Primera Unidad Farmacología y Bioquímica IV

REUNION DE
PRACTICA N° 01
- DETERMINACION SERICA DE ACIDO URICO --

INTRODUCCION:
El ácido úrico es un producto de la degradación hepática de las bases nitrogenadas purínicas adenina y guanina, que circulan
en la sangre (en el plasma y en los glóbulos rojos humanos) y es la orina su vía de excreción. Un adulto normal produce unos
500 mg de ácido úrico por día. Aproximadamente 80 % de esa cantidad es excretada por orina, el resto se degrada y es
eliminado como CO2 y NH3, o urea.

En el plasma, el ácido úrico alcanza una concentración de 4 a 6 mg/dl. Los varones tienen niveles 1 mg / dl más altos que las
mujeres, diferencia que desaparece después de los 45-50 años de edad. Al pH sanguíneo predomina la forma desprotonada o
urato; a pH menores predomina la forma protonada no disociada o ácido úrico.

En orina, el pH ácido favorece la formación de ácido úrico no disociado y puede precipitar; en alcalinidad, ocurre lo contrario. La
cantidad de uratos excretados varía normalmente de 250 a 750 mg / 24 hrs, cantidad que puede incrementarse con una dieta
rica en purinas.

En el hombre, la uricemia se incrementa después de la ingestión de nucleoproteínas con los alimentos, los que se degradan y
en un primer momento liberan los ácidos nucleicos de las proteínas.

Como sucede con otros constituyentes séricos, la concentración de ácido úrico en suero o plasma depende de un neto balance
entre el grado de síntesis de purinas y fraccionamiento de nucleoproteínas por un lado y, por otro, del grado de eliminación de
ácido úrico. En condiciones patológicas, podemos encontrar concentraciones incrementadas de ácido úrico sérico en la gota,
que es el más común de los desórdenes del metabolismo de las purinas, más frecuente en hombres. También existe
hiperuricemia proveniente de la destrucción excesiva de células (material nuclear) en leucemias y linfomas, policitemias, etc. En
las alteraciones renales severas son comunes los niveles altos de ácido úrico como resultado de una excreción disminuida.

FUNDAMENTACIÓN DE LA TECNICA:
La técnica empleada en la determinación de ácido úrico en sangre, es una técnica enzimática basada en la siguiente reacción:
uricasa POD
Ácido úrico + 2 H2O + O2 alantoína + H2O2 + CO2; 2 H2O + 4-AF + 3,5 DHS Quinonimina

FINALIDAD:
 Realizar la medición sérica de ácido úrico mediante la enzima uricasa.

MATERIAL Y EQUIPOS
 Material de vidrio: tubos de ensayo, pipetas milimétricas.
 Equipo de extracción de muestra: guantes, alcohol, algodón, agujas N° 20, jeringas x 5 cc.
 Equipos: centrífuga, micropipetas x 10 ul, baño maría, espectrofotómetro.
 Muestra: Suero sanguíneo.
 S. Estándar: solución de ácido úrico 10 mg/dl.
 A. Reactivo A: viales conteniendo uricasa (UOD), peroxidasa (POD), 4-aminofenazona (4-AF) y ferrocianuro de potasio.
 A. Reactivo B: solución de diclorohidroxibenceno sulfónico (DHS) en buffer fosfatos pH 7.4.
 Reactivo de Trabajo: disolver el contenido de un vial de Reactivo A en un frasco de Reactivo B. Enjuagar varias veces el vial
con Reactivo B. Mezclar hasta disolución completa. Homogeneizar y fechar.

PROCEDIMIENTO:
1) Extracción de muestras: previa limpieza de la zona con alcohol, se extraerá 5 cc de sangre de la flexura del codo con jeringa
hipodérmica de 5 cc y aguja N° 20, de un paciente en ayunas.
2) Una vez obtenidas las muestras, colocarlas en tubos de ensayo y dejarlas reposar durante 10 minutos.
3) Terminado el reposo, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugarlos a 3000 RPM durante 10 minutos.
4) Finalizado el centrifugado separar el suero para trabajar la determinación.
5) Para la determinación de ácido úrico: En 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) y D (Desconocido),
colocar:

2
 Primera Unidad Farmacología y Bioquímica IV

TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES
B S D
Muestra (suero / ul) -- -- 20.0
Estándar (ul) -- 20.0 --
Reactivo de Trabajo (ml) 1.0 1.0 1.0
Mezclar suavemente e incubar por 5 minutos a 37 °C o 20 minutos a temperatura
ambiente (18 a 25 °C). Retirar, enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm, llevando
el aparato a cero con el blanco.

RESULTADOS:
1) Luego de la incubación de los sistemas, se observa lo siguiente:

B D

2) Lecturas en el espectrofotómetro:
Estabilidad de la mezcla de reacción final
El color de reacción final es estable 30 minutos, por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso.

ACTIVIDADES A DESARROLLAR POR EL ALUMNO:

1) Cálculos de los resultados:
 Cálculo del factor:
10 mg/dl
F=
S
 Cálculo de la concentración de Ácido úrico.
Ácido úrico (mg/dl) = (D – B) x F

2) Interpretación de los resultados.

 Valores Referenciales:
 Hombres: 2.5 a 6.0 mg/dl.
 Mujeres: 2.0 a 5.0 mg/dl.

3) Explique bioquímicamente lo encontrado.

PREGUNTAS DE APLICACIÓN:
1) ¿Cuáles son las fuentes responsables de la producción de ácido úrico?
2) ¿Cuáles son los posibles mecanismos de la sobreproducción directa del ácido úrico?
3) ¿Cuáles son las causas de la hiperuricemia? y ¿Qué es la gota?
4) Esquematice y explique el metabolismo del ácido úrico.
5) Elabore un esquema y explique el uso de alopurinol en el tratamiento de la gota.

2
 Primera Unidad Farmacología y Bioquímica IV

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.
2) Nelson D, Cox M. Lehninger. Principios de Bioquímica. 6ta Edición, Editorial Omega, España, 2011
3) Huamán-Saavedra J. Laboratorio clínico. Procedimiento e interpretación, 2 edición Edit. Universitaria. Trujillo, 2018