ESTUDIO CITOMORFOLÓGICO

DE LAS PLAQUETAS

Justo Tobias Alegre Torres

Tecnólogo Médico en Laboratorio Clínico y Anatomía Patológica
Maestría en Bioquímica con mención en Bioquímica Clínica
UNMSM -GECH-SPTMH – ASPEGC- IPLC - CAAPP - HEMATOTEAM

1
MORFOLOGÍA DE LA MADURACIÓN
NORMAL PLAQUETARIA:
MEGACARIOPOYESIS Y
TROMBOCITOPOYESIS

2
Antecedentes
 Las plaquetas son fragmentos celulares sin núcleo de
aspecto discoide, con múltiples gránulos y organelas.
 Producción a nivel de MO,síntesis controlada por IL-6,
IL-3, IL-11, y TPO.
 Circula en forma inactiva, sin capacidad de agregación.
 Bajo estimulación, cambia su morfología.
 Desarrollo receptores para los factores de coagulación y
habilidad para unirse una a otra y al endotelio.

3
 Megacariopoyesis

• Proceso de la hematopoyesis encargado de proliferación y

maduración de megacariocitos.

• Megacariocitos, precursores de las plaquetas.

• Proceso que se desarrolla en Médula ósea, Pulmón y en caso de

necesitad en hígado y bazo.

4
 Trombocitopoyesis o Trombopoyesis
• Proceso de la hematopoyesis encargado de la producción y liberación
de las plaquetas por el megacariocito.
•
• Es el proceso continuo de la Megacariopoyesis.

Ambos términos: Megacariopoyesis y Trombocitopoyesis, suelen ser

diferentes, continuos y complementarios, pero en suelen denominarlos
como sinónimos.

5
Megacariopoyesis

6
7
 TROMBOPOYETINA
 Hormona descubierta en 1986
 Glucoproteína de 353 aminoácidos
 Peso molecular de 30 kDa.
 Localizado en el cromosoma 3q27.
 Producida principalmente en el hígado, riñón y
estroma de la médula ósea.
Megacariopoyesis y Trombocitopoyesis
Un proceso continuo
Megacarioblasto

Promegacariocito

Megacariocito granular.

Plaqueta.

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Se distinguen tres tipos de progenitores morfológicamente diferenciables
en la MO.
 MEGACARIOBLASTO

Tamaño: 10 – 24 um
Núcleo: ovalado frecuentemente
bilobulado
 2 juegos de cromosomas(4N)
 Nucléolo 2 – 6
 Cromatina laxa
Citoplasma: Basófilo
Núcleo / citoplasma 3:1
 PROMEGACARIOCITO

Tamaño: 15 - 40 um
Núcleo: multilobulado
 4 – 8 juegos de cromosomas(8 -16N)
 Nucléolo variable
 Cromatina densa
Citoplasma: Basófilo y granular
Núcleo / citoplasma 1:2
 MEGACARIOCITO

Tamaño: 50 - 150 um
Núcleo: polilobulado
 8 - 32 juegos de
cromosomas(64N)
 Cromatina densa
Citoplasma: Azurofila y gránulos
abundantes
Núcleo / citoplasma 1:4
15
16
17
Megacarioblasto

18
Promegacariocito

19
Diferentes Estadios de Maduración
de Megacariocitos

20
Megacariocito Formador de Plaquetas

25
Elementos discoides, aprox. 7 fl
36
 La Plaqueta
• Fragmentos celulares sin núcleo, con granulaciones y organelas.
• Circula en forma inactiva, en forma de discos cóncavos.
• Cambio morfológico en respuesta a estímulos: activación de la
coagulación, inflamación, agregación, etc.

37
La Plaqueta

39
La Plaqueta

41
CONSIDERACIONES Y CRITERIOS
PARA EL ESTUDIO
CITOMORFOLÓGICO

42
La Citomorfología Sanguínea
• La Citomorfología se considera el
estudio minucioso y objetivo de
las células en general, basados
en las observaciones al
microscopio de luz de un
extendido adecuado y bien
coloreado.
• Puede aplicarse a cualquier
fluido o tejido.
• En este caso será para estudio
de la sangre humana.

43
•¿Cómo hacer el estudio de la
Citomorfología Sanguínea?

44
 Exámenes de Extendidos de Sangre Periférica
• Definición

• Es la evaluación microscópica adecuada de un frotis o extendido

de sangre periférica (sea venosa, arterial o capilar) en óptimas
condiciones de distribución, conservación de la morfología celular
y coloración, para realizar el estudio cuali-cuantitavo de las células
sanguíneas circulantes.

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Se frecuenta en la práctica realizar los siguientes exámenes para
el estudio de la citomorfología sanguínea:

• Estudio de Lámina Periférica

• Recuento Diferencial Leucocitario
• Mielograma
• Estudio del aspirado de médula ósea

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 Importancia
• El estudio o examen de la citomorfología sanguínea permite
evaluar el estado en cantidad y calidad de los elementos
formes de la sangre, asociando sus cambios o alteraciones a
patologías del sistema hematopoyético, inmunológico,
cardiovascular, hemostático, metabólico, entre otros.

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 Valores de Referencia
• Como todo parámetro en el laboratorio clínico, debe constar de
rangos o valores de referencia, en base a la población sana
que es atendida por la institución.
• En este caso la morfometría a permitido determinar valores
referenciales, en base a variables, como el sexo, la edad, grupo
étnico, y otros de menor relevancia.

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 Relevancia Clínica
• Muchos de las alteraciones cuali-cuantitativas son cambios
fisiológicos por adaptación, más no asociados a patología o
enfermedad.
• Es de allí la importancia de saber que cambios ayudarían a
realizar un buen screening, y en ciertos casos hasta
diagnóstico.

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 Discrepancias
• No siempre los cambios observados se asociaran a un cuadro
clínico claro, causando discrepancias diagnósticas (Medicina
basada en Evidencias).
• Las discrepancias también se dan en el laboratorio, en
aspectos citomorfológicos, recuento celular, y según el
procedimiento manual o automatizado.

50
 Por tanto:

El Examen de un Extendido Sanguíneo:

• Abarca la revisión y análisis citomorfólogico exhaustivo y

detallado de los elementos formes de la sangre, como
apoyo al diagnóstico de múltiples patologías.

• Incluye una evaluación cuali-cuantitativa de las células

sanguíneas.

51
 IMPORTANTE:
Conocer la Biología y Bioquímica Celular

52
 Procedimientos Preanalíticas
• Mencionaremos las 3 más importantes y claves:
1. Una toma de muestra óptima.
2. Un frotis de calidad analítica.
3. Una coloración óptima.

• Otras consideraciones:
• Mantenimiento y control de calidad de los instrumentos.
• Verificación y control de los insumos (material de pre analítica, colorantes,
etc.).
• Recurso humano competente, para realizar estos procedimientos.
 Efectos adversos de los anticoagulantes sobre las
células, pasadas las 4 horas de obtenida la muestra
• Eritrocitos
• Crenación, hinchamiento.
• Plaquetas
• Hidratación o hinchamiento, desgranulación.
• Leucocitos
• Vacuolización en neutrófilos y monocitos.
• Remarcación de las granulaciones primarias.
• Cambios necrobióticos (apoptosis y cariorrexis).
• Hidratación de linfocitos y monocitos.
• Desestructuración de la cromatina (alteraciones en la forma y condensación).
 Un frotis de calidad analítica
• Extensión de capa fina de Sangre
Periférica sobre una lámina
portaobjeto, para la evaluación
cito morfológica de las células
sanguíneas.

• El documento CLSI H20, indica

las características de un frotis de
calidad analítica, a nivel
macroscópico y microscópico,
dándole un nivel de Estándar.
 Frotis de sangre periférica
• Ojo:
• El frotis ideal, es aquel que cumple
las características de calidad y esta
libre de anticoagulantes.
• El más cercano a esto, es el frotis
realizado de pulpejo de dedo,
aunque es limitado para evaluar
plaquetas.
• Los frotis realizados del tubo con
EDTA, se acercan a lo ideal, pero
pueden sufrir interferencias
propias al anticoagulante.
• IMPORTANTE:
• Los frotis que se hagan de la
muestra del tubo lila, deben
realizarse como máximo dentro de
las 4 horas de haberse tomado la
muestra de sangre.
• El uso de EDTA K2 y K3 es
adecuado para estudio
hematológico.
 Requisitos de un Frotis de Calidad Analítica
•Macroscopía:
–Mínimo 2.5 cm de largo.
–Debe llegar antes de 1 cm final de la
lámina.
–Transición Gradual del espesor.
–Bordes libres, que no toquen el filo de
la lámina.
–Mínimo de artefactos.
•Microscopía
–Distribución aceptable de las células.
–Morfología aceptable.
 Una coloración óptima
• Los colorantes recomendados para estudio citomorfológico en sangre
periférica, son llamados colorantes Romanosky.
• Se caracteriza por la mezcla de una colorante ácido y Amplia gamma
uno básico, además de la presencia de AZURES (A, B y C).
• Leishman y Jenner (Inglaterra), y May-Grünwald y Reuter (Alemania),
mayor estabilidad y reproducibilidad.
• Wright modificó la técnica de Leishman.
• Giemsa utilizó esta coloración para estudios en microbiología.
Pautas para aceptar la coloración
•Condición aceptable de leucocitos
☺ El efecto anticoagulante tales como
vacuolización excesiva o cambios en la forma
nuclear deben ser mínimos.
☺ Menos de 2% de leucocitos smudged o
basket cell, excepto en algunos desordenes
linfoproliferativos (esto se considera en caso
de un FROTIS ESTÁNDAR), en caso de la
rutina es aceptable hasta una 10%.

60
Interferencias

61
Interferencias

62
Interferencias

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Interferencias

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 Procedimientos analíticos
• Las consideraciones analíticas más importantes son:
1. Técnica de revisión del frotis.
2. Competencias del analista.
3. Valoración y Reporte de los hallazgos.

Otras consideraciones analíticas:

• Desempeño de los instrumentos durante el análisis celular.
• Protocolos de trabajo de acuerdo al tipo de paciente o muestra.
 Evaluación del Frotis para Plaquetas
Ubicación de la zona de revisión
Entre el cuerpo y la cola
Eritrocitos distribuidos en monocapa
La evaluación de las plaquetas se hacen a la par que el
estimado del recuento de plaquetas.
En caso se aplique un SVR por campo, se deben revisar al
menos de 5 a 10 campos.
Se consideran varias zonas para evaluar la morfología y la
cantidad.

66
 Competencias del analista
• Las competencias profesionales para la revisión del frotis y RDL, según
la CAP son intermedias a altas.
• Según otros ejemplos, se puede crear una jerarquía de profesionales
según sus competencias para la revisión de una frotis.
• Debe destacarse que en algunos casos la revisión facultativa (valor
clínico) esta sujeto a profesionales especialistas, mientras la revisión
técnica (valor analítico) a profesionales con formación laboratorial.
• Las competencias básicas son: Conocimiento, Destreza y Actitud.
• Todo profesional en Hematología, debe capacitarse constantemente
en estas competencias.
 Criterios de Evaluación de la
Citomorfología PLaquetaria
• Cantidad:
• Valor cuantificado o estimado.
• Nivel de alteración.
• Tamaño:
• Forma:
• Alteraciones observadas.
• Granulación:
• Alteraciones observadas.
• Valoración o cuantificación.
• Otros: Precursores, fragmentos.
• Indicar presencia.
 EN RELACIÓN AL
TAMAÑO/VOLUMEN

70
Tamaño
• Plaquetas normales de 2 – 3 um.
• Mayor tamaño, pero no excede a un hematie, Macroplaqueta.
• Mayor tamaño al de un Hematíe, Megaplaqueta.
• Se necesitan al menos evaluar 10 campos, y que la variación supere
un 10 %.
Plaqueta Gigante (PREPLAQUETA)
Plaqueta Gigante (PREPLAQUETA)
Plaqueta Gigante (PREPLAQUETA)
Macroplaquetas
Macroplaquetas :

Se observan en :
• Recambio incrementado de plaquetas
• Desordenes mieloproloferativos
• Desordenes mielodisplásicos
• Anomalía de May – Hegglin
• Sindrome de la plaqueta gris
 EN RELACIÓN A LA
GRANULARIDAD O CONTENIDO
PLAQUETARIO

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Granularidad
• La plaquetas constan de granulaciones en la parte central (Cromó
mero).
• La deficiencia de estas granulaciones pueden indicar actividad o
patologías de deficiencia de granulaciones.
• Se evalua en forma general.
 Plaquetas Desgranuladas

• Descarga de gránulos plaquetarios “in vivo”

- By Pass cardiopulomonar
- Leucemia de células peludas
- Sindrome de plaqueta gris
• Descarga de gránulos plaquetarios “in vitro”
- mala técnica de venopunción
Plaquetas Desgranuladas
 Plaqueta Hipogranular
• Tamaño de la célula: 1 - 4 mm
• Forma de la célula: redondo u oval con márgenes
irregulares
• Color del citoplasma: azul
• Gránulos:finos, color violeta en el área central de la plaqueta
• Núcleo: ausente
Plaquetas Hipogranulares
EN RELACIÓN A LAS FORMAS
ANORMALES DE PLAQUETAS

90
Forma
• Forma normal, discoide.
• Varían por dos causas principalmente:
• Activación, forma irregular con pseudopodos.
• Patologías en la Megacariopoyesis.
• Se designan a las formas mas aberrantes, como plaquetas bizarras.
• Plaqueta formas anormales alargadas, se denominan PREPLAQUETAS
y PROPLAQUETAS.
EN RELACIÓN A LAS PLAQUETAS
RETICULADAS

93
 Plaquetas reticuladas
Distinción entre las causas de trombocitopenia:
• Falla medular (bajo conteo de plaquetas
reticuladas)
• Incremento en la producción medular secundario
a consumo/destrucción periférica de plaquetas
(alto recuento de plaquetas reticuladas)
Puedo medir las plaquetas inmaduras?
Fig. Scattergram patterns of XE-2100/IPF in the healthy subject and patients.

a) Donante sano b) Paciente PTI

c) Bajo quimioterapia (fase nadir ) d) Bajo quimioterapia (fase recuperación MO)

 EN RELACIÓN A LOS
PRECURSORES PLAQUETARIOS

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Trombocitos Patológicos
Fragmentos citoplasmáticos
Anomalías Plaquetarias
TOMA A 100X
Coloración Wright
106
TOMA A 100X
Coloración Wright
107
TOMA A 20X
Coloración Wright
108
VALORACIÓN Y REPORTE DE LA
MORFOLOGÍA PLAQUETARIA

109
 Cantidad de Plaquetas
• Es importante considerar la cantidad de plaquetas,
dependiendo del método que se emplee para contar
(manual, estimado o automatizado).
• Se recomienda indicar el grado de trombocitopenia o
trombocitosis.
• Es uno de los primeros criterios al evaluar la patología
plaquetaria.

110
Reporte de la Cantidad de Plaquetas
Cantidad de plaquetas x Reporte
uL
Menor a 20,000 Trombocitopenia grave
20,000 a 50,000 Trombocitopenia severa
50,000 a 100,000 Trombocitopenia moderada
100,000 a 150,000 Trombocitopenia leve
150,000 a 450,000 Normal
450,000 a 750,000 Trombocitosis leve
750,000 a 1`000,000 Trombocitosis moderada
Mayor a 1 millón Trombocitosis marcada

111
 Valoración de la Morfología Plaquetaria
Alteraciones por campo de 100x

Ocasional 1+ 2+ 3+
Alteraciones de Tamaño: Menor a 1 1-2 3-5 Mayor a 5
Plaquetas Grandes
(macroplaquetas)
Plaquetas Gigantes
(megaplaquetas)

Plaquetas Hipogranulares o Menor a 1 1-5 6- 10 Mayor a

Agranulares 10

Formas anormales de plaqueta Menor a 1 1-5 6 - 10 Mayor a

(Plaquetas bizarras) 10

• Esta tabla se basa en el promedio de alteraciones de plaquetas que se

encuentren de la revisión de 10 campos a 1000x.
112
113
114
115
116
117
 Guía ICSH:2015

Justo Tobias Alegre Torres

Tecnólogo Médico en Laboratorio Clínico y Anatomía Patológica
Maestría en Bioquímica con mención en Bioquímica Clínica
UNMSM -GECH-SPTMH – ASPEGC- IPLC - CAAPP - HEMATOTEAM
 Plaquetas
Las principales recomendaciones se dirigen a:

• Plaquetas gigantes GRADOS

• Hipogranulación PRESENCIA

• Megacariocitos, micromega. PRESENCIA

122
 Tendencias en la Morfología Plaquetaria
• El término “Plaqueta Reticulada” ha tomado mayor importancia por
su valor clínico y el buen desempeño de los analizadores
automatizados para determinarlo.
• El término “Plaqueta Bizarra” es empleado para describir una
plaqueta con más de un alteración citomorfológica, se correlaciona
más con los procesos de dismegacariopoyesis.
• La término “Proplaqueta” o “Fragmento de citoplasma de
megacarioctio”, se debe considerar y diferenciar de una
Megaplaqueta o plaqueta gigante.
• Los precursores nucleados de plaqueta en sangre periférica pueden
ser “Micromegacariocito” y “Núcleo de Megacariocito”.
123
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