MITOCONDRIAS

“The incredible Machine” Dr. Alejandro Roth

Nat. Geographic Soc. 1985 Fac. de Ciencias.

 Organización morfo-funcional de las mitocondrias

Las mitocondrias poseen dos membranas fosfolipídicas que definen el espacio

intermembranas y la matriz.

ADN mitocondrial

 Mitocondrias de crestas Laminares

Mitocondrias de crestas tubulares.

Glándula suprarrenal Reconstrucción de tomografía de mitocondrias
http://www.drjastrow.de/EMAtlasE.html
con crestas laminares. Tejido: grasa parda.
Perkins et al (1998). J. Bioenergetics and Biomembranes, 30, 431-442.

 Organización morfo-funcional II
Membrana externa: contiene proteínas
integrales: enzimas (i.e. monoamino oxidasa y
canales acuosos débilmente selectivos a
aniones (VDACs) y permeables a moléculas
con PMs hasta 4 o 5 KDa.

Membrana interna: Plegada formando las

crestas mitocondriales. Contiene: lípidos
30% ( PC, PE, cardiolipina) y proteínas
integrales (70%): complejo
multienzimático de la cadena
respiratoria, ATPasa F0F1 o ATP sintasa,
transportadores y canales iónicos

Matriz mitocondrial: contiene enzimas, que

participan en la oxidación de piruvato y
ácidos grasos y las del ciclo del ácido
cítrico. Además, DNA mitocondrial, ribosomas,
tRNA y enzimas para la expresión de los genes
mitocondriales.

Cardiolipina, difosfatidilglicerol

Las mitocondrias son organelos móviles

y activos

Movimiento: Las mitocondrias no son organelos

sésiles. Están asociados al citoesqueleto y
responden a estímulos.

División: ¿qué forma tiene una mitocondria?

Estamos acostumbrados a una visión estática, sin
embargo, las mitocondrias forman retículos
mitocondirales o se dividen en múltiples organelos.

Figure 14-4 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

péptido señal de translocación a mitocondrías+GFP. Lodish et al, 2004

Expresado en levaduras. Microscopía Confocal

Mitocondrias en movimiento por sobre citoesqueleto de microtúbulos. Células H9c2 expresan

tubulinaGFP, con las mitocondrias marcadas con mitoDsRed.
Yi et al, 2004. JCB, Volume 167, Number 4, 661-672

Origen de las Mitocondrias

Carácterísticas probables de los
protoeucariontes
1. Células Depredadoras:
• Gran Tamaño,
• Citoesqueleto
• Núcleo protegido (de las presas y de las enzimas digestivas).

Carácterísticas probables de las ¡¡SIMBIOSIS!!

protomitocondrias

1. ¿Parásitos intracelulares? Poco probable debido a su

eficiente metabolismo.

2. Cadena transportadora de H+ en la membrana.

Probablemente asociada ya a la generación de energía,
pero desarrollada inicialmente para…

3. Sin núcleo definido.

http://ilpoteredellasimbiosi.blogspot.cl/2008/12/lquenes.html

 Eukaryotes Plants
Eucariontes
Plantas

Early diversification of Origin of

algal/plant lineages and plastids
gene transfer to the host
Ancient
protozoon

Early diversification of
eukaryotic lineages and
gene transfer to the host
Ancient
cyanobacterium
Origin of mitochondria

Cianobacterias Arqueobacterias
Ancient The host
proteobacterium that acquired
mitochondria

Protobacterias
Cyanobacteria Proteobacteria
Endosimbiontes Intracelulares que derivaron de procariotes de vidaArchaebacteria libre han dado origen a
dos organelos citoplasmáticos:
the term ‘
NUMTS ’ was coined to designate these nuclear divergence indicates recurrent transfer events, from
Las Mitocondrias se originaron stretches of mtDNA a partir
26
. Numts de
have una α-proteobacteria,
been found in the mientrasTheque
ancient to contemporary. human los cloroplastos
genome has at
derivan de las cianobacterias. Ambos organelos han transferido un número sustancial de genes a sus
ARCHAEBACTERIA nuclear
30
genomes of 27
grasshoppers , primates 28,29
and least 296 different numts of between 106 bp and 14,654
An ancient group of organisms shrimps , and are often mistaken for bona fide bp (90% of the mitochondrial genome) that cover the
hospederos.
that have ribosomes Las
and cell características
31,32
mtDNA . del hospedero de las mitocondrias entire mtDNA circle son controversiales,
. Other 34
studies tallied 612 mtDNA se sabe que
membranes that distinguish 35
Eukaryotic genome sequences have more fully insertions in the human genome , a greater number
estuvo relacionado
them from eubacteria. They con las ARCHAEBACTERIA, pero se desconoce
exposed the scale of integrated mitochondrial and
su organización intracelular
because different sequence conservation criteria for
sometimes show
(procarionte, eucarionte
environmentally extreme cpDNAo intermedio)
in the nuclear genome.y Fragments
sus genética
of organelle Timmis numts
identifying et al, are
2004, Nature
used in differentReviews36
Genetics. 123-135
studies . Older
ecology. DNA are becoming recognized as a normal attribute of numts are more abundant in the human genome than
 S
¿Se puede demostrar que genes mitocondriales son transferibles
al núcleo celular?

Materiales:
a) Mitocondrias aisladas.
b) Cromosomas mitocondriales aislados.
c) ADN de un gen de resistencia a antibióticos antimicóticos
con promotor genético que solo permite expresión en
EUCARIONTES.
d) ADN de proteína fluorescente verde.
e) Levaduras.
f) anti-micótico destruíble por (c)

Método:
1. Insertar (c) y (d) en (b).
2. Ingresar (b) en (a) mediante microinyección
3. Inyectar (a) en (e) y crecer en cantidades enormes.
4. Agregar (f) y estudiar las células que sobreviven
11

 Reacciones químicas en la mitocondria

Hay tres grupos de reacciones que ocurren en la membrana interna y la matriz:

1- Oxidación del piruvato o ácidos grasos a CO2 acoplada a la reducción de los
compuestos portadores de electrones NAD+ y FAD a NADH y FADH2.

2- Transferencia de electrones desde el NADH y FADH2 al O2: ocurren en la

membrana interna y están acopladas al transporte de protones y a la generación de una diferencia
de potencial electroquímico de H+ a través de dicha membrana .

3- Captura de la energía almacenada en el gradiente electroquímico de

protones para la síntesis de ATP por el complejo ATPasa F0F1

e- H+
H+ e- H+
FADH2

H+ H+
H+
Lodish et al. 2004

 alimentos

Etapa 1:
desdoblamiento de proteínas polisacáridos grasas
macromoléculas a
subunidades simples
monosacáridos ácidos grasos
aminoácidos
(ej. glucosa) y glicerol
Etapa 2:

glicolisis
desdoblamiento de ATP
las subunidades a
acetil-CoA y pro- piruvato
ducción de canti-
dades limitadas de
ATP y NADH acetil-CoA

ciclo de
Krebs
Etapa 3:
oxidación completa
del acetil-Coa hasta
CO2 y H2O con pro-
poder reductor
ducción de grandes
NADH
cantidades de ATP y
NADH fosforilación
oxidativa
CR

ATP
O2

NH3 H2O CO2

desechos

 Glicólisis:

Ocurre en el
Citosol de la
célula

Recordar:

Sin Oxígeno-Fermentación

En presencia de oxígeno-
respiración celular

Figure 2-70 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008) Viaje a la Mitocondria

 ¿Qué dominios y estructuras DEBEN reconocer?

Figure 14-10 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

El ATP es un compuesto intermediario clave en una serie de procesos bioquímicos celulares
en los cuales se hidroliza.

ATP ADP + Pi (HPO4-2)

La energía libre de hidrólisis ΔGh del ATP es de aprox. 12 kcal/mol. De esta energía, las
reacciones más eficientes usan aprox. 7 kcal/mol. El resto, aprox. 5 kcal/mol, se libera al
medio en forma de calor.

nicotinamida adenina dinucleótido

+2 e-
+H+

EN RESUMEN:
Para entender las
reacciones en las
+2 e- mitocondrias:
+2H+ SIGAN LOS
ELECTRONES

Estructuras del NAD y del FAD en sus formas oxidadas y reducidas

Transporte de sustratos al interior de la mitocondria:

piruvato y Acil-CoA-de-AcGrasos

 Activación: de piruvato a Acetil-CoA

Las mitocondrias pueden usar piruvato (CH3-CO-COO-) o ácidos grasos como combustible,
para formar la importante molécula portadora activada: acetil CoA.

El piruvato generado durante la glicólisis es transportado a través de las membranas

mitocondriales a la matriz. Allí reacciona con la coenzima A para formar acetil CoA, NADH
y CO2 en una reacción catalizada por el complejo piruvato deshidrogenasa.

complejo piruvato deshidrogenasa

 Fuente de energía en las mitocondrias:
Oxidación mitocondrial de ácidos grasos

En el citosol los ácidos grasos

libres son esterificados a la
coenzima A para formar
acil-CoA en una reacción
exergónica acoplada a la
hidrólisis de ATP a AMP y PPi.

Las moléculas de acil-CoA se

transportan a la mitocondria
donde son oxidadas a acetil
CoA y moléculas de acil CoA
acortadas en dos átomos de
carbono (n-2).

Al mismo tiempo una

molécula de NAD+ es
reducida a NADH y una de
FAD a FADH2.

 Ciclo del ácido cítrico

El paso final de la oxidación de los
carbohidratos y lípidos se produce en el
ciclo del ácido cítrico o ciclo de Krebs.
Reacciones por enzimas en la matriz
mitocondrial. Sustrato fundamental es el
acetil CoA.
Primero, un residuo acetilo del acetil CoA
se condensa con una molécula de
oxaloacetato para dar citrato.
Luego, a través de una secuencia de
reacciones (etapas 2 a 8) cada molécula
de citrato es convertida en oxaloacetato
perdiendo 2 moléculas de CO2 en el
proceso.
En el ciclo, cuatro pares de electrones
son removidos de los átomos de
carbono: tres pares de e- son
transferidos a tres moléculas de NAD+
para formar 3NADH + 3H+ y un par es
transferido al aceptor FAD para formar
FADH2.

 Ciclo del ácido cítrico

ATP formado =?
 Fosforilación oxidativa

La fosforilación oxidativa es el proceso en cual se forma ATP como resultado de la

transferencia de electrones desde el NADH o FADH2 al O2 por medio de una serie de
transportadores de electrones en la membrana interna mitocondrial.

Las reacciones de la vía glicolítica y del ciclo de Krebs producen la conversión de

1 molécula de glucosa en 6 de CO2 y la reducción de 10 NAD+ a 10 NADH y 2 FAD a
2 FADH2.

 Fosforilación oxidativa

La fosforilación oxidativa es el proceso en cual se forma ATP como resultado de la

transferencia de electrones desde el NADH o FADH2 al O2 por medio de una serie de
transportadores de electrones en la membrana interna mitocondrial.

Las reacciones de la vía glicolítica y del ciclo de Krebs producen la conversión de

1 molécula de glucosa en 6 de CO2 y la reducción de 10 NAD+ a 10 NADH y 2 FAD a
2 FADH2.

 Fosforilación oxidativa

 Fosforilación oxidativa

El NADH y el FADH2 transfieren electrones a la cadena respiratoria ubicada en la

membrana interna mitocondrial (MIM) constituida por tres grandes complejos enzimáticos:
el complejo I NADH deshidrogenasa (NADH-CoQ reductasa, 880 kD) , el complejo
III citocromo b-c1 (CoQ-citocromo c reductasa) y el complejo IV citocromo c
oxidasa.

¿Y el complejo II? … tarea

proteína soluble

coenzima Q

 Fosforilación oxidativa
soluble protein

Cada uno de estos complejos actúa

como una bomba de protones
impulsada por el transporte de
electrones. La pérdida de electrones
regenera las formas oxidadas de
NAD+ y FAD y las formas reducidas
del aceptor. Los electrones son coenzima Q (Q)

finalmente transferidos al O2.

Los ΔG de estas reacciones son muy

negativos, indicando éstas son
fuertemente exergónicas.

Al pasar electrones de una molécula

transportadora a la otra la energía
liberada es usada para bombear
protones al espacio intermembranas,
generándose una diferencia de
potencial electroquímico de protones
(ΔμH+) a través de la membrana
interna.

 Síntesis quimiosmótica de ATP

La síntesis de ATP se realiza utilizando la energía almacenada en forma de gradiente

electroquímico de protones a través de la membrana interna, vía la ATPasa F0F1.

Este mecanismo, de un acoplamiento quimiosmótico fue propuesto por Peter Mitchell en

1961, hipótesis que no fue aceptada al comienzo pero después fue comprobada
experimentalmente. P. Mitchell recibió por ello el premio Nobel en 1978.

-120 mV
V
H+
H+
H+ H+

Los 2 componentes del gradiente electroquímico de protones

 Síntesis de ATP

La ATPasa F0F1 funciona

esencialmente como un
motor molecular.
Están formadas por dos
dominios: F1 y F0

El complejo F0F1 o ATPasa

F 0 F 1 acopla el flujo de
protones a favor de su
gradiente a la síntesis de
ATP.
Actúa como una ATP
sintetasa. (3 H+s/ATP)

F0 contiene tres tipos de

subunidades a, b y c .
F1 está compuesto de 5
polipéptidos diferentes: α,
β, γ, δ y ε,

 H+

Síntesis de ATP

La ATPasa F0F1 funciona esencialmente

como un motor molecular.
Están formadas por dos dominios: F1 y F0

El complejo F0F1 o ATPasa F0F1 acopla el

flujo de protones a favor de su gradiente a
la síntesis de ATP.
Actúa como una ATP sintetasa.
Descargue (3 H+s/
el archivo
ATP) Abra Firefox. Vaya a "Archivo" y seleccione "Abrir Archivo"
Abra el archivo descargado

F0 contiene tres tipos de subunidades a, b

yc.
F1 está compuesto de 5 polipéptidos
diferentes: α, β, γ, δ y ε,

ATPasas de membrana tipo F

Están presentes en las membranas plasmáticas de las bacterias, en la membrana tilacoide de
cloroplastos y en la membrana interna de las mitocondrias.
Catalizan la reacción de síntesis de ATP (ΔG > 0) a partir de ADP y Pi.
La energía proviene del gradiente de potencial electroquímico de protones (H+) a través de la
membrana generado por la actividad de la cadena transportadora de electrones. Es decir,
actúan como ATP sintetasas.
Al igual que las ATPasas tipo V están formadas por dos dominios: F1 y F0
El complejo integral F0 contiene tres tipos de subunidades a, b y c: (a1b2c10 en bacterias) y
contiene el canal a través del que se transportan los protones. El complejo F1 está compuesto
de 5 polipéptidos diferentes :α,β, y γ.

ADP + Pi ATP

lumen mitocondria

H+ H+
Lodish et al. 2000 H+ H+
H+ espacio inntermembranas

ATPasas de membrana tipo V

Presentes en las membranas de las vacuolas y en organelos como lisosomas, retículo

endoplásmico, cisternas del aparato de Golgi y vesículas cubiertas, bombean
electrogenicamente H+ desde el citosol al lumen del organelo (hidrolizando ATP).
Una cabeza (V1) hidrofílica que está orientada hacia el citoplasma y donde se realiza la
hidrólisis del ATP.

H+
H+ lumen organelo
H+

citosol

H+

Lodish et al. 2000

 Resumen de la fosforilación oxidativa en mitocondrias

http://www.nature.com/nrg/journal/v2/n5/animation/nrg0501_342a_swf_MEDIA1.html
 ¿Qué dominios y estructuras DEBEN reconocer?

Figure 14-10 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

 Las Mitocondrias: Resumen
(a) (b)

1. Acoplamiento quimio-osmótico "

H
"
H
2. Son organelos característicos de las células eucarióticas,
ΔG>?
resultado de un evento endosimbiótico. 1 CHEMIOSMOTIC EN
ATP ADP " P ADP " Pi
3. En ellas se produce una serie de reacciones de óxido-reducción i ATP
cuya energía libre es utilizada para la síntesis de ATP.H" H"
(a) (b)
4. En las células aeróbicas, el piruvato formado en la glicólisis
(anaeróbica) es transportado a la mitocondria donde es
" oxidado a "
CO2.
H H ΔG>?
Figure 1.2
5. Estas reacciones de oxido-reducción permiten A hypothetical
generar una ‘thylakoid’ to demonstrate
ATP
diferencia en la concentración de protones An ATP
entre el synthase
interior ycomplex
el is1 incorporated
CHEMIOSMOTIC EN
into a phos
ADP " Pi ATP ADP " Pisi ad
exterior de la membrana interna de las that mitocondrias.
the ATP bindingElsite is on the outside.
"
(a) ATP
transporte de los protones a favor deto su H"
be hydrolysed
gradientetode ADP " Pi and Hprotons are pumped i
(a) ATP (b)
concentración (∆G<<0) permite acoplar fosfato a ADP,
is converted to ADP " Pi the energy available fro
generando el grueso del ATP producido por la conversión
decreases, deenergy required to pump further p
while the
glucosa a CO2. ent which " has already been established " steadily incr
H H
equilibrium is attained. (c) If this equilibrium is now d
6. Si las mitocondrias son dañadas desencadenanremoving
procesos ATP,
Figure 1.2de A
Muerte
the ATP synthase
hypothetical will reverse
‘thylakoid’ and attemp
to demonstrate
Celular:
librium
An ATPby synthesizing
synthase ATP.isNet
complex synthesis, into
incorporated however,
a phosw
Producción de Radicales Libres ATP gradient
that the ATP ADP "would
of protons
binding Pi isATP
site rapidly
on collapse
the outside.ADP(a) and
" Paisi ne
ATP ad
Liberación de Citocromo C (señal apoptótica)
established.
H" For continuous
to be hydrolysed to ADP " ATP Pi andsynthesis,
"
protons
H a primary
are pumpedpri
http://www.dnalc.org/media/a/closer_look.swfexample by photons
ATP is converted (hn), is
to ADP "required to pump
Pi the energy protonsfro
available ac
and replenish the gradient of protons. A proton circuit h

 Dudas sobre las Mitocondrias
• ¿Qué función cumple la
presencia de 2 membranas?
• ¿Cuál de las dos membranas es
crucial para la función de las
mitocondrias?
• ¿Cómo se obtiene la energía
para sintetizar ATP?
• ¿qué es una gradiente
electroquímica?
• ¿Por qué presentan crestas
mitocondriales? ¿qué formas
tienen?
• ¿Cómo se hace una tomografía
de una mitocondria en base a
microscopía electrónica?
• ¿cuáles son los posibles
orígenes de las mitocondrias?
¿qué evidencia tenemos de
esto?
• ¿Como se define simbiosis?
• ¿Cuál es la función de la
cardiolipina?
• ¿qué tipo de proteína es la ATP
sintasa?
• ¿En que se diferencia la ATP
sintasa de la Na/K ATPasa?
• ¿Qué enfermedades
mitocondriales pueden afectar
los tejidos de manera
diferencial?

37
Ustedes me pidieron que les mandara
fotos de los esquemas que fuí
dibujando. No digan que no les
adver …

38
tí
 X
¡¡CUIDADO!
Aquí me
equivoqué.
Piruvato no
pasa por un
intermediario de
CoA.

39
!

 alimentos

Etapa 1:
desdoblamiento de proteínas polisacáridos grasas
macromoléculas a
subunidades simples
monosacáridos ácidos grasos
aminoácidos
(ej. glucosa) y glicerol
Etapa 2:

glicolisis
desdoblamiento de ATP
las subunidades a
acetil-CoA y pro- piruvato
ducción de canti-
dades limitadas de
ATP y NADH acetil-CoA

ciclo de
Krebs
Etapa 3:
oxidación completa
del acetil-Coa hasta
CO2 y H2O con pro-
poder reductor
ducción de grandes
NADH
cantidades de ATP y
NADH fosforilación
oxidativa
CR

ATP
O2

NH3 H2O CO2

desechos

41
 Transporte de metabolitos en la
mitocondria Ca2+

La energía del gradiente electroquímico de

protones también se utiliza para el transporte
activo a través de la MIM de una serie de
metabolitos que participan en las reacciones que
ocurren en la matriz mitocondrial, en co-
transporte o contra-transporte con H+.

El transporte de PO4-3 y piruvato hacia la matriz

es mediado por transportadores que acoplan la
entrada de fosfato y piruvato con el flujo de H+ a
favor de su gradiente electroquímico.

La entrada de ADP a la matriz es mediada por un

contratransportador, acoplada a la salida de ATP,
en un proceso impulsado por el gradiente de
potencial. El potencial de membrana impulsa
también la acumulación de Ca2+.

 Comparación de la combustión con las oxidaciones biológicas

(A) Si el hidrógeno se quemara la mayor parte de la energía se liberaría como calor.

(B) En contraste, en las oxidaciones biológicas la energía liberada es almacenada en una
forma útil para la célula por medio de la cadena transportadora de electrones.
El resto de la energía de oxidación es liberada como calor.