Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Ciencias Agrcolas Ingeniero Agrnomo Fitotecnista Tarea 5 Prueba de ELISA Produccin

y tecnologa de semillas Por: Judith Vernica Garduo Romero

Prueba de ELISA para el diagnostico de virus en las plantas. En la dcada de 1980, se masific el uso de la prueba inmunolgica ELISA ( Enzyme Linked Immunosorbent Assay) que permite con un alto grado de eficiencia y confiabilidad identificar virus especficos. Esta metodologa fue clave en el avance del conocimiento de las enfermedades virosas en los frutales. En la actualidad, se dispone comercialmente de estuches de diagnstico serolgico para la mayora de los virus que afectan los frutales. La prueba ELISA se ha constituido en una herramienta fundamental en los viveros para detectar y propagar material limpio de virus. El test de ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) es una tcnica de laboratorio muy sensible que es usada para detectar la presencia de antgenos o anticuerpos de inters en una amplia variedad de muestras biolgicas. Una aplicacin comn del ELISA es adsorber anticuerpos a las paredes de una placa de plstico (polietileno), a la que posteriormente se le agregar extractos de savia de la planta problema. Si el antgeno est presente en la muestra, stos sern inmovilizados a las paredes de la placa. Un segundo anticuerpo unido covalentemente a una enzima que reconoce el antgeno inmovilizado es agregado posteriormente. La presencia en cada pocillo de la placa del complejo anticuerpo-antgeno-anticuerpo enzima es revelado por el cambio de color que ocurre al aplicar un sustrato cromognico que es utilizado por la enzima conjugada al segundo anticuerpo. El cambio de color, y por lo tanto la presencia del antgeno, es cuantificado por medio de la medicin de absorbencia que es efectuado es un lector de placa de ELISA.

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Test de ELISA. A. Ilustracin esquemtica de los pasos involucrados en la ejecucin del test de ELISA. Pasos 1 y 2, produccin y purificacin de la inmunoglobulinas desde un conejo inmunizado. 3, activacin de la placa de polietileno con el anticuerpo especifico; 4a, inmovilizacin del antgeno, 4b, aplicacin de extracto que no contiene el anti gneo de inters; 5a y 5b , adicin del anticuerpo conjugado a la enzima y revelado de la placa con viraje del color de sustrato en caso de presencia del antgeno de inters (5a). B. Fotografa de un lector de ELISA C. Fotografa de una placa de polietileno revelada con el sustrato cromognico. Los pocillo s que delatan la presencia del antgeno de inters han virado a color amarillo. Fuente: www.inia.cl/virologia/.../generalidades.htm