Durante el proceso de destilación los iones amonio (NH4 + ) se convierten
en amoniaco (NH3) que es arrastrado al vaso receptor por medio de una corriente de vapor
de agua (destilación al vapor).

El vaso receptor para el destilado se llena con una solución absorbente para capturar el gas
amoniaco disuelto. La solución absorbente más común es el ácido bórico [B(OH)3] en
solución acuosa al 2-4%. También pueden utilizarse otros ácidos, dosificados con precisión,
como el ácido sulfúrico o clorhídrico para capturar el amoniaco en forma de iones amonio
solvatados. El ácido bórico es el método de elección porque permite la automatización.
3. Valoración La concentración de los iones amonio capturados puede determinarse por
medio de dos tipos de valoración: • Cuando se utiliza el ácido bórico como solución
absorbente, posteriormente se lleva a cabo una valoración ácido-base utilizando una
solución estandarizada de ácido sulfúrico o clorhídrico. El rango de concentración de la
solución utilizada varía entre 0,01N a 0,5N dependiendo de la cantidad de iones amonio
presentes. La detección del punto final se puede realizar manualmente, con una valoración
colorimétrica, utilizando una combinación de indicadores. La combinación de indicadores de
rojo de metilo y azul de metileno se utiliza con frecuencia en muchos métodos. El punto final
de la valoración también se puede determinar potenciométricamente con un electrodo de
pH. Esta valoración se llama valoración directa.

Cuando se utiliza una solución valorada de ácido sulfúrico como solución absorbente, el
ácido sulfúrico residual (es decir, el exceso que no reacciona con NH3) se valora con una
solución estandarizada de hidróxido sódico y la cantidad de amoniaco se calcula por
diferencia. El punto final se detecta con un indicador de color, el más utilizado es el rojo de
metilo. Esta valoración se llama valoración indirecta o por retroceso.
BLIOGRAFÍA
https://bteduc.com/guias_es/78_Preparacion_del_medio_de_agar-almidon.pdf
http://www.scielo.org.co/pdf/racefn/v39n153/v39n153a09.pdf