CDU: 638.16:543.01 AL 02.04.

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Norma Técnica MIEL DE ABEJAS. DETERMINACIÓN DE AZUCARES INEN 1 633

Ecuatoriana REDUCTORES TOTALES SACAROSA Y LA RELACIÓN
Obligatoria FRUCTOSA-GLUCOSA. 1989-02

1. OBJETO
Instituto Ecuatoriano de Normalización, INEN – Casilla 17-01-3999 – Baquerizo Moreno E8-29 y Almagro – Quito-Ecuador – Prohibida la reproducción

1.1 Esta norma establece los métodos de ensayo para determinar os azúcares reductores totales,
sacarosa y la relación fructosa-glucosa en miel de abejas.

2. METODO PARA DETERMINAR AZUCARES REDUCTORES TOTALES

2.1 Resumen

2.1.1 Se basa en el método de Lane-Eynon, que consiste en reducir el complejo de cobre de un

volumen dado del reactivo de Fehling en ebullición, mediante la adición de la muestra diluida de miel
de abejas, empleando azul de metileno como indicador.

2.2 Instrumental

2.2.1 Equipo usual de laboratorio y en particular:

2.2.1.1 Balanza analítica, sensible al 0,1 mg.

3
2.2.1.2 Matraces aforados, de 100 y 500 cm .
3
2.2.1.3 Probetas graduadas, de 5 y 25 cm .
3
2.2.1.4 Erlenmeyer, de 250 cm .
3
2.2.1.5 Pipetas, de 5 y 10 cm .

2.2.1.6 Bureta, de 50 cm3

2.3 Reactivos

2.3.1 Solución de azul de metileno, al 0,2%

Disolver 2g de azul de metileno en agua destilada y diluir hasta obtener 1 l.

2.3.2 Solución patrón de azúcar invertido (acuosa 10 g/litro).

3
2.3.2.1 Pesar exactamente 9,5 g de sacarosa pura, añadir 5 cm de ácido clorhídrico (HCI puro al 36,5%
3
aproximadamente) y disolver en agua hasta obtener unos 100 cm .

2.3.2.2 Conservar esta solución acidificada durante varios días a temperatura ambiente (7 días
aproximadamente, entre 12 ° - 16 ° C ó 3 días entre 20 y 25 ° C).

(Continúa)
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2.3.2.3 Diluir después hasta obtener un litro. Neutralizar un volumen apropiado de esta solución con
hidróxido de sodio 1 N (40g/I), inmediatamente antes de utilizarla diluir hasta obtener la concentración
necesaria (2g/I ) para la normalización.

2.3.3 Crema de alúmina.

2.3.3.1 Preparar una solución fría saturada de alumbre (K2 S04 AI 2 (S04)3. 24 H20) en agua.

2.3.3.2 Añadir hidróxido amónico (NH 4 0H), agitando constantemente hasta obtener una
solución alcalina que reaccione con tornasol, dejar que el precipitado sedimente y lavar por
decantación con agua, hasta que el agua procedente de los lavados, tratada con solución de cloruro
de Bario (BaCI2), muestre ligeros indicios de sulfato.

2.3.3.3 Verter el agua sobrante y conservar la crema restante en una botella cerrada.

2.3.4 Solución de Fehling. Se obtiene mezclando en volúmenes iguales las soluciones A y B.

2.3.4.1 Solución A. Solución de sulfato de cobre. Disolver en agua destilada 69,28 g de sulfato
cúprico pentahidratado (Cu S04. 5H 2 0, pm= 249,71) hasta obtener un litro.

2.3.4.2 Solución B. Solución alcalina de tartrato. Diluir en agua destilada 346 g de tartrato sódico-
potásico (C4 H4 KNa0 6 . 4H 2 0) y 100 g de hidróxido de sodio (Na 0H) hasta obtener un litro.
Filtrar con un filtro preparado de asbesto.

2.4 Preparación de la muestra.

2.4.1 Si la miel está líquida, homogeneizar por agitación, si está parcialmente o totalmente
cristalizada, colocar el envase cerrado a baño de María 60.65 ° C hasta fundición total, cuidando no
sumergirlo; luego mezclar muy bien y enfriar rápidamente.

Si hay impurezas o substancias extrañas, calentar la muestra en baño de María hasta 40 ° C y

filtrarla a través de un lienzo.

2.4.2 Para la miel de panal:

Cortar la superficie del panal si está operculado y separar completamente la miel del panal,
filtrándola por un tamiz cuya malla tenga un reticulado cuadrado de 0,500 mm por 0,500 mm (malla
No. 40, tamaño del retículo, 420 mm).

Si algunas porciones del panal o de la cera pasan a través del tamiz, calentar la muestra como se indica
en el punto 2.4.1. Si la miel en el panal es granulada, calentar hasta que la cera se licue,
remover, enfriar y separar la cera.

2.5 Procedimiento

2.5.1 Primer procedimiento

(Continua)
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Pesar 25g (P1) de muestra bien homogenizada y transferir con agua destilada a un matraz de 100
3 3
cm ; añadir 5 cm de crema de alúmina y diluir hasta la marca con agua a 20 ° C y filtrar.

2.5.2 Segundo procedimiento

Pesar 2 g (P2) de la muestra homogenizada, disolver en agua destilada y diluir en un matraz

3 3
graduado hasta obtener 200 cm de solución (solución de miel). De esta solución tomar 50 cm y
3
disolver en agua destilada hasta obtener 100 cm (solución de miel diluida).

2.5.3 A continuación normalizar la solución de Fehling modificado de la siguiente manera.

3 3
2.5.3.1 Mezclar 5 cm de solución A y 5 cm de la solución B de manera que estas soluciones
reaccionen completamente con 0,050g de azúcar invertido, añadido desde una bureta de 25
3
cm la solución diluida de azúcar invertido (2g/I).

2.5.4 Titulación preliminar.

2.5.4.1 Al final de la titulación de reducción, el volumen total de reactivos añadidos será de 35

3
cm . Esto se consigue añadiendo el volumen adecuado de agua antes de comenzar la titulación.
Puesto que los requisitos para miel especifican que ésta debe contener más de un 60% de azúcares
reductores, es necesaria una titulación preliminar para determinar el volumen de agua que será preciso
añadir a una muestra dada, para asegurar que la reducción se realice a volumen constante. Para
3
calcular el volumen de agua, que es preciso añadir, se resta de 25 cm el volumen de solución
diluida de miel, consumida en la titulación preliminar.

3 3 3
2.5.4.2 Verter con una pipeta 5 cm de solución A en un matraz de 250 cm , y añadir 5 cm
3
de solución B. Añadir 7 cm de agua destilada, un poco de pómez en polvo, u otro regulador de
3
ebullición, y agregar con la bureta 15 cm de solución diluida de miel.

2.5.4.3 Calentar la mezcla y, mantenerla durante 2 minutos en ebullición.

3
2.5.4.4 Añadir un cm de solución acuosa de azul de metileno al 0,2%, sin interrumpir la
ebullición, y completar la titulación, sin que el tiempo total de ebullición pase de 3 minutos, con
pequeñas adiciones repetidas de solución diluida de miel, hasta que el indicador pierda el color. Lo
que hay que observar es el color del líquido que permanece en la parte superior.

2.5.4.5 Tomar nota del volumen total de la solución diluida de miel utilizada.

2.5.5 Calcular la cantidad de agua que es necesario añadir para que, al final de la titulación, el
3 3
volumen total de los reactivos sea de 35 cm ; para ello, restar de 25 cm la titulación preliminar.

3 3 3
2.5.5.1 Verter con una pipeta 5 cm de la solución A en un matraz de 250 cm , y añadir 5 cm de
solución B.

3
2.5.5.2 Añadir (25-x) cm de agua destilada, un poco de pómez en polvo u otro regulador de
3
ebullición y, de una bureta, todo el volumen, menos 1,5 cm de solución diluida de miel
determinada en la titulación preliminar.

(Continua)

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2.5.5.3 Calentar la mezcla fría sobre una tela metálica, hasta ebullición moderada durante 2
3
minutos. Añadir 1,0 cm de solución de azul de metileno al 0,2 por ciento sin interrumpir la
ebullición y completar la titulación, sin que el tiempo total de ebullición pase de 3 minutos, con
pequeñas adiciones repetidas de solución diluida de miel, hasta que el indicador pierda el color.

2.5.5.4 Tomar nota del volumen total de solución diluida de miel. La diferencia entre titulaciones
3
duplicadas no deberá ser superior a 0,1 cm

2.6 Cálculos

2.6.1 Cuando usa el procedimiento del numeral 2.5.1, los cálculos se hacen de la siguiente manera:

25 1000
C = x
P1 Y1

2.6.2 Cuando utiliza el procedimiento del párrafo 2.5.2:

2 1000
C = X
P2 Y2

Siendo:

C - g de azúcar invertido por 100 g de miel

P1 - peso (g) de la muestra de miel utilizada según el numeral 2.5.1.
P2 - peso (g) de la muestra utilizada según el numeral 2.5.2.
3
Y1 - volumen (cm ) de solución diluida de miel consumida durante la determinación efectuada
según el procedimiento del, numeral 2.5.1.
3
Y2 - volumen (cm ) de solución diluida de miel consumida durante la determinación efectuada
según el numeral 2.5.2.

3. METODO PARA LA DETERMINACION DE SACAROSA

3.1 Resumen

3.1.1 La determinación de sacarosa se basa en el método de inversión de Walker.

3.2. Equipo usual de laboratorio y en particular:

3.2.1 Balanza analítica, sensible al 0,1 mg.

3
3.2.2 Matraz aforado a 100 y 250 cm .

3.3 Reactivos

(Continua)

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3.3.1 Solución de azul de metileno, igual a la del numeral 2.3.1. .

3.3.2 Solución patrón de azúcar invertido, como se indica en el numeral 2.3.2.

3.3.3 Solución de Fehling, preparada como indica el numeral 2.3.4.

3.3.4 Acido clorhídrico (6,34 N acuosa)

3.3.5 Solución de hidróxido de sodio

3.4 Preparación de la muestra

3.4.1 La preparación de muestra se realizará como se indica en el numeral 2.4.

3.5 Procedimiento

3.5.1 Para esta determinación preparar la muestra como se indica en el punto 2.5.1.

3 3
3.5.2 Diluir 10cm de esta solución enagua destilada hasta obtener 250 cm de solución de miel.

3.5.3 Hidrólisis de la maestra de ensayo.

3 3
3.5.3.1 Poner la solución de miel (50 cm ) en un matraz graduado de 100 cm , junto con 25
3
cm destila, calentar la muestra de ensayos hasta una temperatura de 65 ° C en baño María.

3
3.5.3.2 Retirar del baño María y añadir 10 cm de ácido clorhídrico 6,34 N.

3.5.3.3 Dejar que la solución se enfríe de modo natural durante 15 minutos y, a

continuación, calentar hasta 20°C, y neutralizar co n hidróxido de sodio 5N, empleando
tornasol como indicador.

3
3.5.3.4 Enfriar nuevamente y completar el volumen hasta 100 cm (solución diluida de miel).

3.5.3.5 Realizar la titulación como en el numeral 2.5.3, continuar el procedimiento como indica el
numeral 2.5.5.4.

3.6 Cálculos

3.6.1 Calcular el porcentaje de azúcar invertido (g de azúcar invertido por 100 g de miel), después
de la inversión, utilizando la fórmula apropiada que para obtener el porcentaje de azúcar invertido
antes de la inversión, como se indica en 2.6.

(Continua)

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4. METODO PARA LA DETERMINACION DE LA RELACION FRUCTOSA-GLUCOSA

4.1 Instrumental

4.1.1 Equipo usual de laboratorio y en particular

4.1.1.1 Balanza analítica, sensible al 0,1 mg.

4.1.1.2 Balón volumétrico

3
4.1.1.3 Matraz afor ado de 250 cm .

4.2 Reactivos

4.2.1 Solución 0,05 N de yodo.

4.2.2 Solución de hidróxido de sodio 0,1 N.

4.2.3 Acido sulfúrico concentrado.

4.2.4 Solución de tiosulfato de sodio 0,5N.

4.3 Procedimiento

3 3
4.3.1 Pesar 1 g de miel de abeja, pasara un balón volumétrico de 250 cm . Se diluye con 150 cm de
agua destilada y se agita completando con agua destilada hasta la marca.

3 3
4.3.2 Se transfieren con una pipeta 50 cm de esta solución de miel, a un matraz de 250 cm y se
3 3
añaden 40 cm de la solución de yodo y 25 cm de la solución de hidróxido de sodio. Se tapa el
frasco, se agita y se guarda en la oscuridad durante 20 minutos.

3
4.3.3 Se acidifica agregando 5 cm de ácido sulfúrico y se titula rápidamente el exceso de yodo con la
solución de tiosulfato de sodio.

4.3.4 Se repite el proceso usando un blanco preparado, empleando, en vez de la solución de miel, 50
3
cm de agua destilada.

4.4 Cálculos

4.4.1 La concentración de glucosa se calcula mediante la siguiente ecuación

G = (b-s) X 0,004502

(Continua)
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Siendo:

G = glucosa, expresada en porcentaje en masa.

3
b = volumen de la solución de tiosulfato de sodio, usado en la titulación en blanco, en cm .
s = volumen de la solución de tiosulfato de sodio, empleado en la titulación de la
3
muestra, en cm .

4.4.2 La concentración de fructosa se calcula mediante la siguiente ecuación:

F=A-G

Siendo:

F = fructosa, expresada en porcentaje en masa.

A = azúcares reductores totales, expresados en porcentaje en masa.
G = glucosa expresada en porcentaje en masa.

4.4.3 La relación fructosa-glucosa se calcula así:

F
R=
G
Siendo:

R = relación fructosa-glucosa.
F = fructosa, expresada en porcentaje en masa.
G = glucosa, expresada en porcentaje en masa.

5. ERRORES DE METODO

5.1 La diferencia entre los resultados de una determinación efectuada por duplicado no debe
exceder del 1,0% del promedio de ambos ensayos; en caso contrario, se debe repetir la
operación.

6. INFORME DE RESULTADOS

6.1 Como resultado final, debe reportarse la media aritmética de los resultados de la
determinación.

6.2 Deben indicarse el método usado y el resultado obtenido. Debe mencionarse, además,
cualquier condición no especificada en esta norma o considerada como opcional, así como
cualquier circunstancia que pueda haber influido sobre los resultados.

(Continua)
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NTE INEN 1 633 1989-02

APENDICE Z

Z.1 NORMAS A CONSULTAR

Esta norma no requiere de otra para su aplicación.

Z. 2 BASES DE ESTUDIO

Análisis Moderno de los Alimentos, Leslie Hart y Harry Johnstone Fisher, Editorial Acribia, Zaragoza
(España) 1971.

Official Methods of Analysis. Associations of Official Analytical Chemists. Fourteenth Edition, Edited
by Sidney Williams, Arlington, Virginia, 1984.

Codex Alimentarius. Normas del Codex para los azúcares incluida la miel, Volumen III. Roma, 1981.

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 INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA

Documento: TITULO: MIEL DE ABEJAS. DETERMINACION DE Código:

NTE INEN 1 633 AZUCARES REDUCTORES TOTALES SACAROSA Y LA AL 02.04-307
RELACION FRUCTOSA-GLUCOSA.
ORIGINAL: REVISIÓN:
Fecha de iniciación del estudio: 1988-05-11 Fecha de aprobación anterior por Consejo Directivo
Oficialización con el Carácter de
por Acuerdo No. de
publicado en el Registro Oficial No. de

Fecha de iniciación del estudio:

Fechas de consulta pública: de a

Subcomité Técnico: AL 02.04 Azúcares

Fecha de iniciación: 1988-06-03 Fecha de aprobación: 1988-06-03
Integrantes del Subcomité Técnico:

NOMBRES: INSTITUCIÓN REPRESENTADA:

Dr. José Escudero (Presidente) ADAP

Ing. Carolina Palacio de Wray MAG-INCCA
Lic. Flor de Gallardo LA COLMENA
Ing. Renne Palacios SUPERBA
Dra. Luz Guerrero PASTEURIZADORA QUITO S.A.
Dra. Delia de Mora INSTITUTO NACIONAL DE HIGIENE-
GUAYAQUIL
Agr. Becker Ayala ASOCIACION DE APICULTORES DE
TUNGURAHUA
Arg. Alfredo Zuñiga ASOCIACION DE APICULTORES DE
TUNGURAHUA
Dra. Rosa de León INSTITUTO NACIONAL DE HIGIENE – QUITO
Sr. Silvio Durán EL PARAISO
Dra. Magdalena Báus MINISTERIO DE SALUD PUBLICA
Ing. Norma Santamaría (Secretaria Técnica) INEN

Otros trámites: ♦4 Esta norma sin ningún cambio en su contenido fue DESREGULARIZADA, pasando de
OBLIGATORIA a VOLUNTARIA, según Resolución de Consejo Directivo de 1998-01-08 y oficializada
mediante Acuerdo Ministerial No. 235 de 1998-05-04 publicado en el Registro Oficial No. 321 del 1998-05-20
El Consejo Directivo del INEN aprobó este proyecto de norma en sesión de 1989-02-15

Oficializada como: OBLIGATORIA Por Acuerdo Ministerial No. 216 del 1989-05-10
Registro Oficial No. 218 del 1989-06-23
Instituto Ecuatoriano de Normalización, INEN - Baquerizo Moreno E8- E8-29 y Av. 6 de Diciembre
Casilla 17-
17-01-
01-3999 - Telfs: (593 2)2 501885 al 2 501891
501891 - Fax: (593 2) 2 567815
Dirección General: E-E-Mail: furresta@inen.gov.ec
Área Técnica de Normalización: E- E-Mail: normalizacion@inen.gov.ec
Área Técnica de Certificación:
Certificación: E-
E-Mail: certificacion@inen.gov.ec
E-Mail: verificacion@inen.gov.ec
Área Técnica de Verificación: E-
Área Técnica de Servicios Tecnológicos: E- E-Mail: inencati@inen.gov.ec
Regional Guayas: E-E-Mail: inenguayas@inen.gov.ec
Regional Azuay: E-
E-Mail: inencuenca@inen.gov.ec
inencuenca@inen.gov.ec
Regional Chimborazo: E-E-Mail: inenriobamba@inen.gov.ec
URL:www.inen.gov.ec