FORMATO DE GUÍAS DE LABORATORIO

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UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA
FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS
PROGRAMA DE QUÍMICA
GUÍAS DE LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA I

PRÁCTICA 4. TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS

INTRODUCCIÓN

La cromatografía es una técnica que permite separar los componentes de una mezcla. Esta separación se
logra utilizando un sistema bifásico: fase estacionaria donde se retienen los compuestos a separar y fase
móvil que desplaza de forma diferencial los compuestos a través de la fase estacionara.

Dependiendo de la naturaleza de las fases, se pueden distinguir distintos tipos de cromatografía:

- Cromatografía sólido-líquido: la fase estacionaria es un sólido y la móvil un líquido.
- Cromatografía líquido-líquido: ambas fases son líquidos y en la estacionaria el líquido se ancla a un soporte
sólido.
-Cromatografía líquido-gas: la fase estacionaria es un líquido no volátil sobre soporte sólido y la fase móvil un
gas.
-Cromatografía sólido-gas: la fase estacionaria es un sólido y la móvil un gas.

La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionaria y la fase móvil atraviesa el sistema desplazando
los componentes de la mezcla a distintas velocidades que dependen de la afinidad de los mismos por cada
una de las fases. Se denomina elución a la migración de los componentes de la mezcla a lo largo de la fase
estacionaria impulsados por la fase móvil.

Concepto de Rf. Distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación / distancia que recorre el
disolvente hasta el frente del eluyente. El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la
muestra (tipo de adsorbente, eluyente, así como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de
saturación, etc.). Tiene una reproducibilidad de ± 20%, por lo que es mejor correr duplicados de la misma
placa.

En el caso de la CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELAGADA O FINA se utiliza una placa recubierta con fase
estacionaria manteniendo un pequeño espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascenderá, por
capilaridad, por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo “manchas” de los
componentes

OBJETIVOS

Reconocer las técnica de cromatografía en capa delgada (CCD) y Cromatografía en Columna (CC), como
técnicas de separación e identificación, sus características y los factores que en ella intervienen.
CONSULTA PREVIA
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1. Clasifique los tipos de cromatografía en función de:

a) En función de la interacción que se establece entre los componentes de la mezcla y las fases
móvil y estacionaria
B) En función del tipo de soporte empleado para la fase estacionaria.
2. Qué es una fase móvil y una fase estacionaria.
3. Defina el concepto de polaridad. Clasifique los solventes más empleados según la polaridad.

MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES REACTIVOS

1 Cromatofolio de silica gel Acetato de etilo (10 ml/grupo)

3 Capilares Hexano (10 ml/grupo)
3 Cámaras de elución Metanol o etanol (200ml/grupo)
3 Pipeta de 5 ml Ortotoluidina (50 mg)
Pinzas Acetofenona (50 mg)
Columna o bureta Sílica (5 g/grupo)
Soporte Universal Algodón
2 Pinzas para soporte U con nuez Violeta de cristal (2 mg/grupo)
4 Erlenmeyer de 50 ml Naranja de metilo (2 mg/grupo)
1 Beacker de 50 ml Trietilamina (5 ml/grupo)
Embudo de vidrio
Probeta de 100 ml
Placas de tinción
Pipeteador
Plancha de calentamiento
Lámpara UV
Cámara de yodo

METODOLOGÍA

1. Cromatografía en capa delgada (CCD), polaridad de las sustancias.

Es un experimento comparativo en el que se desea saber cuál sustancia es más polar y cuál menos polar.

Se dispone de tres disoluciones, previamente preparadas, orto-toluidina (T), acetofenona (A) y una mezcla de
ambos (M). Se introduce un tubo capilar en la disolución B, tomando una pequeña cantidad de la misma y por
su extremo se coloca en una placa de cromatografía, con gel de sílice como adsorbente, una mancha a unos
7 mm del borde izquierdo de la placa y a 1 cm del borde inferior. A la misma altura y a unos 7 mm del borde
derecho se coloca con otro capilar una mancha de la solución T y en la parte central de la placa una mancha
de la solución M de nuevo con un capilar diferente (¡Cuidado, no confundir los capilares de cada disolución!)
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Se dejan secar y se introducen en el interior de una cubeta de cromatografía conteniendo 5 ml de (1: acetato
de etilo, 2: hexano y 3: mezcla de acetato de etilo hexano en proporción 2:8), de modo que el disolvente no
toque la zona en la que se encuentran las manchas.

Se tapa la cubeta y cuando el disolvente ha ascendido a 1 cm del borde superior se saca la placa y se marca
el nivel del disolvente en un extremo de la misma. Se deja secar y se revela la placa en una lámpara de luz
ultravioleta, localizando la posición de cada mancha. Se miden las distancias recorridas por el frente del
disolvente y para cada mancha, y se calcula el valor de Rf.

2. Separación por cromatografía en columna de una mezcla de violeta cristal y naranja de metilo
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Se sujeta la columna, en posición vertical, a un soporte utilizando dos pinzas: una cerca de la llave y otra en la
parte superior y se introduce un pequeño copo de algodón en su extremo inferior. Se coloca un erlenmeyer
debajo de la columna y un embudo en la parte superior (Figura 1).
En un vaso de precipitados se prepara una suspensión con 5g de gel de sílice (adsorbente) y aprox. 50mL de
etanol (eluyente).
Se añade un poco de etanol a la columna y luego se vierte la suspensión previamente preparada en su
interior. Se abre la llave, se golpean suavemente las paredes de la columna mientras dura la sedimentación
del adsorbente para que este se compacte adecuadamente procurando que no se formen burbujas y evitando
que se seque la gel de sílice.
El etanol que se va recogiendo de la columna se incorpora al vaso donde se preparó la suspensión
adsorbente-eluyente para así recuperar la gel de sílice que hubiera podido quedar y se transvasa todo de
nuevo a la columna.

Figura 1. Esquema de montaje de una Cromatografía en Columna

Se deja que el eluyente baje hasta una altura sobre el adsorbente de 1-2 mm, se cierra la llave de la columna
se quita el embudo y con una pipeta se añade cuidadosamente 1 mL de una solución preparada de violeta
cristal y naranja de metilo. Se abre la llave de la columna para que esta disolución quede inmersa en la gel de
sílice y se vuelve a cerrar cuando la disolución de colorantes alcanza una altura de 1 mm sobre el adsorbente.
Se añaden con una pipeta 5mL de etanol con mucho cuidado y muy lentamente para no distorsionar el frente
de la columna. A continuación, se abre la llave y se continúa añadiendo etanol para desarrollar la columna
hasta que se recoja el primer colorante. Después se utiliza una mezcla de disolventes: etanol/trietilamina en
proporción 9:1 como eluyente para el segundo colorante ( Figura 2)
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Figura 21.- Esquema de separación de dos componentes por Cromatografía en Columna

RECOMENDACIONES

1) Para aplicar las soluciones a las cromatoplacas utilice capilares, que previamente deber ser estirados en la
flama del mechero con el fin de que tengan el diámetro adecuado.

2) Precaución, nunca mire directamente la luz ultravioleta, ésta puede causar daños severos al ojo. Una vez
revelada la placa, marque ligeramente con un lápiz el contorno de las manchas para mejor ubicación de las
mismas.

3) Para mayor claridad de los resultados, incluya en su informe los dibujos de las cromatoplacas de todos los
experimentos de esta práctica. Hágala del mismo tamaño de las placas.

CUESTIONARIO
a) En el experimento 1, ¿Cuál de las dos sustancias, la más polar o la menos polar, recorre mayor distancia
en la placa a partir del punto de aplicación? ¿Por qué?
b) En ese mismo experimento, calcular los valores Rf y contestar ¿cuál de las dos sustancias tiene Rf mayor
y cuál menor?
c) ¿Qué significa que una sustancia tenga: Rf < 0.5? Rf = 0.5? Rf > 0.5?
d) ¿Por qué la CCD es un criterio parcial y no total de identificación?
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e) ¿Cuál será el resultado de los siguientes errores en cromatografía en capa fina? - Aplicación de solución
muy concentrada. - Utilizar eluyente de alta polaridad. - Emplear gran cantidad de eluyente en la cámara de
cromatografía.
f) Qué es la adsorción cromatográfica? ¿Qué diferencia existe entre adsorción y absorción?
g) ¿Cómo escogería el disolvente más adecuada para utilizarlo como eleyunte?
h) Enumere los eluyentes y soportes para cromatografía en columna.
i) Qué factores que influyen en una separación por cromatografía en columna.
j) A la vista de los resultados obtenidos en la CCF de la p-toluidina y de la acetofenona, indicar
detalladamente cómo se podría separar una mezcla de estos dos compuestos por cromatografía en columna
utilizando gel de sílice como adsorbente.

BIBLIOGRAFÍA

W. CLARK STILL, MICHAEL KAHN, ABHIJIT MITRA. Rapid chromatographic technique for preparative
separations with moderate resolution. J. Org. Chem., 1978, 43 (14), pp 2923–2925.
HAMMOND C. Experimental Organic Techniques. Freeman & Co. USA, 1999

AULT A. Techniques and Experiments for Organic Chemistry. University Science Books. USA 1998 Pag.113-
121

ROBERTS R.M. Modern Experimental Organic Chemistry. 3rd. Ed. Holt. Rinehart Winston, N.Y., 1979.

CLEMENT B. Organic Chemistry Laboratory Manual. Texas A&M University, USA,2002 Pag. 143-146

AULT A. Techniques and Experiments for Organic Chemistry. University Science Books. USA 1998 Pag.113-
121