PR CE INHIBICIÓN NO COMPETITIVA 28 29 96 2022

4 4) El salicilato inhibe la acción catalítica de la glutamato deshidrigenasa (Ver Tabla N° 1)

(a) Determinar el tipo de inhibición mediante el análisis grático.
(b) Calcular KM del sustrato.
(c) Calcular la constante de disociación del complejo enzima-sustrato.
DATOS: SOLUCIÓN: Requerimimos hallar [S]-1 y vo-1, para
Tabla N° 1 construir la gráfica doble inversa.
[S], vo, mg de producto / min [S]-1, vo-1, (mg de producto / min)-1
mM Sin salicilato Con salicilato, 40 mM mM [salicilato]=0 [salicilato] = 40 mM
1.5 0.21 0.08 0.6667 4.7619 12.5000
2.0 0.25 0.09 0.5000 4.0000 11.1111
3.0 0.28 0.12 0.3333 3.5714 8.3333
4.0 0.33 0.13 0.2500 3.0303 7.6923
8.0 0.44 0.16 0.1250 2.2727 6.2500
16.0 0.50 0.18 0.0625 2.0000 5.5556

Figura N° 4. vo-1, (mg de producto / min)-1 vs [S]-1, (nM)-1

16.00
4.7438 1.8047
11.8603-1 + 4.7438
vo-1 = 11.8603[S] 4.5463
0.39997302
R² = 0.9905 0.396960165
[salicilato] = 40 mM
14.00
0.39846659

12.00
vo-1, (mg de producto / min)-1

10.00

8.00

6.00
= −𝟎. 𝟑𝟗 …

4.00

vo-1 = 4.5463[S]-1 + 1.8047

𝐊𝐌
𝟏

2.00 R² = 0.9818
−

[salicilato]=0

0.00
-0.60 -0.40 -0.20 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00

[S]-1, (nM)-1

a) La inhibición es NO COMPETITIVA.
b) La constante de Michaelis-Menten (KM) es:
c) Constante de disociación del complejo enzima-sustrato (KI):
c.1) Determinación analítica:

c.2.a) Determinación gráfica utilizando las pendientes de la GL-B para cada [I]

[I] Pendiente
0 4.5463
40 11.8603

Figura auxiliar 2.a. Pendiente m de la GL-B, KM/Vmáx, para cada [I]

en mM de salicilato
14

12
Pendiente m de la GL-B, KM/Vmáx

10

8
-K I = -24.5... mM

0
-30 -20 -10 0 10 20 30 40 50 60
[I], mM de salicilato

c.2.b) Determinación gráfica utilizando las intersecciones de la GL-B para cada [I]

[I] Intersección
0 1.8047
40 4.7438

Figura auxiliar 2.a. Intersección de la GL-B, 1/Vmáx, para cada

[I] en mM de salicilato

6.0

5.0
máx,
Intersección de la GL-B, 1/Vmáx,
4.0

3.0

-𝐊 𝐈 = - 24.5... mM 2.0

1.0

0.0
-30 -20 -10 0 10 20 30 40 50

[I] en mM de salicilato