1.

DEFINICIONES
FUNDAMENTOS DEL
MÉTODO Significado
Los efectos de los metales en aguas potables y residuales pueden ser beneficiosos, tóxicos o simplemente
molestos. Algunos metales resultan esenciales, mientras que otros pueden perjudicar a los consumidores
del agua, a los sistemas de tratamiento de aguas residuales y a las aguas de depósitos. En muchos casos el
potencial de beneficio o riesgo depende de la concentración.

En general los métodos de absorción atómica de llama se aplican en el caso de concentraciones

moderadas entre 0.1-10.0 mg/L, en sistemas de matrices simples y complejas. La fotometría de llama da
buenos resultados para concentraciones altas de los elementos de los grupos I y II. Es frecuente la
necesidad de tratamientos preliminares de la muestra.

Definición de términos

a) Metales disueltos: son los metales en una muestra sin acidular que pasa a través de un filtro de
membrana de 0.45µ (policarbonato ó esteres de celulosa).
b) Metales suspendidos: son los metales en una muestra sin acidular que son retenidos por de un
filtro de membrana de 0.45µ (policarbonato ó esteres de celulosa).
c) Metales totales: es la concentración de metales determinada en una muestra sin filtrar tras
digestión intensa, ó la suma de las concentraciones de metales en las fracciones disueltas y
suspendidas. Note que los metales totales se definen operacionalmente por el procedimiento de
digestión.
d) Metales extraíbles con ácido: es la concentración de metales en solución tras el tratamiento de una
muestra sin filtrar con ácido mineral diluido caliente.

Para determinar por separado metales disueltos y suspendidos hay que filtrar inmediatamente después
de recogida la muestra y no preservar con ácido sino hasta después de la filtración.

Toma y conservación de muestras

Antes de recoger una muestra es necesario decidir cuál es la fracción que se va a analizar (disuelta,
suspendida, total ó extraíble con ácido). Esta decisión determina en parte si se acidula la muestra con
o sin filtración, así como el tipo de digestión requerida.

Durante la toma de muestra y conservación de las mismas pueden producirse errores debido a la
contaminación del dispositivo de muestreo, a la eliminación defectuosa de los residuos de muestras
previas del recipiente de la muestra ó a la pérdida de metales por adsorción y/o precipitación en el
recipiente de la muestra, como consecuencia de una inapropiada acidulación de la misma.

-Recipiente para las muestras: los mejores recipientes para la muestra son los fabricados en cuarzo
o TFE. Debido a que estos envases son costosos se prefieren los de polipropileno o polietileno lineal
con tapón de polietileno. Solo se deben utilizar recipientes y filtros que han sido lavados con ácido.
-Conservación: consérvense las muestras inmediatamente después de su toma, acidulando con ácido
nítrico concentrado (HNO3) a pH < 2. Fíltrense las muestras para metales disueltos antes de
preservarlas, normalmente es suficiente 1.5 mL de HNO3 concentrado/L de muestra (ó 3 mL de HNO3
1+1/ L muestra) para una conservación a corto plazo.

Después de acidulada la muestra consérvela preferiblemente refrigerada a 4°C para evitar un cambio
de volumen ocasionado por evaporación. En estas condiciones, las muestras con concentraciones
de metales de varios miligramos por litro se mantienen estables a lo largo de un período de hasta 6
meses, excepto el mercurio cuyo límite es de 5 semanas.
Tratándose de niveles de metal del orden de microgramos por litro, analícese dos muestras lo antes
posible después de tomada.
Prácticas de control de calidad
-Rango dinámico: antes de usar un nuevo método, determinar el rango dinámico, es decir, el rango de
concentración en el que un método tiene una respuesta creciente (linear ó de segundo orden). Para cada
analito analizar varias soluciones estándar que cubran el rango de interés. Cada medición de los estándares
debe estar dentro del 10% del valor real para ser aceptado dentro de la determinación del rango dinámico.
-Calibración inicial: calibrar inicialmente con un mínimo de un blanco y tres estándares de calibración del
analito de interés. Seleccionar los estándares de calibración de manera que cubra la concentración
esperada de la muestra y que están dentro del rango dinámico del método. El número de puntos de
calibración depende de lo ancho del rango dinámico y de la forma de la curva de calibración.
Como regla general las diferencias entre las concentraciones de los estándares de calibración no deben ser
mayores de un orden de magnitud. El coeficiente apropiado de correlación lineal o no lineal de respuesta
del instrumento debe ser ≥ 0.995. Usar la calibración inicial para cuantificar la concentración del analito
en las muestras. Usar la verificación de la calibración solo para el control la calibración inicial y no
para la cuantificación de la muestra. Repetir la calibración inicial diariamente y cada vez que el criterio de
aceptación de la verificación de la calibración no se cumpla.
-Verificación de la calibración: la verificación de la calibración es una confirmación periódica de que la
respuesta del instrumento no ha cambiado significativamente desde la calibración inicial. Verificar la
calibración mediante el análisis de un estándar de calibración de concentración media (estándar de
verificación de punto medio) y un blanco de calibración al inicio y al final de una corrida de muestras y
de forma periódica durante una corrida (normalmente después de una serie de 10 muestras). Una
determinación del estándar de verificación por fuera del 90 al 110% de la concentración esperada indica
un problema potencial. Si la determinación del estándar de verificación esta por fuera del 80 al 120% de la
concentración esperada, cesar inmediatamente el análisis de las muestras e iniciar una acción correctiva.
Repetir la calibración inicial y el análisis de las muestras desde la última verificación de la calibración
aceptable.
-Blanco del método (BM): un blanco de método (también conocido como blanco de reactivo), es una
porción de agua reactivo tratada exactamente como una muestra, incluyendo exposición a todos los
equipos, vidriería, procedimientos y reactivos. El blanco del método es usado para evaluar si analitos o
interferencias se encuentran presentes en el proceso analítico o en el sistema. El analíto de interés no debe
estar presente en el blanco del método a un nivel de alarma según los requerimientos del usuario. Tomar
acciones correctivas inmediatamente cuando las mediciones del blanco del método sobrepasen el límite de
detección del método. Incluir un mínimo de un blanco del método con cada serie de 20 ó menos muestras.
-Blanco fortificado del laboratorio (BFL): también conocido blanco de adición es un blanco del método
que ha sido fortificado con una concentración conocida de analíto, es usado para evaluar el desempeño del
laboratorio y la recuperación del analito en una matriz limpia. Preparar concentraciones fortificadas de
aproximadamente el punto medio de la curva de calibración o más baja, con soluciones stock preparadas
de una fuente diferente de las usadas
para preparar los estándares de trabajo. Calcular el porcentaje de recuperación, graficar cartas de control y
determinar los límites de control para estas mediciones. Asegurar que el BFL cumple el criterio de
desempeño para el método. Establecer acciones correctivas para ser tomadas en el caso que el BFL no
satisfaga los criterios de aceptación. Incluir un mínimo de un BFL con cada serie de 20 ó menos muestras.
-Duplicados: usar duplicados de muestras de concentración medible. Aleatoriamente seleccionar las
muestras a ser analizadas por duplicado. Procesar el duplicado de la muestra independientemente y a
través de la preparación de la muestra y el proceso analítico completo. Incluir un mínimo de un duplicado
por cada tipo de matriz con cada serie de 20 ó menos muestras.
-Matriz fortificada del laboratorio (MFL)/Duplicado de la Matriz fortificada del laboratorio : usar la MFL
(también conocida como adición de matriz) y el duplicado de MFL para evaluar respectivamente el error y
precisión del método, debido a una matriz específica. Preparar por adición de una concentración conocida
del analito a una muestra seleccionada aleatoriamente. Preparar las concentraciones de adición a
aproximadamente el doble de la concentración presente en la muestra original, si es necesario diluir la
muestra para que la medición se encuentre dentro de la curva de calibración establecida. Limitar la adición
de volumen al 5% o menos del volumen de la muestra. Calcular el porcentaje de recuperación y las
diferencias de porcentaje relativo, graficar cartas de control y determinar los límites de control. Asegurar
que se cumple el criterio de desempeño para el método. Procesar las muestras fortificadas
independientemente y a través de la preparación de la muestra y el proceso analítico completo. Incluir un
mínimo de un MFL y un duplicado de MFL con cada serie de 20 ó menos muestras.
Para verificar la ausencia de interferencias analizar las muestras sin diluir y con una dilución de 1:10, los
resultados deben encontrarse entre un 10% de diferencia entre cada una de ellas.

Tratamiento preeliminar de las muestras

Las muestras contienen partículas y material orgánico que generalmente requieren un pretratamiento antes
del análisis espectroscópico. Los ”metales totales” incluyen todo los metales enlazados inorgánicamente
y orgánicamente, disueltos y particulados. Las muestras sin color, transparentes (principalmente aguas
potables) que tengan una turbidez <1 NTU, sin olor y de una sola fase, se pueden analizar directamente
por espectroscopia de absorción atómica de llama, sin digestión para el análisis de metales totales.
Digestar todas las otras muestras antes de determinar metales totales. Para determinar metales disueltos,
filtrar la muestra, acidificar el filtrado y almacenar hasta la realización del ensayo. Para determinar
metales suspendidos, filtrar la muestra, digestar el filtro con el material en su superficie y analizar.

Tener precaución de no introducir metales a las muestras durante el tratamiento preliminar. Durante éste
evitar contacto con caucho, pinturas de base metálica, humo de cigarrillo, toallas de papel y todos aquellos
productos metálicos, incluyendo los de acero inoxidable, metal galvanizado y latón. Las campanas de
extracción convencionales pueden contribuir significativamente a la contaminación de las muestras,
particularmente durante la digestión
ácida en recipientes abiertos. Mantener los recipientes cubiertos con vidrios de reloj y lejos de corrientes
de aire para evitar la contaminación por este medio. Las puntas plásticas para pipetas son con
frecuencia contaminadas con Cu, Fe, Zn y Cd, antes de usar se deben remojar en HCl 2N ó HNO3 por
varios días y lavar con agua desionizada. Evitar el uso de plásticos coloreados que pueden contener
metales. En lo posible usar recipientes plásticos y puntas de pipetas certificadas como libres de metal.
Evitar el uso de vidrio si se va analizar Aluminio ó Sílice.

Usar agua libre de metales (desionizada) para todas las operaciones. Utilizar ácidos grado reactivo para la
preservación, extracción y digestión. Si se encuentran concentraciones excesivas de metales, purificar los
ácidos por destilación o usar ácidos ultra puros. Procesar blancos a través de los pasos de digestión y
filtración y evaluar los resultados del blanco respecto a los resultados correspondientes de las muestras.
Aplicar correcciones a los resultados de las muestras o tomar otras acciones correctivas tal como sea
necesario o apropiado.

La digestión de metales se utiliza para reducir la interferencia debida a materia orgánica y para convertir
los metales asociados a particulados en una forma que puede ser determinada por espectrometría de
absorción atómica.

El ácido nítrico digiere muchas muestras adecuadamente. El nitrato es un matriz aceptable para la
absorción atómica de llama. Algunas muestras pueden requerir una adición de ácido perclórico,
clorhídrico, fluorhídrico ó sulfúrico para una digestión completa. La tabla No. 1 es una guía en la
selección de que ácidos usar en adición al HNO 3 para una digestión completa. Como regla general, el
HNO3 solo es adecuado para muestras limpias ó materiales fácilmente oxidables; la digestión con HNO3 -
H2SO4 ó HNO3- HCl es adecuada para materia orgánica fácilmente oxidable; las digestiones con HNO 3 –
HClO4 ó HNO3 –HClO4-HF son necesarias para materia orgánica difícil de oxidar o minerales que
contienen silicatos.

Tabla No. 1 Ácidos usados en conjunto con HNO3 para preparación de muestras
Ácido Recomendado para Puede ser útil para No recomendado para
HCl Ag Sb, Ru, Sn Th, Pb
H2SO4 Ti - Ag, Pb, Ba
HClO4 - Materiales orgánicos -
HF - -

La tabla No. 2 indica los volúmenes sugeridos de muestra para la espectrometría de absorción atómica de
llama, si el volumen recomendado excede la capacidad del recipiente de digestión, proceder adicionando
muestra y evaporar. Cuando las muestras son concentradas durante la digestión (>100 mL de muestra
usada) determinar la recuperación del metal para cada matriz digestada para verificar la validez del
método. Usar volúmenes grandes de muestra puede requerir ácido adicional, el cual puede incrementar la
concentración de impurezas.
Tabla No. 2 Volúmenes sugeridos de muestra para digestar
Concentración estimada del
Volumen de la muestra
metal
(mL)
(mg/L)
< 0,1 1000
0.1-10 100
10-100 +
10

Reportar resultados como sigue:

Concentración del metal en la solución digestada, mg/L: A X B/C Donde:
A: Concentración del metal en la solución digestada, mg/L. B:
Volumen final de la solución digestada, mL
C: Volumen de la muestra, mL

Metales por espectrometría de absorción atómica

Debido a que los requerimientos para la determinación de metales por espectrometría de absorción
atómica varían con el metal y/o la concentración a ser determinada, a continuación se presentan los
métodos de espectrometría de absorción atómica de llama de nuestro interés.
-Aspiración directa en una llama de Aire-Acetileno: para la determinación de Antimonio, Bismuto,
Cadmio, Calcio, Cesio, Cromo, Cobalto, Cobre, Oro, Iridio, Hierro, Plomo, Litio, Magnesio, Manganeso,
Níquel, Paladio, Platino, Potasio, Rodio, Rutenio, Plata, Sodio, Estroncio, Talio, Estaño y Zinc (SM 3111
B).
- Aspiración directa en una llama de óxido Nitroso- Acetileno: para la determinación de Bario, Berilio,
Calcio, Molibdeno, Osmio, Renio, Sílice, Torio, Titanio y Vanadio (SM 3111 D).

Metales por espectrometría de absorción atómica de llama

Principio: en la espectrometría de absorción atómica de llama, una muestra es aspirada hacia una llama y
atomizada. Un haz de luz es dirigido a través de la llama, a un monocromador y sobre un detector que
mide la cantidad de luz absorbida por el elemento atomizado en la llama. Para algunos metales la
absorción atómica exhibe una sensibilidad superior sobre la emisión de llama, porque cada metal tiene su
propia longitud de onda de absorción característica y una fuente de luz del elemento usado, esto hace que
el método este relativamente libre de interferencias espectrales y de radiación. La cantidad de energía
absorbida en la llama a la longitud de onda característica es proporcional a la concentración del elemento
en la muestra sobre un rango de concentración limitado. La mayoría de instrumentos de absorción atómica
también pueden ser operados en modo emisión, el cual puede proporcionar una mejor linealidad para
algunos elementos.

Interferencias
-Interferencia química: el tipo de interferencia más molesta es la química, y resulta de la falta de
absorción en la llama por átomos enlazados en una combinación molecular. Esto puede ocurrir cuando la
llama no es lo suficientemente caliente para disociar las moléculas ó cuando los átomos disociados son
oxidados inmediatamente a compuestos que no se pueden disociar posteriormente a la temperatura de la
llama. Tales interferencias pueden reducirse o eliminarse por la adición específica de elementos ó
compuestos a la solución de la muestra. Por ejemplo la interferencia por fosfatos en la determinación de
magnesio puede ser superada por la adición de lantano. Similarmente, la introducción de calcio elimina la
interferencia por sílice en la determinación de manganeso. Sin embargo el sílice y metales como el
aluminio, bario, berilio y vanadio requieren de una llama de óxido nitroso-acetileno que alcanza una
mayor temperatura para disociar sus moléculas. La llama de óxido nitroso-acetileno también es útil en la
reducción de cierto tipo de interferencias químicas encontradas en la llama de aire-acetileno. Por ejemplo,
la interferencia causada por altas concentraciones de fosfatos en la determinación de calcio en la llama
aire-acetileno, es reducida en la llama de óxido nitroso-acetileno.

Las salmueras y el agua de mar pueden analizarse por aspiración directa pero se recomienda una dilución
de la muestra. La aspiración de soluciones que contienen una alta concentración de sólidos disueltos
puede resultar en una acumulación de estos en la cabeza del quemador. Esto requiere el apagado frecuente
de la llama y la limpieza de la cabeza del quemador.

Preferiblemente se debe usar una corrección de fondo cuando de analicen aguas con un contenido de
sólidos por encima del 1%, especialmente cuando la línea de resonancia primaria del elemento de interés
está por debajo de 240 nm. Cuando se analicen salmueras y agua de mar es necesario realizar chequeos
más frecuentes de recuperación para asegurar la precisión de los resultados en estas matrices concentradas
y complejas.

Corrección de fondo
La absorción molecular y la dispersión de la luz causadas por partículas sólidas en la llama pueden
conducir a valores erróneos de absorción excesivamente altos que dan como resultado errores positivos.
Cuando tales fenómenos ocurren, es necesario el uso de una corrección de fondo para obtener valores
precisos. Se pueden utilizar uno de estos tres tipos de corrección de fondo: de fuente continua (lámpara de
cátodo hueco lleno de hidrógeno ó lámpara de arco de deuterio), de Zeeman o corrección de Smith-
Hieftje.
Cuando la lámpara de cátodo hueco de fuente de líneas del elemento de interés y la fuente continua están
colocadas en el mismo trayecto óptico y en el mismo intervalo de tiempo, el fondo de la banda ancha de
la señal elemental se sustrae electrónicamente y la señal resultante queda compensada respecto al fondo.

Sensibilidad, límites de detección y rangos óptimos de concentración

La sensibilidad de la espectrometría de absorción atómica se define como la concentración de metal que
produce una absorción del 1% (una absorbancia de aproximadamente 0.0044). El
límite de detección del instrumento se define aquí como la concentración que produce una absorción
equivalente al doble de la magnitud de la fluctuación del fondo. La sensibilidad y límites de detección
varían con el instrumento, el elemento determinado, la complejidad de la matriz y la técnica seleccionada.

El intervalo de concentración óptimo por lo general comienza a partir de la concentración de varias veces
el límite de detección y se extiende hasta la concentración a la cual la curva de calibración empieza a
aplanarse. Para conseguir los mejores resultados conviene utilizar concentraciones de muestras y patrones
dentro del intervalo óptimo de concentración del espectrómetro. La tabla No. 3 indica los intervalos de
concentraciones medibles con atomización convencional. En muchos casos, el intervalo de concentración
mostrado en la tabla No. 3 puede extenderse hacia abajo por expansión de la escala o por integración de la
señal de absorción durante un largo tiempo. El intervalo puede prolongarse hacia arriba por dilución,
utilizando una longitud de onda menos sensible, haciendo girar la cabeza del quemador ó utilizando un
microprocesador para linealizar la curva de calibración a altas concentraciones.

Tabla No.3 Intervalos de concentraciones medibles con atomización convencional

Rango de
Longitud Límite de
Tipo de concentración Sensibilidad
Elemento de onda detección
llama óptimo mg/L
(nm) mg/L
mg/L
Ba 553.6 N-Ac 1-20 0.03 0.4
Fe 248.3 A-Ac 0.3-10 0.02 0.12
K 766.5 A-Ac 0.1-2 0.005 0.04
Mn 279.5 A-Ac 0.1-10 0.01 0.05
Na 589.0 A-Ac 0.03-1.0 0.002 0.015
Sr 460.7 A-Ac 0.3-5.0 0.03 0.15
N: Óxido nitroso A: Aire Ac: Acetileno

Preparación de estándares
Preparar soluciones estándares de concentración conocida del metal en agua con una matriz similar a la de
la muestra. Usar estándares que cubran la concentración esperada de la muestra y estén dentro del rango
de trabajo del método. Los estándares muy diluidos deben ser preparados diariamente de soluciones madre
(stock) en concentración mayor de 500 mg/L. Las soluciones madre pueden ser obtenidas de distintas
fuentes comerciales o pueden ser preparadas según procedimientos que se describen más adelante. Si se
realiza un procedimiento de digestión, llevar los estándares a través del mismo procedimiento de digestión
empleado con las muestras.

Equipo
 a. Espectrómetro de absorción atómica: que consiste de una fuente de luz que emite la línea del
espectro de un elemento (lámpara de cátodo hueco ó lámpara de descarga sin electrodo), un
dispositivo para vaporizar la muestra que es usualmente una llama, un medio de aislamiento de la
línea de absorción (monocromador o filtro y abertura ajustable), y un detector fotoeléctrico
asociado a un amplificador electrónico y equipo de medición.

b. Quemador: el tipo más común de quemador es el de premezclado, que introduce la muestra

atomizada en una cámara de condensación para eliminación de gotas grandes. El quemador puede
estar equipado con una cabeza convencional que contiene una sola ranura; una cabeza de tres
ranuras, que puede ser preferido para aspiración directa con una llama de aire-acetileno, o una
cabeza especial para ser usada con óxido nitroso y acetileno.

c. Lectura: la mayoría de instrumentos vienen equipados con un mecanismo de lectura digital o nula.
La mayoría de instrumentos modernos son equipados con microprocesadores o control
independiente con computadoras capaces de integrar las señales de absorción en el tiempo y
linealizar curvas de calibración a altas concentraciones.

d. Lámparas: usar una lámpara de cátodo hueco (HCL) o una lámpara de descarga sin electrodos
(EDL). Usar una lámpara para cada elemento a ser analizado. Las lámparas multielemento de
cátodo hueco generalmente proporcionan una menor sensibilidad que las lámparas de un solo
elemento. Las lámparas de descarga sin electrodo requieren un mayor tiempo de calentamiento y
estabilización.

e. Válvulas reductoras de presión: mantener los suministros de combustible y oxidante a presiones

un poco más altas que la presión de operación controlada mediante el uso adecuado de válvulas
reductoras. Usar válvulas reductoras por separado para cada gas.

f. Venteo: colocar un venteo de 15 a 30 cm sobre el quemador para remover humos y vapores de la

llama. Esta precaución protege al personal del laboratorio de vapores tóxicos, protege el equipo de
vapores corrosivos y proporciona estabilidad a la llama para evitar que esta se distorsione. Es
necesario seleccionar un blower de tamaño recomendado por el fabricante que provea un flujo de
aire adecuado.

Aseguramiento de la calidad/Control de calidad

Analizar un blanco entre lecturas de muestras o estándares para verificar la estabilidad de la línea base.
Realizar el cero cuando sea necesario.

A una muestra de cada diez (o una muestra de cada grupo de muestras, si menos de diez se van a analizar)
adicionar una cantidad conocida del metal de interés y reanalizar para confirmar la recuperación. La
cantidad de metal adicionado debe ser aproximadamente igual a la cantidad
encontrada. Si se encuentra presente poco metal adicionar una cantidad cercana a la mitad del rango lineal
del ensayo. La recuperación del metal adicionado debe encontrarse entre el 85% y el 115%.

Analizar una solución estándar adicional después de cada diez muestras o con cada lote de muestras para
confirmar que el ensayo se encuentra en control.

2. CONTENIDO
2.1 ELEMENTOS Y CONDICIONES
2.1.1 Disposiciones de seguridad:
- El uso de los instrumentos de absorción atómica sin la ventilación adecuada puede constituir un
peligro a la salud. Por ejemplo, la combustión de hidrocarburos halógenados produce vapores
tóxicos. Cuidados extremos deberán ser tomados en cuenta para extraer los gases adecuadamente.
- El no realizar el cambio del cilindro antes de que llegue a la presión de 600 kPa (85 psig) puede
ocasionar daño a las válvulas o tuberías dentro del sistema de control de gases, por el acarreo de la
acetona existente en el cilindro.
- La presión de la línea del acetileno que viene del cilindro nunca debe exceder la presión de 100
kPa (15 psig). A presiones altas, el acetileno puede espontáneamente descomponerse o explotar.
- Tanto las línea del oxidante como la del combustible deberán ser purgadas al final del día de
trabajo o si el instrumento no será utilizado por un largo periodo de tiempo. Las válvulas del
cilindro deberán ser cerradas para prevenir una falla de los reguladores de presión y que las líneas
de gas estén sujetas a la presión del tanque.
- El acetileno puede reaccionar con el cobre para formar compuestos potencialmente explosivos.
Las tuberías, reguladores y conexiones de cobre deben estar estrictamente prohibidas al igual que
latón con un contenido de cobre > 65%, plata o mercurio líquido.
- Todas las líneas de acarreo de óxido nitroso deberán estar libres de grasa, aceite u otro material
orgánico, de lo contrario puede ocurrir una combustión espontánea. Los cilindros de óxido nitroso
deberán ser considerados como cilindros de alta presión y deberán ser manejados con cuidados
extremos.
- Usar el óxido nitroso siguiendo estrictamente las instrucciones del fabricante. Una secuencia
incorrecta de los flujos de gas en el encendido y apagado del instrumento puede producir
explosiones de retorno de llama (flashback).
- Ajustar los cilindros de óxido nitroso con un regulador especial no congelable o envolver un
regulador corriente con un serpentín de calentamiento para evitar un retorno de llama en el
quemador causado por la reducción en el flujo de óxido nitroso a través de un regulador congelado.
(La mayoría de los instrumentos de absorción atómica modernos tienen los sistemas de control de
gas automáticos que pueden apagar una llama de óxido nitroso-acetileno de forma segura en caso de
una reducción en la velocidad de flujo del óxido nitroso.)
 - Colocar todos los cilindros de gas con seguridad en un lugar inamovible o permanentemente en
una pared.
- Cuando los cilindros de gas sean almacenados en áreas confinadas, como un cuarto, la ventilación
deberá ser la adecuada para prevenir acumulaciones tóxicas o explosivas. Mover o almacenar los
cilindros de gas solo en posición vertical con la cubierta de la válvula colocada. Colocar los
cilindros de gas lejos del calor o fuentes de ignición, incluyendo lámparas calientes.
- Cuando se almacenen los cilindros fuera de un edificio, los cilindros serán almacenados
protegidos contra temperaturas extremas (incluyendo los rayos directos del sol), y deberán ser
almacenados en un suelo firme.
- Marcar los cilindros claramente para identificar su contenido y estado (lleno, vacío, etc.).
- Use solo los reguladores y mangueras conectoras apropiadas.
- Use tubería de hierro galvanizado, acero u otro tipo de tubería la cual no reaccione químicamente
con el acetileno. Nunca utilice tubería de cobre para el acetileno.
- Realice periódicamente pruebas de fugas de gas, aplicando una solución jabonosa en las uniones
y sellos.
-Nunca vea la llama, lámparas de cátodo hueco, de descarga sin electrodos o de deuterio
directamente sin el uso de protección de los ojos. Radiación ultravioleta potencialmente peligrosa
puede ser emitida de estas fuentes. Gafas de seguridad ordinarias generalmente proporcionan
suficiente protección, pero protectores laterales adicionales aseguran un margen de seguridad
adicional. Las gafas de seguridad también proporcionan protección mecánica para los ojos.
- Nunca dejar la llama encendida sin atención.
- Los instrumentos de absorción atómica con corrección Zeeman generan un fuerte campo
magnético. Las personas con marcapasos deberán ser advertidos de no operar el equipo o acercarse
a las vecindades del instrumento con corrección Zeeman.
2.1.2 Elementos: Bata de laboratorio, guantes de nitrilo, gafas de seguridad, máscara con filtros
para vapores orgánicos.
2.1.3 Condiciones de operación: Ubicar el equipo en sitio adecuado según instrucciones del
fabricante.

2.2 EQUIPOS Y MATERIALES

2.2.1 Balanza Analítica
2.2.2 Plancha de calentamiento.
2.2.3 Campana de extracción.
2.2.4 Espectrómetro de Absorción Atómica y equipo asociado.
2.2.5 Material de vidrio: balones aforados, beakers, pipetas volumétricas clase A, etc.

2.3 INSUMOS (Reactivos)

2.3.1 Aire: limpio y secado a través de un filtro para remover aceite, agua y otras sustancias
extrañas. La fuente puede ser un compresor o un cilindro comercial.
2.3.2 Acetileno: grado estándar comercial.
2.3.3 Oxido Nitroso: comercialmente disponible en cilindros.
2.3.4 Agua libre de metales: usar agua libre de metales para preparar todos los reactivos y
estándares de calibración y como agua de dilución. Preparar agua libre de metales por desionización
del agua de la llave y/o por el uso de uno de los siguientes procesos, dependiendo de la
concentración del metal en la muestra: destilación única, re destilación o sub-ebullición. Siempre
chequear el agua desionizada o destilada para determinar si se encuentra presente el elemento de
interés como traza.
2.3.5 Solución de Calcio: Disolver 630 mg de carbonato de calcio, CaCO3, en 50 mL de HCl 1+5.
Si es necesario hervir suavemente para que todo el carbonato se disuelva. Enfriar y diluir a 1000 mL
con agua.
2.3.6 Acido Clorhídrico, HCl: 1%, 10%, 20% (todos v/v), 1+5, 1+1 y concentrado.
2.3.7 Solución de Lantano: Disolver 58.65 g de oxido de lantano, La 2O3, en 250 mL de HCl
concentrado. Añadir el ácido suavemente hasta disolver todo el material y diluir a 1000 mL con
agua.
2.3.8 Peróxido de hidrogeno al 30%.
2.3.9 Acido Nítrico, HNO3: 2% (v/v), 1+1 y concentrado.
2.3.10 Agua regia: Añadir 3 volúmenes de HCl concentrado a 1 volumen de HNO3 concentrado.
2.3.11 Solución de Cloruro de Potasio: Disolver 250 g de KCl en agua diluir a 1000 mL.
2.3.12 Solución de Nitrato de Aluminio: Disolver 139 g de Al(NO 3)3. 9H2O en 150 mL de agua.
Acidificar ligeramente con HNO3 concentrado para evitar posible hidrólisis y precipitación Calentar
para disolver completamente. Enfriar y diluir a 200 mL.
2.3.13 Soluciones estándares de metales: preparar una serie de soluciones estándares de metales
en el rango óptimo de concentración por dilución apropiada de las siguientes soluciones stock con
agua conteniendo 1.5 mL de HNO 3 concentrado/ L. Las soluciones stock estándares también se
encuentran disponibles comercialmente. Alternativamente prepararlas como se describe abajo.
Secar completamente los reactivos antes de su uso. En general, usar reactivos de alta pureza.
1) Solución Estándar de Bario, 100 mg/L: disolver 0.1516 g de BaCl2 (secado a 250°C por dos
horas), en cerca de 10 mL de agua con 1 mL de HCl 1+1. Adicionar 10 mL de HCl 1+1 y diluir
a 1000 mL con agua.
2) Solución Estándar de Estroncio, 100 mg/L: suspender 0.1685 g de SrCO3 en agua y disolver
cuidadosamente con una cantidad mínima de HNO 3 1+1. Adicionar 10 mL de HNO3
concentrado y diluir a 1000 mL con agua.
3) Solución Estándar de Hierro, 100 mg/L: disolver 0.100 g de alambre de hierro en una mezcla
de 10 mL de HCl 1+1 y 3 mL de HNO 3 concentrado. Adicionar 5 mL de HNO 3 concentrado y
diluir a 1000 mL con agua.
4) Solución Estándar de Manganeso, 100 mg/L: disolver 0.1000 g de manganeso metálico en 10
mL de HCl concentrado, mezclado con 1 mL de HNO3 concentrado. Diluir a 1000 mL con
agua.
5) Solución Estándar de Potasio, 100 mg/L: disolver 0.1907 g de cloruro de potasio, KCl (secado
a 110°C), en agua y aforar a 1000 mL.
 6) Solución Estándar de Sodio, 100 mg/L: disolver 0.2542 g de cloruro de sodio, NaCl, secado a
140°C, en agua y adicionar 10 mL de HNO3 concentrado y aforar a 1000 mL.

2.4 CONDICIONES AMBIENTALES

Trabajar la muestra a 25ºC y hacer los pesajes de los reactivos requeridos para la preparación del
ensayo en balanza analítica ubicada en sitio fijo, libre de corrientes de aire y vibraciones.

2.5 PROCEDIMIENTO GENERAL

5.5.1. Digestión ácida total HNO3-HCl
1. Reactivos

a. Aparatos:

- Plato de calentamiento.

- Erlenmeyers de 125 ml, beaker Griffin de 150 ml ó cristalizadores, lavados con ácido y
enjuagados con agua.

- Balones aforados de 100 ml.

- Vidrios de reloj.

b. Reactivos:

- Ácido nítrico concentrado grado analítico ó mejor, HNO3

- Ácido clorhídrico, HCl 1+1

- Ácido nítrico, HNO3 1+1

2. Procedimiento: transferir un volumen de muestra homogenizada y preservada con ácido, según

criterio de la tabla No. 2 a un cristalizador. En una campana de extracción adicione 3 ml de
HNO3 concentrado y cubra con un vidrio de reloj. Llevar el cristalizador a una plancha de
calentamiento y cuidadosamente evaporar la muestra a menos de 5 mL, no permitir que la muestra
entre en ebullición ni que el fondo del cristalizador se seque. Retirar del calentamiento y enfriar.
Lavar paredes abajo el cristalizador y el vidrio de reloj con un poco de agua desionizada y
adicionar 5 mL de HNO3 concentrado. Cubrir el cristalizador con un vidrio de reloj y calentar
nuevamente. Incrementar la temperatura de la plancha de calentamiento hasta que ocurra un
reflujo suave, continuar el calentamiento adicionando ácido si es necesario hasta que la digestión
sea completa, lo cual generalmente es indicado por un cambio de color claro en la muestra
digestada ó cuando ésta no cambia su apariencia con reflujo continuo. Enfriar, adicionar 10 mL de
HCl 1+1 y 15 mL de agua desionizada por 100 ml de volumen final. Calentar por 15
 minutos adicionales para disolver cualquier precipitado o residuo. Enfriar, lavar paredes abajo el
cristalizador y el vidrio de reloj con agua. Filtrar la muestra digestada para remover cualquier
material insoluble que pueda obstruir el nebulizador sobre un balón volumétrico, con lavados
sucesivos del cristalizador y del filtro de manera que se recupere el total de la muestra, aforar al
volumen inicial y homogenizar muy bien.

DIAGRAMA DE FLUJO DE LA DIGESTIÓN ÁCIDA TOTAL CON HNO3-HCL

100 ml DE MUESTRA DE UN BALON AFORADO- LLEVAR A UN CRISTALIZADOR

3ml [HNO3]
Cubrir con un vidrio de reloj

DIGERIR HASTA 5 ml
No permitir que la muestra ebulla, ni se seque el fondo del recipiente

ENFRIAR

Enjuagar las paredes del cristalizador y el vidrio de reloj con un mínimo de agua desionizada ADICIONAR
5ml [HNO3]

AUMENTAR LA TEMPERATURA DE CALENTAMIENTO- PRESENCIA REFLUJO SUAVE

CALENTAR HASTA LIGERO COLOR DEL
DIGESTADO Ó AUSENCIA DE CAMBIO EN SU
APARIENCIA AL CONTINUAR EL REFLUJO,
SINO AGREGAR MAS [HNO3]

LLEVAR POR EVAPORACIÓN A 5 ml

ENFRIAR

ADICIONAR 10 ml HCL 1: 1 Y 15 ml H2O

CALENTAR POR 15 MINUTOS

ENFRIAR

FILTRAR – FILTRO BANDA AZUL

Lavar las paredes del recipiente, vidrio de reloj y filtro con porciones sucesivas de agua desionizada

AFORAR A 100 ml
Materiales:
- Cristalizadores - Vidrios de reloj
- Pipetas de 5 ml – 10 ml - Embudos
- Balones aforados de 100 ml - Envases plásticos 100 ml
* Toda la vidriería purgada con HNO3 al 1.5 %

5.5.2. Preparación de la muestra: cuando se requiere determinar Ca ó Mg, diluir y mezclar 100 mL
de la muestra o estándar con 10 mL de la solución de lantano (5.3.7), antes de aspirar. Cuando se
desea determinar Fe o Mn, mezclar 100 mL de muestra con 25 mL de la solución de calcio (5.3.5),
antes de aspirar. Cuando se desea determinar Cr, mezclar 1 ml de H2O2 30% con cada 100 mL de
muestra antes de aspirar.

Para la determinación de Al, Ba o Ti, mezclar 2 mL de la solución de KCl (5.3.11) en 100 mL de

muestra o estándar antes de aspirar. Para determinar Molibdeno y Vanadio, mezclar 2 mL de la
solución de Al(NO3)3. 9H2O (5.3.12) en 100 mL de muestra o estándar antes de aspirar.
Alternativamente puede usar volúmenes más pequeños de manera proporcional.

5.5.3. Operación general del Instrumento

5.5.3.1 Método directo de llama de Aire-Acetileno: debido a las diferencias entre marcas y
modelos de espectrómetros de absorción atómica, no es posible formular instrucciones aplicables a
todos los instrumentos. Ver el manual de operación del fabricante. En general, proceder de acuerdo
a lo siguiente: Instalar una lámpara de cátodo hueco para el metal deseado en el instrumento y
ajustar aproximadamente la perilla de longitud de onda, de acuerdo a la tabla No. 3. Fijar el
ancho de abertura (slit) de acuerdo a lo sugerido por el fabricante para el elemento a determinar.
Encender el instrumento, aplicar a la lámpara de cátodo hueco la corriente sugerida por el fabricante
y dejar calentar el instrumento hasta que la fuente de energía se estabilice, generalmente alrededor
de 10 a
20 minutos. Reajustar la corriente como sea necesario, después del calentamiento. Optimizar la
longitud de onda ajustando la perilla de longitud de onda hasta que sea
obtenida la mayor ganancia. Alinear la lámpara de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Instalar la cabeza del quemador adecuado y ajustar la posición del mismo. Dar paso al aire y ajustar
la velocidad de flujo a la especificada por el fabricante para obtener la máxima sensibilidad para el
metal que se está determinando. Dar paso al acetileno, ajustar la velocidad de flujo al valor
especificado, y encender la llama. Dejar estabilizar la llama por unos pocos minutos. Aspirar un
blanco que consiste en agua desionizada que contiene la misma concentración de ácido en
estándares y muestras. Realizar el cero del instrumento. Aspirar una solución estándar y ajustar la
velocidad de aspiración del nebulizador hasta obtener la máxima sensibilidad. Ajustar el quemador
vertical y horizontalmente para obtener la máxima respuesta. Aspirar el blanco de nuevo y realizar
el cero del instrumento. Aspirar un estándar cercano a la mitad del rango lineal. Registrar la
absorbancia de este estándar cuando esta recién preparado y con una lámpara de cátodo hueco
nueva. Referirse a estos datos en determinaciones subsecuentes del mismo elemento para chequear
la consistencia del ajuste del instrumento y el envejecimiento de la lámpara de cátodo hueco y el
estándar.

En este punto el instrumento se encuentra listo para operar. Al finalizar los análisis, extinguir la
llama apagando el acetileno primero y luego del aire.

5.5.3.2 Método directo de llama de Óxido Nitroso-Acetileno: debido a las diferencias entre marcas
y modelos de espectrómetros de absorción atómica, no es posible formular instrucciones aplicables
a todos los instrumentos. Ver el manual de operación del fabricante. En general, proceder de
acuerdo a lo siguiente: Instalar una lámpara de cátodo hueco para el metal deseado en el
instrumento y ajustar aproximadamente la perilla de longitud de onda, de acuerdo a la tabla No. 3.
Fijar el ancho de abertura (slit) de acuerdo a lo sugerido por el fabricante para el elemento a
determinar. Encender el instrumento, aplicar a la lámpara de cátodo hueco la corriente sugerida por
el fabricante y dejar calentar el instrumento hasta que la fuente de energía se estabilice,
generalmente alrededor de 10 a 20 minutos. Reajustar la corriente como sea necesario, después del
calentamiento. Optimizar la longitud de onda ajustando la perilla de longitud de onda hasta
que sea obtenida la mayor ganancia. Alinear la lámpara de acuerdo con las instrucciones del
fabricante.

Después de ajustar la longitud de onda, instalar la cabeza del quemador para óxido nitroso. Dar paso
al acetileno (sin encender la llama) y ajustar la velocidad de flujo al valor especificado por el
fabricante para una llama de óxido nitroso-acetileno. Cortar el acetileno. Con los suministros de aire
y óxido nitroso activados, dar paso al óxido nitroso y ajustar el flujo del gas de acuerdo a las
especificaciones del fabricante. Girar la válvula de oxidante a la posición de aire y verificar que la
velocidad de flujo es el mismo. Dar paso al acetileno y encender para obtener una llama
amarilla brillante. Con un movimiento
rápido cambiar el oxidante a óxido nitroso. La llama debe tener un cono rojo sobre la cabeza del
quemador, sino es así, ajustar el flujo de combustible (acetileno) para obtener un cono rojo. Después
de encender la llama de óxido nitroso, dejar que el quemador alcance el equilibrio térmico antes de
iniciar los análisis.

Aspirar un blanco que consiste en agua desionizada que contiene 1.5 mL de HNO 3 concentrado/L y
verifique la velocidad de aspiración. Ajustar si es necesario a una velocidad entre 3 y 5 mL/min.
Realizar el cero del intrumento. Aspirar un estándar del metal deseado con una concentración
cercana al punto medio del rango de concentración óptimo y ajustar el quemador (vertical y
horizontalmente) en la trayectoria de la luz para obtener una respuesta máxima. Aspirar el blanco y
realizar nuevamente el cero del instrumento. El instrumento está listo para correr los estándares y
muestras.

Para extinguir la llama, cerrar la válvula de óxido nitroso y pasar a la de aire y luego cortar el
acetileno. Este procedimiento elimina el peligro de retorno de llama que puede ocurrir en el
encendido y apagado directo del óxido nitroso y acetileno.

5.5.4 Preparación de Estándares: Seleccionar por lo menos 3 concentraciones de las soluciones

estándares del elemento a analizar, que cubra la concentración esperada de la muestra. Aspirar un
blanco y realizar el cero del instrumento. Luego aspirar cada estándar sucesivamente en la llama y
registra el valor de la absorbancia obtenida. Ver tabla No.3 para chequear los rangos de trabajo.

Preparar una curva de calibración graficando la absorbancia versus las concentraciones de las
solucione estándares, en papel gráfico lineal. Para los instrumentos equipados con lectura directa de
concentración, este paso no es necesario. Graficar las curvas de calibración para Ca y Mg
basadas en las concentraciones originales de los estándares antes de la dilución con la solución
de lantano. Graficar las curvas de calibración para Fe y Mn basadas en las concentraciones
originales de los estándares antes de la dilución con la solución de calcio. Graficar la curva de
calibración para Cr basada en las concentraciones originales de los estándares antes de la adición
de H2O2.

Graficar las curvas de calibración para Al, Ba y Ti basadas en las concentraciones

originales de los estándares antes de adicionar la solución de KCl. Graficar las curvas de calibración
para Mo y V basadas en las concentraciones originales de los estándares antes de adicionar la
solución de Al(NO3)3.
 5.5.5 Análisis de muestras: lavar el nebulizador por aspiración de agua que contiene 1.5 mL de
HNO3 concentrado/L y hacer el cero del instrumento. Aspirar las muestras y determinar sus
absorbancias.

5.5.6 Cálculos: calcular la concentración de cada metal, en microgramos por litro (µg/L) para
elementos traza y en miligramos por litro (mg/L) para los metales más comunes, haciendo
referencia a la apropiada curva de calibración preparada. Alternativamente leer la concentración
directamente del instrumento, si el instrumento está equipado para ello. Si la muestra ha sido
diluida, multiplicar por el factor de dilución apropiado.

2.6 CONTROL DE CALIDAD

Junto con las muestras debe ser analizado un blanco de calibración al inicio, intermedio y final de una
corrida de muestras, un blanco del método, un 5% de duplicado de muestras, un estándar de calibración
de concentración media para verificación de la calibración inicial y un 5% de spike (matriz fortificada
del laboratorio “MFL”), siguiendo el mismo procedimiento utilizado con las muestras.

2.7 CONDICIONES CRÍTICAS DEL PROCEDIMIENTO

Utilizar los elementos de protección personal según el parámetro analizado, para todos los metales
utilizar la máscara con filtros para vapores orgánicos, cuando se determine Mercurio cambiar los filtros
por vapores de mercurio, emplear gafas de lente oscuro cuando se realizan determinaciones en llama
mezcla de acetileno – oxido nitroso. Tener especial cuidado en la manipulación de los cilindros y flujos
de los gases de combustión del equipo. Mantener las válvulas cerradas mientras no se opere el equipo,
de igual forma chequear antes de iniciar los análisis en absorción atómica, los manómetros de cada
cilindro y del compresor de aire, teniendo en cuenta las condiciones de operación especificadas por el
fabricante. Disponer adecuadamente los residuos ácidos provenientes de la atomización en llama de las
muestras, almacenados en el garrafón blanco. Consultar siempre la ficha de seguridad de los productos
manejados para determinar el correcto uso y disposición final.

2.8 OPERACIÓN ESPECÍFICA ESPECTROFOTÓMETRO DE ABSORCIÓN ATÓMICA

BUCK SCIENTIFIC 211

Usar las flechas [left/right] para cambiar las opciones dentro de un ítem del menú y siempre presionar
[Enter] para que el cambio sea reconocido. Usar las flechas [Up/Down] para desplazarse al siguiente
ítem del menú.

2.8.1 Análisis por absorción de llama

2.8.1.1 Alineación de la longitud de onda

Instalar la lámpara deseada en la posición superior (la más alta de la torreta de lámparas, es la posición
de operación). Enchufar el conector de la lámpara a esta posición, el cual está indicado por un número
sobre la lámpara.

Presionar el botón [Lib] para entrar a la biblioteca, presionar el botón [Sel] hasta que el número de la
lámpara coincida con el de la posición de la torreta que está usando. Presionar las flechas [Up/Down]
hasta que se muestre el metal y método deseado, verificar que ha seleccionado un archivo del tipo
absorbancia/llama, los cuales se indican como: elemento-D2-longitud de onda-lib3. Presionar [2] para
cargar el método, luego presionar [Enter] y luego [Esc]. El archivo que seleccionó aparecerá en la parte
superior de la ventana de ANÁLISIS ACTIVO.

Nota. En algunos de los programas para la determinación de elementos se encuentran archivos de tipo
lib1, estos son equivalentes a los archivos de tipo lib3 para absorbancia/llama y pueden ser trabajados
de igual manera.

Girar la perilla para seleccionar la posición del slit especificado en el método, el cual se encuentra en la
parte lateral derecha del equipo.

Girar la perilla de longitud de onda para corregirla a la especificada por el método, la cual se encuentra
en la parte lateral derecha del equipo.

Presionar [Align] para mostrar el gráfico de barras.

El gráfico de barras indica la cantidad de energía de la lámpara alcanzada por el detector, “0” en la
escala representa la cantidad de energía obtenida luego de presionar [Align]. Girar la perilla de
longitud de onda muy despacio en una dirección, si el gráfico alcanza el máximo hacia la derecha
presione [Align] para centrarlo, si el gráfico se mueve hacia la izquierda, girar la perilla de longitud de
onda en la dirección opuesta. Repetir este procedimiento hasta obtener la lectura más alta que se pueda
(con el gráfico lo más a la derecha posible). Prestar atención al valor numérico de la energía, esta va
de una escala de 0 a 6 y se debe alcanzar la más alta posible. El gráfico muestra la lectura de energía,
este se desplaza a la derecha a medida que el valor de la energía se incrementa.

La mayoría de las lámparas emiten una energía entre 2.5 y 4.5. Si se presentan problemas alineando la
lámpara, presionar [Bkgnd] para apagar la lámpara y volver a intentarlo. Presionar [Align] cuando
haya terminado, de ésta manera la longitud de onda quedará establecida.
2.8.1.2 Alineación de la lámpara

En la parte superior izquierda del equipo encuentra una tapa, al levantarla se encuentran dos perillas
para la alineación de la lámpara (la perilla frontal para alineación horizontal y la trasera para alineación
vertical), rotar cualquiera de las dos perillas en una dirección mientras observa el gráfico de barras
tratando de alcanzar la mayor energía posible de manera similar a la alineación de la longitud de onda.

Cuando la energía ha sido maximizada, mover la otra perilla y repetir el procedimiento. Alternar el
ajuste entre las dos perillas hasta que no haya más ganancia de energía, en este punto la lámpara
quedará ajustada. Presionar [a/z] para hacer 0 y salir a la pantalla de análisis.

2.8.1.3 Alineación del quemador

Ajuste vertical  Perilla derecha (el quemador se mueve de arriba hacia abajo) Ajuste
horizontal  Perilla izquierda (el quemador se mueve de adelante hacia atrás)
Ajuste de rotación  Barra del quemador

a. Posición vertical
Con la llama y gases apagados poner una tarjeta o superficie similar sobre la parte superior del
quemador, de tal manera que pueda ver la imagen de la lámpara sobre la tarjeta. Girar la perilla de
ajuste vertical de tal manera que el borde inferior de la luz del punto focal esté aproximadamente a 4
mm de la parte superior del quemador (esta es la mejor posición para la mayoría de análisis). Ajustar la
posición horizontal si es necesario para obtener la imagen sobre la ranura de la cabeza del quemador;
este es solo un ajuste grueso. Realizar el cero presionando [a/z], elevar lentamente la cabeza del
quemador mientras observa la absorbancia en la pantalla, cuando la cabeza del quemador intercepta el
haz de luz ésta de repente se hace positiva, cuando note que esto ocurre parar y bajar la cabeza del
quemador cerca de los vueltas de la perilla.

b. Posición horizontal

Nota. Peligro de retorno de llama “Flashback”: Siempre dar paso al aire primero y
apagarlo de último. Asegurar que el circuito de drenaje está lleno con agua, para
prevenir que el acetileno fluya hacia el recipiente de residuos. Nunca use vidrio o algo
que pueda romperse como recipiente de residuos.

Con los cilindros de acetileno y aire listos (abrir válvulas de paso al equipo) y la lámpara de D2 de
corrección de fondo apagada, presionar [a/z] para hacer cero en la absorbancia en la pantalla, oprimir el
botón [Air] mientras aspira agua para que se produzca un aerosol en la cabeza del quemador. Girar la
perilla de ajuste horizontal en una dirección mientras observa
la absorbancia en la pantalla, con el objeto de localizar la cabeza del quemador directamente bajo el
haz de luz de la lámpara, con el fin de alcanzar la lectura más alta posible de absorbancia.

Repetir el procedimiento con el ajuste de rotación (con la barra del quemador), se debe físicamente
rotar la cabeza del quemador para obtener la mayor lectura de absorbancia.

2.8.1.4 Ajuste del nebulizador

- Mientras todavía aspira agua girar el ajuste del nebulizador en sentido contrario a las manecillas del
reloj hasta observar burbujas de aire en el capilar y dentro del beaker, girar lentamente en sentido de las
manecillas del reloj hasta que el nebulizador empiece a aspirar el agua y observar la lectura de
absorbancia en la pantalla. Ajustar el nebulizador para alcanzar la lectura más alta y estable que se
pueda (esto probablemente puede ocurrir dentro uno o dos giros desde donde el nebulizador empezó a
aspirar). De esta manera el nebulizador queda ajustado y no requerirá repetir este procedimiento por
varios meses.

Nota. Mediante el nebulizador se realiza el ajuste del flujo de aire (oxidante) en el equipo.

Al terminar encender el corrector de fondo si el método lo requiere, presionando [Bkgnd]. El corrector

de fondo es útil en longitudes de onda por debajo de 450 nm para reducir o eliminar falsas
absorbancias debido a sólidos disueltos o materia orgánica en la muestra.

Recuerde: si usted no ha cambiado nada solo necesita verificar estos alineamientos,

si ha tenido problemas o necesita cambiar la altura de la cabeza del quemador para
análisis especiales. Cuando cambie la lámpara solo necesita alinear la longitud de
onda y la lámpara.

2.8.1.5 Encendido de la llama

El equipo cuenta con una caja de gases la cual ha sido diseñada para una operación de la llama a través
de botones, también ha sido construida con características de seguridad para evitar una operación
inapropiada. Esta incluye:

a. Un sensor de llama que cierra el gas si no se detecta llama.

b. Un sensor de drenaje, que impide el encendido a menos que la trampa esté llena de agua.
c. Sensor de venteo apagado que impide el encendido a menos que el enchufe esté instalado.
d. Sensor de cabeza de quemador, que asegura que el quemador esté instalado apropiadamente
para los gases usados.
e. Detección de falla de energía, que apaga la llama de forma segura si se produce una falla de
energía.
f. Detección de teclado, que apaga la llama en caso de realizarse una selección incorrecta de teclas.

2.8.1.5.1 Encendido de la llama Aire-Acetileno

Asegurar que esté instalada la cabeza del quemador para aire (cabeza de quemador grande, de 10 cm).

Establecer la presión de aire a 60 psi (4,1 bar) y el acetileno a 13 psi (Abrir válvulas de paso al
instrumento y verificar adecuadas presiones en los reguladores de los cilindros de gas, de ser necesario
se deberán ajustar).
Pulsar y mantener oprimida la tecla [Air] en el panel de la izquierda y comprobar que los flujos de aire
y acetileno se encuentran alrededor de 5. Ajustar el flujo de acetileno si es necesario, o la llama puede
no encenderse.

Las luces de bloqueo deben estar apagadas excepto la de bloqueo de N2O (N2O interlock). Si la luz
del quemador (Burner Sensor) se mantiene encendida entonces puede que se requiera adicionar agua
al sensor de drenaje, la cabeza del quemador no está bien puesta en su lugar o el venteo no está
encendido.

Pulsar y mantener oprimida la tecla [ON] de 5 a 8 segundos hasta que la llama se encienda, luego soltar
el botón. Si la llama no enciende verificar los flujos de gas e intentar nuevamente.

Después del encendido de la llama ajustar el flujo de acetileno hacia abajo con la perilla “Fuel
Adjust”, de manera que sea de una a dos unidades menor que el flujo de aire, a menos que el análisis
requiera un flujo mayor. En este punto las teclas [ON], [Air], [N2O] están desabilitadas.

Para apagar la llama presionar la tecla [OFF] y los gases se cortarán y se extinguirá la llama.

Apagado temporal: mientras la llama está encendida, apagar el flujo de acetileno oprimiendo el
botón [OFF] y cerciorarse que la llama se ha apagado. Aspirar agua desionizada por unos pocos
minutos con el aire aún encendido, para enfriar el quemador y desmontarlo.

Apagado total: Con la llama apagada, cerrar el tanque de acetileno. Abrir la válvula de paso de
acetileno al instrumento y observará que el medidor de flujo cae a cero, de esta manera la línea del
combustible se ha desocupado. Cerrar la válvula de paso del acetileno al instrumento y la de los otros
cilindros de gases. Finalmente apagar el equipo.
2.8.1.5.2 Encendido de la llama Óxido Nitroso-Acetileno

Quitar las tres tuercas que sujetan la cabeza del quemador de Aire-Acetileno y a continuación
desmontar la cabeza del quemador.

Asegurar que la junta este en su lugar e instalar el quemador de óxido nitroso. Apretar las tuercas
teniendo cuidado de no apretarlas demasiado y conectar el pin de bloqueo.

Presionar el botón [Air] y chequear los flujos adecuados de encendido.

Pulsar y mantener oprimido el botón [ON] entre 5-8 segundos, hasta que la llama se encienda.

Pulsar el botón [N2O] y soltarlo, la llama cambia inicialmente de un amarillo brillante a una azulada
característica de la llama de óxido nitroso. La llama debe tener un cono rojizo en la superficie del
quemador de una altura de ½”, sino es así se debe ajustar el flujo de combustible (Acetileno) para que
esto ocurra. No se debe bajar demasiado el flujo de combustible tal que desaparezca el cono rojo, ni
aumentarlo demasiado de tal manera que la llama se vuelva blanca.

El acetileno de más que se introduce, se convierte en carbón, el cual se acumula en la ranura de

la cabeza del quemador causando lecturas inestables. Algunos elementos pueden requerir un flujo alto
de combustible para una óptima sensibilidad.

El carbón puede ser retirado con un destornillador de mango largo, mientras la llama de Aire/Acetileno
se enciende. Puede remitirse a la sección de optimización de la llama para ajustar las condiciones y
lograr obtener una máxima absorbancia.

Apagado Normal: para apagar la llama de óxido nitroso de manera normal, pulsar el botón [Air]
para regresar a una llama basada en aire y después de 10 segundos, pulsar el botón [OFF].

Apagado de emergencia: para apagar la llama de óxido nitroso de emergencia, simplemente

presionar [OFF] y el sistema purga de inmediato todos los gases inflamables en el sistema con un soplo
de aire comprimido, con un suave sonido. Esto no es un retorno de llama, sino un apagado forzoso
seguro de la llama.

2.8.1.6 Chequeo de Sensibilidad y Optimización de la Llama

2.8.1.6.1 Chequeo de Sensibilidad

 Antes de realizar la calibración chequear el desempeño de la sensibilidad para verificar que el sistema
de quemador está funcionando adecuadamente. Encender la llama y aspirar el estándar de mayor
concentración, según la Tabla No. 4, observar la lectura de absorbancia. Observar en la Tabla No. 4 en
la columna de “Chequeo de Sensibilidad”, la concentración del patrón de sensibilidad que debe correr
de tal manera que debe obtener una lectura de absorbancia cercana a 0.200 abs (se permite una
diferencia hasta de ±20%), si la lectura no se obtiene deberá revisar la alineación del quemador, la
limpieza del nebulizador, la cabeza del quemador y/o optimizar la llama.

2.8.1.6.2 Optimización de Llama

Muchos elementos corren bien en una llama azulada y pobre (llama oxidante), como resultado de
establecer el flujo del acetileno en cuatro (4) y ajustar la altura del quemador con una tarjeta como se
describió anteriormente. Sin embargo para elementos que requieren llamas ricas ó reductoras
(incluyendo aquellos que requieren N2O) o si se ha tenido problemas con la verificación de la
sensibilidad, una optimización de la llama puede mejorar los resultados. Empezar con la cabeza del
quemador 4 mm por debajo del haz de luz, encender la llama y permitir que el quemador se caliente
por unos pocos minutos mientras se aspira agua desionizada. Realizar el cero del instrumento y luego
aspirar el estándar de mayor concentración. Lentamente incrementar el acetileno mientras observa la
lectura de absorbancia hasta alcanzar el mayor valor posible. Si mediante el incremento de combustible
no logra una mejora, intentar reduciendo el flujo de acetileno (si está corriendo con N2O, tener cuidado
de no permitir reducir el cono por debajo de 0.5 in). Como incrementar el flujo de acetileno puede
cambiar la altura de la llama se debería hacer el ajuste vertical del quemador también.

Tabla No. 4 Rangos de concentración para Absorción Atómica de Llama- Buck Scientific
Límite de Chequeo de Rango
Longitud de Slit Tipo de Llama,
Metal detección Sensibilidad Lineal
Onda (nm) (nm) Color
(mg/L) (mg/L) (mg/L)
N-A.
Bario 553.6 0.7 0.50 10 25.00 Enriquecida-
reductora /Roja
A-A.
Hierro 248.3 0.2 0.05 2.5 5.00
Oxidante/Azul
A-A.
Manganeso 279.5 0.7 0.03 1.25 2.50
Oxidante/Azul
A-A.
Potasio 766.5 0.7 0.01 1.00 3.00
Oxidante/Azul
A-A. Oxidante/
Sodio 589.0 0.2 0.005 0.25 2.00
Azul
N-A.
Estroncio 460.7 0.2 - 2.5 3.75 Enriquecida-
reductora/Roja
A-A: Aire-Acetileno N-A: N2O-Acetileno
El “Rango Lineal” es la concentración de analito en mg/L que producirá una absorbancia de
aproximadamente 0.300 Abs y mantiene de manera segura el análisis en la parte lineal de la curva de
calibración. En esta área de la curva se necesita un solo estándar de calibración pero es recomendable
correr uno adicional. Por encima de la sección lineal de la curva se requiere una calibración
multipunto. Los valores para el chequeo de la sensibilidad en la Tabla No.4 son las cantidades en
mg/L requeridas para dar una lectura de absorbancia de
0.200 Abs.

2.8.1.7 Estándares de Calibración y Análisis de Muestras

Nota. Chequear el menú [help] para mostrar una lista de funciones especiales disponibles.

Presionar la tecla [Cal]. La pantalla mostrará el formulario de calibración. En la posición 151 se

mostrará como std 1-blanco y en las posiciones 152 a 154 los estándares 2 al 4.
Nota 1: el primer estándar (el superior de la tabla) siempre debe ser el blanco.
Nota 2: por defecto se define el Std 2 como el “máximo” estándar que es necesario para definir los
análisis por emisión, pero puede ser ignorado para otras calibraciones.
Nota 3: si el formulario de calibración ha sido editado pueden presentarse otros datos. Presionando [align]
se restablecen los datos de muestra por defecto.
Nota 4: si desea establecer sus propias posiciones en el formulario de calibración, puede editar los
identificadores de las muestras en el menú [smpls].
Nota 5: deben definirse las posiciones, nombres y valores de concentración, sino pueden presentarse
errores.

Presionar la tecla [down arrow ] para ubicarse en la posición 152 luego presionar la tecla
[Sel] para mover el cursor a la columna de concentración y digitar los valores de la concentración de
los estándares que serán analizados. Luego presionar [Enter] para introducir el valor. Si tiene menos de
tres estándares para correr, puede ubicarse en la posición que desea eliminar y luego presionar la tecla
[upper case] y manteniéndola oprimida presionar [del] y [enter] para remover la línea seleccionada. Si
desea adicionar un quinto o sexto estándar, escribir el número de posición 155 ó 156 debajo de la
posición 154 y presionar [enter]. El identificador de la muestra será traído desde la página [smpls]
automáticamente. Para introducir más estándares se pueden adicionar los identificadores apropiados en
la página [smpls].

Presionar la tecla [Cntls] y seleccionar las unidades en las cuales quiere el reporte. Seleccionar el tipo
de curva. La lineal requiere mínimo de un estándar, la de segundo orden (2nd) requiere dos estándares.
etc. Para mejores resultados usar al menos un estándar más de los requeridos. Debería ser capaz de
obtener una buena curva de calibración con 2 ó
 más estándares usando un ajuste de segundo orden. Usar la opción de curvas de tercer o cuarto orden
para el uso de más estándares solo si es necesario.

Seleccionar el número de replicas de los estándares que desea, el resto de información que aparece en
el formulario es solamente información de referencia de la calibración anterior.

Presionar la tecla [ESC] para retornar al formulario de calibración.

Antes de iniciar estar seguro que la llama haya estado encendida al menos 5 minutos y que el corrector
de fondo este encendido para análisis con longitudes de onda por debajo de los 450 nm.

Presionar la tecla [Start] y seguir las instrucciones de la parte inferior de la pantalla.

Aspirar el blanco y presionar la tecla [Enter], siempre permita que transcurran 5 segundos entre la
aspiración del blanco, los estándares y la muestra para permitir que la muestra se equilibre en la llama.

Aspirar el primer estándar y presionar [Enter].

Continuar con los siguientes estándares repitiendo el paso anterior.

Cuando finalice presionar el botón [Cal] para calcular la curva. Si no hay errores, presionar el botón
[Yes] para calcular la curva, luego presionar la tecla [Enter] para graficar la curva.

Si observa que la curva es satisfactoria presionar la tecla [ESC] dos veces para retornar a la pantalla de
análisis activo donde podrá leer las muestras. El instrumento mostrará lecturas continuamente de
acuerdo como se aspiren las muestras.

Aspirar las muestras y Presionar la tecla [Read] para obtener mejores resultados, ya que el instrumento
realizará la integración de la señal al tiempo especificado en la biblioteca. Realizar esto proporciona
mayor precisión y reproducibilidad de las lecturas.

NOTA: Es adecuado chequear un blanco y un estándar antes de empezar y durante la corrida de las
muestras cada 5 o 10 muestras, para asegurar una buena precisión. Un porcentaje de recuperación entre
90%-110% es aceptable, si excede este rango parar el análisis y reajustar la curva, luego volver a
analizar las muestras desde donde se evidenció el problema. Reajustar la curva aspirando el blanco y
presionar [a/z], luego aspirar el estándar de mayor concentración y oprimir la tecla [rslp].

2.8.2 Análisis por emisión de llama

2.8.2.1 Modo Emisión
 Establecer el método como lo haría para absorbancia, excepto que debe elegir un archivo de tipo
emisión de la librería y no cambiar el modo a concentración.

Remover la lámpara de la posición más alta de la torreta ó mover la torreta a una posición que no tenga
lámpara.

Establecer la longitud de onda respectiva. Presionar [Align], encender la llama y aspirar el estándar de
mayor concentración. Si ocurre un error por baja energía es necesario presionar [Align] otra vez.
Optimizar la longitud de onda para obtener la máxima energía utilizando la perilla respectiva.
Presionar [esc] cuando haya terminado para entrar a la pantalla de ANÁLISIS ACTIVO.

Aspirar el blanco y seguidamente presionar [a/z], nuevamente aspirar el estándar de mayor

concentración y presionar [rslp]. Aspirar el blanco nuevamente y presionar [a/z]. Esto establecerá la
ganancia pmt al nivel apropiado y el conteo de emisión se mostrará cercano a 100.0.

Desde la pantalla de ANÁLISIS ACTIVO, presionar la tecla [cal]. Establecer la información de la

calibración de igual manera como para el análisis por absorción de llama, luego presionar la tecla
[start] y seguir las instrucciones para la calibración. El software pedirá correr el estándar de mayor
concentración, luego realizará un reajuste (reslope) automáticamente. Después de la calibración se
procederá como en el modo absorbancia. Calcular la curva de igual manera al procedimiento para
absorbancia en llama y retornar a la pantalla de ANÁLISIS ACTIVO, de esta manera ya puede analizar
las muestras.

2.9 Procedimiento rápido de trabajo Espectrofotómetro de Absorción Atómica Buck

Scientific 211

2.9.1 Ajuste de longitud de onda, alineación de lámpara y alineación de la cabeza del

quemador
1. Introducir la lámpara en el socket de la torreta.

2. Conectar el cable correspondiente a la lámpara

3. Oprimir [lib]

4. Oprimir [sel], introducir el número de la lámpara que está en la posición de operación

5. Oprimir [PG UP ], elegir el archivo del elemento que se va a determinar.

6. Presionar [2], para cargar el método seleccionado.

7. Oprimir [enter]

8. Oprimir [esc]

9. Seleccionar el Slit del método con la perilla ubicada en el costado derecho del equipo.

10. Seleccionar la longitud de onda del método con la perilla ubicada en el costado derecho del
equipo.

11. Oprimir [align], se mostrará el gráfico de barras.

12. Girar perilla de longitud de onda hasta máxima energía del gráfico de barras.

13. Oprimir [align], repetir el paso anterior hasta máxima alineación. Al terminar oprimir [align].

14. Alinear la lámpara con sus dos perillas hasta alcanzar la máxima energía posible.

15. Oprimir [a/z] para hacer cero y salir a la pantalla de análisis.

16. Realizar el ajuste vertical del quemador con una tarjeta hasta que el haz de luz quede 4mm por
encima de la cabeza del quemador.

17. Oprimir [a/z]. Elevar lentamente la cabeza del quemador mientras observa la absorbancia en la
pantalla, cuando la cabeza del quemador intercepta el haz de luz esta de repente se hace positiva,
cuando note que esto ocurre parar y bajar la cabeza del quemador cerca de los vueltas de la perilla.

18. Dar paso al aire al equipo.

19. Oprimir [air] y aspirar agua.

20. Realizar el ajuste horizontal moviendo la perilla respectiva hasta alcanzar la máxima absorbancia.

21. Girar la barra del quemador hasta alcanzar la máxima absorbancia.

22. Mover muy lentamente el nebulizador hasta alcanzar la lectura de absorbancia más alta y estable.
Con el nebulizador se ajusta el flujo de aire en el equipo.
23. Si va a trabajar una longitud de onda menor de 450 nm oprimir [bkgnd].
.9.2 Encendido de la llama de Acetileno-Aire

1. Ajustar la presión del Acetileno en 13 psi y Aire en 4.1 Bar. Dar paso a los gases en el equipo y
verificar que las presiones no hayan caído, sino realizar el ajuste para alcanzar dichas presiones.

2. Pulsar [air]

3. Pulsar y mantener oprimido [ON] entre 5-8 segundos hasta que ocurra el encendido de la llama.

4. Ajustar los flujos de aire y acetileno si es necesario.

5. Para apagar la llama oprima [OFF].

5.9.3 Encendido de la llama de Acetileno-óxido Nitroso

1. Ajustar la presión del Acetileno en 13 psi y Óxido nitroso entre 50-60 psi. Dar paso a los gases en
el equipo y verificar que las presiones no hayan caído, sino realizar el ajuste para alcanzar dichas
presiones.

2. Pulsar [air]

3. Pulsar y mantener oprimido [ON] entre 5-8 segundos hasta que ocurra el encendido de la llama.

4. Pulsar el botón [N2O]. Nunca encender o apagar la llama en el modo Óxido nitroso. Si la llama
no enciende revisar los flujos de gases e intentar de nuevo.

5. Ajustar los flujos de aire y acetileno si es necesario según el procedimiento.

6. Para apagar la llama oprimir [air] y luego de 10 segundos presionar [OFF].

5.9.4 Calibración y medición

1. Preparar los estándares para la calibración y el estándar para chequeo de la sensibilidad según
tabla No. 4.

2. Aspirar el estándar de mayor concentración según tabla No. 4, este debe dar una lectura de
absorbancia cercana a 0.300.

3. Aspirar el estándar para chequeo de sensibilidad, este debe dar una lectura de absorbancia cercana
a 0.200, sino lo logra realizar el ajuste necesario para optimizar la llama según el procedimiento.

4. Oprimir [cal]

5. Oprimir [down arrow ]

6. Oprimir [sel], digitar los valores de la concentración de los estándares.

7. Oprimir [enter]

8. Oprimir [cntls], establecer las unidades y tipo de curva que prefiera.

9. Oprimir [esc]

10. Antes de iniciar estar seguro que la llama haya estado encendida al menos 5 minutos y que el
corrector de fondo este encendido para análisis por debajo de 450 nm.

11. Oprimir [start], seguir las instrucciones en la parte inferior de la pantalla.

12. Aspirar el blanco, oprimir [enter]

13. Aspirar el primer estándar, oprimir [enter]

14. Realizar el paso anterior para los otros estándares.

15. Oprimir [cal] para calcular la curva.

16. Oprimir [yes] para calcular la curva.

17. Oprimir [enter] para graficar la curva

18. Oprimir [esc], nuevamente oprimir [esc] para retornar a la pantalla de análisis activo.
 19. Aspirar las muestras y oprimir [read].

20. Para reajustar la curva aspirar el blanco y presionar [a/z], luego aspirar el estándar de mayor
concentración (según Tabla No. 4, columna Rango Lineal) y oprimir la tecla [rslp].

6. DOCUMENTOS RELACIONADOS
-Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. Part 3000 Metals.
-Buck Scientific 210/211 VGP Atomic Absorption Spectrophotometer Operator´s Manual.
-Analytical Methods for Atomic Absorption Spectroscopy, Perkin- Elmer.

7. ANEXOS

Tomado de Analytical Methods for Atomic Absorption Spectroscopy, Perkin Elmer.

Corrección de curvas: las medidas cuantitativas en absorción atómica están basadas en la ley de Beer, que
establece que la concentración es proporcional a la absorbancia (C=kA). Es bien conocido sin embargo
que para muchos elementos, particularmente a altas concentraciones, la relación entre concentración y
absorbancia se desvía de la ley de Beer y no es lineal.
Algunas razones por las que ocurre esto incluyen difusión de la luz, temperatura no homogénea, espacio
en la celda de absorción, ampliación de la línea y en algunos casos absorción de líneas cercanas.

Selección del número de estándares: es muy importante seleccionar el número y concentraciones de los
estándares de calibración. Si la concentración del analíto de todas las muestras a ser analizadas caen en el
rango línea,l un estándar de calibración debe ser usado. El límite superior del rango lineal para muchos
elementos se encuentra entre 0.20 y 0.30 unidades de absorbancia. Por lo tanto si la lectura del estándar de
mayor concentración se encuentra dentro de este rango ó es más bajo, se puede usar un estándar de
calibración. Usando un punto de calibración la curva es una línea recta.

Si se espera que la concentración del analíto en las muestras exceda el rango lineal pueden usarse dos o
tres estándares de calibración. En general, si se espera que la concentración del analíto sea menor a 3
veces el rango lineal, son adecuados dos estándares de calibración. Generalmente dos estándares de
calibración son óptimos en casos de curvatura moderada (10%- 15%).

Tres estándares de calibración deben ser usados para una curvatura fuerte. En general la concentración del
tercer estándar de calibración debe ser 6 veces la concentración del primer estándar. Es importante notar
que no es una ventaja el uso de más estándares de calibración que los necesarios. El uso de muchos
estándares de calibración puede dar lugar a resultados erróneos. Por ejemplo, si se usan tres estándares
de calibración en el rango lineal puede
resultar una curva en forma de S debido a la variabilidad de las lecturas del instrumento. En este caso, el
instrumento puede reconocer un intento de calibración inválido y mostrará un código de error.

Como seleccionar los estándares de calibración apropiadamente?

Si todas las muestras se encuentran en el rango lineal puede ser usado un estándar de calibración (S1).

Se utilizan dos estándares de calibración cuando se excede el rango lineal. Usualmente S2 debe ser 3x la
concentración de S1.

Si se excederá el rango lineal, como decidir si usar dos o tres estándares de calibración? Hay un
procedimiento fácil de seguir a continuación:

1. Preparar tres estándares. El primero debe ser el límite del rango lineal. La concentración del
segundo estándar debe ser aproximadamente 3x la concentración del primero.

La concentración del tercer estándar debe ser aproximadamente 6x la concentración del primer
estándar (regla 1:3:6).

2. Establecer el instrumento de absorción atómica en modo concentración, realizar el autocero con el

blanco. Calibrar con los estándares S1 y S2. Realizar la lectura de la concentración del tercer
estándar. Si su valor se encuentra dentro de ± 10% del valor esperado, hacer su tercer estándar=S2
y omitir el segundo estándar. Se obtendrá una ligera curvatura y deberá usar solo dos estándares
de calibración.

Si el tercer estándar se desvía más del ± 10% del valor esperado, la curvatura es más marcada y
son necesarios tres estándares de calibración. Mantener S2 e introducir en la curva de calibración
el tercer estándar como S3.

Rara vez se requieren más de tres estándares para una calibración precisa. Sin embargo cuando
se usen más de tres estándares de calibración emplear la regla 1:3:6 de tal manera que queden
espaciados a lo largo de la curva de calibración.