GUIA DE ESTUDIO ANALISIS INSTRUMENTAL

Métodos analíticos Cualitativo Cuantitativo

Clásicos Propiedades fis y quim: Gravimetría:
color, punto determinación de masa
ebullición/fusión, analito a partir del
solubilidad, olor. mismo.
Volumetría:
volumen/peso de un
reactivo que rxn del
todo con el analito.
Instrumentales Propiedades fis y quim: Lo mismo del
conductividad, cualitativo.
adsorción, separación
cromatografía,
potencial electrodo.

Análisis instrumental: técnicas y métodos para hacer procedimientos de análisis con instrumentos.
Pertenece a la química analítica.

Métodos instrumentales: métodos modernos que separan, identifican y cuantifican especies

químicas. Fenómenos físicos-químicos conocidos, se miden propiedades de analitos para análisis
cuali o cuanti.

Señales analíticas: absorción luz (espectrofotometría, fotometría), emisión luz (espectroscopia),

conductividad, potencial electrodo (potenciómetro), dispersión (turbidimetria), rotación
(Polarimetría), refracción, difracción (rayos X y de electrones).

Instrumentos análisis: debe convertir señales físicas/químicas del analito en info que sea
interpretada por el ser humano, es un dispositivo de comunicación entre el sistema de estudio y el
investigador.

Componentes básicos instrumento analítico:

 Generador de señales: indica presencia y concentración del analito. Puede ser un

compuesto o ion del propio analito.
 Detectores (transductores entrada): convierte un tipo de energía/señal en otro.
 Procesadores de señales: modifica la señal del detector para su lectura.
 Dispositivos de lectura: transductor que convierte una señal procesada en otra que puede
ser entendida por el investigador.
Parametros de calidad: criterios para decidir si un método instrum es adecuado o no
para resolver un problema analítico. EJEMPLOS:

 Precisión: errores aleatorios (desviación estándar, varianza)

 Exactitud: mide el error de un método analítico. Comparación con muestras
patrón o con método patrón.
 Sensibilidad: concentración del analito necesaria para generar una respuesta del
instrumento (determinan sensibilidad: propiedades fis y quim, respuesta
transductor entrada, componentes de la matriz muestra)
 Limite de detección: concentración/ peso mínimo de analito que pueden detectarse para
un nivel dado (depende de la magnitud de señal y valor de las fluctuaciones estadísticas de
la señal del blanco).

Métodos instrumentales más sensibles que los métodos químicos: detectan y determinan
cantidades de analito más pequeñas, analizan trazas. EJEMPLOS:

 Ruido: degrada exactitud y precisión, limite detección menos favorable. Ruido químico
(variables incontroladas directamente relacionadas con la química, temperatura, presión),
Ruido instrumental (componentes del instrumento, generador señales, detector, etc).
 Selectividad: grado de interferencia de especias sobre la identificación de otras. El más
favorable es en el que ninguna otra sustancia interfiere y el método/reacción son
característicos de la sustancia que se determina (método especifico).

Características para la elección del método: velocidad, facilidad y comodidad, habilidad del
operador, coste y disponibilidad, coste por muestra.

Tipos de errores:

 Aleatorios: indeterminados. Se encuentran en la naturaleza y están presentes en todos los

análisis. Ruidos térmicos, golpeteos. Se puede minimizar por métodos de filtrado.
 Sistematizados: determinados. Hace que los resultados se desvien constantemente
respecto a los valores esperados. Calibracion inadecuada, pureza insuficiente de reactivos,
mal uso de los instrumentos de medición. No puede reducirse por métodos estadísticos,
pero se pueden identificar y minimizar cambiando el procedimiento analítico.

Calibración: Relación entre valores indicados y valores conocidos. Depende del método
instrumental, respuesta del instrumento, interferencias de la matriz y núm. de muestras por
analizar. Utiliza estándares/patrones químicos.

Métodos de calibración:

 Estándares externos: analiza separadamente de la muestra que se esta ensayando. Por

ello se utilizan soluciones patrón con distintas concentraciones de analito, junto a la matriz
que es similas/idéntica a la muestra. Se mide su absorbancia y se hace una curva de
calibración. Se usa en métodos espectrofotométricos.
 Estándares internos (añadidos): se utiliza cuando la matriz de una muestra sea
desconocida/compleja que no pueda usarse un estándar externo, cuando el proceso de
 preparación de la muestra/técnica sea compleja/muy variable, cuando la medida dependa
de condiciones instrumentales precisas y poco controlables.

Método de adiciones estándares: Se utiliza cuando es imposible suprimir interferencias

físicas/químicas en la matriz. Señal cero para concentración cero. Las soluciones deben ser diluidas
al mismo volumen final. Este método es utilizado en la química electroanalítica, también las
absorción atómica y espectrofotométrica de emisión de llama.

Método del estándar interno:

U2 CROMATOGRAFIA

Mikhail Twseet 1901 formalizo el uso de la cromatografía.

Cromatografía: chroma (color) y graphein (escribir).

Fase móvil: arrastra los pigmentos hacia la salida. Es transportada por la fase estacionaria.

Fase estacionaria: retiene los pigmentos. Los analitos se separan en bandas.

Tipos de cromatografía:
  Adsorción: fase estacionaria (solido en donde los componentes de la muestra son
absorbidos), fase móvil (liquido-solido o gas-liquido). Ejemplo cromatografía capa
fina TLC, en donde la fase estacionaria es un plano.
 Partición: fase estacionaria (liquido soportado en un sólido inerte), fase móvil
(liquido-liquido o gas-liquido). Ejemplo cromatografía en papel, donde FE es una
capa de agua absorbida en una hoja de papel.
 Intercambio iónico:
Intercambiadores + (anicónicos)
poseen contra-iones – (aniones).
Intercambiadores – (catiónicos)
poseen contra-iones + (cationes).
Se pueden separar proteínas
mediante este tipo de cromatografía, las proteínas más cargadas se van a
unir con fuerza al intercambiador, por lo tanto, para poder eluirlas se debe
aumentar la fuerza iónica del medio. La matriz puede estar formada por compuestos
orgánicos, resinas o polisacáridos. Características de la matriz, eficiencia, recuperación,
capacidad, fluidez, etc.
 Exclusión: Por tamaño, fase estacionaria (material poroso que permite la elución de los
solutos, EJEMPLO partículas sílice/polímeros), rellenos (inertes, estables, tamaño y poro
uniforme de partícula, resistentes). Las partículas que no pueden pasar por la fase
estacionaria se eluyen y salen primero. Se recogen fracciones del líquido que se eluye para
trazar el perfil de elución.
 Afinidad: separa mezclas proteinas por afinidad/capacidad de union a un ligando.
Cromatografia de adsorcion solido-liquido, una sustancia se enlaza en soportes solidos que
retiene los analitos, esto es reversible. Separaciones llave-cerradura. Ligandos: (moléculas
bioquímicas que se encuentran en el soporte sólido. Tipos ligandos: naturaleza
(macromoléculas, moléculas bajo peso molecular), selectividad (específicos: anticuerpos) y
generales (lectinas y nucleótidos). Soportes: se une covalentemente con el ligando de
afinidad. Propiedades (gran superficie, porosidad y tamaño de grano controlable,
hidrofilico, estabilidad mecánica x alta presión). Ejemplos de soportes: geles orgánicos de
polisacáridos (agarosa), polímeros acrilamida, fractogel TSK, sílices CPG.

Características: solo separa un solo soluto analito,

sistema de baja presión, columnas cortas, alta selectividad, campo de aplicación restringido.

Factores que influyen en el grado de separación en cualquier técnica cromatográfica: solubilidad

y flujo del solvente.

 Encargados de la movilización por la FE: Velocidad de flujo del solvente, solubilidad de las
sustancias en el solvente
 Retardo del movimiento: efectos de fraccionamiento (partición), efectos de adsorción.
Octadecilo (columna C18): separación fase reversa FR (compuestos hidrofóbicos), se separan por
la diferencia de polaridades y se crean interacciones entre el gel, FM y analito. El grupo funcional
hidrofóbico más utilizado es el octadecilo, tiene 18 carbonos.

CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

La fase estacionaria se sitúa dentro de un tubo de vidrio.

Dependiendo del fluido para la fase móvil: cromatografía de

líquidos, gases (columna cerrada) y fluidos supercríticos.

Fase estacionaria: alúmina, gel de sílice. Partícula grande.

Fase móvil:

Clasificacion:

 Elucion: mas utilizada. El solvente fluye por la columna separando los componentes de la
mezla. Eluyente (FM que porta la muestra), eluato (la salida del eluyente).

TIPOS:

Elucion simple: un solo solvente, con el cual tambien se empaca la columna.

Elucion fraccionada: se eluye una parte de los componentes de la muestra con un solvente y se
utiliza otro solvente para completar la separacion por completo. Este 2do solvente debe de tener
mayor poder elutivo.

Elucion gradual/gradiente: el solvente se modifica de forma escalonada, aumentando su poder de

elucion. Se usa para la separacion de intercambio ionico.

Desplazamiento: Se coloca una parte de la muestra en la columna, se van agregando solventes

con poca afinidad a la FE sucesivamente cada una con mayor afinidad a la FE.

 Analisis frontal: Utiliza la propia mezcla hasta que la columna se satura. Es útil para saber
el núm. de componentes de una muestra y huellas de impurezas.

Componentes separados:
Identificación de componentes separados:

 Extracción del relleno: se eluye durante un tiempo y se saca de la columna con un embolo
metálico:

Son coloreados: dejar que se evapore el disolvente, se corta en rodajas donde están los
componentes y se extraen.

No coloreados: con una tira de papel se presiona el cuerpo del absorbente para que absorba el
disolvente y al secarse de revela. El papel se vuelve a poner al lado del relleno y se localiza la
posición de los componentes, se corta en rodajas y se extraen con un disolvente.

 Recolección de volúmenes: se recolectan volúmenes de eluato durante la separación se

analiza para saber la posición de los componentes de la muestra.
 Análisis continuo: se pasa el eluyente por algún aparato que mida alguna propiedad de los
elementos separados. Cuando se genera la señal se observan los resultados en una gráfica,
el cual permite localizar las fracciones de material utilizable.

Analisis cualitativo: se recomienda determinar el volumen de retencion, el cual es la cantidad en

ml de FM necesarios para eluir la mitad del componente. No es confiable.

Aplicaciones: separacion/purificacion de compuestos organicos, solidos/lquidos. Ejemplo

proteinas.

Proceso: por gravedad.

Variables: diametro columna, cantidad adsorbente, eleccion del solvente.