Identificación y cuantificación de la concentración de una disolución de CuSO4.

5H2O, por
espectrofotometría de UV-Vis, mediante regresión lineal simple (RLS), aplicando el método de
estándar externo.

https://phet.colorado.edu/sims/html/beers-law-lab/latest/beers-law-lab_es.html

En la siguiente práctica se determinará la concentración de una muestra problema de CuSO4.5H2O

previamente preparada por el profesor y la cual denominaremos muestra problema (MP). Para la
identificación y cuantificación de la MP se prepararan un set de disoluciones estándar o patrones
de CuSO4.5H2O, con la cual se determinara el espectro de absorción del analíto para determinar la
longitud de onda donde ocurre la máxima absorción (max), identificando la max se procede a
medir la absorbancia de cada una de las disoluciones estándares o patrones a esta longitud de
onda y se procede a construir una curva de calibrado como lo hicieron en la practica 1. Teniendo la
curva de calibrado, se determinará la concentración de la muestra problema por regresión lineal
simple.

Objetivos:

 Preparar un set de disoluciones estándar o patrón a partir de una disolución madre.

 Determinar el espectro de absorción del CuSO4.5H2O, y determinar longitud de onda donde

ocurre la máxima absorción (max).

 Construir la curva de calibrado graficando Absorbancia vs [disolución patrón], y mediante

regresión lineal simple determinar la concentración de la MP, mediante la metodología de
estándar externo

Parte experimental:

Preparación de la disolución madre de CuSO4.5H2O.

 Preparar 50 mL disolución madre de CuSO4.5H2O 100 mM, a partir del soluto sólido de
CuSO4.5H2O, teniendo en cuenta la pureza del soluto.

WCuSO4.5H2O = ____________________________

 A partir de la disolución madre de CuSO4.5H2O, preparar 5 disoluciones estándar con diferentes

alícuotas de esta disolución, siguiendo el esquema número 1. Determine por dilución la
concentración de cada una de las disoluciones patrones.
 Determinar el espectro de absorción de la disolución madre de CuSO4.5H2O, en el rango del
visible [1000-400] nm, e identifique la max, donde ocurre la máxima absorción molecular. Para
ello deben realizar una muestra blanco, colocando en una cubeta de 1 cm de paso óptico agua
destilada hasta ¾ partes de capacidad de la celda y ubicarla en el equipo donde debe ir la muestra
blanco, seleccionar en el equipo Auto zero, y luego línea base en el rango de [1000-400] nm, para
restar cualquier absorción del blanco a las disoluciones de CuSO4.5H2O. Luego tomar una celda de
1 cm de paso óptico y llenarla ¾ de su capacidad con la disolución madre de CuSO4.5H2O y medir
su espectro de absorción en el rango establecido. El espectro de absorción al igual que las medidas
fotométricas se realizar en el espectrofotómetro Shimadzu UV-1900 de doble haz.

 Seleccionar en el equipo Shimadzu UV-1900 la metodología fotométrica y medir la absorbancia

de las disoluciones estándar o patrón a la max. Construir la curva de calibrado graficando
Absorbancia vs [disoluciones estándar], determine la regresión lineal, ecuación de la recta y
coeficiente de regresión lineal. Tener siempre presente tener una muestra blanco en el equipo
para que la absorbancia de las disoluciones estándar y la muestra solo sea por el analíto y no el
disolvente y material de la celda.

 Medir la absorbancia de la muestra problema por triplicado y mediante regresión lineal simple
determinar la concentración de la MP.

 Medir la absorbancia de la muestra blanco (Agua destilada) 10 veces, con la absorbancia del
blanco determinar los límite de detección y límite de cuantificación.

Para el informe:

 Cálculos de los gramos de CuSO4.5H2O necesarios para preparar la disolución de 100 mM.

 Cálculos para determinar la concentración de las disoluciones estándar preparadas a partir de la

disolución madre de CuSO4.5H2O 100 mM.

 Espectro de absorción del CuSO4.5H2O desde 1000 nm hasta los 400 nm.