Laboratorio Bioquímica 2022-1

Informe laboratorio

Práctica 5: Producción de etanol a partir de Sacharomyces

cerevisiae inmovilizada en alginato de calcio.
Daniel Felipe Sánchez Sánchez1 y Brayan Stiven Misar2
1  Ingeniería de producción agroindustrial; danielsasa@unisabana.edu.co

2  Ingeniería Química; brayanmipa@unisabana.edu.co

Abstract:

In this laboratory, the production of ethanol was carried out, from the fermentation of
glucose, using the process called Saccharomyces cerevisiae immobilized in calcium
alginate.

Cellular immobilization was carried out by entrapment. This immobilization procedure

must be carried out by dripping with a 3% w/v calcium alginate solution containing
yeast (Saccharomyces cerevisiae). Once this process has been carried out, it is possible
to show certain factors such as: temperature, pH, ethanol concentration, aeration, which,
depending on the percentage, were affected by fermentation.

In addition to this, different mechanisms were carried out, such as: determination of
sugars by means of DNS and calibration of the curve by means of the refractive index to
calculate the concentration of ethanol produced. Finally, the process of counting cells in
a Neubauer chamber in liquid medium was completed, in order to obtain the number of
cells per unit volume, performing a rule of 3 to find an approximate value for the
number of cells.

Introducción: Las levaduras tienen grandes ventajas

Inicialmente, las levaduras se definen
en los sectores comerciales como lo son
como microorganismos con los cuales
en el área alimenticia, bebidas,
con normalidad estamos en contacto, es
farmacéuticos y enzimas industriales.
posible hallarlos en; plantas, animales e
En general, las levaduras tienen efectos
insectos, sin embargo, no es del
benéficos en la vida humana. A pesar de
conocimiento de muchos, que estos son
esto, el conocimiento acerca de las
también posibles encontrarlos en
lavaduras esta limitado a identificarlas
superficies como las cáscaras de frutas y
como una clase de hongo, que son
nuestra propia piel.
únicamente utilizadas para las
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producciones de vino, cerveza y pan. en la fermentación del pan, cerveza,

No obstante, estos microorganismos vino y producción de alcohol, en donde
tiene una gran importancia en el sector esta levadura es la más resistente a
industrial, ya que son utilizados modelo etanol, resistiendo hasta 14% de etanol
de estudio para enfermedades como; en su medio (Barajas & Saavedra
Alzheimer, Parkinson y cáncer, es por Molina, 2021).
esto que es necesario que se tenga un
mayor conocimiento este Durante la producción de etanol una de
microorganismo. las mejores opciones es por
fermentación a partir de materias primas
Las levaduras, son hongos unicelulares,
ricas en carbohidratos como ;azúcar,
con tamaños aproximados de 3 a 40
almidón, celulosa. Es por esto que
micrómetros, por lo que no existe
usualmente se le designa al etanol
posibilidad de verlas a simple vista.
obtenido por este proceso como
Estos tienen cierto tiempo de
"bioetanol". Entre estas materias primas
reproducción el cual varía entre especies
usadas en estos procesos se encuentran
y es de 2 a 3 horas en las condiciones de
las frutas y vegetales como la caña
crecimiento más favorables. 
de azúcar y la remolacha, los cereales
Una de las especies mayormente
(trigo, maíz, sorgo), los tubérculos
conocida y utilizada es “Saccharomyces
(papas, yuca) y en general, materias
cerevisiae” , su nombre significa
provenientes de ligno–celulosas o de
“levadura comedora de azúcar”. Según
residuos orgánicos (Vázquez, 2007)
diferentes autores, esta especie de
La lavadura “Saccharomyces
levadura fue utilizada como modelo de
cerevisiae” es un microorganismo
estudio de laboratorio desde 1930, ya
inocuo para el ser humano. Es por esta
que tiene grandes ventajas como su gran
razón que este hongo es ampliamente
conservación durante procesos
utilizado en la industria biotecnológica
esenciales que son llevados a cabo por
y farmacéutica en la producción de
las células en humanos, por lo que las
proteínas, péptidos, vacunas y
observaciones de los efectos causados
compuestos altamente valorados en el
por enfermedades como Alzheimer, se
mercado. Esto ocasiona que la levadura
pueden extrapolar a humanos.
sea posible considerarse como una
Como se menciono anteriormente, esta
verdadera “fabrica celular” para la
clase de microrganismos son empleados
producción de diferentes productos,
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tanto de uso terapéutico en el ámbito de empleadas para aumentar los niveles de

la salud como en insumos para a la
industria de alimentos.
A partir de esto, entre los productos
hechos en levaduras se destacan las
vacunas contra la hepatitis A y B, la
hirudina (anticoagulante), la insulina y
el glucagón, hormonas las cuales son
glucosa en sangre. Finalmente, en el
caso de la industria de alimentos, las
levaduras usualmente son utilizadas
para producir amilasas, pectinasas y
glucanasas; enzimas que participan en la
producción de jugos de frutas y
alimentos procesados (chile, 2019).

Metodología:
depositaron 10 gotas de alginato de
Iniciando con la metodología, se hizo
sodio en 10 mL de solución salina
uso del maní como materia prima, para
isotónica estéril,en donde luego se
esto se preparo una solución de 50 mL
transifirio a un balón aforado de 25 mL
de alginato de sodio al 3% p/v, donde
y se llevo al aforo con solución salina
luego se mezclo en alginato hasta que se
para luego llevarla al conteo celular.
solubilizo. Luego de esto se agrego
Una vez formadas las esferas, se debe
lentamente el alginato al agua,con el fin
esperar 60 minutos hasta que tomen
de evitar la formación de grumos. Una
mayor firmeza,y posteriormente se
vez hecho esto, se realizo una
procede a retirarlas de la solución de
esterilización por 20 min, mediante
cloruro de calcio, haciéndolas pasar por
calentamiento a baño María ,luego se
un colador al lado del mechero.
dejo en reposo a temperatura ambiente
Se coloca el Erlenmeyer en un agitador
hasta que alcance una temperatura de
orbital a 200 rpm y 30°C. Luego se
40°C.
tomo una muestra de 1 mL cada dos
Se peso 1,5g de levadura, y este se
horas para medir azúcares reductores y
suspendio en 25 mL de agua destilada
concentración de etanol.Se dejo
estéril y se mezclo con la solución de
fermentar durante 17 horas y una vez
alginato previamente hecha(Todo este
terminado este tiempo, tomamos la
proceso se realizo junto a un mechero
solución de hidróxido de calcio y se
con el fin de evitar contaminación en la
filtra el precipitado. Se coloca en horno
mezcla). Se coloca la suspensión en una
a 60°C para luego determinar la
jeringa estéril y se descargo gota a gota
cantidad de carbonato de calcio y
la suspensión en la solución de cloruro
de calcio 0,1 M en agitación. Se
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posteriormente por estequiometría el Curva de calibración de etanol

dióxido de carbono. mediante determinación de índice de
Determinación de azúcares refracción.
reductores por medio de ácido
Para la cuantificación del etanol, se
dinitrosalicílico (DNS)
debió preparar una curva de calibración
Par determinar el DNS se debió
a partir de las siguientes disoluciones
preparar una curva estándar de la
mostradas a continuación:
siguiente forma: Se colocan en 6 tubos
de ensayo con las disoluciones que se
mostraran a continuación:

Tabla N°2: volúmenes usados para la

Tabla N°1:
preparación para la curva estándar para
determinar los azúcares reductores por
medio de ácido dinitrosalicílico.
preparación de la curva de calibración.
Cámara de Neubauer
Con el fin de realizar el conteo celular

Se tomaron 50μl de la solución y se se hizo uso de esta cámara para esto se

adicionaron en tubos de ensayo, luego debio:

se adicionaron 450μl de agua destilada.

  Se Limpio la cámara y la
Luego a todos los tubos, incluyendo los
lamina de cuarzo con alcohol.
de la curva de calibración se le
adicionan 500μl de DNS (Solución A),   Se reviso la lamina de cuarzo.
después se llevaron los tubos a
ebullición durante 5 minutos e  Se Coloco la lamina de cuarzo

inmediatamente se pasan a agua-hielo. sobre la cámara en forma

vertical.
Se adicionaron 5ml de agua destilada,
se agito y se deja en reposo durante 15  Finalmente, se procedio a llenar

minutos, por último se procedió a medir la cámara.

la absorbancia de cada muestra a 540

nm.
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Por ultimo, para realizar el conteo,

las células se debe contar cuadro por
cuadro y se hace un total. Luego
esto se pasa al ocular de 40X, donde
es posible ver cada uno de los
campos y mediante el carro del
microscopio se desplaza la
cuadricula hasta contar en todos los
cuadros.