Capítulo 11

Biosíntesis y acumulación
de carotenoides en el
fruto de tomate
Francesc Hernández-Gras, Karel de Pourcq, Djédoux Maxime
Angaman y Albert Boronat

Relevancia comercial y nutricional del tomate

11. Biosíntesis y acumulación de carotenoides en el fruto de tomate

El tomate (Solanum lycopersicum) es una de las hortalizas más consumidas en el
mundo. Con aproximadamente 160 millones de toneladas producidas en 2012, el
tomate representa uno de los principales cultivos a escala global. En la actualidad los
principales países productores son China, India y Estados Unidos, que contribuyen
aproximadamente con la mitad de la producción mundial (tabla 1). España, con una
producción de aproximadamente cuatro millones de toneladas, es el noveno productor
mundial y el segundo de Europa detrás de Italia (tabla 1). Tomando en consideración
la distribución geográfica de los países productores, se pueden delimitar dos grandes
áreas que concentran la mayor parte de la producción mundial: por una parte, y con
cerca de 40% de la producción, está Asia (excluyendo Medio Oriente), y son China
e India los países más destacados; por otra, la cuenca mediterránea, que representa
aproximadamente 20% del total, donde Turquía, Egipto, Italia y España son los países
productores más importantes.

208
Tabla 1. Principales países productores de tomate en 2012 propiedades adecuadas a tal fin. El consumo creciente del
tomate y sus derivados ha comportado que la superficie
Millones Porcentaje de
Posición País dedicada a su cultivo se haya duplicado durante los últimos
de toneladas producción mundial
veinte años. Las zonas de mayor consumo de tomate son los
1 China 48.6 30.5 países del área mediterránea y Medio Oriente.
2 India 16.8 10.6
3 Estados Unidos 12.5 7.9 De forma similar a otros componentes vegetales de la dieta,
4 Turquía 11.0 6.9 el tomate contiene diversos compuestos, como minerales,
5 Egipto 8.1 5.1 vitaminas y otros de interés en nutrición, que poseen un efecto
6 Irán 6.8 4.3 beneficioso para la salud. Distintos estudios epidemiológicos
7 Italia 6.0 3.7 han establecido una correlación entre las dietas ricas en tomate
8 Brasil 4.4 2.8 y una menor incidencia de enfermedades cardiovasculares y
de ciertos tipos de cáncer. Entre los compuestos con efectos
9 España 3.9 2.4
saludables del tomate destacan el licopeno y el β-caroteno
10 Uzbekistán 2.6 1.6
(figura 4), dos carotenoides que se sintetizan y acumulan en
11 México 2.4 1.5
el fruto durante el proceso de maduración. El licopeno es el
12 Rusia 2.2 1.4
carotenoide coloreado mayoritario (85-90% del contenido
13 Ucrania 2.1 1.3
total) y es el pigmento responsable del típico color rojo del
14 Nigeria 1.5 0.9 fruto maduro. No obstante, los tomates también contienen
15 Túnez 1.3 0.8 importantes cantidades de los carotenoides incoloros fitoeno
16 Portugal 1.2 0.8 y fitoflueno (Fraser y Bramley, 2004; Meléndez-Martínez,

11. Biosíntesis y acumulación de carotenoides en el fruto de tomate

17 Marruecos 1.2 0.8 Fraser y Bramley, 2010). El licopeno posee una potente
18 Grecia 1.2 0.7 actividad antioxidante, al menos in vitro, y su ingesta a través
19 Siria 1.2 0.7 de la dieta se ha asociado con un menor riesgo de padecer
20 Irak 1.1 0.7 cáncer de próstata y patologías cardiovasculares (Krinsky y
Johnson, 2005; Rao y Rao, 2007). Es de destacar que el tomate
Fuente: http://faostat.fao.org/site/567/default.aspx.
representa la principal fuente dietaria de licopeno, ya que su
presencia está restringida únicamente a otros pocos frutos,
como la sandía, la papaya, el pomelo rosado o toronja y la
El tomate se comercializa fresco y en forma de productos guayaba. El β-caroteno es el segundo carotenoide coloreado
procesados, como zumos o jugos, salsas, triturados o más abundante en el fruto y puede representar 10-15% de
concentrados. Mientras que el tomate fresco debe tener unas los carotenoides coloreados totales. Sus beneficios para el
características organolépticas que satisfagan al consumidor, organismo son múltiples y derivados principalmente de su
el tomate para uso industrial debe tener además otras metabolización a retinol (vitamina A), un compuesto esencial

209
para la funcionalidad de determinados órganos y de gran
importancia también en el proceso de la visión (Von Lintig y
Vogt, 2004). Además, el β-caroteno se ha relacionado con
una disminución del riesgo de padecer cáncer de pulmón y
enfermedades cardiovasculares (Krinsky y Johnson, 2005; Fritz
et al., 2011). A diferencia del licopeno, el β-caroteno presenta
una amplia distribución en alimentos de origen vegetal (Fraser
y Bramley, 2004; Krinsky y Johnson, 2005). El tomate contiene
también cantidades importantes de los carotenoides incoloros
fitoeno y fitoflueno (que suelen ser los mayoritarios después del
licopeno) y niveles relativamente bajos de xantofilas, siendo
la luteína la más abundante (Meléndez-Martínez et al., 2010).
Conjuntamente con la zeaxantina, la luteína tiene un papel
importante en el proceso de la visión. Ambos carotenoides son
componentes del pigmento macular del ojo y se acepta que
su ingesta a través de la dieta disminuye el riesgo de padecer
degeneración macular asociada a la edad (Fraser y Bramley,
2004). De forma similar al β-caroteno, la luteína se encuentra
también presente en una gran variedad de frutas y hortalizas
(Fraser y Bramley, 2004).
Además de su papel como pigmentos y de su relevancia
nutricional, los carotenoides actúan como precursores de
compuestos volátiles que contribuyen al aroma y el sabor
del fruto (Simkin et al., 2004). En este sentido, es interesante
indicar que el contenido de carotenoides del fruto del tomate se
ha correlacionado con la aceptabilidad de sus características
sensoriales por parte de los consumidores (Vogel et al., 2010).
Biosíntesis de carotenoides
durante la maduración
del fruto y su regulación
En las plantas, todas las etapas de la biosíntesis de
carotenoides tienen lugar en los plástidos mediante la acción
de enzimas importadas desde el citosol y codificadas por
genes nucleares. Al igual que el resto de los isoprenoides,
los carotenoides se sintetizan a partir de los precursores de
5-carbonos isopentenil difosfato (IPP) y dimetilalil difosfato
(DMAPP) (Bouvier, Rahier y Camara, 2005; Cazzonelli y
Pogson, 2010). Las plantas contienen dos vías metabólicas
para la síntesis de IPP y DMAPP, la vía del mevalonato (MVA)
localizada en el citosol-retículo endoplasmático y la vía
del metileritritol 4-fosfato (MEP) localizada en los plástidos
(Rodríguez-Concepción y Boronat, 2002; Hemmerlin, Harwood
y Bach, 2012; Rodríguez-Concepción et al., 2013). En el
caso particular de los cromoplastos del fruto del tomate,
se ha descrito que los carotenoides se sintetizan de forma
mayoritaria a partir de IPP y DMAPP sintetizado por la vía
del MEP (Enfissi et al., 2005; Rodríguez-Concepción, 2010).
11. Biosíntesis y acumulación de carotenoides en el fruto de tomate
La adición secuencial de tres moléculas de IPP al DMAPP,
catalizada por la enzima geranilgeranil difosfato (GGPP)
sintasa (GGPS), resulta en la formación de GGPP (compuesto
de 20 átomos de carbono). El primer paso específico de la
carotenogénesis es la conversión de GGPP en fitoeno (15-cis-
fitoeno), un intermedio no coloreado de 40 átomos de carbono,
en el estroma plastídico (figura 1). Esta reacción, catalizada
por la fitoeno sintasa (PSY) constituye una de las principales
etapas limitantes en la biosíntesis de carotenoides (Fraser et
al., 2002; Cazzonelli y Pogson, 2010). El mutante yellow-flesh
(r), que produce frutos con el pericarpo amarillento debido a
la falta de acumulación de carotenoides, está afectado en el
gen que codifica para la isoforma PSY1 (Fray y Grierson, 1993)
210

Figura 1. Representación esquemática de la biosíntesis de
carotenoides en el fruto del tomate. Los carotenoides presentes en
cantidades muy bajas en el fruto, pero relativamente abundantes en
los tejidos vegetativos de la planta, se indican en color gris. El grosor
de las flechas refleja de forma aproximada la expresión y actividad de
las enzimas implicadas. Abreviaturas: GGPS, geranilgeranil difosfato
sintasa; PSY1, fitoeno sintasa; PDS, fitoeno desaturasa; PTOX,
oxidasa terminal plastídica; ZDS, z-caroteno desaturasa; CrtISO,
caroteno isomerasa; ZISO, z-caroteno isomerasa; LCY-B2, licopeno
β-ciclasa específica de cromoplastos; LCY-E, licopeno ε-ciclasa;
CHY, caroteno hidroxilasa; VDE, violaxantina de-epoxidase; ZEP,
zeaxantina epoxidase.
y cuya expresión se induce fuertemente al inicio del proceso
de la maduración (Giorio, Stigliani y D’Ambrosio, 2008). Se ha
descrito recientemente que el factor de trascripción RIPENING-
INHIBITOR (RIN) interacciona con la región promotora del
gen PSY1 para activar su expresión (Martel et al., 2011). De
acuerdo con su papel regulador en la síntesis de carotenoides,
la sobreexpresión de PSY1 resulta en un incremento del
contenido de licopeno y β-caroteno en el fruto (Fraser et
al., 2007). El fitoeno se convierte posteriormente (todo-E)-
licopeno mediante la acción secuencial de las enzimas fitoeno
desaturasa (PDS), ζ-caroteno desaturasa (ZDS) y caroteno
isomerasa (CrtISO) (Figura 46). La oxidasa plastídica terminal
(PTOX) participa en el proceso de desaturación del fitoeno
catalizado por la PDS transfiriendo electrones al oxígeno
y utilizando la plastoquinona como intermediario (Carol y
Kuntz, 2001). Los mutantes ghost (gh), defectivos en PTOX,
muestran frutos amarillentos debido a los bajos niveles de
licopeno sintetizados (Barr et al., 2004). Los mutantes gh están
también afectados en la síntesis de carotenoides en otros
tejidos de la planta. La caracterización del mutante tangerine
(t), que presenta frutos de color anaranjado, permitió aislar el
11. Biosíntesis y acumulación de carotenoides en el fruto de tomate
gen crtISO, el cual codifica para una enzima que cataliza las
etapas de isomerización necesarias para transformar el poli-
cis-licopeno sintetizado por la ZDS en (todo-trans)-licopeno
(Isaacson et al., 2002). Estudios recientes indican que el
proceso de conversión del ζ-caroteno en licopeno implicaría
también la participación de una ζ-caroteno isomerasa (ZISO)
y de dos enzimas CrtISO-like. Se ha propuesto también que
CrtISO y ZISO podrían formar complejos enzimáticos con PDS
y ZDS respectivamente (Fantini et al., 2013)
El licopeno puede ser convertido en α-caroteno y β-caroteno
por la acción de la ε-licopeno ciclasa (LCY-E) y la β-licopeno
ciclasa (LCY-B) respectivamente. A partir de estos
211
compuestos, la hidroxilación de los anillos del β-caroteno
conduce a la formación de zeaxantina y violaxantina, mientras
que la hidroxilación de los anillos del α-caroteno resulta en la
formación de luteína (figura 1) (Cazzonelli y Pogson, 2010).
El tomate contiene dos genes que codifican para LCY-B,
LCY-B1(CRTL-B) y LCY-B2 (CYC-B). La expresión de LCY-B2
se induce de forma transitoria en las primeras etapas de la
maduración del fruto (Ronen et al., 2000). El gen LCY-B2
fue identificado en el mutante Beta (b), que presenta niveles
elevados de β-caroteno en el fruto. Los frutos del mutante
old-gold (og), defectivo en LCY-B2, muestra un color rojo
muy intenso debido al incremento de los niveles de licopeno
combinado con la ausencia de β-caroteno (Ronen et al., 2000).
Al inicio de la maduración del fruto del tomate (cuando
la coloración naranja-roja ya es aparente) se empiezan a
sintetizar carotenoides de forma muy activa, y el licopeno es
el que se acumula de forma mayoritaria en el fruto maduro
(Fraser et al., 1994). La acumulación del licopeno en el fruto
del tomate se produce como consecuencia de la intensa
activación de la expresión de los genes que codifican
para PSY1 y PDS asociada a una fuerte disminución de la
expresión de las ciclasas que actúan sobre el licopeno (LCY-E
y LCY-B1) (Hirschberg, 2001). El β-caroteno presente en el
fruto maduro estaría asociado a la expresión transitoria de
gen LCY-B2 durante las primeras etapas del proceso de
maduración. El inicio de la biosíntesis de carotenoides en el
fruto se correlaciona con la inducción de genes que codifican
enzimas reguladoras de la vía del MEP, como la desoxixilulosa
5-fosfato sintasa (isoforma DXS1) y la hidroximetilbutenil
difosfato reductasa (Lois et al., 2000; Botella-Pavía et al., 2004;
Paetzold et al., 2010; Rodríguez-Concepción, 2010). Plantas
transgénicas que sobre-expresan la DXS de E. coli dirigida a
los plastos muestran niveles incrementados de carotenoides
en el fruto. Eso indica que el aporte de IPP y DMAPP a través
de la vía del MEP es un factor limitante en la biosíntesis de
carotenoides en los cromoplastos (Enfissi et al., 2005).
Ciertos aspectos relacionados con los mecanismos que
regulan la síntesis y acumulación de carotenoides en el fruto
se han puesto de manifiesto a partir de la caracterización de
mutantes que muestran niveles alterados de carotenoides.
De especial relevancia ha sido el análisis molecular de los
mutantes high pigment (hp1, hp2 y hp3) que presentan
niveles elevados de carotenoides tanto en las hojas como
en los frutos. El mutante hp2, que se caracteriza por una
elevada acumulación de carotenoides y otras moléculas,
como flavonoides y vitaminas C y E, mostró estar afectado
en la expresión del gen DE-ETIOLATED (DET1), que codifica
para un regulador negativo de la fotomorfogénesis (Mustilli et
al., 1999). La supresión específica de DET1 en el fruto resulta
en un aumento significativo de los niveles de carotenoides
y flavonoides sin afectar otros parámetros (Davuluri et al.,
2005). Estudios posteriores mostraron que los elevados
niveles de carotenoides observados en las líneas defectivas
11. Biosíntesis y acumulación de carotenoides en el fruto de tomate
en DET1 no se deben a cambios en la expresión de genes
relacionados con su biosíntesis sino a la alteración de ciertos
parámetros relacionados con características de los plástidos
(Enfisi et al., 2010). Los mutantes hp2 y hp3 están afectados
en los genes UV-DAMAGED DNA-BINDING PROTEIN 1
(DDB1) y ZEP (que codifica para zeaxantina epoxidasa)
respectivamente (Lieberman et al., 2004; Galpaz et al., 2008).
El análisis molecular de los mutantes hp1 y hp3 ha puesto
de manifiesto que su elevado contenido de carotenoides
está mayoritariamente asociado al incremento del número y
tamaño de los plástidos (Cookson et al., 2003; Galpaz et al.,
2008). De forma similar a hp2, el incremento del contenido
de carotenoides en los mutantes hp1 y hp3 tampoco está
212
asociado a la expresión de genes carotenogénicos. No
obstante, en el caso del mutante hp1 se ha observado un
aumento de la actividad PSY en el fruto (Cookson et al., 2003).
El mutante green-flesh (gf) presenta frutos de color verde
rojizo debido a la presencia simultánea de cloroplastos que
contienen clorofilas y cromoplastos ricos en carotenoides.
La mutación gf se debe a la afectación de la funcionalidad
de la proteína STAY GREEN (SGR) (Barry et al., 2008). SGR
es una proteína plastídica implicada en la degradación de la
clorofila en hojas y frutos. El silenciamiento del gen SGR1 en
el fruto genera un gran aumento del contenido de licopeno
y β-caroteno asociado al incremento de la expresión del
gen PSY1 (Luo et al., 2013). Se ha determinado que SGR1
interacciona con la PSY1 in vivo y que modula negativamente
su actividad (Luo et al., 2013). También se ha descrito que la
sobre-expresión del gen ARABIDOPSIS PSEUDO RESPONSE
REGULATOR2-LIKE (APRR2-Like) resulta en un aumento
del área y del número de plastos asociado al incremento del
contenido de clorofila en los frutos verdes y de carotenoides en
los frutos maduros (Pan et al., 2013).
La biosíntesis y acumulación de carotenoides en el fruto del
tomate está muy influida por diversos factores ambientales
y hormonales, los cuales pueden interactuar entre sí de
forma coordinada. Entre los factores ambientales destaca
la intensidad de la luz (Alba, Cordonnier-Pratt y Pratt, 2000;
Schofield y Paliyath, 2005; Giliberto et al., 2005) y situaciones
de estrés moderado, como el estrés oxidativo (Cocaliadis et al.,
2014), la temperatura (Lurie et al., 1996) o los niveles elevados
de CO2 (Zhang et al., 2014). Entre las hormonas implicadas en
el desarrollo y maduración del fruto están el etileno, las auxinas,
el ácido abscísico, el ácido jasmónico y los brasinoesteroides.
Los mecanismos implicados en la síntesis, señalización y
control de la expresión génica mediada por dichas hormonas
se han estudiado de forma muy extensa y aparecen en
excelentes revisiones recientes (Klee y Giovannoni, 2011;
Seymour et al., 2013; Karlova et al., 2014).
Los cromoplastos
y su papel en la síntesis
de carotenoides
Los cromoplastos son plástidos especializados en la síntesis
y acumulación de carotenoides. Se encuentran generalmente
en frutos, flores, semillas y raíces y se originan a partir de
otros tipos de plástidos, como proplástidos, cloroplastos,
leucoplastos o amiloplastos (Li y Yuan, 2013). Los cromoplastos
muestran una gran diversidad morfológica y se han clasificado
en diferentes tipos según su forma y el tipo de estructuras
suborganulares que presentan (Camara et al., 1995). Los
cromoplastos del fruto del tomate son de tipo cristalino y
difieren de los del fruto del pimiento (tipo globular) y de los
de las flores de Narcissus (tipo membranoso) (Camara et al.,
1995), dos de los tipos de cromoplastos mejor estudiados. La
11. Biosíntesis y acumulación de carotenoides en el fruto de tomate
diversidad morfológica de los cromoplastos está posiblemente
relacionada con la gran variedad de niveles y perfiles de
carotenoides que se acumulan en ciertos tejidos particulares
de las plantas.
La diferenciación de los cromoplastos está asociada a la
síntesis activa de carotenoides y a una extensa reorganización
del sistema membranoso interno de los plástidos de los cuales
derivan (figura 2). Dicha reorganización está posiblemente
relacionada con la formación de las estructuras implicadas
en el almacenamiento de los carotenoides sintetizados de
forma masiva en dichos orgánulos. El análisis de frutos de
plantas transgénicas de tomate con contenidos modificados
213

Figura 2. Principales procesos durante el desarrollo y maduración
del fruto.
de licopeno y β-caroteno sugiere que las estructuras
suborganelares de los cromoplastos se pueden adaptar
para facilitar el almacenamiento de los intermediarios y los
carotenoides sintetizados (Nogueira et al., 2013).
En el fruto del tomate, los cromoplastos se generan a partir de
los cloroplastos fotosintéticamente activos presentes en el fruto
verde (Bathgate et al., 1985). Este proceso de diferenciación
comporta la desaparición de las membranas tilacoidales y la
formación de nuevas estructuras suborganelares cuyo papel no
ha sido definido con detalle. La estructuras más prominentes
presentes en los cromoplastos del fruto de tomate incluyen
plastoglóbulos de gran tamaño asociados a un extenso sistema
membranoso lamelar y largos filamentos osmiofílicos descritos
como estructuras de almacenamiento de licopeno en forma
cristalina (Rosso, 1968; Harris y Spurr, 1969) (figura 3).
Desde hace tiempo se sabe que los cromoplastos
acumulan proteínas sintetizadas de novo. Esto indica que la
diferenciación de los cloroplastos a cromoplastos constituye
un proceso de desarrollo activo y no un mero proceso de
senescencia (Bathgate et al., 1985; Lawrence, Cline y Moore,
1993). En la actualidad se conoce relativamente poco sobre
las señales y los procesos implicados en la biogénesis de los
cromoplastos (Li y Yuan, 2013).
Los cloroplastos del fruto verde son fotosintéticamente activos
y capaces de producir ATP y NADPH que pueden ser utilizados
para la fijación del CO2 y procesos anabólicos (Batz, Scheibe
y Neuhaus, 1992). Durante el proceso de diferenciación de
los cromoplastos se degradan las clorofilas y, por lo tanto, se
pierde la capacidad de producir ATP y NADPH asociadas a
la fotosíntesis. Además, se genera una demanda creciente
de carbohidratos exógenos para las distintas reacciones
anabólicas que tienen lugar en los cromoplastos. De forma
parecida se debe activar un mecanismo de aporte alternativo
de ATP, ya sea mediante su importación desde el citosol o a
través de su producción endógena.
11. Biosíntesis y acumulación de carotenoides en el fruto de tomate
La síntesis de carotenoides requiere el aporte de piruvato
y gliceraldehido 3-fosfato (los precursores metabólicos de
la vía del MEP) y de una importante provisión de energía
(ATP) y poder reductor (NADPH). El origen del piruvato y del
gliceraldehído 3-fosfato utilizados en la síntesis de carotenoides
en los cromoplastos no se conoce con detalle. Estudios
realizados en cloroplastos y cromoplastos aislados de fruto de
pimiento han puesto de manifiesto la presencia de todas las
actividades enzimáticas requeridas para la conversión de la
glucosa en piruvato a través de la glucólisis (Thom et al., 1998).
No obstante, los bajos niveles de actividad de la fosfoglicerato
mutasa y la enolasa han llevado a sugerir que, de forma similar
214
 Figura 3. Cromoplastos en desarrollo de fruto de tomate (var. Moneymaker), imagen tomada con microscopio electrónico. E, estroma; P, plastoglóbulos;
ML, membranas laminares: CL, estructuras membranosas que contienen licopeno; a) sección longitudinal, b) sección transversal. Barra de escala = 1µm

11. Biosíntesis y acumulación de carotenoides en el fruto de tomate

a otros plástidos, el flujo de carbono hacia la parte inferior de
la glucólisis estaría limitado. En consecuencia, se ha propuesto
que los metabolitos de la parte baja de la glucólisis podrían
ser aportados directamente desde el citosol (Thom et al.,
1998). En este sentido, es posible que ciertos transportadores
de membrana descritos en otros plástidos no fotosintéticos
pudieran participar en dicho proceso (Fischer y Weber, 2002;
Weber, 2004). Estudios de incorporación de precursores
marcados con 14C utilizando un sistema de cromoplastos
aislados de fruto de tomate han mostrado que se pueden
incorporar diversos intermediarios metabólicos de forma
eficiente a carotenoides (Angaman et al., 2012). Entre dichos
compuestos destaca el malato, un metabolito muy abundante
en el fruto que puede ser convertido directamente en piruvato
por la acción de la enzima málica presente en los cromoplastos
(Angaman et al., 2012). La relevancia del metabolismo del
malato en la maduración del fruto del tomate la pusieron de
manifiesto Centeno et al. (2011) y Osorio et al. (2013).
Como se ha indicado antes, la diferenciación de los
cromoplastos comporta la desaparición de las membranas
tilacoidales y la formación de un nuevo sistema membranoso

215
y vesicular en cuyo entorno tiene lugar la biosíntesis y el
almacenamiento de los carotenoides sintetizados de novo.
La biogénesis de las membranas de los cromoplastos ha
sido estudiada en flores de Narcissus. En este caso, los
ácidos grasos utilizados para la formación de las nuevas
membranas plastídicas son sintetizados de novo dentro de
los cromoplastos (Kleinig y Liedvogel, 1978, 1980). Se ha
descrito recientemente que la síntesis de lípidos de membrana
es también un proceso muy activo en los cromoplastos de
tomate (Angaman et al., 2012). Dado que la primera etapa de
la biosíntesis de ácidos grasos es la formación de malonil-CoA
a partir de acetil-CoA, reacción catalizada por la acetil-CoA
carboxilasa en los plástidos, la biosíntesis de los carotenoides
y la de los ácidos grasos en los cromoplastos podrían competir
tanto por la disponibilidad del piruvato (el precursor del
acetil-CoA) como del ATP y del NADPH requeridos en ambos
procesos.
Los recientes análisis proteómicos relacionados con la
diferenciación de los cromoplastos durante la maduración
del fruto han proporcionado una visión general de la variedad
de procesos bioquímicos y metabólicos asociados a dicho
proceso. Entre ellos destaca la fuerte disminución de
proteínas relacionadas con la fotosíntesis, el ciclo de Calvin, la
fotorrespiración y el metabolismo de los hidratos de carbono.
Además del aumento de las proteínas relacionadas con la
biosíntesis de isoprenoides (incluyendo los carotenoides)
destaca la presencia de numerosas proteínas asociadas con
la respuesta a estrés (ciclo ascorbato-glutatión, estrés abiótico,
redox y choque térmico). Es también de resaltar la presencia
de transportadores de membrana y de proteínas implicadas en
el suministro de energía (Barsan et al., 2010, 2012).
En las células heterotróficas, la mayor parte del ATP se sintetiza
en la mitocondria. Posteriormente se transporta al citosol y,
desde allí, a los diversos orgánulos celulares. Se ha descrito
recientemente que los cromoplastos son capaces de sintetizar
ATP de novo a través de un proceso respiratorio que utiliza
NADPH como donador de electrones (Pateraki et al., 2013).
Dicha síntesis de ATP implica la participación del complejo
de la ATP sintasa plastídica que contiene un nuevo tipo de
subunidad γ que se induce durante la maduración del fruto.
Dicha subunidad se caracteriza por la ausencia del dominio
ditiol presente en la subunidad γ de los cloroplastos, hecho que
posiblemente le confiere una regulación diferencial (Pateraki et
al., 2013).
Consistente con su papel en la biosíntesis de carotenoides,
durante la maduración del fruto se produce un incremento en
la expresión de PTOX de forma paralela a la diferenciación
de los cromoplastos (Josse et al., 2000). Se conoce que la
PTOX es inhibida por los análogos de pirogalol, especialmente
por el octil galato (Ogal). Recientemente se ha descrito
que la actividad respiratoria (consumo de oxígeno) de los
cromoplastos se estimula por NADH y NADPH y es sensible
11. Biosíntesis y acumulación de carotenoides en el fruto de tomate
a Ogal (Renato et al., 2014). Además, la tasa de síntesis de
ATP de los cromoplastos de tomate dependiente de NAD(P)
H es completamente inhibida por Ogal. El hecho de que la
síntesis de ATP también se inhiba por la acción de agentes
desacoplantes de la translocación de protones sugiere la
participación de un gradiente quimiosmótico asociado a dicho
proceso (Renato et al., 2014).
El Ogal afecta también la respiración y los niveles de ATP en
muestras de pericarpo de fruto maduro. Así, mientras que el
consumo de oxígeno de muestras de hoja y de pericarpo de
fruto verde no se ven afectados por Ogal, este compuesto
induce una fuerte disminución de la respiración en muestras de
216
pericarpo de fruto maduro (hasta 26%). Del mismo modo, Ogal
causa una disminución significativa en el contenido de ATP en
muestras de pericarpo de fruto maduro. Es de resaltar que el
número de mitocondrias energizadas se reduce mucho durante
la maduración del fruto. Todo ello indica que la contribución de
los cromoplastos a la respiración total de fruto aumenta en las
etapas avanzadas del proceso de maduración (Renato et al.,
2014).
Papel de los plastoglóbulos
y otras estructuras
suborganelares en la síntesis
y acumulación de carotenoides
Los plastoglóbulos son partículas lipoproteicas presentes en los
plástidos que han recibido un interés creciente en los últimos
años al descubrirse que contienen enzimas implicadas en
la síntesis de isoprenoides, como tocoferoles y carotenoides
(Brehelin, Kessler y Van Wijk, 2007; Brehelin y Kessler,
2008). Si bien los plastoglóbulos de los cloroplastos se han
estudiado con cierto detalle, tanto a nivel estructural como
funcional, el conocimiento que se tiene de los plastoglóbulos
de los cromoplastos es mucho menor. Se ha descrito que los
plastoglóbulos aislados de cromoplastos de ciertas plantas
contienen triglicéridos, β-caroteno y ésteres de carotenoides,
y se ha sugerido por lo tanto un papel funcional en el
almacenamiento de lípidos y carotenoides (Vishnevetsky,
Ovadis y Vainstein, 1999; Steinmuller y Tevini, 1985). En el
caso de tomate se ha descrito que los plastoglóbulos aislados
del fruto maduro muestran autofluorescencia a 488 nm, lo cual
indicaría la presencia de carotenoides en dichas estructuras
suborganelares (Kilambi et al., 2013). El análisis proteómico de
plastoglóbulos aislados de cromoplastos de pimiento ha puesto
de manifiesto la presencia de las enzimas carotenogénicas
ZDS, LYC-B y β-caroteno hidroxilasa (Ytterberg, Peltier y Van
Wijk, 2006). Estos resultados sugieren un papel activo de los
plastoglóbulos en la biosíntesis de carotenoides de forma
adicional a su posible función de almacenamiento. No obstante,
la gran diversidad estructural de los cromoplastos de las
plantas hace que esta observación no se pueda generalizar
a los distintos tipos de cromoplastos. Como se ha indicado
antes, los cromoplastos del tomate son de tipo cristalino,
por lo cual es posible que los plastoglóbulos no tengan un
papel muy relevante en la acumulación de licopeno, ya que
éste se almacenaría en su mayoría en forma de estructuras
membranosas de aspecto semicristalino (figura 3). Sin embargo,
estudios recientes basados en el subfracionamiento de
cromoplastos de fruto de tomate en gradientes de densidad
han sugerido que los plastoglóbulos podrían contener cristales
de licopeno (Nogueira et al., 2013). Es posible, no obstante,
que la resolución de los gradientes de densidad utilizados en
dichos estudios, no permitan una separación eficiente de los
plastóglóbulos y los cristales de licopeno.
11. Biosíntesis y acumulación de carotenoides en el fruto de tomate
En los cloroplastos, se ha descrito que los plastoglóbulos se
forman a partir de los grana tilacoidales. El número y tamaño
de los plastoglóbulos está influido por diversos factores, entre
ellos la activación del metabolismo lipídico (Austin et al.,
2006) y el estrés, senescencia o mutaciones que impiden la
formación de los tilacoides (Brehelin, Kessler y Van Wijk, 2007;
Singh y McNellis, 2011). Los plastoglóbulos se componen
de una hemimembrana recubierta de proteínas que envuelve
un núcleo lipídico hidrofóbico (Brehelin y Kessler, 2008). En
los cloroplastos, los plastoglóbulos se hallan con frecuencia
unidos a los tilacoides a través de la hemicapa lipídica que
los rodea. Durante la senescencia o en condiciones de estrés
oxidativo se han observado agrupaciones de plastoglóbulos
217
que permanecen unidos entre sí mediante extensiones de
la hemicapa lipídica que los envuelve. Eso ha sugerido que
el contenido de los plastoglóbulos puede estar en equilibrio
dinámico con los lípidos de los tilacoides (Austin et al., 2006).
En Arabidopsis, las proteínas presentes en los plastoglóbulos
se han podido identificar mediante aproximaciones
proteómicas (Vidi et al., 2006; Ytterberg et al., 2006).
Estudios posteriores han confirmado que las proteínas
pertenecientes a la familia de las fibrilinas (denominadas
también plastoglobulinas, plastid-lipid associated proteins o
chromoplast-associated carotenoid-binding proteins) están
entre las proteínas mayoritarias (Lundquist et al., 2012). Se ha
propuesto que las fibrilinas pueden participar en la formación
de estructuras plastídicas que se han relacionado con la
acumulación de pigmentos debido posiblemente a su función
como sumidero. Pese a no observarse la generación de nuevas
estructuras sumidero, la sobreexpresión de la fibrilina CHRC de
pimiento en el tomate resulta en un incremento del contenido
total de carotenoides en el fruto, lo que indica que estas
proteínas podrían tener un papel relevante en la acumulación
AGRADECIMIENTOS
de carotenoides (Simkin et al., 2007). En este sentido se ha
descrito recientemente que los mutantes hp1 y hp2 muestran
niveles incrementados de la fibrilina CHRC (Kilambi et al.,
2013). Todo ello indicaría que las fibrilinas contribuyen de
forma importante al almacenamiento de los carotenoides en los
cromoplastos.
En la actualidad se desconoce la función de la mayoría de los
compartimentos y estructuras suborganelares presentes en
los cromoplastos. Por eso sería de interés combinar el uso de
técnicas de perfilado metabólico y proteómico con técnicas
de fraccionamiento que permitieran separar el conjunto de
los sistemas membranosos y vesiculares presentes en los
cromoplastos. Con base en los distintos procesos bioquímicos
y metabólicos actualmente identificados en los cromoplastos,
se podrían abordar también estudios de inmunocitoquímica con
anticuerpos que reconocieran proteínas marcadoras de dichos
procesos. Todo esto permitiría una mayor comprensión no sólo
de la síntesis y acumulación de carotenoides en el fruto sino
también del conjunto de procesos bioquímicos y metabólicos
relacionados.
11. Biosíntesis y acumulación de carotenoides en el fruto de tomate
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