Ejercicio I.

Relación de pase
1. Considere una botella de cultivo de 20 cm2 en la cual tiene una monocapa
de células Vero al 100% de confluencia. Se le pide realizar un pase o
subcultivo en relación 1:4:2 y para ello solo cuenta con botellas de 40 cm 2.
Tome en cuenta los siguientes datos: a) una botella confluente de 20 cm 2
se mantiene con 3 mL de medio MEM al 10% de SFB y puede ser
disgregada con 0.5 mL de Tripsina-EDTA, b) cada botella de 40 cm 2 se
mantiene con 6 mL de medio MEM al 10% de SFB, c) el volumen de
suspensión celular obtenida después de disgregar y neutralizar no debe
exceder de 2 mL.
Responda haciendo esquemas:
 ¿Qué volumen de la suspensión celular original siembra en las nuevas
botellas del subcultivo? 1.75 ml

20 cm2
Vf: 3.5 mL 40 cm2

3.5 mL Esto si cada botella fuera de 20 cm 2 pero como son de 40 cm2

=0.875 mL
4 entonces se siembran 1.75 mL a una botella de 40 cm 2

 ¿Cuántas duplicaciones de la población celular sembrada en las botellas

de 40 cm2 se dan para llegar al 100% de confluencia? 3 duplicaciones

100 % confluencia 1 100 % 2 3

=25 % 50 % 75 %
4
 2. Considere una botella de cultivo de 40 cm2 en la cual tiene una monocapa
de células Vero al 100% de confluencia. Se le pide realizar un pase o
subcultivo en relación 1:2:4 y para ello solo cuenta con botellas de 20 cm 2.
Tome en cuenta los siguientes datos: a) una botella confluente de 40 cm 2
se mantiene con 6 mL de medio MEM al 10% de SFB y puede ser
disgregada con 1 mL de Tripsina-EDTA, b) cada botella de 20 cm 2 se
mantiene con 3 mL de medio MEM al 10% de SFB, c) el volumen de
suspensión celular obtenida después de disgregar y neutralizar no debe
exceder de 3 mL.
Responda haciendo esquemas:
 ¿Qué volumen de la suspensión celular original siembra en las nuevas
botellas del subcultivo? 1.75 ml

40 cm2 20 cm2
20 cm2 20 cm2 20 cm2
Vf: 7 mL

Esto si se tuviera una botella de 40 cm 2 pero como son de 20 cm 2 el volumen

7 mL obtenido se vuelve a dividir entre 2 y por lo tanto cada botella deberá contener 1.75
=3.5 mL
2 mL

 ¿Cuántas duplicaciones de la población celular sembrada en las botellas

de 20 cm2 se dan para llegar al 100% de confluencia? 1 duplicación

100 % confluencia 1
=50 % 50 %
2
 3. Tengo una botella de 80 cm2 con células MDCK al 100% de confluencia, el
tiempo de duplicación de esta línea celular es de 24 h. Para el día de
mañana usted requiere 2 botellas de la misma área al 100% de confluencia.
Considere que: a) la monocapa de células se disgrega con 2 mL de
solución tripsina-EDTA, b) la tripsina-EDTA es neutralizada con no más de
4 mL medio MEM al 10% de SFB, c) el volumen para mantener la relación
fluido-gas las botellas de 80 cm 2 es de 15 mL fluido-gas para el óptimo
crecimiento de mis células.
Responda haciendo esquemas:
 ¿Qué relación de pase haría para obtener las botellas que necesita para
el día de mañana? 1:2:2

80 cm2
80 cm2 80 cm2

 ¿Qué volumen de la suspensión celular original y qué volumen de medio

MEM se coloca en las nuevas botellas del subcultivo?
3 mL de suspensión celular y 12 mL de medio MEM

4. Dentro del laboratorio a su cargo, el departamento de I&D le solicita 5

botellas de 20 cm2 de células vero en una relación de pase 1:5 y el
departamento de farmacia le solicitan 2 botellas de 80 cm 2 con la misma
relación de pase. Mediante un diagrama de flujo indique los pasos
necesarios para obtener lo solicitado, para ello considere que solo cuenta
con una botella de 80 cm2 de células Vero a un 100% de confluencia, el
volumen final para cada botella de 20 cm 2 es de 5 mL y para las botellas de
80 cm2 es de 15 mL. Indique el volumen de la suspensión celular que debe
adicionar a cada botella solicitada y el volumen de medio para completar el
volumen final de cada botella. Realice los esquemas correspondientes.
 5 botellas de 20 cm2 se les adiciona a cada una 1 mL de
suspensión celular y 4 mL de medio

80 cm2

2 botellas de 80 cm2 se les adiciona a cada una 3 mL de

suspensión celular y 12 mL de medio