FASE II

PRACTICA Nº4

MICOBACTERIUM TUBERCULOSIS

I. INTRODUCCION
 Las infecciones por Micobacterium tuberculosis son un problema de salud pública
en nuestro país por lo cual es importante realizar la correcta identificación de dichas
bacterias empleando medios diagnósticos clínicos e imagenologicos disponibles ,
así como la aplicación de las distintas pruebas laboratoriales destacando a la
coloración de Ziehl Nielsen que es útil para identificar BAAR.

II. OBJETIVOS Y PROCEDIMIENTO

 Discutir la importancia de la identificación microbiana para el diagnóstico,
tratamiento y prevención de enfermedades infecto contagiosas causadas por
Micobacterium.
 Comprender la importancia de la tinción de Zielh Neelsen como una técnica básica
para la observación de microorganismos.

 PROCEDIMIENTO
 1.- Colocar Sobre los bordes del lavadero 2 varillas de vidrio unidas en los extremos
por un tubo de goma.
 2.- Colocar sobre este soporte de varilla, la serie de láminas extendidas y fijadas. 3.-
cubrir la totalidad de de la superficie del extendido con el colorante fucsina básica
fenicada. No olvidar filtrar el colorante antes de efectuar la tinción.
 4.- Calentar suavemente con la llama del mechero de alcohol, por debajo de cada
lamina porta objetos hasta la emisión de vapores, repetir el proceso 3 veces. No
debe hervir la preparación. Si el volumen del colorante disminuye por evaporación
agregar mas colorante hasta cubrir el extendido y dejar enfriar. El tiempo es de
aproximadamente 5 minutos.
 5.- Eliminar la fucsina, dejar caer agua corriente a baja presión sobre la parte que no
tiene el extendido.
 6.- Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con la solución de alcohol
ácido, durante 2 minutos hasta obtener una coloración rosa pálido. De ser necesario
decolorar nuevamente y dejar reposar 1 minuto.
 7.- Eliminar el alcohol ácido, lavar nuevamente la lamina con agua corriente a baja
presión , cuidando de no desprender la película que formo el extendido.
 8.- Cubrir la superficie del extendido con el colorante azul de metileno durante 30
segundos a 1 minuto. Eliminar el azul de metileno y lavar cada lamina con agua a
baja presión.
 9.- Colocar las láminas coloreadas en orden numérico sobre el soporte de madera y
dejar secar al medio ambiente.
III. MATERIAL.

 Solución de hipoclorito de sodio al 5%.

 Hisopos.
 Mechero de Bunsen.
 Estufa a 37°C.
 Placas Petri.
 Asas de Kolle.
 Medios de Cultivo.
 Batería de coloración de Zielh Neelsen
 Microscopio óptico.
 Reactivo

IV. DISCUSIÓN
 Los alumnos reconocerán las características micro morfológicas de este género
bacteriano, así mismo observará y entenderá el fundamento de las distintas
pruebas de identificación.

V. RESULTADOS
 ¿Que características se observan en la tinción de Zielh Neelsen?
La tinción de Ziehl-Neelsen en una técnica de coloración para identificar bacilos
alcohol-ácido resistentes (BAAR). Esta técnica es un tipo de coloración diferencial,
lo que implica el uso de distintos colorantes con la finalidad de crear contraste entre
las estructuras que se desean observar, diferenciar y posteriormente identificar. La
tinción de Ziehl-Neelsen sirve para identificar ciertos tipos de microorganismos,
como: Mycobacterium tuberculosis y nocardias.
Procedimiento:
- Fijación:
- Coloración fucsina básica fenicada: tres vapores
- Decoloración: Alcohol acido 3%.
- Coloración Azul de metileno
- Observación microscópica.

 ¿Cuál es la finalidad de utilizar el Alcohol ácido?

Sirve para la decoloración de las bacterias BAAR- para su posterior coloración con
azul de metileno,
 ¿Cuál es la estructura bacteriana a la que se debe la afinidad de los
colorantes?
El fundamento de esta técnica de tinción se basa en las propiedades de la pared
celular de estos microorganismos. La pared está formada por un tipo de ácidos
grasos llamados ácidos micólicos; estos se caracterizan por presentar cadenas muy
largas. Cuando los ácidos grasos presentan estructuras muy largas, estos pueden
retener los colorantes con mayor facilidad. Algunos géneros de bacterias son muy
difíciles de teñir mediante tinción de Gram, debido al alto contenido de ácidos
micólicos de la pared celular. En la tinción de Ziehl-Neelsen se utiliza el compuesto
fenólico carbol fucsina, un colorante básico. Este tiene la capacidad de interactuar
con los ácidos grasos de la pared celular, la cual es de textura cerosa a temperatura
ambiente. La tinción con carbol fucsina es mejorada en presencia de calor, debido a
que la cera se derrite y las moléculas de colorante se mueven con mayor rapidez
hacia el interior de la pared celular.

 Detalle todo lo observado en prácticas.

BIBLIOGRAFIA
 Microbiología Médica. 8º Ed. Murray Rosenthal Pfaller. 2017
 Microbiología Médica. 27º Ed. Jawetz, Melnick y Adelberg. 2017
 Microbiología Basada en la Resolución de Problemas. 1º Ed. Swapan y Sanjay.
2007
 PRACTICA Nº2

CASO CLINICO – MICOBACTERIAS-BACILLUS-CLOSTRIDIUM

I. OBJETIVOS
 Exponer un caso clínico, teniendo en cuenta las distintas partes de una historia
clínica.
 Exponer los signos y síntomas característicos del cuadro infeccioso
 Dar a conocer la fisiopatología del agente etiológico en revisión.
 Comprender e interpretar las distintas pruebas diagnósticas, así como el
diagnóstico diferencial dependiendo del caso.
 Analizar las conductas terapéuticas a tomar.
 Conocer las medidas preventivas.

II. DISCUSION
Se tomará casos clínicos, exponiendo mediante papeles lo pertinente a cada cuadro
clínico:
 Tuberculosis pulmonar: Paciente, Internista, Laboratorista, Microbiologo,
Farmacologo, Epidemiologo.
 Tétanos : Paciente, internista , laboratorista, microbiologo, farmacologo,
Epidemiologo.
 Antrax : Paciente, Internista, Laboratorista, Microbiologo, Farmacologo,
Epidemiologo.
III. RESULTADO
 Realizar exposición e informe escrito de lo expuesto.

CASO CLINICO 1 CASO CASO

CLINICO 2 CLINICO 3
TUBERCULOSIS
PULMONAR TETANOS ANTRAX

AGENTE Mycobacterium Clostridium Bacillus Anthracis

ETIOLÓGICO Tuberculosis Tetani

FACTORES DE Capacidad de crecimiento Tetanoespasmina- Factor de edema

VIRULENCIA intracelular en los neurotoxina EF, es una adenil
macrófagos termolábil, ciclasa que en
bloquea la combinacion con
liberación de PA forma toxina
neurotransmisores de edema
inhibidores de la
contracción
muscular. Como Factor letal LF,
consecuencia se con el PA
produce una constituyen la
contracción toxina letal, que es
continua que el principal factor
conduce a la de virulencia y
llamada provoca la muerte
contracción en los seres
tetánica. humanos o
animales
infectados

Antigeno
protector PA,
forma un conducto
de membrana que
permite a entrada
de LF y EF en la
celula
 Bacilos delgados,  Aerobios
PRINCIPALES rectos o Es un bacilo Gram grandes 1-
CARACTERISTI ligeramente positivo 3micrometr
CAS DEL curvados. perteneciente a la o
AGENTE  Gram + (tiñen familia
 Gram
mal) Clostridiaceae. En
 Aerobios cultivos frescos positivos
 BAAR: Acido los bacilos se tiñen  extremos
alcohol resistentes de azul, pero, tras cuadrados
 Inmóviles: 24 horas de  disposicion
 carecen de en cadenas
fimbrias crecimiento, largas
 No esporulados, tienden a perder la  esporas en
no capsulados coloración de el centro de
 Patógenos y Gram y aparecen
los bacilos,
Saprófitos teñidos de rojo, su
tamaño está entre no
0.3-2 x 1.5-20 deforman
micras. Forma una al bacillus
endospora
terminal esférica
de mayor diámetro
que la célula
vegetativa, por lo
que la célula con
la espora tiene
aspecto de palillo
de tambor.
Presenta
movilidad gracias
a la presencia de
flagelos peritricos,
aunque algunas
cepas son
inmóviles. En
relación con su
metabolismo, es
anaerobio estricto
y catalasa
negativo.
 Carbunco
PRINCIPALES La infección primaria es Es el responsable cutaneo:
PATOLOGIAS la tuberculosis pulmonar, de el Tétanos, un
DEL AGENTE la tuberculosis diseminada desorden mas comun
ocurre sobre todo en neurológico
pacientes caracterizado por  Carbunco
inmunocomprometidos un aumento del pulmonar:
tono muscular y
espasmos mas agresivo
provocados por la
tetanospasmina.  carbunco
de tubo
digestivo

muy poco frecuente

 Niña de 9 años.
ANAMNESIS  Con adecuado   FILIACIÓN Paciente varón de 51
crecimiento y años, natural y
-Edad: 43 años procedente de Ancash,
desarrollo.
agroganadero, sin
 Calmetizada al antecedentes médicos
nacer, con el resto -Sexo: Masculino
de relevancia.
 del certificado Relato
esquema de -Trabajo: Doce días antes de
vacunación Electricista ingresar al hospital,
vigente. una herida localizada
ANTECEDENT en cara ventral del
 Sin antecedentes
tercio distal de su
personales ni ES
antebrazo derecho
familiares a PERSONALES tuvo contacto directo
destacar, ni noción con carne y vísceras de
de contacto previo -Sin antecedentes una res fallecida en su
con pacientes con médicos localidad. Cinco días
TBC después, presentó una
 Comenzó 24 horas MOTIVO DE pápula indolora
previas con tos CONSULTA: pequeña y pruriginosa
seca, agregó fiebre en la zona de la herida
de hasta 39,5ºC -Recibió una inicial, la cual se
descarga eléctrica ampolló e incrementó
 Dolor abdominal
su volumen. Cuatro
difuso a días después, la
predominio de -Sin heridas
vesícula ampollosa
cutáneas
hemiabdomen inicial devino en una
inferior. úlcera necrótica
-Lumbalgia rodeada de pequeñas
 Febril
 Hemodinámicamen flictenas, asociadas a
dolor intenso en todo
te estable
el antebrazo, con
 Sin síndrome marcado incremento
funcional del volumen y
respiratorio. temperatura. A los dos
días, acudió al centro
de salud de su
localidad, donde le
indicaron que se
trataba de una herida
infectada y le
administraron dos
dosis de penicilina G
clemizol de 1 000 000
UI, vía intramuscular,
y ante la persistencia e
incremento del dolor,
fue referido tres días
después al Hospital
Loayza. Ingresó por
emergencia con dolor
intenso en el brazo
derecho.

EXAMEN A la auscultación Exploración:

CLINICO pleuropulmonar se
evidenció Se evidencio
hipoventilación en cara opistótonos,
axilar de hemitórax trismus y rigidez
izquierdo. generalizada.
 No se evidencio
puerta de ingreso
de la infección.

Se procedió a
realizar 
intubación
orotraqueal,
sedoanalgesia,
relajación
muscular y
administración de
antitoxina tetánica.
 Neutrófilos 12
LABORATORIO Identificación: No están indicadas 750 cel/mL
pruebas de Elevado( valor
Se solicitaron exámenes laboratorio normal
para etiologías como específicas para
gérmenes atípicos y TBC.
Neutrófilos
determinar el
La prueba de la diagnóstico de 2.000 y
tuberculínica (PPD) fue de tétanos. El 7.500/mL)
13 mm y las 3 muestras de diagnóstico se basa  Tiempo de
esputo para búsqueda de en la presentación protrombina
M tuberculosis, clínica. 13,2s (11 a
presentaron examen 13.5s)
microscópico directo  Tiempo parcial
negativo. de
tromboplastina
A los 20 días de iniciado
41,2s(25 a 35s)
el tratamiento
antituberculoso, se recibió  PCR 5,37 mg/
el resultado del cultivo de dL(niveles
expectoración, que inferiores a 0,3
desarrolló M tuberculosis, mg/dL)
confirmando la  CPK total 1
enfermedad tuberculosa. 730 U/L(32 y
294 U/L para
los hombres)
 CPK-MB 51
U/L(0-25 U/L)

Otra especialidad EPIDEMIOLOGÍA RADIOLOGÍA:

(pediatra, nefro,
infecto, etc) El Perú tiene el 14% de Se realizaron
los casos estimados de neuroimágenes
tuberculosis en la Región descartando
de las Américas; Lima patologías del
Metropolitana y el Callao sistema nervioso
 notifican el 64% de los central (SNC). Los
casos de tuberculosis registros
(TB) del país, el 79% de electroencefalográ
los casos de TB ficos de los
multidrogorresistente pacientes
(TB-MDR) y el 70% de mostraron
los casos de TB artefactos por
extensamente resistente temblor muscular
(TB-XDR). con trazados de
fondo normales
una vez que el
paciente estaba
relajado.

TRATAMIENTO Al paciente se le TRATAMIENTO

3 regímenes basados en brindó: DE ELECCIÓN
FARMACOLOGI rifamicina y dos regímenes
CO alternativos de monoterapia -Metronidazol IV CIPROFLOXACIN
con isoniazida diaria. 500mg c/8h x 7 OO
días DOXICICLINA +
 Rifampicina otro antibiótico
 Rifabutina -Midazolam 5-15 adicional
 Rifapentina mcg/kg/h y ( rifampicina,vanco
 Isoniazida Fentanilo 2-7 micina,
 Pirazinamida mcg/kg/h penicilina ,etc)
 Etambutol
-Vecuronio 1-2 PREVENCION
mcg/kg/min
VACUNACIÓN
-Antitoxina HUMANOS
500UI (250UI
deltoides + Población donde la
250UI intratecal) enfermedad es
endémica
-Ventilación
asistida x 21 días Población que
trabaja con
-Morfina + productos de
Metoprolol + animales importados
Sulfato de
magnesio Personal militar

-Diazepam oral

IV. BIBLIOGRAFIA
 Microbiología Médica. 8º Ed. Murray Rosenthal Pfaller. 2017
 Microbiología Médica. 27º Ed. Jawetz, Melnick y Adelberg. 2017
 Microbiología Basada en la Resolución de Problemas. 1º Ed. Swapan