UNIVERSIDAD REGIONAL AMAZÓNICA IKIAM

FACULTAD CIENCIAS DE LA VIDA

CÁTEDRA DE FISIOLOGÍA VEGETAL

TRABAJO AUTÓNOMO

AUTORES:
COTACACHI DIEGO, CUNGUAN JOMELY, PRADO ISMAEL,
ROJAS LIZBETH, & VASQUEZ LENIN

DOCENTE:
PhD. JOSÉ MORENO

07 - 08 - 2022

TENA-NAPO-ECUADOR
1. TEMA

Efectos fisiológicos de la sobreexpresión del gen SP6A en Solanum

tuberosum L.

1
 2. PROBLEMATIZACIÓN

En la actualidad la producción de cultivos se ha visto limitada por la presencia de

enfermedades, mismas que tienden a bajar o eliminar su rendimiento o calidad de cosecha
(Cuesta & Rivadeneira, 2021). Durante las últimas décadas el control de enfermedades ha ido
cambiando en cuanto a técnicas de manejo de las mismas. El cultivo de Solanum tuberosum
o conocida como papa es uno de los principales cultivos destinados al consumo mundial. Sin
embargo, al momento, nuevas enfermedades de naturaleza emergente están afectando la
productividad del cultivo de la papa en Ecuador. Por lo expuesto, para mitigar las pérdidas de
producción de papa se han planteado alternativas que han ayudado a

3. JUSTIFICACIÓN

La papa Solanum tuberosum L. es el tercer cultivo más importante de Ecuador y el

segundo cultivo más importante en la Sierra ecuatoriana, después del maíz suave llamado
choclo, con 421.000 toneladas al año la papa es el octavo rubro con mayor producción. La
provincia del Carchi abarca el 35% de la producción a nivel nacional, además el consumo per
cápita es de 24 kg al año. EL Instituto Nacional de Investigaciones Agropecuarias (INIAP) a
través del Programa Nacional de Raíces y Tubérculos (PNRT-papa), desde inicios de los años
sesenta trabaja en el desarrollo de alternativas tecnológicas para mejorar la productividad y
competitividad del rubro en beneficio de los diferentes actores de la cadena productiva.
Tradicionalmente se ha venido trabajando en: el mejoramiento genético, agronomía y manejo
del cultivo, tecnología de producción de semilla, manejo de suelos y fertilización, manejo
integrado de plagas y enfermedades, poscosecha y valor agregado (INIAP, 2021).
Sin embargo en la actualidad con los avances tecnológicos y el uso de alternativas que
minimicen el uso de recursos con la finalidad de mejoras en la producción mediante la
manipulación genética mediante la sobreexpresión del gen SP6. El objetivo de estos
experimentos, como en los experimentos genéticos clásicos, es observar cualquier cambio
fenotípico asociado con el cambio de la expresión de un gen de interés. Cualquier cambio
fenotípico se interpreta y la función del gen nativo se deduce en función de las vías que se
alteran en los transformantes (Lloyd, 2003). La técnica de sobreexpresión de genes para
nuestro caso de estudio puede ser importante para mejorar la productividad induciendo la

2
tuberización y comprendiendo cómo se da el transporte de asimilados en la planta. Si bien el
uso de técnicas de mejoramiento genético puede resultar costosas y poco exploradas en el
Ecuador, los resultados suelen ser efectivos. El siguiente trabajo de revisión bibliográfica se
justifica en el hecho de entender la sobreexpresión del gen SP6A como una posible
alternativa para mejorar la tuberización de la papa en el Ecuador y así mejorar la
productividad y la calidad de vida de los agricultores.

4. OBJETIVOS

4.1. Objetivo General

Evaluar los efectos fisiológicos causados por la sobreexpresión del gen SP6A en Solanum
tuberosum L.
4.2. Objetivos Específicos
● Comprender cómo afecta la sobreexpresión del gen SP6A en la tuberización, el
crecimiento de brotes, crecimiento secundario y de las raíces
● Analizar la función del gen SP6A en la movilización de asimilados bajo el control
de promotores específicos.

5. MARCO TEÓRICO

5.1. Solanum tuberosum L.

La papa es uno de los tubérculos más cultivados y consumidos a nivel mundial. La

producción mundial de papa (Solanum tuberosum L.) se estimó en 388 millones de toneladas
en el 2018. China se lleva el primer puesto como principal productor de papa; otros países
exportadores de papa son India, Rusia y Estados Unidos (Bazantes et. al., 2020).

Por otro lado, Ecuador también es un importante productor y exportador de papa. Este
tubérculo se incluye en la dieta de los ecuatorianos debido a su alto contenido nutricional. La
actividad agrícola es uno de los principales sectores económicos a nivel nacional, generando
empleos principalmente en el sector rural, y también en el sector industrial. Para el 2018,
Ecuador exportó más 350 mil toneladas de papa, 21% más que en el año 2017; su principal
destino de exportación fue Estados Unidos (Bazantes et. al., 2020).

3
 El cultivo de la papa, se centra principalmente en la región andina de Ecuador, más de
50 mil hectáreas se destinan para el cultivo de este tubérculo (MAGAP, s.f). La papa se
cultiva en todas las provincias de la región Sierra, pero las que más volumen producen son
Carchi, Pichincha, Tungurahua, Chimborazo y Cotopaxi (Espinoza, 2020). Carchi es una de
las provincias más productoras de papa, produciendo cerca de 30 t/ha (Espinoza, 2020).

Según el Instituto Nacional de Investigaciones Agropecuarias (Mastrocola et. al.,

2016), en el Ecuador podemos encontrar más de 500 variedades de papa de diferente tipo,
color, forma, tamaño, y sabor. A lo largo del tiempo se han nombrado a las especies de papas
por su forma, lugar de cultivo, o con nombres propios. Las especies que más se cultivan son
la Superchola, Gabriela, Esperanza, Roja, Fripapa y María, esto a correspondiente a la región
norte; en la zona centro se cosecha las papas nativas Uvilla y Leona blanca, también se
cultiva Gabriela, Esperanza y María; y en la zona austral se cosecha la Bolona, Jubaleña, y
Esperanza. Estas y otras especies se cosechan para el comercio interior, exterior y para el
consumo dentro del hogar (Espinoza, 2020).

5.2. Expresión Génica

La expresión génica es un proceso por el cuál se puede modificar la información

codificada de un gen con el fin de producir moléculas de ARN que codifican proteínas o
moléculas de ARN que no codifican, pero cumplen otras funciones. Este proceso actúa como
un interruptor capaz de controlar el momento y el lugar en donde se producen las moléculas
de ARN, proteínas y como un control de volumen que determina la cantidad de materia que
debe producirse. La expresión génica está regulada minuciosamente y cambia
considerablemente de acuerdo con las condiciones que se presente. El producto que genera el
ARN y las proteínas de los genes sirven para la expresión génica. Es así como, la expresión
génica es el proceso en el que la célula produce moléculas que son necesarias mediante la
lectura del código genético escrito por el ADN (Anello et al., 2021).

5.3. Gen SP6A

La tuberización está controlada principalmente por SP6A entre varios otros

reguladores. SP6A es un miembro de la familia de genes de la proteína de unión a
fosfatidiletanolamina (PEBP), conocida por codificar proteínas que regulan el tiempo de

4
floración (FLOWERING LOCUS T (FT)) y la formación de órganos de almacenamiento. La
expresión de SP6A está bajo control de temperatura y duración del día y se correlaciona con
la formación de tubérculos ( Abelenda et al, 2011 , 2014 ; Lehretz et al, 2019 , 2021 ; Navarro
et al, 2011 , 2015 ).

5.4. CYCLING DOF FACTOR1 (CDF1)

Las mutaciones en el factor de transcripción CYCLING DOF FACTOR1 (CDF1) son

las principales responsables de la tuberización en condiciones de día largo (LD). CDF1
reprime la expresión de CONSTANS-like 1 (COL1) que se requiere para la expresión de otro
PEBP, SELF-PRUNING 5G (SP5G). SP5G controla negativamente la expresión de SP6A y
por lo tanto retrasa e inhibe la tuberización. CDF1 está bajo el control de la degradación
proteasomal, que normalmente ocurre bajo LD. La degradación proteosomal de CDF1 está
mediada por la unión de FLAVIN-BINDING KELCH-REPEAT F-BOX (FKF1) y
GIGANTEA (GI). Los alelos de CDF1, que son deficientes en el sitio de unión de GI/FKF1,
no se degradan en condiciones de LD. Esto permite que ocurra la tuberización tanto en LD
como en SD, un requisito previo para el cultivo de papa en Europa.

5.5. Factores que afectan la expresión del gen SP6A

Las temperaturas atmosféricas elevadas promueven el crecimiento y la floración de

los brotes, mientras que se inhibe la inducción y el crecimiento de los tubérculos. Lo más
probable es que la inducción de la floración esté regulada por otro PEBP, SELF PRUNING
3D (SP3D). La inhibición de la tuberización por temperatura elevada es paralela a una
reducción en la expresión de SP6A, independientemente de la vía CDF1. La sensibilidad al
calor de la expresión de SP6A está mediada por un ARN pequeño. La expresión de SES se
induce a temperaturas elevadas y es responsable de la degradación postranscripcional de
SP6A transcripciones. Esto se demostró mediante la expresión de una variante de SP6A con
codón optimizado.

5.6. Sugars Will Event Be Exported Transporters (SWEET)

Para llegar al sistema del floema, la sacarosa se transporta simplásmicamente desde

las células mesófilas a mesófilas a través de los plasmodesmos hasta que alcanza el
parénquima del floema. Aquí, la sacarosa se exporta al apoplasto a través de la salida de
sacarosa unida a la membrana plasmática.transportadores, llamados SWEET (Sugars Will

5
Event Be Exported Transporters). Posteriormente, la sacarosa apoplásmica se carga
activamente en el complejo célula acompañante/elemento criboso mediante proteínas
simportadoras de sacarosa/protones (SUT/SUC) y se transloca a través de los elementos
cribosos a tejidos sumideros distantes siguiendo el flujo másico. Durante el transporte de
larga distancia, la sacarosa se descarga continuamente a lo largo del camino para apoyar el
metabolismo de los sumideros axiales. El exceso de sacarosa descargada radialmente se
vuelve a cargar en el floema y esta descarga y recarga continúa hasta que la sacarosa alcanza
los sumideros terminales. El proceso de descarga y recarga requiere energía y se cree que
limita la asignación de sacarosa a los sumideros terminales, como raíces, flores, semillas o
tubérculos. Los diferentes sumideros terminales compiten por la sacarosa disponible. El
hallazgo de que SP6A es capaz de unirse e inhibir la actividad de SWEET11 dio la primera
indicación de cómo podrían acoplarse la asignación de fotoperíodo y sacarosa (Lehretz et al.,
2021).

6. METODOLOGÍA
6.1. Material vegetal y condiciones de crecimiento.

Se obtuvieron plantas papa de tipo salvaje ( Solanum tuberosum L. 'Solara').

Basándonos en la descripción de ( Rocha-Sosa et al., 1989 ) se realiza la transformación de
las plantas. Las plantas se mantienen y amplifican en cultivo de tejidos en medio Murashige y
Skoog (MS) que debe contener sacarosa al 2%. Las plantas se cultivan en condiciones de
invernadero con 16 h de luz suplementaria. La altura de la planta se mide desde la superficie
del suelo hasta el meristema apical. El índice de cosecha se calculó como la relación entre el
peso fresco del tubérculo por planta y el peso fresco verde por planta. Se tomaron muestras
de hojas de origen completamente desarrolladas (5 a 8 desde arriba).

6.2. Generación de construcciones transgénicas

Para fines de subclonación, se utilizó Escherichia coli XL1 blue (Bullock et al.,
1987). La transformación estable de las plantas se llevó a cabo con la cepa C58C1 de
Agrobacterium tumefaciens. Los plásmidos que expresan HXK y SP6A se generaron
utilizando el método de clonación Golden Gate ( Engler et al., 2008 ; Weber et al., 2011 ;
Werner et al., 2012 ). Los plásmidos usados ​fueron los siguientes KST:AtHXK1;
StLS1:SP6A, similar al KST:AtHXK1+StLS1:SP6A basado en el vector AGM4723 con
resistencia a Kanamicina, marcador para la selección de plantas transformadas.

6
6.3. Extracción de ARN y RT-PCR cuantitativa

Se tomaron muestras de hojas fuente durante la primera mitad del período de luz, 4 h
después del amanecer. El ARN total se aisló de 100 mg de material foliar congelado
moliéndolo en 1 ml de cloruro de guanidio 8 M con β-ME al 0,7 %. La cantidad de ARN se
midió con un espectrofotómetro ND-1000 ( NanoDrop Technologies). La síntesis de ADN
complementario y el análisis cuantitativo de RT-PCR (qPCR) se realizaron como se describe
en Ferreira et al. (2010). Los cebadores utilizados para el análisis de expresión se enumeran
en la Tabla 1.

Tabla 1. Primers usados

Número
interno Nombre Transcript ID Sequence 5`-3`

PGSC0003DMT40001 TTCCGACACCATCGACAA
SS539 qPCR_UBI_fwd 3321 TGT

PGSC0003DMT40001 CGACCATCCTCAAGCTGC
SS540 qPCR_UBI_rev 3321 TT

PGSC0003DMT40006 ACAGTGTATGCCCCAGGT
SS588 qPCR_SP6A_fwd 0057 TG

PGSC0003DMT40006 AACAGCTGCAACAGGCA
SS589 qPCR_SP6A_rev 0057 ATC

AtHXK1_qPCR_ CCTCAAGGCCTTCGAAG
SS873 fwd AT4G29130 AGG

AtHXK1_qPCR_ AAGTCCAGCGTGCATCTC
SS874 rev AT4G29130 AA

7
6.4. Mediciones de azúcar

Los azúcares solubles se extrajeron utilizando aprox. 50 mg de peso fresco molido en

500 μl de etanol al 80% e incubación a 80°C por 1h. El sobrenadante etanólico se secó al
vacío y se resuspendió en 250 μl de agua. Posteriormente, se determinaron los contenidos de
azúcar soluble utilizando un ensayo óptico acoplado como se describió anteriormente (
Hastilestari et al., 2018 ).

6.5. Experimentos de carga de esculina

Se realizó un ensayo de carga de esculina para visualizar el transporte de asimilados

en el floema. Primero, la superficie de la hoja se raspó suavemente con papel de lija para
eliminar la cutícula de las hojas originales. Posteriormente, las hojas se infiltraron con 1 ml
de esculina por hoja (CAS 66778-17-4, Merck, Alemania, solución de 10 mg/ml). Para evitar
el marchitamiento, las hojas cargadas se cubrieron herméticamente con parafilm. Después de
ca. ocho horas, el material vegetal se analizó al microscopio. Se excitó Esculin con una
lámpara de mercurio HBO 50 , se filtró la fluorescencia con un filtro DAPI y se tomaron
imágenes con un microscopio Leica DMR.

7. RESULTADOS

Para la determinación de los resultados fisiológicos mediados por HXK y SP6A se

generaron líneas transgénicas adicionales mediante el promotor KST1 y StLS1
respectivamente. el resultante de estos transgénicos se obtuvieron líneas que HXK o SP6A de
las cuales se dividieron en dos grupos de tres muestras; expresión HXK (líneas 6, 10 y 32) y
expresión de SP6A (líneas 4, 8 y 20) en función de sus niveles de expresión. Por otro lado, se
seleccionaron líneas transgénicas, donde se expresan HXK y SP6A (líneas H + S 17, 27 y
28). Para comparar el rendimiento de las plantas, HXK, SP6A y líneas transgénicas dobles
junto con plantas de tipo salvaje (WT) no transformadas. Las muestras fueron llevadas a un
invernadero para evaluar su desarrollo a los 14 y 29 días, donde; las líneas HXK no hubo
diferencia en desarrollo frente al control, mientras las líneas SP6A y HXK+SP6A
disminuyeron el tamaño de los brotes.

8
 Por otro lado, SP6A reprime el crecimiento de tallos y hojas mediante reducción del
diámetro del tallo y formación de nódulos apicales mediante la escasez de sacarosa mediante
la inhibición de la actividad SWEET11 apoyando en la formación de sumideros terminales.
Esto fue evidenciado en las muestras SP6 y HXK+SP6A. Sin embargo, conjuntamente con la
inhibición de la salida de sacarosa hacia los órganos circundantes el transporte de sacarosa en
el floema debió ser mayor. Para ello, se utilizó el colorante fluorescente esculina. La esculina
es un compuesto orgánico que posee una estructura similar a la sacarosa y funciona con
sustrato de SWEET11 y proteínas SUC o SUT. La esculina entra en el flujo por transporte
activo de sacarosa y es descargada pasivamente por las proteínas SWEET. Estas
características hacen de la esculina un indicador ideal para la carga de sacarosa a través de
SUC/SUT y la fuga a través de los transportadores de salida SWEET. La concentración de
esculina en las hojas WT y HXK + SP6A fue igualmente eficiente. Ocho horas después de la
carga de esculina, se controló su fluorescencia de los entrenudos debajo de las hojas. En el
caso de las plantas WT, una señal difusa de fluorescencia de esculina era visible en el primer
entrenudo debajo de la hoja cargada. A medida que aumentaba la distancia a la hoja cargada,
la señal se debilitaba, hasta desaparecer casi por completo en el 5° entrenudo. El patrón de
fluorescencia observado indica que la esculina se carga eficientemente en el sistema del
floema y que se descarga radialmente desde el floema de transporte hacia las células del
parénquima. En plantas que expresan HXK + SP6A, la fluorescencia de esculina era más
brillante y mucho más enfocada a los haces vasculares. La señal era claramente detectable
incluso en entornos distantes. Esto sugiere que se inhibe la salida de esculina (sacarosa) y que
el transporte de sacarosa a larga distancia es más eficaz en las líneas transgénicas.

En cuanto a la inhibición de la descarga de la sacarosa, se conoce que esta favorece el

crecimiento de los nudos basales y las raíces de Solanum tuberosum L. antes de la
tuberización. Por ende, de acuerdo con los datos que se muestran, las hojas sobreexpresan
SP6A de manera más eficiente. Además, se estima que la fuga de asimilación se reduce a lo
largo de la ruta de transporte aumentando la disponibilidad de la sacarosa en el tallo. Por otra
parte, la ausencia de los tubérculos puede usarse como estimulación para el crecimiento de
los brotes de los nudos basales y por ende el de las raíces. Las plantas que expresan WT o
HXK, SP6A y HXK + SP6A muestran mayor crecimiento en los nudos basales obteniendo
mayor número de brotes; sin embargo, las plantas que expresan HXK no muestran el fenotipo
de ramificación o el crecimiento acelerado del nódulo basal este puede darse debido a que
presenta expresión del SP6A (Figura 1).

9
 Figura 1. Fenotipo de tallo de plantas de patata HXK, SP6A y HXK+SP6A

Ahora, para validar el mejoramiento de la sacarosa puede acelerar el crecimiento de

las raíces igual que el crecimiento de los brotes laterales, las plantas WT y HXK + SP6A se
extendieron en un cultivo de tejidos y se trasplantaron a cultivos de arena. Dentro de dos
semanas se cosecharon las raíces para determinar la longitud y la acumulación de materia
seca en los brotes y raíces. Se obtuvo que las plantas HXK +SP6A mostraron mayor longitud
y peso seco en comparación con las plantas WT (Figura 2). Las plantas transgénicas
expresaron SP6A y HXK juntas, no se puede descartar que la alteración de la regulación de
los estomas pueda tener un efecto positivo indirecto sobre el crecimiento de las raíces. Por lo
que, la biomasa total y el peso de los brotes no difirieron significativamente entre los
diferentes genotipos. Esto condujo a un aumento de la relación raíz a brote de las líneas
transgénicas SP6A en comparación con las plantas que expresan WT y HXK.

10
 Figura 2. Fenotipo de raíz de plantas de papa HXK+SP6A a las dos semanas.

Para conocer el número de tubérculos y el rendimiento de estos se indagó y se obtuvo

que, experimentos anteriores con plantas transgénicas HXK + SP6A mostraron que tanto el
número de tubérculos como el rendimiento aumentaron significativamente en condiciones de
control y estrés abiótico. Sin embargo, ocho semanas después de la transferencia, se
cosecharon las plantas y se determinaron el rendimiento y el número de tubérculos. El
número de tubérculos, el peso medio de los tubérculos y el rendimiento aumentaron en las
plantas transgénicas que expresan SP6A, independientemente de la presencia o ausencia de
HXK. El aumento en el número de tubérculos y el rendimiento indican que los asimilados se
asignan preferentemente al desarrollo de sumideros de almacenamiento, los tubérculos. Dada
la competencia entre los tejidos sumideros, esto debería conducir a un menor suministro de
asimilados de los órganos reproductivos sexuales, las flores (Figura 3).

Figura 3. Formación de tubérculos y floración en plantas de papa HXK, SP6A y

HXK + SP6A.

11
 Por otro lado, la descarga de sacarosa simplástica del floema de transporte, de acuerdo
con los datos presentados anteriormente, la salida radial de sacarosa a lo largo del floema de
transporte se produce principalmente de forma apoplásmica. Sin embargo, el número de
plasmodesmos entre estos tipos de células es bastante bajo. Además, estos plasmodesmos son
en su mayoría cerrados, pero responden a la presión hidrostática. En este caso, la expresión
de SP6A no debería inhibir la descarga radial de sacarosa. Para validar esta hipótesis, se
diseñó un experimento de remoción de tubérculos. La figura 4 presenta una representación
esquemática de la configuración experimental y el flujo de trabajo. Además, los tubérculos
madre también se cubrieron con tierra y las plantas se dejaron crecer hasta que comenzó la
formación de tubérculos.

Figura 4. Influencia de los sumideros de tubérculos en el transporte de azúcar en el floema

del tallo.

12
 8. DISCUSIÓN

Los procesos de la floración y la tuberización son procesos que están vinculados

estrechamente, y el gen SP6A, es un factor clave que contribuye a inducir el proceso de
desarrollo de la tuberización en la papa (Abelenda et al., 2014; Navarro et al., 2011).
Se sabe que SP6A se produce en condiciones óptimas en la hoja y se supone que se transporta
a través del floema hacia los estolones; además de eso, SP6A forma parte de un complejo de
activación de tuberígenos, el cual se encarga de controlar el desarrollo de la formación y el
crecimiento de los tubérculos mediante la activación de genes diana (Teo et al., 2017; Zierer
et al., 2021).

De acuerdo con algunos estudios, aún es incierto el modus operandi de SP6A, pero al
parecer como ya se mencionó previamente, SP6A contribuye al desarrollo de los tubérculos
de papa como un órgano sumidero de almacenamiento. Estudios similares, concuerdan con
este hallazgo y además tienen relación con las proteínas FT. Las proteínas FT tienen la
capacidad de controlar la formación de órganos de almacenamiento como fuentes de
sumidero, como por el ejemplo en el trabajo de Zheng et. al. (2018), en el cual se evidencia
la hinchazón del nabo por parte de las proteínas FT; igualmente se evidencia el crecimiento
de bulbos en la cebolla en el trabajo de Lee et. al. (2013).

Por otro lado, las plantas de patata que sobreexpresan SP6A bajo el control del
promotor StLS1 que es específico de los órganos de la hoja y el tallo, muestran un
crecimiento reducido de las partes altas, con tallos más pequeños y delgados. Además, los
resultados muestran un deterioro en el desarrollo de las yemas axilares de los nudos apicales;
esto indica que hay una reducción de nutrientes hacia el tallo. Otra alteración fisiológica que
se puede evidenciar, es que las plantas que sobreexpresan SP6A parecen más tupidas, con
tallos más pequeños pero en más cantidad (Lehretz et.al., 2021)
Bajo tierra, estas plantas producen un número significativamente mayor de tubérculos
en comparación con WT ( Fig. XX ), similar a estudios previos que utilizan diferentes
promotores o variantes de SP6A (Lehretz et al., 2019 ; Navarro et al., 2011).

Además de estimular la iniciación y desarrollo del tubérculo, la sobreexpresión del

gen SP6A podría regular los flujos de carbono en la planta y así contribuir adicionalmente al
desarrollo de los órganos de almacenamiento. Los resultados muestran que, el fenotipo de los

13
brotes de las plantas que sobreexpresan SP6A indica que podría haber menos carbono
disponible en las plantas transgénicas para suministrar al crecimiento de los brotes, la síntesis
de pigmentos y el crecimiento de las yemas axilares (Lehretz et.al., 2021).

Las plantas que sobreexpresan el gen SP6A, pueden tener proporciones alteradas de
sacarosa que es descargada mediante los apoplastos. Este dato es reconocido por estudios
previos sobre descargas de esculina (Lehretz et.al., 2021). La carga de esculina muestra una
fuga de esculina reducida del floema de transporte de las líneas que sobreexpresan HXK +
SP6A en comparación con las plantas WT.

La sobreexpresión de SP6A sola, es suficiente para aumentar el número de tubérculos

y el rendimiento de tubérculos por lo que una asignación mejorada de asimilados contribuye a
este efecto. Según Viola et al. (2007), durante el desarrollo del tubérculo, el modo de
descarga de sacarosa cambia de la ruta apoplástica, a la ruta simplástica a través de los
plasmodesmos. Este cambio va acompañado de una mayor resistencia al hundimiento del
tubérculo y una acumulación masiva de compuestos de almacenamiento. En consecuencia, la
disminución de la exportación de azúcar al apoplasto de los tallos y tubérculos es un requisito
previo para aumentar la asignación de asimilados (Lehretz et.al., 2021)

En cuanto a la interacción de SP6A con SWEET11, se estipula que esta relación

conduce el flujo de asimilados hacia la fuente del sumidero del tubérculo (Abelenda et al.,
2019). Según Lehretz et.al., 2021, la producción mejorada de tubérculos de las plantas que
sobreexpresan SP6A podría explicarse por tres posibles mecanismos. En primer lugar, la
interacción de SP6A con SWEET11 podría evitar la fuga de sacarosa de las células
acompañantes hacia el apoplasto a lo largo del floema de transporte. Este escenario requiere
que SWEET11 se localice junto con SP6A en las células acompañantes del floema y actúe
allí como un exportador de sacarosa.

La hipótesis de que SWEET11 exporta sacarosa está respaldada por el estudio de

Abelenda, 2019. Abelenda y sus colegas, encontraron una disminución de los niveles de
azúcar apoplásmico de los tallos de las plantas tipo SWEET11-RNAi y SUC2:SP6A, pero un
aumento de los niveles de azúcar en las plantas 35S:SWEET11. La transformación de estas
plantas con SUC2:SP6A bloqueó la fuga de sacarosa y provocó una disminución de los
niveles de sacarosa en el tallo (Abelenda et al., 2019). Si este modelo es correcto, la

14
expresión de SP6A bajo el promotor SUC2 debería dar un fenotipo de tuberización fuerte,
similar al de las plantas que expresan SP6A bajo el control del promotor StLS1.

En contraste, si el gen SP6A está presente en las células del parénquima del floema,
SP6A inhibirá la actividad de SWEET por interacción directa. Esto hará que se inhiba la
captación de sacarosa en estas células, lo cual incrementa los niveles de azúcar en el
apoplasto, lo que provocaría una inhibición de la transporte de sacarosa fuera del floema; por
lo tanto, más sacarosa permanece en el floema (Lehretz et.al., 2021). Si este segundo
postulado se cumpliera, la sacarosa apoplásmica debería ser hidrolizada por enzimas
invertasas unidas a la pared celular, lo que llevaría a una disminución en la proporción de
sacarosa. A pesar de ello, este postulado no parece ser conveniente para los resultados de la
expresión de SP6A, que muestra un aumento de la proporción de sacarosa en tallos que
sobreexpresan el gen mencionado (Lehretz et.al., 2021)

Es así como surge un tercer escenario, el cual podría ser que la sacarosa entre
simplásmicamente en las células del parénquima del floema. Según Lehretz et.al., 2021, la
acción comunitaria de los transportadores de azúcar y las invertasas unidas a la pared celular
funciona como bombas de succión de agua, que mantienen los niveles de sacarosa
apoplásmicos extremadamente bajos. La inhibición de la acción de SWEET por parte de
SP6A en las células del parénquima, bloquearía este mecanismo de bombeo propuesto, lo que
conllevaría a una fuga de sacarosa reducida (Lehretz et.al., 2021).

Si bien el modo exacto de acción de SP6A aún es difícil de determinar, el fenotipo de

las líneas dobles que sobreexpresan HXK + SP6A y SP6A simples, sugiere que los azúcares
se translocan de manera más eficiente a los órganos sumideros subterráneos (Lehretz et.al.,
2021). Este efecto también se observó durante las primeras etapas de desarrollo, antes de que
comenzara la formación de tubérculos. Investigaciones previas, también mostraron que SP6A
reprime el desarrollo de las flores, mientras que la reducción de la expresión de SP6A mejoró
el desarrollo de las flores (Plantenga et al., 2019).

9. CONCLUSIONES

En resumen, los resultados obtenidos respaldan la suposición de que SP6A juega un

papel importante en el desarrollo del tubérculo de papa. Además de su papel establecido

15
como parte del complejo de iniciación del tubérculo, SP6A es un actor importante en la
regulación del equilibrio fuente-sumidero. Controla la dirección del flujo de asimilados hacia
el tubérculo en desarrollo y, por lo tanto, permite mantener un suministro alto de asimilados,
necesarios para el crecimiento del tubérculo. Esto se logra mediante la regulación de la
descarga apoplásmica de sacarosa a los sumideros radiales, probablemente mediante la
inhibición de la salida de sacarosa del floema de transporte. Sin embargo, la sobreexpresión
de SP6A también puede tener efectos perjudiciales, los niveles muy altos de expresión de
SP6A afectan el desarrollo de los brotes. La razón podría ser que la tuberización ocurre
demasiado temprano durante el desarrollo antes de que el brote haya alcanzado la madurez.
Esto da como resultado reducciones en el rendimiento porque el área foliar desarrollada es
demasiado pequeña para producir suficientes asimilados para alimentar a los tubérculos en
crecimiento.

16
 10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Abelenda, S., Bergonzi, M., Oortwijn, S., & Sonnewald, M. (2019). Source-sink regulation is
mediated by interaction of an FT homolog with a SWEET protein in potato report
source-sink regulation is mediated by interaction of an FT homolog with a SWEET
protein in potato. Curr. Biol, 29, 1-9.

Abelenda, J. A., Navarro, C., & Prat, S. (2014). Flowering and tuberization: a tale of two
nightshades. Trends in Plant Science, 19(2), 115-122.

Anello, M., Arnal, N., Barbisan, G., Catanesi, I., & Villegas, E. (2021). Regulación de la
expresión génica. Libros de Cátedra.

Chen, X., Qu, B., Hou, D., Sosso, S., Osorio, R., & Fernie, W. (2012). Sucrose efflux
mediated by SWEET proteins as a key step for phloem transport. Science, 335,
207-211.
Cuesta S. & Rivadeneira, E. (2021). Estado actual de la investigación de la papa en el
Ecuador.

INIAP. (2021). Manual del cultivo de papa para pequeños productores. 3ra. Edición. Instituto
Nacional de Investigaciones Agropecuarias – INIAP.

Lee, R., Baldwin, S., Kenel, F., McCallum, J., & Macknight, R. (2013). FLOWERING
LOCUS T genes control onion bulb formation and flowering. Nature
communications, 4(1), 1-9.

Lehretz, G. G., Sonnewald, S., Hornyik, C., Corral, J. M., & Sonnewald, U. (2019).
Post-transcriptional regulation of FLOWERING LOCUS T modulates heat-dependent
source-sink development in potato. Current Biology, 29(10), 1614-1624.

Lehretz, G. G., Sonnewald, S., & Sonnewald, U. (2021). Assimilate highway to sink
organs–Physiological consequences of SP6A overexpression in transgenic potato
(Solanum tuberosum L.). Journal of Plant Physiology, 266, 153530.

17
Lloyd, A. (2003). Vector construction for gene overexpression as a tool to elucidate gene
function. Methods in molecular biology, 236, 329–344.

Lohaus, H., Winter, B., & Riens, H. (1995). Further studies of the phloem loading process in
leaves of barley and spinach. The comparison of metabolite concentrations in the
apoplastic compartment with those in the cytosolic compartment and in the sieve
tubes. Botanica Acta, 108, 270-275.

Mastrocola, N., Pino, G., Mera, X., Rojano, P., Haro, F., Rivadeneira Ruales, J. E., ... &
Cuesta Subía, H. X. (2016). Catálogo de variedades de papa del Ecuador. Instituto
Nacional de Investigaciones Agropecuarias (INIAP).

Navarro, C., Abelenda, J. A., Cruz-Oró, E., Cuéllar, C. A., Tamaki, S., Silva, J., ... & Prat, S.
(2011). Control of flowering and storage organ formation in potato by FLOWERING
LOCUS T. Nature, 478(7367), 119-122.

Plantenga, S., Bergonzi, J., Abelenda, C., Bachem, R., & Heuvelink, L. (2019). The
tuberization signal StSP6A represses flower bud development in potato. 70, 925-936.

Teo, C. J., Takahashi, K., Shimizu, K., Shimamoto, K., & Taoka, K. I. (2017). Potato tuber
induction is regulated by interactions between components of a tuberigen complex.
Plant and Cell Physiology, 58(2), 365-374.

Viola, J., Pelloux, A., Van Der Ploeg, T., Gillespie, N., Marquis, A., & Roberts, R. (2007).
Symplastic connection is required for bud outgrowth following dormancy in potato
(Solanum tuberosum L.) tubers. Plant Cell Environ, 30, 973-983

Zierer, W., Rüscher, D., Sonnewald, U., & Sonnewald, S. (2021). Tuber and tuberous root
development. Annual review of plant biology, 72(1), 551-580.

Zheng, Y., Luo, L., Liu, Y., Yang, Y., Wang, C., Kong, X., & Yang, Y. (2018). Effect of
vernalization on tuberization and flowering in the Tibetan turnip is associated with
changes in the expression of FLC homologues. Plant diversity, 40(2), 50-56.

18