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Comunicaciones de investigación bioquímica y biofísica 444 (2014) 199–204

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Comunicaciones de investigación bioquímica y biofísica

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MicroRNA-375 inhibe el crecimiento del cáncer colorrectal al dirigirse a PIK3CA

YihuiWanga,1, Qing Chao Tangb,1, Mingqi Lia, Shixiong Jianga, Xi Shan Wangb,⇑
aDepartamento de Cirugía Colorrectal, Tercer Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Harbin, 150 Haping Road, 150081 Harbin, China
bCentro Oncológico, Segundo Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Harbin, 246 Xuefu Road, 150086 Harbin, China

información del artículo resumen

Historial del artículo: El cáncer colorrectal (CCR) es la segunda causa más común de muerte por cáncer. Los microARN (miARN) representan una
Recibido el 8 de enero de 2014 Disponible clase de pequeños ARN no codificantes que controlan la expresión génica al desencadenar la degradación del ARN o interferir
en línea el 16 de enero de 2014
con la traducción. La expresión aberrante de miARN está implicada en enfermedades humanas, incluido el cáncer. En este
documento, mostramos que miR-375 con frecuencia estaba regulado negativamente en líneas celulares y tejidos de cáncer
Palabras clave:
colorrectal humano en comparación con los tejidos de colon humanos normales. PIK3CA fue identificado como un objetivo
miR-375
potencial de miR-375 por bioinformática. La sobreexpresión de miR-375 en células SW480 y HCT15 redujo la expresión de la
Cáncer colonrectal
proteína PIK3CA. Posteriormente, usando construcciones reporteras, mostramos que la región no traducida de PIK3CA (30
PIK3CA
-UTR) lleva el sitio de unión directa de miR-375. Además, miR-375 suprimió la proliferación de células CRC y la formación de
PI3K
Acto colonias y condujo a la detención del ciclo celular. Además, la sobreexpresión de miR-375 resultó en la inhibición de la vía de
señalización de fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K)/Akt. El silenciamiento de PIK3CA mediado por ARNip bloqueó el efecto
inhibitorio de miR-375 sobre el crecimiento de células CRC. Por último, encontramos que el miR-375 sobreexpresado reprimió
eficazmente el crecimiento tumoral en experimentos con animales de xenoinjerto. En conjunto, proponemos que la
sobreexpresión de miR-375 puede proporcionar una inhibición selectiva del crecimiento de las células CRC al dirigirse a la vía
de señalización PI3K/Akt.
- 2014 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.

1. Introducción cáncer[11]y carcinoma hepatocelular[12]Chang et al. Curiosamente, miR-375

El cáncer colorrectal (CCR) es la principal causa de muerte por cáncer tanto en
hombres como en mujeres, y representa $50,830 muertes por año en los Estados
Unidos.[1]. A pesar de los avances significativos en el manejo del CCR, la
supervivencia de los pacientes con CCR avanzado ha cambiado poco en los últimos
10 años. Por lo tanto, una mayor aclaración de los mecanismos moleculares
subyacentes a la tumorigénesis del CCR y el desarrollo de dianas terapéuticas son
cruciales para esta enfermedad mortal.
Los microARN (miARN) son ARN no codificantes cortos endógenos que
regulan la expresión génica a través de la unión a secuencias
complementarias, preferentemente 30-Regiones UTR de ARNm. Los miARN
están significativamente involucrados en la regulación de funciones
celulares, como el metabolismo, la diferenciación, la proliferación y la
muerte.[2–4], y han sido reconocidos como reguladores importantes en
cánceres humanos, incluido el CCR[5,6]. Los miARN, que funcionan como
supresores de tumores u oncogenes, son útiles como biomarcadores para el
diagnóstico y como dianas terapéuticas para el tratamiento del cáncer.
Se ha indicado la expresión desregulada de miR-375 en varios tipos de
cáncer, incluido el carcinoma oral[7], cáncer de mama[8], adenocarcinoma
esofágico[8], cáncer de pulmón[9], glioma[10], gástrico
puede funcionar como supresor de tumores en algunos tipos de cáncer, como el
cáncer oral.[13], cáncer de ovarios[14], cáncer de cuello uterino[15]y cáncer
gástrico[11]. Por el contrario, miR-375 también puede funcionar como un oncogén
en el cáncer de mama.[dieciséis], Cancer de prostata[17]y otros tipos de cáncer.
Recientes estudios provida han demostrado que la expresión de miR-375 está
significativamente disminuida en tejidos tumorales CRC[18]. En este estudio,
encontramos que miR-375 estaba regulado a la baja en líneas celulares y tejidos
de CRC. Identificamos PIK3CA como un nuevo objetivo de miR-375 en células CRC.
Además, la expresión ectópica de miR-375 en células CRC suprimió el crecimiento
celular. miR-375 funciona como un supresor de tumores al regular a la baja la vía
de la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K)/Akt. en unen vivomodelo de xenoinjerto,
mostramos que miR-375 disminuyó significativamente los volúmenes y pesos de
los tumores. Nuestros datos proporcionaron un posible objetivo diagnóstico y
terapéutico para el tratamiento del CCR.
2. Materiales y métodos
2.1. Muestras

Se obtuvieron pares de tejidos colorrectales humanos normales y

⇑Autor correspondiente. Dirección: Departamento de Cirugía Colorrectal, Instituto de
Cáncer Colorrectal, Segundo Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Harbin, 246
Xuefu Road, 150086 Harbin, China. Fax: +86 451 87220756.
Dirección de correo electrónico:wxshan12081@163.com (X.Wang).
1Yihui Wang y Qingchao Tang contribuyeron igualmente a este trabajo.
malignos después de la revisión y aprobación del Third Affiliated Hospital of
Harbin Medical University entre enero de 2011 y noviembre de 2012.
Ninguno de los pacientes del estudio recibió quimioterapia o radioterapia
antes de la cirugía. El consentimiento informado por escrito fue

0006-291X/$ - ver portada - 2014 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.
http://dx.doi.org/10.1016/j.bbrc.2014.01.028
200 Y.Wang et al. / Comunicaciones de investigación bioquímica y biofísica 444 (2014) 199–204

obtenidos de todos los pacientes. La información clinicopatológica estaba y calculado usando los 2-DDConnecticutmétodo, con U6 snRNA como control
disponible y dos patólogos determinaron los diagnósticos de forma endógeno.
independiente.
2.7. Ensayo de crecimiento celular

2.2. Líneas celulares

Se sembraron células infectadas con Lv-miR-375 o Lv-NC (2000/pocillo) en

Las líneas celulares de cáncer colorrectal humano Caco2, SW480,
HT29, HCT15 y SW620 se obtuvieron de la American Type Culture
Collection (ATCC). Las líneas celulares se cultivaron en medio
modificado DMEM/F12 1:1 suplementado con FBS al 10 % (Invitrogen,
Carlsbad, CA) en las condiciones recomendadas, y las células se
separaron con tripsina-EDTA (Invitrogen).
placas de cultivo de 96 pocillos y se midió el crecimiento celular entre 0 y 5 días
después de la adición de 0,5 mg/ml de solución de MTT (Sigma, St. Louis, MES).
Luego se registró la absorbancia a 490 nm utilizando un lector de microplacas
(Bio-Rad, Hercules, CA). Además, se determinaron los recuentos de células totales
mediante el método de exclusión con azul de tripano utilizando un
hemocitómetro. Los datos presentados son de tres experimentos independientes.

2.3. Ensayo de plásmidos, transfecciones y luciferasa

2.8. Ensayo de formación de colonias

miR-375 se adquirió de Shanghai Gene-Pharma Co (Shanghai,
China), junto con el control negativo (NC). 30-UTR de PIK3CAse amplificó Las células infectadas con Lv-miR-375 o Lv-NC se colocaron en una placa
por PCR a partir de ADN genómico SW480 y se clonó cadena abajo del fresca de seis pocillos y se mantuvieron en DMEM que contenía FBS al 10%.
gen de luciferasa en el vector pGL (Promega, Madison, WI). Los En 24 h, el medio fue reemplazado por medio nuevo. Después de 14 días, las
vectores mutantes que contenían cinco bases mutadas en los sitios de células se fijaron con metanol y se tiñeron con cristal violeta al 0,1%. Las
unión de miR-375 predichos por separado se construyeron utilizando el colonias visibles se contaron manualmente.
kit de mutagénesis dirigida al sitio (Stratagene, La Jolla, CA). Gen
PIK3CA con tipo salvaje 3 de longitud completa0-UTR (PIK3CA-WtUTR) y
2.9. Análisis del ciclo celular
gen PIK3-CA con mutante 30-UTR en 1–5 sitios de unión de miRNA-375
(PIK3CA-MutUTR) se construyeron en el vector pcDNA3.1. miRNA fue
Las células se tripsinizaron y se fijaron con etanol al 70 % a 4 °C durante
transfectado con tipo salvaje o mutantePIK3CA30-Plásmidos UTR en
la noche antes de teñirlas con yoduro de propidio (PI). Los contenidos de
células SW480, utilizando X-tremeGENE (Roche, Penzberg, Alemania).
ADN se detectaron mediante un citómetro de flujo LSRII (BD Biosciences,
Los lisados celulares se recogieron 48 h después de la transfección. La
San Jose, CA). Los datos fueron analizados por Flow Jo (Tree Star, Ashland,
actividad de luciferasa se midió usando un sistema informador de
OR).
luciferasa dual (Promega). Como control interno se utilizó la actividad
Renilla. Cada transfección se realizó por triplicado.
2.10. Animales y crecimiento tumoral subcutáneo

2.4. Producción y transducción de lentivirus

Se compraron ratones desnudos BALB/c machos atímicos (12
semanas de edad, 18–20 g) de Beijing Wei-tong Li-hua Laboratory
Las secuencias de miR-375 se clonaron en el vector lentiviral pGCSIL-GFP.
Animals and Technology Ltd. pautas. Los animales fueron criados en
Antes de la transducción, el lentivirus se filtró a través de un filtro de 0,45yo
condiciones libres de patógenos específicos en jaulas de malla bajo
m filtro polisulfónico de baja unión a proteínas (Millipore, Bedford, MA) y
condiciones controladas de temperatura (23 -C ± 3 -C) y humedad
concentrado con ultracentrífuga Optima™L-100 XP (Beckman Coulter, Miami,
relativa (50% ± 20%), con 10-15 cambios de aire por hora e iluminación
FL). Las células SW480 o HCT15 se infectaron con 20 MOI de lentivirus que
ligera durante 12 ha día. A los animales se les permitió el acceso a
expresa miR-375 (Lv-miR-375) o lentivirus de control (Lv-NC) mediante
comida y agua del grifo ad libitum durante los períodos de aclimatación
infección por rotación durante 2 h, seguido de incubación a 37 °C durante 2
y experimentales. Suspensión de células Lv-miR-375-SW480 o células
h.
Lv-NC-SW480 (1 - 106) en 100yoFui inyectado sc en la región escapular
derecha de ratones desnudos. El tamaño del tumor se determinó cada
2.5. Aislamiento de proteínas y Western blot
5 días mediante la medición con calibre de dos diámetros
perpendiculares de los implantes. El volumen del tumor (mm3) se
Las proteínas totales se extrajeron con tampón de lisis RIPA con
calculó según la fórmula: volumen (mm3= 1/2 - largo - ancho2). Los
inhibidores de proteinasa/fosfatasa (Thermo Scientific, Hudson, NH). El
ratones portadores de tumores se sacrificaron el día 25.
lisado se separó mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con
dodecilsulfato de sodio al 10 %, y el gel se transfirió a una membrana
de PVDF (Millipore). La membrana se bloqueó en leche descremada al
5% y luego se incubó con uno de los siguientes anticuerpos: anti-
2.11. Estadísticas
PIK3CA, anti-p-Akt, anti-Akt, anti-p-mTOR y anti-mTOR o anti-GAPDH
( Biotecnología de Santa Cruz, Santa Cruz, CA). Luego de ser incubados
con anticuerpos secundarios anti-conejo o anti-ratón (Santa Cruz Todos los valores se expresan como media ± SEM. Las diferencias entre los

Biotechnology) por 1 h, los complejos inmunes fueron detectados grupos se analizaron mediante ANOVA de una vía seguido de análisis post hoc de

utilizando el método de quimioluminiscencia mejorada (ECL). Bonferroni según fuera apropiado. APAGSSe consideró significativo un valor
inferior a 0,05.

2.6. Extracción de ARN y PCR en tiempo real (RT-PCR) 3. Resultados

El miARN total se extrajo con el reactivo TRIzol (Invitrogen) de
acuerdo con las instrucciones del fabricante. El ADN complementario se
sintetizó a partir de 5 ng de ARN total, utilizando el kit de transcripción
inversa de miARN Taqman (Applied Biosystems, Foster City, CA). Los
niveles de expresión de miR-375 se cuantificaron utilizando el kit de
ensayo de miARN TaqMan específico de miARN (Applied Biosystems)
3.1. Regulación a la baja de miR-375 en líneas celulares y tejidos CRC
Para investigar el papel de miR-375 en CRC humano, primero examinamos los
niveles de expresión de miR-375 en líneas celulares de CRC. El análisis de RT-PCR
mostró que la expresión de miR-375 estaba marcadamente regulada a la baja en
las cinco líneas celulares de CRC, en comparación con el
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Figura 1.Regulación a la baja de la expresión de miR-375 en líneas celulares y tejidos de cáncer colorrectal humano (CRC). (A) Análisis de PCR en tiempo real de la expresión relativa de miR-375 en cinco líneas celulares de
CRC. Los niveles de transcripción se normalizaron aU6la expresión y los datos se muestran como los niveles relativos comparados con ocho muestras de colon normales. (B) Los niveles de expresión de miR-375 se
examinaron en tejidos CCR primarios con tejidos normales adyacentes emparejados de ocho pacientes individuales. Los niveles de transcripción se normalizaron aU6la expresión y los datos se muestran como los niveles
relativos comparados con la muestra de colon normal correspondiente. (C) miR-375 se reguló negativamente en los tejidos CRC en comparación con los tejidos normales emparejados (norte =cuatro muestras normales,
norte =cuatro muestras de CRC; NCBI/GEO/GSE45349,pag <0,05). Los datos (A y B) se muestran como media ± SEM de tres experimentos independientes.
⁄⁄pag <0.01,⁄⁄⁄pag <0.001.

Figura 2.PIK3CA es objetivo directo de miR-375. (A) Representación esquemática de cinco sitios objetivo putativos de miR-375 enPIK3CA30-UTR. (B) Análisis de transferencia Western de los niveles de proteína PIK3CA en
respuesta a la sobreexpresión de miR-375 en células SW480 (izquierda) y HCT15 (derecha). Se usó GAPDH como control de carga. (C) Representaciones esquemáticas de las construcciones de indicadores de luciferasa que
contienen de tipo salvaje o mutadoPIK3CA30-UTR. (D) Actividad relativa de luciferasa de células SW480 transfectadas con plásmidos que portan 3 de tipo salvaje o mutante0- UTR dePIK3CAgen y miR-375.norte =4. CN:
control negativo. Los datos se muestran como media ± SEM de tres experimentos independientes.⁄pag <0.05,⁄⁄pag <0,01 en comparación con NC.

muestras de tejido de colon normal (Figura 1A). A continuación, para explorar si la
regulación a la baja de miR-375 en líneas celulares de CRC es clínicamente
relevante, comparamos los niveles de expresión de miR-375 entre CRC clínico y
muestras de tejido no neoplásico adyacentes emparejadas de ocho pacientes.
Como se muestra enFigura 1B, la expresión de miR-375 fue menor en las ocho
muestras de tumores CRC, en comparación con las de los tejidos normales
adyacentes. De acuerdo con nuestros resultados, una base de datos publicada
(NCBI/GEO/GSE45349) mostró una regulación a la baja similar de miR-375 en
tejidos tumorales CRC (Figura 1C;pag <0,01). Estos resultados indican que la
expresión reducida de miR-375 es un evento frecuente en las células y tejidos del
CCR humano, que puede estar involucrado en la progresión del CCR.
3.2. PIK3CA es un objetivo directo de miR-375 en células CRC
Usando el servidor web DIANA-microT v5.0[19,20], identificamos a
PIK3CA como un objetivo potencial de miR-375. Hay cinco sitios de unión
putativos de miR-375 ampliamente conservados en vertebradosPIK3CA 30
-UTR (Figura 2A). Para probar que los objetivos miR-375PIK3CA 30-UTR,
transfectamos transitoriamente células SW480 con miR-375 o miARN de
control. En particular, la expresión de PIK3CA disminuyó sustancialmente 48
h después de transfectar miR-375 (Figura 2B). Además, realizamos un
ensayo de reportero de luciferasa. Tipo salvaje de longitud completa 30-UTR
dePIK3CAfue clonado aguas abajo de la luciferasa
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gen en el vector pGL3. Además, se construyeron vectores mutantes que
contenían seis bases mutadas en los sitios de unión predichos y, como se
muestra enFigura 2C. Como se esperaba, miR-375, en lugar de NC, suprimió
significativamente la actividad de luciferasa de los genes informadores que
contenían tipo salvajePIK3CA30-UTR. Además, la inhibición se rescató
parcialmente cuando uno de los sitios de unión estaba mutado o se eliminó
casi por completo con todos los sitios mutados (Figura 2D). Estos resultados
indican que miR-375 se dirige directamente a PIK3CA en células CRC.
3.3. La sobreexpresión de miR-375 inhibe el crecimiento de células CRC
Para investigar la importancia biológica de miR-375 en la tumorigénesis de
CRC, establecimos líneas celulares de expresión estable de miR-375 de SW480 y
HCT15 mediante transducción de lentivirus. El aumento de la expresión de
miR-375 por transducción lentiviral se confirmó mediante RT-PCR (Fig. 3A).
Curiosamente, la sobreexpresión de miR-375 disminuyó significativamente la
proliferación de células SW480 y HCT15 en comparación con el control negativo
mediante el ensayo MTT y los métodos de recuento de células (Fig. 3B y C). A
continuación, llevamos a cabo el ensayo de formación de colonias para evaluar la
tumorigenicidad de una sola célula. Como se muestra en Fig. 3D, la
sobreexpresión forzada de miR-375 redujo el número de colonias supervivientes
de las dos líneas celulares CRC a aproximadamente un 50 % en comparación con
las células infectadas con el vector NC. El análisis de los ciclos celulares confirmó
además que la sobreexpresión de miR-375 condujo a detenciones del ciclo celular
en ambos tipos de células. Nuestros resultados sugieren que miR-375 inhibe el
crecimiento de células CRC.
3.4. miR-375 regula la vía PI3K/Akt en células CRC
Dado que PIK3CA es un miembro importante de la familia PI3K,
examinamos la expresión de componentes clave de la vía PI3K/Akt en células
CRC con o sin sobreexpresión de miR-375. Como se muestra enFigura 4A, los
niveles de Akt y mTOR, los dos componentes principales de la vía PI3K/Akt,
se redujeron drásticamente por miR-375. Además, los niveles de proteína
total y fosforilada de ambas moléculas mostraron los mismos resultados, lo
que indica que miR-375 puede ser un regulador importante de la vía de
señalización de PI3K/Akt. Para investigar si miR-375 afecta el crecimiento de
las células CRC mediante la regulación de PIK3CA, cotransfectamos el siRNA
de PIK3CA junto con miR-375 o NC en células SW480 y HCT15. Los resultados
de ambas líneas celulares mostraron que las células cotransfectadas con
PIK3CA siRNA y NC proliferaron a un ritmo más lento que las células de
control, mientras que las células cotransfectadas con PIK3CA siRNA y
miR-375 no mostraron una mayor reducción en la tasa proliferativa (pag <
0,01; Figura 4B). Para determinar aún más si el efecto de formación
antitumoral de miR-375 está mediado por la regulación negativa de PIK3CA,
clonamos el gen PIK3CA con longitud completa de tipo salvaje o mutante 30
-UTR dePIK3CA en el vector pcDNA3.1 y cotransfectó estos plásmidos con
miR-375 en células SW480 y HCT15 (Figura 4C). Los resultados de Western
blot mostraron que, en presencia de miR-375, el nivel de proteína PIK3CA
aumentó significativamente en células transfectadas con plásmidos PIK3CA-
MutUTR, pero no con plásmidos PIK3CA-WtUTR (Figura 4D).
Consistentemente, el efecto inhibitorio de miR-375 sobre la proliferación de
células CRC

Fig. 3.La sobreexpresión de miR-375 inhibe el crecimiento de células CRC. (A) Análisis de PCR en tiempo real de la expresión relativa de miR-375 en células SW480 o HCT15 transducidas con Lv-NC y Lv-miR375 2 días después
de la transducción. Los niveles de transcripción se normalizaron aU6la expresión y los datos se muestran como los niveles relativos en comparación con las células transducidas con Lv-NC. (B y C) La proliferación de células
SW480 y HCT15 se determinó mediante los ensayos MTT (B) y el método de recuento de células (C).norte =4. (D) Micrografías representativas (izquierda) y cuantificación (derecha) de colonias de células teñidas con cristal
violeta en células SW480 y HCT15 transducidas con Lv-miR-375 o Lv-NC.norte =4. (E) Perfiles del ciclo celular de células SW480 y HCT15 transducidas con Lv-miR-375 o Lv-NC.norte =3. Los datos se muestran como media ±
SEM de tres experimentos independientes.⁄pag <0,05 en comparación con NC.
 Y.Wang et al. / Comunicaciones de investigación bioquímica y biofísica 444 (2014) 199–204 203

Figura 4.La sobreexpresión de miR-375 suprime la vía PI3K/Akt e inhibeen vivoformación de tumores (A) Análisis de transferencia Western de los niveles de proteína mTOR y Akt total y fosforilada en
respuesta a la sobreexpresión ectópica de miR-375 en células SW480 y HCT15. Se usó GAPDH como control de carga. (B) Ensayos de MTT en células SW480 (izquierda) y HCT15 (derecha) transfectadas
con ARNip de PIK3CA y/o miR-375. (C) Representaciones esquemáticas de las construcciones PIK3CA que contienen tipo salvaje (PIK3CA-WtUTR) o mutadasPIK3CA30-UTR (PIK3CA-MutUTR). (D) Análisis de
transferencia Western de los niveles de proteína PIK3CA en células SW480 y HCT15 cotransfectadas con plásmidos miR-375 y PIK3CA-WtUTR o PIK3CA-MutUTR. Las células transfectadas con NC-miRNA y
vectores vacíos se usaron como control. (E) Ensayo MTT en células SW480 (izquierda) y HCT15 (derecha) en respuesta al tratamiento en (D). norte =4. Los datos se muestran como media ± SEM de tres
experimentos independientes. (F) Volúmenes medios de tumores de xenoinjerto en grupos Lv-miR-375 o Lv-NC medidos cada 5 días mediante medición con calibre hasta 25 días. (G) Fotografía de tres
tejidos tumorales representativos de cada grupo a los 25 días después de la inyección. (H) Promedio de pesos tumorales de xenoinjerto a los 25 días.norte =8 en cada grupo.⁄⁄pag <0,01 en comparación
con el grupo Lv-NC.

solo puede ser antagonizado por plásmidos PIK3CA-MutUTR, lo que indica
que miR-375 inhibe el crecimiento de células CRC al unirse a 30-UTR de
PIK3CA y reducción de la expresión de PIK3CA (Figura 4MI). En conjunto,
nuestro resultado indica que miR-375 suprime la proliferación de células
CRC mediante la inhibición de la vía de señalización PI3K/Akt.
se redujo significativamente (Figura 4F-H). Estos hallazgos confirman
además que miR-375 es un gen supresor de tumores en CCR.
4. Discusión

3.5. La sobreexpresión de MiR-375 inhibe la tumorigénesis de células CRC en ratones
desnudos
Para estudiar más a fondo la función de miR-375 en la inhibición del
crecimiento del tumor CRCen vivo,Lv-miR-375-SW480 o Lv-NC-SW480 se
inyectaron por vía subcutánea en ratones desnudos. En comparación con el
control, el volumen tumoral promedio y el peso del grupo miR-375-SW480
Los miARN son reguladores clave de la expresión génica en diversos
tipos de cáncer y son prometedores para el desarrollo de nuevos enfoques
para el diagnóstico y las terapias del cáncer. Estudios recientes indican la
expresión anormal y el significado patológico de miR-375 en varios cánceres
humanos. Parece que miR-375 puede actuar en diferentes tipos de cáncer a
través de diferentes mecanismos. En un estudio sobre el cáncer oral, se
encontró que miR-375 es el miARN menos expresado y
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inhibió el crecimiento de células de cáncer oral al regular el gen CIP2A[13]. En el
cáncer de cuello uterino, miR-375 se asoció con metástasis en los ganglios
linfáticos y el factor de transcripción SP1 se identificó como un objetivo directo de
miR-375[15]. También se demostró que MiR-375 participa en la transdiferenciación
de células epiteliales al inhibir Wnt/b-vía de la catenina
[21]. Más recientemente, se encontró una expresión elevada de miR-375 en
el cáncer gástrico y miR-375 puede desensibilizar las células a la radiación
ionizante y al etopósido al dirigirse a p53[22]. Slaby y sus colegas informaron
la expresión aberrante de miR-375 en CRC[18]. Sin embargo, los
mecanismos detallados que rodean el papel de miR-375 pueden
desempeñar en la tumorigénesis del CCR deben dilucidarse más.
En este estudio, confirmamos la regulación a la baja de miR-375 en líneas
celulares y tejidos de CRC. Más importante aún, identificamos PIK3-CA como
un objetivo de miR-375. La sobreexpresión de miR-375 condujo a una
reducción significativa en el nivel de proteína PIK3CA y la inhibición de la vía
de señalización PI3K/Akt. Además, proporcionamos la primera en vivo
evidencia de que miR-375 inhibió la formación de tumores CRC.
El gen PIK3CA, ubicado en 3q26, codifica el p110asubunidad catalítica de
PI3K. La amplificación del gen PIK3CA se correlaciona con la actividad de la
vía de señalización PI3K/Akt[23]. PI3K es una quinasa lipídica y genera
fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato (PI(3, 4, 5)P3), que funciona como segundo
mensajero para la activación de Akt[24,25]. La proteína Akt activada modula
la proliferación celular a través de numerosos objetivos posteriores, como
Bad, procaspasa-9, objetivo de rapamicina en mamíferos (mTOR), glucógeno
sintasa cinasa-3 (GSK-3), inhibidores de cinasa dependientes de ciclina, P21 y
P27[26]. En el presente estudio, encontramos que la sobreexpresión de
miR-375 regulaba los niveles de proteínas totales y fosforiladas de Akt y
mTOR en células CRC, lo que indica que miR-375 puede ser un regulador
importante de la vía de señalización de PI3K/Akt. Más importante aún,
descubrimos que la inhibición del crecimiento inducida por miR-375 se
puede bloquear eliminando PIK3CA. Todos estos resultados indicaron que
miR-375 reprimió la expresión de PIK3CA, que a su vez, al regular la vía PI3K/
Akt, inhibió el crecimiento de células CRC.
En resumen, nuestro presente estudio demuestra que miR-375 es un supresor
del crecimiento tumoral en el cáncer colorrectal humano, al menos parcialmente a
través de la represión de la vía PI3K/Akt. La capacidad de miR-375 para inhibir el
crecimiento de células CRC puede brindarnos una perspectiva novedosa sobre el
tratamiento del paciente.
Declaracion de conflicto de interes
Los autores declaran no tener conflicto de intereses.
Expresiones de gratitud
Ninguna.
Referencias
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