BIOQUÍMICA DIAGNÓSTICA

LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA I

PRACTICA No. 5
CROMATOGRAFÍA

OBJETIVOS.
Separar y purificar compuestos de una mezcla utilizando el método de
cromatografía.

DEFINICIÓN.
 Cromatografía. Grupo de métodos físicos utilizados para la determinación
de sustancias, separación de componentes en las mezclas complejas y para
su purificación, basados en el principio de retención selectiva.

 Fase Móvil. Liquido o gas que penetra la fase estacionaria y que se mueve
en una dirección determinada.

 Fase Estacionaria. Es la parte que permanece inmóvil durante la

cromatografía, esta puede estar fija en una columna de vidrio o adherida a
un soporte. Esta fase puede ser papel o una resina.

 Revelador. Métodos visuales para la identificación de sustancias coloras e

incoloras, estos pueden ser físicos o químicos.

CARACTERISTICAS DE LOS COMPUESTOS USADOS EN LA FASE MOVIL Y

ESTACIONARIA.
Fase Características de compuesto Ejemplos

Estacionaria Puede ser un sólido, un gel o un Gel de sílice

líquido. Alúmina
Polvo de celulosa

Móvil Puede ser un líquido, un gas o un Hexanol

fluido supercrítico.
 Mezcla de agua y
metanol
Nitrógeno
Argón
Helio

MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS.
 Por su tipo de lecho
 Cromatografía en columna. Técnica de separación donde su fase
estacionaria es más común es el gel de sílice y la alúmina; su fase
móvil son solventes orgánicos.

 Cromatografía en plano. Técnica de separación en donde la fase

estacionaria es en un plano, como la cromatografía en papel o la
cromatografía en capa fina.

 Por el estado físico de la fase móvil

 Cromatografía de gases. Técnica de separación en donde la fase
móvil es un gas. Esta se lleva a cabo siempre en columna. Su fase
móvil es un gas inerte (helio o nitrógeno) y su fase estacionaria un
sólido o un liquido

 Cromatografía líquida. Técnica de separación en donde la fase móvil

es un líquido. Esta se puede realizar en columna o en plano. La fase
móvil es un solvente o una mezcla de ellos, su fase estacionaria es un
sólido que interactúa con las sustancias que se desean separar.

 Cromatografía con fluido supercrítico. Técnica de separación

donde su fase móvil es un líquido ligeramente por encima de su
temperatura y presión críticas. Se usa para análisis y purificación de
moléculas de moderado peso molecular. Se usa comúnmente CO 2
para su fase móvil.

 Por su mecanismo de separación

 Cromatografía de adsorción. Se basa en las diferencias de
afinidades de adsorción de los componentes de la muestra y de un
sólido activo.

 Cromatografía de reparto. Se basa en las diferencias de solubilidad

de los componentes de la fase estacionaria y/o móvil.
  Cromatografía de exclusión. Se basa en las diferencias de tamaño
de las moléculas, en su forma o en su carga.

 Cromatografía de afinidad. Se utiliza para la separación de una

interacción biológica entre el compuesto y la fase.

PREPARACIÓN DE UNA PLACA PARA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.

 Se limpian dos portaobjetos con jabón, se enjuagan con agua destilada y se
dejan secar.
 Se prepara una pasta de 15g de gel de sílice G y 37ml de agua, se agita muy
bien con una varilla.
 Se colocan dos portaobjetos juntos y se sumergen en la pasta y se separan,
quedando una capa fina y homogénea en cada portaobjetos.
 Se dejan secar al aire libre.
 Una vez ya seco el gel, se colocan los portaobjetos en la estufa a 100°C
durante una hora.

¿CÓMO SE PREPARA UNA COLUMNA?

Para preparar una columna, se introduce un absorbente sólido en un tubo cilíndrico
ya sea de vidrio o de plástico. En la base del tubo se coloca un filtro, ya sea un tapón
de algodón, lana de vidrio o frita de vidrio que sujete la fase sólida.

TIPOS DE REVELADORES.
 Químicos
 Yodo
 Ácido Sulfúrico
 2,4-dinitrofenilhidracina
 Verde de Bromocresol
 Paradimetil amino benzaldehído
 Ninhidrina

 Físicos
 Luz ultravioleta
 Adsorbente indicador fluorescente
PROPIEDADES FISICOQUIMICAS DE REACTIVOS Y PRODUCTOS Y SU
CODIGO NFPA.

Compuestos Propiedades Físicas y Químicas Código NFPA

Solido blanco inodoro.

Gel de Sílice Con un punto de fusión de 1710°C
y con un punto de ebullición de
2230°C.
Insoluble.

Alúmina Liquido blanco inodoro.

Solido blanco inodoro.

Celulosa Con una densidad de 1.5g/cm3 a
20°C.
Es insoluble.

Líquido incoloro con aroma a

gasolina.
Hexano Con un punto de fusión de -94.3°C
y con un punto de ebullición de
69°C.
Con una densidad de 0.66 g/cm3 a
20°C.
 Líquido incoloro e inodoro.
Agua Con un punto de fusión de 0°C y un
punto de ebullición de 100°C.
Con una densidad de 1 g/cm3 a
20°C.

Líquido incoloro con un aroma

característico.
Metanol Con un punto de fusión de -98°C y
con un punto de ebullición de
64.5°C.
Con una densidad de 0.792 g/cm3.

Liquido incoloro e inodoro.

Nitrógeno Con un punto de fusión de -209.9°C
y con un punto de ebullición de -
195.8°C.

Solido de color violeta oscuro con

un aroma picante.
Yodo Con un punto de fusión de 113 a
114°C y con un punto de ebullición
de 184.4°C.
Con una densidad de 4,93 g /cm³ a
20°C.
 Líquido de aspecto aceitoso,
incoloro o café, inodoro, pero
concentrado es sofocante.
Ácido Sulfúrico Con un punto de fusión de 3 - -64°C
y con un punto de ebullición de 274
– 280°C.
Es soluble en agua y en alcohol
etílico.

Solido de color naranja o rojo.

Con un punto de fusión de 202°C.
2,4- Es insoluble en agua fría.
dinitrofenilhidraci
na

Polvo solido cristalino de color

amarillo claro o café claro.
Verde de Con un punto de fusión de 217°C.
Bromocresol Es insoluble.

p- Polvo solido de color amarillo claro

dimetilaminobenz con un aroma fuerte.
aldehído Con un punto de fusión de 70 a
75°C y un punto de ebullición de
176 a 177°C.
Soluble en agua a 20°C.

Polvo solido cristalino de color

amarillo.
Ninhidrina Con un punto de fusión de 250°C.
Soluble en agua a 20°C.
 Gas incoloro e inodoro.
Helio Con un punto de fusión de -272°C y
con un punto de ebullición de -
268.94°C.

Gas incoloro e inodoro.

Argón Con un punto de fusión de -189.2°C
y con un punto de ebullición de -
185.9°C.

Referencias
¿Qué es Cromatografía y para qué sirve? (s.f.). Obtenido de Labomersa:
https://labomersa.com/2020/12/15/que-es-cromatografia-y-para-que-sirve/

Base de datos de educación científica de JoVE. (2021). Cromatografía en columna. Obtenido de

Química Orgánica: https://www.jove.com/v/10217/column-
chromatography?language=Spanish

Clasificación según el estado físico de la fase móvil. (s.f.). Obtenido de SECYTA:

https://www.secyta.es/es/node/13

Clasificación según el mecanismo de separación. (s.f.). Obtenido de SECYTA:

https://www.secyta.es/es/node/14

Clasificación según el tipo de lecho cromatográfico. (s.f.). Obtenido de SECYTA:

https://www.secyta.es/es/node/12

Cromatografía. (2019). Obtenido de Enciclopedia de Ejemplos: https://www.ejemplos.co/15-

ejemplos-de-cromatografia/

Cromatografía en columna. (5 de noviembre de 2020). Obtenido de Wikipedia:

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Definiciones básicas. (s.f.). Obtenido de SECYTA: https://www.secyta.es/es/node/10

Ernesto. (23 de diciembre de 2007). Técnicas Cromatográficas. Obtenido de
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Facultad de Farmacia. (27 de marzo de 2008). Practica 3. Obtenido de Univercidad de Granada:

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García Arellanes, J., Hernández Godínez, E., Noguéz Córdova, M. O., Arroyo Razo, G. A., & Miranda
Ruvalcaba, R. (2021). Practica 4. Sublimación. En Manual de Prácticas de Laboratorio de
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Javeriana, P. U. (s.f.). Procedimiento para la gestión de peligro químico. Obtenido de Pontificia

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López Crux, J. I. (30 de enero de 2017). Cromatografia en capa fina. Obtenido de

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