Ciclo de Krebs

36 FUNDAMENTOS DE BIOQUÍMICA METABÓLICA
KNADH/NAD+ + –
KAcetil-CoA/CoA Quinasa (E2) Piruvato
KATP/ADP
ATP ADP
Piruvato DH (E1) Piruvato DH (E1) - P

defosforilada fosforilada
activa inactiva
ZF igura 3.5. Regulación de la

P1 H2O
actividad del complejo piruvato
deshidrogenasa por fosforilación/
defosforilación reversible del com- + + KCa2+
+
Insulina Fosfatasa (E2) Vasopresina
ponente E1.
El piruvato, sustrato de la reacción, ejerce una inhibición sinérgica con

ADP sobre la quinasa (PDK). La actividad de la fosfatasa (PDP) está re-
gulada por la concentración de iones Ca2+. El aumento de los niveles de
Ca2+, lo que sucede en condiciones de déficit energético, incrementa la
actividad de la fosfatasa (PDP), favoreciendo su unión a E2. La insulina,
al unirse a su receptor de membrana, desencadena una cascada de se-
ñalización que conduce a la activación de la proteína quinasa C, que se
transloca a la mitocondria y fosforila la fosfatasa (PDP) activándola.
Cuando se produce la transición hacia un estado de ayuno, el organismo
necesita conservar los compuestos de 3 carbonos (como piruvato, lacta-
to y alanina) como sustratos gluconeogénicos; en estas condiciones se
produce la fosforilación del enzima E1 y se inactiva el complejo piruvato
deshidrogenasa. Durante el ayuno se produce la oxidación de ácidos gra-
sos, lo que incrementa los niveles mitocondriales de NADH, acetil-CoA y
ATP, estimulándose la actividad de la quinasa PDK, que fosforila a E1 y lo
inactiva. Estos cambios son muy evidentes en el hígado y en el músculo
esquelético.
EL CICLO DE KREBS
El ciclo del ácido cítrico, de los ácidos tricarboxílicos o, simplemente, de

Copyright © 2017. Editorial Tébar Flores. All rights reserved.
El ciclo de Krebs es la vía Krebs, en honor a su descubridor Hans Krebs, fue la consecuencia de
final común para la oxi- propuestas, experimentos y deducciones brillantes que han marcado un
dación de las moléculas hito en la historia y el desarrollo de la Bioquímica. Krebs basó sus estu-
combustibles en condicio- dios en los realizados previamente por Thumberg, Szent Gyorgy, Martius,
nes aeróbicas. Knoop y Ochoa, y sus primeros resultados los publicó en 1937 en las
revistas Enzymologia y Lanzet.
Este ciclo es la vía final común para la oxidación de las moléculas combus-
tibles: glucosa y otras hexosas, ácidos grasos y aminoácidos. La mayoría
de estas moléculas se degradan hasta acetil-CoA, que entra en el ciclo de
Krebs para oxidarse completamente hasta CO2 (figura 3.6). El acetil-CoA
es una molécula central en el metabolismo, ya que además es el precursor
de la síntesis de ácidos grasos, cuerpos cetónicos y colesterol.
© Editorial Tébar Flores. Prohibida la reproducción sin la autorización expresa de la editorial

Teijón, Rivera, José María, and Gaitán, María Dolores Blanco. <i>Fundamentos de bioquímica metabólica (4a. ed.)</i>, Editorial Tébar Flores, 2017. ProQuest Ebook Central,
http://ebookcentral.proquest.com/lib/bibliouaosp/detail.action?docID=5513803.
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TEMA 3 • Destinos metabólicos del piruvato. Ciclo de Krebs 37
Piruvato
Aminoácidos Ácidos grasos
1 NADH CO2
NADH NADH
Acetil CoA
Oxalacetato Citrato
NADH
Malato
Isocitrato
Ciclo del
ácido cítrico NADH
2 Fumarato CO2
FADH2 _-Cetoglutarato
Succinato
NADH
Succinil-CoA
ATP CO2
ZFigura 3.6. Las tres etapas de la
Transportadores respiración. 1) El carbono de las
electrónicos reducidos
(NADH, FADH2) moléculas combustibles se con-
vierte en acetil-CoA. 2) El acetil-
ADP H + 1/2O2 CoA se oxida en el ciclo de Krebs
Cadena y produce CO2 y transportadores
respiratoria electrónicos reducidos (NADH y
ATP H2O
3 FADH 2). 3) Los transportadores
electrónicos reducidos se reoxidan
en la cadena de transporte elec-
Transportadores
electrónicos oxidados
trónico y se genera energía para
(NAD+, FAD) la síntesis de ATP por fosforilación
oxidativa.
a) Reacciones del ciclo

El carácter cíclico de esta vía metabólica se debe a que, después de una
serie de reacciones, se regenera el compuesto de partida, el oxalacetato. En cada vuelta del ciclo
En cada vuelta del ciclo de Krebs un grupo acetilo (2 carbonos) del ace- entran 2 carbonos en
til-CoA se transfiere a una molécula de oxalacetato (un ácido dicarboxíli- forma de acetil-CoA, y
co de 4 carbonos) para formar citrato (un ácido tricarboxílico de 6 carbo- se liberan 2 carbonos en
nos). El citrato se oxida mediante una secuencia de 7 reacciones, durante forma de CO2 en las reac-
las que se liberan dos carbonos en forma de dos moléculas de CO2 y se ciones catalizadas por la
regenera una molécula de oxalacetato, que puede iniciar otra vuelta del isocitrato deshidrogenasa
ciclo. El conjunto de reacciones del ciclo se muestra en la figura 3.7. y el complejoD-cetogluta-
rato deshidrogenasa, re-
generándose oxalacetato.

–
ATP
Acetil-CoA COO
–
O Citrato
CH2
CoA
H2O + C –
H3C S-CoA OOC C OH
COO–
CH2
Citrato Aconitasa H C OH
O COO
–
C sintasa COO– –
OOC C H Isocitrato
Oxalacetato
CH2 CH2
–
+
COO– NAD
+ ATP
NADH + H COO–
NADH
+
Isocitrato ADP
Malato deshidrogenasa deshidrogenasa +
NAD+ NADH + H + CO2
–
OOC O
COO– C
HO C H CH2
_-cetoglutarato
Malato CH2
CH2
–
COO
COO–
Complejo
NAD++ CoA
_-cetoglutarato
Fumarasa deshidrogenasa – Succinil-CoA
NADH
CoA S O ATP
+
C NADH + H
H2O H COO –
C + CO2
CH2
C Succinato Succinil-CoA
–
OOC H COO– CH2 Succinil-CoA
deshidrogenasa sintetasa
Fumarato CH2 COO–
FADH2 CH2 GDP + Pi

–
FAD COO GTP + CoA
Succinato
ZFigura 3.7. Reacciones del ciclo de Krebs.
En cada vuelta se incorpora un grupo acetilo de un acetil-CoA y se elimi-

Cada vuelta del ciclo de nan dos moléculas de CO2. Cuando el ciclo está funcionando con fines
Krebs genera un fosfa- energéticos, una molécula de oxalacetato sería suficiente para lograr la
to de alta energía (ATP oxidación de un número infinito de grupos acetilo. En estas condiciones,
o GTP). 3 moléculas de
por cada vuelta se liberan 4 pares de hidrógeno (o sus electrones equiva-

NADH y una de FADH 2. lentes) en forma de tres NADH y un FADH2, los cuales pasarán al oxígeno
Estos coenzimas reduci- molecular para obtener energía en forma de ATP.
dos se reoxidarán en la
cadena respiratoria, ge- La primera reacción del ciclo es la condensación de una molécula de
nerando energía para la acetil-CoA con otra de oxalacetato por la acción catalítica de la citrato
síntesis de ATP por fosfo- sintasa. La reacción es irreversible porque la hidrólisis del enlace tioés-
rilación oxidativa. ter del acetil-CoA implica la liberación de una gran cantidad de energía
(ΔG0’ = –7,5 kcal/mol). La citrato sintasa es un dímero de subunidades
idénticas de 49 kDa, en la que cada centro activo está situado en una
hendidura localizada entre los dominios grande y pequeño de cada su-
bunidad. Cataliza la reacción mediante un mecanismo secuencial orde-
nado: primero se une el oxalacetato y después el acetil-CoA. El oxalace-
tato induce en la enzima una profunda reorganización estructural que

lleva a la creación de un centro de unión para el acetil-CoA. La forma

abierta del enzima, en ausencia de ligandos, se convierte en una forma
cerrada cuando se une el oxalacetato.
La reacción de isomerización del citrato a isocitrato está catalizada por la
aconitasa, se produce en dos etapas que implican una deshidratación y
una hidratación sucesivas, con la formación de un compuesto interme-
dio (cis-aconitato). La aconitasa es una ferro-sulfo proteína o proteína
con hierro no hemo, las agrupaciones de hierro-azufre facilitan las reac-
ciones de deshidratación y rehidratación del sustrato enlazado al enzima.
En el ciclo hay cuatro reacciones catalizadas por deshidrogenasas que
reducen 3 moléculas de NAD+ y una de FAD: isocitrato deshidrogenasa,
complejo D-cetoglutarato deshidrogenasa, succinato deshidrogenasa y
malato deshidrogenasa. En las dos primeras también se producen des-
carboxilaciones.
El complejo enzimático D-cetoglutarato deshidrogenasa, que cataliza la
transformación del D-cetoglutarato en succinil-CoA, tiene una estructura
similar al de la piruvato deshidrogenasa; como éste, está constituido por
tres enzimas y los mismos coenzimas: TPP, lipoamida, CoA-SH, FAD y
NAD+. Las enzimas son: E1, componente D-cetoglutarato deshidrogena-
sa con TPP como grupo prostético, cataliza la descarboxilación oxidativa
del D-cetoglutarato; E2, dihidrolipoil transsucinilasa, unida a la lipoami-
da, cataliza la transferencia del grupo succinilo al CoA; y E3, dihidrolipoil
deshidrogenasa con grupo prostético FAD, que cataliza la regeneración
de la forma oxidada de la lipoamida.
La reacción catalizada por la succinil-CoA sintetasa genera un enlace fos-
fato de alta energía en forma de GTP (o de ATP) gracias a la energía libe-
rada por la hidrólisis del enlace tioester del succinil-CoA. Las isoenzimas
de la succinil-CoA sintetasa en cerebro, corazón y músculo esquelético
(tejidos que dependen del metabolismo oxidativo) están asociadas a ATP,
mientras que las isoenzimas de hígado y riñón (tejidos biosintéticos) es-
tán asociadas a GTP. En las mitocondrias el cociente ATP/ADP es próximo
a 1, mientras que el cociente GTP/GDP es de 100; por ello, en el hígado
la reacción estará desplazada hacia la producción de succinil-CoA (para
la biosíntesis hepática de cuerpos cetónicos) y en el músculo esquelético
se desplazará hacia la formación de succinato.
La succinato deshidrogenasa, que cataliza la deshidrogenación depen-
diente de FAD del succinato, forma parte del complejo II de la cadena
respiratoria, es una proteína integral de membrana, unida a la membra-
na mitocondrial interna.
La reacción neta del ciclo es:
Acetil-CoA + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi + 2 H2O

2 CO2 + 3 NADH + 3 H+ + FADH2 + GTP + CoA-SH
Las tres moléculas de NADH y la de FADH2 se oxidan en la cadena de

transporte electrónico, como se detalla en el tema 28 del libro de Fun-
damentos de Bioquímica Estructural. El oxígeno molecular no participa
directamente en el ciclo de Krebs pero éste solamente funciona en con-
diciones aeróbicas porque el NADH y el FADH2 únicamente transfieren
sus electrones al oxígeno molecular en la cadena respiratoria.

El ciclo del ácido cítrico está regulado por la acción de enzimas alostéri-
El ciclo de Krebs está re- cas que responden a las concentraciones de metabolitos celulares y que
gulado por la acción de son limitantes en la velocidad metabólica del ciclo. En el ciclo existen tres
tres enzimas alostéricas: reacciones que se pueden considerar claves en la regulación y que son
citrato sintasa, isocitrato catalizadas por las siguientes enzimas: citrato sintasa, isocitrato deshi-
deshidrogenasa y comple- drogenasa y complejo enzimático D-cetoglutarato deshidrogenasa.
jo enzimático D-cetogluta-
rato deshidrogenasa. x La citrato sintasa es un punto de control en muchas bacterias, pero
no en las células animales; en bacterias el ATP es un efector alostérico
negativo de la enzima. En las células animales, la regulación alostérica
del ciclo se produce en las reacciones catalizadas por las dos deshi-
drogenasas.
x La isocitrato deshidrogenasa se inhibe por NADH (producto de la re-
acción) y por ATP, y es alostéricamente estimulada por ADP, que incre-
menta la afinidad del enzima por sus sustratos.
x El complejo enzimático D-cetoglutarato deshidrogenasa es homólogo
del complejo piruvato deshidrogenasa y, de forma equivalente, está
constituido por tres enzimas y cinco coenzimas (TPP, lipoamida, FAD,
NAD+ y CoA). La regulación es análoga a la del complejo piruvato
deshidrogenasa; así la D-cetoglutarato deshidrogenasa se inhibe por
succinil-CoA y NADH (productos de la reacción) y por ATP.
En general, un nivel energético intracelular elevado, lo que equivale a
un nivel alto de ATP, reduce el flujo a través del ciclo.
b) Carácter anfibólico del ciclo y reacciones anapleróticas
El ciclo de Krebs también tiene un carácter anfibólico, ya que suministra
El ciclo de Krebs tiene ca- intermediarios para biosíntesis (figura 3.8). El succinil-CoA es esencial en
rácter anfibólico porque la síntesis de porfirinas (hemo, clorofila), algunos aminoácidos proceden
algunos de sus interme- de D-cetoglutarato o de oxalacetato. El citrato sale de la mitocondria y
diarios se utilizan en rutas por acción de la ATP-citrato liasa citoplasmática se transforma en oxala-
biosintéticas. cetato y acetil-CoA, que se utiliza para la síntesis de ácidos grasos.
Cuando los intermediarios del ciclo de Krebs se utilizan para biosíntesis,
han de ser repuestos para que el flujo a través del ciclo no se vea condi-
cionado por un descenso en su concentración. Para ello, las reacciones
anapleróticas se encargan de rellenar o reponer los intermediarios del
ciclo. La principal reacción anaplerótica del ciclo de Krebs es la transfor-
mación mitocondrial de piruvato en oxalacetato, catalizada por la piru-
vato carboxilasa (PC), que es un enzima esencial en la gluconeogénesis,
vía metabólica que se produce en hígado y riñón. La PC sólo es activa en
presencia de acetil-CoA, y sólo cuando la carga energética de la célula es

baja el oxalacetato formado en la reacción se incorpora al ciclo de Krebs.
PC-biotina
Piruvato + CO2 + ATP + H2O Oxalacetato + ADP + Pi + 2 H+
Otras reacciones anapleróticas son:

Formación de oxalacetato a partir de aspartato: es una reacción de tran-
saminación reversible catalizada por la aspartato aminotransferasa (AST)
AST
Aspartato Oxalacetato
Glutamato
D-Piruvato

Piruvato
Glucosa Co2
+
AcetilCoA
PC
Fosfoenolpiruvato Ácidos grasos
Colesterol
PE
PC
K
Oxalacetato
Citrato
aci ón
s amin
Aminoácidos Tran
(Asp)
Malato
EM Isocitrato
Piruvato
Fumarato
_-cetoglutarato
Tra
nsa
mi
na
Succinato ció
Succinil-CoA n
Tirosina Aminoácidos (Glu)
Fenilalanina
Isoleucina Porfirinas
Metionina
Valina
Propionato
ZFigura 3.8. Carácter anfibólico del ciclo de Krebs y reacciones anapleróticas. La flechas azules indican las reacciones biosin-
téticas a partir de intermediarios del ciclo, y la flechas moradas indican las reacciones anapleróticas. PC: Piruvato carboxilasa
mitocondrial. PEPCK: PEP carboxiquinasa citoplasmática. EM: Enzima málica citoplasmática.
Formación de D-cetoglutarato a partir de glutamato catalizada, bien por

la glutamato deshidrogenasa o bien mediante una reacción de transa-
minación.
Glutamato DH
Glutamato + NAD+ + H2O NH4+ + D-cetoglutarato + NADH + H+
ALT
Glutamato D-Cetoglutarato
Alanina
Piruvato
Formación citoplasmática de L-malato a partir de piruvato por la enzima

málica (malato deshidrogenasa dependiente de NADP+).
–
O O
C
–
NADPH + H+
O O CHOH
C NADP
+
H2O CH2
C O
C
CH3
O O–
CO2
Piruvato Malato


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FADH2 CH2 GDP + Pi

En cada vuelta se incorpora un grupo acetilo de un acetil-CoA y se elimi-

por cada vuelta se liberan 4 pares de hidrógeno (o sus electrones equiva-

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lleva a la creación de un centro de unión para el acetil-CoA. La forma

Acetil-CoA + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi + 2 H2O

Las tres moléculas de NADH y la de FADH2 se oxidan en la cadena de

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presencia de acetil-CoA, y sólo cuando la carga energética de la célula es

Otras reacciones anapleróticas son:

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Formación de D-cetoglutarato a partir de glutamato catalizada, bien por

Formación citoplasmática de L-malato a partir de piruvato por la enzima

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